JP5757686B2 - 微晶質ペプチド懸濁液の徐放性 - Google Patents

Description

活性成分の徐放性を提供する処方物において、生物学的に活性なペプチドを動物及びヒトにもたらすことがしばしば必要とされている。このような処方物は、マイクロカプセル、微粒剤又はインプラント可能な杆状体の形の生分解性及び生物学的適合性ポリマー中に活性成分を配合することにより、又はそれとは別に、機械的装置、例えばマイクロポンプ又は非生分解性容器を使用することにより提供され得る。ペプチドが水性媒体中で高度に可溶性である場合、ペプチドは非分解性ポリマー、例えばセルロース誘導体との錯体として処方されてもよいし、非経口注射の際にゲルを形成し、活性ペプチドが徐放するようなポリマー溶液と混合されてもよい。

全ての上記の処方物は、例えば懸濁流体の体積が大きいこと、又は非分解性の装置を排除する必要があることといった欠点及び制限を有する。ゲルを形成するペプチドの場合には、活性成分の所望の徐放作用を妨げる生物学的利用能がしばしば問題となる。

ペプチドの物理化学的観点に依る問題点の幾つかは、R. Deghenghi著、"Antarelix"in Treatment with GnRH Analogs：Controversies and Perspectives"、M. Filicori and C. Flamigni編、The Parthenon Publishing Group, New York and London 1996,第89-91頁に記載されている。更なる問題点はJ. Rivier著、"GnRH analogues towards the next millennium"in GnRH Analogues、B. Lunenfeld編、The Parthenon Publishing Group, New York and London 1999,第31-45頁、並びにその他の研究者、例えばM.F. Powellら著、"Parenteral Peptide Formulations: Chemical and Physical Properties of Native LHRH and Hydrophobic Analogues in Aqueous Solution"in Pharmaceutical Research, Vol. 8, 1258-1263 (1991)に記載されている。

更に、上記問題点を回避する新規の処方物及び投与法が必要とされており、本発明はこの必要性に取り組むものである。

R. Deghenghi著、"Antarelix"in Treatment with GnRH Analogs：Controversies and Perspectives" M. Filicori and C. Flamigni編、The Parthenon Publishing Group, New York and London 1996,第89-91頁 J. Rivier著、"GnRH analogues towards the next millennium"in GnRH Analogues B. Lunenfeld編、The Parthenon Publishing Group, New York and London 1999,第31-45頁 M.F. Powellら著、"Parenteral Peptide Formulations: Chemical and Physical Properties of Native LHRH and Hydrophobic Analogues in Aqueous Solution"in Pharmaceutical Research, Vol. 8, 1258-1263 (1991)

従って本発明の課題は、上記の欠点を有していない新規の疎水性ペプチドのゲル形成を回避する方法、水中の疎水性ペプチドと対イオンとの流体の乳白色微晶質の水性懸濁液、疎水性ペプチドの徐放性処方物の製造法、疎水性ペプチドの注射可能な流体の乳白色微晶質の水性懸濁液の製造法および該方法により得られる水性懸濁液を提供することである。

本発明は疎水性ペプチドのゲル形成を回避する方法に関する。この方法は有利に、ゲルを形成することなく、ペプチドの流体の乳白色微晶質の水性懸濁液を生じさせるのに十分な量及びモル比で、疎水性ペプチドと対イオンとを接触させることを特徴とする。

更に本発明は、ペプチド及び対イオンが、混合の際にゲルを形成することなく懸濁液を形成するのに十分な量及びモル比で存在することを特徴とする、水中の疎水性ペプチドと対イオンとの流体の乳白色微晶質の水性懸濁液に関する。

ゲルの回避により、注射可能な懸濁液を処方することができる。上記水性懸濁液を非経口的に（即ち皮下又は筋肉内で）哺乳動物、例えばヒトに注射した場合、疎水性ペプチドの長時間の徐放性が得られる。

有利に、対イオンは強酸、例えばトリフルオロ酢酸又は硫酸の塩である。又、疎水性ペプチドはＧｎＲＨ類似体であってよく、有利にＧｎＲＨアンタゴニストである。更に有利なＧｎＲＨアンタゴニストは、強酸塩、例えばトリフルオロアセテート又はスルフェートの塩の形のアザリンＢ、アバレリックス、アンチド、ガニレリックス、セトロレリックス又はＦＥ２００４８６の群から選択される。Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ−Ｄ−Ｃｐａ−Ｄ−Ｐａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｈｃｉ−Ｌｅｕ−Ｉｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２トリフルオロアセテート及びＡｃ−Ｄ−Ｎａｌ−Ｄ−Ｃｐａ−Ｄ−Ｐａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｈｃｉ−Ｌｅｕ−Ｉｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２スルフェートは最も有利な化合物である。

疎水性ペプチド塩は有利に２５ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で水性媒体中に懸濁されており、酸：ペプチドのモル比は少なくとも１．６：１である。ペプチド塩は少なくとも部分的に約５〜１５０μｍの粒度を有する針状である。

所望の場合には、水性分散液は等張剤、例えばマンニトールを含有してよい。又、水性懸濁液は製薬学的に認容性の賦形剤を含有してよい。有利に、懸濁液は乾燥されて、水又は緩衝溶液と混合することにより復元可能な凍結乾燥状態にされる。この乾燥された懸濁液を含有する凍結乾燥された配合物、及び乾燥された懸濁液の製造法は、本発明の付加的な実施態様である。

図１は本発明によるテベレリックス(teverelix（登録商標）)トリフルオロアセテートの懸濁液のラットへの皮下注射により得られた薬力学的効果（テストステロン抑制）を表すグラフである。 図２は本発明によるテベレリックストリフルオロアセテートの懸濁液を注射したラットにおける、数週間に亘るペプチドテベレリックスの徐放性を表すグラフである。

驚異的にも、トリフルオロアセテート（ＴＦＡ）又はスルフェートの塩としての式Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ−Ｄ−ｐＣｌＰｈｅ−Ｄ−Ｐａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｈｃｉ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２（テベレリックス、ＧｎＲＨアンタゴニスト）のペプチドの高濃縮水性懸濁液が、その疎水性特性から予想されるようなゲルを形成せず、その代わりに、動物又はヒトへの非経口注射が容易であり、活性成分を数週間に亘って放出する微晶質の乳白色の懸濁液を形成することを見出した（図１及び２参照）。このような挙動は、インビボでの生物学的利用能が劣悪であり、予想通り不所望のゲルを形成するような他の塩、例えばアセテートからは導き出されない。

本発明は、微晶質の高濃度懸濁液の形のそのようなペプチドの延長された遅延放出を得つつ、どのように疎水性ペプチドのゲル化を抑制するか、という問題の簡単でかつ洗練された解決法である。

本発明の更なる利点はこのような懸濁液の体積が小さく、微細な針を通じた非経口注射を可能にし、このようにして、注射される材料の局所的な許容量が改善されることである。このような注射において、ペプチドの量は懸濁液を投与すべき哺乳動物の体重１ｋｇ当たり約０．１〜５ｍｇである。

対イオンの量は有利に、塩を形成させるのに必要な量を超える量である。この量は典型的にはペプチド１モル当たり酸少なくとも１．６モル、有利に２モル以上である。更に、最も望ましい徐放特性を得るために、注射可能な懸濁液を濃縮するのが望ましい。濃縮とは、ペプチドの量が処方物の２．５質量％を上回るべきであることを指す。

懸濁液を凍結乾燥又は噴霧乾燥により乾燥することにより、そのままの貯蔵が可能であり、かつ注射可能な処方物を調製すべき場合には水又は緩衝溶液で復元することができる、凍結乾燥された配合物を形成することができる。

実施例１
５％マンニトール２００μＬをＬＨＲＨアンタゴニストであるテベレリックストリフルオロアセテート約１５ｍｇに添加した。ヴォルテックス（Vortex）を用いて混合物を１分間撹拌し、流動性の乳白色真珠光沢の懸濁液を得た。懸濁液は長さ約１０μｍの微結晶から成る。微結晶は凝集してウニ様構造を形成し得る。懸濁液をラットに皮下注射し（１ｍｇ）、テストステロン抑制の薬力学的効果を４５日間を上回ってもたらした（図１）。薬物速度論的分析は、数週間に亘るペプチドの徐放性を示した（図２）。

実施例２
水２００μＬをＬＨＲＨアンタゴニストであるテベレリックストリフルオロアセテート約１５ｍｇに添加した。ヴォルテックス（Vortex）を用いて混合物を１分間撹拌し、流動性の乳白色真珠光沢の懸濁液を得た。

実施例３
水２００μＬをＬＨＲＨアンタゴニストであるテベレリックスアセテート約１５ｍｇに添加した。ヴォルテックス（Vortex）を用いて混合物を１分間撹拌し、透明ゲルを得た。ＴＦＡ２０μＬ（３モル／モル）をゲルに添加し、流体の流動性の乳白色真珠光沢の懸濁液を形成させた。

実施例４
１００ｍＭのＴＦＡ２００μＬをＬＨＲＨアンタゴニストであるテベレリックスアセテート約１５ｍｇ（２モル／モル）に添加し、流動性の乳白色懸濁液を得た。更に、７５ｍＭのＴＦＡ２００μＬをＬＨＲＨアンタゴニストであるテベレリックスアセテート約１５ｍｇ（１．５モル／モル）と混合した後、透明ゲルを得た。別の実験において、種々の濃度のＴＦＡ１００μＬをＬＨＲＨアンタゴニストであるテベレリックスアセテート７．５ｍｇに、ＴＦＡ／テベレリックスのモル比１〜３で添加した。１．６以上のモル比で流動性の乳白色懸濁液が得られ、その他のモル比でゲルが得られた。

実施例５
１５０ｍＭのＴＦＡ２００μＬを５〜３０ｍｇの量のＬＨＲＨアンタゴニストであるテベレリックスアセテート（濃度は２５〜１５０ｍｇ／ｍｌである）に添加した。濃度１００ｍｇ／ｍｌ以下で流動性の乳白色の懸濁液を得た。

実施例６
１５０ｍＭのＴＦＡ２００μＬをＬＨＲＨアンタゴニストであるテベレリックスアセテート約１５ｍｇ（３モル／モル）に添加し、混合後に流動性の乳白色の懸濁液を得た。懸濁液を一晩凍結乾燥させた。凍結乾燥物に水又は５％マンニトール２００μＬを添加し、混合及び復元後に流動性の乳白色の懸濁液を得た。

実施例７
１５０ｍＭのＴＦＡ１μＬをＬＨＲＨアンタゴニストであるテベレリックスアセテート約７５ｍｇ（３モル／モル）に添加し、混合後に流動性の乳白色の懸濁液を得た。懸濁液を一晩凍結乾燥させた。水及びｐＨ４．０の０．２Ｍアセテート緩衝液１ｍＬを凍結乾燥物に添加し、混合及び復元後に流動性の乳白色の懸濁液を得た。この懸濁液は室温で少なくとも３日間安定であった。

実施例８
２５０ｍＭのＨ_２ＳＯ_４ １００μＬをＬＨＲＨアンタゴニストであるテベレリックスアセテート７．５ｍｇ（５モル／モル）に添加し、数時間後に流動性の乳白色の懸濁液を得た。懸濁液は長さ約１００μｍの微結晶から成る。微結晶は凝集してウニ様構造を形成し得る。懸濁液を一晩凍結乾燥させた。凍結乾燥物に水又は５％マンニトール１００μＬを添加し、混合及び復元後に流動性の乳白色の懸濁液を得た。

Claims (7)

1. Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ−Ｄ−Ｃｐａ−Ｄ−Ｐａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｈｃｉ−Ｌｅｕ−Ｉｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２トリフルオロアセテートが、水性媒体中に、２５ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で懸濁されている、微晶質水性懸濁液。
2. Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ−Ｄ−Ｃｐａ−Ｄ−Ｐａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｈｃｉ−Ｌｅｕ−Ｉｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２スルフェートが、水性媒体中に、２５ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で懸濁されている、微晶質水性懸濁液。
3. 等張剤を含有する、請求項１または２記載の懸濁液。
4. 等張剤がマンニトールである、請求項３記載の懸濁液。
5. 微結晶が、５〜１５０μｍの粒度を有する針状である、請求項１から４までのいずれか１項記載の懸濁液。
6. 請求項１から５までのいずれか１項記載の懸濁液を凍結乾燥して凍結乾燥配合物を製造する方法。
7. 請求項１から５までのいずれか１項記載の懸濁液を凍結乾燥し、得られた凍結乾燥配合物を水又は緩衝溶液で復元する、疎水性ペプチドの注射可能な流体の乳白色微晶質の水性懸濁液の製造法。

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