JP5808408B2

JP5808408B2 - フタラジノンケトン誘導体、その製造法および医薬用途

Info

Publication number: JP5808408B2
Application number: JP2013523468A
Authority: JP
Inventors: タン、ポンチョ; リー、シン; リー、シアンチン; チェン、ヤン; ワン、ビン; ズー、ジョア
Original assignee: ジエンスハンセンファーマセウティカルカンパニーリミテッド
Priority date: 2010-08-09
Filing date: 2011-07-26
Publication date: 2015-11-10
Anticipated expiration: 2031-07-26
Also published as: CN102686591B; JP2013535491A; EP2604610B1; KR20130110149A; BR112013002220A2; US9566277B2; US20130131068A1; PL2604610T3; US9273052B2; CN102686591A; AU2011288876A2; HUE029275T2; HK1174030A1; EP2604610A4; CA2806324A1; UA111161C2; WO2012019427A8; RU2564527C2; AU2011288876A1; CN102372716A

Description

本発明は式（Ｉ）で表される新規のフタラジノンケトン誘導体、その製造法、その誘導体を含む医薬組成物、および治療剤としての、特にポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤としてのそれらの用途に関する。

化学療法と放射線療法が、癌を治療するための２つの一般的な方法である。両方の治療法とも一本鎖および／または二本鎖ＤＮＡの切断を引き起こして細胞毒性を生じさせ、その結果、染色体損傷で標的とする腫瘍細胞を死滅させるものである。ＤＮＡ損傷シグナルへの応答で重要なものは、制御部位における細胞周期のシグナルが活性化されることであり、ＤＮＡ損傷については有糸分裂から細胞を守り、それによって細胞が損傷されるのを防止することである。たいていの場合、腫瘍細胞は細胞周期の制御シグナルが欠損していて、高い増殖速度を有している。それ故、腫瘍細胞は特有のＤＮＡ修復メカニズムを持っていて、それにより迅速に応答して増殖制御に関係する染色体の損傷を修復することができ、その結果、ある治療の細胞傷害効果から腫瘍細胞を救って、生き続けさせることができると考えられる。

臨床応用においては、化学療法薬の有効濃度や放射線療法の放射線強度が、これらのＤＮＡ修復メカニズムと争って標的腫瘍細胞に対する殺効果を確保している。しかしながら、腫瘍細胞はそのＤＮＡ損傷修復メカニズムを強化することによって治療に対する耐性を発達させ、致命的なＤＮＡ損傷から生き残ることができる。耐性に打ち勝つためには、通常、治療薬の投与量や放射線強度を増加させる必要がある。このアプローチは病変近傍の正常組織に副作用を生じ、次いで重篤な副作用により治療方針を複雑にして治療のリスクを増加させる。一方、増加し続ける耐性は治療効果を減少させるため、ＤＮＡ損傷剤の細胞毒性は、ＤＮＡ損傷シグナルによって促進される修復メカニズムをコントロールすることによって腫瘍細胞の特異性に合うように改良することができると結論できる。

ポリＡＤＰリボシル化活性を特徴とするＰＡＲＰ（ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ）は、１８の核酵素と細胞質酵素のスーパーファミリーで構成されている。そのようなポリＡＤＰリボシル化の効果は、標的タンパクの活性とタンパク間の相互作用を調整し、そしてＤＮＡ修復や細胞死を含む他の多くの基本的な生物学的プロセスを制御することができる。また、ゲノム安定性もポリＡＤＰリボシル化と関係している（非特許文献１参照）。

ＰＡＲＰ−１の活性は、細胞ＰＡＲＰ活性全体の約８０％を占めている。もっともＰＡＲＰ−１に類似しているＰＡＲＰ−２とともに、ＰＡＲＰ−１は、ＰＡＲＰファミリーの中でＤＮＡ損傷修復能を持つメンバーである。ＤＮＡ損傷のセンサーおよびシグナル蛋白として、ＰＡＲＰ−１はＤＮＡ損傷部位を迅速に検知して、それらの部位に直接結合し、次いでＤＮＡ修復に必要な種々の蛋白の凝集を誘発して、ＤＮＡ損傷を修復することを可能ならしめている。細胞がＰＡＲＰ−１を欠いている場合は、ＰＡＲＰ−２がＰＡＲＰ−１の代わりにＤＮＡ損傷の修復を行うことができる。

正常細胞に比べ、固形腫瘍ではＰＡＲＰタンパクの発現が一般に亢進していることが研究から明らかになっている。また、遺伝子に関連するＤＮＡ修復が欠損（ＢＲＣＡ−１やＢＲＣＡ−２等）している腫瘍（乳がんや卵巣がん等）は、ＰＡＲＰ−１阻害剤に非常に感受性が高いことを示している。これは、トリプルネガティブ乳がんと呼ばれる腫瘍の治療における単剤としてＰＡＲＰ阻害剤の使用が可能であることを示している（非特許文献２および３参照）。同時に、ＤＮＡ損傷の修復メカニズムは、化学療法薬や電離放射線治療によって生じた耐性へ応答する腫瘍細胞のメインメカニズムであるため、ＰＡＲＰ−１はがん治療の新しい方法を探索するための有効なターゲットであると考えられる。

ＰＡＲＰ阻害剤は、ＰＡＲＰ触媒基質として用いることができるＮＡＤ^＋ニコチンアミドをその類縁体開発のテンプレートとして用いて早期に開発し、デザインできる。ＮＡＤ^＋の拮抗阻害剤として、これらの阻害剤はＮＡＤ^＋とＰＡＲＰ触媒部位で競合し、それによりポリＡＤＰリボース鎖の合成を防止する。ポリＡＤＰリボシル化の修飾を持たないＰＡＲＰはＤＮＡ損傷部位から分離されないため、修復に関与する他の蛋白を障害部位に導き、これにより修復プロセスの遂行を防止する。従って、細胞毒性薬または放射線の効果で、ＰＡＲＰ阻害剤はＤＮＡ損傷を持つ腫瘍細胞を最終的に死滅させる。

さらに、ＰＡＲＰ触媒基質として消費されるＮＡＤ^＋は、細胞のＡＴＰ合成プロセスにおける本質的ファクターである。高レベルのＰＡＲＰ活性下で、細胞内ＮＡＤ^＋濃度が有意に減少し、それにより細胞内ＡＴＰ濃度に影響を与える。細胞内ＡＴＰ含量が不足すると、細胞はプログラムされたＡＴＰ依存性の細胞死プロセスを達成できなくなり、特殊なアポトーシス過程である壊死ができるだけである。壊死の間には、多くの炎症性サイトカインが放出され、それによって他の器官や組織に毒性作用を生じる（非特許文献４参照）。従って、ＰＡＲＰ阻害剤は、このメカニズムに関連する種々の疾患、即ち、神経変性疾患（アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病等）、糖尿病、心筋梗塞や急性腎不全などの虚血または虚血再灌流プロセスにおける併発症、敗血症性ショックなどの循環器系疾患および慢性リュウマチなどの炎症性疾患等の治療にも用いることができる（非特許文献５〜８参照）。
現在では、特許文献１〜３を含め、一連の特許出願がフタラジノンケトンＰＡＲＰ阻害剤について開示している。

国際公開第２００２/０３６５７６号国際公開第２００４/０８０９７６号国際公開第２００６/０２１８０１号

D`Amours et al. Biochem.J, 1999, 342, 249 Plummer, E. R. Curr. Opin. Pharmacol. 2006,6, 364 Ratnam, et al; Clin. Cancer Res. 2007, 13,1383 Horvath EM et al. Drug News Perspect, 2007, 20,171-181 Tentori L, et al. Pharmacol. Res., 2002, 45,73-85 Horvath EM et al . Drug News Perspect., 2007,20, 171. Faro R, et al. Ann. Thorac. Surg.,2002, 73, 575. Kumaran D, et al. Brain Res., 2008,192, 178

腫瘍治療に対する一連のＰＡＲＰ阻害剤が知られているが、まだより優れた効果と薬物動態を有する新しい化合物を開発する必要がある。継続した努力の結果、本発明は一連の式（Ｉ）の化合物をデザインし、そのような構造を持つ化合物が優れた効果と機能を示すことを見出した。

本発明は式（Ｉ）のフタラジノンケトン誘導体およびそれらの互変異性体、対掌体、ジアステレオマー、ラセミ体、および薬学的に許容されるそれらの塩の他、それらの代謝物、代謝前駆体もしくはプロドラッグを提供することを対象とする：

式中、ＡおよびＢは、結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールを形成し、該シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールはそれぞれ独立して、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよい；

Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３またはＲ^４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、アルキル、シアノおよびアルコキシルから成る群から選択され、該アルキルまたはアルコキシルは、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルおよびアルコキシルから成る群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよい；

Ｄ，ＥまたはＧは、それぞれ独立して、窒素原子およびＣ（Ｒ^８）から成る群から選択される；

Ｒ^５は、水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、該アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールは、それぞれ独立して、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボキシルおよびアルコキシカルボニルから成る群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよい；

Ｒ^６またはＲ^７は、それぞれ独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、該アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、それぞれ独立して、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボキシルおよびアルコキシカルボニルから成る群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよい；

または、Ｒ^６およびＲ^７は、結合しているＮ原子と一緒になってヘテロシクリルを形成してもよく、該ヘテロシクリルは１以上のＮ、ＯまたはＳ（Ｏ）_ｍのヘテロ原子を含んでいて、さらに該ヘテロシクリルはアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボキシルおよびアルコキシカルボニルから成る群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよい；

Ｒ^８は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、アルコキシル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ベンジル、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^６Ｒ^７、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から選択され、該アルキル、アルコキシル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールまたはベンジルは、それぞれ独立して、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、オキソ、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよい；

ｍは０、１および２から成る群から選択され；そして

ｎは０、１および２から成る群から選択される。

本発明の好ましい実施態様は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、ＡおよびＢが結合している炭素原子と一緒になってアリールを形成しているもの、好ましくは該アリールがフェニルであるものである。

好ましくは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、Ｒ^１が水素のもの。

好ましくは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、Ｒ^１がハロゲン、好ましくはフッ素原子のもの。

好ましくは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３またはＲ^４が、それぞれ独立して水素原子であるもの。

好ましくは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、Ｒ^８が水素、アルキル、ハロゲン、シアノ、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から選択されたものであり、該アルキルは１以上のハロゲン原子で置換されていてもよい。

好ましくは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、Ｒ^８がトリフルオロメチルであるもの。

式（Ｉ）の化合物は不斉炭素原子を含むことができ、従って光学的に純粋なジアステレオマー、ジアステレオマーの混合物、ジアステレオマーのラセミ体、ジアステレオマーのラセミ体混合物の形で、またはメソ化合物として存在することができる。本発明は全てのこれらの形式も含んでいる。ジアステレオマーの混合物、ジアステレオマーのラセミ体またはジアステレオマーのラセミ体混合物は、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーなどの慣用の方法によって分離することができる。

式（Ｉ）の化合物は互変異性体を持っていることも当業者は理解しなければならない。化合物（Ｉ）の互変異性の形式としては、下記の式（ＩＩ）で表される構造が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の化合物としては、下記のものが挙げられるが、これに限定されない：

またはこれらの薬学的に許容される塩。

本発明は式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の製造法に関し、以下の工程を含む：

式（ＩＡ）の化合物をカルボン酸に加水分解し、ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウレアなどの縮合剤の存在下にカルボン酸を式（ＩＢ）の化合物またはその塩とアルカリ条件下で反応させて式（Ｉ）の化合物を得る；
式中：Ｒ^ａは、ヒドロキシル、ハロゲンおよびアルコキシルから成る群から選ばれる；

Ａ，Ｂ，Ｄ，Ｅ，ＧおよびＲ^１〜Ｒ^４は式（Ｉ）で定義されたものである。

他の態様では、本発明はＰＡＲＰ阻害剤の調製における式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用に関する。

もう一つの態様は、本発明は式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の治療上の有効量を必要とする対象に投与することから成るＰＡＲＰの阻害法に関する。

さらに別の態様では、本発明は癌治療におけるアジュバントや腫瘍細胞を電離放射線や化学療法に敏感にさせる薬物の製造における式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用に関する。

他の態様では、本発明は癌治療においてまたは腫瘍細胞を電離放射線や化学療法に敏感にさせるアジュバントとして使用するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

他の態様は、本発明はＰＡＲＰ阻害剤として使用するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

別の態様は、本発明は癌治療用薬物の製造における式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用に関し、該癌は乳がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、肝臓がんおよび大腸がんから成る群から選ばれ、該薬物はさらにテモゾロミド、アドリアマイシン、タキソール、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビンおよびベバシズマブから成る群から選ばれる薬物の治療上の有効量と同時投与される。

さらに他の態様では、本発明は式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の治療上の有効量を必要とする対象に投与することを特徴とする癌の治療法に関し、該癌は乳がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、肝臓がんおよび大腸がんから成る群から選ばれ、該式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩はさらにテモゾロミド、アドリアマイシン、タキソール、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビンおよびベバシズマブから成る群から選ばれる薬物の治療上の有効量と同時投与される。

他の態様では、本発明は癌治療用の薬物として使用するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩に関し、該癌は乳がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、肝臓がんおよび大腸がんから成る群から選ばれ、該薬物はさらにテモゾロミド、アドリアマイシン、タキソール、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビンおよびベバシズマブから成る群から選ばれる薬物の治療上の有効量と同時投与される。

さらに、本発明はまた治療上有効な量の本発明の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。そして本発明は、ＰＡＲＰ阻害剤として、または癌治療におけるアジュバントまたは腫瘍細胞を電離放射線や化学療法に敏感にさせる薬物として、または癌治療の薬物として使用するための該医薬組成物に関する。そして本発明は、ＰＡＲＰ阻害剤の製造における該医薬組成物の使用に関する。そして本発明は、癌治療におけるアジュバントまたは腫瘍細胞を電離放射線や化学療法に敏感にさせる薬物の製造における該医薬組成物の使用に関する。そして本発明は、癌治療用薬物の製造における該医薬組成物の使用に関し、該癌は乳がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、肝臓がんおよび大腸がんから成る群から選ばれ、該医薬組成物はさらにテモゾロミド、アドリアマイシン、タキソール、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビンおよびベバシズマブから成る群から選ばれる薬物の治療上の有効量と同時投与される。

発明の詳細な説明
特に明記しない限り、明細書および特許請求の範囲で用いられた用語は以下に記載の意味を有する。

「アルキル」とは、Ｃ１−Ｃ２０の直鎖および分岐鎖基を含む飽和脂肪族炭化水素基をいう。好ましくはアルキル基は１〜１２個の炭素原子を持つアルキルである。代表例としては、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−エチル―２−メチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、２，３−ジメチルブチル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、３−メチルヘキシル、４−メチルヘキシル、５−メチルヘキシル、２，３−ジメチルペンチル、２，４−ジメチルペンチル、２，２−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルペンチル、２−エチルペンチル、３−エチルペンチル、ｎ−オクチル、２，３−ジメチルヘキシル、２，４−ジメチルヘキシル、２，５−ジメチルヘキシル、２，２−ジメチルヘキシル、３，３−ジメチルヘキシル、４，４−ジメチルヘキシル、２−エチルヘキシル、３−エチルヘキシル、４−エチルヘキシル、２−メチル−２−エチルペンチル、２−メチル−３−エチルペンチル、ｎ−ノニル、２−メチル−２−エチルヘキシル、２−メチル−３−エチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、ｎ−デシル、３，３−ジエチルヘキシル、２，２−ジエチルヘキシル、およびそれらの分岐鎖異性体が挙げられる。より好ましくは、アルキル基は１〜６個の炭素原子を持つ低級アルキルである。代表例としては、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−エチル―２−メチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、２，３−ジメチルブチル等が挙げられる。アルキル基は置換されていてもよいし、無置換でもよい。置換されている場合、置換基はどこの置換可能な位置で置換されていてもよく、好ましくは置換基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロ環アルコキシ、シクロアルキルチオ、複素環アルキルチオ、オキソ、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から独立して選択される１以上の置換基である。

「シクロアルキル」とは、飽和および／または部分的に不飽和の単環式または多環式炭化水素基で、３〜２０個の炭素原子、好ましくは３〜１２個の炭素原子、より好ましくは３〜１０個の炭素原子を持つものをいう。単環式シクロアルキルの代表例としては、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル、シクロオクチル等が挙げられる。多環式シクロアルキルとしては、スピロ環、縮合環および架橋した環を持つシクロアルキルが挙げられる。

「スピロシクロアルキル」とは、１つの共通の炭素原子（スピロ原子と呼ばれる）を通じてつながっている環を持つ５〜２０員の多環式基であって、１つ以上の環は１つ以上の二重結合を含んでいてもよいが、環のどれも完全に共役したπ電子系を持たないものをいう。好ましくはスピロシクロアルキルは、６〜１４員、より好ましくは７〜１０員である。共通のスピロ原子の数によって、スピロシクロアルキルはモノスピロ環、ジスピロ環またはポリスピロ環に分けられるが、好ましくはモノスピロ環またはジスピロ環である。より好ましいスピロシクロアルキルは４員／４員、４員／５員、４員／６員、５員／５員、または５員／６員の単環式スピロ環である。スピロシクロアルキルの代表例としては、これらに限定されないが、以下の基が挙げられる。

「縮合シクロアルキル」とは、５〜２０員の多環式炭化水素基であって、系内の各環が隣接した一対の炭素原子を他の環と共有していて、１つ以上の環が１つ以上の二重結合を含んでいてもよいが、環のどれも完全に共役したπ電子系を持たないものをいう。好ましくは縮合シクロアルキル基は６〜１４員、より好ましくは７〜１０員である。構成する環の数により、縮合シクロアルキルは二環式環、三環式環、四環式環および多環式環縮合シクロアルキルに分けられるが、好ましくは二環式環または三環式環縮合シクロアルキルである。より好ましい縮合シクロアルキルは５員／５員または５員／６員の二環式縮合シクロアルキルである。縮合シクロアルキルの代表例としては、これらに限定されないが、以下の基が挙げられる。

「架橋シクロアルキル」とは、５〜２０員の多環式炭化水素基であって、系内のそれぞれ二つの環が２つの連結していない炭素原子を共有しているものをいう。この環は１つ以上の二重結合を持っていてもよいが、完全に共役したπ電子系は持たない。好ましくは、架橋シクロアルキルは６〜１４員、より好ましくは７〜１０員である。構成する環の数により、架橋シクロアルキルは架橋二環式環、三環式環、四環式環または多環式環に分けられるが、好ましくは二環式環、三環式環または四環式環架橋シクロアルキル、より好ましくは二環式環または三環式環架橋シクロアルキルである。架橋シクロアルキルの代表例としては、これらに限定されないが、以下の基が挙げられる。

該シクロアルキルはアリール、ヘテロアリールまたは複素環アルキルの環に縮合していてもよく、親構造と結合する環はシクロアルキルである。代表例としては、これらに限定されないが、インダニル酢酸、テトラヒドロナフタレン、ベンゾシクロヘプチルなどが挙げられる。該シクロアルキルは置換されていてもよいし、無置換でもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロ環アルコオキシ、シクロアルキルチオ、複素環アルキルチオ、オキソ、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から独立して選択される１つ以上の置換基である。

「アルケニル」とは、少なくとも２つの炭素原子と少なくとも１つの炭素―炭素二重結合を有する上記定義のアルキルをいう。例えば、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−，２−または３−ブテニルなど。アルケニル基は置換されていてもよいし、無置換でもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコオキシ、ヘテロ環アルコキシ、シクロアルキルチオ、複素環アルキルチオ、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から独立して選択される１つ以上の置換基である。

「アルキニル」とは、少なくとも２つの炭素原子と少なくとも１つの炭素―炭素三重結合を有する上記定義のアルキルをいう。例えば、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−，２−または３−ブチニルなど。アルキニル基は置換されていてもよいし、無置換でもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロ環アルコキシ、シクロアルキルチオ、複素環アルキルチオ、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から独立して選択される１つ以上の置換基である。

「ヘテロシクリル」とは、３〜２０員の飽和および／または部分的に不飽和の単環式または多環式炭化水素基であって、環原子としてＮ，ＯまたはＳ（Ｏ）_ｍ（式中、ｍは０，１または２である）から成る群から選ばれる１つ以上のヘテロ原子を有するが、環内に−Ｏ−Ｏ−，−Ｏ−Ｓ−または−Ｓ−Ｓ−はなく、残りの環原子がＣであるものをいう。好ましくは、ヘテロシクリルは１〜４個の該ヘテロ原子を有する３〜１２員、より好ましくは３〜１０員である。単環式ヘテロシクリルの代表例としては、これらに限定されないが、ピロリジル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、スルホ−モルホリニル、ホモピペラジニルなどが挙げられる。多環式ヘテロシクリルとしては、スピロ環、縮合環および架橋環を持つヘテロシクリルが挙げられる。「スピロヘテロシクリル」とは、１つの共通の炭素原子（スピロ原子と呼ばれる）を通じて結合している環を持つ５〜２０員の多環式ヘテロシクリルであって、該環は環原子としてＮ，ＯまたはＳ（Ｏ）_ｐ（式中、ｐは０，１または２である）から成る群から選ばれる１つ以上のヘテロ原子を有し、残りの環原子はＣであって、１つ以上の環は１つ以上の二重結合を含んでいてもよいが、環のどれも完全に共役したπ電子系を持たないものをいう。好ましくは、スピロヘテロシクリルは６〜１４員、より好ましくは７〜１０員である。共通のスピロ原子の数により、スピロヘテロシクリルはモノ−スピロヘテロシクリル、ジ−スピロヘテロシクリルまたはポリ−スピロヘテロシクリルに分けられるが、好ましくはモノ−スピロヘテロシクリルおよびジ−スピロヘテロシクリルである。より好ましくは、スピロヘテロシクリルは４員／４員、４員／５員、４員／６員、５員／５員、または５員／６員のモノ−スピロヘテロシクリルである。スピロヘテロシクリルの代表例としては、これらに限定されないが、以下の基が挙げられる。

「縮合ヘテロシクリル」とは、５〜２０員の多環式ヘテロシクリル基であって、系内の各環が隣接した一対の炭素原子を他の環と共有していて、１つ以上の環が１つ以上の二重結合を含んでいてもよいが、環のどれも完全に共役したπ電子系を持たず、該環は環原子としてＮ，ＯまたはＳ（Ｏ）_ｐ（式中、ｐは０，１または２である）から成る群から選ばれる１つ以上のヘテロ原子を有し、残りの環原子はＣであるものをいう。好ましくは縮合ヘテロシクリルは６〜１４員、より好ましくは７〜１０員である。構成する環の数により、縮合ヘテロシクリルは二環式環、三環式環、四環式環および多環式環縮合ヘテロシクリルに分けられるが、好ましくは二環式環または三環式環縮合ヘテロシクリルである。より好ましい縮合ヘテロシクリルは５員／５員または５員／６員の二環式縮合ヘテロシクリルである。縮合ヘテロシクリルの代表例としては、これらに限定されないが、以下の基が挙げられる。

「架橋ヘテロシクリル」とは、５〜１４員の多環式ヘテロシクリルアルキル基であって、系内のそれぞれ二つの環が２つの連結していない炭素原子を共有していて、該環は１つ以上の二重結合を持っていてもよいが、完全に共役したπ電子系は持たず、そして該環は環原子としてＮ，ＯおよびＳ（Ｏ）_ｍ（式中、ｍは０，１または２である）から成る群から選ばれる１つ以上のヘテロ原子を有し、残りの環原子はＣであるものをいう。好ましくは、架橋ヘテロシクリルは６〜１４員、より好ましくは７〜１０員である。構成する環の数により、架橋ヘテロシクリルは二環式環、三環式環、四環式環または多環式環架橋ヘテロシクリルに分けられるが、好ましくは二環式環、三環式環または四環式環架橋ヘテロシクリル、より好ましくは二環式環または三環式環架橋ヘテロシクリルである。架橋ヘテロシクリルの代表例としては、これらに限定されないが、以下の基が挙げられる。

ヘテロシクリルの該環はアリール、ヘテロアリールまたはシクロアルキルの環に縮合していてもよいが、親構造と結合する環はヘテロシクリルである。代表例としては、これらに限定されないが、以下の基が挙げられる。

ヘテロシクリルは置換されていてもよいし、無置換でもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロ環アルコキシ、シクロアルキルチオ、複素環アルキルチオ、オキソ、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から独立して選択される１つ以上の基である。

「アリール」とは、６〜１４員のすべて炭素の単環式環または多環式縮合環（「縮合」環系とは、系内の各環が隣り合った一対の炭素原子を系内の他の環と共有していることを意味する）基をいい、完全に共役したπ電子系を持っている。好ましくは、アリールはフェニルおよびナフチルなどの６〜１０員である。該アリールは、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環に縮合していてもよく、ここでは親構造と連結する環がアリールである。代表例としては、これらに限定されないが、以下の基が挙げられる：

アリール基は置換されていてもよいし、無置換でもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロ環アルコキシ、シクロアルキルチオ、複素環アルキルチオ、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から独立して選択される１つ以上の基である。

「ヘテロアリール」とは、環原子としてＯ，ＳおよびＮから成る群から選択される１〜４個のヘテロ原子をもつヘテロアリール系であって、５〜１４個の環原子を持つものをいう。好ましくは、ヘテロアリールは５〜１０員である。より好ましくは、ヘテロアリールは５または６員である。ヘテロアリール基の例としては、フリル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−アルキルピロリル、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、テトラゾリルなどが挙げられる。該ヘテロアリールは、アリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環に縮合していてもよく、ここでは親構造と連結する環がヘテロアリールである。代表例としては、これらに限定されないが、以下の基が挙げられる、

ヘテロアリール基は置換されていてもよいし、無置換でもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロ環アルコキシ、シクロアルキルチオ、複素環アルキルチオ、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から独立して選択される１つ以上の基である。

「アルコキシル」とは、−Ｏ−（アルキル）および−Ｏ−（置換シクロアルキル）基の両者であって、アルキルが上記で定義されているものをいう。代表例としては、これらに限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ等が挙げられる。アルコキシルは置換されていてもよいし、無置換でもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロ環アルコキシ、シクロアルキルチオ、複素環アルキルチオ、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から独立して選択される１つ以上の基である。

「ヒドロキシ」とは、−ＯＨ基をいう。

「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子をいう。

「アミノ」とは、−ＮＨ_２基をいう。

「シアノ」とは、‐ＣＮ基をいう。

「ニトロ」とは、‐ＮＯ_２基をいう。

「ベンジル」とは、−ＣＨ_２−（フェニル）基をいう。

「オキソ」とは、＝Ｏ基をいう。

「カルボキシル」とは、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ基をいう。

「アルコキシカルボニル」とは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（アルキル）または（シクロアルキル）基であって、アルキルおよびシクロアルキルは上記定義のものをいう。

「任意の（optional）」または「任意に（optionally）」は、後に記載された事象や情況が起こってもよいし、起こらなくてもよいことを意味し、この記載は事象や情況の事実が生じても生じなくてもよいことを含んでいる。例えば、「アルキルで置換されていてもよい複素環基」は、アルキル基が存在してもよいが、存在しなくてもよいことを意味し、この記載はアルキルで置換されている複素環基とアルキルで置換されていない複素環基の場合を含んでいる。

「置換された」は、基内の１以上の水素原子、好ましくは５まで、より好ましくは１〜３個の水素原子が対応する数の置換基で独立して置換されていることをいう。置換基は化学的に可能な位置にのみ存在することはいうまでもない。当業者は実験や理論で過度な努力を払うことなく置換が可能か不可能か決めることができる。例えば、フリーの水素を持つアミノまたはヒドロキシル基と不飽和結合（オレフィンなど）を持つ炭素原子の組み合わせは不安定である。

「医薬組成物」とは、本発明に記載した１以上の化合物または生理学的／薬学的に許容されるこれらの塩またはプロドラッグと、生理学的／薬学的に許容される担体や賦形剤などの他の化合成分との混合物をいう。医薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を容易にして、活性成分の吸収を促進し、生物活性を発現させることである。

ｍ，ｎおよびＲ^５〜Ｒ^７は、式（Ｉ）の化合物で定義されたものと同じである。

本発明における化合物の合成法
発明の目的を達成するため、本発明は以下の技術的解決法を適用する。

本発明の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の製造法、以下の工程を含む：

随意、式（ＩＡ）の化合物をカルボン酸に加水分解し、次いでヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウレアなどの縮合剤の存在下にカルボン酸を式（ＩＢ）の化合物またはその塩とアルカリ条件下に反応させて式（Ｉ）の化合物を得る；

式中：Ｒ^ａは、ヒドロキシル、ハロゲンおよびアルコキシルから選ばれる；

上記縮合反応は、酸化合物とアミン化合物の間で縮合剤の存在下アルカリ条件で行われ、縮合剤はＮ，Ｎ‘−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ‘−ジイソプロピルカルボジイミドおよびテトラフルオロホウ酸Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ‘−テトラメチルウロニウム（ＴＢＴＵ），から選択され、好ましくはテトラフルオロホウ酸Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ‘−テトラメチルウロニウム（ＴＢＴＵ）であり；アルカリ条件は有機または無機塩基によって調製され、有機塩基としてはジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、トリエチルアミン、ヘキサヒドロピリジン、Ｎ−メチルピペラジン、４−ジメチルアミノピリジン等から成る群から選ばれ、好ましくはジイソプロピルエチルアミンである；使用する溶媒はトルエン、ベンゼン、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、または上記溶媒の混合物であり、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドである；反応温度は−８０℃および１００℃の間でコントロールし、好ましくは０℃と６０℃の間である；反応時間は通常１分と７２時間の間でコントロールし、好ましくは１５分と２４時間の間である。

好ましい実施態様
以下の実施例は本発明を説明するためのものであり、実施例は本発明の範囲を限定するものと考えてはならない。

化合物の構造はＮＭＲおよび／またはＭＳにより同定した。ＮＭＲのケミカルシフト（δ）は１０^−６（ｐｐｍ）で示した。ＮＭＲはBruker AVANCE-400で測定した。溶媒は重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ_６）、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ_３）および重水素化メタノール（ＣＤ_３ＯＤ）であり、内部標準はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）である。

ＭＳはFINNIGAN LCQAd（ＥＳＩ）マススペクトロメータ（製造：Thermo、型：Finnigan LCQ advantage MAX）で測定した。

ＨＰＬＣはAgilent 1200DAD 高圧液体クロマトグラフィースペクトロメーター（Sunfire C18 150x4.6mmクロマトグラフィーカラム）およびWaters 2695-2996 高圧液体クロマトグラフィースペクトロメーター（Gimini C18 150x4.6mmクロマトグラフィーカラム）で測定した。

ＩＣ_５０はNovoStar ELISA (BMG Co., ドイツ)で測定した。

薄層シリカゲルはYantai Huanghai HSGF254またはQingdao GF254シリカゲルプレートを用いた。ＴＬＣで用いたプレートの厚さは０．１５ｍｍ〜０．２ｍｍで、生成物の精製用薄層クロマトグラフィーで用いたプレートの厚さは０．４ｍｍ〜０．５ｍｍである。

カラムクロマトグラフィーでは、通常、担体としてYantai Huanghai 200-300メッシュシリカゲルを用いた。

本発明の公知の出発物質は先行技術の慣用合成法で製造できるか、またはABCR GmbH & Co.KG、Acros Organics、Aldrich Chemical Company、Accela ChemBio IncまたはDari chemical Company等から購入できる。

実施例で明示しない限り、以下の反応はアルゴン雰囲気下または窒素雰囲気下で行った。

用語「アルゴン雰囲気」または「窒素雰囲気」は、反応フラスコが１Ｌのアルゴンまたは窒素を有する風船を備えていることをいう。

水素化反応では、反応系は通常真空にして水素で満たし、そしてこの操作を３回繰り返した。

マイクロ波反応はCEM Discover-S 908860 マイクロ波反応器を用いて行った。

実施例で明示しない限り、以下の反応で用いた溶液は水溶液である。

実施例で明示しない限り、以下の反応の反応温度は室温であった。

室温は最も適当な反応温度で、２０℃〜３０℃であった。

反応過程は薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でモニターしたが、展開溶媒の系としては：Ａ：ジクロロメタンとメタノールの系、Ｂ：ｎ−ヘキサンと酢酸エチルの系、Ｃ：石油エーテルと酢酸エチルの系、Ｄ：アセトンが挙げられる。溶媒の容積比は化合物の極性に応じて調整した。

カラムクロマトグラフィーおよび薄層クロマトグラフィーによる化合物精製の溶出系としては：Ａ：ジクロロメタンとメタノールの系、Ｂ：ｎ−ヘキサンと酢酸エチルの系が挙げられ、溶媒の容積比は化合物の極性に応じて調整したが、時々少量のトリエチルアミンなどのアルカリ試薬や酢酸などの酸性試薬も加えた。

4-[[4-フルオ-3-[3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル]-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（１５０ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ、「特許出願ＷＯ２００４０８０９７６」に開示の公知方法に従って調製）を２ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（２８４ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ）、３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−[１，２，４]トリアゾロ[４，３−ａ]ピラジン塩酸塩１ｂ（１３８ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ，「特許出願ＷＯ２００４０８０９５８」に開示の公知方法に従って調製）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ，１ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣を薄層クロマトグラフィーで溶出系Ａを用いて精製して、4-[[4-フルオ-3-[3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル]-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン１を白色固体として得た(２５ｍｇ、収率１０．６％)。
MS m/z (ESI): 473.2 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 10.04
(br. s, 1H), 8.48 (d, 1H), 7.80 (m, 3H), 7.55 (m, 1H), 7.40 (m,
1H), 7.15 (m, 1H), 4.29 (s, 2H), 4.23 (m, 2H), 3.74 (m, 2H), 3.20 (m, 2H)

4-[[3-(3,4-ジヒドロ-1H-ピロロ[1,2-a]ピラジン-2-カルボニル)-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

工程１
２−ピロール−１−イル−エタナミン
ピロール２ａ（１２ｇ，１７．９０ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬのアセトニトリルに溶解し、２−クロロエチルアミン塩酸塩（２４．６０ｇ，２１．２０ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（０．５０ｇ，４ｍｍｏｌ）および硫酸水素テトラブチルアンモニウム（２．４０ｇ，７ｍｍｏｌ）を添加した。還流条件下で４時間撹拌した後、反応混合液は５０℃に加熱して１２時間反応させた。反応混合液を減圧下で濃縮して、２−ピロール−１−イル−エタナミン２ｂを淡黄色オイルとして得た(８ｇ、収率４１．０％)。

工程２
１，２，３，４−テトラヒドロピロロ[１，２−ａ]ピラジン
２−ピロール−１−イル−エタナミン２ｂ(２ｇ，１８ｍｍｏｌ)を４０ｍＬのエタノールに溶解し、ホルムアルデヒド溶液（４０％，１．５ｍＬ，１８ｍｍｏｌ）を添加し、次いで１ｍＬのトリフルオロ酢酸をゆっくりと滴下した。反応混合液は５０℃で１５分間加熱した後、室温に冷やして１２時間撹拌した。反応混合液は減圧下で濃縮して、５０ｍＬの酢酸エチルを加えて、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥してろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して、１，２，３，４−テトラヒドロピロロ[１，２−ａ]ピラジン２ｃを淡黄色オイルとして得た(１．６０ｇ、収率７２．７％)。

工程３
4-[[3-(3,4-ジヒドロ-1H-ピロロ[1,2-a]ピラジン-2-カルボニル)-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（３００ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を３ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（５６８ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）、１，２，３，４−テトラヒドロピロロ[１，２−ａ]ピラジン２ｃ（２１０ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３５０μＬ，２ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[3-(3,4-ジヒドロ-1H-ピロロ[1,2-a]ピラジン-2-カルボニル)-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン２を白色固体として得た(１５ｍｇ、収率３．７％)。
MS m/z (ESI): 403.1 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 10.19
(br. s, 1H), 8.51 (d, 1H), 7.82 (m, 3H), 7.41 (m, 2H), 7.13 (m, 1H), 6.65
(m, 1H), 6.24 (m, 1H), 5.81 (m, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.33 (s, 2H), 4.13
(m, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.71 (m, 1H), 2.85 (m, 1H)

メチル 7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキシレート

工程１
メチル３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−カルボキシレート
７−ｔｅｒｔ−ブチル１−メチル３−（トリフルオロメチル）−６，８−ジヒドロ−５Ｈ−イミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１，７−ジカルボキシレート３ａ（６００ｍｇ，１．７２ｍｍｏｌ，「特許出願ＷＯ２００９０８２８８１」に開示の公知方法に従って調製）を２０ｍＬの塩化水素の１，４−ジオキサン溶液（２Ｍ）に溶解した。５時間撹拌後、反応混液は減圧下に濃縮して、５０ｍＬのジクロロメタンを添加した。飽和炭酸水素ナトリウム溶液を反応混液にｐＨが８になるまで滴下した。有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過を行った。ろ液を減圧下に濃縮して粗メチル３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−カルボキシレート３ｂ（４３０ｍｇ）を白色固体として得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。

工程２
メチル 7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキシレート
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（３００ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を２ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（５６８ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）、粗メチル３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−カルボキシレート３ｂ（３００ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．４ｍＬ，２ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、メチル 7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキシレート３を淡黄色固体として得た（１２０ｍｇ、収率２３．０％）。
MS m/z (ESI): 530.1 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 10.48
(br. s, 1H), 8.52 (d, 1H), 7.87 (m, 3H), 7.43 (m, 2H), 7.30 (m, 1H),
5.02 (m, 2H), 4.34 (s, 2h), 4.17 (m, 2H), 3.99 (m, 2H), 3.00 (s, 3H)

4-[[3-(6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,2-a]ピラジン-7-カルボニル)-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

工程１
イミダゾ[１，２−ａ]ピラジン
ピラジン−２−アミン４ａ（５ｇ，５２ｍｍｏｌ）を４０％２−クロロアセトアルデヒド溶液（１５ｍＬ，７８ｍｍｏｌ）に溶解し、炭酸水素ナトリウム（６．６０ｇ，７８ｍｍｏｌ）を添加した。１００℃で４８時間撹拌した後、反応混液は室温まで冷却し、１００ｍＬの飽和炭酸カリウム溶液を加えて、ジクロロメタン（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下に濃縮し、イミダゾ[１，２−ａ]ピラジン４ｂを茶色の固体として得た(３ｇ、収率５０．０％)。
MS m/z (ESI): 120.1 [M+1]

工程２
５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，２−ａ]ピラジン
イミダゾ[１，２−ａ]ピラジン４ｂ（５００ｍｇ，４．２０ｍｍｏｌ）を５ｍＬの２−メトキシエタノールに溶解し、二酸化白金（１００ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）を添加して、反応器を３回水素でパージした。１２時間撹拌後、反応混合液はろ過した。ろ液を減圧下に濃縮して、５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，２−ａ]ピラジン４ｃを黄色オイルとして得た（２００ｍｇ、収率３８．７％）。
MS m/z (ESI): 124.1 [M+1]

工程３
4-[[3-(6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,2-a]ピラジン-7-カルボニル)-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（３２３ｍｇ，１．０８ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（６１４ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）、５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，２−ａ]ピラジン４ｃ（２００ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．４ｍＬ，２．１６ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[3-(6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,2-a]ピラジン-7-カルボニル)-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン４を白色固体として得た（１０ｍｇ、収率２．３％）。
MS m/z (ESI): 404.1 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 10.07
(br. s, 1H), 8.53 (d, 1H), 7.96 (m, 1H), 7.83 (m, 3H), 7.51 (m, 1H),
7.30 (m, 2H), 6.01 (t, 1H), 4.73 (d, 2H), 4.35 (s, 2H), 1.60 (m, 2H), 1.34 (m, 2H)

4-[[4-フルオロ-3-[3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（５００ｍｇ，１．６８ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（９５５ｍｇ，２．５２ｍｍｏｌ）、３−トリフルオロメチル−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン塩酸塩５ａ（４５７ｍｇ，２ｍｍｏｌ，「特許出願ＷＯ２００９０８２８８１」に開示の公知方法に従って調製）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．６ｍＬ，３．３６ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[4-フルオロ-3-[3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン５を白色固体として得た（４００ｍｇ、収率５０．５％）。
MS m/z (ESI): 472.1 [M+1]
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃):
δ 10.81 (br. s,
1H), 8.49 (m, 1H), 7.79 (m, 3H), 7.42 (m, 2H), 7.08 (m, 1H), 5.00 (m, 1H), 4.64
(m, 1H), 4.32 (m, 2H), 4.16 (m, 3H), 3.75 (m, 1H), 3.49 (s, 1H)

4-[[4-フルオロ-3-[1-(ヒドロキシメチル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

工程１
[３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−イル]メタノール
メチル３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−カルボキシレート３ｂ（３１５ｍｇ，１．２６ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのエタノールに溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（２４０ｍｇ，６．３３ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌した後、反応混液にガスが発生しなくなるまで２Ｍ塩酸を滴下した。反応混液を減圧濃縮し、粗[３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−イル]メタノール６ａ（２３０ｍｇ）を白色固体として得た。生成物は精製しないで、次の反応に直接用いた。

工程２
4-[[4-フルオロ-3-[1-(ヒドロキシメチル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（３７２ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（８５ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ）、[３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−イル]メタノール６ａ（２７７ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）、１−エチル−（３−ジメチル−アミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３５９ｍｇ，１．８８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．３ｍＬ，２．５ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣を溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製して、4-[[4-フルオロ-3-[1-(ヒドロキシメチル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン６を白色固体として得た（４００ｍｇ、収率６４．０％）。
MS m/z (ESI): 502.2 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 10.81 (br.
s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.83-7.75 (m, 3H), 7.42-7.36 (m, 2H), 7.14-7.12 (m, 1H),
5.31 (s, 1H), 5.04 (s, 1H), 4.69 (d, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.32-4.25 (m, 4H), 4.16-4.10
(m, 1H), 2.05 (s, 1H)

N-エチル-7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド

工程１
Ｎ−エチル−３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−カルボキサミド
メチル３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−カルボキシレート３ｂ（１ｇ，４ｍｍｏｌ）を４０ｍＬのエチルアミン溶液（６０％）に溶解した。５０℃で１２時間撹拌した後、反応混液を減圧濃縮して、粗Ｎ−エチル−３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−カルボキサミド７ａ（１．１５ｇ）を白色固体として得た。生成物は精製しないで、次の反応に直接用いた。
MS m/z (ESI): 263.1 [M+1]

工程２
N-エチル-7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（２５０ｍｇ，０．８４ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（４８０ｍｇ，１．２６ｍｍｏｌ）、粗Ｎ−エチル−３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−カルボキサミド７ａ（２４２ｍｇ，０．９２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．３ｍＬ，１．６８ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液に５０ｍＬの水を加え、ジクロロメタンで抽出した（５０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、減圧濃縮し、１００ｍＬの酢酸エチルを加えて、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（４０ｍＬ）、次いで飽和食塩水（４０ｍＬ）で続けて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、N-エチル-7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド７を白色固体として得た（２００ｍｇ、収率４３．９％）。
MS m/z (ESI): 543.2 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 11.38
(br. s, 1H), 8.47 (m, 1H), 7.84 (m, 3H), 7.37 (m, 2H), 7.19 (m,
1H), 5.10 (s, 2H), 4.30 (s, 2H), 4.29 (m, 4H), 3.47 (m, 2H), 1.27 (m, 3H)

7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボン酸

メチル 7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキシレート３（３０ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ）を１，５ｍＬのテトラヒドロフラン、メタノールおよび水の混合溶媒（Ｖ／Ｖ／Ｖ＝１：１：１）に溶解し、水酸化ナトリウム（１０ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混液にｐＨが２になるまで濃塩酸を滴下した。反応混液はジクロロメタンで抽出した（１５ｍＬ×２）。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボン酸８を淡黄色固体として得た（１０ｍｇ、収率３４．４％）。
MS m/z (ESI): 516.5 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CD₃OD): δ 8.36 (d, 1H),
7.93 (d, 1H), 7.83 (m, 2H), 7.60 (d, 1H), 7.29 (m, 1H), 6.97 (t, 1H), 4.32 (s,
2H), 3.41 (m, 6H)

4-[[4-フルオロ-3-[1-(メチルアミノメチル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

工程１
4-[[3-[1-(クロロメチル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン
4-[[4-フルオロ-3-[1-(ヒドロキシメチル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン６（２００ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ）を５ｍＬの塩化チオニルに溶解した。反応混液は４時間加熱してリフラックスした。反応混液を減圧濃縮して、１０ｍＬの水を加え、ジクロロメタンで抽出した（１０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して、4-[[3-[1-(クロロメチル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン９ａを黄色固体として得た（２００ｍｇ、収率９６．６％）。
MS m/z (ESI): 520.1 [M+1]

工程２
4-[[4-フルオロ-3-[1-(メチルアミノメチル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン
4-[[3-[1-(クロロメチル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン９ａ（３７２ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）を５ｍＬのアセトニトリルに溶解し、メチルアミンの２Ｍテトラヒドロフラン溶液０．６ｍＬと炭酸カリウム（１５９ｍｇ，１．１５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混液を６時間加熱してリフラックスした。反応混液はろ過した。ろ液を減圧濃縮し、溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[4-フルオロ-3-[1-(メチルアミノメチル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン９を黄色固体として得た（２０ｍｇ、収率１０．１％）。
MS m/z (ESI): 515.2 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 11.87 (br.
s, 1H), 8.35-8.42 (m, 1H), 7.72-7.81 (m, 3H), 7.35-7.43 (m, 1H), 6.96-7.06
(m, 1H), 5.01-5.02 (m, 1H), 3.99-4.28 (m, 6H), 3.71-3.72 (m, 1H), 3.47 (s, 1H),
2.74 (d, 3H), 2.03-2.05 (m, 1H)

7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド

工程１
3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド
メチル３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−カルボキシレート３ｂ（２５０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）および１０ｍＬの水酸化アンモニウムを２０ｍＬの封管に入れた。反応混液を１００℃に加熱し、３時間反応を行った。反応混液を減圧濃縮して、粗3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド１０ａ（２４０ｍｇ）を白色固体として得た。生成物は精製しないで、次の反応に直接用いた。
MS m/z (ESI): 235.1 [M+1]

工程２
7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（１５０ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（２８５ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ）、粗3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド１０ａ（１３０ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ，１ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液に５０ｍＬの水を加え、ジクロロメタンで抽出した（６０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、減圧濃縮し、１００ｍＬの酢酸エチルを加えて、水（４０ｍＬ）、次いで飽和食塩水（４０ｍＬ）で続けて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド１０を白色固体として得た（５０ｍｇ、収率２０．０％）。
MS m/z (ESI): 515.1 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 8.49 (m, 1H),
7.85 (m, 3H), 7.33 (m, 2H), 7.15 (m, 1H), 5.07 (s, 2H), 4.30 (s, 2H), 4.23 (m,
4H)

4-[[3-[1-ブロモ-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

工程１
tert-ブチル 3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート
３−トリフルオロメチル−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン塩酸塩５ａ（２．２０ｇ，８．３０ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、トリエチルアミン（４．６ｍＬ，３３．２０ｍｍｏｌ）およびジtert-ブチルジカルボナート（２．７０ｇ，１２．５０ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液に５０ｍＬの水を加え、ジクロロメタンで抽出した（５０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、飽和塩化アンモニウム溶液（４０ｍＬ）、次いで飽和食塩水（４０ｍＬ）で続けて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して、tert-ブチル 3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート１１ａを淡褐色固体として得た（２．２０ｇ、収率９１．７％）。
MS m/z (ESI): 292.1 [M+1]

工程２
tert-ブチル 1-ブロモ-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート
tert-ブチル 3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート１１ａ（３７０ｍｇ，１．２７ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解して、−７８℃でＮ−ブロモコハク酸イミド（４５３ｍｇ，２．５４ｍｍｏｌ）を添加した。１時間撹拌後、反応混液を室温まで加熱して、１２時間反応を行った。反応混合液に５０ｍＬの水を加え、酢酸エチルで抽出した（６０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して、粗tert-ブチル 1-ブロモ-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート１１ｂ（５１０ｍｇ）を淡黄色オイルとして得た。
MS m/z (ESI): 372.0 [M+1]

工程３
1-ブロモ-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン塩酸塩
粗tert-ブチル 1-ブロモ-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート１１ｂ（４７０ｍｇ，１．２７ｍｍｏｌ）を塩化水素の２Ｍ１，４−ジオキサン溶液５０ｍＬに溶解した。４時間撹拌後、反応混液を減圧濃縮して、1-ブロモ-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン塩酸塩１１ｃ（２２０ｍｇ，収率５６．５％）を淡黄色オイルとして得た。

工程４
4-[[3-[1-ブロモ-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（２１０ｍｇ，０．７０ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（３６０ｍｇ，０．９５ｍｍｏｌ）、1-ブロモ-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン塩酸塩１１ｃ（２１４ｍｇ，０．７０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．４ｍＬ，２．１０ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液に５０ｍＬの水を加え、ジクロロメタンで抽出した（８０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、減圧濃縮し、１００ｍＬの酢酸エチルを加えて、飽和炭酸ナトリウム溶液（４０ｍＬ）、水（４０ｍＬ）、次いで飽和食塩水（４０ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[3-[1-ブロモ-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン１１を白色固体として得た（１８５ｍｇ、収率４８．０％）。
MS m/z (ESI): 552.0 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 8.48 (m, 1H),
7.73 (m, 3H), 7.31 (m, 2H), 7.11 (m, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.48 (m,
4H)

4-[[4-フルオロ-3-[2-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,2-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

工程１
2-(トリフルオロメチル)イミダゾ[1,2-a]ピラジン
ピラジン−２−アミン４ａ（５．２５ｇ，５５．２０ｍｍｏｌ）を１２０ｍＬのエタノールに溶解し、３−ブロモ−１，１，１−トリフルオロ−プロパン―２−オン１２ａ（５．７ｍＬ，５５．２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混液は加熱して１６時間リフラックスを行った。反応混液は減圧濃縮し、１００ｍＬの酢酸エチルおよび１００ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えて、分液した。水相は酢酸エチルで抽出した（５０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ｂを用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、2-(トリフルオロメチル)イミダゾ[1,2-a]ピラジン１２ｂを黄色固体として得た（２．４０ｇ、収率２２．８％）。
MS
m/z (ESI): 188.0 [M+1]

工程２
2-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,2-a]ピラジン
2-(トリフルオロメチル)イミダゾ[1,2-a]ピラジン１２ｂ（２．４０ｇ，１２．５５ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのメタノールに溶解して、Ｐｄ−Ｃ（１０％、４８０ｍｇ）を添加し、反応容器は３回水素でパージした。１２時間撹拌後、反応混液をろ過し、ろ過ケーキはメタノールで洗浄した。ろ液を減圧濃縮して、2-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,2-a]ピラジン１２ｃを黄色オイルとして得た（２．３０ｇ、収率９５．８％）。

工程３
4-[[4-フルオロ-3-[2-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,2-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（５００ｍｇ，１．６８ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（８３０ｍｇ，２．５２ｍｍｏｌ）、2-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,2-a]ピラジン１２ｃ（３８４ｍｇ，２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１ｍＬ，５ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、得られた残渣は溶出系Ａを用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、4-[[4-フルオロ-3-[2-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,2-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン１２を白色固体として得た（２００ｍｇ、収率２５．０％）。
MS m/z (ESI): 472.1[M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 10.29 (br.
s, 1H), 8.47 (m, 1H), 7.80 (m, 3H), 7.37 (m, 2H), 7.25 (m, 1H), 6.50 (m,
1H), 4.67 (s, 2H), 4.28 (m, 2H), 4.14 (m, 2H), 3.73 (m, 2H)

7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-N-メチル-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド

工程１
N-メチル-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド
メチル３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−カルボキシレート３ｂ（５００ｍｇ，２ｍｍｏｌ）を８ｍＬのメチルアミン溶液（２０％〜３０％）に溶解し、２０ｍＬの封管に入れた。６０℃で６時間撹拌した後、反応混液を減圧濃縮し、粗N-メチル-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド１３ａ（４９８ｍｇ）を白色固体として得た。生成物は精製しないで、次の反応に直接用いた。
MS m/z (ESI): 249.1 [M+1]

工程２
7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-N-メチル-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（５９８ｍｇ，２ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いで１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１３５ｍｇ，１ｍｍｏｌ）、粗N-メチル-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド１３ａ（４９８ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、１−エチル（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（５７３ｍｇ，３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７７４ｍｇ，６ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、３０ｍＬの水を加えて、酢酸エチルで抽出した（５０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-N-メチル-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド１３を白色固体として得た（６５０ｍｇ、収率６１．０％）。
MS m/z (ESI): 529.1 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CD₃OD): δ 8.36-8.34 (t,
1H), 7.96-7.94 (d, 1H), 7.86-7.81 (m, 2H), 7.50-7.45 (m, 2H), 7.22-7.15 (dd,
1H), 5.23 (s, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.39 (d, 2H), 4.32 (d, 1H), 4.21 (s, 1H), 4.14
(s, 1H), 3.76 (s, 1H), 2.85 (d, 3H)

エチル 7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,2-a]ピラジン-3-カルボキシレート

工程１
エチルイミダゾ[1,2-a]ピラジン-3-カルボキシレート
ピラジン−２−アミン４ａ（１ｇ，１０ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのエチレングリコールジメチルエーテルに溶解し、５０ｍＬのメタノールおよび３−ブロモ−２−オキソ−プロピオン酸塩（２．３０ｇ，１２ｍｍｏｌ）を添加した。室温で４時間撹拌後、反応混液を０℃に冷却して、固形物が析出するまで３０分間撹拌した。反応混液をろ過し、ろ過ケーキはエーテル（１０ｍＬ×３）で洗浄した。固形物は５０ｍＬの無水エタノールに溶解し、溶液は４時間リフラックスを行った。反応混液は減圧濃縮し、１００ｍＬのジクロロメタンを加え、飽和炭酸ナトリウム溶液（４０ｍＬ）および飽和食塩水（４０ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液は減圧濃縮して、エチルイミダゾ[1,2-a]ピラジン-3-カルボキシレート１４ａを褐色固体として得た（０．５５ｇ、収率２８．９％）。
MS m/z (ESI): 192.1 [M+1]

工程２
エチル 5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,2-a]ピラジン-3-カルボキシレート
エチルイミダゾ[1,2-a]ピラジン-3-カルボキシレート１４ａ（５５０ｍｇ，２．７６ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのメタノールに溶解して、Ｐｄ−Ｃ（１０％、１００ｍｇ）を添加し、反応容器は３回水素でパージした。３時間撹拌後、反応混液をろ過し、ろ液を減圧濃縮して、エチル 5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,2-a]ピラジン-3-カルボキシレート１４ｂを黄色オイルとして得た（４８０ｍｇ、収率８７．６％）。
MS m/z (ESI): 196.1 [M+1]

工程３
エチル 7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,2-a]ピラジン-3-カルボキシレート
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（３００ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（５７０ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）、エチル 5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,2-a]ピラジン-3-カルボキシレート１４ｂ（２００ｍｇ，１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．３ｍＬ，２ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液に５０ｍＬの水を加えて、ジクロロメタンで抽出した（８０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、減圧濃縮し、１００ｍＬの酢酸エチルを加えて、飽和炭酸ナトリウム溶液（４０ｍＬ）、水（４０ｍＬ）および飽和食塩水（４０ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、エチル 7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,2-a]ピラジン-3-カルボキシレート１４を白色固体として得た（２８０ｍｇ、収率５８．６％）。
MS
m/z (ESI): 476.1 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 10.53 (br.
s, 1H), 8.46 (m, 1H), 7.76 (m, 3H), 7.59 (s, 1H), 7.36 (m, 2H), 7.08 (m,
1H), 4.69 (s, 2H), 4.37 (m, 2H), 4.31 (s, 2H), 4.27 (m, 4H), 1.26 (t, 3H)

4-[[3-[3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

３−［（４−オキソ−３Ｈ−フタラジン−１−イル）メチル］安息香酸１５ａ（３００ｍｇ，１．０７ｍｍｏｌ，「特許出願ＷＯ２００４０８０９７６」に開示の公知方法に従って調製）を１０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（７３０ｍｇ，１．９３ｍｍｏｌ）、３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−[１，２，４]トリアゾロ[４，３−ａ]ピラジン塩酸塩１ｂ（２６９ｍｇ，１．４０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．９ｍＬ，５．３０ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液に１５ｍＬの水を加えて、酢酸エチルで抽出した（２０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[3-[3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン１５を白色固体として得た（１００ｍｇ、収率２０．６％）。
MS m/z (ESI): 455.1 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 10.30 (br.
s, 1H), 8.49 (d, 1H), 8.02 (m, 1H), 7.78 (m, 3H), 7.43 (m, 3H), 5.31 (s,
2H), 4.35 (s, 2H), 4.21 (m, 2H), 4.12 (m, 2H)

4-[[3-(6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル)-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（３６０ｍｇ，１．２０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（６００ｍｇ，１．８０ｍｍｏｌ）、５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン１６ａ（１５０ｍｇ，１．２０ｍｍｏｌ，「特許出願ＷＯ２００９０９００５５」に開示の公知方法に従って調製）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．４ｍＬ，２．４０ｍｍｏｌ）を添加した。２０時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[3-(6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル)-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン１６を黄色固体として得た（１００ｍｇ、収率２１．０％）。
MS m/z (ESI): 405.1 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 10.47 (br.
s, 1H), 8.51-8.49 (m, 1H), 7.99-1.77 (m, 4H), 7.42-7.30 (m, 2H), 7.30-7.12
(m, 1H), 4.76 (m, 2H), 4.37-4.28 (m, 4H), 3.77-3.73 (m, 2H)

4-[[3-(6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル)-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（１７０ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（３２３ｍｇ，０．８５ｍｍｏｌ）、５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン塩酸塩１７ａ（１００ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ、「Journal of Medicinal Chemistry, 2005, 48(1), 141-151」に開示の公知方法に従って調製）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３０２ｍｇ，１．７０ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[3-(6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル)-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン１７を淡黄色固体として得た（５０ｍｇ、収率２１．７％）。
MS m/z (ESI): 405.1 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 10.87 (br. s,
1H), 8.46-8.45 (m, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.80-7.76 (m, 3H), 7.40-7.38 (m, 2H),
7.12-7.07 (m, 1H), 4.79 (m, 2H), 4.31-4.20 (m, 4H), 3.75-3.62 (m, 2H)

4-[[4-フルオロ-3-[1-(ピロリジン-1-カルボニル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

工程１
ピロリジン-1-イル-[3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-イル]メタノン
ピロリジン（５６０ｍｇ，８ｍｍｏｌ）、メチル３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１−カルボキシレート３ｂ（４００ｍｇ，１．６０ｍｍｏｌ）および０．４ｍＬの水を封管中で混ぜ合わせた。５０℃で４時間撹拌後、反応混液を減圧濃縮して、粗ピロリジン-1-イル-[3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-イル]メタノン１８ａ（４６０ｍｇ）を淡黄色固体として得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。
MS m/z (ESI): 289.1 [M+1]

工程２
4-[[4-フルオロ-3-[1-(ピロリジン-1-カルボニル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（４１７ｍｇ，１．４０ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（１ｇ，２．８０ｍｍｏｌ）、粗ピロリジン-1-イル-[3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-イル]メタノン１８ａ（４００ｍｇ，１．４０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．７ｍＬ，４．２０ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、２０ｍＬの水を加えて、酢酸エチルで抽出した（１０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[4-フルオロ-3-[1-(ピロリジン-1-カルボニル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン１８を淡黄色固体として得た（１５０ｍｇ、収率１８．０％）。
MS m/z (ESI): 569.2 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆): δ
12.57 (br. s, 1H), 8.26 (d, 1H), 7.83-7.93 (m, 3H), 7.46-7.50 (m,
2H), 7.26-7.31 (m, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.27-4.34 (m, 2H),
4.26-4.27 (m, 1H), 4.07-4.17 (m, 2H), 3.89-3.92 (m, 2H), 3.66-3.68 (m, 1H),
3.48-3.49 (m, 1H), 3.36-3.38 (m, 1H), 1.76-1.91 (m, 4H)

4-[[4-フルオロ-3-[2-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（７８０ｍｇ，２．６５ｍｍｏｌ）を１５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（１．８０ｇ，４．７７ｍｍｏｌ）、2-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン１９ａ（５６０ｍｇ，２．９２ｍｍｏｌ，「特許出願ＷＯ２００９０２５７８４」に開示の公知方法に従って調製）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．４ｍＬ，７．９５ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、３０ｍＬの水を加えて、酢酸エチルで抽出した（３０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[4-フルオロ-3-[2-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン１９を淡黄色固体として得た（２０５ｍｇ、収率１６．４％）。
MS m/z (ESI): 473.1 [M+1]
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃):
δ 10.67 (br. s,
1H), 8.48 (s, 1H), 7.77 (m, 3H), 7.42 (m, 2H), 7.11 (t, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.75
(s ,1H),4.39 (s, 2H), 4.32 (d, 3H), 3.88 (s, 1H)

4-[[4-フルオロ-3-[1-(モルホリン-4-カルボニル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

工程１
7-tert-ブトキシカルボニル-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボン酸
７−ｔｅｒｔ−ブチル１−メチル３−（トリフルオロメチル）−６，８−ジヒドロ−５Ｈ−イミダゾ[１，５−ａ]ピラジン−１，７−ジカルボキシレート３ａ（４．１０ｇ，１２ｍｍｏｌ）を１５ｍＬのテトラヒドロフランとメタノールの混合溶媒（Ｖ／Ｖ＝２：１）に溶解し、２０ｍＬの２Ｍ水酸化ナトリウム溶液を添加した。１２時間撹拌後、反応混液は減圧下に濃縮し、１Ｍ塩酸を反応混液のｐＨが５と７の間になるまでに滴下した。反応混液はろ過し、ろ過ケーキを真空乾燥して、7-tert-ブトキシカルボニル-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボン酸２０ａ（２ｇ、収率５０．０％）を淡黄色固体として得た。
MS m/z (ESI): 334.1 [M+1]

工程２
tert-ブチル 1-(モルホリン-4-カルボニル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート
7-tert-ブトキシカルボニル-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボン酸２０ａ（３３０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（７５６ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、モルホリン（１７４ｍｇ，２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、２０ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液を加えて、ジクロロメタンで抽出した（２０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、tert-ブチル 1-(モルホリン-4-カルボニル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート２０ｂを黄色固体として得た（４００ｍｇ、収率１００．０％）。
MS m/z (ESI): 405.1 [M-1]

工程３
モルホリノ-[3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-イル]メタノン塩酸塩
、tert-ブチル 1-(モルホリン-4-カルボニル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート２０ｂ（４７０ｍｇ，１．２７ｍｍｏｌ）を塩化水素の２Ｍ１，４−ジオキサン溶液２０ｍＬに溶解した。１２時間撹拌後、反応混液を減圧濃縮して、モルホリノ-[3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-イル]メタノン塩酸塩２０ｃ（３００ｍｇ）を淡黄色オイルとして得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。

工程４
モルホリノ-[3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-イル]メタノン
粗モルホリノ-[3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-イル]メタノン塩酸塩２０ｃ（３３０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの酢酸エチルに溶解し、炭酸カリウム（１０ｇ，７２ｍｍｏｌ）を添加した。４時間撹拌後、反応混液をろ過し、ろ液を減圧濃縮して、粗モルホリノ-[3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-イル]メタノン２０ｄ（３００ｍｇ）を淡黄色固体として得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。

工程５
4-[[4-フルオロ-3-[1-(モルホリン-4-カルボニル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（３９０ｍｇ，１．３０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（９８３ｍｇ，２．６０ｍｍｏｌ）、粗モルホリノ-[3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-イル]メタノン２０ｄ（４００ｍｇ，１．３０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．７ｍＬ，３．９０ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[4-フルオロ-3-[1-(モルホリン-4-カルボニル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン２０を淡黄色固体として得た（１５０ｍｇ、収率２０．０％）。
MS m/z (ESI): 585.2 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆): δ
12.58 (br. s, 1H
), 8.27 (d, 1H ), 7.83-7.98 (m, 3H), 7.48-7.50 (m, 2H), 7.27-7.32 (m, 1H), 5.07
(s, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.27-4.35 (m, 2H), 4.26-4.27 (m, 1H), 4.07-4.12 (m, 3H),
3.59-3.66 (m, 6H), 3.17-3.18 (m, 2H)

N-メチル-7-[3-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド

３−［（４−オキソ−３Ｈ−フタラジン−１−イル）メチル］安息香酸１５ａ（１８６ｍｇ，０．６７ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（９８ｍｇ，０．７３ｍｍｏｌ）、粗N-メチル-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド１３ａ（１５０ｍｇ，０．６１ｍｍｏｌ）、１−エチル（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１７３ｍｇ，０．９１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２５３μｌ，１．８２ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、５０ｍＬの水を加えて、酢酸エチルで抽出した（５０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、N-メチル-7-[3-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド２１を淡黄色固体として得た（２８０ｍｇ、収率９０．０％）。
MS m/z (ESI): 511.2 [M+1]
¹H NMR
(400 MHz, CDCl₃): δ 11.80 (br.
s, 1H), 8.49 (d, 1H), 7.89 (m, 2H), 7.79 (t, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.43 (m,
2H), 5.26 (s, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.22 (m, 4H), 3.01 (m, 3H)

7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-N,N-ジメチル-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド

工程１
tert-ブチル 1-(ジメチルカルバモイル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート
7-tert-ブトキシカルボニル-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボン酸２０ａ（３３０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（７５６ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、ジメチルアミン塩酸塩（１５６ｍｇ，２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３８７ｍｇ，３ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、５０ｍＬの酢酸エチルを加えて、飽和塩化アンモニウム溶液（３０ｍＬ）次いで飽和食塩水（２０ｍＬ×３）で順次洗浄した。有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、粗tert-ブチル 1-(ジメチルカルバモイル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート２２ａ（３６２ｍｇ）を淡黄色固体として得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。
MS m/z (ESI): 363.1 [M+1]

工程２
N,N-ジメチル-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド塩酸塩
粗tert-ブチル 1-(ジメチルカルバモイル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート２２ａ（３６２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を塩化水素の２Ｍ１，４−ジオキサン溶液３ｍＬに溶解した。１２時間撹拌後、反応混液を減圧濃縮して、粗N,N-ジメチル-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド塩酸塩２２ｂ（２６２ｍｇ）を淡黄色オイルとして得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。

工程３
N,N-ジメチル-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド
N,N-ジメチル-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド塩酸塩２２ｂ（２３４ｍｇ，０．８０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの酢酸エチルに溶解し、炭酸カリウム（１０ｇ，７２ｍｍｏｌ）を添加した。４時間撹拌後、反応混液をろ過し、ろ液を減圧濃縮して、粗N,N-ジメチル-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド２２ｃ（２００ｍｇ）を淡黄色固体として得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。

工程４
7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-N,N-ジメチル-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（３００ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（７５６ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、N,N-ジメチル-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド２２ｃ（２００ｍｇ，０．８０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-N,N-ジメチル-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド２２を淡黄色固体として得た（４５ｍｇ、収率１１．０％）。
MS m/z (ESI): 543.1 [M+1]
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.58 (br. s, 1H), 8.27 (d, 1H),
7.83-7.96 (m, 3H), 7.49-7.51 (m, 2H), 7.27-7.31 (m, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.35 (s,
2H), 4.26-4.27 (m, 1H), 4.05-4.07 (m, 1H), 3.66-3.67 (m, 1H), 3.30-3.39 (m,
6H), 2.88-2.97 (m, 2H)

4-[[3-[3-(ジフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル]-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジ-1-オン

工程１
２，２−ジフルオロ−Ｎ’−ピラジン−２−イル−アセトヒドラジドジフルオロアセテート
ピラジン−２−イルヒドラジン２３ａ（１ｇ，９ｍｍｏｌ）をナス型フラスコ（２５ｍＬ）に入れ、無水ジフルオロ酢酸（４ｇ，２２．９８ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。室温で３時間撹拌後、反応混液を減圧濃縮して、粗２，２−ジフルオロ−Ｎ’−ピラジン−２−イル−アセトヒドラジドジフルオロアセテート２３ｂ（２ｇ）を褐色オイルとして得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。

工程２
3-(ジフルオロメチル)-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン
２，２−ジフルオロ−Ｎ’−ピラジン−２−イル−アセトヒドラジドジフルオロアセテート２３ｂ（２ｇ，０．０１ｍｏｌ）を１０ｍＬのポリリン酸に溶解した。１４０℃で７時間撹拌後、反応混液を５０℃に冷却して、もう１２時間撹拌した。反応混液は熱いうちに氷水５０ｍＬ中に注ぎ、反応混液のｐＨが７と８の間になるまで３０％アンモニア水を滴下して、酢酸エチルで抽出した（３０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過した。ろ液は減圧濃縮した。得られた残渣を３０ｍＬの酢酸エチルに溶解し、活性炭を加えた。３０分間撹拌した後、混合液をろ過し、ろ液を減圧濃縮して、3-(ジフルオロメチル)-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン２３ｃを黄色固体として得た（４６０ｍｇ、収率３０％）。
MS m/z (ESI): 171 [M+1]

工程３
3-(ジフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロ-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン
3-(ジフルオロメチル)-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン２３ｃ（４６０ｍｇ，２．７０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのメタノールに溶解して、Ｐｄ−Ｃ（１０％、４６ｍｇ）を添加し、反応容器は３回水素でパージした。３時間撹拌後、反応混液をろ過し、ろ過ケーキはメタノール（１０ｍＬ）で洗浄した。ろ液を減圧濃縮して、粗3-(ジフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロ-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン２３ｄ（４００ｍｇ）を淡黄色オイルとして得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。
MS m/z (ESI): 175.0 [M+1]

工程４
4-[[3-[3-(ジフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル]-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジ-1-オン
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（６８５ｍｇ，２．３０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（１．１０ｇ，３．４５ｍｍｏｌ）、粗3-(ジフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロ-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン２３ｄ（４００ｍｇ，２．３０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．２ｍＬ，６．９０ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[3-[3-(ジフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル]-4-フルオロ-フェニル]メチル]-2H-フタラジ-1-オン２３を白色固体として得た（２００ｍｇ、収率２０．０％）。
MS m/z (ESI): 454.6 [M+1]

N-(シクロプロピルメチル)-7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド

工程１
tert-ブチル 1-(シクロプロピルメチルカルバモイル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート
7-tert-ブトキシカルボニル-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボン酸２０ａ（３３０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（７５６ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、シクロプロピルメチルアミン（１４２ｍｇ，２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、５０ｍＬの酢酸エチルを加えて、飽和塩化アンモニウム溶液（１５ｍＬ×３）次いで飽和食塩水（１０ｍＬ）で順次洗浄した。有機相を集めて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して、粗tert-ブチル 1-(シクロプロピルメチルカルバモイル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート２４ａ（３００ｍｇ）を茶赤色オイルとして得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。
MS m/z (ESI): 389.1 [M+1]

工程２
N-(シクロプロピルメチル)-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド塩酸塩
粗tert-ブチル 1-(シクロプロピルメチルカルバモイル)-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-7-カルボキシレート２４ａ（３００ｍｇ，０．７７ｍｍｏｌ）を塩化水素の２Ｍ１，４−ジオキサン溶液２０ｍＬに溶解した。１２時間撹拌後、反応混液を減圧濃縮して、粗N-(シクロプロピルメチル)-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド塩酸塩２４ｂ（２５０ｍｇ）を淡黄色オイルとして得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。
MS m/z (ESI): 289.1 [M+1]

工程３
N-(シクロプロピルメチル)-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド
N-(シクロプロピルメチル)-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド塩酸塩２４ｂ（２５０ｍｇ，０．７７ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、炭酸カリウム（３２０ｍｇ，２３０ｍｍｏｌ）を添加した。４時間撹拌後、反応混液をろ過し、ろ液を減圧濃縮して、粗N-(シクロプロピルメチル)-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド２４ｃ（２５０ｍｇ）を黄色固体として得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。

工程４
N-(シクロプロピルメチル)-7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（３００ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（７５６ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、粗N-(シクロプロピルメチル)-3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド２４ｃ（２５０ｍｇ，０．８７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、N-(シクロプロピルメチル)-7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド２４を淡黄色固体として得た（１５０ｍｇ、収率３０．０％）。
MS m/z (ESI): 569.2 [M+1]

7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボニトリル

工程１
3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボニトリル
3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボキサミド１０ａ（１００ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）を５ｍＬのオキシ塩化リンに溶解した。反応混液は加熱して４時間リフラックスした。反応混液を減圧濃縮し、１０ｍＬの飽和炭酸ナトリウム溶液を加えて、酢酸エチルで抽出した（２５ｍＬ×３）。有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、粗3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボニトリル２５ａ（１００ｍｇ）を褐色固体として得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。
MS m/z (ESI): 217.0 [M+1]

工程２
7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボニトリル
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（２１０ｍｇ，０．７０ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（３５０ｍｇ，０．９２ｍｍｏｌ）、粗3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボニトリル２５ａ（１００ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２５０μＬ，１．１８ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、7-[2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]ベンゾイル]-3-(トリフルオロメチル)-6,8-ジヒドロ-5H-イミダゾ[1,5-a]ピラジン-1-カルボニトリル２５を白色固体として得た（５０ｍｇ、収率２１．９％）。
MS m/z (ESI): 496.6 [M+1]

4-[[4-フルオロ-3-[3-(2,2,2-トリフルオロエチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン

工程１
3-(2,2,2-トリフルオロエチル)-5,6,7,8-テトラヒドロ-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン
3-(2,2,2-トリフルオロエチル) -[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン２６ａ（４６４ｍｇ，２．２９ｍｍｏｌ、「Journal of Medicinal
Chemistry,
2005, 48(1), 141-151」に開示の公知方法に従って調製）を２０ｍＬのメタノールに溶解し、Ｐｄ−Ｃ（１０％、２００ｍｇ）を添加し、反応容器は３回水素でパージした。３時間撹拌後、反応混液をろ過し、ろ液を減圧濃縮して、粗3-(2,2,2-トリフルオロエチル)-5,6,7,8-テトラヒドロ-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン２６ｂ（４８０ｍｇ）を無色オイルとして得た。生成物は、精製しないで、次の反応に直接用いた。

工程２
4-[[4-フルオロ-3-[3-(2,2,2-トリフルオロエチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン
2-フルオロ-5-[(4-オキソ-3H-フタラジン-1-イル)メチル]安息香酸１ａ（８０１ｍｇ，２．６９ｍｍｏｌ）を２５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヘキサフルオロリン酸Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（１．２７ｇ，３．３６ｍｍｏｌ）、粗3-(2,2,2-トリフルオロエチル)-5,6,7,8-テトラヒドロ-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン２６ｂ（４６０ｍｇ，２．２４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．８ｍＬ，４．４８ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌後、反応混合液は減圧濃縮し、３０ｍＬの水を加えて、酢酸エチルで抽出した（３０ｍＬ×３）。有機相を合わせて減圧濃縮し、３０ｍＬの酢酸エチルを加えて、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過した。ろ液は減圧濃縮し、得られた残渣は溶出系Ａを用いて薄層クロマトグラフィーで精製し、4-[[4-フルオロ-3-[3-(2,2,2-トリフルオロエチル)-6,8-ジヒドロ-5H-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン-7-カルボニル]フェニル]メチル]-2H-フタラジン-1-オン２６を白色固体として得た（２４０ｍｇ、収率２２．１％）。
MS m/z (ESI): 486.6 [M+1]

試験例

生物活性試験
［試験例１］ＰＡＰＲの酵素活性の測定法

以下のin vitroスクリーニング試験が、ＰＡＰＲの酵素活性の阻害に対する本発明化合物の活性の測定に用いられる。

下記のアッセイは、ＰＡＰＲの酵素活性を阻害する本発明化合物の活性をTrevigen HT F
homologousポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ阻害アッセイキット(TREVIGEN HT F homogeneous
PARP Inhibition Assay Kit, No. 4690-096-K)を用いて測定するものである。試験法はＤＮＡ修復過程で消費されるＮＡＤ^＋の必要量に基づくが、このものは蛍光活性を持たない基質を触媒して高い蛍光活性を持つ分子にする別の反応にも用いられる。それ故、反応系のＮＡＤ^＋濃度は蛍光シグナルの増加の程度を測定することによって知ることができるので、ＰＡＲＰの酵素活性に対する試験化合物の阻害の程度が計算できる。

TREVIGEN HT F homologousポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ阻害アッセイキットの取扱説明書は、アッセイの詳細な操作の他に、反応混合物（reaction mix）、サイクリング反応混合物（cycling mix）、緩衝液（buffer）などの試薬調製の参考としても用いることができる。

試験の方法は次のように纏められる：試験化合物はジメチルスルホキシドに溶解した後、試験で望む濃度に緩衝液で希釈した。２５μＬの２００ｎＭＮＡＤ^＋溶液を９６穴丸底プレートに添加して、１μＬの試験化合物溶液を添加し、コントロールの複製ウェルを設置した。次いで、ＤＮＡ，ＰＡＲＰ酵素および反応緩衝剤を含む２５μＬの反応混合液を各ウェルに添加した。室温で３０分間インキュベートした後、５０μＬのサイクリング反応混合物を各ウェルに添加し、室温で１５〜４０分間、暗所でインキュベートした。次いで、５０μＬの停止液を各ウェルに添加し、各ウェルの蛍光値をＥＬＩＡＳＡ（Ｅｘ５４４ｎｍ，Ｅｍ５９０ｎｍ）で読み取った。ＰＡＰＲの酵素活性についての試験化合物の阻害率はＮＡＤ^＋の検量線の式により計算できた。

化合物のＩＣ_５０値は、異なる濃度での阻害率により計算できた。

結論：本発明の好ましい化合物はＰＡＲＰ−１キナーゼの増殖抑制に関し有意に阻害活性を有する。

［試験例２］細胞増殖抑制アッセイ

以下の試験はトリプルネガティブ表現型の乳がん株細胞ＭＤＡ−ＭＢ−４３６の増殖抑制に対する本発明化合物の活性をin vitroで測定するものである。

下記のin vitro細胞アッセイはトリプルネガティブ表現型の乳がん細胞の増殖抑制に対する試験化合物の活性を測定するものである。阻害活性はＩＣ_５０値で示す。

試験方法は次のように纏められる：完全培地として１０％ＦＢＳとともにＤＭＥＭＦ１２（両者ともＧｉｂｃｏより購入）を用いることにより、ＭＤＡ−ＭＢ−４３６細胞を適当な細胞濃度（例、３０００細胞／ｍｌ培地）で９６穴細胞培養プレートに播種した。３７℃、５％二酸化炭素の条件下、細胞を恒温のインキュベーターで培養し、終夜生育した。試験化合物はジメチルスルホキシドに溶解した後、ＦＢＳを含まない培養液で試験で望む濃度に希釈した。細胞が器壁に付着した後、細胞培養液は一連の濃度（通常７〜９濃度）で試験化合物が含まれている新しい培養液と替えた。次いで、細胞プレートは３７℃、５％二酸化炭素の条件下で連続７２時間培養した。７２時間後、細胞増殖の抑制に対する試験化合物の活性をＣＣＫ８（細胞カウントキット−８、Ｎｏ．：ＣＫ０４，Ｄｏｊｉｎｄｏより購入）法を用いて測定した。

試験化合物のＩＣ_５０値は、異なる濃度での試験化合物の阻害率のデータにより計算した。

結論：本発明の好ましい化合物はＭＤＡ−ＭＢ−４３６細胞の増殖抑制に関し有意に阻害活性を有する。

薬物動態アッセイ
実験例１：本発明の実施例７、実施例１３および実施例１９の化合物の薬物動態アッセイ

１．要約
実施例７、実施例１３および実施例１９の化合物をラットに胃内にまたは静脈注射で投与して薬物の血漿濃度を異なる時間ポイントでＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により測定し、試験動物はＳＤラットを用いた。本発明化合物の薬物動態学的挙動をラットで調べ評価した。

２．プロトコール

２．１サンプル
実施例７、実施例１３および実施例１９の化合物

２．２試験動物
２４匹の成体ＳＤラット、雄と雌半々、を、SINO-BRITSH SIPPR/BK LAB. ANIMAL LTD., COから購入、証明書 No.： SCXK (Shanghai) 2003-0002.

２．３試験化合物の調製
胃内投与群：試験化合物の正しい量を図り、０．５ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、生理食塩水で１０ｍＬに希釈して、１．５ｍｇ／ｍＬに調整した。
静脈注射投与群：試験化合物の正しい量を図り、０．５％ＣＭＣ−Ｎａ中に添加して、１．５ｍｇ／ｍＬ懸濁液を調製した。

２．４投与
一夜絶食した後、２４匹の健康な成体ＳＤラット、雄と雌半々、に１５．０ｍｇ／ｋｇの投与量で胃内に投与し、投与容量は１０ｍＬ／ｋｇであった。

２．５サンプル収集
胃内投与群：血液サンプル（０．２ｍＬ）を眼窩洞から投与前および投与後０．２５時間、０．５時間、１．０時間、１．５時間、２．０時間、３．０時間、４．０時間、６．０時間、７．０時間、９．０時間、１２．０時間および２４．０時間に採取し、ヘパリン処理したチューブに入れて３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離して血漿を分離した。血漿サンプルは−２０℃で保存した。ラットは投与後２時間で餌を与えた。

静脈注射投与群：血液サンプル（０．２ｍＬ）を眼窩洞から投与前および投与後２分、１５分、０．５時間、１．０時間、２．０時間、３．０時間、４．０時間、６．０時間、８．０時間、１２．０時間および２４．０時間に採取し、ヘパリン処理したチューブに入れて３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離して血漿を分離した。血漿サンプルは−２０℃で保存した。ラットは投与後２時間で餌を与えた。

３．操作
投与後の種々の時間ポイントで採取したラットのブランクの血漿２０μｌに内部標準液５０μｌおよびメタノール１４０μｌを添加し、攪拌機で３分間かき混ぜた。混合液は１３，５００ｒｐｍで１０分間遠心分離を行った。上澄み液２０μｌをＬＣ−ＭＳ／ＭＳで分析した。主な薬物動態パラメーターはソフトウエアＤＡＳ２．０で計算した。

４．薬物動態パラメーターの結果
本発明化合物の薬物動態パラメーターを以下に示した：

結論：本発明化合物はより優れた薬物動態学的データと有意に改善された薬物動態特性を有する。

抗腫瘍効果のアッセイ
実験例２試験は本発明化合物の抗腫瘍効果をマウスで測定するものである。

１．目的
ヒト大腸癌ＳＷ６２０またはヒト乳がん細胞ＭＸ−１をヌードマウスに移植した腫瘍についてテモゾロミド（ＴＭＺ）と併用して投与した本発明化合物の治療効果を試験動物としてＢＡＬＢ／ｃＡヌードマウスを用いて評価した。

２．試験薬
実施例１および実施例１９の化合物

３．試験動物
ＢＡＬＢ／ｃＡヌードマウス、ＳＰＦ、１６−２０ｇ、雌、をSINO-BRITSH SIPPR/BK LAB. ANIMAL LTD., COから購入、証明書 No.： SCXK (Shanghai) 2008-0016.

４．実験方法

４．１ヌードマウスを３日間実験環境に馴化させた。

４．２ヌードマウスの右の肋骨に大腸癌細胞ＳＷ６２０を皮下注射で播種した。腫瘍が３３９±１３２ｍｍ^３に成長した後、マウスをランダムにチーム分けした（ｄ０）。

４．３投与量と投与計画を下記の表に示した。腫瘍の容積とマウスの体重は週に２〜３回測定して記録した。
腫瘍の容積（Ｖ）は次の等式で計算した：
Ｖ＝１／２×ａ×ｂ^２
式中、ａ，ｂはそれぞれ長さと幅を示す。
抗腫瘍率（％）＝（Ｃ−Ｔ）／Ｃ（％）
式中、Ｔ，Ｃは、それぞれ実験終了時における実験グループ（試験化合物）およびブランクのコントロール群の腫瘍容積を示す。

５．投与量、投与計画および結果

結論：抗腫瘍率データ（％）の範囲は次のものを示す：「＋」：５０％〜６０％；「＋＋」：６０％〜８０％；「＋＋＋」：８０％〜１００％。テモゾロミド（ＴＭＺ）と併用して投与した本発明の試験化合物は、大腸癌細胞ＳＷ６２０およびヒト乳がん細胞ＭＸ−１について有意な抗腫瘍率を持ち、全て６０％以上であった。

Claims

式（Ｉ）の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩：

式中、ＡおよびＢは、結合している炭素原子と一緒になってアリールを形成し、；
Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３またはＲ^４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、アルキルおよびアルコキシルから成る群から選択され、；
Ｄ，ＥまたはＧは、それぞれ独立して、窒素原子およびＣ（Ｒ^８）から成る群から選択され；
Ｒ^５は、水素、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルから成る群から選択され；
Ｒ^６またはＲ^７は、それぞれ独立して、水素、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルから成る群から選択され；
または、Ｒ^６およびＲ^７は、結合しているＮ原子と一緒になってヘテロシクリルを形成してもよく、該ヘテロシクリルは１以上のＮ、ＯまたはＳ（Ｏ）_ｍのヘテロ原子を含んでいて、さらに該ヘテロシクリルはアルキル、ハロゲン、ヒドロキシルおよびアルコキシルから成る群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ^８は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、アルコキシル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）ＯＲ^５、‐（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^６Ｒ^７、‐Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^５、‐ＮＲ^６Ｒ^７、‐ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から選択され、該アルキルまたはアルコキシルは、それぞれ独立して、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルから成る群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよく；
ｍは０、１および２から成る群から選択され；そして
ｎは０、１および２から成る群から選択される。
アリールがフェニルである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ^１が水素である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ^１がハロゲンである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ^１がフッ素原子である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ^８が水素、アルキル、ハロゲン、シアノ、‐Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５、‐（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^６Ｒ^７および‐Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７から成る群から選択されたものであって、該アルキルは１以上のハロゲン原子で置換されていてもよい、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ^８がトリフルオロメチルである、請求項６に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３またはＲ^４が、それぞれ独立して水素である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ^２、Ｒ^３またはＲ^４がそれぞれ独立して水素であり、Ｒ^１がハロゲンである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ^２、Ｒ^３またはＲ^４がそれぞれ独立して水素であり、Ｒ^１がフッ素原子である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩。
化合物が、

から成る群から選ばれる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩。
製造法が：

式（ＩＡ）の化合物をカルボン酸に加水分解する任意の工程と、カルボン酸を式（ＩＢ）の化合物またはその塩と反応させて式（Ｉ）の化合物を得る工程（式中：Ｒ^ａは、ハロゲン、ヒドロキシルおよびアルコキシルから成る群から選ばれ；Ａ，Ｂ，Ｄ，Ｅ，ＧおよびＲ^１〜Ｒ^４は請求項１で定義されたものである）を含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の製造法。
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の治療上有効な量と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物。
ＰＡＲＰ阻害剤の製造における請求項１〜１１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩または請求項１３に記載の医薬組成物の使用。
癌治療におけるアジュバント、または腫瘍細胞を電離放射線もしくは化学療法に敏感にさせる薬物の製造における請求項１〜１１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩または請求項１３に記載の医薬組成物の使用。
乳がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、直腸がん、肝臓がんおよび大腸がんから成る群から選択される癌の治療用薬物の製造における請求項１〜１１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩の使用または請求項１３に記載の医薬組成物の使用。
さらにテモゾロミド、アドリアマイシン、タキソール、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビンおよびベバシズマブから成る群から選ばれる治療上の有効量の薬が使用される、請求項１４，１５または１６のいずれか１項に記載の使用。