JP5475335B2 - リン脂質組成物の製造方法 - Google Patents
リン脂質組成物の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5475335B2 JP5475335B2 JP2009140653A JP2009140653A JP5475335B2 JP 5475335 B2 JP5475335 B2 JP 5475335B2 JP 2009140653 A JP2009140653 A JP 2009140653A JP 2009140653 A JP2009140653 A JP 2009140653A JP 5475335 B2 JP5475335 B2 JP 5475335B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phospholipid
- soybean
- composition
- lecithin
- reaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 title claims description 84
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 59
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 11
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 claims description 47
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 46
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 claims description 45
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 43
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 36
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 33
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 33
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 claims description 27
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims description 26
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 claims description 26
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 22
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 claims description 18
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 claims description 18
- 102000011420 Phospholipase D Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000553 Phospholipase D Proteins 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 12
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 28
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 26
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 239000002585 base Substances 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 14
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 description 9
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 8
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- -1 alkali metal salts Chemical class 0.000 description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 7
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 6
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 5
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 5
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 description 4
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010000659 Choline oxidase Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- INAPMGSXUVUWAF-GCVPSNMTSA-N [(2r,3s,5r,6r)-2,3,4,5,6-pentahydroxycyclohexyl] dihydrogen phosphate Chemical compound OC1[C@H](O)[C@@H](O)C(OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H]1O INAPMGSXUVUWAF-GCVPSNMTSA-N 0.000 description 2
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 2
- 229910001508 alkali metal halide Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910001615 alkaline earth metal halide Inorganic materials 0.000 description 2
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 2
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 150000007933 aliphatic carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N ammonium dihydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].OP(O)([O-])=O LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000387 ammonium dihydrogen phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004380 ashing Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 150000001991 dicarboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- HJKTUGMLMSMABY-UHFFFAOYSA-L disodium 3-carboxy-3,5-dihydroxy-5-oxopentanoate acetate Chemical compound C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)[O-])(=O)[O-].[Na+].[Na+].C(C)(=O)O HJKTUGMLMSMABY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 235000013310 margarine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003264 margarine Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000874 microwave-assisted extraction Methods 0.000 description 1
- 235000020124 milk-based beverage Nutrition 0.000 description 1
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- WZWGGYFEOBVNLA-UHFFFAOYSA-N sodium;dihydrate Chemical compound O.O.[Na] WZWGGYFEOBVNLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003628 tricarboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
Description
そして、酵素源である大豆として特定の吸水率の大豆種子を用い、且つ大豆酵素抽出物中の前記活性比を9.0以上とすれば、PCとPEを分解することにより高純度のPAが得られ、且つPIの分解を抑制でき、さらに作業性が良く抽出率も向上するため、極めて効率良く含窒素塩基を含まないリン脂質を高含有するリン脂質組成物を製造することができることを見出した。
吸水率(%)={(浸漬後の大豆質量(g)−浸漬前の大豆質量(g))/浸漬前の大豆質量(g)}×100 〔1〕
前記カルボン酸としては、炭素数2〜8の直鎖又は分岐鎖の脂肪族カルボン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸、炭素数7〜12の芳香族カルボン酸が挙げられ、例えば酢酸、酪酸、プロピオン酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸等が挙げられる。また、アルカリ金属としては、例えばナトリウム、カリウムが挙げられ、アルカリ土類金属としては、例えばマグネシウム、カルシウムが挙げられる。
(1)PL-C活性測定法
ここでいうPL-C活性とは、大豆酵素抽出物1mlが1分間に加水分解するPIの量(nmol)を意味し、PL-CによりPIをイノシトールリン酸とジアシルグリセロールに分解する工程後、生成したイノシトールリン酸のリン量を測定する以下の方法で測定した。
<試薬>
(A)基質・緩衝液:基質としてPI(SIGMA P-6636)80mgを0.5%デオキシコール酸(東京化成工業)水溶液5mlに加え、さらに0.38M酢酸緩衝液(pH6)10mlを加え溶解したもの。
(B)リン標準液:リン含量が正確に0.5mMとなるように蒸留水でリン酸一カリウム(和光純薬工業)を溶解したもの。
(C)反応停止液:クロロホルム66ml、メタノール33ml、濃塩酸1mlを混合したもの。
(D)酸化剤
(E)脱色剤
(F)発色剤
(D)〜(F)は過マンガン酸塩灰化法のリン脂質テストキット試薬(和光純薬工業製)を使用した。
<操作>
(i)測定対象となる試料(下記「大豆酵素抽出物の調製」により得られた大豆酵素抽出物)100μLを試験管に正確に計り取った。このとき、ブランクとして試料を取らない試験管を準備し、同時に分析した。
(ii)37℃水浴中で、前記2つの試験管にそれぞれ前記(A)の基質・緩衝液400μLを正確に計り取った後に加えて混合し、加えた時点から30分間放置した。
(iii)同時に検量線作成用に、標準ブランクとして蒸留水500μL、標準リンとして前記(B)のリン標準液500μLを各々正確に試験管に計り取っておいた。
(iv)(i)の試料及びブランク、並びに(iii)の検量線作成用の標準ブランク及びリン標準液を入れた各々の試験管に前記(C)の反応停止液2.5mLを正確に加え、よく混合した。
(v)上記試験管をそのまま1000rpmで10分間遠心分離し、上層200μLを正確に別の試験管に計り取った。
(vi)遠心分離で上層を採取した試験管に硫酸0.2mLを正確に加え、混合したのち沸騰浴中で10分間放置した。
(vii)前記(D)の酸化剤1.0mLを正確に加えて混合したのち、ガラス玉を試験管の上にのせ、沸騰浴中で30分放置した。
(viii)室温で10分間放冷し、ガラス玉を取った。
(ix)前記(E)の脱色剤1.0mLを正確に加え、よく撹拌した。
(x)前記(F)の発色剤0.25mLを正確に加え、混合したのち、37℃水浴中で20分間放置した。
(xi)流水で10分間冷却した。
(xii)吸光度計(HITACHI、U-3310)で660nmの吸光度を測定し、下記式〔2〕より活性を求めた。
ここでいうPL-D活性とは、大豆酵素抽出物1mlが1分間に加水分解するPCの量(nmol)を意味し、PL-DによりPCをコリンとPAに分解する工程後、生成したコリンをコリンオキシダーゼ・フェノール法にて測定する以下の方法で測定した。
<試薬>
(G)基質・緩衝液:基質としてPC(商品名エピクロンS-200、Lucas Mayer社製)0.3gに、0.13%ノニデットP-40(SIGMA N-3516)水溶液10mlと75mM酢酸緩衝液(75mM塩化カルシウム入り;pH6.0)20mlを加え、溶解したもの。
(H)標準塩化コリン溶液:0.2mM塩化コリン(SIGMA C-1879)を含む50mM酢酸緩衝液(50mM塩化カルシウム入り;pH6.0)
(I)反応停止液: 1Mトリス塩酸緩衝液(150mM EDTA2ナトリウム2水塩入り;pH8.0)。
(J)発色基質液:4-アミノアンチピリン61mgを、100mMトリス塩酸緩衝液(4mMフェノール入り;pH8.0)100mlに溶解したもの。
(K)発色液:前記(J)発色基質液10mlに6mgコリンオキシダーゼ(SIGMA C-5896)6mgとパーオキシダーゼ(和光純薬工業)1mgを溶解したもの。
(L)発色停止液:1%(w/v)トリトンX-100(和光純薬工業)水溶液。
<操作>
(i)75mM酢酸緩衝液で50倍に希釈した測定対象となる試料(下記「大豆酵素抽出物の調製」により得られた大豆酵素抽出物)200μLを試験管に正確に取った。このとき、ブランクとして試料を取らない試験管、標準ブランクとして蒸留水200μLを正確に取った試験管、及び標準コリンとして前記(H)標準塩化コリン溶液200μLを正確に取った試験管を準備し、同時に分析した。
(ii)37℃水浴中で、前記(G)基質・緩衝液300μLを各々の試験管に正確に加えて混合し、加えた時点から10分間放置した。
(iii)正確に10分経過したら、前記(I)反応停止液200μLを各々の試験管に正確に加え、よく混合した。
(iv)前記(K)発色液500μLを各々の試験管に正確に加えて混合し、37℃水浴中で20分間放置し、発色させた。
(v)前記(L)発色停止液2mLを各々の試験管に正確に加えて混合し、吸光度計(HITACHI、U-3310)で500nmの吸光度を測定し、下記式〔3〕より活性を求めた。
ヘキサンをリン脂質組成物1mLに対し3mLの割合で加え、よく混合した。3000rpmで10分間遠心分離し、上層を採取した。得られた上層3〜4滴にクロロホルム1mLを加えた。この溶液10μLを液体クロマトグラフに注入し、リン脂質組成を下記式〔4〕より求めた。
液体クロマトグラフ測定条件
カラム:ワコーシルNH2(5μm)、4.0×150mm (和光純薬工業)
カラム温度:40℃
溶離液:アセトニトリル/エタノール/12mMリン酸二水素アンモニウム水溶液(30/65/5容量比)
流速:1.0ml/min
検出:UV 210nm
(1)大豆酵素抽出物の調製
6種類の市販の乾燥大豆200gをワーリングブレンダーにてそれぞれ破砕した。破砕物はふるいにかけて夾雑物を除去した後、ガラスカラムに充填し、ペリスタポンプで流量を3.3ml/minに調整しながらカラム底部から抽出液(50mM塩化カルシウム入りの0.4M酢酸ナトリウム緩衝液;pH6.0)を流し、カラム上部から酵素抽出物を900g回収した。
(2)酵素反応
撹拌装置を備えた1000mLの4口フラスコに、市販の脱脂レシチン(商品名SLP-WSP:辻製油(株)製)を100gとり、これに酵素抽出物600gを加え、遮光、窒素ガス雰囲気下、30℃の条件で反応を行った。なお、本レシチンはリン脂質が100質量%であり、そのリン脂質組成(モル比)は、PA10.9%、PI16.2%、PC38.2%、PE34.7%であった。リン脂質中のPAのモル比が90%となった時点(実施例1〜4、比較例1及び2)、さらにPAのモル比が高まった時点(実施例5及び6)でそれぞれ反応液を採取し、リン脂質組成を高速液体クロマトグラフィーで分析し、反応終了後の総リン脂質の収量(総リン脂質質量の計算値)、PA+PIの収量及びそれぞれの収率を、下記に示した計算に従って求めた。
(3)計算方法
反応開始前の原料レシチンはPA、PC、PE及びPIから構成されているので、原料レシチン100g中の各リン脂質の質量は、各リン脂質の平均分子量にそれぞれのモル数を乗じることにより算出することができる。ここで、原料レシチン中の各リン脂質のモル数は、それぞれのモル組成比に比例した値であるので、原料レシチン中のPA、PC、PE及びPIのモル組成比をそれぞれA、B、C及びDとし、それぞれの平均分子量をMwPA、MwPC、MwPE、MwPIとすると、例えば原料レシチン100g中のPAの質量WPAは、
WPA={(MwPA×A)/(MwPA×A+MwPC×B+MwPE×C+MwPI×D)}×100
であり、よって、原料レシチン100g中のPAのモル数MnPAは、
MnPA=WPA/MwPA
である。その他のリン脂質についても同様にMnPC、MnPE、MnPIが算出される。
次に、各リン脂質の反応後のモル数をmnPA、mnPC、mnPE、mnPIとし、反応終了後のPA、PC、PE及びPIのモル組成比をそれぞれa、b、c及びdとする。ここで、PIは反応によりDAGに分解されて減少するが、PC及びPEは、酵素反応によりそれぞれPAが生成するため、PA+PC+PEの合計モル数は反応前後で変化しないので、
mnPA+mnPC+mnPE=MnPA+MnPC+MnPE
であり、よって、
mnPI/(MnPA+MnPC+MnPE+mnPI)=d
であり、ここで、MnPA+MnPC+MnPE=Xとすれば次の式が導かれる。
mnPI=d×X/(1−d)
すると、反応終了後のPA、PC及びPEのモル数は、それぞれ、
mnPA=a×{X+d×X/(1−d)}
mnPC=b×{X+d×X/(1−d)}
mnPE=c×{X+d×X/(1−d)}
となる。以上から、反応終了後の各リン脂質のモル数にそれぞれの平均分子量を乗じて収量を算出し、「総リン脂質の収量」及び「PA+PIの収量」を求めた。
また、PIの分解率は下記式〔5〕より、PIの分解により生じたジアシルグリセロール(DAG)の収量については下記式〔6〕よりそれぞれ算出した。
PIの分解率(%)=(MnPI−mnPI)/MnPI×100 〔5〕
DAGの収量=(MnPI−mnPI)×DAGの平均分子量 〔6〕
大豆の吸水率は、前記の式〔1〕より算出した。
〔分離性〕
○:撹拌静置30分後にHex相と水相の界面が完全に分離した状態
△:撹拌静置60分後にHex相と水相の界面が完全に分離した状態
×:撹拌静置60分以上経過してもHex相と水相の界面が分離しない状態
抽出率(%)=Hexを除去した後のリン脂質組成物の最終収量の実測値(g)/反応終了後のリン脂質組成物収量の計算値(g)×100 〔7〕
結果を表1に示す。
すなわち、実施例1−6では、PC及びPE分解率が高く、またPI分解率を抑えることができ、且つ反応液の分相状態が良好であったためリン脂質組成物を抽出する際の分離性、PA+PIの収率が良かった。一方、PL−DとPL−Cの活性比が9.0未満である大豆酵素抽出物を用いた比較例1では、PI分解率が極めて高くなりリン脂質組成物中の含窒素塩基を含まないリン脂質の収率が悪かった。
大豆種子の吸水率が145%を超える比較例2では、PI分解率が高い上に、反応液の分相状態に劣り分離性が極めて低いためリン脂質組成物中の含窒素塩基を含まないリン脂質の収率が悪かった。
Claims (5)
- レシチンに、吸水率が145%以下である大豆種子より抽出され、ホスホリパーゼDとホスホリパーゼCの活性比が9.0以上である大豆酵素抽出物を反応させるリン脂質組成物の製造方法。
- レシチンが天然由来のレシチンである請求項1記載の製造方法。
- リン脂質組成物中のリン脂質のうち、含窒素塩基を含まないリン脂質の組成比が94%以上である請求項1又は2記載の製造方法。
- 含窒素塩基を含まないリン脂質が、ホスファチジン酸及びホスファチジルイノシトールである請求項3記載の製造方法。
- リン脂質組成物中のリン脂質のうち、ホスファチジン酸組成比が90%以上、ホスファチジルイノシトール組成比が4%以上で得るものである請求項1〜4のいずれか1項記載の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009140653A JP5475335B2 (ja) | 2009-06-12 | 2009-06-12 | リン脂質組成物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009140653A JP5475335B2 (ja) | 2009-06-12 | 2009-06-12 | リン脂質組成物の製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010284116A JP2010284116A (ja) | 2010-12-24 |
JP5475335B2 true JP5475335B2 (ja) | 2014-04-16 |
Family
ID=43540336
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009140653A Active JP5475335B2 (ja) | 2009-06-12 | 2009-06-12 | リン脂質組成物の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5475335B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2911525B1 (en) * | 2012-10-24 | 2020-01-01 | Cargill, Incorporated | Phospholipid-containing emulsifier composition |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0683633B2 (ja) * | 1987-04-08 | 1994-10-26 | 花王株式会社 | 食品用離型油組成物 |
JPH0677507B2 (ja) * | 1989-01-10 | 1994-10-05 | 花王株式会社 | 改質したリン脂質の製造方法 |
JPH0677509B2 (ja) * | 1989-05-26 | 1994-10-05 | 花王株式会社 | 改質したリン脂質の製造方法 |
JPH0683639B2 (ja) * | 1989-05-26 | 1994-10-26 | 花王株式会社 | 改質したリン脂質の製造方法 |
JPH0466091A (ja) * | 1990-07-06 | 1992-03-02 | Kao Corp | 固定化酵素によるホスファチジン酸の製造方法 |
-
2009
- 2009-06-12 JP JP2009140653A patent/JP5475335B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2010284116A (ja) | 2010-12-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4933432B2 (ja) | 新規なリン脂質加工剤 | |
Casado et al. | Phospholipases in food industry: a review | |
EP2308954B1 (en) | Method for production of highly pure phospholipid, and highly pure sphingomyelin and plasmalogen-type glycerophospholipid produced by the method | |
JP5934483B2 (ja) | リン脂質結合型dha増加剤 | |
JPH09165A (ja) | 酸性リン脂質の濃縮法 | |
JP5475335B2 (ja) | リン脂質組成物の製造方法 | |
JP5530696B2 (ja) | プラズマローゲン型リン脂質 | |
JP2007119361A (ja) | ホスホリパーゼa2阻害剤 | |
JP5477521B1 (ja) | リン脂質含有組成物の製造方法及びリン脂質含有組成物 | |
JPH0517918B2 (ja) | ||
JPH066032B2 (ja) | 酵素改質レシチンの製造法 | |
JPH0387191A (ja) | ホスファチジルイノシトールの製造方法 | |
JP2001186898A (ja) | 多価不飽和脂肪酸残基をもつホスファチジルセリンの製造法 | |
JPH08168390A (ja) | 高度不飽和脂肪酸含有グリセリドの製造方法 | |
WO2005090587A1 (ja) | 酵素の除去方法および該方法を用いるリン脂質の塩基転移または加水分解方法 | |
JP5894377B2 (ja) | リン脂質の製造方法 | |
JP2503567B2 (ja) | レシチンの精製方法 | |
JPH06228170A (ja) | ホスファチジルクロマノール誘導体、その製造方法、抗酸化剤及び乳化剤 | |
JP5041790B2 (ja) | 多価不飽和脂肪酸を構成要素とするホスファチジルセリンの製造方法 | |
JP6177862B2 (ja) | リン脂質の製造方法 | |
JP2002218991A (ja) | ホスファチジルセリンの製造方法 | |
JP2515839B2 (ja) | リン脂質の精製方法 | |
JP2017042163A (ja) | ステリルグリコシドの製造方法及びステリルグリコシド含有物 | |
JPH0662648B2 (ja) | 高純度レシチンの製造方法 | |
ES2882528T3 (es) | Desgomado enzimático de aceite de triglicéridos no refinado |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120321 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20131112 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140128 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140206 |
|
R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 5475335 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |