JP5628797B2 - 人参の花または人参の種子抽出物を含有する皮膚外用剤組成物 - Google Patents
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Description
乾燥した人参の花1kgに70%(v/v)エタノール10Lを入れ、常温で一日間放置して抽出した。同工程を2回繰り返して抽出液を得て、得られた抽出液をろ過した後、そのろ過液を真空濃縮機で2Lに濃縮した。しかる後、同量のエーテルを添加してろ過液からエーテル層を除去することでクロロフィルを除去した。同工程を3回繰り返した後、残った抽出液を真空濃縮機で濃縮して乾固物150gを得た。
乾燥した人参の種子1kgを粉砕した後、ヘキサン10Lを入れ、常温で一日間放置して抽出した。同工程を3回繰り返して抽出液を得て、抽出液をろ過した後、そのろ過液を真空濃縮機で濃縮して人参の種子油120gを得た。このようにして得た抽出物油に水酸化ナトリウムを添加して遊離脂肪酸を除去し、蒸留水で3回水洗した後、カーボンを使用して脱色させてから、100℃の真空状態で不活性ガスにて異臭成分を除去して人参の種子油100gを得た。
乾燥した人参の種子1kgを粉砕した後、ヘキサン10Lを入れ、常温で一日間放置して抽出した。同工程を3回繰り返して人参の種子から油を除去し、油が除去されて残った人参の種子粕に水10Lを入れ、常温で一日間放置して抽出した。同工程を3回繰り返して抽出液を得て、抽出液をろ過した後、そのろ過液を真空濃縮機で濃縮して乾固物100gを得た。
紫外線(UV)照射によって細胞から発生する活性酸素種(ROS)を除去する能力を比較する実験を通じて、人参の花抽出物と人参の種子抽出物の抗酸化効果を調査した。
人参の花抽出物の陽性対照群として一般に抗酸化効果を比較するのに使用されるビタミンC(Sigma Co.社製)を使用した。また試験物質を処理していない群を対照群として使用した。ヒトHaCaT角質形成細胞断層培養系(P Boukamp、German Cancer Research Center、Heidelberg.Germany)を紫外線(UVB 30mJ/cm2)で処理した後、実施例1に従って調製された抽出物10ppm、50ppm、100ppmでそれぞれ処理した。しかる後、ジクロロジヒドロフルオロセイン・ジアセテート(DCFH−DA;Molecular Probes、Inc)を蛍光プレートリーダで測定した。紫外線で処理していない対照群を100とし、これに対する割合でROS生成の割合を計算した。その結果を表1と図1に示した。
ヒトの正常線維芽細胞(自体一次培養)を24時間培養した後、実施例1の人参の花抽出物、実施例2に従って調製された人参の種子油と実施例3の人参の種子粕抽出物とビタミンEをそれぞれ濃度別に処理し、12時間後に陽性対照群であるH2O2(最終濃度10−3M)を処理した後、電気泳動法にて染色した結果を蛍光燎微鏡で観察した。このとき、イメージアナライザーであるKOMET 3.1(Kinetic Imaging、England)を使用して25個の各細胞においてDNA切断の結果から示されたテール(tail)の長さ(μm)を分析し、その結果を下表3及び図2に示した。
ヒト線維芽細胞を105個の濃度で12穴平板培養器にて培養した後、実施例1の人参の花抽出物1ppm、10ppm、50ppmを含む培地、または実施例2の人参の種子油、または実施例3の人参の種子粕抽出物1ppm、10ppmを含む培地と表4のように交換した。培養後三日目に細胞を収穫し、ELISA方法を用いて生成されたI型プロコラーゲンの量を定量した。陽性対照群としてTGF−β(ヒト形質転換因子−β1、Roche Co.)を使用した。その結果は、人参の花抽出物と人参の種子抽出物を含んでいない対照群を0にし、陽性対照群を100にして測定した値との比較値として算出した。これを表4と図3に示した。
ヒト線維芽細胞を105個の濃度で12穴平板培養器にて培養してから紫外線Bを40mJ/cm2で照射した後、実施例1の人参の花抽出物1ppm、10ppm及び50ppmを含む培地と交換した。培養後二日目に細胞を収穫してELISA方法を用いて生成されたマトリックスメタロプロテイナーゼ1(MMP−1)の量を定量した。その結果は、試験物質を含まない紫外線を照射していない対照群を100にして測定した値との比較値として算出し、陽性対照群は、レチノイン酸(RA、Sigma.Co.)を使用した。これを表5及び図4に示した。
30〜50歳の顔面しわのある試験対象者120人に対し、下表6に表した組成を有する実施例1の人参の花抽出物を含有する栄養クリーム(実施例4)及び実施例2の人参の種子油と実施例3の人参の種子粕抽出物を含有する栄養クリーム(実施例5)、人参の花抽出物と人参の種子抽出物を含有していないことを除いては、上記実施例4、5と同じ組成物(比較例1)の栄養クリームを調製した後、これらの皮膚しわ改善効果を比較評価した(単位:重量%)。
上記表6の組成にて調製した実施例4、5及び比較例1の皮膚弾力改善効果を測定した。30歳以上の女性60人を対象に3つのグループに分けて、各組に上記実施例4または5及び比較例1の栄養クリームを毎日2回ずつ12週間顔面に塗布した後、皮膚弾力測定器(Cutometer SEM 575、C+K Electronic Co.社製、Germany)を利用して皮膚弾力を測定した。その結果を計算した結果、比較例1を使用した部位の弾力効果は、0.21±0.14(平均±標準偏差)を示したのに対し、実施例4を使用した部位の弾力効果は、0.30±0.10、実施例5を使用した部位の弾力効果は、0.29±0.08を示し、優れた皮膚弾力改善効果を示した。上記結果値は、皮膚弾力測定器の皮膚粘弾性(viscoelasticity)の性質のことを意味する。
実施例1の人参の花抽出物及び実施例2の人参の種子油と実施例3の人参の種子粕抽出物のメラニン生成抑制効果を調べるために鼠の色素細胞を利用した。
実施例1の人参の花抽出物、実施例2の人参の種子油と実施例3の人参の種子粕抽出物のヒト皮膚に対する美白効果を調べるために下記のような実験を施した。
角質形成細胞及びヒト皮膚細胞株(HaCaT)の分化時に生成される周辺帯(CE)の量を測定して、本発明による実施例1の人参の花抽出物、実施例2の人参の種子油及び実施例3の人参の種子粕抽出物の細胞分化促進効果を調べた。
ヒト角質形成細胞を96穴型細胞培養プレートの各ウェルに5×104個を入れて24時間付着させた。付着させた皮膚細胞株に試験物質を処理した後、二日経過した後、培地を除去し、−20℃の冷蔵庫に保管した。細胞の凍結−解凍を2回繰り返し、細胞を破壊させた後、−20℃で保管したアセトン:エタノール(1:1、v/v)を処理し、4℃で30分間放置して細胞を固定させた。その後、室温で放置して有機溶媒を蒸発させ、ブロッキング(1%ウシ血清アルブミン)、トランスグルタミナーゼ抗体(1次抗体)、HRPアンチ−マウス抗体(二次抗体)を処理し、発色はo−フェニレンジアミン(OPD)を添加して行った。発現量は490nmで吸光度を測定し、補正は630nmでバックグラウンドを測定して行った。低カルシウム(0.03mM)処理群と高カルシウム(1.2mM)処理群とをそれぞれ陰性/陽性対照群にし、低カルシウム濃度に実施例1の人参の花抽出物1ppm、10ppm、100ppmを添加して実施した試験結果を、下表10に表した。
皮膚乾燥症がある50〜60代の成人男女75人を3つのグループに分け、各組に実施例4、実施例5と比較例1を毎日2回ずつ4週間顔面に塗布した。塗布開始前と、塗布後1週、2週、4週経過した時点、及び塗布を中止して2週経過(総6週経過)した後に、恒温、恒湿条件(24℃、相対湿度40%)下にコニオメーターで皮膚水分量を測定し、その結果を、下表11に表した。試験結果は、試験開始直前に測定したコニオメーターの値を基準にし、一定期間措置した後の測定値の増加分を百分率で表したものである。
脂性肌緩和効果を測定するために、20〜45歳の脂性肌女性30人の額部分に、そのうち10人に対しては実施例4(人参の花抽出物含有)を、他の10人に対しては実施例5(人参の種子油と人参の種子粕抽出物含有)を、また他の10人に対しては比較例1を朝、夕方の1日2回塗布して使用させた後、1週、2週、3週、及び4週後に皮膚の皮脂分測定器(Sebumeter SM810)を利用して皮膚の皮脂分泌量を測定した。実験は20℃、相対湿度20%の条件下に行われ、下表12にその測定結果を表した。結果は被験者10人の平均値で示した。脂性肌の場合、測定値が220以上であり、正常肌の場合、100ないし220の間である。
ヒト線維芽細胞を105個の濃度で12穴平板培養器にて培養してからLPS処理を施した後、実施例1の人参の花抽出物を1ppm、10ppm及び100ppm含む培地、実施例2の人参の種子油と実施例3の人参の種子粕抽出物を1ppm、50ppm含む培地に入れ替えした。培養後二日目に細胞を収穫してウエスタンプロット方法にて生成されたCOX−2の量を定量した。対照群を100にし、濃度計で測定した値との比較値を下表13に表した。このとき、対照群は実施例1の人参の花抽出物、実施例2の人参の種子油及び実施例3の人参の種子粕抽出物を処理せずに培養した未処理群である。
実験への参加者は、平素ニキビを含めた皮膚トラブルのひどい女性15人であって、恒温・恒湿室でせっけんでの洗顔後30分間適応させ、ニキビの個数及び炎症が伴われた個数を比較して皮膚トラブルの程度を測定した。
本発明の人参の花抽出物を含有する組成物に対し、皮膚での血液循環促進効果を評価するために、レーザードプラー灌流画像(LDPI)を利用して皮膚での血液循環位を測定した。LDPIは皮膚での血液循環を測定する機器として広く知られており、現在も使用されている機器であり、皮膚の毛細管に対して血液の速度や量だけでなく小動脈と小静脈での血流まで測定することができる非常に敏感な機器である。
上記実施例1に従い調製された人参の花抽出物、実施例2と3に従い調製された人参の種子油及び人参の種子粕抽出物を含有する組成物を、下表16の組成どおり混合して調製した。
初期脱毛現象のある被験者30人を対象にして脱毛防止効果に関する実験を16週間施した。上記実施例6、7、8、及び比較例2の組成物を1日1回ずつ16週間使用させてから16週が経過した後、髪を洗う際に脱け毛を収集してその本数を数え、その結果を表17に表した。
上記実施例1(人参の花抽出物)、実施例2(人参の種子油)及び実施例3(人参の種子粕抽出物)がピチロスポルム・オバレ(Pityrosporum ovale)(ATCC 12087)を抑制する効果があるか否かを調べるために液体培地希釈法を用いて実験を行った。このとき、二重希釈を行ってから、32℃で24時間及び48時間定置培養した後、その懸濁された程度により菌の増殖有無を判断し、菌の増殖がない最小濃度を最小阻害濃度(MIC)と決定した。なお、混合液が不透明で菌の増殖有無を判断しにくい場合は、顕微鏡観察を通じて確認した。その結果を下表18に表した。
毛髪試料0.1gをシャンプー0.1gで洗浄してから流れる水にきれいに洗った後、毛髪試料を25℃、50%湿度条件下に6時間乾燥させた。しかる後、上記表16の実施例6、7、8、及び比較例2の組成物をそれぞれ0.1gずつ塗布し、次のような方法にてゴニオフォトメーターを使用して光沢を測定した。
ヒトの骨髄中間葉幹細胞(hBM−MSCs)をロンザ社(Lonza、Inc.Walkersbille、MD、USA)から購入し、ロンザ社の指針書によって培養した。脂肪細胞分化は、インドメタシンの代わりにトログリタゾン(TRO)を使用して中間葉幹細胞の脂肪細胞分化を誘導したことを除いては、ロンザ社で勧奨する方法にて行った。具体的に、中間葉幹細胞の培養液にインシュリン1g/ml、デキサメタゾン(DEXA)1M、イソブチルメチルキサンチン(IBX)0.5mM及びTRO 2Mを入れて培養して、中間葉幹細胞を脂肪細胞に分化させた。実験群の場合、脂肪細胞分化への誘導時に実施例1の人参の花抽出物、実施例2の人参の種子油、実施例3の人参の種子粕抽出物、トログリタゾン、及びグリベンクラミド(Sigma−aldrich、U.S.Aから購入)をそれぞれ10M処理後(十日間二日置きに処理)、各10Mを培地に添加した。中間葉幹細胞の脂肪細胞分化を誘導して十日後、細胞培養液を除去してPBSで細胞を洗浄してから、10%ホルマリン/PBS溶液0.2ml/cm2を使用して細胞を10分間固定させた。固定された細胞を60%イソプロパノール溶液0.5ml/cm2で1回洗浄し、オイルレッドO(Oil Red O)を60%イソプロパノールに溶かしてなる染色液を0.2ml/cm2で10分間脂肪細胞内の脂質体を染色した。染色されたオイルレッドOを100%イソプロパノール溶液で溶出させた後、500nmの波長で吸光度を測定した。その結果を下表20に表した。各データ値は、IDX(−)陰性対照群で補正した。
Claims (32)
- 人参の種子粕抽出物を有効成分として含有する皮膚外用剤組成物であって、該人参がPanax ginseng C.A. Meyerである、皮膚外用剤組成物。
- 人参の花抽出物及び人参の種子油のうちの1つ以上をさらに含む、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 前記人参の花抽出物は、皮膚外用剤組成物の総重量に対して0.001〜10重量%の濃度で含有される、請求項2に記載の皮膚外用剤組成物。
- 前記人参の種子粕抽出物は、皮膚外用剤組成物の総重量に対して0.001〜10重量%の濃度で含有される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 皮膚損傷を抑制して皮膚を保護するために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 酸化または紫外線による皮膚損傷を減少させることによって皮膚を保護するための、請求項5に記載の皮膚外用剤組成物。
- 前記皮膚は、頭皮または毛髪である、請求項5に記載の皮膚外用剤組成物。
- 皮膚老化を予防または改善するために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 酸化または紫外線による皮膚損傷抑制、コラーゲン生成促進またはマトリックスメタロプロテイナーゼ1(MMP−1)の生合成阻害によって皮膚の老化を抑制するための、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 皮膚しわを予防または改善させるために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- コラーゲン生成促進またはマトリックスメタロプロテイナーゼ1(MMP−1)の生合成阻害によって皮膚しわを予防または改善させる、請求項10に記載の皮膚外用剤組成物。
- 皮膚弾力を改善させるために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 皮膚美白のために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- メラニン生成抑制または皮膚に沈着された色素の美白化によって皮膚美白を遂行する、請求項13に記載の皮膚外用剤組成物。
- 皮膚保湿のために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 角質形成細胞の分化促進またはトランスグルタミナーゼ発現促進によって皮膚水分を保持する、請求項15に記載の皮膚外用剤組成物。
- アトピーまたは乾癬を含む皮膚乾燥疾患を予防または改善するために使用される、請求項15に記載の皮膚外用剤組成物。
- 皮膚角質除去のために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 皮膚の皮脂調節のために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 皮脂の分泌を抑制することによって皮膚の皮脂を調節する、請求項19に記載の皮膚外用剤組成物。
- 炎症の予防または改善、または刺激緩和のために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 前記皮膚は頭皮である、請求項21に記載の皮膚外用剤組成物。
- ニキビを含む皮膚トラブルを予防または改善するために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 前記皮膚は頭皮である、請求項23に記載の皮膚外用剤組成物。
- 皮膚血色を改善するために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 前記皮膚は、頭皮または毛髪である、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 脱毛予防のために使用される、請求項26に記載の皮膚外用剤組成物。
- 抗ふけのために使用される、請求項26に記載の皮膚外用剤組成物。
- 毛髪の光沢または柔らかさを改善するために使用される、請求項26に記載の皮膚外用剤組成物。
- 顔またはボディーのボリューム及び弾力を改善するために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
- 脂肪細胞の分化促進によって顔またはボディーのボリューム及び弾力を改善する、請求項30に記載の皮膚外用剤組成物。
- 顔またはボディーラインを改善するために使用される、請求項1に記載の皮膚外用剤組成物。
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