JP5788330B2 - 有機着色微粒子、それを含む診断薬キット及びインビトロ診断方法 - Google Patents
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Description
また、金属コロイドの場合、リガンドの結合方法は物理吸着と呼ばれる原理が一般的である。リガンドの結合方法としては、物理吸着、化学結合(共有結合)、イオン結合、包括法、などが一般的に挙げられる。物理吸着とは基材(例えば、発色微粒子)と結合する材料(例えば、リガンド)との間に働く疎水性相互作用を利用した結合方法である。実際には疎水性相互作用だけでなく、靜電的作用、分子間力、その他、様々なメカニズムが働いていると考えられる。物理吸着はその他の結合方法に対し操作が容易であることから、簡便性やコストの面で有利になる。しかしながら物理吸着の場合は、リガンドの結合部位が一定にならなかったり、界面活性剤の存在下で吸着が阻害されてしまったり、などの問題が起こる場合もあり得る。また十分な量のリガンドを結合できない場合もあり得る。
以下の特許文献3には、セルロースを染色した微粒子が開示されているが、セルロース微粒子量に対する染料仕込み量が20wt%程度であるため、得られる染色微粒子は淡いものとなる。これを以下の特許文献4にあるように、物理吸着あるいは化学結合により抗体を付与してイムノクロマトに用いたが、抗体の結合量が十分でなく、また微粒子自体の発色が弱い為、明瞭な発色結果が得られない。
すなわち本発明は以下のとおりである。
[2]前記有機着色微粒子の重量の20wt%〜80wt%が着色成分である、前記[1]に記載の有機着色微粒子。
[3]物理吸着によりリガンドが結合された、前記[1]又は[2]に記載の有機着色微粒子。
[4]反応性活性基を有する、前記[1]〜[3]のいずれかに記載の有機着色微粒子。
[5]前記反応性活性基が原子数3以上のスペーサー構造を有する、前記[4]に記載の有機着色微粒子。
[6]共有結合により前記反応性活性基にリガンドが結合された、前記[4]に記載の有機着色微粒子。
[7]前記[1]〜[6]のいずれかに記載の有機着色微粒子を含む診断薬キット。
[8]イムノクロマトグラフキットである、前記[7]に記載の診断薬キット。
以下、本願発明について詳細に説明する。
本発明における有機着色微粒子とは、平均粒径が10nm〜1000nmであり、かつ、発色強度が1.0〜5.0である有機着色微粒子をいう。平均粒径の好ましい範囲は、100nm〜900nmであり、より好ましくは200nm〜800nmである。平均粒径が1000nmを超えると、イムノクロマトキットに用いた際に展開が遅く、評価の迅速化に繋がらず、また展開膜上に捕捉されやすくなり、バックグラウンド自体が発色してしまうことで期待する検出箇所での発色が不明瞭になる傾向にある。特に検出箇所においては、補足試薬の塗布に起因して、展開膜のポアサイズが小さく変化している場合が多い。そのためそこでは標識が捕捉され易い傾向があり、すなわち擬陽性が出易い。もはや検査キットとして信頼できないものとなってしまう。
本発明における発色強度とは、有機着色微粒子の分散液を光路長10mmとして、400nm〜800nmの範囲で積分球を用いた可視吸光度測定を行い、分散媒のバックグラウンド成分を差し引くことで、分散基質自体の吸光度曲線を得、その最大値(ABS)を分散基質の重量パーセントで割り返し、0.01wt%当りで算出した値として定義する。積分球を用いることで、粒子の散乱光の影響を低減させることができるため、得られた値は微粒子の発色度合いの指標足り得、この数値が大きいほど発色が明瞭であると判断できる。本発明の微粒子の発色強度は1.0以上であるが、大きい程好ましい。発色強度を増大させるには、分散する染料や顔料として発色が高いものを用いるか、染色回数を増やすなどの手段を選択することができる。しかしながら、発色強度を5.0以上にするには、一般的な染料を用いた数回の染色では到達できないため、経済性を考慮すれば発色強度は1.0〜5.0であり、より好ましくは1.5〜5.0であり、さらに好ましくは2.0〜5.0である。発色強度が1.0より小さい場合は、発色が弱いため、イムノクロマトキットに用いた際に検出部位の視認性に劣り、検査結果の信頼性を損ねてしまう。
本発明における有機着色微粒子の素材は、発色強度が高く、安定分散したものであれば特に限定されない。染料や顔料を用いて濃色化可能な素材が適用できるが、濃染化し、かつ強固な染着を実現したほうが、イムノクロマトによる検査時や、キットの長期保管の品質安定化に寄与するので好ましい。強固な染着を達成するには、例えば、共有結合性の反応性染料を用いることが出来、反応性染料で染色できるものとして、セルロース由来のものが挙げられる。セルロース由来のものからなる微粒子は大量の水酸基を有するため、多くの反応性染料を共有結合により保持することができるだけでなく、濃染化した後も水などへの安定分散性を保持することができる。それゆえ、有機着色微粒子の素材としては、セルロースを用いると好適であるが、その種類は特に限定されない。再生セルロース、精製セルロース、天然セルロース等を用いることができる。一部誘導体化されたセルロースを用いてもよい。好ましくは、有機着色微粒子の重量の20〜90wt%はセルロース由来である。より好ましくは、有機着色微粒子の重量の20〜80wt%はセルロース由来である。さらに好ましくは20〜70wt%である。
本発明における有機着色微粒子の素材の製造方法は特に限定されない。湿式粉砕等による力学的な手法を用いて、分級して所望の平均粒径の微粒子を得てもよいが、本発明ではセルロースをその良溶媒に溶解し、水、有機溶媒、アンモニア等を混合した凝固液を用いることでセルロース微粒子を調製している。この方法を用いることにより得られるセルロース微粒子の粒径を凝固液の組成によって調整することが可能となる。本発明の有機着色微粒子の素材の製造方法を限定することを意図しないが、以下、具体例によって、より詳細に説明する。
まず、セルロースリンターをセルロースの良溶媒に溶解させる。本発明では良溶媒には公知の方法で調製した銅アンモニア溶液を用いる。そして凝固液としては有機溶媒+水+アンモニア混合系を主に用いる。この凝固液を攪拌しながら、調製しておいた銅アンモニアセルロース溶液を加えて凝固を行う。さらに硫酸を加え中和、再生を行うことで、目的のセルロース微粒子を含有したスラリーを得ることができる。このスラリーを希釈、精製、乾燥させることで、セルロース微粒子分散液やセルロース微粒子を得ることができる。
本発明における有機着色微粒子の素材の着色方法も特に限定されるものではなく、染料を用いる方法、顔料を用いる方法など様々なものを用いることができる。中でも発色強度を高くできる点で染料を用いる方法が好ましく、直接染料、含金染料、酸性染料、反応性染料、塩基性染料、分散染料、硫化染料、植物染料、ナフトール染料等、各種の染色剤を用いることができる。
本発明において有機着色微粒子としてセルロース微粒子を用いる場合、セルロース微粒子の表面積は、繊維の表面積に比べて著しく大きいため、染着量を極めて大きくすることができ、有機着色微粒子のうち10wt%以上が着色成分である微粒子を得ることもできる。しかしながら、発色性と経済性の観点から、着色成分は、有機着色微粒子の10wt%〜80wt%が好ましく、より好ましくは20wt%〜80wt%であり、さらに好ましくは30wt%〜80wt%である。さらに、本発明においては、セルロース微粒子を濃色に染めることができ、かつ長期間安定すなわち湿潤堅牢度に優れたものとするため、共有結合にて染着させるのが望ましいという観点から、反応性染料を選択することが好ましい。
本発明におけるリガンドとは、特定の検査対象物質に選択的かつ特異的に結合する性質を持つ物質である。その種類は特に限定されるものではないが、例えば、抗体、抗原、酵素、遺伝子、ホルモン、細胞、核酸、ペプチド、タンパク質などが挙げられる。
本発明においては染料を用いてセルロースを濃色に染色するだけでリガンドの物理吸着が可能である。染色だけでは物理吸着性能が不十分な場合は、必要に応じてセルロースの誘導体化と組み合わせることで親水疎水バランスを調整してもかまわない。セルロースを濃色に染色するだけでリガンドの物理吸着が可能になる理由は明らかになっていないが、染色によりセルロースが疎水化されたためと考えられる。一般的に、フィルムなどでは接触角を測定することで親水疎水の程度を知ることができるが、ナノ微粒子では接触角を測定することは困難である。そこでモデル的に平坦なセルロースであるセロハン(登録商標)を濃色に染色し接触角を測定したところ、未染色のセルロースの接触角が20〜30度程度であるのに対し、十分に染色したセロハン(登録商標)では、染料の染着量に比例して40〜100度にも達することが確認できた。一般的な染料は、ベンゼン、ナフタレン、アントラキノン、アゾなど疎水性が強い構造を持つ。本発明においては、繊維の染色条件では通常考えられないような大量の染料をセルロースに結合させた結果、抗体が物理吸着できるほどの疎水化が達成できたと予想される。タンパク質定量法で一般的なローリー法を用いて、結合しているマウスIgG抗体を定量したところ、本発明における有機着色微粒子の様に、十分に染色されている場合は、抗体の結合を確認することができた。一方、染色強度が低すぎると、未染色粒子との差が認められず、抗体結合量は低い傾向にあった。
本発明においてはリガンドの結合方法として物理吸着だけでなく化学結合を選択することもできる。一般的には物理吸着は操作が簡便でありコストが安いというメリットがあるが以下のような問題が発生する可能性も指摘されている。例えば、リガンドの結合部位が一定にならず反応の選択性が失われてしまう、界面活性剤の存在化で結合していたリガンドが外れてしまう、などである。そこでそれらの問題を解決するために、状況に応じてリガンドと共有結合を形成する化学結合方式をとる場合もある。また化学結合方式ではリガンドの結合量を物理吸着より更に多くすることができる場合もある。
本発明における反応性活性基はリガンドを共有結合させるために用いる。反応性活性基の代表的な例としてはカルボキシル基、アミノ基、アルデヒド基、チオール基、エポキシ基、水酸基などが挙げられる。種類は特に限定されないが、カルボキシル基、及びアミノ基が好ましい。カルボキシル基の場合は、カルボジイミドを用いてリガンドのアミノ基と共有結合を形成することができる。反応性活性基を導入するタイミングは染色前に予め導入しておいてもかまわないし、染色後に導入してもよい。導入する部位は有機微粒子でもかまわないし染料部分に導入してもよい。また、染料の構造の一部を反応性活性基としておいてもかまわない。
本発明における反応性活性基は原子数3以上のスペーサー構造を有することが好ましい。本願発明者らは、高度に濃色化された有機着色微粒子に反応性活性基を導入しリガンドを化学結合させイムノクロマトに用いる際に、原子数3以上のスペーサー構造を有すると感度がより向上することを見出した。この理由は明らかになってはいないが、例えば、大量に存在する染料の立体障害や電荷の影響により、リガンドと検査対象物質の選択的反応が妨害される可能性があると考えられる。
上記の着色方法にて得られた有機着色微粒子、すなわち染色セルロース微粒子は、分散液のままの状態でネバードライのまま用いることも可能であるが、各種の試薬、界面活性剤、緩衝剤を添加し分散液の安定化を図ってもよい。また必要に応じて乾燥を行うことで微粒子単体に又は各種濃度の分散液に調製することも可能である。本発明においては、染色微粒子を分散させる液体の種類は、微粒子を溶解又は膨潤させないものであれば特に限定されない。水や各種無機化合物水溶液、アルコール類、エーテル類、アルデヒド類、ケトン類、脂肪酸類、アミン類、その他有機溶媒を用いることができる。各種の化合物を任意の割合で混合した溶媒を用いてもよく、さらにはそれらの溶媒と相溶性のある疎水性溶媒と混合して用いることも可能である。
本発明の有機着色微粒子の粒度分布は、以下の式(1):
CV値=(粒度分布測定装置より求めた体積粒度分布における標準偏差)/(粒度分布測定装置より求めた体積平均メジアン径)×100 式(1)
で求められる。特に限定するものでないが、前述した通り、粒径が大きすぎると、イムノクロマトキットにおいて、バックグラウンドの発色や、擬陽性が見られる傾向があるため、粒度分布は小さいほうが好適であり、70%以下が好ましい。CV値を小さくしたいときは微粒子製造条件によって調整は可能だが、染色前、染色後の各段階において濾過、遠心分離などの操作により粒子を分級してもよい。本発明においては、好適なCV値の範囲は、経済性も鑑みて10%〜70%であるが、より好ましくは10%〜60%、さらに好ましくは10%〜50%である。
本発明の有機着色微粒子はイムノクロマトグラフ方法による免疫測定法に好適に用いられる。
以下、イムノクロマトグラフ方法の代表例を説明するが、これに限るものでなく、サンドイッチアッセイ全般に適用できる。イムノクロマトグラフ方法は、概して、被検出物資である抗原又は抗体と特異的に結合する抗体又は抗原に、金属コロイドやポリスチレン由来の着色ラテックスからなる発色微粒子を標識として予め結合させる。他方、クロマト基材上の所定箇所に、抗原又は抗体に特異的に反応する抗体又は抗原をライン状に塗布する。検査時において、前記の標識−抗体又は抗原を、被検出物質である抗原又は抗体と接触させることにより、複合体を形成させ、これをクロマト基材上で展開させるが、この複合体は、ライン状に塗布した1次抗体により捕捉が可能である(サンドイッチアッセイ)。このとき標識物質も捕捉されるため、所定箇所での顕色が起こることになる。目視による被検出物質の有無が判定できることから、簡便な検査方法として、近年、広く普及している。また抗原又は抗体を用いる免疫反応だけでなく、被検出物質と特異的な反応を起こすリガンドを用いることにより様々な検査が可能になる。免疫診断薬以外にも、生化学的な分析、遺伝学的な分析等、任意の分析反応など様々な分野でイムノクロマトは利用されている。
まず、本発明における有機着色微粒子又は着色微粒子分散体の測定法について詳細に説明する。
特に記載のない限り全ての操作は25℃の環境下で実施した。
また、セルロース微粒子分散体、染色セルロース微粒子分散体の凝集をときほぐすため、マイクロフルイディックス社製油圧式超高圧ホモジナイザーM−110−E/Hを用いた。その際の処理圧力は50MPaであり、高圧部であるチャンバーを10回通す操作を行った。
<微粒子の調製>
セルロースリンターを銅アンモニア溶液に溶解させ、次いで水及びアンモニアで希釈して、セルロース濃度0.37wt%の銅アンモニアセルロース溶液を調製した。その溶液の銅濃度は0.13wt%であり、アンモニア濃度は1.00wt%であった。次いで、テトラヒドロフラン濃度90wt%、水濃度10wt%の凝固液を調製した。マグネティックスターラーを用い凝固液5000gをゆっくり攪拌しながら、予め調製しておいたセルロース濃度0.37wt%の銅アンモニアセルロース溶液500gを添加した。5秒程度攪拌を継続したのちに10wt%の硫酸1000gを加え中和、再生を行い、目的のセルロース微粒子を含有したスラリー26500gを得た。得られたスラリーを10000rpmの速度で10分間遠心分離した。沈殿物をデカンテーションにより取り出し、脱イオン水を注入して攪拌し、再び遠心分離した。pHが6.0〜7.0になるまでこの操作を数回繰り返し、その後高圧ホモジナイザーによる分散処理を行い、セルロース微粒子分散体150gを得た。なお全ての操作は25℃の環境下で行った。
次に、前記のようにして調製したセルロース微粒子の染色を行った。微粒子濃度を1.0wt%に調整したセルロース微粒子分散体100gに対し、硫酸ナトリウム30g、反応性染料としてダイスター株式会社製Levafix Navy CA Gr.(登録商標)(以下、青系Aともいう。)1g、を加え攪拌させながら恒温槽を用いて60℃まで昇温した。60℃に昇温後に炭酸ナトリウム4gを加え、2時間染色を行った。続いて得られた粗染色微粒子を水酸化ナトリウム5wt%水溶液で洗浄し、遠心分離で回収、純水にて水洗した後遠心分離で回収するという一連の操作を1サイクルとし、同様の操作を計3サイクルまで実施し、染色微粒子を得た。染料成分の割合は、有機着色微粒子の重量の49%であった。
染色前後の平均粒径と、発色強度を測定した結果を、以下の表1に示す。
実施例1で得た未染色セルロース微粒子を、同様の操作で染色するが、計10サイクルまで実施し、染色微粒子を得た。染色前後の平均粒径と発色強度を測定した結果を、以下の表1に示す。
実施例1で得た未染色セルロース微粒子を、反応染料としてダイスター株式会社製Levafix Rubine CA Gr.(登録商標)(以下、赤系Bともいう。)1gを用いること以外は、実施例1と同様の方法でセルロース微粒子、及び染色セルロース微粒子を得た。染色前後の平均粒径と発色強度を測定した結果を、以下の表1に示す。
凝固に用いる凝固液が、テトラヒドロフラン濃度95wt%、水濃度5wt%であること以外は実施例1と同じ方法で、セルロース微粒子、及び染色セルロース微粒子を得た。染色前後の平均粒径と発色強度を測定した結果を、以下の表1に示す。
実施例4で得た未染色セルロース微粒子を、反応染料としてダイスター株式会社製Levafix Rubine CA Gr.(登録商標)(赤系B)1gを用いること以外は、実施例1と同様の方法でセルロース微粒子、及び染色セルロース微粒子を得た。染色前後の平均粒径と発色強度を測定した結果を、以下の表1に示す。
凝固に用いる凝固液が、アセトン濃度26.5wt%、アンモニア濃度0.20wt%、水濃度73.3wt%であること以外は実施例1と同じ方法で、セルロース微粒子、及び染色セルロース微粒子を得た。染色前後の平均粒径と発色強度を測定した結果を、以下の表1に示す。
凝固に用いる凝固液が、テトラヒドロフラン濃度97wt%、水濃度3wt%であること以外は実施例1と同じ方法で、セルロース微粒子、及び染色セルロース微粒子を得た。染色前後の平均粒径と発色強度を測定した結果を、以下の表1に示す。
比較例1で得た染色セルロース微粒子を日本ミリポア株式会社製のポアサイズ0.8μのニトロセルロース由来のろ過膜を用いて、ろ過し、ろ液を採取した。平均粒径と発色強度を測定した結果を、以下の表1に示す。
実施例1で得た未染色セルロース微粒子を、実施例1と同様の操作で染色したが、1サイクルのみの染色を行い、染色微粒子を得た。染色前後の平均粒径と発色強度を測定した結果を、以下の表1に示す。
実施例1で得た未染色セルロース微粒子を、硫酸ナトリウム15g、反応染料としてダイスター株式会社製Levafix Rubine CA Gr.(登録商標)(赤系B)0.5gとした以外は実施例1と同様の操作で染色したが、1サイクルのみの染色を行い、染色微粒子を得た。染色前後の平均粒径と発色強度を測定した結果を、以下の表1に示す。
実施例1で得た未染色セルロース微粒子を、硫酸ナトリウム6g、反応性染料としてダイスター株式会社製Levafix Navy CA Gr.(登録商標)(青系A)0.2gとした以外は、実施例8と同様の操作を行い、染色微粒子を得た。染色後の平均粒径と発色強度を測定した結果を、以下の表1に示す。
実施例6で得た未染色セルロース微粒子を、硫酸ナトリウム6g、反応性染料としてダイスター株式会社製Remazol Black B HI−GRAN.150(登録商標)(以下、青系Cともいう)を0.2gとした以外は、実施例8と同様な操作を行い、染色微粒子を得た。染色前後の平均粒径と発色強度を測定した結果を以下の表1に示す。
染色ポリスチレンラテックス粒子として、BangsLaboratories社製のDS02B(PrimaryBlue(登録商標)、平均粒径0.47μm)の発色強度を測定した。結果を、以下の表1に示す。
平均粒径が0.04μmの金コロイド粒子の発色強度を測定した結果を以下の表1に示す。
実施例1〜比較例5の染色、着色又は発色粒子を用いて、イムノクロマトグラフ用のキットを作製し、性能評価を実施した。
<物理吸着による抗体結合染色微粒子の調製>
実施例1〜比較例4で得られた染色又は着色微粒子をリン酸緩衝液(以下、「PBS」という。)により、固形分濃度が1重量%となるように希釈調整し、得られた1重量染色粒子リン酸緩衝液懸濁液1mlと、ヒト絨毛性ゴナドトロピン(以下「hCG」という)に対するマウス由来のモノクローナル抗体(MedixBiochemica社製#5014抗hCG抗体)をPBSで100μg/mlに希釈して得られた抗体希釈液1mlとをエッペンドルフ遠沈管に採り、室温で2時間振とうして、染色粒子にモノクローナル抗体を結合させ、次いで0.1重量%の濃度で牛血清アルブミン(以下、BSAという。)を含有するPBSを用いて3回、遠心洗浄し、最終的に2mlとなるように再分散させることにより、抗体結合染色微粒子分散液を得た。
濃度0.01重量%の塩化金水溶液200mlを沸騰させ、これに濃度1重量%のクエン酸ナトリウム水溶液を加え、溶液の色が薄い黄色から紫色〜赤色に変わるまで加熱沸騰を行って、比較例5に示す平均粒径が0.04μmの金コロイド粒子の分散液を調製した。次いで得られた金コロイド分散液に50mMりん酸二水素カリウム溶液を加えてpHを8に調整し、これにhCGに対するモノクローナル抗体を、金コロイド粒子分散液1ml当り10μgとなる割合で加え、その10mlに濃度30重量%のBSA(ウシ血清アルブミン)を0.1ml加え、遠心沈降処理して、上澄液を除去し、BSAを濃度0.1重量%で含有するPBSを用いて3回遠心沈降処理により洗浄し、再分散させることにより、抗体結合金コロイド粒子分散液を得た。
市販メンブランフィルター(ミリポア社製HF120、25mm×300mm)の一方の端(以下、この一方の端はストリップの下端となる、他の一方の端はストリップ上端となる)から7mmの位置に液体噴射装置を用いて展開方向に垂直、すなわちメンブレン長辺に平行に、テストライン用の抗体を幅約1mmとなるよう噴射印刷した。より詳しくはテストライン抗体として、マウス由来の抗hα−サブユニット抗体(MedixBiochemica社製#6601)を用い、PBSにて0.5mg/mlに調整したものを、1.0μL/cmとなるよう噴霧した。また、同様に下端から12mmの位置にはコントロールライン用の抗体を幅1mmで噴射印刷した。より詳しくはコントロールラインとして、ウサギ由来の抗マウス抗体(Daco社製Z0259)を用い、PBSにて0.5mg/mlに調整したものを、1.0μL/cmとなるよう噴霧した。各々の抗体を噴霧した後、1時間乾燥させ、ついで乳性カゼインを含むホウ酸緩衝液を用いたブロッキングを行い、スクロースを含むTris−HCl緩衝液を用い洗浄を行い、室温で一晩定着をさせることで、クロマト用メンブレンを調製した。
得られた、各実施例、比較例記載の染色粒子を用いたクロマト用メンブレンに、20×300mmの濾紙性の吸収パッドを上端から5mmの間が重なるように長辺どうしで接触させたのち、ギロチンカッターで5mm巾ごとに切断することでサンプルを作製した。単純計算で60サンプルできることになる。
展開試験に用いる、hCG含有試料は以下のようにして調製した。
hCGを、1重量%濃度でBSAを含有するPBSにより希釈して、hCG濃度がそれぞれ100、10、0mIU/mlのhCGを含有させた。この試料液に、上記で得られた5mm巾キットサンプルの下端から2mmを浸漬して、試料液を展開させた。10分経過後、メンブランフィルター上での反応部位(標識印刷部)における顕色を目視観察した。評価基準として、テストラインにて発色が認められない場合を(−)、発色が認められる場合を(+)、発色がはっきりと認められる場合を(++)、発色が強く認められる場合を(+++)を用いた。評価結果を、以下の表2に示す。
比較例1では、特に抗原濃度が高い側で、バックグラウンドの呈色により見かけ感度が下がる現象が見られた。また試料中にhCGが無くても発色する傾向、すなわち擬陽性が見られた。実施例7において、比較例1の粒子をろ過したものを用いたところ、バックグラウンドの呈色は残るものの、擬陽性は見られなくなったことから、粒径が過大であると擬陽性が発生すると考えられる。粒径が過大な場合は診断薬キットに不適である。実施例1〜9で擬陽性が見られなかったことから、実施例1〜9は、高感度であるといえる。
一方、比較例2〜4では、染料の発色強度が小さいため、hCG濃度10mIU/mlでは発色は検出できなかった。したがって、本発明の有機着色微粒子を用いれば、ポリスチレンラテックスと比較して高感度になることが理解できる。
また、比較例5の金コロイドとの比較においては同等又はそれ以上の感度を示すことも理解できる。すなわち本発明の有機着色微粒子を用いることで、高感度診断が青色系でも赤色系でも可能となる。
続いて実施例1で得られた染色微粒子にカルボキシル基やアミノ基などの反応性活性基の導入を行なった。
[実施例10]
実施例1で得た青色染色微粒子分散液の一部に純水、イソプロピルアルコール(和光純薬社製、試薬特級)を加え、分散媒体のイソプロピルアルコール:水の比が85:15となり、かつ分散媒体中の粒子濃度が0.50wt%になるように調整した。得られた染色セルロース微粒子分散液20gを回転子と共に試験管に入れ、ガラス製還流管を取り付けた。約10℃の水道水を還流させ冷却しながら、セルロース微粒子分散液が50℃となるようウォーターバスにて30分間加熱した。なお加熱はマグネティックスターラーを用いて緩やかに攪拌させながら行った。その後、40wt%の苛性ソーダ溶液74mgを攪拌しながら加え、さらに30分間攪拌を継続し、その後クロロ酢酸ナトリウム(和光純薬社製)216mgを加えた。3時間の間、攪拌、および還流を継続し、カルボキシル基の導入を行った。3時間経過後、ウォーターバスによる加熱を止め、ナス型フラスコを氷水で冷やし、反応後スラリーの温度が20℃になるまで冷却した。冷却後に攪拌を継続しながら、10wt%塩酸を1.0g加えて反応後スラリーのPHを酸性にした。微粒子の洗浄と同様に遠心分離機を用いて、デカンテーション−脱イオン水による希釈を数回繰り返し、PHを6.0〜7.0とし、さらに高圧ホモジナイザーによる分散処理を行い、カルボキシル化染色微粒子分散液を得た。得られた分散液の一部を平均粒径と発色強度を測定した結果を以下の表3に示す。
実施例1で得た青色染色微粒子分散液の一部に純水、アセトン(和光純薬社製、試薬特級)を加え、分散媒体のアセトン:水の比が1:1となり、かつ分散媒体中の粒子濃度が1.0wt%になるように調整した。得られた染色セルロース微粒子分散液10.0gを回転子と共にガラス製試験管に入れ、ガラス製還流管を取り付けた。約10℃の水道水を還流させ冷却しながら、セルロース微粒子分散液が40℃となるようウォーターバスにて30分間加熱した。なお加熱はマグネティックスターラーを用いて緩やかに攪拌させながら行った。その後、5−ヘキセン酸(和光純薬社製)705mg、硝酸二アンモニウムセリウム(和光純薬社製)677mg、1mol/L硝酸(和光純薬社製)617mlを加えた。3時間の間、攪拌、および還流を継続し、カルボキシル基の導入を行った。反応後の処理は実施例10と同様にし、カルボキシル化染色微粒子分散液を得た。得られた分散液の一部を平均粒径と発色強度を測定した結果を以下の表3に示す。
カルボキシル化のために加える反応剤が16−ヘプタデセン酸(和光純薬社製)1654gであること以外は実施例11と同様の方法でカルボキシル化染色微粒子分散液を得た。得られた分散液の一部を平均粒径と発色強度を測定した結果を以下の表3に示す。
実施例1で得た青色染色微粒子分散液の一部に純水を加え、分散媒体中の粒子濃度が1.0wt%になるように調整した。得られた染色微粒子分散液10.0gを回転子と共にガラス製試験管に入れ、ガラス製還流管を取り付けた。約10℃の水道水を還流させ冷却しながら、セルロース微粒子分散液が35℃となるようウォーターバスにて30分間加熱した。なお加熱はマグネティックスターラーを用いて緩やかに攪拌させながら行った。その後、エピクロルヒドリン(和光純薬社製)571gを加え、30分の間、攪拌、および還流を継続し、エポキシ基の導入を行った。その後、ウォーターバスの温度を50℃に昇温し、6−アミノヘキサン酸(和光純薬社製)810gを加え、1時間の間、攪拌、および還流を継続し、カルボキシル基の導入を行なった。反応後の処理は実施例10と同様にし、カルボキシル化染色微粒子分散液を得た。得られた分散液の一部を平均粒径と発色強度を測定した結果を以下の表3に示す。
エポキシ基の導入後に加える反応剤が25wt%アンモニア水(和光純薬社製)840gであること以外は実施例13と同様にし、アミノ化染色微粒子分散液を得た。得られた分散液の一部を平均粒径と発色強度を測定した結果を以下の表3に示す。
実施例10〜14で得られたカルボキシル化及びアミノ化染色微粒子分散液を乾燥させ、カルボキシル化及びアミノ化染色微粒子を調整し、赤外分光分析装置により反応性活性基の導入を確認した。カルボキシル化染色微粒子は1730cm-1前後、アミノ化染色微粒子は1600cm-1前後、それぞれの吸収が増加しており、反応性活性基の導入に成功したことを確認した。
実施例10〜14の反応性活性基を導入した染色微粒子に抗体を化学結合させ、その後イムノクロマトグラフ用のキットを作製し、性能評価を実施した。
<化学結合による抗体結合染色微粒子の調製1>
2-モルホリノエタンスルホン酸(和光純薬社製)、苛性ソーダ、純水を用いてpHが5.2であり濃度が50mMの2-モルホリノエタンスルホン酸緩衝液(以下、「MES」という)を調製し、更に1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(和光純薬社製、以下カルボジイミドという)をMES緩衝液に溶解させ、カルボジイミド濃度が20wt%となるよう調整した。実施例10〜13で得られたカルボキシル化染色微粒子を遠心分離機を用いて沈降させた後、前記MES緩衝液に再分散させ固形分濃度が1重量%となるように濃度を調整し、カルボキシル化染色微粒子MES緩衝液分散体を得た。カルボキシル化染色微粒子MES緩衝液分散体10gに対し、20wt%のカルボジイミド溶液1gを加え、恒温振盪槽を用い25度の環境下で1時間反応させ、反応終了後に10,000rpmの速度で30分間遠心分離を行った。沈殿物をデカンテーションにより取り出し、リン酸緩衝液を加えて攪拌し、カルボジイミド活性化染色微粒子をリン酸緩衝液に分散させた。微粒子の洗浄と同様に遠心分離機を用いて、デカンテーション−リン酸緩衝液よる希釈を3回繰り返し、未反応のカルボジイミドを除去した。得られたカルボジイミド活性化染色微粒子を用い、物理吸着による抗体結合染色微粒子の調製と同様の手順で化学結合による抗体結合染色微粒子を調製した。
アミノ化染色微粒子分散液を遠心分離機を用いて沈降させた後、前記リン酸緩衝液に再分散させ固形分濃度が1重量%となるように濃度を調整し、アミノ化染色微粒子リン酸緩衝液分散体を得た。アミノ化染色微粒子PBS緩衝液分散体10gに対し、25%グルタルアルデヒド溶液(和光純薬社製)1gを加え、恒温振盪槽を用い37度の環境下で2時間反応させ、反応終了後に10,000rpmの速度で30分間遠心分離を行った。沈殿物をデカンテーションにより取り出し、リン酸緩衝液を加えて攪拌し、グルタルアルデヒド活性化染色微粒子をリン酸緩衝液に分散させた。微粒子の洗浄と同様に遠心分離機を用いて、デカンテーション−リン酸緩衝液よる希釈を3回繰り返し、未反応のグルタルアルデヒドを除去した。得られたグルタルアルデヒド活性化染色微粒子を用い、物理吸着による抗体結合染色微粒子の調整と同様の手順で化学結合による抗体結合染色微粒子を調製した。0.1重量%の濃度で牛血清アルブミンを加える前に1gのグリシンを加えることで未反応のアルデヒドを除去した。
実施例10〜14で得られた化学結合による抗体結合染色微粒子と、実施例1から得られた物理吸着による抗体結合染色微粒子のイムノクロマト用微粒子としての評価を行った。
評価は前記と同様の手順で、hCG濃度がそれぞれ10、1、0mIU/mlの3水準で行った。評価結果を以下の表4に示す。
Claims (8)
- 体積平均メジアン径である平均粒径が10nm〜1000nmであり、発色強度が1.0〜5.0である有機着色微粒子であって、該有機着色微粒子の重量の10wt%〜80wt%が着色成分であり、該有機着色微粒子の重量の20wt%〜90wt%がセルロース由来であり、該着色成分が反応性染料であり、ここで、該発色強度は、有機着色微粒子の分散液を光路長10mmとして、400nm〜800nmの範囲で積分球を用いた可視吸光度測定を行うと共に、分散媒のバックグラウンド成分を差し引くことで、分散基質自体の吸光度曲線を得、その最大値(ABS)を分散基質の重量パーセントで割り返し、0.01wt%当りで算出した値である、前記有機着色粒子。
- 前記有機着色微粒子の重量の20wt%〜80wt%が着色成分である、請求項1に記載の有機着色微粒子。
- 物理吸着によりリガンドが結合された、請求項1又は2に記載の有機着色微粒子。
- 反応性活性基を有する、請求項1〜3のいずれか1項に記載の有機着色微粒子。
- 前記反応性活性基が原子数3以上のスペーサー構造を有する、請求項4に記載の有機着色微粒子。
- 共有結合により前記反応性活性基にリガンドが結合された、請求項4に記載の有機着色微粒子。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載の有機着色微粒子を含む診断薬キット。
- イムノクロマトグラフキットである、請求項7に記載の診断薬キット。
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WO2018181549A1 (ja) * | 2017-03-28 | 2018-10-04 | デンカ株式会社 | 膜担体、並びにそれを用いた液体試料検査キット及びその製造方法 |
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CN107119470A (zh) * | 2017-05-25 | 2017-09-01 | 华南理工大学 | 一种纳米纤维素的高效染色方法 |
CN107201678B (zh) * | 2017-06-15 | 2020-07-28 | 华南理工大学 | 一种纳米纤维素的高浓深度染色方法 |
US20210080455A1 (en) * | 2017-09-25 | 2021-03-18 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Organic Colored Microparticles, Diagnostic Reagent Kit, and In Vitro Diagnosis Method |
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WO2020166698A1 (ja) * | 2019-02-14 | 2020-08-20 | 東洋紡株式会社 | イムノクロマト試験片およびそれを用いた測定方法 |
JPWO2020166699A1 (ja) * | 2019-02-15 | 2021-12-16 | 東洋紡株式会社 | イムノクロマト試験片およびそれを用いた測定方法 |
CN111157749B (zh) * | 2020-01-13 | 2021-06-22 | 润和生物医药科技(汕头)有限公司 | 一种快速检测试纸及其制备方法和应用 |
WO2023089972A1 (ja) * | 2021-11-18 | 2023-05-25 | 旭化成株式会社 | 蛍光セルロース粒子 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH1048215A (ja) * | 1996-07-31 | 1998-02-20 | Sekisui Chem Co Ltd | 着色粒子 |
JP2955405B2 (ja) * | 1990-08-31 | 1999-10-04 | ジェイエスアール株式会社 | イムノクロマトグラフ法 |
JP2003526786A (ja) * | 2000-03-06 | 2003-09-09 | デイド・ベーリング・マルブルク・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 多糖で被覆された担体、その製造および使用 |
WO2008084854A1 (ja) * | 2007-01-12 | 2008-07-17 | Asahi Kasei Fibers Corporation | セルロース微粒子並びにその分散液及び分散体 |
WO2009123148A1 (ja) * | 2008-03-31 | 2009-10-08 | 旭化成せんい株式会社 | セルロース誘導体微粒子、その分散液、その分散体及び診断薬 |
Family Cites Families (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4166105A (en) * | 1973-07-30 | 1979-08-28 | Block Engineering, Inc. | Dye tagged reagent |
JPS51125675A (en) * | 1975-02-13 | 1976-11-02 | Asahi Chem Ind Co Ltd | A porous capsule structvre and a process for manufacturing turing it |
NL8000173A (nl) * | 1980-01-11 | 1981-08-03 | Akzo Nv | Toepassing van in water dispergeerbare, hydrofobe kleurstoffen als label in immunochemische testen. |
US5120643A (en) | 1987-07-13 | 1992-06-09 | Abbott Laboratories | Process for immunochromatography with colloidal particles |
US5298430A (en) * | 1988-09-13 | 1994-03-29 | Hoechst Celanese Corporation | Immunoassay process utilizing a cellulose organic ester fibret support element |
US5266497A (en) * | 1990-08-31 | 1993-11-30 | Japan Synthetic Rubber Co., Ltd. | Immunochromatographic assay with improved colored latex |
JPH0760159A (ja) | 1993-06-18 | 1995-03-07 | Sekisui Chem Co Ltd | 気泡発生用ノズル |
EP0937097B1 (en) | 1996-11-06 | 2001-08-16 | Sequenom, Inc. | Compositions and methods for immobilizing nucleic acids to solid supports |
JP2008298785A (ja) * | 1996-11-06 | 2008-12-11 | Sequenom Inc | 固体支持体に核酸を固定化するための組成物および方法 |
GB2322192B (en) * | 1997-02-14 | 2001-01-31 | Unilever Plc | Assay devices |
US6327410B1 (en) * | 1997-03-14 | 2001-12-04 | The Trustees Of Tufts College | Target analyte sensors utilizing Microspheres |
WO2001062772A2 (en) * | 2000-02-23 | 2001-08-30 | Xenoport, Inc. | Self-encoded combinatorial synthesis of compound multiplets |
CN2445326Y (zh) * | 2000-10-09 | 2001-08-29 | 刘永详 | 测定被糖化蛋白的免疫分析装置 |
AU2002211899A1 (en) * | 2000-10-12 | 2002-04-22 | Amnis Corporation | Methods for synthesizing reporter labeled beads |
US7695738B2 (en) * | 2003-02-19 | 2010-04-13 | Academia Sinica | Carbohydrate encapsulated nanoparticles |
DE10323901A1 (de) * | 2003-05-26 | 2005-01-05 | Institut Virion/Serion Gmbh | Verfahren und Testmittel zur Untersuchung und/oder zum Nachweis von Biomolekülen und/oder Wirkstoffen in Flüssigkeitsproben |
US7037729B2 (en) * | 2003-08-04 | 2006-05-02 | Emory University | Porous materials embedded with nanospecies, methods of fabrication thereof, and methods of use thereof |
US20070141727A1 (en) * | 2005-12-15 | 2007-06-21 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Luminescent metallic cluster particles and uses thereof |
JP4819640B2 (ja) * | 2006-10-04 | 2011-11-24 | 日本電信電話株式会社 | セルロース系材料膜、それを用いたバイオセンサおよびその製造方法 |
DE102006056458A1 (de) | 2006-11-28 | 2008-05-29 | Grünenthal GmbH | Arzneimittelzubereitung von Tramadol und Acetaminophen |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JP2955405B2 (ja) * | 1990-08-31 | 1999-10-04 | ジェイエスアール株式会社 | イムノクロマトグラフ法 |
JPH1048215A (ja) * | 1996-07-31 | 1998-02-20 | Sekisui Chem Co Ltd | 着色粒子 |
JP2003526786A (ja) * | 2000-03-06 | 2003-09-09 | デイド・ベーリング・マルブルク・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 多糖で被覆された担体、その製造および使用 |
WO2008084854A1 (ja) * | 2007-01-12 | 2008-07-17 | Asahi Kasei Fibers Corporation | セルロース微粒子並びにその分散液及び分散体 |
WO2009123148A1 (ja) * | 2008-03-31 | 2009-10-08 | 旭化成せんい株式会社 | セルロース誘導体微粒子、その分散液、その分散体及び診断薬 |
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