JP5384100B2 - バイオマス処理方法及びバイオマス用処理剤 - Google Patents
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Description
本実施形態に係るバイオマス処理方法は、含窒素バイオマスに、脱窒機能を有するジオバチルス属の微生物と、該微生物の増殖及び該微生物による含窒素バイオマスの発酵を促進する発酵促進材とを配合する工程を備えている。この配合工程により、含窒素バイオマスは最終的に堆肥化される。本実施形態において使用される含窒素バイオマスの具体例は、窒素を含有するバイオマスであれば特に限定されず、例えば牛、豚、羊、馬、鶏等の家畜の排泄物(糞尿)、下水処理汚泥、及び生ごみ等の食品廃棄物が挙げられる。
次に、本実施形態に係る含窒素バイオマスの処理方法により製造された堆肥及び畜産用敷料の作用を説明する。
(1)本実施形態において、含窒素バイオマスの処理にジオバチルス属の微生物が使用されている。したがって、従来のバチルス属の微生物を用いた処理方法に比べて短期間(本実施形態においては30〜45日)で処理が完了する。
(3)微生物を用いた分解及び発酵処理が行われることから、燃焼法、浄化法、吸着法等の物理的な処理方法又は化学的な処理方法に比べて、本実施形態に係る処理方法は複雑な装置及び大量の水を必要としない。更に、本実施形態に係る処理方法は、更なる処理を必要とする二次処理物、即ち副産物が少なく、化石燃料等のエネルギーの消費量を抑制することもできる。
(5)ジオバチルス属の微生物による高温処理では、含窒素バイオマスの温度が60〜95℃に上昇する。したがって、処理温度が100℃付近である超高温菌に比べて低い温度で含窒素バイオマスを処理することができることから、含窒素バイオマスの分解の進行と水分含有率とのバランスを容易に図ることができる。
上記実施形態において、ジオバチルス属の微生物を用いた含窒素バイオマスの処理方法が、堆肥及び畜産用敷料の製造方法として使用されている。しかしながら、本実施形態の処理方法が、単にそのまま廃棄されることが例えば環境の悪化を招く家畜の排泄物、下水処理汚泥等の廃棄物を、環境を悪化させるおそれのない処理物に処理する方法として使用されてもよい。この場合、処理物を適切に廃棄することが容易である。また、ジオバチルス属の微生物は、上記実施形態に係る用途の他、例えば高温処理を活用した土壌の消毒及び殺菌処理等の分野に適用されてもよい。
<微生物の分離及び同定>
まず、様々な場所で採取した、完熟した牛糞由来の堆肥を、水または生理食塩水を入れた試験管に入れた後、ミキサーにより激しく攪拌し、堆肥中に含まれる微生物を堆肥から溶出させた。この溶出液の一部を採取し、Schaeffer's sporulation medium(0.8% nutrient broth (Difco), 27mM KCl, 2mM MgSO4 7H2O, 1mM Ca(NO3)24H2O, 0.1mM MnCl2 4H2O, and 1μM FeSO47H2O)に加えて65℃で6時間培養した。この培養物を100℃で5分間加熱し、芽胞形成に至らなかった栄養体細胞を死滅させた。次いで、芽胞形成菌のみを前述の微生物生育培地成分を含む寒天平板培地に広げ、65℃でさらに培養してコロニーを形成させた。以上により好熱性芽胞形成細菌を分離した。
細胞の幅 0.5〜1.0(μm)
細胞の長さ 1.5〜2.5(μm)
DNA GC含量(モル%) 51.8
運動性 −
生育温度45℃ +
生育温度70℃ +
生育pH9.0 +
脱窒能 +
嫌気性での生育 +
カゼインの加水分解 +
デンプンの加水分解 +
利用性
ラムノース −
セルビオース +
ガラクトース +
キシロース +
リボース +
アラビノース +
クエン酸 +
フェノール耐性 20(mM)
<堆肥化処理>
家畜の排泄物(肥育牛糞)を含窒素バイオマスとして使用し、実施例1及び比較例1に係る堆肥化処理を行なった場合の含窒素バイオマス中の温度、菌体の増殖の程度、臭気ガスの濃度、温暖化ガスの濃度、及び堆肥の完熟度を1週間毎に経時的に測定した。更に、堆肥成分を1週間毎に経時的に分析した。肥育牛の家畜の排泄物及び水分調整材としてのオガ粉の合計50m3中に各種菌を10m3加え、実施例1においてはセルロモナス属微生物K32A株由来(Cellulomonas sp. K32A)のセルラーゼを含有する発酵促進材を更に加えて処理反応を開始した。実施例1の種菌として、ジオバチルス.サーモデニトリフィカンス(Geobacillus thermodenitrificans、受託番号NITEB BP-157)を用いた。比較例1の種菌として、主にCanocytophaga sp.を含む「戻し堆肥」製造用の種菌(豊橋飼料株式会社、図2の(5)参照)を用いた。
家畜の排泄物(堆肥)において、該排泄物の表層より50cm内方における温度の経時変化を図1(a)に示し、表層より20cm内方における温度の経時変化を図1(b)に示す。図1(a)及び図1(b)中の各グラフにおいて、垂直方向における温度の急激な低下は、空気混入のために堆肥の撹拌作業を行うべく、堆肥から温度計を取り外した際に生じたものである。
上記実施例1及び比較例1の含窒素バイオマス処理過程中における細菌叢の経時変化を、DGGE(変性剤濃度勾配ゲル電気泳動)測定により評価した。DGGEは、濃度勾配を有するDNA変性剤、例えば尿素等を含有するゲルを電気泳動に用いることにより、種固有のGC比とAT比とに基づいてDNAの分離を行う。電気泳動で得られたDNAバンドに対して塩基解析を行うことにより、各バンドが由来する菌株の帰属分類群を推定した。
(1−a):Alcaligenes faecalis、
(1−b):Enterococcus sp.、
(1−c):Bacillus subtilis、
(2−a):不明、
(2−b):Alcaligenes faecalis、
(2−c):Cytophaga sp.、
(2−d):Nitrobactor sp.、
(2−e):Uncultured bacterium、
(2−f):Cytophaga sp.、
(2−g):Capnocytophaga、
(2−h):Glycomyces sp.、
(2−i):Bacteroidas sp、
(3−a):不明、
(3−b):Knoellia sinensis、
(3−c):Nitrobactor sp.、
(3−d):Cytophaga sp.、
(3−e):Canocytophaga sp.、
(3−f):Glycomyces sp.、
(3−g):不明、
(3−h):Bacteroidas sp.、
(3−i):不明、
(4−a):Nitrobactor sp.、
(4−b):Cytophaga sp.、
(4−c):Canocytophaga sp.、
(4−d):Glycomyces sp.、
(4−e):Bacteroidas sp.、
(4−f):不明、
(4−g):不明、
(5−a):Nitrobactor sp.、
(5−b):Flavobactrium sp.、
(5−c):Canocytophaga sp.、
(5−d):Canocytophaga sp.、
(5−e):Glycomyces sp.、
(6−a):Bacillus thermocloaceae、
(7−a):Bacillus thermocloaceae、
(7−b):Bacillus sp.、
(7−c):Bacillus subtilis、
(8−a):Lactobacillus sp.、
(8−b):Thiomicrospira denitrificans、
(8−c):Glycomyces aeizonensis、
(8−d):Bacillus fortis、
(8−e):Bacillus niacini、
(8−f):Bacillus pumilus、
(8−g):Virgibacillus sp.、
(8−h):Sulfobacillus sp.、
(8−i):Geobacillusthermodenitrificans。
実施例1及び比較例1の各堆肥から発生するアンモニア、アミン、メルカプタン、及び硫化水素を採取し、それらの濃度を測定した。具体的には、堆肥にガス放出測定用チャンバーを設置し、発生したガスをテドラーバックに採取した。アンモニア、アミン、メルカプタン、及び硫化水素の濃度を、検知管(ガステック社製GV−100S)を用いて測定した。それらの測定結果を表1に示す。
実施例1及び比較例1において、処理開始後2,4,及び6週目の各堆肥から発生する温暖化ガスとしてのメタンガス及び一酸化二窒素の濃度を測定した。具体的には、堆肥にガス放出測定用チャンバーを設置し、発生したガスをテドラーバックに採取した。メタンガスの濃度の測定を、ガスクロマトグラフ(株式会社島津製作所GC−14A)、及びカラム(PorapackQ-S 60/80 mesh 2.1m×2.6mm)を用いて行なった。一酸化二窒素の濃度の測定を、ガスクロマトグラフ質量分析計(株式会社島津製作所QP−5000)、及びカラム(Pora Plot 27.5m×0.32mm)を用いて行なった。それらの測定結果を表2に示す。
種子の発芽数と茎の伸長とを測定する発芽インデックス法を用いた堆肥の腐熟度に基づいて堆肥の完熟度を表した。家畜の排泄物の処理により得られた堆肥が作物の堆肥として使用される場合、安全性が重要である。家畜の排泄物には有害な有機物、雑草の種子等が含まれることから、堆肥が安全に使用されるためには堆肥の腐熟度を向上させる必要がある。腐熟度とは、土壌及び作物の環境の悪化を招かない程度、且つ作物の生育に適した状態にまで、有機物を微生物等の働きによって分解した度合を示す。つまり、有機物が前記程度及び状態にまで分解されたときが腐熟の終了時(完熟)であり、有機物が前記程度及び状態に向かって分解されるまでの腐熟の過程を腐熟度という。作物の生育に適した状態とは、例えば(1)水分が減少し、汚物感及び悪臭がなくて取り扱い性が向上していること、(2)有害な微生物及び病原菌、雑草の種子が死滅していること、及び(3)有害な有機諸成分が分解されており、それらの有害作用及びガス害が軽減されていることにより達成される。
GI=G/Gc×L/Lc×100(%)
前記式において、GIは発芽インデックスを示し、Gは堆肥抽出液での発芽数を示し、Gcは蒸留水での発芽数を示し、Lは堆肥抽出液での茎長を示し、Lcは蒸留水での茎長を示す。
堆肥中の成分のうち、窒素(N)、炭素(C)、リン酸(P2O5)、酸化カリウム(K2O)、及び塩素(Cl)の堆肥おける割合と、堆肥を精製水に1:10で溶解して調製した溶液のpH及びEC(電気伝導度)とを測定した。これらの測定を、肥料分析法(日本の農林水産省農業環境技術研究所法)に従って行なった。全窒素(N)の割合を、デバルダ合金−硫酸法を用いて測定した。炭素(C)の割合を、二クロム酸酸化による有機炭素の定量法を用いて測定した。リン酸(P2O5)の割合を、キノリン重量法を用いて測定した。酸化カリウム(K2O)の割合を、テトラフェニルホウ酸ナトリウム重量法を用いて測定した。塩素(Cl)の割合を、硝酸銀法を用いて測定した。前記溶液のpHを、ガラス電極を用いて測定した。前記溶液のECを、電気伝導率計を用いて測定した。それらの測定結果を表4に示す。
実施例2では含窒素バイオマスとして肥育牛糞を使用し、実施例3では含窒素バイオマスとして乳牛糞を使用した以外は、実施例1と同様の方法により堆肥化処理(6週間)を行なった。比較例2では、含窒素バイオマスとして、日本の那須牧場産の牛糞を使用して製造された市販品堆肥を用いた。比較例3では、含窒素バイオマスとして、日本の和田牧場産の牛糞を使用して製造された市販品堆肥を用いた。比較例4では、含窒素バイオマスとして、牛糞を使用して製造された株式会社三貴社製の堆肥を用いた。各堆肥を1g量り取って精製水100mlに懸濁させた。次いで、懸濁液を激しく撹拌した後30分間静置し、上清を回収してその吸光度を各波長にて測定した。測定結果を表5に示す。
実施例4では含窒素バイオマスとして肥育牛糞を使用し、実施例5では含窒素バイオマスとして乳牛糞を使用し、各実施例において含窒素バイオマスに泥炭を少量添加した以外は、実施例1と同様の方法により堆肥化処理(6週間)を行なった。比較例5では、含窒素バイオマスとして日本の古河牧場産の牛糞を用いて製造された市販品堆肥を用いた。実施例4,5及び比較例2〜5の堆肥1gを15ml容量の滅菌済みスピッツに量り取り、0.1%Tween20添加ペプトン食塩緩衝液(日本薬局方)10mlを加えて懸濁させた。次いで、懸濁液を激しく撹拌することによって各堆肥サンプルに含まれる微生物を溶出させ、平板塗抹法により乾物1g中の微生物数(cfu)を求めた。好気性細菌検出用として普通寒天培地を用い、嫌気性菌検出用としてGAM寒天培地を用い、放線菌検出用培地としてHV寒天培地を用いた。中温菌として、30℃の培養温度にて増殖する細菌を検出した。高温菌として、65℃の培養温度にて増殖する細菌を検出した。それらの結果を表6に示す。
ジオバチルス属の微生物の硝酸除去率及び全窒素除去率を測定した。実施例6としてジオバチルス.サーモデニトリフィカンス(受託番号NITEB BP-157、硝酸塩還元能+、脱窒能+)を使用し、比較例6としてジオバチルス.ステアロサーモフィルス(受託番号ATCC7953、硝酸塩還元能+、脱窒能−)を使用した。比較例6において使用されたジオバチルス.ステアロサーモフィルス(受託番号ATCC7953)は脱窒能を有していないが、ジオバチルス.ステアロサーモフィルスには脱窒能を有しているものもある。まず、トリプトン(Difco)10g、硝酸カリウム2g、及び精製水1L(pH7.5)からなる培地に各種菌を接種し、65℃にて12時間嫌気培養を行った。硝酸濃度を比色法(ロシュ:Cat No.1 746 081)で定量し、全窒素量をケルダール法により分析した。培養前と培養後との硝酸濃度及び全窒素量をそれぞれ測定することにより、硝酸除去率及び全窒素除去率を求めた。測定結果を表7に示す。
家畜の排泄物(鶏糞)を含窒素バイオマスとして使用し、実施例7及び比較例7の堆肥化処理を行なった場合における含窒素バイオマス中の高温菌数、有機質の分解率、アンモニア態窒素の含有量(乾物100g中)、臭気ガスの濃度、及び温暖化ガスの濃度を経時的に測定した。採卵用鶏の排泄物及びオガ粉の合計50m3中に各種菌を10m3加えて処理反応を開始した。実施例7の種菌として、ジオバチルス.サーモデニトリフィカンス(Geobacillus thermodenitrificans、受託番号NITEB BP-157)を用いた。比較例7の種菌として、主にCanocytophaga sp.を含む「戻し堆肥」製造用の種菌(豊橋飼料株式会社、図2の(5)参照)を用いた。一次発酵槽にて3日間分解処理を行い、それ以後はブロアー付レーン式醗酵槽にて24日目まで分解処理を行なった。
Claims (11)
- 含窒素バイオマスに、脱窒機能を有するジオバチルス属の微生物及び該ジオバチルス属の微生物による含窒素バイオマスの発酵を促進する発酵促進材を配合する工程、並びに前記ジオバチルス属の微生物及び発酵促進材の作用により、含窒素バイオマスの温度を50℃以上に上昇させて嫌気状態下で含窒素バイオマスの発酵を行う工程を備えること特徴とするバイオマス処理方法。
- 前記ジオバチルス属の微生物の至適生育温度範囲は50〜70℃であることを特徴とする請求項1に記載のバイオマス処理方法。
- 前記ジオバチルス属の微生物の至適生育pH範囲はpH6〜8であることを特徴とする請求項1又は請求項2に記載のバイオマス処理方法。
- 前記脱窒機能を有するジオバチルス属の微生物は、日本の独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターへ2005年12月26日に寄託されたジオバチルス.サーモデニトリフィカンス(受託番号NITE BP-157)であることを特徴とする請求項1から請求項3のいずれか一項に記載のバイオマス処理方法。
- 前記発酵促進材は、多糖類分解酵素及び有機質資材から選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする請求項1から請求項4のいずれか一項に記載のバイオマス処理方法。
- 前記多糖類分解酵素は、セルラーゼ、キシラナーゼ、及びペクチナーゼから選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする請求項5に記載のバイオマス処理方法。
- 前記有機質資材は、油粕、米糠、ふすま、コーンスティープリカー、黒砂糖、大豆油粕、肉粕、乾血粉、チキンミール、魚粕、鰹節の煮粕、さなぎ粕、酵母エキス粕、及びビール粕から選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする請求項5に記載のバイオマス処理方法。
- 前記含窒素バイオマスは、家畜の排泄物及び下水余剰汚泥から選ばれる少なくとも一種を含有することを特徴とする請求項1から請求項7のいずれか一項に記載のバイオマス処理方法。
- 前記配合工程は、該配合工程が完了するまでに、1回又は2回以上の空気混入作業により前記含窒素バイオマスに酸素を供給する工程を備えることを特徴とする請求項1から請求項8のいずれか一項に記載のバイオマス処理方法。
- 前記配合工程において、含窒素バイオマスに泥炭がさらに配合されることを特徴とする請求項1から請求項9のいずれか一項に記載のバイオマス処理方法。
- 請求項1から請求項10のいずれか一項に記載のバイオマス処理方法に用いられるバイオマス用処理剤であって、脱窒機能を有するジオバチルス.サーモデニトリフィカンス、及び該ジオバチルス.サーモデニトリフィカンスによる含窒素バイオマスの発酵を促進する発酵促進材を含有することを特徴とするバイオマス用処理剤。
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