JP5209566B2 - invitroにおけるCD14陽性単球からの樹状細胞の産出 - Google Patents
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
- C12N2503/04—Screening or testing on artificial tissues
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
- C12N2503/04—Screening or testing on artificial tissues
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/11—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from blood or immune system cells
Description
(i)結合間質中に、間質性樹状細胞、及び任意でマクロファージ及び内皮細胞、又は、
(ii)上皮内にランゲルハンス細胞、
のいずれかを含む再生皮膚又は再生粘膜である三次元多細胞モデルである。
(i)結合間質中に、間質性樹状細胞、及び任意でマクロファージ及び内皮細胞、及び、
(ii)上皮内にランゲルハンス細胞、
の両方を含む再生皮膚又は再生粘膜である三次元多細胞モデルである。
−上皮内に位置してLCへ分化すること;
−結合間質(真皮又は絨毛膜)中に位置して、IDC、内皮細胞及びマクロファージに分化すること;並びに、
−生体内のLC、IDC、内皮細胞及びマクロファージと匹敵する機能を獲得すること;
ができる。
a)あらかじめ従来技術によって集めたCD14陽性単球を循環血液から分離すること、及び、
b)分離したCD14陽性単球をサイトカイン数種類を含む培地中で十分な時間培養して、LCとIDCの2種からなる集団を取得すること:
を含む方法に関する。
−間質細胞、特に繊維芽細胞を含む、コラーゲンを基盤とするゲル
−1種以上のグリコサミノグリカン類及び/又は必要に応じてキトサン(CNRSのEP0296078 A1、Coletica社のWO01/911821及びWO01/92322)を含んでいてよいコラーゲンから作られる多孔性マトリックスであって、間質細胞、特に繊維芽細胞を組み込むことができる多孔性マトリックス
−ヒアルロン酸(Hyalograft(R) 3D−Fidia Advanced Biopolymers社)及び/又はコラーゲン及び/又はフィブロネクチン及び/又は繊維素のゲル又は膜(例えば、Vitrix(R)(オルガノジェネシス社)等)
−真皮層から構成される真皮等価物(Michel M.ら;1999年 ;In Vitro Cell.Dev Biol.−Animal,vol.35,318−326)
−表皮を剥がした死んだ真皮
−合成半透膜、具体的にはニトロセルロース半透膜、ナイロン半透膜、テフロン(R)膜若しくはテフロン(R)スポンジ、ポリカーボネート若しくはポリエチレン若しくはポリプロピレン若しくはポリエチレンテレフタレート(PET)の半透膜、Anopore無機半透膜、酢酸セルロース若しくはセルロースエステル(HATF)の膜、Biopore−CM半透膜、ポリエステル半透膜、ポリグリコール酸の膜若しくは薄膜からなる群より選択される不活性な担体(上記群は、Skin2TMmodel ZK1100、Dermagraft(R)及びTranscyte(R)(Advanced Tissue Sciences社)等の製品を含む)であって、間質細胞、特に繊維芽細胞を組み込むことができる不活性な担体
から選択されることが好ましい(真皮又は絨毛膜の)マトリックス担体を含む。
−間質細胞、特に繊維芽細胞を含む、コラーゲンを基盤とするゲル
−1種以上のグリコサミノグリカン類及び/又は必要に応じてキトサン(CNRSのEP0296078 A1、Coletica社のWO01/911821及びWO01/92322)を含んでいてよいコラーゲンから作られる多孔性マトリックスであって、間質細胞、特に繊維芽細胞を組み込むことができる多孔性マトリックス
−ヒアルロン酸(Hyalograft(R) 3D−Fidia Advanced Biopolymers社)及び/又はコラーゲン及び/又はフィブロネクチン及び/又は繊維素のゲル又は膜(例えば、Vitrix(R)(オルガノジェネシス社)等)
−真皮層から構成される真皮等価物(Michel M.ら;1999年 ;In Vitro Cell.Dev Biol.−Animal,vol.35,318−326)
−表皮を剥がした死んだ真皮
−合成半透膜、具体的にはニトロセルロース半透膜、ナイロン半透膜、テフロン(R)膜若しくはテフロン(R)スポンジ、ポリカーボネート若しくはポリエチレン若しくはポリプロピレン若しくはポリエチレンテレフタレート(PET)の半透膜、Anopore無機半透膜、酢酸セルロース若しくはセルロースエステル(HATF)の膜、Biopore−CM半透膜、ポリエステル半透膜、ポリグリコール酸の膜若しくは薄膜からなる群より選択される不活性な担体(上記群は、Skin2TMmodel ZK1100、Dermagraft(R)及びTranscyte(R)(Advanced Tissue Sciences社)等の製品を含む)であって、間質細胞、特に繊維芽細胞を組み込むことができる不活性な担体。
−間質細胞、特に繊維芽細胞を含む、コラーゲンを基盤とするゲル
−1種以上のグリコサミノグリカン類及び/又は必要に応じてキトサン(CNRSのEP0296078 A1、Coletica社のWO01/911821及びWO01/92322)を含んでいてよいコラーゲンから作られる多孔性マトリックスであって、間質細胞、特に繊維芽細胞を組み込むことができる多孔性マトリックス
−ヒアルロン酸(Hyalograft(R) 3D−Fidia Advanced Biopolymers社)及び/又はコラーゲン及び/又はフィブロネクチン及び/又は繊維素のゲル又は膜(例えば、Vitrix(R)(オルガノジェネシス社)等)
−真皮層から構成される真皮等価物(Michel M.ら;1999年 ;In Vitro Cell.Dev Biol.−Animal,vol.35,318−326)
−表皮を剥がした死んだ真皮
−合成半透膜、具体的にはニトロセルロース半透膜、ナイロン半透膜、テフロン(R)膜若しくはテフロン(R)スポンジ、ポリカーボネート若しくはポリエチレン若しくはポリプロピレン若しくはポリエチレンテレフタレート(PET)の半透膜、Anopore無機半透膜、酢酸セルロース若しくはセルロースエステル(HATF)の膜、Biopore−CM半透膜、ポリエステル半透膜、ポリグリコール酸の膜若しくは薄膜からなる群より選択される不活性な担体(上記群は、Skin2TMmodel ZK1100、Dermagraft(R)及びTranscyte(R)(Advanced Tissue Sciences社)等の製品を含む)であって、間質細胞、特に繊維芽細胞を組み込むことができる不活性な担体。
プロトコール1:
GM−CSF、TGFβ1及びIL−13の存在下で2日間、その後GM−CSF及びTGFβ1の存在下で更に4日間、CD14陽性を懸濁液中で培養する→D6:(未分化で未熟な)LC前駆体
懸濁液中へのTNFαの添加(<18時間)→(分化して未熟な)LCが大部分
GM−CSF、TGFβ1及びIL−13の存在下で6日間、CD14陽性を懸濁液中で培養する→D6:(未分化で未熟な)IDC前駆体
懸濁液中へのTNFαの添加(<18時間)→(分化して未熟な)IDCが大部分
GM−CSF、TGFβ1及びIL−13の存在下で4日間、その後GM−CSF及びTGFβ1の存在下で更に2日間、CD14陽性を懸濁液中で培養する→D6:(未分化で未熟な)LC前駆体及びIDC前駆体
懸濁液中へのTNFαの添加(<18時間)→(分化して未熟な)LCとIDCの均一な混合集団
GM−CSF、TGFβ1及びIL−13の存在下で6日間、2日間、4日間又は6日間、CD14陽性を懸濁液中で培養する→D6:(未分化で未熟な)LC前駆体及びIDC前駆体
懸濁液中へのTNFαの添加(>20時間)→(分化し成熟していて、LC又はIDCのいずれでもない)活性細胞
−TNFαの添加は、LC前駆体及びIDC前駆体がLC及びIDCへ分化するのに必須ではないこと;及び、
−LC及びIDCに加えて、マクロファージ及び真皮/絨毛膜の内皮細胞が自動的に得られること:
が観察される。
・CD14陽性単球→D6:LC前駆体及び/又はIDC前駆体(=未分化で未熟な細胞)
・TNFαの添加(<18時間)→LC及び/又はIDC(=「分化した」未熟な細胞))
・TNFαの添加(>20時間)→LC又はIDCのいずれでもない成熟した細胞(=「成熟した活性」細胞)
・LC及び/又はIDC又は成熟した細胞への(Tリンパ球上に存在する)CD40リガンドの添加→「相互連結」細胞(=「成熟の最終段階」)
<末梢循環血液からのCD14陽性単球の分離方法>
1人以上の人間のドナーからの静脈血を、ヘパリンリチウムやクエン酸塩リン酸塩デキストラン(citrate phosphate dextran)等の従来の抗凝血薬を入れたヴァキュテーナー(vacutainer)又はビニール袋に採取することにより、末梢循環血液を集める。
−フィコール勾配を用いて遠心分離した後、循環血液の単核細胞を回収し、磁気ビーズを結合した抗体混合物(主として抗CD3、抗CD7、抗CD19、抗CD45RA、抗CD56、抗IgE)により間接的に標識する。
−磁気カラムを通した後、磁気標識されていない単球のみを溶出する。
<分離したCD14陽性単球を培養して、未分化で未熟な樹状細胞を得る>
実施例1で得られたCD14陽性単球を、約100万個/1mlの割合で、非働化(decomplemented)ウシ胎児血清を10%添加し、2種のサイトカイン、すなわちサイトカインGM−CSFを400国際単位/ml(IU/ml)及びサイトカインTGFβ1を10ng/mlの割合で最初から含んだRPMI1640培地中で培養する。
−in vitroにおいて発生した樹状細胞の約30〜50%は、Langerin(ランゲルハンス細胞の特異的マーカー)を細胞内レベルでしか発現しておらず、成熟のマーカーCD83、DC−LAMP及びCCR7を発現しない;
−in vitroにおいて発生した樹状細胞の約30〜50%は、DC−SIGN(間質性樹状細胞の特異的マーカー)を発現し、成熟のマーカーCD83、DC−LAMP及びCCR7を発現しない。
<分離したCD14陽性単球を培養して、間質性樹状細胞(IDC)へ選択的に分化できる未分化で未熟な樹状細胞を得る>
実施例1で得られたCD14陽性単球を、約100万個/1mlの割合で、非働化ウシ胎児血清を10%添加し、2種のサイトカイン、すなわちサイトカインGM−CSFを400IU/ml及びサイトカインTGFβ1を10ng/mlの割合で最初から含んだRPMI1640培地中で培養する。
−in vitroにおいて発生した樹状細胞の約60〜80%は、DC−SIGN(間質性樹状細胞の特異的マーカー)を発現する;
−DC−SIGN陽性細胞の集団は、マーカーCD68を強く発現するため、未熟である。
<分離したCD14陽性単球を培養して、ランゲルハンス細胞(LC)へ選択的に分化できる未分化で未熟な樹状細胞を得る>
実施例1で得られたCD14陽性単球を、約100万個/1mlの割合で、非働化ウシ胎児血清を10%添加し、2種のサイトカイン、すなわちサイトカインGM−CSFを400IU/ml及びサイトカインTGFβ1を10ng/mlの割合で最初から含んだRPMI1640培地中で培養する。
−in vitroにおいて発生した樹状細胞の約60〜80%は、Langerinを細胞内レベルで発現し、CCR6(MIP−3αの特異的受容体)を発現する;
−in vitroにおいて発生した樹状細胞は、MIP−3αによって強く化学誘引されてCCR6受容体の機能を示す;
−成熟のマーカーCD83、DC−LAMP及びCCR7を発現しないことから、in vitroにおいて発生した樹状細胞は未熟である。
<分離したCD14陽性単球を培養して、主として間質性樹状細胞を得る>
実施例1で得られたCD14陽性単球を、約100万個/1mlの割合で、非働化ウシ胎児血清を10%添加し、2種のサイトカイン、すなわちサイトカインGM−CSFを400IU/ml及びサイトカインTGFβ1を10ng/mlの割合で最初から含んだRPMI1640培地中で培養する。
−in vitroにおいて発生した樹状細胞の約60〜80%は、DC−SIGNを膜レベルで発現する;
−in vitroにおいて発生した樹状細胞は、間質性樹状細胞に特徴的なマンノース受容体を強く発現する;
−in vitroにおいて発生した間質性樹状細胞は、生体内の間質性樹状細胞と同一の機能的特徴を有する。
<分離したCD14陽性単球を培養して、主としてランゲルハンス細胞を得る>
実施例1で得られたCD14陽性単球を、約100万個/1mlの割合で、非働化ウシ胎児血清を10%添加し、2種のサイトカイン、すなわちサイトカインGM−CSFを400IU/ml及びサイトカインTGFβ1を10ng/mlの割合で最初から含んだRPMI1640培地中で培養する。
−in vitroにおいて発生した樹状細胞の約60〜80%は、Langerin(ランゲルハンス細胞の特異的マーカー)を膜レベルで発現し、ランゲルハンス細胞の超微細構造としての特異的マーカーであるBirbeck顆粒を示す;
−in vitroにおいて発生したランゲルハンス細胞は、生体内のランゲルハンス細胞と類似した機能を有する;すなわち、MIP−3αによって化学誘引されたり、IL−1βの影響を受けて、又は、TNPや2、4、6−トリニトロベンゼンスルホン酸等の強いアレルゲンによる感作を受けて遊走したりし得る。
<分離したCD14陽性単球を培養して、ランゲルハンス細胞と間質性樹状細胞の2種からなる均質な集団を得る>
実施例1で得られたCD14陽性単球を、約100万個/1mlの割合で、非働化ウシ胎児血清を10%添加し、2種のサイトカイン、すなわちサイトカインGM−CSFを400IU/ml及びサイトカインTGFβ1を10ng/mlの割合で最初から含んだRPMI1640培地中で培養する。
−in vitroにおいて発生した樹状細胞の約30〜50%が、Langerinを膜レベルで発現する;
−in vitroにおいて発生した樹状細胞の約30〜50%が、DC−SIGNを膜レベルで発現する;
−二重標識実験によって、発生した樹状細胞がLangerin陽性及びDC−SIGN陽性のいずれであるかを確認できる。
<分離したCD14陽性単球を培養して、主として活性化した成熟樹状細胞を得る>
実施例1で得られたCD14陽性単球を、約100万個/1mlの割合で、非働化ウシ胎児血清を10%添加し、2種のサイトカイン、すなわちサイトカインGM−CSFを400IU/ml及びサイトカインTGFβ1を10ng/mlの割合で最初から含んだRPMI1640培地中で培養する。
−in vitroにおいて発生した樹状細胞は、成熟のマーカーCD83、DC−LAMP及びCCR7(MIP−3βの特異的受容体)を発現する;
−in vitroにおいて発生した樹状細胞は、MIP−3βによって強く化学誘引されてCCR7受容体の機能を示す。
<遊走に関する懸濁単細胞モデル中における、主としてランゲルハンス細胞からなる集団の使用>
細胞の発生:実施例6参照
in vitroにおいて発生したランゲルハンス細胞の任意の攻撃(例えば微生物(例えば細菌性微生物)等の生物種の攻撃)に向かう走化能を、孔隙率8〜5μmの膜で分けた2つの区画を有する(基底膜を模倣したマトリックス(MatrigelTM型)で覆われていても覆われていなくてもよい)走化チェンバー、又は、ボイデンチェンバーを用いて、以下のプロトコールによって評価する。
−この細菌性の刺激の後に、ランゲルハンス細胞を、非働化ウシ胎児血清を2%(v/v)添加したRPMI1640培地0.5ml中に細胞2.5×105個の割合で、走化チェンバーの上室へ播種する;走化チェンバーの下室にはウシ胎児血清を2%添加したRPMI1640培地0.75mlをあらかじめ播種してある;
−37℃において1時間遊走させた後、走化チェンバーの下室へ遊走したランゲルハンス細胞(すなわち、走化チェンバー下室中の培地)を回収する;
−遊走したランゲルハンス細胞を、白色光顕微鏡により細胞を計数して定量する;
−結果を、走化率(すなわち、刺激されて遊走した細胞の割合を自発的に遊走した細胞の割合(ネガティブコントロール)で割ったもの)として示す。
<サイトカイン分泌に関する懸濁単細胞モデル中における、主として間質性樹状細胞からなる集団の使用>
細胞の発生:実施例5参照
任意の攻撃(例えば化学種(特にTNPや2、4、6−トリニトロベンゼンスルホン酸等のアレルゲン)の攻撃)に対する、in vitroにおいて発生した間質性樹状細胞のサイトカインタンパク質(例えばインターロイキン12(IL−12))分泌を、ELISA分析(固相酵素免疫測定法)を用いて以下のプロトコールにより定量することができる。
−この刺激の後、間質性樹状細胞を回収し、非働化ウシ胎児血清を10%添加し、2種のサイトカイン、すなわちサイトカインGM−CSFを400IU/ml及びサイトカインTGFβ1を10ng/mlの割合で最初から含んだRPMI1640培地1ml当たり細胞100万個の割合で、6ウェルプレートに播種する;
−37℃においてCO2を5%含んだ湿気のある空気中で48時間培養した後、間質性樹状細胞の培養上清を回収する;
−まず1200rpmで10分間遠心分離して細胞残屑を除去した培養上清を、ELISAに使用する;IL−12に対するELISAの手順については、製造者(R&D System社)提供の使用説明書を参照するとよい;
−結果をIL−12の濃度(ng/細胞100万個/ml)として示す。
<抗原取り込みの懸濁二細胞モデル中における、LCとIDCの2種からなる集団の使用>
細胞の発生:実施例7参照
LCとIDCの2種からなる本質的に均質な集団の利点は、生体内での場合と同様に互いに相互作用する可能性があるということである。in vitroにおいて発生したランゲルハンス細胞及び間質性樹状細胞の取り込み経路(すなわち抗原捕獲能)を、デキストラン及びフローサイトメトリーを用いて以下のプロトコールにより研究した。
−濃度2μg/mlの抗DC−SIGN抗体5μl、30分間、4℃;
−濃度1μg/mlの蛍光色素TRI−Color標識ヤギ抗マウス抗体10μl、30分間、4℃;
−1/20に希釈した正常なマウス血清を用いたブロッキング;
−濃度1μg/mlのフィコエリトリン標識抗Langerin抗体2μl、30分間、4℃;及び
−非働化ウシ胎児血清を1%添加したPBS(リン酸緩衝化生理食塩水)からなる取り込みバッファー500μlにFITCデキストランを1mg/ml溶解したもの;試験は37℃において、ネガティブコントロールは4℃において15分間反応させる
−FITCデキストランと反応させた後、細胞をフローサイトメトリーによって分析する;
−結果は、(ネガティブコントロールと比較して)陽性のランゲルハンス細胞及び間質性樹状細胞の百分率として、すなわち、デキストランを取り込んだ細胞の百分率として示す;
−ランゲルハンス細胞(Langerin陽性)の50〜70%がFITCデキストランを取り込み、間質性樹状細胞(DC−SIGN陽性)の60〜80%がFITCデキストランを取り込む。
<LC及びIDCの成熟経路を研究するための、懸濁二細胞モデル中におけるLCとIDCの2種からなる集団の使用>
細胞の発生:実施例7参照
6日目に、サイトカインTNFαを200IU/mlの割合で48時間添加する。
−抗DC−SIGN抗体(2μg/ml)5μl又は抗Langerin抗体(2μg/ml)10μlのいずれか、30分間、4℃;
−濃度1μg/mlの蛍光色素FITC(フルオレセインイソチオシアネート)標識ヤギ抗マウス抗体10μl、30分間、4℃;
−1/20に希釈した正常なマウス血清を用いたブロッキング;
−濃度1μg/mlの蛍光色素PE(フィコエリトリン)標識抗DC−LAMP抗体10μl、30分間、4℃;
−結果は、DC−LAMP陽性のLC及びDC−LAMP陽性のIDCの百分率として示す。
<未感作のTリンパ球に対する同種の刺激に関する懸濁単細胞モデル中における、活性化した成熟樹状細胞の集団の使用>
細胞の発生:実施例8参照
in vitroにおいて発生した成熟樹状細胞が相互連結樹状細胞の機能を獲得できるかどうか(すなわち、同種の未感作のTリンパ球の増殖を刺激できるかどうか)を調べるために、以下のプロトコールによって混合リンパ球反応を行った。
−活性化した樹状細胞を回収し、同種の未感作のTリンパ球と共に、ヒトAB型血清を10%添加したRPMI1640培地中で3日間培養する;活性化した樹状細胞125〜8000個を準備し、未感作のTリンパ球105個と共に培養する;
−混合リンパ球培養3日目に、活性5mCiのトリチウム化チミジン20μlを18時間添加する;
−結果を、活性化した樹状細胞の数(125〜8000個の範囲)を横軸、同種の未感作のTリンパ球へのトリチウム化チミジンの取り込み(cpm(カウント/分))を縦軸とするグラフに示す。
<共存培養における角質細胞及びLCの単層多細胞モデル>
細胞の発生:実施例4又は6参照
Cloneticsの培地(参照:KGM−2)を入れた6ウェルプレート型の培養皿内に角質細胞1×105個を播種し、角質細胞がコンフルエントになるまで浸漬培養する。コンフルエントになった時点で、実施例4又は6によりin vitroにおいて発生した樹状細胞1〜3×105個を添加する。更に3〜4日間、非働化ウシ胎児血清を10%添加し、2種のサイトカイン、すなわちサイトカインGM−CSFを400IU/ml及びサイトカインTGFβ1を10ng/mlの割合で最初から含んだRPMI1640培地中で培養する。
<共存培養における繊維芽細胞及び間質性樹状細胞の単層多細胞モデル>
細胞の発生:実施例3及び5参照
Hyclone IIウシ血清を10%、ペニシリンを100IU/ml及びゲンタマイシンを最終濃度20μg/ml添加したDMEM−Glutamax培地を入れた6ウェルプレート型の培養皿内に、繊維芽細胞1×105個を播種し、繊維芽細胞がコンフルエントになるまで浸漬培養する。コンフルエントになった時点で、実施例3又は5によりin vitroにおいて発生した樹状細胞1〜3×105個を添加する。更に3〜4日間培養する。
<上皮細胞及びランゲルハンス細胞を含む歯肉粘膜の再生表皮又は再生上皮の三次元多細胞モデル>
モデルは以下のプロトコールによって調製する。
−角質細胞又は上皮細胞1〜2×106個をボイデンチェンバー(膜の孔隙率は0.4μm)の挿入部に播種する;培養1日後に、実施例4によりin vitroにおいて発生した樹状細胞1〜3×105個を添加し、Hyclone IIウシ血清を10%、アスコルビン酸2−リン酸塩を最終濃度1mM、EGFを最終濃度10ng/ml、ヒドロコルチゾンを最終濃度0.4μg/ml、umulineを最終濃度0.12IU/ml、isuprelを最終濃度0.4μg/ml、トリヨードサイロニンを最終濃度2.10−9M、アデニンを最終濃度24.3μg/ml、ペニシリンを最終濃度100IU/ml、アンホテリシンBを最終濃度1μg/ml及びゲンタマイシンを最終濃度20μg/ml添加したDMEM−Glutamax/Ham F−12(比率3/1 v/v)培地中で3〜8日間浸漬培養する;
−その後、培養した角質細胞を、ウシ血清、ヒドロコルチゾン、isuprel、トリヨードサイロニン及びumulineを加えないこと以外は上記浸漬培養で用いたものと同じ培地中、12〜18日間気体界面に置く;
−その後、培養した上皮細胞を、ウシ血清の割合を10%から1%に減らす以外は上記浸漬培養で用いたものと同じ培地中で、12〜18日間浸漬培養を続ける。
<間質性樹状細胞、マクロファージ及び内皮細胞の集団を含む、再生真皮又は再生歯肉絨毛膜の三次元多細胞モデル>
細胞の発生:実施例3、4、5、6又は7参照
モデルを以下のプロトコールによって調製する:
−正常な人間の皮膚又は歯肉粘膜の繊維芽細胞2×105個を、Hyclone IIウシ血清を10%、アスコルビン酸2−リン酸塩を最終濃度1mM、EGF(表皮成長因子)を最終濃度10ng/ml、ペニシリンを最終濃度100IU/ml、アンホテリシンBを最終濃度1μg/ml及びゲンタマイシンを最終濃度20μg/ml添加したDMEM−Glutamax培地中、ジフェニルホスホリルアジドで架橋したコラーゲンを基盤とするマトリックス培養基上に播種する。培養14日後に、in vitroにおいて発生した樹状細胞1〜3×105個を、結合間質等価物上に播種し、更に14日間培養する。
<ランゲルハンス細胞、間質性樹状細胞、マクロファージ及び内皮細胞の集団を含む、再生皮膚の三次元多細胞モデル>
細胞の発生:実施例4又は6参照
モデルを以下のプロトコールによって調製する:
−正常なヒト皮膚繊維芽細胞2×105個を、Hyclone IIウシ血清を10%、アスコルビン酸2−リン酸塩を最終濃度1mM、EGF(表皮成長因子)を最終濃度10ng/ml、ペニシリンを最終濃度100IU/ml、アンホテリシンBを最終濃度1μg/ml及びゲンタマイシンを最終濃度20μg/ml添加したDMEM−Glutamax培地中、コラーゲン/グリコサミノグリカン/キトサンを基盤とする真皮培養基上に播種して、14日間培養する;
−その後、in vitroにおいて発生した正常なヒト角質細胞2×105個及び樹状細胞1〜3×105個を、Hyclone IIウシ血清を10%、アスコルビン酸2−リン酸塩を最終濃度1mM、EGFを最終濃度10ng/ml、ヒドロコルチゾンを最終濃度0.4μg/ml、umulineを最終濃度0.12IU/ml、isuprelを最終濃度0.4μg/ml、トリヨードサイロニンを最終濃度2.10−9M、アデニンを最終濃度24.3μg/ml、ペニシリンを最終濃度100IU/ml、アンホテリシンBを最終濃度1μg/ml及びゲンタマイシンを最終濃度20μg/ml添加したDMEM−Glutamax/Ham F−12(比率3/1 v/v)培地中、真皮等価物上に播種し、7日間浸漬培養する;
−その後、培養した細胞を、ウシ血清、ヒドロコルチゾン、isuprel、トリヨードサイロニン及びumulineを加えないこと以外は上記浸漬培養で用いたものと同じ培地中、14日間気体界面に置く;
−その後、培養した細胞をTissue−Teck(R)等の無定形の樹脂で覆い、液体窒素中で凍結する;
−厚さ6μmの凍結切片について、抗Langerin、抗DC−SIGN及び抗V−CAMモノクローナル抗体、並びに、Novocastra社製マクロファージマーカー(クローン3A5モノクローナル抗体NCL−MACRO)を用いて免疫組織化学的に調べ、存在する様々な細胞の種類を特定する;
−用いたマーカーにより、表皮中におけるランゲルハンス細胞(Langerin陽性)の存在、並びに、真皮中における間質性樹状細胞(DC−SIGN陽性)、マクロファージ(Novocastra社製マクロファージマーカー:クローン3A5モノクローナル抗体NCL−MACRO)及び内皮細胞(V−CAM陽性)の存在が明らかになった。
<ランゲルハンス細胞、間質性樹状細胞、マクロファージ及び内皮細胞の集団を含む、色素細胞を有する再生皮膚の三次元多細胞モデル>
モデルを、実施例18に記載のプロトコールにより調製し、in vitroにおいて発生した角質細胞及び樹状細胞と共にメラノサイト10000個を播種する。
<間質性樹状細胞、マクロファージ及び内皮細胞の集団を含む、再生皮膚の三次元多細胞モデル>
細胞の発生:実施例3、5又は7参照
モデルを、実施例18に記載のプロトコールに従って調製する。
<ランゲルハンス細胞、間質性樹状細胞、マクロファージ及び内皮細胞の集団を含む、再生膣粘膜の三次元多細胞モデル>
細胞の発生:実施例4又は6参照
モデルを、以下の変化を加えた実施例18に記載のプロトコールに従って調製する:角質細胞を膣上皮細胞に置き換え、繊維芽細胞は膣粘膜から採取し、全ての培養は浸漬培養として培地中で行う。
<間質性樹状細胞、マクロファージ及び内皮細胞の集団を含む、再生膣粘膜の三次元多細胞モデル>
細胞の発生:実施例3、5又は7参照
モデルを、以下の変化を加えた実施例18に記載のプロトコールに従って調製する:角質細胞を膣上皮細胞に置き換え、繊維芽細胞は膣粘膜から採取し、全ての培養は浸漬培養として培地中で行う。その後、培養した上皮細胞を、ウシ血清の割合を10%から1%に減らす以外は上記浸漬培養で用いたものと同じ培地中で、12〜18日間浸漬培養を続ける。
<実施例16、18、19又は20に記載するモデルのいずれかを使用して、LC/上皮環境の相互作用を調べる>
モデルを調製した後、E−カドヘリンを標識する。
接着分子E−カドヘリンの発現がランゲルハンス細胞及び上皮細胞上に見られることから、このタンパク質を介してランゲルハンス細胞と近隣の上皮細胞が好中球性の相互作用をしている可能性が示される。
<実施例16に記載する再生表皮モデルを使用して、UVB照射の影響を調べる>
様々な環境因子、特にUV照射、より正確には(大抵の場合表皮まで届く)UVB照射の影響を調べるため、以下のプロトコールに従って免疫組織化学に調べることにより、UVB照射後の再生表皮モデル中におけるランゲルハンス細胞の走化性及び表現型を評価した。
−表皮におけるランゲルハンス細胞の減少を視覚化するため、抗Langerinモノクローナル抗体を用いて免疫組織化学に調べる;
−再生表皮の表皮部中に残存するランゲルハンス細胞の表現型が変化していることが、抗CD1a、抗CCR6、抗HLA−DR、抗CD80、抗CD83、抗CD86、抗CCR7及び抗DC−LAMPモノクローナル抗体を用いることにより分かる。
<実施例20に記載する再生皮膚モデルを使用して、UVA照射の影響を調べる>
様々な環境因子、特にUV照射、より正確にはUVA照射が皮膚の真皮に及ぼす影響を調べるため、以下のプロトコールに従って免疫組織化学に調べることにより、UVA照射後の再生皮膚モデル中における間質性樹状細胞の表現型を評価した。
−抗DC−SIGN、抗凝固因子XIIIa、抗HLA−DR、抗CD80、抗CD83、抗CD86、抗CCR7及び抗DC−LAMPモノクローナル抗体を用いて免疫組織化学に調べることにより、再生皮膚試料の真皮部中に存在する間質性樹状細胞の表現型の変化が分かる。
<実施例18、19及び20のいずれかに記載する再生皮膚モデルを使用して、有効成分の影響を受けて分泌されたサイトカインの性質を調べる>
潜在的な感作性又はアレルギー性を評価し、人間の皮膚を対象とする有効成分の炎症性又は抗炎症性活性を評価するため、IL−1、IL−6、IL−8、IL−12、TNFα、INFγ等の炎症性サイトカイン、及び、IL−2、IL−10等の免疫抑制サイトカインの分泌量を、以下のプロトコールによるELISAによって定量した。
−サイトカインを2〜3日毎に14日間定量する。
<実施例16に記載する再生表皮モデルを使用して、アレルギー反応を調節できる有効成分をスクリーニングする>
アレルギー性ストレス誘導後の有効成分の免疫調整効果を、以下のプロトコールによって調べる:
−培養12日目に、濃度5mMのTNP(2、4、6−トリニトロベンゼンスルホン酸)300μlを、37℃において30分間、ボイデンチェンバーの上室へ添加する;
−この刺激の後、培地を、試験する有効成分を様々な濃度で含んでいてよい新しい培地で置き換え、更に2日間培養を続ける;
−培養14日後、ボイデンチェンバー(孔隙率8〜5μmの膜(MATRIGELTMで覆われていても覆われていなくてもよい))の下室へ遊走したランゲルハンス細胞の数を、光学顕微鏡で計数して定量する;培地を回収して遠心分離し、上清をIL−12(R&D System社)についてのELISA及びタンパク質の分析(BCA)に使用する;結果は、タンパク質1μg当たりのIL−12の量(ng)で示す。
<実施例18、19及び21のいずれかによって得られる再生皮膚モデル又は再生粘膜モデルを使用して、有効成分の免疫刺激活性や免疫抑制活性を調べ、免疫寛容を評価及び/又は誘発する>
ランゲルハンス細胞及び/又は間質性樹状細胞が有効成分に対して免疫応答及び/又は寛容応答を誘発するか又は誘発しないかを、ランゲルハンス細胞及び/又は間質性樹状細胞の表現型を以下のプロトコールによる三次元培養モデルにおいて免疫組織化学的に調べることによって評価した。
−細胞の表現型を、様々な抗体を用いて免疫組織化学的に調べる(実施例18及び24参照)。
<実施例10によって得られる主として間質性樹状細胞を含む懸濁モデルを使用して、有効成分の免疫刺激活性や免疫抑制活性を調べ、免疫寛容を評価及び/又は誘発する>
以下のプロトコールによって調べる:
−TNPで刺激した後、試験する有効成分を様々な濃度で含んでいてよい培地中で細胞を48時間培養する;培養終了後、間質性樹状細胞の表現型を、抗CD1a、抗CCR6、抗HLA−DR、抗CD80、抗CD83、抗CD86、抗CCR7及び抗DC−LAMPモノクローナル抗体を用いてフローサイトメトリーにより調べる。
<実施例21又は22に記載する再生粘膜モデルのいずれかを使用して、HIVによる感染を調べる>
以下のプロトコールによって調べる:
針を用いて35日間培養した再生粘膜中に、ウィルス懸濁液(濃度55ng(p24)/106の単細胞栄養(monocytotrophic)株HIV−1BaL)を直接注射したり置いたりすることによって感染させる。37℃において1晩培養後、培地で4回洗浄する。1週間培養を続けて、以下のように調べる:
−感染した再生粘膜の培養上清中のタンパク質p24の産生をELISAで測定することにより、ウィルスの複製を定量する(コールター/Immunotech社);
−DCの感染を、感染した再生粘膜の組織切片についてのin situ PCRによって監視する。gag遺伝子の特異的プライマーとしてSK38とSK39を用い、ジゴキシゲニン標識又は非標識dNTPの存在下で行う。PCR条件は、94℃において変性させ、95℃、55℃、72℃のサイクルを20回行う。PCRを行った後、アルカリフォスファターゼ標識抗DIG抗体と共に切片をインキュベートする。その後、その切片をメチルグリーンで染色する。
−in situ PCRの結果、感染した細胞が表皮中(ランゲルハンス細胞)及び真皮中(間質性樹状細胞)に存在することが分かる。
−このモデルは、ウィルスの感染、複製及び伝染の機構を調べ、(ワクチン、薬等を含む)治療法を研究し開発するためのツールとして使用することができる。
<無血清培地を用いた樹状細胞の懸濁液の調製−治療への適用>
CD14陽性培養は実施例2、3、4、5、6、7及び8と同様に行うが、ウシ胎児血清を10%添加したRPMI1640培地は、STEMBIO社製の特定の無血清培地に置き換える(StembioA:Sb A 100参照)。
Claims (35)
- CD14陽性単球から得られる間質性樹状細胞およびランゲルハンス細胞の少なくとも1つの混合集団であって、
(i)間質性樹状細胞、及び任意でマクロファージ及び内皮細胞は結合間質中に位置し、及び、
(ii)ランゲルハンス細胞は上皮内に位置する、
上記混合集団を含む再生皮膚又は再生粘膜である
三次元多細胞モデル。 - −繊維芽細胞を含む、コラーゲンを基盤とするゲル
−1種以上のグリコサミノグリカン類又はキトサンを含んでいてよいコラーゲンから作られる多孔性マトリックスであって、繊維芽細胞を組み込むことができる多孔性マトリックス
−ヒアルロン酸、コラーゲン、フィブロネクチン若しくは繊維素のゲル又は膜
−真皮層から構成される真皮等価物
−表皮を剥がした死んだ真皮
−合成半透膜、ニトロセルロース半透膜、ナイロン半透膜、テフロン(R)膜若しくはテフロン(R)スポンジ、ポリカーボネート若しくはポリエチレン若しくはポリプロピレン若しくはポリエチレンテレフタレート(PET)の半透膜、Anopore無機半透膜、酢酸セルロース若しくはセルロースエステル(HATF)の膜、Biopore−CM半透膜、ポリエステル半透膜、ポリグリコール酸の膜若しくは薄膜からなる群より選択される不活性な担体であって、繊維芽細胞を組み込むことができる不活性な担体
から選択される担体を含む
ことを特徴とする請求項1に記載の三次元多細胞モデル。 - ランゲルハンス細胞/間質性樹状細胞の混合物、及びランゲルハンス細胞/間質性樹状細胞/内皮細胞/マクロファージの混合物からなる群から選択されるいずれか一つを含む
ことを特徴とする請求項1又は2に記載の三次元多細胞モデル。 - 有効成分を研究又は選択するためのものである請求項1〜3のいずれか1項に記載の三次元多細胞モデル。
- 有効成分の免疫刺激活性や免疫抑制活性を研究したり、前記有効成分による免疫寛容を評価したり誘発したりするためのものである請求項1〜3のいずれか1項に記載の三次元多細胞モデル。
- 上皮関門の生理病理学;皮膚又は粘膜の刺激;ウィルス、レトロウィルス、細菌、カビ、微生物及び抗原粒子による攻撃;光毒性;光防御;化粧品や医薬品の有効成分の効果;及び、化粧品や医薬品の最終製品の効果を研究するための、並びに、病原体による感染機構を研究するためのものである請求項1〜3のいずれか1項に記載の三次元多細胞モデル。
- 病原体、ウィルス、レトロウィルス、細菌、カビ、微生物及び抗原粒子の存在を検出するためのものである請求項1〜3のいずれか1項に記載の三次元多細胞モデル。
- 医療的、生物医学的又は化粧的用途のために、免疫応答や寛容応答をin vitro又はin vivoにおいて調整するためのものである請求項1〜3のいずれか1項に記載の三次元多細胞モデル。
- 組織工学又は細胞工学的の用途のためのものである請求項1〜3のいずれか1項に記載の三次元多細胞モデル。
- 医療的又は生物医学的用途のためのものである請求項1〜3のいずれか1項に記載の三次元多細胞モデル。
- 免疫応答を刺激できるDCの注入といった抗癌性細胞療法;免疫寛容状態をつくることによる自己免疫疾患における細胞療法;免疫系に影響を及ぼす疾病の遺伝子治療;並びに、ワクチンの開発及び生産のためのものである請求項1〜3のいずれか1項に記載の三次元多細胞モデル。
- 末梢循環血液から分離したCD14陽性単球から、サイトカインGM−CSF、TGFβ及びIL−13を含む培地中で培養することによって行う分化によって得られる少なくとも1種のランゲルハンス細胞と間質性樹状細胞の混合集団に由来する、
(i)間質性樹状細胞、又は
(ii)ランゲルハンス細胞及び間質性樹状細胞、
のいずれかを含む、皮膚、粘膜、真皮、絨毛膜、表皮又は上皮である再生組織の三次元多細胞モデル。 - ランゲルハンス細胞および間質性樹状細胞の双方を含み、かつ組織が皮膚または粘膜である、請求項12に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。
- ランゲルハンス細胞と間質性樹状細胞は、調整した(preconditioned)未分化の細胞、分化した未熟細胞、成熟細胞又は相互連結細胞である
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - 分化の結果、マクロファージ型の細胞及び/又は内皮型の細胞等の、調整した(preconditioned)未分化の細胞又は分化した細胞の亜集団が更に少なくとも1種得られる
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - ランゲルハンス細胞と間質性樹状細胞の集団の配分は、サイトカインIL−13が存在することによって決まる
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - 培養は、ランゲルハンス細胞への分化に有利であるように、サイトカインIL−13の存在下で最長2日間行う
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - 培養は、間質性樹状細胞の形成に有利であるように、サイトカインIL−13の存在下で6日間行う
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - 培養は、ランゲルハンス細胞/間質性樹状細胞の2種からなる集団の形成に有利であるように、サイトカインIL−13の存在下で4日間行う
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - ランゲルハンス細胞及び間質性樹状細胞を更に分化させるためには、サイトカインTNFαの存在下で培養を行えばよい
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - TNFαの存在下における培養を、18時間未満の間行うことにより、活性化した成熟樹状細胞に成熟するのを避けながら、未熟なランゲルハンス細胞及び間質性樹状細胞を分化させる
ことを特徴とする請求項20に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - TNFαの存在下における培養を、20時間を超えて行うことにより、活性化した成熟樹状細胞に成熟させる
ことを特徴とする請求項20に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - サイトカインGM−CSFの濃度は0.1〜4000IU/mlであり、かつサイトカインTGFβの濃度は0.01〜400ng/mlである
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - サイトカインIL−13の濃度は、0.01〜400ng/mlである
ことを特徴とする請求項16に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - サイトカインTNFαの濃度は、0.1〜4000IU/mlである
ことを特徴とする請求項20に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - CD14陽性単球の抽出は新鮮な血液から行われ、すなわち、個体から血液を採取して24時間以内に実施される
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - CD14陽性単球の抽出は新鮮な血液から行われ、すなわち、個体から血液を採取した直後、又は5時間以内に実施される
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - 発生したランゲルハンス細胞及び間質性樹状細胞は生体内で見つかったものと同一の機能の表現型を有する
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - 前記ランゲルハンス細胞及び間質性樹状細胞の培養が、(i)上皮細胞、(ii)間質細胞、又は(iii)上皮細胞及び間質細胞のいずれかを含む三次元の培養モデルにおいて得られる
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - 上皮細胞及び間質細胞が明確に分離される場合、ランゲルハンス細胞は上皮細胞の領域に位置し、間質性樹状細胞は間質細胞の領域に位置する
ことを特徴とする請求項12又は13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - 内皮細胞及びマクロファージは、三次元の条件に置かれた場合に、培養に由来する特定の細胞からの分化によって得られる
ことを特徴とする請求項15に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - 完全な皮膚モデル又は粘膜モデルの中に組み込んだ時、繊維芽細胞及び上皮細胞からなる細胞の環境、並びに、間質の環境に基づいて、上皮内に位置してランゲルハンス細胞に分化したり、結合間質中に位置して間質性樹状細胞、マクロファージ及び内皮細胞に分化したりでき、かつ、生体内のランゲルハンス細胞、間質性樹状細胞、マクロファージ及び内皮細胞と匹敵する機能を獲得できるような調整した(preconditioned)未分化の細胞が得られる
ことを特徴とする請求項13に記載の再生組織の三次元多細胞モデル。 - CD14陽性単球の分化が:
a)あらかじめ集めたCD14陽性単球を末梢循環血液から抽出すること、及び、
b)分離したCD14陽性単球を、GM−CSF、TGFβ1及びIL−13を含む培地中で培養して、ランゲルハンス細胞と間質性樹状細胞の2種からなる集団を取得すること
を含むことを特徴とする、請求項1〜11のいずれか1項に記載の三次元多細胞モデル。 - ランゲルハンス細胞と間質性樹状細胞が三次元の細胞培養で培養される
ことを特徴とする請求項33に記載の三次元多細胞モデル。 - 角質細胞が表面上にある(deposited)
ことを特徴とする請求項34に記載の三次元多細胞モデル。
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DE602004031033D1 (de) * | 2003-10-09 | 2011-02-24 | Core Dynamics Ltd | Verfahren zum tiefgefrieren, auftauen und transplantieren von lebensfähigem knorpel |
WO2005072790A1 (en) * | 2004-02-02 | 2005-08-11 | I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. | Device for directional cooling of biological matter |
WO2005072523A2 (en) * | 2004-02-02 | 2005-08-11 | I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. | Biological material and methods and solutions for preservation thereof |
US7785806B2 (en) | 2004-04-28 | 2010-08-31 | Vaxdesign Corporation | Method for determining the immunogenicity of an antigen |
US8030070B2 (en) | 2004-04-28 | 2011-10-04 | Sanofi Pasteur Vaxdesign Corp. | Artificial lymphoid tissue equivalent |
US7709256B2 (en) | 2004-04-28 | 2010-05-04 | Vaxdesign Corp. | Disease model incorporation into an artificial immune system (AIS) |
US7855074B2 (en) | 2004-04-28 | 2010-12-21 | Vaxdesign Corp. | Artificial immune system: methods for making and use |
US8071373B2 (en) | 2004-04-28 | 2011-12-06 | Sanofi Pasteur Vaxdesign Corp. | Co-culture lymphoid tissue equivalent (LTE) for an artificial immune system (AIS) |
US7785883B2 (en) | 2004-04-28 | 2010-08-31 | Vax Design Corp. | Automatable artificial immune system (AIS) |
US7771999B2 (en) | 2004-04-28 | 2010-08-10 | Vaxdesign Corp. | Disease model incorporation into an artificial immune system (AIS) |
US8298824B2 (en) | 2004-04-28 | 2012-10-30 | Sanofi Pasteur Vaxdesign Corporation | Methods of evaluating a test agent in a diseased cell model |
WO2005120591A1 (en) * | 2004-06-07 | 2005-12-22 | I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. | Method for sterilization of biological preparations |
EP1778007A1 (en) * | 2004-08-12 | 2007-05-02 | I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. | Method and apparatus for freezing or thawing of a biological material |
EP1850661A2 (en) * | 2005-02-22 | 2007-11-07 | Interface Multigrad Technology (IMT) Ltd. | Preserved viable cartilage, method for its preservation, and system and devices used therefor |
WO2006127150A2 (en) | 2005-04-08 | 2006-11-30 | Argos Therapeutics, Inc. | Dendritic cell compositions and methods |
JP4792566B2 (ja) * | 2005-06-01 | 2011-10-12 | 財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 | 樹状細胞を含む三次元培養ヒト皮膚モデル |
WO2007015252A2 (en) | 2005-08-03 | 2007-02-08 | I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. | Somatic cells for use in cell therapy |
ATE495238T1 (de) * | 2005-12-21 | 2011-01-15 | Vaxdesign Corp | Iin vitro methode um eine potentielle reaktion eines tieres an einen agenten zu bestimmen |
EP1969366B1 (en) | 2005-12-21 | 2015-10-21 | Sanofi Pasteur VaxDesign Corporation | In vitro germinal centers |
EP2409714A1 (en) | 2006-06-27 | 2012-01-25 | Sanofi Pasteur VaxDesign Corporation | Models for vaccine assessment |
FR2905380B1 (fr) * | 2006-09-04 | 2008-12-05 | Engelhard Lyon Sa | Procede de production de cellules de langerhans et/ou de cellules de dentritiques interstitielles/dermiques a partir de monocytes cd14+ |
DE102007006736B4 (de) | 2007-02-07 | 2012-01-12 | Dagmar Briechle | In-vitro Testkit zur tierversuchsfreien Bestimmung des sensibilisierenden Potentials einer Substanz |
WO2009048661A1 (en) | 2007-07-16 | 2009-04-16 | Vaxdesign Corporation | Artificial tissue constructs comprising alveolar cells and methods for using the same |
US20090202978A1 (en) * | 2008-02-13 | 2009-08-13 | Ginadi Shaham | Method and apparatus for freezing of a biological material |
FR2962443B1 (fr) | 2010-07-06 | 2017-11-17 | Basf Beauty Care Solutions France Sas | Modele de tissu adipeux et procede de preparation |
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Family Cites Families (3)
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DE19839113A1 (de) * | 1998-08-27 | 2000-03-02 | Univ Ludwigs Albert | Verfahren zur Herstellung von dendritischen Zellen mit niedermolekularen Fragmenten der Hyaluronsäure |
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