JP5286287B2 - 骨発達を促進するための組成物及び方法 - Google Patents

Description

関連出願への相互参照
[0001] 本出願は、その内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国仮特許出願番号６０／８９１，１７１（２００７年２月２２日出願）、及びＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５４７９６（２００８年２月２２日出願）に対する優先権を主張する。

[0002] 本発明は、哺乳動物において骨発達を促進するための組成物及び方法に関する。

[0003] 市販のペットフード（例、キャットフード）には、多くの異なる栄養必要量へ対処するように特に製剤化された組成物が含まれる。これらには、例えば、異なる品種タイプ、サイズ、及び身体状態のために設計された製剤が含まれる。それらには、動物の生活環の異なる段階におけるその栄養必要量に対処するように設計された製剤も含まれる。しかしながら、そのようなペットフード製剤の利用可能性にもかかわらず、動物の健康の他の側面に対処するための製剤及び方法を開発すべきニーズがある。

[0004] 動物は、骨折や関節脱臼が含まれる損傷を受け易い。動物はまた、骨粗鬆症や骨関節炎のような変性疾患を発症する場合がある。従って、そのような損傷及び変性疾患を阻害する組成物及び方法へのニーズがある。

[0005] 骨は代謝的に活発であり、カルシウムの定常的な吸収及び再堆積（redeposition）を受ける。これには、骨を取り除く（吸収）破骨細胞とそれを置き換える（堆積）する造骨細胞の連続的で協調的な作用が必要とされる。これは、「骨代謝回転」と一般に呼ばれている。正常な骨では、動物の骨格成長に続いて、ミネラル堆積がミネラル吸収と平衡状態にあるが、ある種の条件では、骨吸収が骨堆積を上回り、骨ミネラル含量の損失を生じる。骨吸収の増加を伴う高い骨代謝回転は、骨強度を損なう可能性があり、骨構造の希薄化をもたらす。これは、異常な骨微細構造と骨ミネラル化の低下を生じる場合がある。動物は、一般に、年齢が増すにつれて骨ミネラル含量を失い、骨減少症を生じ、そしてこの骨ミネラル含量の損失は骨粗鬆症の主因であり、これはより高い骨折傾向を引き起こす場合がある。動物には、骨ミネラル含量損失になる素因をもつ場合もあり、ここではそのような骨ミネラル含量損失が様々な疾患及び状態と関連する。骨損失を遅らせるか又は骨の再石灰化に役立つ食品やサプリメントが開発されてきた。しかしながら、動物が成熟するときにそのような状態を回避するように成長期の動物において骨形成を促進する組成物が含まれる、そのような組成物を開発することへの不断のニーズがある。

[0006] 当該技術分野では、骨脱離（desorption）には、カルシウムとリンが骨より遊離するので、骨アルカリホスファターゼ（「ＢＡＰ」）の増加が伴うことが一般に知られている。様々な材料の使用は、骨形成タンパク質及びマトリックスメタロプロテイナーゼが含まれる、骨維持又は骨形成に関与する遺伝子の発現に奏効する可能性がある。例えば、カルニチンの骨形成への使用が知られている。しかしながら、動物において骨形成を促進する他の組成物及び方法を開発する必要がある。

[0007] ある側面において、本発明は、動物において骨発達を促進するのに有用である組成物に関する。
[0008] 本発明には、
約０．１％〜約０．７％のＥＰＡ；
約５０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍのマンガン；及び
約０．５％〜約１．６０％のメチオニンを含んでなる、動物において骨発達を促進するのに有用なペット食品組成物、「組成物１．０」が含まれる。

[0009] 本発明には、以下の組成物も含まれる：
「組成物１．１」 約０．１％〜約０．７％のＤＨＡ、例えば、約０．１％〜約０．５％若しくは０．６％、例えば、約０．２％、約０．３％、又は約０．４％のＤＨＡを含んでなる「組成物１．０」；
「組成物１．２」 約２００〜約１２００ＩＵ／ｋｇのビタミンＥ、例えば、約５００ＩＵ／ｋｇ〜約１１００ＩＵ／ｋｇ、約７００、約８００、約９００、又は約１０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＥを含んでなる「組成物１．０」又は「組成物１．１」；
「組成物１．３」 約５０〜約５００ｐｐｍのビタミンＣ、例えば、約１００〜約４００ｐｐｍのビタミンＣ、例えば、約１５０、約１７５、約２００、又は約２２５ｐｐｍのビタミンＣを含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．２」のいずれかの組成物；
「組成物１．４」 約１００ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍのカルニチン、例えば、約２００、約３００、又は約４００ｐｐｍのカルニチンを含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．３」のいずれかの組成物；
「組成物１．５」 約２．５ｇ／１０００ｋｃａｌ〜約７ｇ／１０００ｋｃａｌのリジンを含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．４」のいずれかの組成物；
「組成物１．６」 約２４００ｐｐｍ〜約７５００ｐｐｍのコリン、例えば、約３０００、約４０００、約４５００、約４６００、約４６２５、約４６５０、約４７００、約５０００、又は約６０００ｐｐｍのコリンを含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．５」のいずれかの組成物；
「組成物１．７」 約０．１％〜約０．６％のＥＰＡ、例えば、約０．２％、約０．３％、約０．４％、又は約０．５％のＥＰＡを含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．６」のいずれかの組成物；
「組成物１．８」 約５０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍのマンガンを含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．７」のいずれかの組成物；
「組成物１．９」 約０．８％〜約１．６％のメチオニン、例えば、約１．３又は約１．４％のメチオニンを含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．８」のいずれかの組成物。

「組成物１．１０」 以下をさらに含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．９」のいずれかの組成物：
０〜約９０重量％の炭水化物；
約５〜約７０重量％のタンパク質；
約２〜約５０重量％の脂肪；
約０．１〜約２０重量％の総食物繊維；
０〜約１５重量％、又は約２〜約８重量％のビタミン、ミネラルと、動物の栄養必要量を支える多様な百分率における他の栄養素。

「組成物１．１１」 約５〜約５５重量％の炭水化物を含んでなる、「組成物１．１０」；
「組成物１．１２」 約２０〜約６０重量％のタンパク質、例えば、約３０〜約５５重量％のタンパク質を含んでなる、「組成物１．１０」又は「組成物１．１１」；
「組成物１．１３」 約５〜約４０重量％の脂肪、例えば、少なくとも約８％又は約９％〜約４０％の脂肪を含んでなる、「組成物１．１０」〜「組成物１．１２」のいずれか１つの組成物；
「組成物１．１４」 約１〜約１１重量％の総食物繊維を含んでなる、「組成物１．１０」〜「組成物１．１３」のいずれか１つの組成物；
「組成物１．１５」 約１０００〜約４０００ｐｐｍのタウリンを含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．１４」のいずれかの組成物；
「組成物１．１６」 約０．５％〜約６．０％のリノール酸、例えば、約２．５％〜約５％のリノール酸を含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．１５」のいずれかの組成物；
「組成物１．１７」 約１％〜約３％の総ｎ−３脂肪酸、例えば、約１．３％、約１．４％、約１．５％、又は約１．６％の総ｎ−３脂肪酸を含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．１６」のいずれかの組成物；
「組成物１．１８」 約１％〜約６％の総ｎ−６脂肪酸、例えば、３％〜５％、約３．５％、又は約４％の総ｎ−６脂肪酸を含んでなる、「組成物１．０」〜「組成物１．１７」のいずれかの組成物。

[0010] 本発明の組成物は、湿潤（ウェット）、乾燥（ドライ）、又は半乾燥（セミドライ）食品であってよい。
[0011] 本発明には、「組成物１．０」〜「組成物１．１８」のいずれか１つをネコ科動物へ投与することを含んでなる、該ネコ科動物において骨発達及び／又は関節健康を促進する方法、「方法２．０」が含まれる。

[0012] 本発明には、以下の方法も含まれる：
「方法２．１」 ネコ科動物が仔猫である、「方法２．０」の方法。
「方法２．２」 ネコ科動物が、「組成物１．０」〜「組成物１．１８」のいずれか１つを妊娠期に給餌した母猫（a queen）より産まれたものである、「方法２．０」又は「方法２．１」の方法。

「方法２．３」 ネコ科動物が子宮内にいる、「方法２．２」の方法。
「方法２．４」 「組成物１．０」〜「組成物１．１８」のいずれか１つを妊娠前に母猫へ給餌する、「方法２．２」の方法。

「方法２．５」 「組成物１．０」〜「組成物１．１８」のいずれか１つを妊娠期間の大部分の間母猫へ給餌する、「方法２．２」又は「方法２．４」の方法。
「方法２．６」 「組成物１．０」〜「組成物１．１８」のいずれか１つより本質的になる組成物を妊娠の前とその間に母猫へ給餌する、「方法２．２」〜「方法２．５」のいずれか１つの方法。

「方法２．７」 「組成物１．０」〜「組成物１．１８」のいずれか１つを離乳前に、例えば、まだ哺育の間に仔猫へ給餌する、「方法２．０」〜「方法２．６」のいずれか１つの方法。

「方法２．８」 「組成物１．０」〜「組成物１．１８」のいずれか１つを離乳後に仔猫へ給餌する、「方法２．０」〜「方法２．７」のいずれか１つの方法。
「方法２．９」 「組成物１．０」〜「組成物１．１８」のいずれか１つからなる食品組成物を仔猫へ給餌する、「方法２．８」の方法。

「方法２．１０」 組成物の有効量を動物へ投与する、「方法２．０」〜「方法２．９」のいずれか１つの方法。
「方法２．１１」 組成物を有効期間動物へ投与する、「方法２．０」〜「方法２．１０」のいずれか１つの方法。

本発明の他の特徴及び利点は、以下に続く実施例の詳細な説明を参考にして理解されよう。
[0013] また、本明細書に開示する組成物を成長期の動物へ、例えば、成長期の仔犬又は仔猫へ直接投与することに加えて、本組成物は、動物がまだ子宮内にある間、又は動物が乳幼児である間に動物の母獣へ投与してよいと考慮される。

[0014] 本発明の他の特徴及び利点は、以下に続く実施例の詳細な説明を参考にして理解されよう。

[0015] 本明細書に記載の発明は、それらが多様であり得るので、記載される特別な方法論、プロトコール、及び試薬に限定されないと考慮される。また、本明細書に使用する用語は、特別な態様について記載する目的だけのものであり、本発明の範囲を制限することを決して企図しないと理解されたい。

[0016] 他に定義しなければ、本明細書に使用するすべての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が通常理解するのと同じ意味を有する。さらに、本明細書に引用されるすべての参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本開示における定義と引用文献のそれとの間に抵触がある場合は、本開示が標準となる。

[0017] 本明細書において、そして付帯の特許請求項において使用するように、単数形の「ａ」、「ａｎ」（不定冠詞）及び「ｔｈｅ」（定冠詞）には、文脈が明らかに他に指示しなければ、複数の指示（reference）が含まれる。

[0018] 本発明は、あらゆる動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくは、伴侶動物に関する。用語「伴侶動物」は、ヒトと密接に関連して生きるあらゆる動物を意味して、限定されないが、あらゆる品種のイヌ科動物及びネコ科動物が含まれる。しかしながら、本明細書では、その食餌がヒトによって管理され得るあらゆる動物が本明細書に開示される製剤を給餌されることより利益を得る可能性があると考慮される。これらの動物には、例えば、家畜化された酪農動物（例、ウシ、ウマ、ブタ、等）、並びに捕獲状態にある（例えば、動物園、等において）非家畜化動物を含めてよい。好ましくは、動物は、ネコ科動物、仔猫又は成猫のいずれかである。

[0019] 本明細書に使用するように、特別な結果を達成するのに「有効な量」又は「有効量」、等の用語は、特に所望される生物学的結果を達成するのに有効であり得る、本明細書に記載するような化合物、材料、又は組成物の量を意味する。本明細書に考慮されるように、そのような結果には、例えば、子宮内で発育している間、及び／又は誕生後のその成長段階の間（例えば、生後６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、又は１５ヶ月まで）のいずれかでの動物の神経系の発達、骨及び関節の健康、免疫機能の強化、及び／又は健全な身体組成の向上が含まれる。そのように有効な活性は、例えば、動物が子宮内にいるか又は哺育されている間は、本発明の組成物の前記動物の母獣への投与によって、並びに、その成長期の間は動物への直接投与によって達成してよい。

[0020] 本明細書に使用するように、本明細書に記載されるような成長期の動物における特別な生体プロセス又は身体状態の「強化」は、成長期の動物の生体プロセス又は身体状態における、対照動物と比較した改善を意味する。そのようなプロセス又は状態の改善は、当業者により決定され得る。

[0021] 本明細書に使用するように、「成長期の動物の発育の強化」、「強化された成長」、又は「成長を促進すること」、等の用語は、本明細書に記載の生体プロセスが限定されずに含まれる、生物の成長及び発育に不可欠な生体プロセスが限定されずに含まれる、成長期の動物の１以上の生体プロセス及び／又は身体状態における全般的な改善、例えば、骨及び関節の健康、神経系及び免疫系の発達、及び体重増加（例えば、脂肪組織の代わりに除脂肪体重が増えること）を意味する。

[0022] 動物の「成長」生活期（ライフステージ）は、誕生又は離乳（ほぼ８週齢）〜約１歳の期間を意味する。
[0023] 本明細書に使用するように、用語「仔猫」は、典型的には誕生と１２ヶ月の間の年齢の未熟なネコ科動物を意味する。

[0024] 本明細書に使用するような「必須アミノ酸」は、生物によってデノボ（de novo）合成し得ないので、食餌に供給しなければならないアミノ酸を意味する。当業者には、生物の代謝に依存して、必須アミノ酸が種ごとに異なると理解されている。例えば、イヌ及びネコ（及びヒト）の必須アミノ酸は、フェニルアラニン、ロイシン、メチオニン、リジン、イソロイシン、バリン、スレオニン、トリプトファン、ヒスチジン、及びアルギニンであると一般に理解されている。さらに、タウリン（技術的にはアミノ酸ではないが、システインの誘導体）は、ネコの必須物であるとみなされている。バランスのとれた食餌は、すべての必須アミノ酸を提供することができるが、より不可欠であるいくつかの必須アミノ酸がある。そのうちの１つが欠乏した食餌では、たとえ他の必須アミノ酸が十分な量で存在していても、他の必須アミノ酸の有用性を制限するからである。

[0025] 当業者により理解されるように、「制限アミノ酸」は、食餌に不十分な量で存在するならば、たとえ他の必須アミノ酸が他のやり方で十分に多い量で存在していても、他の必須アミノ酸の有用性の制限をもたらすアミノ酸を意味する。リジンは、本明細書に開示する組成物において、制限必須アミノ酸である。従って、残りの必須アミノ酸は、所望の生物学的結果に影響を及ぼすのに重要であると決定されるリジンの量に関連して定量的に製剤化されるか又は「バランスをとる」。本明細書に使用するように、「バランスのとれたアミノ酸」は、最適な動物の成長及び発育を確保するためのエネルギーに対する必須アミノ酸、リジンの関係に関連する。

[0026] 本明細書に使用する「必須栄養素」は、身体によって合成し得ない、正常な身体機能に必要とされる栄養素を意味する。必須栄養素のカテゴリーには、ビタミン、食餌ミネラル、必須脂肪酸、及び必須アミノ酸が含まれる。当業者には、必須とみなされる栄養素が生物の代謝に依存して、種ごとに異なると理解されている。例えば、イヌ及びネコの必須栄養素には、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｂ１、Ｂ６、Ｂ１２、リボフラビン、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、カルシウム、リン、マグネシウム、ナトリウム、カリウム、コリン、鉄、銅、亜鉛、マンガン、セレン、及びヨウ素が含まれる。コリンは、一般的にはＢ複合ビタミンとみなされるので、準必須栄養素に含めてよい。

[0027] Ｌ−カルニチン（レボカルニチン）としても知られるカルニチンは、アミノ酸のリジン及びメチオニンより合成される四級アンモニウム化合物であり、脂肪酸の細胞質からミトコンドリアへの輸送に責任がある。

[0028] あらゆる理論や特別な作用機序に制限されずに言えば、本発明は、ある種の成分のペット食品組成物への添加とこれら組成物の動物への投与により、成長期の動物の骨の発達／健康、及び／又は関節の健康を強化することができるという驚くべき発見に基づく。データは、本発明の組成物を給餌した動物（又は、その母獣が妊娠中および離乳の前に本組成物で給餌されたが、その同腹仔の成長を通して継続された動物）がＢＡＰ及びデオキシピリジノリンの低下したレベルを明示することを示している。従って、１つの側面において、本発明は、本発明の組成物を動物へ投与することを含んでなる、前記動物において骨の発達を促進する方法に関する。増加した骨発達は、ＢＡＰ又はデオキシピリジノリンの低下レベルによって示される場合がある。従って、別の側面において、本発明は、本発明の組成物を動物へ投与することを含んでなる、動物においてＢＡＰ及び／又はデオキシピリジノリンのレベルを低下させる方法に関する。

[0029] Ｉ型コラーゲン組織は、動物において最も豊富なコラーゲン種の１つであり、石灰化した骨に見出される唯一のコラーゲン種であり、そこではそれがその組織マトリックスの９０％より多くを占める。さらに、Ｉ型コラーゲンは、関節のような結合組織において、他のコラーゲン種と一緒に見出される。Ｉ型コラーゲンのカルボキシ末端架橋連結テロペプチド（「ＩＣＴＰ」）は、Ｉ型コラーゲンのカルボキシ末端のテロペプチド領域である。このペプチドは、骨吸収と結合組織の分解に由来する。血清ＩＣＴＰ濃度の増加は、骨又は関節の材料の損失の指標であると考えられている。従って、１つの側面において、本発明は、本発明の組成物を動物へ投与することを含んでなる、前記動物において健康な骨及び関節を促進する方法に関する。別の側面において、本発明は、本発明の組成物を動物へ投与することを含んでなる、動物においてＩＣＴＰ（例えば、血清レベル）を低下させる方法に関する。

[0030] 本明細書に考慮されるように、本発明の組成物は、栄養的に完全でバランスの取れた動物飼育用組成物を含む。そのような組成物には、他の栄養素及び成分の中でも、健康推奨量のタンパク質、炭水化物、及び脂肪が含まれる。「栄養的に完全でバランスの取れた動物飼育用組成物」、並びに動物飼育用組成物に適した栄養素及び成分とその推奨量は、当業者に馴染みのものである（例えば、National Research Council, 2006（2006年度全米科学アカデミー）、「Nutritional Requirements for Dogs and Cats（イヌ及びネコの栄養必要量）」ナショナル・アカデミー・プレス、ワシントンＤ．Ｃ．又は Association of American Feed Control Officials 社の公報、「Nutritional Requirements for Dogs and Cats 2006（イヌ及びネコの栄養必要量、２００６年度版）」を参照のこと）。

[0031] 本明細書において、本明細書に開示する組成物はまた、抗酸化剤、添加剤、安定化剤、濃化剤、芳香剤、嗜好性向上剤、及び着色剤を当業者に馴染みの量及び組合せで含んでよいと考慮される。「抗酸化剤」は、フリーラジカルと反応するか、又はその産生を減少させてそれらを中和することが可能である物質を意味する。例には、限定されないが、β−カロテン、セレン、コエンザイムＱ１０（ユビキノン）、ルテイン、トコトリエノール、大豆イソフラボン、Ｓ−アデノシルメチオニン、グルタチオン、タウリン、Ｎ−アセチルシステイン、ビタミンＥ、ビタミンＤ、ビタミンＣ、フラボノイド、アントシアニンジン、及びリポ酸が含まれる。

[0032] あらゆる稠度（consistency）又は水分含量の食品が考慮されるが、好ましくは、本発明の組成物は、例えば、湿潤、半乾燥、又は乾燥の動物食品組成物であってよい。「湿潤」食品は、缶又はホイルバッグ入りで販売される食品を意味し、約７０％〜約９０％の水分含量を有する。「乾燥」食品は、約５％〜約１５％の水分含量の組成物を意味し、小片又はキブルの形態でしばしば製造される。半乾燥組成物は、約１５％〜約７０％の水分を有する組成物を意味する。本明細書においてまた考慮されるのは、中間的な含水稠度（moisture consistency）の組成物と、様々な稠度の成分、並びに１より多い稠度が含まれ得る成分を含んでよい組成物、例えば、軟らかで噛みごたえのある肉様の粒子、並びに外側のシリアル成分と内側のクリーム成分を有するキブルである。本明細書においてまた考慮されるのは、中間的な含水稠度の組成物と、様々な稠度の成分、並びに１より多い稠度が含まれ得る成分を含んでよい組成物、例えば、軟らかで噛みごたえのある肉様の粒子、並びに、例えば米国特許第６，５１７，８７７号に記載されるような、外側のシリアル成分と内側のクリーム成分を有するキブルである。

[0033] 以下の実施例は、本発明をさらに例示して、本発明を制限することを企図しない。全体を通して使用するように、範囲は、その範囲内にある個々の数値を記載するための簡略表記として使用する。範囲内のどの数値も、その範囲の末端として選択してよい。製剤について記載するとき、それらは、当該技術分野で一般的であるように、その成分に関して記載してよいが、これらの成分は、実際の製剤において、それが作製、保存、及び使用されるときに互いと反応する場合があり、そのような産物も記載の製剤に含まれると企図されると理解される。

[0034] 以下の実施例は、本発明の範囲内にある例示の態様をさらに記載して明示する。この実施例は、単に例示の目的のために示すのであって、多くのバリエーションが本発明の精神及び範囲より逸脱することなく可能であるので、本発明を制限するものと解釈してはならない。当業者には、本明細書に示して記載されるものに加えて、本発明の様々な修飾物が明らかなはずであり、それらは、付帯の特許請求項の範囲内にあると企図される。

実施例１
[0035] 成長期の動物の発育を強化するための製剤を本明細書において以下に開示する。これらの組成物は、「理想のタンパク質コンセプト」（Baker and Czarnecki-Maulden, 1991 Annu. Rev. Nutr. 11: 239-63）を考慮に容れて開発されている。

[0036] 「成長」生活期のための食品を開発する。これらの食品には、イヌ科動物の成長とネコ科動物の成長のための製剤が含まれる。これらの食品のための最低栄養推奨量、並びに試作食品用の目標値を以下の表１に収載する。

表１：仔猫用製剤の主要栄養素

実施例２
[0037] 試験には、４種の食品：実験製剤Ｘ、市販品Ａ、市販品Ａ１、及び市販品Ｂを使用する。この食品の組成を表２に提示する。市販品Ａ、Ａ１、及びＢの食品は、市販の供給源より入手可能である。市販品Ａ及びＡ１は、同じブランドの食品であるが、異なるロットで生産されている。

表２：母猫及び仔猫へ給餌する食品の栄養素分析

[0038] １９匹の母猫に製剤Ｘ又は市販品Ａを妊娠前の少なくとも２週間給餌する。母猫は、触診により妊娠を確定するまで群れ施設（group lodging）で維持してから、母獣用施設（maternity lodging）へ移す。市販品Ａを給餌した母猫からは４８匹の仔猫が産まれ、製剤Ｘを給餌した母猫からは１６匹の仔猫が産まれる。仔猫の誕生に続き、その母猫由来の仔猫は、離乳するまで同じ食品で飼育する。

[0039] 離乳に続き、市販品Ａを給餌した母猫から産まれた４８匹の仔猫を以下のように分けた：１６匹の仔猫に市販品Ａ１を給餌し；１６匹の仔猫に市販品Ｂを給餌し；そして１６匹の仔猫に製剤Ｘを給餌する。離乳に続き、製剤Ｘを給餌した母猫から産まれた１６匹の仔猫は、製剤Ｘで維持する。

[0040] 仔猫より血清試料を、離乳前、３、６、及び９月齢で採取して、使用まで凍結保存する。次いで、試料を融解して、Yamka, et al., Intern J Appl Res Vet Med, Vol4, No. 3, 2006 にすでに記載されたアッセイと表１２に提示するような市販アッセイへ処する。

表１２ 市販アッセイ

[0041] 離乳前の仔猫について、データを両側ｔ検定により解析すると、製剤Ｘ食品を給餌した母猫に由来する仔猫において、有意により低い濃度のＣ末端架橋連結テロペプチド（Ｐ＝０．０１４）とより低い（Ｐ＝０．０５１）濃度のＢＡＰが明示される（ここでは、その仔猫にも製剤Ｘを給餌した）。

[0042] 骨アルカリホスファターゼ−Ｇｌｏｂａｌ ＡＮＯＶＡは、３月齢での有意差を明示するが、６又は９月齢の時点では明示しない。このデータを市販品Ａ−市販品Ａ１の仔猫群と製剤Ｘ−製剤Ｘの仔猫群の間でのｔ検定によりさらに解析すると、製剤Ｘ−製剤Ｘ群のＢＡＰの有意により低い活性がすべての時点で明示される。

[0043] Ｉ型軟骨のカルボキシ末端ｃ−テロペプチド（ＩＣＴＰ）−Ｇｌｏｂａｌ ＡＮＯＶＡ解析は、群平均間の有意差を９月齢以外のすべての時点で明示する。製剤Ａを給餌した母獣に由来する３つの仔猫群の解析は、平均間の有意差を３月齢だけで明示する。製剤Ｘ−製剤Ｘ給餌群の市販品Ａ−市販品Ａ１給餌群に対するｔ検定による比較は、製剤Ｘ−製剤Ｘ群の有意に低い数値を６月齢以外のすべての測定時点で明示する（６月例では、Ｐ＝０．０５４）。

[0044] デオキシピロジニリン（ＤＰＤ）−Ｇｌｏｂａｌ ＡＮＯＶＡ解析は、平均間の有意差を３、６、及び９月齢で明示する。製剤Ａだけを給餌した母獣からの３つの仔猫群の解析は、同じ結果を生じる。製剤Ｘ−製剤Ｘの仔猫と市販品Ａ−市販品Ａ１の仔猫の間の個別ｔ検定比較は、有意差を３月齢と６月齢で明示して、製剤Ｘ−製剤Ｘ群は、この２つの時点でより低い数値を有する。

Claims (17)

1. 動物において骨形成を促進するためのペット食品組成物であって、
   ０．１％〜０．７％のＥＰＡ；
   ０．１％〜０．７％のＤＨＡ；
   ２．５％〜５．０％のリノール酸；
   １％〜３％の総ｎ−３脂肪酸；
   ２００〜１２００ＩＵ／ｋｇのビタミンＥ；
   ５０〜５００ｐｐｍのビタミンＣ；
   ５０ｐｐｍ〜２００ｐｐｍのマンガン；及び
   ０．５％〜１．６％のメチオニン
   を含んでなる、前記ペット食品組成物。
2. １００ｐｐｍ〜５００ｐｐｍのカルニチンを含んでなる、請求項１の組成物。
3. ２．５ｇ／１０００ｋｃａｌ〜７ｇ／１０００ｋｃａｌのリジンを含んでなる、請求項１又は２の組成物。
4. ２４００ｐｐｍ〜７５００ｐｐｍのコリンを含んでなる、請求項１〜３のいずれか１項の組成物。
5. ０．１％〜０．６％のＥＰＡを含んでなる、請求項１〜４のいずれか１項の組成物。
6. ５０ｐｐｍ〜１５０ｐｐｍのマンガンを含んでなる、請求項１〜５のいずれか１項の組成物。
7. ０．８％〜１．６％のメチオニンを含んでなる、請求項１〜６のいずれか１項の組成物。
8. 請求項１〜７のいずれか１項のペット食品組成物をネコ科動物へ、または該ネコ科動物が子宮内にいる間に該ネコ科動物の母猫へ投与することを含んでなる、該ネコ科動物において骨形成を促進する方法。
9. ネコ科動物が仔猫である、請求項８の方法。
10. ネコ科動物が、請求項１〜７のいずれか１項の組成物を給餌した母猫（a queen）より産まれたものである、請求項８又は９の方法。
11. ネコ科動物が子宮内にいる、請求項１０の方法。
12. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物を妊娠前に母猫へ給餌する、請求項１０又は１１のいずれか１項の方法。
13. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物を妊娠期間の大部分の間母猫へ給餌する、請求項１０〜１２のいずれか１項の方法。
14. 本質的に請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物のいずれか１つからなる組成物を妊娠の前とその間に母猫へ給餌する、請求項１０〜１３に記載の方法。
15. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物を離乳前に仔猫へ給餌する、請求項８〜１４のいずれか１項の方法。
16. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物を離乳後に仔猫へ給餌する、請求項８〜１５のいずれか１項の方法。
17. 請求項１〜７のいずれか１項の組成物を哺乳動物へ投与することを含んでなる、骨アルカリホスファターゼを阻害することによって骨形成を促進する方法。