JP5718545B2 - 髄膜炎菌結合体ワクチン接種 - Google Patents

Description

本明細書中に引用される全ての文書は、その全体が参考として援用される。

（技術分野）
本発明は、髄膜炎菌に対するワクチンに関する。具体的には、本発明は、複数の髄膜炎菌血清群に由来する結合体化莢膜糖に基づくワクチンに関する。

生物の莢膜多糖に基づいて、１２種の血清群の髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、２９Ｅ、Ｗ１３５、Ｘ、Ｙ、およびＺ）が、同定されている。Ａ群は、サハラ以南のアフリカにおける疫病に最も頻繁に関与する病原体である。血清群ＢおよびＣは、米国およびほとんどの先進国における大多数の症例の原因である。血清群Ｗ１３５およびＹは、米国および先進国における残りの症例の原因である。

血清群Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ１３５に由来する莢膜多糖の四価ワクチンが、多年にわたって公知である（非特許文献１および２（参考文献１および２））。青年および成人において有効であるが、そのワクチンは、弱い免疫応答および短い防御期間しか誘導せず、乳児において使用し得ない（例えば、非特許文献３（参考文献３））。なぜなら、多糖は、ブーストされ得ない弱い免疫応答を誘導するＴ細胞非依存性抗原であるからである。このワクチン中の多糖は、結合されていない（非特許文献４（参考文献４））。

血清群Ｃに対する結合体ワクチンが、ヒト使用に関して認可されており、それには、Ｍｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭ（非特許文献５（参考文献５））、Ｍｅｎｉｎｇｉｔｅｃ^ＴＭおよびＮｅｉｓＶａｃ−Ｃ^ＴＭが挙げられる。血清群Ａ＋Ｃに由来する結合体の混合物が、公知であり（非特許文献６〜７および特許文献１（参考文献６〜８））、血清群Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙに由来する結合体の混合物が、報告されている（特許文献２〜３、非特許文献８、特許文献４、非特許文献９（参考文献９〜１３））。

髄膜炎菌結合体が周知であるが、これらは、既存の小児科免疫スケジュールには未だ適合されていない。小児科免疫スケジュールは、先進国に関しては、代表的には、出生時にＢ型肝炎ワクチン、２ヶ月目から初めて、ジフテリア／破傷風／百日咳（Ｄ−Ｔ−Ｐ）、ｂ型インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｔｙｐｅ ｂ）（Ｈｉｂ）結合体、不活化ポリオウイルス結合体および不活化肺炎球菌結合体のすべてを含む。

しかし、既存の免疫スケジュールに結合体化ワクチンを付加した場合、キャリア誘導体エピトープ抑制（すなわち、一般的に公知であるような「キャリア抑制」）（特にキャリアプライミングから生じる抑制）の問題に、取り組まなければならない。「キャリア抑制」は、キャリアタンパク質による動物の予備免疫が、そのキャリア上に提示される新規抗原性エピトープに対する免疫応答を後に惹起することを妨げる現象である（非特許文献１０（参考文献１４））。

参考文献１５（非特許文献１１）において報告されるように、いくつかのワクチン抗原が、同じタンパク質成分（結合体中で免疫原として、および／またはキャリアタンパク質として、使用される）を含む場合、それらの抗原の間で干渉の可能性が存在する。参考文献１５において、破傷風トキソイド（Ｔｔ）キャリアに結合体化された抗原に対する免疫応答が、Ｔｔに対する既存の免疫によって抑制された。

参考文献１６（非特許文献１２）は、Ｄ−Ｔ−ＰワクチンとＨｉｂ結合体ワクチンとの組み合わせは、そのＨｉｂ結合体のキャリアがＤ−Ｔ−Ｐワクチン由来の破傷風抗原と同じである場合に、どのように有害な影響を受けるかを報告している。その著者らは、共通するタンパク質キャリアによる干渉から生じるこの「キャリア抑制」減少が、複数の結合体を含むワクチンを導入する場合には考慮されるべきであると結論付けている。

参考文献１５および１６とは対照的に、参考文献１７（非特許文献１３）は、破傷風トキソイドによるプライミングは、後に投与されたＨｉｂ−Ｔｔ結合体に対する免疫応答に対して何の負の影響も有さなかったが、母系獲得した抗Ｔｔ抗体を有する患者において、抑制が観察されたと報告した。しかし、参考文献１８（非特許文献１４）において、「エピトープ抑制」効果が、破傷風ワクチン接種から生じる既存の抗Ｔｔ抗体を有する患者において、Ｔｔベースのペプチド結合体について報告された。

参考文献１９（非特許文献１５）において、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の無毒化変異体）をキャリアとして有する結合体は、ワクチンの一部として（例えば、Ｄ−Ｔ−ＰワクチンもしくはＤ−Ｔワクチンの一部として）以前にジフテリア毒素を受けてはいない小児においては効果がないものであり得ることが、示唆された。この研究は、参考文献２０（非特許文献１６）においてさらに発展された。参考文献２０において、Ｄ−Ｔ免疫によるキャリアプライミング効果は、その後のＨｉｂ結合体による免疫の間持続することが観察された。

参考文献２１（非特許文献１７）において、その著者らは、ジフテリアトキソイドキャリアタンパク質もしくは破傷風トキソイドキャリアタンパク質による予備免疫は、それらのキャリアに結合体化したＨｉｂ莢膜糖によるその後の免疫の後に、抗ＨＩｂ抗体レベルの増加を減少させ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が等しく影響を受けたことを見出した。上記結合体のキャリア部分に対する応答もまた、抑制された。さらに、より一般的な非エピトープ特異的抑制が観察され、同様に、１つの結合体による予備免疫は、４週間後に投与されたキャリアおよび第二の結合体の糖部分の両方に対する免疫応答に影響を与えることが観察された。

１つの多価肺炎球菌結合体ワクチンにおける種々のキャリアタンパク質の使用は、参考文献２２（特許文献５（ＷＯ９８／５１３３９から特許化された））において報告されており、複数のキャリアが、キャリア抑制を回避するために使用される。その著者らは、負の干渉を生じることなく多価結合体ワクチンにおいて許容され得るキャリアタンパク質の最大負荷が存在すると予測している。参考文献２３（非特許文献１８）において、混合キャリアタンパク質を含む肺炎球菌結合体ワクチンが、抗肺炎球菌応答と並行して、そのキャリアに対する意図されないブースター応答を惹起したことが、報告された。

参考文献２４（非特許文献１９）において、ジフテリアブースターおよび破傷風ブースターが多価髄膜炎菌血清群Ｃ結合体とともに投与されたか否かに関する調査において、髄膜炎菌結合体に対する力価は、そのキャリアが破傷風トキソイドキャリアでありかつ患者が破傷風含有ワクチンによる予備免疫を受けている場合に低減されたことが、見出された。

最後に、参考文献２５（非特許文献２０）は、キャリアタンパク質に対する事前曝露は、糖−タンパク質結合体の状態で投与された多糖に対する抗体応答を増強または抑制のいずれかをし得る」と報告している。参考文献２５において使用された結合体は、破傷風トキソイドまたはＣＲＭ１９７変異体をキャリアタンパク質として使用した。

従って、キャリアプライミングおよび／またはキャリア抑制に関する状況が、混乱しており、特定の何らかの結合体がキャリア抑制に悩まされるかまたはキャリアプライミング増強から恩恵を受けるかは、不明のままである。髄膜炎結合体ワクチンは、この問題に取り組まれるまで、既存の小児科免疫スケジュールに組み込まれる位置にも付加される位置にも存在しない。さらに、髄膜炎菌結合体が四価混合物（すなわち、４種の異なる結合体）として投与される場合、キャリア抑制の可能性は、さらによりリスクが高くなる。

糖結合体に対する免疫応答に対して負の影響を有するキャリアを用いるプライミングの問題に加えて、逆もまた、生じ得る。すなわち、結合体による免疫は、そのキャリアに対する免疫応答に対して負の影響を有し得る（参考文献２６（非特許文献２１））。
国際特許公開第２００５／０００３４５号パンフレット 国際特許公開第０２／０５８７３７号パンフレット 国際特許公開第０３／００７９８５号パンフレット 国際特許公開第２００４／０１３４００号パンフレット オーストラリア国特許第７４８１６号明細書 Ａｒｍａｎｄら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．（１９８２）１０：３３５〜３３９ Ｃａｄｏｚら，Ｖａｃｃｉｎｅ（１９８５）３：３４０〜３４２ ＭＭＷＲ（１９９７）４６（ＲＲ−５）１〜１０ Ｂａｋｌａｉｃら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．（１９８３）４２：５９９〜６０４ Ｊｏｎｅｓ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ（２００１）２：４７〜４９ Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏら、Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９２）１０：６９１〜８ Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、ＪＡＭＡ（１９９６）２７５：１４９９〜５０３ Ｒｅｎｎｅｌｓら、Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ（２００２）２１：９７８〜９７９ Ｃａｍｐｂｅｌｌら、Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ（２９９２）１８６：１８４８〜１８５１ Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８０）２８５：６６４〜６６７ Ｓｃｈｕｔｚｅら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８５）１３５：２３１９〜２３２２ Ｄａｇａｎら、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ（１９９８）６６：２０９３〜２０９８ Ｂａｒｉｎｇｔｏｎら、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ（１９９４）６２：９〜１４ Ｄｉ Ｊｏｎら、Ｌａｎｃｅｔ（１９８９）２（８６７７）：１４１５〜８ Ｇｒａｎｏｆｆら、Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９３）Ｓｕｐｐｌ １，Ｓ４６〜５１ Ｇｒａｎｏｆｆら、ＪＡＭＭ（１９９４）２７２：１１１６〜１１２１ Ｂａｒｉｎｇｔｏｎら、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ（１９９３）６１：４３２〜４３８ Ｏｌａｎｄｅｒら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）２０：３３６〜３４１ Ｂｕｒｒａｇｅら、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ（２００２）７０：４９４６〜４９５４ Ｐｅｅｔｅｒｓら、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ（１９９９）５９：３５０４〜３５１０ Ｈｏｐｐｅｎｂｒｏｕｗｅｒｓら、Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９９）１７：２５８８〜９８

（発明の開示）
参考文献２７は、髄膜炎結合体ワクチンにおけるキャリア抑制は、１種よりも多い型のキャリアタンパク質を使用することによって処理されるべきであると示唆する。具体的には、参考文献２７は、インフルエンザ菌タンパク質Ｄが、髄膜炎菌結合体のキャリアタンパク質として使用され、破傷風トキソイド（Ｔｔ）もまた可能であると示唆する。参考文献２８において、エピトープ抑制を回避するために、タンパク質Ｄもまた、選り抜きのキャリアである。同様に、参考文献２９は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ線毛が、多価結合体ワクチンにおけるキャリア抑制を回避するためにキャリアとして使用されるべきであると示唆する。対照的に、ジフテリアトキソイド（Ｄｔ）およびその誘導体は、髄膜炎菌糖結合体のキャリアとして、複数の髄膜炎菌結合体が同時に投与される場合でされ安全に使用され得ることが、見出されている。参考文献２４において研究された一価髄膜炎菌血清群Ｃ結合体のいずれも、Ｄｔキャリアを使用しなかった。

さらに、参考文献２７はまた、髄膜炎菌結合体ワクチンが、Ｄ−Ｔ−Ｐワクチンと同時に投与されて（例えば、実施例３を参照のこと）、その結果、その髄膜炎菌結合体に由来するキャリアタンパク質に対する事前曝露が存在しないようにすべきであることを示唆する。対照的に、髄膜炎菌結合体は、それらがキャリアタンパク質として、例えば、前回の免疫原（例えば、Ｄ−Ｔ−Ｐ免疫もしくはＤ−Ｔ免疫における）の形態または前回のキャリアタンパク質（例えば、Ｈｉｂ結合体ワクチンもしくは肺炎球菌結合体ワクチンにおける）としてのいずれかで既に受容されている場合でさえ、患者に対して投与され得ることが、現在見出された。一価血清群Ｃ結合体枠知音におけるキャリア誘導体エピトープ抑制についての以前の研究（参考文献２４）は、いかなる結合体予備免疫の効果も、検討しなかった。

参考文献２７と対比的であることに加えて、髄膜炎結合体に対する免疫応答を患者が惹起する能力は、患者が別の結合体を既に受容している場合でさえ、参考文献２１と対比的である。

従って、本発明は、髄膜炎菌により引き起こされる疾患に対してヒト患者を免疫するための方法を提供し、その方法は、
（ａ）（ｉ）血清群Ａ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体との結合体；（ｂ）（ｉ）血清群Ｃ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体との結合体；（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体との結合体；および（ｄ）（ｉ）血清群Ｙ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体との結合体；のうちの少なくとも２つを含む組成物を、そのヒト患者に対して投与する工程；
を包含し、
その患者は、（ａ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体；および／または（ｂ）（ｉ）髄膜炎菌以外の生物の莢膜糖と（ｉｉ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体との結合体で予備免疫されている。

本発明はまた、髄膜炎菌により引き起こされる疾患に対してヒト患者を免疫するための医薬の製造における、
（ａ）（ｉ）血清群Ａ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体との結合体；（ｂ）（ｉ）血清群Ｃ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体との結合体；（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体との結合体；および（ｄ）（ｉ）血清群Ｙ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体との結合体；のうちの少なくとも２つの使用を提供し、
その患者は、（ａ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体；および／または（ｂ）（ｉ）髄膜炎菌以外の生物の莢膜糖と（ｉｉ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体との結合体で予備免疫されている。

上記髄膜炎菌性疾患は、好ましくは、髄膜炎であり、より好ましくは、細菌性髄膜炎であり、最も好ましくは、髄膜炎菌性髄膜炎である。従って、本発明は、髄膜炎を引き起こす髄膜炎菌感染に対して防御するために使用され得る。

上記予備免疫抗原が、ジフテリアトキソイドの誘導体である場合、その誘導体は、好ましくは、Ｄｔと免疫学的に交差反応性を保持し、好ましくはＣＲＭ１９７である。

（予備免疫された患者）
免疫されるべき患者は、（ａ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体；および／または（ｂ）（ｉ）髄膜炎菌以外の生物の莢膜糖と（ｉｉ）ジフテリアトキソイドもしくはその誘導体との結合体で予備免疫されている。代表的な予備免疫は、ジフテリアトキソイド抗原；ジフテリアトキソイドもしくはＣＲＭ１９７キャリアを使用するＨｉｂ莢膜糖結合体；および／またはジフテリアトキソイドもしくはＣＲＭ１９７キャリアを使用する肺炎球菌莢膜糖結合体を含んでいる。

上記患者は、少なくとも１回（例えば、１回、２回、３回、もしくはそれ以上の回数）の上記予備免疫抗原投与を受け、その投与（もしくは複数回投与のうちのもっとも早い投与）は、本発明に従う髄膜炎菌結合体による免疫の少なくとも６ヶ月間（例えば、６ヶ月間、９ヶ月間、１２ヶ月間、１５ヶ月間、１８ヶ月間、２１ヶ月間、２４ヶ月間、３６ヶ月間、４８ヶ月間、６０ヶ月間、１２０ヶ月間、１８０ヶ月間、２４０ヶ月間、３００ヶ月間、もしくはそれ以上）前に、上記患者に投与される。好ましい患者群において、上記予備免疫は、出生から３年間以内（例えば、出生から２年間以内、出生から１年間以内、出生から６ヶ月間以内、または出生から３ヶ月、２ヶ月、もしくは１ヶ月以内）に行われた。

本発明に従って免疫されるべき患者は、代表的には、ヒトである。そのヒトは、少なくとも１ヶ月齢であり、例えば、少なくとも２ヶ月齢、少なくとも３ヶ月齢、少なくとも４ヶ月齢、少なくとも６ヶ月齢、少なくとも２歳、少なくとも５歳少なくとも１１歳、少なくとも１７歳、少なくとも４０歳、少なくとも５５歳などである。患者の好ましい組は、少なくとも６ヶ月齢である。患者の別の好ましい組は、２歳〜５５歳の年齢群にあり、患者の別の好ましい組は、１１歳〜５５歳の年齢群にある。患者のさらに好ましい組は、１１歳未満（例えば、２歳〜１１歳）である。しかし、すべての場合において、年齢に関係なく、上記患者は、本明細書において規定されるように予備免疫される。

上記予備免疫抗原がジフテリアトキソイドである場合、上記患者は、Ｄ−Ｔ−Ｐ予備免疫またはＤ−Ｔ予備免疫においてそのトキソイドを「Ｄ」抗原として受容する。そのような免疫は、代表的には、２ヶ月齢、３ヶ月齢、および４ヶ月齢の新生児に与えられる。上記免疫が破傷風ワクチンを含む場合、そのワクチンは、全細胞ワクチンまたは細胞性破傷風ワクチン（「Ｐｗ」）であり得るが、好ましくは、無細胞性破傷風ワクチン（「Ｐａ」）である。予備免疫Ｐａワクチンは、一般的には、以下の周知かつ十分に特徴付けられたＢ．ｐｅｒｔｕｓｉｓ抗原：（１）破傷風トキソイド（「ＰＴ」）（化学的手段もしくは部位特異的変異誘発のいずれかによって無毒化されている）（例えば、９Ｋ／１２９Ｇ」変異体（参考文献３０））；（２）線維性赤血球凝集素（「ＦＨＡ」）；（３）ペルタクチン（「６９ｋＤａ外膜タンパク質としても公知である）；のうちの１つ、２つ、または３つを含む。無細胞性破傷風ワクチンはまた、凝集原２および／または凝集原３を含み得る。Ｄ−Ｔ−Ｐ予備免疫における「Ｔ」抗原は、代表的には、破傷風トキソイドである。

上記予備免疫抗原がジフテリアトキソイドである場合、上記患者はまた、もしくは上記患者はあるいは、タンパク質−糖結合体のキャリアタンパク質としてそのトキソイドを受容する。そのような結合体としては、「ＰＲＰ−Ｄ」Ｈｉｂ結合体（参考文献３２の表１４−７を参照のこと）（例えば、ＰｒｏＨＩＢＩＴ^ＴＭ製品）が挙げられる。

上記予備免疫抗原がＣＲＭ１９７である場合、上記患者は、代表的には、Ｈｉｂ結合体および／または多価肺炎球菌結合体で予備免疫されている。そのような免疫は、代表的には、２ヶ月齢、３ヶ月齢、および４ヶ月齢の新生児に対して与えられる。ＣＲＭ１９７を使用するＨｉｂ結合体としては、「ＨｂＯＣ」結合体（参考文献３２の表１４−７）（例えば、ＨｉｂＴＴＴＥＲ^ＴＭ製品）が挙げられる。ＣＲＭ１９７キャリアを使用する肺炎球菌結合体としては、７価ＰＣＶ７混合物（例えば、ＰｒｅｖＮａｒ^ＴＭワクチン（参考文献３１））が挙げられる。上記患者はまた、血清群Ｃ髄膜炎菌（「ＭｅｎＣ」）結合体で予備免疫され得る。ＣＲＭ１９７キャリアを使用するＭｅｎＣ結合体としては、Ｍｅｎｉｎｖａｃｔ^ＴＭ／Ｍｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭ（参考文献５）、およびＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃ^ＴＭが挙げられる。しかし、好ましくは、上記患者は、Ｈｉｂ結合体および／または肺炎球菌結合体で予備免疫されているが、ＭｅｎＣ結合体では予備免疫されていない。上記キャリアがＭｅｎＣ結合体で予備免疫されている場合、本発明に従って投与されるワクチンは、血清群Ｃ結合体を含んでいても含まなくてもよい。

上記予備免疫が結合体化抗原である場合、上記患者はまた、ほぼ必ず、少量の遊離ジフテリアトキソイド（もしくは誘導体）を、（例えば、貯蔵の間の上記結合体の加水分解により引き起こされる）上記結合体の低レベル混入の結果として受容するが、この少量は、代表的には、有意な免疫応答を提供するために十分ではない。

ジフテリアトキソイドは、周知かつ十分に特徴付けられたタンパク質（例えば、参考文献３２の第１３章を参照のこと）であり、これは、不活化化学物質（例えば、ホルマリンもしくはホルムアルデヒド）でＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｊｉｐｈｔｈｅｒｉａｅのＡＤＰ−リボシル化外毒素を処理することによって取得され得る。ＣＲＭ１９７もまた、周知かつ十分に特徴付けられており（参考文献３３〜３６）、結合体化糖ワクチン中のキャリアとして広汎に使用されている。ＣＲＭ１９７およびＤｔは、多くのキャリアエピトープを共有する。

上記予備免疫の結果は、その患者の免疫系が上記予備免疫抗原に曝露されていることである。ジフテリアトキソイド（Ｄｔ）による予備免疫について、これは、一般的には、上記患者が抗Ｄｔ抗体応答を惹起しており（代表的には、抗Ｄｔ力価＞０．０１ＩＵ／ｍｌ）を与える）、Ｄｔに対して特異的な記憶Ｂリンパ球および記憶Ｔリンパ球を保有すること、すなわち、Ｄｔによる予備免疫が、代表的には、上記患者における既往性（ａｎａｍｎｅｓｔｉｃ）抗Ｄｔ免疫応答を惹起するために十分であることを、意味する。Ｄｔ（または誘導体）が結合体中の糖についてのキャリアである予備免疫について、上記予備免疫は、抗糖応答を惹起し、上記患者は、上記糖に対して特異的な記憶Ｂリンパ球および／または記憶Ｔリンパ球を保有する。すなわち、上記予備免疫は、代表的には、上記患者における既往性（ａｎａｍｎｅｓｔｉｃ）抗糖免疫応答を惹起するために十分である。上記予備免疫は、好ましくは、上記患者において、例えば、ジフテリア疾患に対する防御免疫を惹起するために十分である。

従って、本発明に従って免疫されるべき患者は、一般的な患者とは区別される。なぜなら、それらの患者は、免疫系が上記予備免疫抗原に対する免疫応答を既に惹起している一般集団の部分集団のメンバーであり、その結果、ジフテリアトキソイド（もしくはその誘導体）キャリアを含む髄膜炎菌結合体による本発明に従う免疫は、上記予備免疫抗原に対する免疫応答を以前には惹起していない患者においてとは異なる免疫応答を、上記部分集団において惹起する。結合体（特に、Ｈｉｂ結合体）のキャリアとしてのＤｔ（もしくは誘導体）で予備免疫されている患者が、好ましい。特に好ましい患者は、結合対のキャリアとしてのＤｔ（もしくは誘導体）で予備免疫されており、かつまた、非結合体化免疫原としてのＤｔで予備免疫されている。

ジフテリアトキソイド（もしくは誘導体）（結合体形態もしくは非結合体形態）で呼び免疫されていることに加え、上記患者は、他の抗原で予備免疫されていてもよい。そのような抗原としては、百日咳抗原（上記参照）；破傷風トキソイド（上記参照）；Ｂ型インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｔｙｐｅ Ｂ）（上記参照）；Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）；ポリオウイルス（例えば、不活化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ））；肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（上記参照））；インフルエンザウイルス；ＢＣＧ；Ａ型肝炎ウイルス抗原；麻疹ウイルス；流行性耳下腺炎ウイルス；風疹ウイルス；水痘ウイルスなどが挙げられるが、これらに限定はされない。

上記患者は、１つ以上の髄膜炎菌結合体で予備免疫されていても、されていなくてもよい。いくつかの好ましい実施形態においては、患者が初めて髄膜炎菌結合体を受容したときに、その患者は、Ｄｔ（もしくは誘導体）で既に予備免疫されている。他の実施形態において、髄膜炎菌結合体は、（ｉ）Ｄｔもしくは誘導体、および（ｉｉ）髄膜炎菌結合体の両方で既に予備免疫されている。

（結合体）
本発明は、結合体化糖で患者を免疫する。結合体化は、糖の免疫原性を増強するために使用される。なぜなら、この結合体化によって、糖が、Ｔ非依存性抗原からＴ依存性抗原へと変換され、これによって、免疫学的記憶のためのプライミングが可能になるからである。結合体化は、小児科ワクチンのために特に有用であり（例えば、参考文献３７）、周知技術である（例えば、参考文献３８〜４０において概説される）。

本発明に従って使用される組成物は、少なくとも２つの髄膜炎菌結合体を含み、各結合体は、ジフテリアトキソイド（もしくはその誘導体）キャリアタンパク質および莢膜糖を含む。上記莢膜糖は、髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、およびＹから選択され、その組成物が、これら４つの血清群のうちの２つ、３つ、または４つすべてに由来する糖を含むようにされる。具体的組成物は、血清群ＡおよびＣに由来する糖；血清群ＡおよびＷ１３５に由来する糖；血清群ＡおよびＹに由来する糖；血清群ＣおよびＷ１３５に由来する糖；血清群ＣおよびＹに由来する糖；血清群Ｗ１３５およびＹに由来する糖；血清群ＡおよびＣおよびＷ１３５に由来する糖；血清群ＡおよびＣおよびＹに由来する糖；血清群ＡおよびＷ１３５およびＹに由来する糖；血清群ＣおよびＷ１３５およびＹに由来する糖；血清群ＡおよびＣおよびＷ１３５およびＹに由来する糖を含む。４つすべての血清群に由来する糖を含む組成物が、最も好ましい。

これらの４つの血清群のうちの各々の莢膜糖は、十分に特徴付けられている。血清群Ａ髄膜炎菌の莢膜糖は、（α１→６）結合型Ｎ−アセチル−Ｄ−マンノサミン−１−リン酸のホモポリマーであり、Ｃ３位およびＣ４位において部分的Ｏ−アセチル化を含む。そのアセチル基は、加水分解を防止するためにブロッキング基で置換され得（参考文献４７）、そのように改変された糖は、本発明の意味においては依然として血清群Ａ糖である。血清群Ｃ莢膜糖は、（α２→９）結合型シアリン酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸もしくは「ＮｅｕＮａｃ」）のホモポリマーである。ほとんどの血清群Ｃ株は、そのシアリン酸残基のＣ７位および／またはＣ８位にＯ−アセチル基を有するが、臨床単離株のうちの約１５％は、これらのＯ−アセチル基を欠く（参考文献４８および４９）。その糖構造は、→９）−Ｎｅｕ ｐ ＮＡｃ ７／８ ＯＡｃ−（α２→として記載される。血清群Ｗ１３５糖は、シアリン酸−ガラクトース二糖単位のポリマーである。血清群Ｃ糖とは異なり、この血清群Ｗ１３５糖は、可変であるがシアリン酸の７位および９位にＯ−アセチル化を有する（参考文献５０）。この構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−α−（２→６）−Ｄ−Ｇａｌ−α−（１→として記載される。血清群Ｙ糖は、血清群Ｗ１３５糖と類似しているが、但し、その二糖反復単位は、ガラクトースの代わりにグルコースを含む。血清群Ｗ１３５と同様に、この血清群Ｙ糖は、シアリン酸の７位および９位に可変のＯ−アセチル化を有する（参考文献５０）。血清群Ｙの構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−α−（２→６）−Ｄ−Ｇｌｃ−α−（１→として記載される。

本発明に従って使用される糖は、（例えば、ネイティブ莢膜糖において観察されるのと同じＯアセチル化パターンで）上記のようにＯ−アセチル化され得るか、またはその糖は、その糖環のうちの１つ以上の位置において部分的にかもしくは全体的に脱Ｏ−アセチル化され得るか、またはその糖は、そのネイティブ莢膜糖と比較して過剰にＯ−アセチル化され得る。

本発明に従って使用される糖は、細菌において観察されるネイティブ莢膜糖よりも好ましくは短い。従って、上記糖は、好ましくは、脱重合され、脱重合は、精製後であるが結合体化の前に生じる。脱重合は、その糖の鎖長を低減させる。好ましい脱重合方法は、過酸化水素の使用を含む（参考文献９）。過酸化水素は、（例えば、最終Ｈ_２Ｏ_２濃度１％を生じるように）糖に添加され、その後、その混合物は、望ましい鎖長低減が達成されるまで（例えば、約５５℃にて）インキュベートされる。別の脱重合方法は、酸加水分解を含む（参考文献１０）。他の脱重合方法は、当業者にとって公知である。本発明に従う使用のために結合体を調製するために使用される糖は、これらの脱重合方法のうちのいずれかによって取得され得る。脱重合は、免疫原性のために最適な鎖長を提供するため、および／またはその糖の物理的管理能のために鎖長を低減するために、使用され得る。

結合体において使用するために代表的なキャリアタンパク質は、細菌毒素または細菌トキソイド（例えば、ジフテリア毒素（もしくはそのＣＲＭ_１９７変異体）および破傷風毒素）である。他の公知のキャリアタンパク質としては、髄膜炎菌外膜タンパク質、合成ペプチド、熱ショックタンパク質、百日咳タンパク質、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、増殖因子、種々の病原体由来抗原に由来する複数のヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のタンパク質Ｄ、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ、鉄取込みタンパク質、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａまたは毒素Ｂなどが挙げられる。しかし、本発明に従って、上記髄膜炎菌結合体は、ジフテリアトキソイド（もしくはその誘導体（例えば、ＣＲＭ１９７）キャリアタンパク質を含む。共有結合体化が、好ましい。

上記組成物において１つよりも多くのキャリアタンパク質を使用することが、好ましい。従って、種々のキャリアタンパク質が、種々の血清群のために使用され得る。例えば、血清群Ａ糖が、ＣＲＭ１９７に結合体化され得、一方、血清群Ｃ糖が、ジフテリアトキソイドに結合体化され得る。特定の糖抗原のために１つよりも多くのキャリアタンパク質を使用することもまた、可能である。例えば、血清群Ａ糖が、２つのグループにあり得、いくつかはＣＲＭ１９７に結合体化され、他はジフテリアトキソイドに結合体化される。しかし、一般的には、その組成物中の髄膜炎菌糖すべてについて（より好ましくは、すべての糖（すなわち、存在し得るあらゆる非髄膜炎菌結合体を含む）について）同じキャリアタンパク質を使用することが、好ましい。上記組成物がジフテリアトキソイドキャリアタンパク質を含む場合、その組成物は、ＣＲＭ１９７キャリアタンパク質を全く含まないことが、好ましい。

単一のキャリアタンパク質は、１つよりも多くの糖抗原（参考文献５１）を含み得る。例えば、単一のキャリアタンパク質は、そのタンパク質に、血清群Ａ由来の糖および血清群Ｃ由来の糖を結合体化し得る。この目的を達成するために、糖は、上記結合体化反応の前に混合され得る。しかし、一般的には、各血清群について別個の結合体を有することが、好ましい。結合体は、好ましくは、（糖の質量として測定して）実質的には１：１：１：１の比を生じるように混合される。例えば、各血清群の糖の質量は、互いの±１０％以内にある。組成物中の血清群１つ当たりの髄膜炎菌抗原の代表的な量は、１μｇ〜２０μｇであり、例えば、血清群１つ当たり２μｇ〜１０μｇ、または約４μｇである。１：１：１：１の比の代替法として、二重血清群Ａ用量（２：１：１：１）が、使用され得る。

糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）が１：１５（すなわち、過剰なタンパク質）〜１５：１（すなわち、過剰な糖）、好ましくは１：１０〜１０：１、より好ましくは１：５〜５：１にある結合体が、好ましい。過剰なキャリアタンパク質が、好ましい。糖：タンパク質比が約１：１２または約１：６または約１：３である結合体が、特にキャリアがＤｔである場合には、好ましい。１：３の比が、最も好ましい。

結合体は、遊離キャリアタンパク質（参考文献５２）と組み合わせて使用され得る。しかし、所定のキャリアタンパク質が、本発明の組成物中で遊離形態および結合体化形態の両方で存在する場合、その非結合体化形態は、全体として、その組成物中のキャリアタンパク質の総量のうちの好ましくは５％以下であり、より好ましくは２重量％未満で存在する。同様に、非結合体化糖は、好ましくは、糖の総量のうちの１５重量％以下である。

適切な任意の結合体化反応が、使用され得、任意の適切なリンカーが、必要な場合に使用され得る。

上記糖は、代表的には、結合体化の前に活性化または官能化される。活性化は、例えば、シアニル化試薬（例えば、ＣＤＡＰ（例えば、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート（参考文献５３、５４など）））を含み得る。他の適切な技術は、カルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ−ニトロ安息香酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ−ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを使用する（参考文献４４に対する序文もまた参照のこと）。

リンカー基を介する結合が、任意の公知手順（例えば、参考文献５５および５６において記載される手順）を使用して作製され得る。ある型の結合は、多糖の還元的アミド化、生じるアミノ基をアジピン酸リンカー基の一端とカップリングすること、その後、タンパク質をそのアジピン酸リンカー基のもう一端にカップリングすること（参考文献４２、５７、５８）を含む。他のリンカーとしては、Ｂ−プロピオンアミド（参考文献５９）、ニトロフェニル−エチルアミン（参考文献６０）、ハロアシルハライド（参考文献６１）、グリコシド結合（参考文献６２）、６−アミノカプロン酸（参考文献６３）、ＡＤＨ（参考文献６４）、Ｃ_４〜Ｃ_１２部分（参考文献６５）などが挙げられる。リンカーを使用することの代替法として、直接的結合が、使用され得る。上記タンパク質に対する直接的結合は、例えば、参考文献６６および６７において記載されるような、上記多糖の酸化、その後の上記蛋白質による還元的アミノ化を含み得る。

（例えば、末端＝Ｏ基を−ＮＨ_２で置換することによる）上記糖中へのアミノ基の導入、その後のアジピン酸ジエステル（例えば、アジピン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドジエステル）による誘導体化、およびキャリアタンパク質との反応を含むプロセスが、好ましい。

ある好ましい結合体化方法において、糖は、アジピン酸二水和物と反応させられる。血清群Ａについて、カルボジイミドもまた、この段階で添加され得る。反応期間の後、ナトリウムシアノボロヒドリドが、添加される。その後、誘導体化糖が、例えば、限外ろ過によって調製され得る。その後、その誘導体化糖は、キャリアタンパク質と（例えば、ジフテリアトキソイドと）混合され、カルボジイミドが、添加される。反応期間の後、その結合体が、回収され得る。この結合体化方法のさらなる詳細は、参考文献１０において見出され得る。この方法によって取得可能な結合体（例えば、ジフテリアトキソイドキャリアとアジピン酸リンカーとを含む結合体）が、本発明に従う使用のために好ましい結合体である。

結合体は、好ましくは別個に調製され、その後に混合される。混合の後、混合された結合体の濃度は、例えば、発熱物質を含まない滅菌リン酸緩衝化生理食塩水で調節され得る。各結合体は、混合する前には、好ましくは、１５μｇ以下のキャリアを含む。

本発明に従う髄膜炎菌結合体を投与する結果は、好ましくは、投与される各血清群について、上記患者が血清殺菌抗体（ＳＢＡ）応答を惹起し、（その混合髄膜炎菌結合体を受ける前の予備免疫された患者と比較した）ＳＢＡ力価の増加が、少なくとも４倍であり、好ましくは少なくとも８倍であることである。そのＳＢＡ試験は、髄膜炎菌防御について標準的な相互関連因子である。髄膜炎菌ワクチンについての血清学的相互関連因子のさらなる詳細が、参考文献６８において与えられる。

（本発明に従って使用される組成物のさらなる抗原性成分）
髄膜炎菌結合体に加えて、本発明に従って使用される組成物は、必要に応じて、以下のさらなる抗原のうちの１つ、２つ、または３つを含み得る：
１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の結合体化莢膜糖（例えば、参考文献３２の第２３章；参考文献６９〜７１）：
１つよりも多くの血清型の肺炎連鎖球菌に由来する糖を含むことが、好ましい。例えば、２３種の異なる血清型に由来する多糖の混合物が、広範に使用され、同様に、５種〜１１種の異なる血清型に由来する多糖を含む結合体ワクチンも、広範に使用される（参考文献７２）。例えば、ＰｒｅｖＮａｒ^ＴＭ（参考文献３１）は、７種の血清型（４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ）に由来する抗原を含み、各糖は、還元的アミン化によってＣＲＭ１９７に個別に結合体化されており、０．５μｇ用量について各糖２μｇ（４μｇの血清型６Ｂ）であり、結合体は、リン酸アルミニウムアジュバントに吸着されている。肺炎球菌が本発明に関して使用するための組成物中に含まれる場合、その組成物は、好ましくは、少なくとも血清型６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆを含む。

２．インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ）に由来する結合体化莢膜糖（例えば、参考文献３２の第１４章）：
上記結合体のキャリアタンパク質は、ＣＲＭ９１７、Ｄｔ、破傷風トキソイド、または髄膜炎菌の外膜複合体であり得る。その結合体の糖部分は、多糖（例えば、全長ポリリボシルリビトールホスフェート（ＰＲＰ））であり得るが、その莢膜多糖をオリゴ糖（例えば、分子量約１ｋＤａ〜約５ｋＤａ）へと脱重合することが、好ましい。好ましいＨｉｂ結合体は、アジピン酸リンカーを介してＣＲＭ１９７に共有結合したオリゴ糖を含む（参考文献７３、７４）。上記Ｈｉｂ抗原の投与は、好ましくは＞０．１５μｇ／ｍｌ、より好ましくは＞１μｇ／ｍｌの抗ＰＲＰ抗体濃度を生じる。組成物がＨｉｂ糖抗原を含む場合、その組成物はまた、好ましくは、水酸化アルミニウムアジュバントを含まない。上記組成物がリン酸アルミニウムアジュバントを含む場合、そのＨＩｂ抗原は、そのアジュバントに吸着されても（参考文献７５）、吸着されていなくてもよい（参考文献２７）。吸着の防止は、抗原／アジュバント混合の間における正しいｐＨ、適切な０荷電点を有するアジュバント、および組成物中における種々の別個の抗原を混合する適切な順序を選択することによって、達成され得る（参考文献７６）。

３．髄膜炎菌血清群Ｂに由来するタンパク質抗原（例えば、参考文献７７）。

上記組成物は、これらのさらなる抗原のうちの１つ以上を含み得る。

そのような抗原は、アルミニウム塩に吸着されていても、吸着されていなくてもよい。髄膜炎菌結合体が一連の投与において投与される場合、その投与のうちのいくつかまたはすべては、これらの余分な抗原を含み得る。

上記髄膜炎菌結合体を含む組成物は、好ましくは、破傷風トキソイドを含まない。これらの組成物は、好ましくは、百日咳抗原を含まない。これらの組成物は、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原を含まない。これらの組成物は、ポリオウイルスを含まない。組成物は、好ましくは、髄膜炎菌結合体１つにつき５０μｇ以下のジフテリア毒素を含み、より好ましくは、合わされたすべての髄膜炎菌結合体について５０μｇ以下のジフテリア毒素を含む。

（ワクチン組成物）
本発明に従って使用される組成物は、代表的には、薬学的に受容可能なキャリアを含む。そのようなキャリアは、上記組成物を受容する個体に対して有害な抗体の生成をそれ自体は誘導しない任意のキャリアを含む。適切なキャリアは、代表的には、大きくゆっくり代謝される高分子（例えば、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、スクロース、トレハロース、ラクトース、および脂質凝集物（例えば、油滴またはリポソーム））である。そのようなキャリアは、当業者にとって周知である。上記ワクチンはまた、希釈剤（例えば、水、生理食塩水、グリセロールなど）を含み得る。さらに、補助物質（例えば、湿潤剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝物質など）が、存在し得る。発熱物質を含まない滅菌リン酸緩衝化生理食塩水が、代表的なキャリアである。薬学的に受容可能なキャリアおよび賦形剤の詳細な考察が、参考文献７８において入手可能である。

本発明に従って使用される組成物は、特に多用量形式でパッケージされた場合に、抗菌剤を含み得る。

本発明に従って使用される組成物は、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（ポリソルベート）（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０）を含み得る。界面活性剤は、一般的には、低レベル（例えば、＜０．０１％）で存在する。

本発明に従って使用される組成物は、ナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウムおよび／またはリン酸ナトリウム）を含み得る。これらは、張度調整のために使用され得る。１０±２ｍｇ／ｍｌの濃度のＮａＣｌ（例えば、約８．８ｍｇ／ｍｌ）が、代表的である。１．２ｍｇ／ｍｌ濃度のリン酸ナトリウムが、代表的である。

本発明に従って使用される組成物は、一般的には、緩衝液（例えば、リン酸緩衝液）を含む。

本発明に従って使用される組成物は、糖アルコール（例えば、マンニトール）または二糖（例えば、スクロースもしくはトレハロース）を、例えば、約１５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ（例えば、２５ｍｇ／ｍｌ）にて、特にその組成物が凍結乾燥される場合、または凍結乾燥物質から再構成された物質を含む場合に、含み得る。しかし、好ましい組成物は、凍結乾燥されない。すなわち、すべての髄膜炎菌結合体は、水性形態で、パッケージング段階から投与段階まで存在する。

組成物は、一般的には、患者に対して直接投与される。直接送達は、非経口注射（例えば、皮下注射、腹腔内注射、静脈注射、筋肉内注射、もしくは組織間隙空間への注射）によって、または直腸投与、経口投与、膣投与、局所投与、経皮投与、鼻内投与、眼内投与、耳投与、肺投与、もしくは他の粘膜投与によって、達成され得る。（例えば、大腿または上腕への）筋肉内投与が、好ましい。注射は、肺（例えば、皮下針）を介してであり得るが、針なし注射が、代替的に使用され得る。代表的な筋肉内用量は、０．５ｍｌである。

複数の血清群に由来する髄膜炎菌結合体が、単一組成物中で混合した状態で投与される。その組成物は、単回投与として投与されてもよいし、複数回投与スケジュールにおいて１回よりも多く投与されてもよい。複数回投与が、初回免疫スケジュールおよび／またはブースター免疫スケジュールにおいて使用され得る。初回投与スケジュールの後には、髄膜炎菌結合体のブースター投与スケジュールが続き得る。プライミング投与の間の適切な間隔（例えば、４週間〜１６週間）、およびプライミングとブースターとの間の適切な間隔は、慣用的に決定され得る。上記結合体は、他のワクチンと同時に（例えば、Ｄ−Ｔ−Ｐワクチンと同時に、または肺炎球菌結合体ワクチンと同時に、またはインフルエンザワクチンと同時に、またはＭＭＲワクチンもしくはＭＭＲＶワクチンと同時に）簡便に投与され得る。これらのワクチンは、一般的には、別個に、しかし同じ医師訪問時に投与される。

細菌注射は、身体の種々の領域に影響を与え得る。従って、組成物は、種々の形態で調製され得る。例えば、上記組成物は、注射可能物質として、液体溶液または液体懸濁物のいずれかとして、調製され得る。注射前に液体ビヒクル中の溶液もしくは懸濁物として適切な固体形態もまた、調製され得る（例えば、凍結乾燥した組成物）。その組成物は、局所投与用に（例えば、錠剤もしくはカプセルとして、またはシロップとして（必要に応じて矯味矯臭済み））調製され得る。その組成物は、肺投与用に（例えば、微細粉末もしくはスプレーを使用する、吸入器として）調製され得る。その組成物は、坐剤もしくはペッサリーとして調製され得る。上記組成物は、鼻投与用、耳投与用、または眼投与用に（例えば、スプレー、ドロップ、ゲル、または粉末として（例えば、参考文献７９および８０））調製され得る。しかし、一般的には、上記髄膜炎菌結合体は、筋肉内注射用に処方される。

本発明に従って使用される組成物は、ワクチンアジュバントを含んでも含まなくてもよい。本発明の組成物において使用され得るアジュバントとしては、以下が挙げられるが、これらに限定はされない：
（Ａ．無機質含有組成物）
本発明中でアジュバントとして使用するために適切な無機質含有組成物は、無機塩（例えば、アルミニウム塩およびカルシウム塩）を含む。本発明は、無機塩（例えば、水酸化物（例えば、オキシヒドロキシド）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシホスフェート、オルトホスフェート）、硫酸塩など（例えば、参考文献１８の第８章および９章を参照のこと）、または種々の無機化合物の混合物を含み、その化合物は、任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）を採り、吸着が好ましい。上記無機質含有組成物はまた、無機塩の粒子（参考文献８２）として処方され得る。

リン酸アルミニウムが、特に好ましい。代表的なアジュバントは、非晶質ヒドロキシリン酸アルミニウムであり、ＰＯ_４／Ａｌモル比は、０．８４〜０．９２であり、約０．６ｍｇのＡｌ^３＋／ｍｌで含まれる。低用量のリン酸アルミニウムとの吸着が使用され得、例えば、１用量当たり１つの結合体について５０μｇ〜１００μｇのＡｌ^３＋である。組成物が複数の細菌種に由来する結合体を含む場合、すべての結合体が吸着される必要はない。

（Ｂ．油エマルジョン）
本発明におけるアジュバントとして使用するために適切な油エマルジョンとしては、スクアレン−水エマルジョン（例えば、ＭＦ５９（参考文献８１の第１０章；参考文献８３もまた参照のこと）（５％スクアレン、０．５％ Ｔｗｅｅｎ８０、および０．５％ Ｓｐａｎ ８５が、マイクロフルイダイザーを使用して１ミクロン未満の粒子に処方されている）が挙げられる。完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）もまた、使用され得る。

（Ｃ．サポニン処方物（参考文献８１の第２２章））
サポニン処方物もまた、本発明におけるアジュバントとして使用され得る。サポニンは、ステロールグリコシドとトリテルペノイドグリコシドとの不均質グループであり、広範な植物種の樹皮、葉、幹、根、および花においてまでも見出される。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来するサポニンは、アジュバントとして広範に研究されている。サポニンはまた、Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ）、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（シュッコンカスミソウ）、およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（サボンソウ）からも商業的に取得され得る。サポニンアジュバント処方物としては、精製処方物（例えば、ＱＳ２１）および液体処方物（例えば、ＩＳＣＯＭ）が挙げられる。ＱＳ２１は、Ｓｔｉｍｕｌｏｎ^ＴＭとして販売されている。

サポニン処方物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを使用して精製されている。これらの技術を使用する具体的な精製画分が同定されており、それには、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＳＱ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−Ｂ、およびＱＨ−Ｃが挙げられる。好ましくは、上記サポニンは、ＱＳ２１である。ＱＳ２１の生成方法は、参考文献８４において開示される。サポニン処方物はまた、ステロール（例えば、コレステロール）（参考文献８５）を含み得る。

サポニンとコレステロールとの組み合わせは、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）（参考文献８１の第２３章）と呼ばれる独特な粒子を形成するために使用され得る。ＩＳＣＯＭは、代表的にはまた、リン脂質（例えば、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリン）を含む。任意の公知サポニンが、ＩＳＣＯＭにおいて使用され得る。好ましくは、そのＩＳＣＯＭは、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡ、およびＱＨＣのうちの１つ以上を含む。ＩＳＣＯＭは、参考文献８５〜８７においてさらに記載される。必要に応じて、ＩＳＣＯＭは、さらなる界面活性剤を含まないものであり得る（参考文献８８）。

サポニンベースのアジュバントの開発についての概説は、参考文献８９および９０において見出され得る。

（Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子）
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。これらの構造は、一般的には、必要に応じてリン脂質と合わされたかまたはリン脂質を用いて処方された、ウイルスに由来する１つ以上のタンパク質を含む。これらは、一般的には、非病原性であり、複製せず、一般的には、ネイティブウイルスゲノムを全く含まない。そのウイルスタンパク質は、組換え生成されても、ウイルス全体から単離されてもよい。ビロソームまたはＶＬＰにおける使用のために適切なこれらのウイルスタンパク質としては、インフルエンザウイルス由来タンパク質（例えば、ＨＡもしくはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス由来タンパク質（例えば、コアタンパク質もしくはキャプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス由来タンパク質、麻疹ウイルス由来タンパク質、シンドビスウイルス由来タンパク質、ロタウイルス由来タンパク質、口蹄疫ウイルス由来タンパク質、レトロウイルス由来タンパク質、ノーウォークウイルス由来タンパク質、ヒトパピローマウイルス由来タンパク質、ＨＩＶ由来タンパク質、ＲＮＡファージ由来タンパク質、Ｑβファージ由来タンパク質（例えば、コートタンパク質）、ＧＡファージ由来タンパク質、ｆｒファージ由来タンパク質、ＡＰ２０５ファージ由来タンパク質、およびＴｙ由来タンパク質（例えば、レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１）が挙げられる。ＶＬＰは、参考文献９１〜９６においてさらに考察される。ビロソームは、例えば、参考文献９７においてさらに考察される。

（Ｅ．細菌誘導体または微生物誘導体）
本発明における使用のために適切なアジュバントとしては、細菌誘導体または微生物誘導体（例えば、腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体、脂質Ａ誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチド、およびＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体）が挙げられる。

ＬＰＳの非毒性誘導体としては、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−デアシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が挙げられる。３ｄＭＰＬは、３デ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａと、４アシル化鎖または５アシル化鎖または６アシル化鎖との混合物である。好ましい「小さい粒子」形態の３デ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａは、参考文献９８に開示される。そのような「小さい粒子」の３ｄＭＰＬは、０．２２μｍ膜を通して滅菌濾過されるために十分に小さい（参考文献９８）。他の非毒性ＬＰＳ誘導体としては、モノホスホリル脂質Ａ模倣物（例えば、アミノアルキルグルコサミドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ−５２９））が挙げられる（参考文献９９、１００）。

脂質Ａ誘導体としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ由来の脂質Ａ（例えば、ＯＭ−１７４）が挙げられる。ＯＭ−１７４は、例えば、参考文献１０１および１０２において記載されている。

本発明におけるアジュバントとして使用するために適切な免疫刺激オリゴヌクレオチドとしては、ＣｐＧモチーフ（グアノシンにリン酸結合により連結された非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列）を含むヌクレオチド配列を含む。パリンドローム配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む、二本鎖ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドもまた、免疫刺激性であることが示されている。

上記ＣｐＧは、ヌクレオチド改変／ヌクレオチドアナログ（例えば、ホスホロチオエート改変）を含み得、そして二本鎖であっても一本鎖であってもよい。参考文献１０３、１０４および１０５は、あり得るアナログ置換（例えば、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンによるグアノシンの置換）を開示する。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献１０６〜１１１においてさらに考察される。

上記ＣｐＧ配列は、ＴＬＰ９に対し得る（例えば、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴ（参考文献１１２））。上記ＣｐＧ配列は、Ｔｈ１免疫応答を誘導するために特異的であっても（例えば、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮ）、またはＢ細胞応答を誘導するためにより特異的であってもよい（例えば、ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮ）。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、参考文献１１３〜１１５において考察される。好ましくは、上記ＣｐＧは、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。

好ましくは、上記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、その５’末端がレセプター認識のために接近可能であるように構築される。必要に応じて、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列が、「イムノマー」を形成するためにその３’末端に付着され得る。例えば、参考文献１１２および１１６〜１１８を参照のこと。

細菌性ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体が、本発明においてアジュバントとして使用され得る。好ましくは、上記タンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ由来（Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ由来（「ＣＴ」）、または百日咳由来（「ＰＴ」）である。無毒化ＡＤＰ−リボシル化毒素を粘膜アジュバントとして使用することが、参考文献１１９において記載されており、非経口アジュバントとして使用することが、参考文献１２０において記載されている。上記毒素またはトキソイドは、好ましくは、ホロ毒素（ＡサブユニットおよびＢサブユニットの両方を含む）の形態である。好ましくは、そのＡサブユニットは、無毒化変異を含む。好ましくは、そのＢサブユニットは、変異されていない。好ましくは、そのアジュバントは、無毒化ＬＴ変異体（例えば、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴ−Ｇ１９２）である。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体（特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２）をアジュバントとして使用することは、参考文献１２１〜１２８において見出され得る。アミノ酸置換に関する多数の言及は、好ましくは、参考文献１２９（本明細書中にその全体が参考として援用される）に示されるＡＤＰ−リボシル化毒素のＡサブユニットおよびＢサブユニットのアライメントに基づく。

（Ｆ．ヒト免疫調節因子）
本発明においてアジュバントとして使用するために適切なヒト免疫調節因子としては、サイトカイン（例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２（参考文献１３０）など）（参考文献１３１）、インターフェロン（例えば、インターフェロンγ）、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子）が挙げられる。

（Ｇ．生物接着因子および粘膜接着因子）
生物接着因子（ｂｉｏａｄｈａｓｉｖｅ）および粘膜接着因子（ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ）もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。適切な生物接着因子としては、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフェア（参考文献１３２）、または粘膜接着因子（例えば、ポリ（アクリル酸）の架橋誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖、およびカルボキシメチルセルロース）が挙げられる。キトサンおよびその誘導体もまた、本発明におけるアジュバントとして使用され得る（参考文献１３３）。

（Ｈ．微粒子）
微粒子もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０ｎｍ、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、最も好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）は、生分解性かつ非毒性である物質（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなど；ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）が好ましく、必要に応じて、負荷電表面を有するように（例えば、ＳＤＳで）処理されるかまたは正荷電表面を有するように（例えば、カチオン性界面活性剤（例えば、ＣＴＡＢ）で）処理される）から形成される。

（Ｉ．リポソーム（参考文献８１の第１３章および第１４章））
アジュバントとして使用するために適切なリポソーム処方物の例は、参考文献１３４〜１３６に記載されている。

（Ｊ．ポリオキシエチレンエーテル処方物およびポリオキシエチレンエステル処方物）
本発明における使用のために適切なアジュバントとしては、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル（参考文献１３７）が挙げられる。そのような処方物としては、ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤とオクトキシノールとの組み合わせ（参考文献１３８）、ならびにポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤もしくはポリオキシエチレンアルキルエステル界面活性剤と少なくとも１種のさらなる非イオン性界面活性剤（例えば、オクトキシノール）との組み合わせ（参考文献１３９）がさらに挙げられる。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス（ｌａｕｒｅｔｈ）９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテルから選択される。

（Ｌ．ムラミルペプチド）
本発明におけるアジュバントとして使用するために適切なムラミルペプチドの例としては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミル−Ｌ−アラニン−２−（１’，２’−ジパルミトイルーｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）が挙げられる。

（Ｋ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ））
ＰＣＰＰ処方物は、例えば参考文献１４２および１４３に記載される。

（Ｍ．イミダゾキノロン化合物）
本発明におけるアジュバントとして使用するために適切なイミダゾキノロン化合物の例としては、Ｉｍｉｑｕａｍｏｄおよびそのホモログ（例えば、「Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ ３Ｍ」）（参考文献１４２および１４３においてさらに記載される）が挙げられる。

（Ｎ．チオセミカルバゾン化合物）
チオセミカルバゾン化合物の例、ならびに本発明においてアジュバントとして使用するために適切な化合物の処方方法、製造方法、およびスクリーニング方法としては、参考文献１４４において記載されるものが挙げられる。そのチオセミカルバゾンは、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α）の生成のためにヒト末梢血単核球の刺激においてときに有効である。

（Ｏ．トリプタントリン（ｔｒｙｐｔａｎｔｈｒｉｎ）化合物、ならびに本発明においてアジュバントとして使用するために適切な化合物の処方方法、製造方法、およびスクリーニング方法としては、参考文献１４５に記載されるものが挙げられる。そのトリプタントリン化合物は、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α）の生成のためにヒト末梢血単核球の刺激においてときに有効である。

本発明はまた、上記に同定されたアジュバントのうちの１つ以上の局面の組み合わせを含み得る。例えば、以下のアジュバント組成物が、本発明において使用され得る：（１）サポニンよび水中油エマルジョン（参考文献１４６）；（２）サポニン（ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）（参考文献１４７）；（３）サポニン（ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて、＋ステロール）（参考文献１４８）；（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／もしくは水中油エマルジョンとの組み合わせ（参考文献１４９）；（６）ＳＡＦ（１０％スクアレン、０．４％ Ｔｗｅｅｎ ８０^ＴＭ、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含み、１ミクロン未満のエマルジョンへとマイクロフルイダイズされているかまたはより大きな粒径のエマルジョンを生じるようにボルテックスされている）；（７）Ｒｉｂｉ^ＴＭアジュバントシステム（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）（２％スクアレン；０．２％ Ｔｗｅｅｎ ８０；モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群からの１つ以上の細胞壁成分（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳを含む（Ｄｅｔｏｘ^ＴＭ））；（８）１種以上の無機塩（例えば、アルミニウム塩）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）；ならびに（９）１種以上の無機塩（例えば、アルミニウム塩）＋免疫刺激オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列）。

免疫刺激因子として作用する他の物質が、参考文献８１の第７章に開示される。

水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムアジュバントの使用が、特に好ましく、結合体は、これらの塩に一般的には吸着される（例えば、参考文献９の実施例７および８；参考文献１０の実施例Ｊ）。吸着せずにアルミニウム塩と混合することもまた、可能である（参考文献２７、７６）。リン酸カルシウムが、別の好ましいアジュバントである。結合体は、これらのアジュバントに別個に混合（そして必要に応じて吸着）され得、その後、その結合体は、一緒に混合され得る。または、上記結合体は、一緒に混合され得、その後アジュバントと混合され得る。

本発明に従って使用される組成物のｐＨは、好ましくは６〜８であり、好ましくは約７である。安定なｐＨが、緩衝液の使用によって維持され得る。組成物が水酸化アルミニウム塩を含む場合、ヒスチジン緩衝液（参考文献１５０）を使用することが好ましい。その組成物は、滅菌され、かつ／または発熱物質を含まない。組成物は、ヒトに対して等張性であり得る。

組成物は、保存剤（例えば、チオメルサール、２−フェノキシエタノール）を含んでもよいし、保存剤を含まなくてもよい。本発明の好ましい組成物は、いかなる水銀物質も含まない。例えば、その組成物は、チオメルサールを含まない。

抗原（特に結合体抗原）の間での干渉を防止するために、ポリアニオン性ポリマー（例えば、ポリ−Ｌ−グルタミン酸）（参考文献１５１）を含むことが、可能である。

組成物は、バイアル中にて与えられてもよいし、充填済みシリンジ中で与えられてもよい。そのシリンジは、針を備えていても、備えていなくてもよい。シリンジは、単一用量の上記組成物を含み、一方、バイアルは、単一用量または複数用量を含み得る。注射可能組成物は、通常は、液体溶液または液体懸濁物である。あるいは、その組成物は、注射前に液体ビヒクル中の溶液または懸濁物にするための固体形態（例えば、凍結乾燥形態）で与えられ得る。

組成物は、単位投与形態または複数回投与形態でパッケージングされ得る。複数回投与形態のために、バイアルが、予め充填されたシリンジよりも好ましい。有効な投与体積は、慣用的に確立され得るが、注射のための本組成物の代表的なヒト用量は、体積０．５ｍｌを有する。

組成物が使用前に即時調製され（例えば、成分が凍結乾燥形態で与えられる場合）、キットとして提示される場合、そのキットは、２つのバイアルを含み得るか、または１つの充填済みシリンジと、１つのバイアルを含み得、そのシリンジの内容物は、注射前にそのバイアルの内容物を再活性化するために使用される。血清群Ａ莢膜糖を含む組成物の場合、血清群Ａ糖が、凍結乾燥され得、一方、他の血清群由来の糖が、液体形態で提示され得る。

組成物は、免疫学的に有効な量の髄膜炎菌結合体、ならびに必要な場合には他の成分を含む。「免疫学的に有効な量」によって、単回投与または一連の投与の一部としてその量を個体に投与すると、患者において抗髄膜炎菌防御免疫応答が惹起されることを意味する。この量は、処置される個体の健康および全身状態、処置される個体の分類学的グループ（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、その個体の免疫系が抗体を合成する能力、望まれる防御の程度、そのワクチンの処方、医学的状態についての主治医の判断、および他の関連要因に依存して変動する。その量は、慣用的試験を介して決定され得る比較的広い範囲内にあり、１用量当たりの各髄膜炎菌抗原の代表的量は、血清群１つ当たり（糖に関して測定すると）１μｇ〜２０μｇ（例えば、血清群１つについて２μｇ〜１０μｇ）であることが、予期される。１血清群について約４μｇという用量が好ましい（すなわち、四価混合物において合計１６μｇ）。

組成物中のキャリアタンパク質の総量は、好ましくは、１００μｇ／用量を超えない。例えば、その量は、≦９０μｇ／用量、≦８０μｇ／用量、≦７０μｇ／用量、≦６０μｇ／用量、≦５０μｇ／用量などである。組成物中のキャリアタンパク質の総量は、一般的には、少なくとも１０μｇ／用量である。

（概要）
用語「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」とは、「含む、有する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含する。例えば、Ｘを「含む」組成物は、Ｘのみからなってもよいし、またはさらなる何かを含んでもよい（例えば、Ｘ＋Ｙ）。

数値ｘに関連する用語「約」」とは、例えば、ｘ±１０％を意味する。

用語「実質的に」とは、「完全に」を排除しない。例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まないものであり得る。必要な場合には、用語「実質的に」は、本発明の定義から省略され得る。

（発明を実施するための様式）
（四価Ａ／Ｃ／Ｗ１３５／Ｙ結合体混合物を使用するキャリア抑制の欠如）
血清群Ａ＋Ｃ、Ｃ＋Ｗ＋Ｙ、またはＡ＋Ｃ＋Ｗ＋Ｙについての髄膜炎菌結合体の混合物が、参考文献９および１０において記載されるように調製され得る。望ましい場合には、これらは、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムアジュバントと混合され得る（これもまた、参考文献９および１０において記載される）。これらのワクチンは、キャリアタンパク質として、上記糖に共有結合した、ＣＲＭ１９７またはジフテリアトキソイド（Ｄｔ）のいずれかを有する。

小児科Ｄ−Ｔ−Ｐワクチン接種（Ｄ−Ｔ−ＰａまたはＤ−Ｔ−Ｐｗのうちのいずれか）を受けた患者（Ｄ−Ｔ−Ｐおよび他の抗原を含むワクチン（例えば、Ｄ−Ｔ−Ｐ−Ｈｉｂ四価、Ｄ−Ｔ−Ｐ−ＨＢｓＡｇ四価、Ｄ−Ｔ−Ｐ−Ｈｉｂ−ＨＢｓＡｇ五価、Ｄ−Ｔ−Ｐ−Ｈｉｂ−ＨＢｓＡｇ−ＩＰＶ六価など）を受けた患者を含む）が、Ｄｔキャリアを有する結合体の混合物を受けるために選択される。この結合体四価混合物は、ヒトにおいて免疫原性である（参考文献９、１１、１３）。

小児科Ｈｉｂワクチン接種を（一価Ｈｉｂ（Ｄ−Ｔ−ＰａもしくはＤ−Ｔ−Ｐｗを伴うかまたは伴わない）として；または組み合わせワクチン（例えば、Ｄ−Ｔ−Ｐ−Ｈｉｂ四価、Ｄ−Ｔ−Ｐ−Ｈｉｂ−ＨＢｓＡｇ五価、Ｄ−Ｔ−Ｐ−Ｈｉｂ−ＨＢｓＡｇ−ＩＰＶ六価など）の一部としてのいずれかで）受けた患者が、ＣＲＭ１９７キャリアを有する結合体の混合物を受けるために選択される。

コントロール患者群が、上記の２つの結合体混合物のうちの１つを受けるために選択される。そのコントロール患者は、ジフテリアトキソイドまたはＣＲＭ１９７のいずれも、別個の抗原としてかまたは結合体中のキャリアタンパク質としてのいずれかで以前に受けたことはない。

その四価結合体がその患者において免疫応答を惹起する能力が、評価される。キャリア抑制は、試験群がコントロール患者よりも有意に低い抗髄膜炎菌免疫応答を示す場合に、特に、上記結合体がその患者において有用なＳＢＡ応答を惹起でない場合に、示される。

臨床試験Ｖ５９Ｐ２（１２ヶ月齢〜１６ヶ月齢の６２０人の被験体を用いてフィンランドおよびドイツにおいて行われた）において、５つの処方物を、試験した。そのワクチンは、ＣＲＭ１９７キャリアおよびリン酸アルミニウムアジュバント（参考文献１０）を使用した。各血清群糖の用量（０．５ｍｌ用量当たりの糖質量μｇとして表わす）は、以下の通りであった：

被験体に、０時点で注射を与え、その４週間後に、その被験体のうちの２５％に、そのワクチンの２回の投与を与えた。

患者の血清を、ワクチン投与の１ヵ月後に収集し、各血清群からの髄膜炎菌に対するＳＢＡアッセイにおいて、ヒト補体を使用して試験した。ＳＢＡ力価は、０時点の血清に対して増加する。基準は、≧１：４および≧１：８である。抗莢膜力価（ＧＭＴ）もまた、各血清群について測定した。結果は、下記表１において示される。

従って、上記三価ワクチンおよび四価ワクチンは、両方とも、ヨチヨチ歩きの小児において免疫原性であった。上記結合体は、結合体１つ当たり２．５μｇ程度の低い糖用量で免疫原性である。その免疫応答は、ブースト可能であり、大きなＳＢＡ力価が、２回目の投与の後に増加する。キャリア抑制の証拠は、この試験後において観察されなかった。

（抗Ｄｔ応答の抑制の欠如）
１９９９年からのベルギーの研究（参考文献２６）は、幼児における後天的破傷風免疫が、破傷風トキソイドに結合体化したＨｉｂワクチンの初回経過の受容後に、小児初期まで持続することを示した。従って、その結合体のキャリアタンパク質は、負の免疫学的影響を有した。対照的に、反対の効果が、肺炎球菌結合体ワクチンの研究において観察された（参考文献１５２）。髄膜炎菌結合体がジフテリア免疫に干渉し得る可能性（参考文献１５３）が、ＣＲＭ１９７キャリアに対する髄膜炎菌血清群Ｃ糖の結合体（Ｍｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭ）を使用して、研究された。

出生１年目に免疫された小児を、以下の５つの群に分割した：（１）４回投与のＭｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭ；（２）３回投与のＭｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭ＋１回投与の二価非結合体化Ａ／Ｃ混合物；（３）３回投与のＨＢｓＡｇワクチン、その後、１回投与のＭｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭ；（４）３回投与のＨＢｓＡｇワクチン、その後、１回投与の二価非結合体化Ａ／Ｃ混合物；（５）髄膜炎菌ワクチンを受容しないためのコントロール。すべての小児にはまた、出生後の最初の４ヶ月間に３回投与のジフテリアワクチンを与えたが、就学前のジフテリアブースターは与えなかった。

患者に、４歳時に１回投与のＭｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭを与え、血液をこのＭｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭ注射の前および後（約３０日間後）にサンプリングした。ジフテリア抗体を、ＥＬＬＩＳＡにより測定し、幾何学的平均濃度を評価した。抗体レベル≧０．１ＩＵ／ｍｌである被験体の割合もまた、評価した。結果は、以下の通りであった：

ベースライン抗Ｄｔ力価は、以前にＭｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭを受けた患者においての方が、受けなかった患者よりも高かった（例えば、群１および４を比較する）。単純回帰分析によって、以前のＭｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭ投与回数（群１、２、３、および４について、それぞれ４回投与、３回投与、１回投与、および０回投与）と、（ａ）ワクチン接種前抗Ｄｔ力価および（ｂ）ワクチン接種後抗Ｄｔ力価との間に有意な線形関係が明らかになった。

従って、幼時に４回Ｍｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭ投与を受けた小児において、４歳の時点でジフテリアに対する免疫の持続増加が存在する。さらに、幼時に少なくとも３回Ｍｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭ投与を受けた患者において、Ｍｅｎｊｕｇａｔｅ^ＴＭのブースター投与の後により高い抗Ｄｔ抗体応答に向う傾向が存在する。髄膜炎菌結合体とジフテリア免疫との間の免疫学的干渉の証拠は、見出されなかった。

（二価Ａ／Ｃ結合体混合物は、ＤＴＰとの干渉を示さない）
血清群ＡおよびＣに由来する莢膜糖（参考文献８）の混合物が、以前にＤＴＰワクチンを受けていないニジェールの幼児（５歳〜１１歳）に投与された。小児に、非結合体化糖（各血清群を５０μｇ）または非アジュバント化Ｄｔ結合体化糖（各々４μｇ）のいずれかを、６つの異なるスケジュールで与えた：
（１）４回結合体投与：６週目、１０週目、１４週目、９ヶ月目
（２）３回結合体投与：６週目、１０週目、１４週目
（３）２回結合体投与：１４週目、９ヶ月目
（４）１回結合体投与：１４週目
（５）１回結合体投与：９ヶ月目
（６）１回非結合体投与：９ヶ月目。
それらの小児には、ＤＴＰおよび経口ポリオワクチンを、６週目、１０週目、および１４週目に与え、９ヶ月目にブースターを与えた。髄膜炎菌ワクチンを、これらの既存のワクチンと同時に投与した。既往（ａｎａｍｎｅｓｔｉｃ）応答を評価するために、それらの小児には、２４ヶ月目に非結合体化ワクチンも与えた。

血清殺菌抗体応答を、１８週目（すなわち、３回目のＤＴＰ／ポリオワクチン接種の４週間後）、１０ヶ月目（すなわち、９ヶ月目のＤＴＰ／ポリオブースターの１ヵ月後）、および２４ヶ月目に非結合体化物質を投与した１週間後に測定した。ＳＢＡ力価の≧１２８倍増加を示す患者の割合は、以下の通りであった：

上記６つの群（参考文献８）の間にジフテリアトキソイドに対する抗体応答の差は存在しなかった。

従って、防御抗原として、および上記結合体のキャリアとして、ジフテリアトキソイドを使用することから生じる干渉の証拠は存在しない。例えば、群５における患者は、最初の髄膜炎菌結合体を受ける前の６週間目、１０週間目、および１４週間目にＤＴＰワクチン中にジフテリアトキソイドを受けたが、２４ヶ月目に＞９９％の抗髄膜炎菌ＳＢＡ応答を示した。

（抗ジフテリア応答に対する負の影響はない）
上記のように、ＤＴＰワクチンと同時に髄膜炎菌結合体ワクチンを受けた患者は、ジフテリアトキソイドに対する免疫応答の低下を示さなかった。別の研究において、髄膜炎菌結合体とＤＴＰとが、別々の時点で投与された。２ヶ月齢、３ヶ月齢、および４ヶ月齢における３回投与ＤＴＰスケジュールの後に、Ｄｔ結合体化糖または非結合体化糖のいずれかとともに二価Ａ／Ｃワクチンの１回投与を行った。ジフテリアトキソイドに対する免疫応答を、ＥＬＩＳＡによって測定した。ＧＭ力価は、以下の通りであった：

上記の非結合体化糖は、いかなる抗Ｄｔ応答も引き起こさなかった（驚くべきことではない）が、上記結合体化糖は、強力な抗ＤＴ応答を生じた。従って、これらの結合体の投与は、未刺激患者において抗ジフテリア免疫を提供し得るか、またはＤｔブースターの代理をし得る。

本発明は、例示としてのみ上記に記載されているが、本発明の範囲および精神の範囲内に残りながら改変がなされ得ることが、理解される。

参考文献（これらの内容は、本明細書中に参考として援用される）

Claims (24)

1. 髄膜炎菌により引き起こされる疾患に対してヒト患者を免疫するための組成物であって、該組成物は、
   （ａ）（ｉ）血清群Ａ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ＣＲＭ１９７との結合体；
   （ｂ）（ｉ）血清群Ｃ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ＣＲＭ１９７との結合体；
   （ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ＣＲＭ１９７との結合体；および
   （ｄ）（ｉ）血清群Ｙ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ＣＲＭ１９７との結合体；
   の４つすべてを含み、
   該患者は、該患者の出生から１年以内に、（ｉ）Ｂ型インフルエンザ菌または肺炎連鎖球菌の莢膜糖と（ｉｉ）ＣＲＭ１９７もしくはジフテリアトキソイドとの結合体で予備免疫されており、該患者は、該組成物の投与の少なくとも６ヶ月前に予備免疫されていることを特徴とする、組成物。
2. 髄膜炎菌により引き起こされる疾患に対してヒト患者を免疫するための医薬の製造における、
   （ａ）（ｉ）血清群Ａ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ＣＲＭ１９７との結合体；（ｂ）（ｉ）血清群Ｃ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ＣＲＭ１９７との結合体；（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ＣＲＭ１９７との結合体；および（ｄ）（ｉ）血清群Ｙ 髄膜炎菌の莢膜糖と（ｉｉ）ＣＲＭ１９７との結合体；の４つすべての使用であって、
   該患者は、該患者の出生から１年以内に、（ｉ）Ｂ型インフルエンザ菌または肺炎連鎖球菌の莢膜糖と（ｉｉ）ＣＲＭ１９７もしくはジフテリアトキソイドとの結合体で予備免疫されており、該患者は、該医薬での該患者の免疫の少なくとも６ヶ月前に予備免疫されていることを特徴とする、使用。
3. 請求項２に記載の使用であって、前記患者は、ジフテリアトキソイドを含むワクチンで予備免疫されていることを特徴とする、使用。
4. 請求項２または３に記載の使用であって、前記患者は、Ｈｉｂ結合体を含むワクチンで予備免疫されていることを特徴とする、使用。
5. 請求項２〜４のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記患者は、少なくとも１つの肺炎球菌結合体を含むワクチンで予備免疫されていることを特徴とする、使用。
6. 請求項２〜５のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記髄膜炎菌結合体（ａ）〜（ｄ）中の糖は、髄膜炎菌において見出されるネイティブ莢膜糖よりも短い、使用。
7. 請求項２〜６のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記髄膜炎菌結合体は、アジピン酸リンカーを含む、使用。
8. 請求項７に記載の使用であって、６０μｇ以下のＣＲＭ１９７キャリアを含む、使用。
9. 請求項２〜８のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記医薬は、肺炎連鎖球菌由来の結合体化莢膜糖をさらに含む、使用。
10. 請求項２〜９のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記医薬は、Ｂ型インフルエンザ菌由来の結合体化莢膜糖をさらに含む、使用。
11. 請求項２〜１０のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記医薬は、血清群Ｂの髄膜炎菌由来のタンパク質抗原をさらに含む、使用。
12. 請求項２〜１１のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記医薬は、水酸化アルミニウムアジュバントおよび／またはリン酸アルミニウムアジュバントを含む、使用。
13. 請求項２〜１２のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記髄膜炎菌により引き起こされる疾患は、髄膜炎菌性髄膜炎である、使用。
14. 請求項１に記載の組成物であって、前記患者は、ジフテリアトキソイドを含むワクチンで予備免疫されていることを特徴とする、組成物。
15. 請求項１および１４のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記患者は、Ｈｉｂ結合体を含むワクチンで予備免疫されていることを特徴とする、組成物。
16. 請求項１、１４および１５のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記患者は、少なくとも１つの肺炎球菌結合体を含むワクチンで予備免疫されていることを特徴とする、組成物。
17. 請求項１、１４、１５および１６のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記髄膜炎菌結合体（ａ）〜（ｄ）中の糖は、髄膜炎菌において見出されるネイティブ莢膜糖よりも短い、組成物。
18. 請求項１、１４、１５、１６および１７のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記髄膜炎菌結合体は、アジピン酸リンカーを含む、組成物。
19. 請求項１８に記載の組成物であって、６０μｇ以下のＣＲＭ１９７キャリアを含む、組成物。
20. 請求項１および１４〜１９のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記組成物は、肺炎連鎖球菌由来の結合体化莢膜糖をさらに含む、組成物。
21. 請求項１および１４〜２０のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記組成物は、Ｂ型インフルエンザ菌由来の結合体化莢膜糖をさらに含む、組成物。
22. 請求項１および１４〜２１のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記組成物は、血清群Ｂの髄膜炎菌由来のタンパク質抗原をさらに含む、組成物。
23. 請求項１および１４〜２２のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記組成物は、水酸化アルミニウムアジュバントおよび／またはリン酸アルミニウムアジュバントを含む、組成物。
24. 請求項１および１４〜２３のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記髄膜炎菌により引き起こされる疾患は、髄膜炎菌性髄膜炎である、組成物。