KR101140039B1

KR101140039B1 - 진세노사이드 ｆ1 또는 화합물 ｋ를 함유하는 피부외용제조성물

Info

Publication number: KR101140039B1
Application number: KR1020040004714A
Authority: KR
Inventors: 김수남; 강병영; 김수정; 이소희; 최규호; 이병곤; 김한곤
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2004-01-26
Filing date: 2004-01-26
Publication date: 2012-05-02
Also published as: KR20050076911A; US20080045467A1; JP2007518795A; WO2005070436A1; CN1905886A; CN1905886B

Abstract

본 발명은 인삼의 주요대사 산물인 진세노사이드(Ginsenoside) F1 (20-O-β-D-글루코피라노실-20(S)-프로토파낙사트리올) 또는 화합물 K(20-O-β-D-글루코피라노실-20(S)-프로토파낙사다이올)를 유효성분으로 하는 젤라티네이즈의 생합성억제제; 및 이를 함유하는 우수한 표피진피경계부 분해억제 및 생성촉진효과와 보호효과를 갖는 피부노화방지용 화장료 및 의약료 조성물에 관한 것이다.

진세노사이드 F1 * 20-O-β-D-글루코피라노실-20(S)-프로토파낙사트리올 * 화합물 K * 20-O-β-D-글루코피라노실-20(S)-프로토파낙사다이올 * 표피진피경계부 * 라미닌10/11 * 피부노화방지 * 주름개선 * 탄력개선

Description

진세노사이드 Ｆ1 또는 화합물 Ｋ를 함유하는 피부외용제 조성물{A composition that contains ginsenoside F1 and/or Compound K for skin external application}

본 발명은 인삼의 주요대사 산물인 진세노사이드(Ginsenoside) F1 (20-O-β-D-글루코피라노실-20(S)-프로토파낙사트리올; 이하‘진세노사이드 F1’이라한다) 또는 화합물 K(20-O-β-D-글루코피라노실-20(S)-프로토파낙사다이올; 이하 ‘화합물 K’라 한다)를 주요 유효성분으로 하는 젤라티네이즈 생합성 억제제; 및 이를 포함하는 표피와 진피의 경계부(이하,‘표피진피경계부’라 한다)분해억제 및 생성촉진효과가 우수한 피부노화방지용 화장료 및 의약료 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤, 에센스 또는 피부 점착타입 화장료의 제형을 갖는 형태로 제조될 수 있으며, 피부의 표피진피경계부 분해억제 및 생성촉진을 통해 피부의 노화를 지연시키고, 노화의 제반 증상들을 방지, 개선시킬 수 있는 안전하고 유효한 외용제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 제기관을 온도 및 습도 변화와 자 외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 하고 있다. 그러나, 외부로부터 받는 과도한 물리적, 화학적 자극, 자외선, 스트레스 및 영양결핍등은 피부의 정상기능을 저하시키고 탄력손실, 각질화, 주름생성 등의 피부노화현상을 촉진시키게 되는데, 특히 자외선에 의해 표피진피경계부는 심하게 손상을 받는다.

사람의 피부에서 노화에 따른 변화에 관하여 검토한 결과, 자외선 노출부 피부에서는 경계부가 분해되어 여러겹이 되는 다중화, 끊어지는 단열 등의 표피진피경계부의 구조변화가 20대후반부터 이미 일어나고 있었다. 또한, 자외선 B의 장기조사로 유도된 생쥐 주름모델을 사용한 연구에서는 자외선 B의 조사에 의해 표피에서 생성된 젤라티네이즈가 표피진피경계부의 손상, 진피의 손상, 그리고 주름의 형성을 야기할 가능성이 있다는 것이 밝혀졌다. 단, 자외선을 많이 받지 않은 비노출부 피부에서는 이러한 변화가 고령인 경우에도 대부분 관찰되지 않았다. 그러므로, 사람의 자외선 노출부 피부의 표피에서는 젤라티네이즈(gelatinase, Matrix Metalloproteinase-2(MMP-2), Matrix Metalloproteinase-9(MMP-9))의 생성이 유도되어, 표피진피경계부의 상해에 관여되는 것으로 보인다.

젤라티네이즈(MMP-2,-9)는 표피진피경계부 구성성분인 4형 콜라겐, 7형 콜라겐 및 기타 세포외 기질 성분을 분해하는 효소이다. 젤라틴 자이모그라피법(Gelatin zymography) 및 효소면역법(ELISA)으로 분석한 결과, MMP-2와 MMP-9 모두가 자외선 노출부 표피 중에서 검출되었다. 또한, 이마의 동결피부에서는 피부 중의 젤라티네이즈 활성이 표피기저층과 유극층 부근에 존재했으며, 안면 등의 자외선 노출부 피부의 표피에서도 젤라티네이즈가 검출되었다. 따라서 자외선이 표피기저세포에서의 젤라티네이즈 생성을 유도하고, 그 일부가 진피경계부의 파괴에 작용하며, 나머지가 표피까지 도달한다는 사실을 예상할 수 있었다.

생쥐에 자외선을 장기조사해서 제작한 주름모델에 있어서 주름 형성기전에 관해 검토한 결과, 자외선 B를 장기조사한 피부에서는 젤라티네이즈 활성이 표피 전층에서 검출되었다. 표피진피경계부 상해는 자외선 B조사 5주째에서 관찰되기 시작하여, 7주째, 10주째에서 그 정도가 높아졌다. 특히, 10주째에는 진피경계부의 단열과 일부에서의 다중화가 관찰되었다. 또한, 진피유두부의 콜라겐섬유에서는 자외선 B 장기조사에 의해 섬유밀도의 저하가 관찰되었다. 따라서, 유도된 젤라티네이즈가 표피진피경계부 상해와 유두진피의 콜라겐분해에 관여할 가능성이 시사되었다(제 96회 FJ세미나집 12-15, 2002).

표피진피경계부가 손상되면, 경계부 편평화, 다중화, 단열 등이 일어나서 주름이 생성되고 피부가 늘어지며 쉽게 상처가 생길 가능성이 높아지고, 본연의 장벽(barrier) 기능이 상실되면, 외부환경의 오염물질을 표피진피경계부에서 걸러주지 못하기 때문에 유해물질이 진피까지 침투할 가능성이 높아져서 피부가 쉽게 손상될 수 있다. 손상된 표피진피경계부를 회복시키거나 건강한 상태로 유지하려면, 먼저 그 구성성분들이 제대로 유지될 수 있게 해야 한다. 연령이 증가함에 따라 생합성이 줄어든다고 알려진 성분은 4형 콜라겐, 7형 콜라겐, 라미닌 10/11 이고, 변화가 없는 것은 라미닌 5, 생합성이 늘어나는 것은 분해에 관련된 효소인 젤라티네이즈(MMP-2, MMP-9)이다(Lavker 등 J. Invest. Derm. 1979, 73:59-65, Pouliot등 Exp. Dermatol. 2002, 11:387-397).

이러한 자외선이나 외부 스트레스에 의한 피부노화현상을 방지하고 보다 건강하고 탄력있는 피부를 유지하기 위하여 종래 각종 동물, 식물, 미생물 등으로부터 얻은 생리활성물질들이 강화된 화장품을 사용함으로써 피부의 고유기능을 유지시키고 피부세포를 활성화시켜 피부노화를 효과적으로 억제하기 위한 노력이 있었다.

화장품 원료로는 피부부작용을 유발하지 않으면서 피부노화방지효과를 갖는 것이 적당하며, 이 중 인삼추출물에 대한 관심은 매우 높아 꾸준한 연구가 진행되고 있다. 그간의 인삼추출물에 대한 연구방향을 살펴보면, 인삼추출물(ginseng extract)에서 인삼 사포닌(ginseng saponin)의 추출, 인삼 어글리콘(ginseng aglycon)의 제조 및 인삼 사포닌의 정제를 통해 인체내부에서의 주요 대사산물인 진세노사이드 F1 또는 화합물 K를 제조, 분리 정제하는 방향으로 전개되었다.

인삼사포닌은 담마란(dammaran) 타입의 트리테르펜(triterpene)인 비당부의 R1, R2, R3 위치의 알코올성 OH기에 글루코스(glucose), 람노스(rhamnose), 자일로스(xylose) 및 아라비노스(arabinose)와 같은 당류가 에테르결합된 구조를 가지며, 현재까지 인삼에서 총 29종이 밝혀졌다. 상기 인삼 사포닌의 각 성분은 1964년 Shibata가 인삼에 함유된 배당체란 뜻으로 진세노사이드(ginsenoside)라 명명하였으며, 박층크로마토그래피(TLC)에서 분리된 이동거리 순으로 올레아닌(Oleamine)계 사포닌인 진세노사이드-Ro와 진세노사이드-Ra, -Rb1, -Rb2, -Rc, -Rd, -Re, -Rf, -Rg1, -Rg2, -Rg3 및 Rh등으로 명명하였다.

이러한 인삼 사포닌은 750여종의 식물에 함유된 다른 식물의 사포닌과는 화 학구조가 상이할 뿐 아니라 약리효능도 다른 것으로 밝혀졌다. 특히 인삼사포닌은 약성이 매우 온화하고 과량투여에 의한 독성이 없을 뿐만 아니라 용혈작용도 거의 없다는 것이 밝혀졌다. 또한, 인삼사포닌을 노화억제제품의 원료로 응용하기 위하여, 인삼 사포닌의 효능을 유지하고, 특히 피부 투과성을 증가시킨 생물전환(bioconversion)된 인삼 어글리콘(aglycon)의 피부에서의 효능이 확인되었다.

상기한 인삼추출물 및 인삼 사포닌을 이용한 사례로써, 화장료(미국특허 제5565207호, 제5567419호, 제5578312호, 제5663160호, 제5626868호, 제5753242호, 제5747300호, 제5853705호, 제6027728호, 제6063366호, 제6221372호, 및 제6228378호), 의약원료(미국특허 제5569459호, 제5571516호, 제5587167호, 제5674488호, 제5665393호, 제5629316호, 제5776460호, 제5739165호, 제5916555호, 제6071521호, 제6083512호, 및 제6255313호) 및 분리, 정제기술(미국특허 제5591611호, 제5591612호, 제5736380호, 제5789392호, 제5780620호, 제5922580호, 제5935636호, 제6132726호, 제6156817호, 및 제6207164호)등에 관한 많은 연구결과가 보고 되었다.

그러나, 인삼 사포닌은 담마란 타입에 R1, R2 및 R3위치의 알코올성 OH기에 당류가 에테르결합으로 연결된 구조를 가지고 있어 친수성이 크며, 분자량이 커짐에 따라 피부 투과성 및 흡수성이 낮아지고, 인삼 사포닌 자체의 친수성 성질 때문에 피부의 각질층을 통과하지 못하여 인삼사포닌이 피부내부로 유입되기 어려운 문제점이 있었다. 한편, 최근에는 사포닌의 대사물에 관한 연구가 진행되면서, 사포 닌 자체보다는 사포닌이 장내세균에 의해 분해된 장내세균대사물이 인삼 사포닌의 효능을 나타내는 활성본체임이 시사되고 있으며, 또한 인삼의 사포닌 성분 중 어글리콘에 당(글루코스)이 하나 붙은 구조로 이루어진 진세노사이드 Rh1, Rh2 및 F1과 화합물 K등이 암세포증식 억제작용, 종양증식억제작용, 항암제의 항암활성 증대작용 등의 약리작용이 있는 것으로 알려지고 있다.

따라서, 인삼사포닌으로부터 당의 일부를 제거하는 것에 의해 얻은 진세노사이드 F1 및 화합물 K를 피부에 효과적으로 도입시키기 위한 제형화 연구가 행해졌고 이로 인한 세포증식효과, 콜라겐생합성효과등의 피부노화방지효과가 증명되었다(한국공개특허 제2003-0060017호, 제2003-0060018호).

한편, 표피진피경계부에 대한 특허들을 살펴보면,“노화방지용 화장료조성물 (한국공개특허 제2003-0066912호)”에서 산마황추출물,“피부 기저막 형성 촉진제, 인공 피부 형성 촉진제 및 인공피부의 제조 방법 (한국공개특허 제2002-0019920호)”,“라미닌-5 생성 촉진제 및 인테그린-α6β4 생성 촉진제를 함유하는 조성물 (일본공개특허 제2003-226655호)",“피부기저막 부활용조성물 (일본공개특허 제2003-183121호, 제2002-338460호)”, “피부기저막형성 촉진제, 인공피부 형성촉진제 및 인공피부의 제조방법 (일본공개특허 제2001-269398호)”, “라미닌-5 및 기저막 구조의 형성 (일본공개특허 제2000-513220호)" 등이 공개되어 있다. 즉 산마황추출물, 코메누카기름, 페닐프로파노이드 등을 표피진피경계부 재생용으로 사용하였다. 그러나 인삼 성분들에 대해서는 표피진피경계부에 대한 분해억제 및 생성촉진 효능과 피부주름 개선, 탄력개선의 용도로 알려진 바가 전혀 없다.

이러한 상황에서 본 발명자들은 피부노화에 영향을 끼치는 여러 요인들을 효과적으로 통제하는 방법을 연구하였고, 인삼 진세노사이드 F1 또는 화합물 K를 함유하는 외용제를 사용할 경우, 자연노화와 광노화에 의해 발생하는 표피진피경계부의 변성, 단열, 다중화 등의 변화를 막거나 회복시켜줄 수 있음을 발견하였다. 즉, 진세노사이드 F1과 화합물 K의 표피진피경계부 분해억제 및 생성촉진 작용은 표피와 진피의 결합력을 강화시킬 수 있으므로, 이러한 성분을 포함함으로써 피부노화방지용 화장료 및 의약료를 제공할 수 있음을 알게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 진세노사이드 F1과 화합물 K를 함유하는 피부노화방지용 외용제를 제공하는 것이다. 또한 본 발명은 상기 진세노사이드 F1 및 화합물 K를 이용하여 피부의 표피진피경계부의 분해를 억제하고 표피와 진피의 결합력을 강화시켜 피부노화를 방지할 수 있도록 하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 진세노사이드 F1, 화합물 K, 또는 이들의 혼합물을 함유하는 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명은 진세노사이드 F1 및 화합물 K 중 적어도 1종 이상을 함유하는 젤라티네이즈 생합성 억제제를 제공한다. 상기 젤라티네이즈는 바람직하게는 MMP-2 또는 MMP-9이다.

본 발명에 의한 상기 젤라티네이즈 억제제를 함유하는 외용제는 피부에 사용할 경우, 피부의 표피진피경계부를 보호할 수 있다. 상기 피부의 표피진피경계부의 보호 효과에 의하여 피부노화방지 및 주름개선의 효과를 얻을 수 있으며, 피부탄력 증진을 이룰 수 있다.

이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명에서 진세노사이드 F1 또는 화합물 K는 억제제 또는 조성물 총중량에 대하여 0.001~10중량%가 함유될 수 있다. 바람직하게는, 0.01~5중량%의 양으로 함유되는 것이 좋다.

본 발명에 사용된 진세노사이드 F1 및 화합물 K의 구조는 하기 화학식 1및 화학식 2로 표현된다.

본 발명에서 사용된 진세노사이드 F1 및 화합물 K는, 인삼정제사포닌을 산, 알칼리 또는 효소등으로 가수분해하여 인삼 사포닌으로부터 당을 제거한 후 반응액을 실리카 칼럼에 통과하여 제조할 수 있다. 여기에서 사용가능한 효소로는 사포닌 당결합을 분해하는 베타-글루코스 분해효소 (β-glucosidase), 알파,베타-아라비노스분해효소 (α,β-arabinosidase), 알파,베타-람노스분해효소 (α,β-rhamnosidase) 등 엑소 당결합 분해효소 및 이들을 함유하고 있는 복합효소제등을 들 수 있다.

본 발명에서는 진세노사이드 F1 및 화합물 K를 사용하여 표피진피경계부 보호에 따른 주름, 탄력 등 피부의 노화에 따라 발생하는 증상을 전반적으로, 또한 효과적으로 개선할 수 있다. 진세노사이드 F1 및 화합물 K의 사용량은 in vitro 실험 및 in vivo실험을 근거로 조성물 총 중량에 대하여 0.001~10중량%, 바람직하게는 0.01~5중량%가 적당하다.

본 발명의 외용제 조성물은 주름 및 탄력을 개선시키는 목적으로 사용되는 것으로 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤 또는 피부 점착타입 화장료의 제형을 갖는 화장료 조성물일 수 있으며, 또한 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피 투여형 제형일 수 있다.

또한, 각 제형의 외용제 조성물에 있어서, 상기한 필수 성분 이외의 다른 성분들은 기타 외용제의 제형 또는 사용목적 등에 따라 당 업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.

이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 작용효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[참고예 1] 인삼 정제 사포닌의 조제

홍삼(KT&G;한국담배인삼공사-6년근 홍삼) 2Kg에 물을 포함한 에탄올 4L를 넣고, 77℃에서 3회 환류 추출한 후, 15℃에서 6일간 침적시켰다. 그 후 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 엑기스를 물에 현탁한 후에, 에테르 1L로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500ml로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 5% KOH로 처리한 다음 증류수로 세척한 뒤, 감압 농축하여 1-부탄올 엑기스를 얻고, 이를 소량의 메탄올에 녹인 다음, 대량의 에틸아세테이트에 추가하여, 생성된 침전물을 건조함으로써, 인삼정제 사포닌 100g(수율:5%)을 얻었으며, 동일 조작을 10회 반복하여 총 1Kg의 인삼 정제 사포닌을 준비하였다.

하기 실시예의 진세노사이드 F1및 화합물 K의 추출 및 확인은 한국 특허출원 제2001-67964호(공개번호 10-2003-0037005)를 참고하였다.

[실시예 1] 산가수분해방법에 의한 진세노사이드 F1의 조제

참고예 1에서 얻은 인삼 정제사포닌 100g에 20배(v/w)의 황산/50% 에탄올용액(v/w)을 가하여, 100℃ 수욕조에서 6시간 동안 가열 환류시켜, 인삼 사포닌에 결합된 당결합을 가수분해시켰다. 반응액을 감압농축하여 용매를 제거하고, 잔사에 증류수 (1,000ml)를 가해 현탁시킨 후, 동량의 에테르로 3회 추출하였다. 총 에테르층을 증류수로 세척한 뒤, 무수황산마그네슘(MgSO₄)으로 탈수, 여과, 농축하여 조생성물을 얻었다. 얻은 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (클로로포름:메탄올 = 9:1⇒4:1로 극성을 증가시켜주면서 분리)로 분리하였으며, 각 분획에 대하여 박막 크로마토그라피 (클로로포름/메탄올/물=65/35/10, Rf=0.65)를 사용하여 진세노사이드 F1의 분획을 분리, 회수하였고, 최종적으로 진세노사이드 F1 2400mg (수율 2.4%)을 얻었다.

[실시예 2] 효소분해방법을 통한 의한 화합물 K의 조제

참고예 1에서 얻은 인삼 정제사포닌 100g을 1,000ml의 시트레이트 완충용액 (pH 5.5)에 용해시키고, 여기에 페니실리움속에서 분리한 나린지나제 효소 1g을 첨가하여 40℃ 수욕상에서 48시간동안 교반시키면서 반응시켰다. 박층크로마토그래피 에 의해 주기적으로 확인하여, 기질이 완전히 소실되면 열수중에서 10분간 가열하여 반응을 종료시킨 다음, 반응액은 동량의 에테르로 3회 추출, 농축하였다. 얻은 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (클로로포름:메탄올 = 9:1⇒4:1로 극성을 증가시켜주면서 분리)로 분리하였으며, 각 분획에 대하여 박막 크로마토그라피 (클로로포름/메탄올/물=65/35/10, Rf=0.73)를 사용하여 화합물 K의 분획을 분리, 회수하여 최종적으로 화합물 K 4400mg (수율4.4%)을 얻었다.

[시험예 1] 자외선에 의한 젤라티네이즈 A (MMP-9)와 젤라티네이즈 B (MMP-2)의 생합성 억제 효능 측정

인체 각질형성세포를 10⁴/well의 농도로 24공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후에 자외선B 를 30mJ/cm²로 조사한 후, 실시예 1 및 실시예 2에서 분리한 화합물을 각각 0.1ppm, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 상등액을 수확해서 젤라틴젤을 이용한 자이모그래피(zymography)를 한 후 생성된 MMP-2와 MMP-9의 양을 덴시토미터로 측정하여 정량하였다. 그 결과는 실시예1 및 실시예2에서 분리한 화합물을 포함하지 않은 대조군 배지 (이하, 대조군이라 함)에서의 MMP-2와 MMP-9의 양을 100으로 하여 비교치를 표 1에 나타내었다.

성분	농도(ppm)	MMP-2(%)	MMP-9(%)
실시예1	10	51	55
	1	67	69
	0.1	82	85
	대조군	100	100
실시예2	10	48	49
	1	61	62
	0.1	79	78
	대조군	100	100

표 1로부터, 진세노사이드 F1 및 화합물 K를 함유하는 본 발명의 조성물은 피부 기질인 4형 콜라겐과 7형 콜라겐을 분해하는 효소인 MMP-2 와 MMP-9의 생합성을 감소시켜, 표피진피경계부의 분해를 방지할 수 있는 성분임을 알 수 있다.

[시험예 2] 피부세포의 4형 콜라겐 생합성 효능 측정

인체 각질형성세포를 5 X 10⁴/well의 농도로 24공 평판배양기에 배양한 후, 실시예 1 및 실시예 2에서 분리한 화합물을 각각 0.1pp, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 24시간 후 상등액을 수확(harvest)해서 닷블랏(Dot Blot) 방법을 사용하여 생성된 4형 콜라겐의 양을 정량하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 2에 나타내었다.

농도(ppm)	4형 콜라겐 생합성(%)
농도(ppm)	실시예1	실시예2
10	134	139
1	129	128
0.1	116	119
대조군	100	100

표 2으로부터, 진세노사이드 F1 및 화합물 K를 함유하는 본 발명의 조성물은 4형 콜라겐 생합성을 농도 의존적으로 증가시킴을 알 수 있다.

[시험예 3] 피부세포의 7형 콜라겐 생합성 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁴/well의 농도로 24공 평판배양기에 배양한 후, 실시예 1 및 실시예 2에서 분리한 화합물을 각각 0.1pp, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 24시간 후 상등액을 수확(harvest)해서 닷블랏 (Dot Blot)방법을 사용하여 생성된 7형 콜라겐의 양을 정량하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 3에 나타내었다.

농도(ppm)	7형 콜라겐 생합성(%)
농도(ppm)	실시예1	실시예2
10	141	146
1	132	135
0.1	118	120
대조군	100	100

[시험예 4] 피부세포의 라미닌 10/11 생합성 효능 측정

인체 각질형성세포를 5 X 10⁴/well의 농도로 24공 평판배양기에 배양한 후, 실시예 1 및 실시예 2에서 분리한 화합물을 각각 0.1pp, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 24시간 후 상등액을 수확(harvest)해서 웨스턴블랏 (Western Blot)방법을 사용하여 생성된 생성된 라미닌 10/11의 양을 정량하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 4에 나타내었다.

농도(ppm)	라미닌 10/11 생합성(%)
농도(ppm)	실시예1	실시예2
10	134	137
1	125	125
0.1	112	115
대조군	100	100

[시험예 5] 무모생쥐에서 표피진피경계부의 변화 측정

본 발명의 조성물에 의해서 자외선에 의한 표피진피경계부의 변화를 확인하기 위하여 하기 표 5의 조성비에 따라 외용제를 영양크림의 제형으로 제조하여 각각 제형예1~3이라고 하였다.

배합성분	제형예1 (중량%)	제형예2 (중량%)	제형예3 (중량%)	비교제형예1 (중량%)
정제수	To 100	To 100	To 100	To 100
진세노사이드 F1	0.1		0.1	-
화합물 K		0.1	0.1	-
식물성 경화유	1.50	1.50	1.50	1.50
스테아린산	0.60	0.60	0.60	0.60
글리세롤 스테아레이트	1.00	1.00	1.00	1.00
스테아릴 알코올	2.00	2.00	2.00	2.00
폴리글리세릴-10 펜타스테아레이트 & 베헤닐 알코올 & 소디움 스테아로일락틸에이트	1.00	1.00	1.00	1.00
아라키딜 베헤닐 알코올 & 아라키딜글루코사이드	1.00	1.00	1.00	1.00
세틸아릴 알코올 & 세테아릴글루코사이드	2.00	2.00	2.00	2.00
PEG-100 스테아레이트 & 글리세롤올레이트 & 프로필렌글리콜	1.50	1.50	1.50	1.50
카프릴릭/카르릭 트리글리세라이드	11.00	11.00	11.00	11.00
사이클로메티콘	6.00	6.00	6.00	6.00
방부제, 향	적량	적량	적량	적량
트리에탄올 아민	0.1	0.1	0.1	0.1

시험을 위하여, 무모 생쥐의 등부위에 상기 제형예1~3 및 비교제형예1을 2주 동안 일주일에 5회 도포하고, 이후 12주 동안은 일주일에 자외선을 3회 조사하면서 제형예1~3 및 비교제형예1을 5회 도포한 후 생검하여 피부진피경계부의 변화를 전자현미경을 이용하여 측정하였다.

그 결과, 자외선을 조사하면서 진세노사이드 F1과 K를 도포하였을 경우 비교제형예1에 비해 표피진피경계부의 변형, 분열, 단리, 다중화 증상이 거의 일어나지 않는 것을 관찰할 수 있어서, 진세노사이드 F1과 화합물 K가 피부의 주름을 감소시키고, 탄력을 강화시켜 줄 수 있다는 것을 확인할 수 있었고, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

표피진피경계부의 변화

	제형예1	제형예2	제형예3	비교제형예1	무처치군
다중화	++	++	+	++++	+/-
단열	++	++	+	++++	+/-

[시험예 6] 사람에서의 주름개선효과(화상분석)

상기 표 5의 비교제형예1과 제형예1~3에 대하여 주름개선효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 평가하였다. 30대 여성 80명을 각각 비교제형예1 및 제형예1~3군으로 20명씩 4조로 나누어 매일 1회 8주간 도포하게 한 후, 실리콘을 이용하여 레플리카를 떠서 주름의 상태를 visiometer (SV600, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)로 측정하여 화상분석하였으며, 표 7에 도포 8주 후의 각각의 parameter 값에서 도포 전 parameter 값을 뺀 것의 평균을 나타내었다.

사용 8주 후 임상 결과	R1	R2	R3	R4	R5
비교제형예1	0.28	0.27	0.22	0.04	0.04
제형예1	-0.21	-0.21	-0.12	-0.04	-0.03
제형예2	-0.20	-0.22	-0.12	-0.03	-0.02
제형예3	-0.20	-0.20	-0.12	-0.04	-0.04

R1 : 주름 등고선의 최고치와 최저치의 차이값

R2 : 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값들의 평균

R3 : 5개씩 나눈 R1값 중 최고 치

R4 : 주름 등고선의 baseline에서 각 각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값

R5 : 주름 등고선의 baseline에서 각 각의 주름 윤곽을 뺀 값의 차이 값

상기 표 6에서와 같이 제형예1~3의 외용제 조성물은 피부 주름 개선 효과가 아주 우수함을 알 수 있었고, 특히 제형예3의 경우 그 효과가 가장 우수하였다.

[시험예 7] 인체에서 피부 탄력 개선 측정

상기 표 5와 같이 제조한 영양크림의 피부 탄력 개선 효과를 측정하였다. 온도 24-26℃, 습도 75% 조건에서 30세 이상의 건강한 여성 40명을 4개조로 나누고, 각 조에 비교제형예1과 제형예1~3의 영양크림을 매일 2회씩 12주간 안면에 도포한 후 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였으며, 그 결과를 표 8에 나타내었다. 표 8의 결과는 Cutometer SEM 575의 ΔR8(R8(왼쪽)-R8(오른쪽))값으로 기재하였는데, R8값은 피부 점탄성 (viscoelasticity)의 성질을 나타낸다. 이와 별도로 시험을 종료한 시점에 시험 대상자들로 하여금 설문지를 작성하게 하여 기기적인 평가와 동시에 주관적인 효능 평가도 실시하였다.

피부탄력

실험제품	피부탄력효과
비교제형예1	0.11
제형예1	0.42
제형예2	0.42
제형예3	0.44

표 8과 같이 진세노사이드 F1 및 화합물 K가 함유된 제형예1~3의 물질을 도포한 군에서는 비교제형예1을 도포한 군에 비해서 피부탄력성이 더 증가되었고, 특히 제형예3의 경우 우수한 탄력증가를 보여주었다.

이와 동시에 설문조사를 통해서도 제형예1~3을 도포한 경우 피부탄력성이 개선됨을 확인할 수 있었고, 특히 제형예3의 경우 설문에서도 우수한 결과를 보여주었다. 결과는 하기 표 9에 나타내었다.

피부 탄력 개선효과 설문조사결과

도포군	응답자 수 (인)
도포군	매우 양호	양호	보통	미흡
비교제형예1	1	3	3	3
제형예1	3	4	2	1
제형예2	3	5	2	0
제형예3	4	5	1	0

이하 본 발명의 또 다른 제형예를 설명하지만, 본 발명에 따른 진세노사이드 F1, 화합물 K를 함유하는 외용제의 제형이 이들 예로만 한정되는 것은 아니며, 이들은 모두 젤라티네이즈의 생합성을 억제하는 효능을 갖는다.

[제형예 4] 유연화장수(스킨로션)

배합성분	중량%
정제수	To 100
진세노사이드 F1	0.1
화합물 K	0.1
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
피이지-12 노닐페닐에테르	0.2
폴리솔베이트 80	0.4
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예 5] 영양화장수(밀크로션)

배합성분	중량%
정제수	To 100
진세노사이드 F1	0.1
화합물 K	0.1
밀납	4.0
폴리솔베이트60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.5
유동파라핀	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예6] 영양크림

배합성분	중량%
정제수	To 100
진세노사이드 F1	0.1
화합물 K	0.1
밀납	10.0
폴리솔베이트60	1.5
피이지 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.5
유동파라핀	10.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	5.0
푸틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예7] 마사지크림

배합성분	중량%
정제수	To 100
진세노사이드 F1	0.1
화합물 K	0.1
밀납	10.0
폴리솔베이트60	1.5
피이지 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.8
유동파라핀	40.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예8] 팩

배합성분	중량%
정제수	To 100
진세노사이드 F1	0.1
화합물 K	0.1
폴리비닐알콜	13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스	0.2
글리세린	5.0
알란토인	0.1
에탄올	6.0
피이지-12 노닐페닐에테르	0.3
폴리솔베이트 60	0.3
방부제, 색소, 향료	적량

이상에서 설명한 바와 같이 진세노사이드 F1과 화합물 K 중 1종 이상을 함유함으로써 젤라티네이즈(MMP-2, MMP-9)의 생합성을 감소시키고, 4형콜라겐, 7형콜라겐, 라미닌 10/11의 생합성을 증가시키며 표피진피경계부의 분해를 억제하고 생성을 촉진시켜 피부노화의 제반증상인 주름 및 탄력을 개선하는 항노화 효능이 있는 피부외용제 조성물로 사용할 수 있다.

Claims

진세노사이드 F1 및 화합물 K를 유효성분으로 함유하는 젤라티네이즈의 생합성 억제용 화장료제제.
제1항에 있어서, 상기 젤라티네이즈는 MMP-2(Matrix Metalloproteinase-2) 또는 MMP-9(Matrix Metalloproteinase-9)인 것을 특징으로 하는 생합성 억제용 화장료제제.
제 1항 또는 제 2항에 의한 젤라티네이즈의 생합성 억제용 화장료제제를 함유하는 화장료 조성물.
제 3항에 있어서, 상기 조성물은 표피진피경계부 분해억제 또는 생성촉진용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 3항에 있어서, 상기 조성물은 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 개선용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.