CN101686712B - 增进成长中的动物的发育的组合物和方法 - Google Patents
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Abstract
公开了促进骨骼发育、增进神经发育、增进认知和运动技能、促进健康身体构成和/或降低成长中的动物的脂肪用的组合物和方法。
Description
对相关申请的交叉引用
本申请要求2007年2月22日提交的美国临时申请No.60/891,171的优先权，其内容经此引用并入本文。
发明领域
本发明涉及增进成长中的动物的发育的组合物和方法。
发明背景
市售的犬和猫食包括针对许多不同的营养需求专门配制的组合物。这些包括，例如，为不同品种类型、大小和身体状况设计的配方。它们也包括针对动物在其生命周期不同阶段的营养需求设计的配方。通常，这些阶段包括生命的成长期、成年期和老年期。例如，美国专利5,851,573公开了大型幼犬的宠物食品组合物；US 6,426,100公开了为成长中的动物提供改进的骨骼塑建和软骨细胞机能的组合物；US 6,582,752公开了性别专用的幼犬食品。尽管这类宠物食品配方可得，但是，仍然需要开发包含用于增进成长中的动物的发育的创新成分和营养素的其它配方。
骨骼是代谢活跃的，始终在进行钙的再吸收和再沉积。这要求破骨细胞的连续和协调作用以除去骨(再吸收)并用成骨细胞(osteblasts)替代其(沉积)。这一般被称作“骨转换”。在正常骨头中，在动物的骨骼生长后，矿物沉积与矿物再吸收平衡；但是，在某些情况下，骨再吸收作用超过骨沉积，以致骨矿物质含量损失。具有提高的骨再吸收作用的高的骨转换会危害骨强度，造成骨结构稀疏。这可能造成异常的骨微结构和降低的骨矿化。动物通常随年龄增加而损失骨矿物质含量，造成骨质减少并且是骨质疏松症的主要起因，这可能造成更高的骨折倾向。动物也可能有骨矿物质含量损失的倾向，因为骨矿物质含量损失与各种疾病和状况相关联。已经开发出延缓骨损失或有助于骨的复钙的食品和增补剂。但是，始终需要开发这样的组合物，包括促进成长中的动物的骨形成以在动物成熟时避免这类状况的组合物。
本领域公知的是，骨解吸伴随着骨碱性磷酸酶(“BAP”)的增加， 因为从骨中释放出钙和磷。各种材料的使用可能影响骨养护或骨形成中涉及的基因的表达，包括骨形态发生蛋白和基质金属蛋白酶。例如，肉毒碱在骨形成中的用途是已知的。但是，需要开发促进动物的骨形成的其它组合物和方法。
被视为超重和/或肥胖的动物增多，以致如今估计，在美国，25％至40％的伴侣动物被视为超重或肥胖。如果动物体重比其理想体重高超过10％，该动物被视为超重，如果其体重比其理想体重高超过15％，被视为肥胖。如果一动物的肋骨可以被触摸到但看不到，则该动物具有理想体重。动物肥胖症牵涉到提高的糖尿病、关节炎、胰腺炎、肝脂肪沉积、矫形失调症、心血管疾病、呼吸疾病、髋关节发育异常、肝病、肠胃失调症和皮肤问题的风险。
动物，如犬科和猫科动物是许多饮食方案和锻炼方案的对象，这些方案在控制体重方面最终无效。在热量降低的动物食品、低脂动物食品、不溶纤维增加的动物食品、低碳水化合物/高蛋白质动物食品和为体重控制而出售的其它食品的发展中已经取得进步。统计学仍表明，总体而言，仍有改进的可能并且在本领域中需要进一步进步。因此，需要用于改善动物的一般健康状况、降低脂肪和增加瘦肌肉的新型方法和组合物。
益智药是本领域中已知的，并通常包括改善认知和神经发育的药物和化合物。尽管益智药已经使用许多年，但一些药剂在食品中使用时是有毒或昂贵的。因此，需要开发出可有助于动物的神经发育且不提高制造成本的组合物和方法。优选可采用本领域中易得的成分改善神经发育，但在可认识和察觉到它们的优点之前，需要开发专门配方。
发明概述
在某些方面中，本发明涉及可用于增进成长中的动物的发育的组合物。本发明的组合物特别包含可增进成长中的动物的神经发育、骨发育和促进健康身体构成的一种或多种营养素或生物活性物质。在某些实施方案中，营养素和生物活性物质包括，但不限于，脂肪酸、抗氧化剂、必需营养素、氨基酸、矿物质和痕量元素、维生素和维生素类物质。本发明的另一些方面涉及增进成长中的动物的发育的方法，包括直接向成长中的动物和/或在动物在子宫内和/或在哺乳期的同时向所述动物的母亲施用有效量的本发明的组合物。
因此，在一个方面中，本发明涉及组合物1，可用于增进成长中的动物的发育的宠物食品组合物，其包含：
大约0.8至大约1.6％蛋氨酸，
大约50至大约200ppm锰，
大约0.1至大约0.5％DHA，
大约0.1至大约0.7％EPA，
大约2500至大约7500ppm胆碱。
本发明还包括下列组合物：
1.1包含大约1000至大约2000ppm牛磺酸的组合物1.0；
1.2包含大约2.5至大约6％亚油酸的组合物1.0或1.1；
1.3包含大约1至大约3％总n-3脂肪酸的任何前述组合物；
1.4包含大约50至大约1200IU/kg维生素E的任何前述组合物；
1.5包含大约50至大约500ppm维生素C的任何前述组合物；
1.6包含大约2.2至大约7g赖氨酸/1000kcal的任何前述组合物；
1.7包含0至大约90重量％碳水化合物的组合物1；
1.8包含大约5重量％至大约70重量％蛋白质，例如大约20％至大约50％，或大约22％至大约50％的组合物1.1或1.2；
1.9包含大约2重量％至大约50重量％脂肪的任何前述组合物；
1.10包含大约0.1重量％至大约20重量％总膳食纤维，例如大约1％至大约11％的任何前述组合物；
1.11以支持动物营养需求的各种(varying)百分比包含0至大约15重量％，例如大约2％至大约8％维生素、矿物质和其它营养素的任何前述组合物；
1.12包含大约5重量％至大约55重量％碳水化合物的任何前述组合物；
1.13包含大约20重量％至大约60重量％蛋白质的任何前述组合物；
1.14包含大约5重量％至大约40重量％脂肪，例如至少大约8％或大约9％至大约40％脂肪的任何前述组合物；
1.15包含大约200至大约1000IU/kg维生素E的任何前述组合物；
1.16包含大约2.5至大约7g赖氨酸/1000kcal的任何前述组合物；
1.17包含大约100ppm至大约500ppm肉毒碱的任何前述组合 物；
1.18作为狗食，例如幼犬食品的任何前述组合物。
本发明的另一实施方案是可用于促进成长中的动物的骨发育的宠物食品组合物，其包含大约0.1％至大约0.7％EPA(例如，大约0.1％至大约0.6％)、大约50ppm至大约200ppm锰(例如，大约50至大约150ppm)和大约0.5％至大约1.6％蛋氨酸(例如，大约0.8％至大约1.6％)。
本发明的另一实施方案是可用于促进动物的健康身体构成的宠物食品组合物，其包含大约0.1％至大约0.5％DHA、大约100ppm至大约500ppm肉毒碱和大约2.5g/1000kcal至大约7g1/000kcal赖氨酸。
本发明还包括方法2.0——促进在犬科动物中骨发育、增进神经发育、增进认知和运动技能、促进健康身体构成和/或降低脂肪的方法，包括对该犬科动物施用任一本发明的组合物，例如组合物1.0-1.18。
本发明还包括下列方法：
2.1方法2.0，其中该犬科动物是幼犬。
2.2方法2.0或2.1，其中该犬科动物由在妊娠过程中喂饲任一组合物1.0-1.18的母犬生出。
2.3方法2.2，其中该幼犬在子宫内。
2.4方法2.2，其中母犬在妊娠之前喂饲任一组合物1.0-1.18。
2.5方法2.2或2.4，其中母犬在大部分妊娠持续期间喂饲任一组合物1.0-1.18。
2.6任一方法2.2-2.5，其中母犬在妊娠之前和在妊娠过程中喂饲基本由任一组合物1.0-1.18构成的组合物。
2.7任一前述方法，其中该幼犬在断奶前，例如仍在哺乳期的同时喂饲任一组合物1.0-1.18。
2.8任一前述方法，其中该幼犬在断奶后喂饲任一组合物1.0-1.18。
2.9方法2.8，其中该幼犬喂饲由任一组合物1.0-1.18构成的食品组合物。
2.10任一前述方法，其中向该动物施用有效量的组合物。
2.11任一前述方法，其中向该动物施用该组合物有效时间。
也设想，除了向成长中的动物，例如向幼犬直接施用本文公开的组合物外，可以在该动物仍在子宫内的同时和/或在该动物在哺乳期的同时向该动物的母亲施用该组合物。
参照下列实例的详述理解本发明的其它特征和优点。
发明详述
本文所述的本发明预计不限于所述的具体方法、规程和试剂，因为这些可变。还要理解的是，本文所用的术语仅用于描述具体实施方案，而不是要以任何方式限制本发明的范围。
除非另行指明，本文所用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员一般理解的相同含义。此外，本文引用的所有参考文献全文经此引用并入本文。在本公开中的定义和引用的参考文献中的定义冲突的情况下，以本公开为准。如通篇所用，范围用于简述在该范围内的各个和每个值。可以选择该范围内的任何值作为该范围的界限。
除非文中清楚地另行指明，本文和所附权利要求中所用的单数形式“一”和“该”包括复数对象。
本发明涉及任何动物，优选哺乳动物，更优选伴侣动物。术语“伴侣动物”是指与人亲密生活在一起的任何动物，并包括，但不限于，任何品种的犬科动物和猫科动物。但是，本文中设想，饮食可受人控制的任何动物都可获益于喂饲本文公开的配方。这些动物可以包括，例如驯养农畜(例如，牛、马、猪等)以及圈养，例如在动物园等中的非驯养动物。该动物优选是犬科动物，例如狗。该犬科动物优选是成长中的犬科动物，例如幼犬。
本文所用的“有效...的量”或用于实现特定结果的“有效量”和类似术语是指可有效实现特别需要的生物学结果的本文所述的化合物、材料或组合物的量。本文设想的这类结果包括，例如，在子宫内和/或在其出生后的成长期(例如，根据该动物，例如犬科动物的物种和品种，最多一岁和更大)，动物的神经发育、骨和关节健康、免疫功能的增进和/或健康身体构成的增进。可以例如通过在该动物在子宫内或在哺乳期的同时向所述动物的母亲施用本发明的组合物以及通过在其成长期间向该动物直接施用来实现这种有效活性。
如本文所用，在如本文所述的成长中的动物中，特定生物学过程或身体状况的“增进”是指与对照动物相比，成长中的动物的生物学过程或身体状况的改善。这类过程或状况的改善可以由本领域技术人员确定。例如，神经发育的增进可以表现为与对照动物相比通过MRI光谱学 测得的更好的脑发育，和/或更好的认知和运动技能分数。骨发育的增进可以表现为例如与对照动物相比更低的骨碱性磷酸酶水平，和/或与对照动物相比更高的双重能量X-射线吸光测定法(DXA或DEXA)骨密度分数。也可以通过DXA评估成长中的动物的身体构成；可以在根据本发明的方法施以该组合物的动物中检验骨矿物质密度、骨矿物质含量、瘦体重、总脂肪量、脂肪量百分比、瘦肉和骨含量并与对照动物进行比较，其中与对照动物相比具有较低的体脂肪百分比的动物被视为具有健康的身体构成。
本文所用的“成长中的动物的发育的增进”或“增进的发育”和类似术语是指成长中的动物的一种或多种生物学过程和/或身体状况，包括但不限于，对生物体的成长和发育而言重要的生物学过程，包括但不限于，本文所述的生物学过程，例如骨和关节健康、神经和免疫系统发育和体重增加(例如瘦肌肉量而非脂肪组织的增加)的总体改善。
动物的“成长”生命阶段是指根据该动物的物种和品种从出生或断奶(大约8周大)到大约1岁或更大的期间。
本文所用的术语“幼犬”是指未成熟的犬科动物，通常在出生和12个月之间。
本文所用的“健康身体构成”是指成长中的动物的身体构成，包括正常的体脂肪百分比，例如大约25％的体脂肪，趋势是通过增加瘦肌肉量而非脂肪组织来增加体重。
本文所用的“必需氨基酸”是指不能由生物体重新合成并因此必须在饮食中提供的那些氨基酸。本领域技术人员理解的是，必需氨基酸根据生物体的代谢随物种而变。例如，通常理解的是，对狗和猫(和人)而言，必需氨基酸是苯基丙氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、苏氨酸、色氨酸、组氨酸和精氨酸。
如本领域技术人员理解的那样，“限制氨基酸”是指如果在饮食中的存在量不足则会造成其它必需氨基酸的效用受限(即使所述其它必需氨基酸原本以足够大的量存在)的氨基酸。赖氨酸是本文公开的组合物中的限制必需氨基酸。因此，相对于被确定为在影响所需生物结果方面至关重要的赖氨酸的量，定量调配或“平衡”其余的必需氨基酸。本文所用的“平衡氨基酸”是指必需氨基酸赖氨酸与确保最佳动物成长和发育所需的能量的关系。
本文所用的“必需营养素”是指正常人体运行所需的不能由身体合成的营养素。必需营养素的类别包括维生素、膳食矿物质、脂肪酸和氨基酸。本领域技术人员理解的是，被认为必需的营养素根据生物体的代谢随物种而变。例如，对狗和猫而言，必需营养素包括维生素A、D、E、K、B1、B6、B12、核黄素、烟酸、泛酸、叶酸、钙、磷、镁、钠、钾、氯、铁、铜、锌、锰、硒和碘。胆碱，通常被视为B族复合维生素，可以包含在半必需营养素中。此外，牛磺酸，尽管在技术上不是氨基酸而是半胱氨酸的衍生物，是猫的必需营养素。
肉毒碱，也称作L-肉毒碱(左卡尼汀)是由氨基酸赖氨酸和蛋氨酸合成的季铵化合物，并负责脂肪酸从胞质溶胶传输到线粒体。
不受任何理论或特定作用模式限制，本发明基于令人惊讶的发现，即将某些成分添加到宠物食品组合物中并向动物施用这些组合物可以增进成长中的动物的发育。例如，数据表明，喂饲本发明的组合物的动物(或在其母亲怀孕过程中和在其断奶前喂饲该组合物并继续贯穿幼仔的整个成长期的那些动物)表现出增进的神经发育、骨和关节健康并具有总体更健康的身体构成。
如本文设想的那样，本发明的组合物包含营养上完全和平衡的动物饲料组合物。在营养素和成分中，这类组合物包括推荐的健康量的蛋白质、碳水化合物和脂肪。“营养上完全和平衡的动物饲料组合物”以及适用于动物饲料组合物的营养素和成分及它们的推荐量是本领域技术人员熟悉的(参见，例如，National Research Council，2006NutritionalRequirements for Dogs and Cats，National Academy Press，Washington D.C.或the Official Publication of the Association of American Feed ControlOfficials，Inc.Nutrient Requirements for Dogs and Cats 2006)。
本文中设想，本文中公开的组合物也可以以本领域技术人员熟悉的量和组合包含抗氧化剂、添加剂、稳定剂、增稠剂、食用香料、适口性增强剂和着色剂。“抗氧化剂”是指能够与自由基反应或降低自由基的生成和中和自由基的物质。实例包括，但不限于，β胡萝卜素、硒、辅酶Q10(泛醌)、叶黄素、生育三烯酚类、大豆异黄酮、S-腺苷甲硫氨酸、谷胱甘肽、牛磺酸、N-乙酰半胱氨酸、维生素E、维生素D、维生素C、黄烷类、花色素和硫辛酸。
尽管设想了任何稠度或含湿量的食品，但本发明的组合物优选可以 例如是湿、半干或干的动物食品组合物。“湿”食品是指在罐头或箔袋中出售并具有大约70至大约90％含湿量的食品。“干”食品是指具有大约5至大约15％含湿量的组合物，并通常以小碎粒或粗粒形式制造。半干组合物是指具有大约15％至大约70％湿度的组合物。本文中还设想了具有中等湿稠度的组合物和可能包含各种稠度的组分以及可能具有超过一种稠度的组分的组合物，例如，软的耐嚼的肉状粒子以及具有外部谷类组分和内部奶油组分的粗粒。
本发明的另一方面涉及通过向动物施用有效量的本发明的组合物来增进成长中的动物的发育的方法。如上所述，“成长中的动物的发育的增进”是指成长中的动物的一种或多种生物学过程和/或身体状况，包括但不限于，对生物体的成长和发育而言重要的生物学过程，包括但不限于，本文所述的生物学过程，例如骨和关节生长、神经和免疫系统发育和健康体重增加的总体改善。本领域技术人员熟悉检测动物状况的方式并将该状况表征为与对照物相比改善或未改善。
在一个方面中，本发明涉及增进成长中的动物的神经发育的方法，包括向所述动物施用本发明的组合物。例如，神经发育的增进可以表现为与对照动物相比更好的认知和运动技能分数。例如，通过测量被施以本发明的组合物的成长中的动物的可训练水平并将其与合适的对照动物进行比较，可以检测神经发育状况。
在另一方面中，本发明涉及增进成长中的动物的骨和关节健康的方法，包括向所述动物施用本发明的组合物。骨和关节健康的增进可以表现为例如与对照动物相比更低的骨碱性磷酸酶水平，因为更低的骨碱性磷酸酶水平被认为表明降低的骨转换和因此更密骨生长倾向。此外，关节炎标记物，例如I型软骨的羧基末端c-端肽和脱氧-pyrodiniline的较低含量可能分别表明减少量的软骨损伤或骨损伤和转换。也可以使用双重能量X-射线吸光测定法(DXA)检测骨和关节健康，增进的骨和关节健康表现为与对照物相比更高的骨密度分数。
在另一方面中，本发明涉及增强成长中的动物的免疫功能的方法，包括向所述动物施用本发明的组合物。例如，具有增强的免疫功能提高的动物可被表征为是在抗原激发时表现出比对照物高的抗体响应的那些动物。
在另一方面中，本发明涉及促进成长中的动物的健康身体构成的方 法。通常，健康身体构成可以被视为具有正常的体脂肪百分比(例如，大约25％(对BCS＝3而言16-24％))和/或其中通过DXA测得的体脂肪百分比不超过27％的身体状况或在动物具有使用例如“Small AnimalClinical Nutrition”，第4版，第13章(ISBN 0-945837-05-4)中公开的方法或其对等物(使用其它传统技术测量身体状况分数)测得的不大于3的身体状况分数时的身体状况。通常，在动物生命的任何阶段中，由瘦肌肉量的增加引起的体重增加优于可归因于脂肪组织的积聚的重量增加。
在本文中设想，本发明的组合物可单独作为完全的营养平衡膳食施用于动物，或作为动物的总体健康程序的一部分与膳食增补剂、维生素和/或本领域技术人员熟悉的其它营养有益剂联合施用于动物。本发明的组合物也可用作兽用治疗产品。因此，该组合物可任选含有载体、稀释剂或赋形剂，它们对预期用途的适用性是本领域技术人员熟悉的。
也设想到，除了向成长中的动物，例如向成长中的幼犬或幼猫直接施用本文公开的组合物外，可以在该动物仍在子宫内的同时或在该动物在哺乳期的同时向动物母亲施用该组合物。
下列实施例进一步例证本发明且不是要限制本发明。要理解的是，当描述配方时，如本领域中常见的那样，它们可以以其成分描述，尽管这些成分在其制造、储存和使用时可能在实际配方中彼此反应，且所述配方旨在涵盖这些产物。
下列实施例进一步描述和验证本发明范围内的示例性实施方案。这些实施例仅用于举例说明而不应被视为本发明的限制，因为可以在不背离其精神和范围的情况下作出许多变动。除本文所示和所述的那些外，本发明的各种修改是本领域技术人员显而易见的且旨在落在所附权利要求内。
除非另行指明，本说明书中所用的所有百分比是干物质基础上的重量百分比。术语“干物质基础”是指除去组合物中的任何水分后该组合物中的组分浓度。
实施例1
在本文中公开用于增进成长中的动物的发育的配方。考虑“理想蛋白质概念”(Baker和Czarnecki-Maulden，1991Annu.Rev.Nutr.11：239-63)来开发这些组合物。
针对“成长”生命期开发食品。这些食品包括针对犬科动物成长和猫科动物成长的配方。这些食品的最低营养素推荐以及原型食品的目标值列在下表1中。
表1.幼犬配方的关键营养素
| 营养素 | 目标值 | 最小值 | 最大值 |
| 蛋白质，％ | 31.3 | 20 | 50 |
| 蛋氨酸，％ | 1.3 | 0.8 | 1.6 |
| 锰，ppm | 100 | 50 | 200 |
| DHA，％ | 0.23 | 0.1 | 0.5 |
| EPA，％ | 0.35 | 0.1 | 0.7 |
| 胆碱，ppm | 5190 | 2500 | 7500 |
| 牛磺酸，ppm | 1600 | 1000 | 2000 |
| 亚油酸，％ | 4.2 | 2.5 | 6 |
| 总n-3脂肪酸，％ | 1.51 | 1.0 | 3 |
| 维生素E，IU/kg | 870 | 200 | 1200 |
| 维生素C，ppm | 90 | 50 | 500 |
| 肉毒碱，ppm | 300 | 100 | 500 |
| 赖氨酸，g/1000kcal | 3.5 | 2.5 | 7 |
实施例2-研究设计
在本文描述的研究中使用五种食品。分析食品的营养素并列在表2中。
表2.该研究中所用的五种食品的分析的营养素状况的平均值
| 营养素 | 组合物H | 组合物P1 | 组合物P2 | 组合物E1 | 组合物E2 |
| 粗蛋白质，％ | 29.4 | 27.9 | 30.2 | 32.2 | 29.43 |
| 脂肪，％ | 17.6 | 14.2 | 15.1 | 21.4 | 16.42 |
| Ca，％ | 1.43 | 1.46 | 1.37 | 1.48 | 1.35 |
| P，％ | 1.2 | 0.96 | 1.02 | 1.12 | 1.24 |
| EPA，％ | 0.31 | ＜0.01 | ＜0.01 | 0.13 | 0.13 |
| DHA％ | 0.19 | 0.01 | ＜0.01 | 0.13 | 0.095 |
| 亚油酸，％ | 38 | 2.14 | 2.58 | 3.7 | 2.85 |
| 总n-3脂肪酸，％ | 1.4 | 0.19 | 0.12 | 0.49 | 0.35 |
| 总n-6脂肪酸，％ | 3.7 | 2.6 | 1.73 | 3.76 | 2.84 |
| 牛磺酸，％ | 0.14 | 0.08 | 0.08 | 0.18 | 0.15 |
| 肉毒碱，ppm | 312.1 | 无分析 | 无分析 | 32.2 | 无分析 |
| 蛋氨酸，％ | 1.3 | 0.52 | 0.6 | 0.78 | 0.6 |
| 胱氨酸，％ | 0.4 | 0.39 | 0.43 | 0.34 | 0.29 |
| 锰，％ | 945 | 64 | 62 | 61.1 | 52 |
| 维生素E，IU/kg | 816 | 43.8 | 60.5 | 300 | 311.6 |
| 维生素C，ppm | 168.6 | ＜10 | 无分析 | 11.6 | 无分析 |
| 胆碱，ppm | 4876 | 无分析 | 1822 | 3199 | 888 |
| 水分，％ | 6.09 | 7.44 | 6.6 | 6.6 | 7.18 |
组合物H是作为本申请的主题的组合物。其它四种组合物可购得。组合物P1和P2是相同品牌的食品，但在不同批次中制成。组合物E1和E2来自相同制造商，但组合物E1出售给小型犬，组合物E2出售给中型犬。
22个母犬被分成三组以在受孕之前接受组合物H、P1或E1至少10天。母犬集中饲养直至经由触诊确认怀孕，然后转移到产科住处。用与最初分配给母犬的食物相同的食物喂养来自该母犬的幼犬，直至幼犬断奶。在断奶后，随机选择喂饲组合物P1的母犬生下的48只幼犬，喂饲组合物E1的母犬生下的16只幼犬和喂饲组合物H的母犬生下的16只幼犬以进一步测试。
在断奶后，在来自喂饲组合物P1的母犬的48只幼犬中，备16只幼犬换成组合物H、P2或E2之一。在断奶后，来自喂饲组合物E1的母犬的16只幼犬换成组合物E2。在断奶后向来自喂饲组合物H的母犬的16只幼犬提供组合物H。
在10个月试验期中，定期提取血样以用于分析健康生物标志以及用于蛋白组和染色体组检验。在2、4、6、9和12个月大时通过DXA扫描狗以证明身体构成和骨密度的变化。此外，在2、4、6、9和12个月大，获取幼犬的网膜电流图以评估视网膜发育。在2、6和12个月大也进行脑成像研究以评估神经生长和发育。最后，在该研究全程中连续进行认知和运动技能测试以评估神经(认知和运动技能)发育。在该研究全程中，每周记录体重且每天记录圈养幼犬的食物摄取。
实施例3
犬科动物神经发育
在各种时间点用手持便携设备(包括小型Ganzfeld型刺激器)在实施例2的幼犬上进行网膜电流图(ERGs)。动物在暗处适应至少1小时，然后在红光下使用盐酸美托咪定(0.1mg/kg IM)和氯胺酮(5mg/kg IM)麻醉。使用托品酰胺1％(Tropicamide Ophthalmic Solution USP，AlconLab.Inc.，Fort Worth，Texas)使瞳孔最大扩张并用盐酸丙美卡因0.5％(Alcaine，Alcon Lab.Inc.，Fort Worth，Texas)眼部麻醉。在眼睛上放置Jet接触镜电极，并衬以甲基纤维素(Methocel，Ciba Vision，Grosswallstadt，Germany)。在枕部和距眼睛外眦大约0.5厘米处放置皮下铂针电极并分别充当接地电极和参比电极。该仪器的标准闪光(standard flash)(SF)(0log)是1.7cd s/m2，由白色LEDs产生。可以以0.3log步长从-3.0log到+1.2log单位改变闪光强度。对此研究中的暗视激发而言，与SF一起使用-3.0log、0log和+1.2log。在10分钟光适应(在室内使用普通荧光)后，在0和+1.2log进行适光记录，最后研究对30Hz闪烁光激发的响应。所有记录都存储在ERG装置上并随后输入计算机以便进一步评测。
第一ERG的分析以及初始位置辨别和反转(reversal)：在第一时间点(8周大)，仅对ERG和光谱学测量结果进行单一分析。基本原理在于，出生后食物组中的幼犬保持用母犬食物喂养直至到达试验机构。 由于在到达试验机构的大约一周内获取ERG和MRI数据，这些出生后的组被合并成单组(N＝48)。假定这些测量结果代表幼犬在到达试验机构之前接受的食物。
在第二时间点(4个月大)。使用ANOVA研究ERG。统计显著性要求0.05的显著性水平，但是，如果它们实现0.10的显著性水平，结果被表征为勉强显著。
通过方差分析(ANOVA)研究用于位置辨别和反转的认知数据，食物组充当对象之间的变量。统计显著性要求0.05的显著性水平，但是，如果它们实现0.10的显著性水平，结果被表征为勉强显著。
物体辨别和反转的统计分析：使用SPSS(version 10)进行统计分析。使用用GLM反复测量程序产生的三个方差分析(ANOVAs)检查物体辨别数据以评测五组之间的差异。对暗视和亮视试验而言，都用GLM选项分析30Hz ERG数据，而其余ERG数据在三个多变量ANOVAs(MANOVAs)中分析。在所有情况下，评估与GLM正规性和方差同质性的一致性，对前者而言，使用Shapiro-Wilk试验(显著性水平设为α＝.05)，对后者而言，使用Levene和(如果适当)Box试验(两者的α＝.001)。使用最减少显著背离数的无论哪种变换(平方根或对数)来解决不完全符合任一假说的情况，且如果该变换没有显著消除它们，则也将omnibus F试验的显著性水平降至α＝.025。由于ANOVA通常至少在方差非齐性方面是稳定的程序，校正偏差的这些努力可能使整个试验在性质上是保守的，即降低假阳性(I型误差)的可能性。同时，如下解决不正确地将真结论否决为不显著(II型误差)的可能性的随后提高：将在“典型”分析中标记的那些效应(其中p ≤.05)确定为“勉强显著”，由此仍有机会探测可能相关的其它结论。根据方差非齐性，用使用Tukey’s最小显著差(LSD)、Dunnett’s试验或Tamhane T2试验进行的成对研究进一步探测显著结果，并调节比较数(Bonferroni校正)。
认知和网膜电流图数据的结果表明，组合物H、E1和E2都可以改进幼犬的训练能力和学习能力，以及视网膜功能，无论是在繁殖前和在整个哺孔期和成长期向母犬喂食，还是在向母犬喂饲组合物P1时断奶后开始喂食。
对于来自仅喂饲组合物P1的母犬的喂饲三种食物之一的断奶后幼犬，在位置和反转分析中发现勉强显著的食物组效应[F(2，45)＝2.9922， p＝0.060245]。Post-hoc Fisher’s表明，与组合物P2相比，喂饲组合物H(p＝0.024683)和组合物E2(p＝0.074957)的组总体犯较少错误。ANOVA也揭示了高度显著的任务效应[F(1，45)＝81.4819，p＜0.001]，这是与初始学习相比，掌握反转时的错误增加的结果。另外，存在任务×分组(task bygroup)交互作用[F(1，45)＝5.1603，p＝0.009602]。对各任务进行独立的单因素ANOVAs以测定这种相互作用的性质。在位置任务中没有发现组效应；但是，在反转中发现显著的组效应[F(2，45)＝6.3878，p＝0.003614]。Post-hoc Bonferroni’s表明，喂饲组合物H(p＝0.00318)和组合物E2(p＝0.04129)的组与喂饲组合物P2的组相比在反转方面犯较少错误。检查在多反转期间掌握的反转数的分析显示出勉强显著的组效应[F(2，45)＝2.692，p＝0.078628]。Post-hoc Fisher’s表明，喂饲组合物H的组掌握比组合物P2(p＝0.067566)和组合物E2(p＝0.039307)组都多的反转。
断奶前的处理条件：这是与其母犬喂饲相同饮食的幼犬的认知比较。在位置和反转分析中发现显著食物组×任务相互作用[F(2，44)＝3.7114，P＝0.032400]和高度显著的任务效应[F(1，44)＝89.3907，p＜0.001]。任务效应是与位置问题相比，掌握反转时的错误增加的结果。对各任务进行独立的单因素ANOVAs以测定食物组×任务相互作用的性质。在位置任务中没有发现组效应；但是，在反转中发现显著的组效应[F(2，44)＝3.0436，p＝0.057807]。Post-hoc Fisher’s表明，喂饲组合物E2的组与组合物P2(p＝0.021493)和组合物H(p＝0.082970)相比在反转方面犯较少错误。在检查对多反转期间掌握的反转数的组效应的分析中没有发现任何效应。
在物体辨别规程中，幼犬在10个学习期中学习响应两个物体之一。在反转期中，调换获得奖赏的物体以便在反转期中奖赏之前中立的物体，且之前获得奖赏的物体不再与奖赏联系在一起。这些分析将初始学得表现(100次试验中的正确响应数)与反转试验分数进行比较。
断奶后唯一饮食的影响：当所有幼犬在母体期喂饲组合物P1然后换成其它食物时，对幼犬认知发育没有影响。
断奶前/断奶后饮食的影响：这是喂饲与母亲相同的食物的幼犬的比较。Post hoc比较表明喂饲组合物H的动物在初始学习期和喂饲组合物E2的狗在反转期中的勉强显著的(P＜0.1)表现提高(与组合物P1相比)。 因此，概括而言，认知效果的量级看起来随给定的任务和随喂饲方案而变，并在几种情况下达到统计显著性。
ERG结果也证实在断奶之前或之后喂饲包含添加的DHA的食物有助于提高成长中的幼犬的视网膜功能的结论。具体而言，初步调查表明，添加的DHA对母亲食物的影响在暗视力范围中b-波幅度的改进中是重要的。就母体影响而言，这种影响很好延续到断奶后的时期，并且也出现在将不含DHA的母亲食物后换成包含DHA的食物的幼犬中。这表明，DHA的添加改善视网膜杆的活性，这在低照度的情况下造成更好的视敏度。
实施例4
骨发育
在实施例2的幼犬中测试骨发育。数据表明，可以通过施用组合物H来降低骨转换，这可能造成更健康的骨发育。
在四个月时采集血清样品并冷冻。将样品解冻并如上所述(Yamka等人Intern J Appl Res Vet Med，第4卷，No.3，2006)和根据Metra BAPEIA，目录号8012，来自Quidel(San Diego，CA)进行检验。
骨碱性磷酸酶(BAP)的单因素方差分析表明在所有组中，与喂饲组合物P1-P2的幼犬相比，BAP的活性降低。这合理表明骨转换降低的可能性和产生更密骨骼的倾向。
实施例5
骨构成
使用LUNAR仪器(General Electric)在2、4、6、9和12个月大的麻醉下的实施例2的幼犬上进行双重能量x-射线吸光测定法。在这些时间点的每一个测定整个身体构成。测量的结果是骨矿物质密度、骨矿物质含量、瘦体重、总脂肪量、％脂肪量、瘦肉+骨含量。在各时间点进行ANOVA以测定组之间的显著差异。每周使用电子秤获得每个幼犬的体重。
结果：
出生到断奶的体重增加-喂饲组合物H的母犬生出的幼犬(平均 330克)比喂饲组合物P1(355克)或组合物E1(362克)的母犬生出的幼犬轻。在出生时，组之间的这种差异不明显，但在4周时，ANOVA接近P＝0.07的显著性。在断奶时，组之间存在显著的体重差异，其中来自喂饲组合物P1(3060克)或组合物E1(3080克)的母犬的幼犬在体重上明显大于来自喂饲组合物H的母犬的幼犬(2540克；P＜0.05)。对来自喂饲P1、H和E2的母犬的幼犬而言，平均每日体重增加分别为47、38和47克/天，组之间显著不同(P＜0.05)。
断奶(58天)到4个月大-如上所述在断奶时，组之间存在显著的体重差异。到4个月大时，如通过单因素ANOVA计算出的那样，幼犬平均体重之间存在显著差异：
P1母犬-P2幼犬 (P2-P2) 6194克平均
P1母犬-H幼犬 (P1-H) 5919克平均
P1母犬-E2幼犬 (P1-E2) 6106克平均
E1母犬-E2幼犬 (E1-E2) 6180克平均
H母犬-H幼犬 (H-H) 5106克平均
当通过双尾t-试验比较组时，据发现，组合物H-H组明显低于任一其它四组。其它四组无一彼此不同。
6个月大-在6个月大时，经由单因素ANOVA，组之间仍存在显著差异，其中组合物H-H组明显低于所有其它组：
P1母犬-P2幼犬 9544克平均
P1母犬-H幼犬 9153克平均
P1母犬-E2幼犬 9156克平均
E2母犬-E1幼犬 9025克平均
H母犬-H幼犬 7580克平均
在此期间的平均体重增加如下：
P1母犬-P2幼犬 54.1克/天平均
P1母犬-H幼犬 50.4克/天平均
P1母犬-E2幼犬 51.2克/天平均
E1母犬-E2幼犬 49.2克/天平均
H母犬-H幼犬 41.7克/天平均
通过单因素ANOVA，这显著不同(P＜0.05)。通过双尾t-试验进行的组比较表明组合物H-H组在生长速度方面明显低于P1-H、P1-P2或 P1-E2组且勉强不同于E1-E2幼犬组。
DEXA分析-在断奶时，在分配至最终食物组之前，在三组H、P1和E1上进行初始DEXA分析，并通过单因素ANOVA比较。随后在所有组(P1-P2、P1-H、P1-E2、H-H和E1-E2)上在大约4、6和9个月大时进行DEXA，并经由单因素ANOVA比较：
总脂肪
断奶初期：来自E1母犬的幼犬具有比来自喂饲P1的母犬的幼犬高的总脂肪，后者具有比来自喂饲H的母犬的幼犬高的总脂肪(组之间的显著差异(P＜0.05))。
4个月大：
·E1-E2＞P1-E2＞P1-P1＞P1-H＞H-H
·组之间显著差异(P＜0.05)
9个月大：
·E1-E2＞P1-P1＞P1-E2＞P1-H＞H-H
·喂饲组合物H的幼犬和来自喂饲组合物H的母犬的幼犬在9个月大时具有较低脂肪。组之间显著差异(P＜0.05)
脂肪百分比
断奶初期：
·E1＞P1＞H
来自喂饲组合物H的母犬的幼犬在断奶时具有较低的体脂肪百分比。组之间显著差异(P＜0.05)
4个月大：
·E1-E2＞P1-E2＞P1-P1＞P1-H＞H-H
·组之间显著差异(P＜0.05)
9个月大：
·E1-E2＞P1-E2＞P1-P1＞P1-H＞H-H
·喂饲组合物H的幼犬和来自喂饲组合物H的母犬的幼犬在9个月大时具有较低的体脂肪百分比。组之间显著差异(P＜0.05)
Claims (29)
1.用于促进犬科动物中骨发育、增进神经发育、增进认知和运动技能、促进健康身体构成和/或降低脂肪的宠物食品组合物，其包含：
0.8至1.6%蛋氨酸；
50至200 ppm锰；
0.1至 0.5% DHA；
0.1至0.7% EPA；和
2500至7500 ppm胆碱。
2.用于促进犬科动物中骨发育、增进神经发育、增进认知和运动技能、促进健康身体构成和/或降低脂肪的宠物食品组合物，其包含：
0.1 %至0.7% EPA；
50 ppm至200 ppm锰；和
0.5%至1.6%蛋氨酸。
3.用于促进犬科动物中骨发育、增进神经发育、增进认知和运动技能、促进健康身体构成和/或降低脂肪的宠物食品组合物，其包含：
0.10%至0.5% DHA，
100 ppm至500 ppm肉毒碱，和
2.2 g/1000 kcal至7 g/1000 kcal赖氨酸。
4.权利要求1-3中任一项的组合物，包含1000至2000 ppm牛磺酸。
5.权利要求1-3中任一项的组合物，包含2.5至6 %亚油酸。
6.权利要求1-3中任一项的组合物，包含1至3%总n-3脂肪酸。
7.权利要求1-3中任一项的组合物，包含50至1200 IU/kg维生素E。
8.权利要求1-3中任一项的组合物，包含50至500 ppm维生素C。
9.权利要求1-3中任一项的组合物，包含2.5至7g赖氨酸/1000 kcal。
10.权利要求1-3中任一项的组合物，包含0至90重量%碳水化合物。
11.权利要求1-3中任一项的组合物，包含5%至70重量%蛋白质。
12.权利要求1-3中任一项的组合物，包含2%至50重量%脂肪。
13.权利要求1-3中任一项的组合物，包含0.1%至20重量%总膳食纤维。
14.权利要求1-3中任一项的组合物，包含2.5至7g赖氨酸/1000 kcal。
15.权利要求1-3中任一项的组合物，包含100 ppm至500 ppm肉毒碱。
16.根据权利要求1-15任一项的组合物在制造用于促进犬科动物中骨发育、增进神经发育、增进认知和运动技能、促进健康身体构成和/或降低脂肪的药物中的用途。
17.权利要求16的用途，其中所述犬科动物是幼犬。
18.权利要求16或17的用途，其中所述犬科动物由在妊娠过程中喂饲权利要求1-15中任一项的组合物的母犬生出。
19.权利要求18的用途，其中所述幼犬在子宫内。
20.权利要求18的用途，其中所述母犬在妊娠之前喂饲根据权利要求1-15任一项的组合物。
21.权利要求18的用途，其中所述母犬在大部分妊娠持续期间喂饲根据权利要求1-15任一项的组合物。
22.权利要求18的用途，其中所述母犬在妊娠之前和在妊娠过程中喂饲基本由权利要求1-15任一项的组合物组成的组合物。
23.权利要求16-17中任一项的用途，其中所述幼犬在断奶前喂饲根据权利要求1-15任一项的组合物。
24.权利要求16-17中任一项的用途，其中所述幼犬在断奶后喂饲根据权利要求1-15任一项的组合物。
25.权利要求24的用途，其中所述幼犬喂饲由根据权利要求1-15任一项的组合物组成的食品组合物。
26.权利要求16的用途，其中所述组合物包含下列成分：
。
27.权利要求16的用途，其中所述组合物包含下列成分：
。
28.权利要求1的组合物，其包含下列成分：
。
29.权利要求1的组合物，其包含下列成分：
。
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