JP5102076B2 - サッカロマイセス・セレビシエ変異株、及び該変異株を用いたrna高含有酵母の製造方法。 - Google Patents
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Description
さらに、特許文献1において開示されている酵母は、低温感受性であり、培養温度が30℃以下となると増殖性が低下するが、この増殖性がやや低下した培養条件下で培養することにより、該酵母菌体内にRNAを高蓄積させるものであり、増殖の至適条件とRNA蓄積の至適条件とが異なるという問題がある。
(2) また、本発明は、前記(1)記載のサッカロマイセス・セレビシエ変異株を培養し、当該変異株菌体内に、乾燥菌体重量当たり14重量%以上のRNAを含有させることを特徴とする、RNA高含有酵母の製造方法を提供するものである。
(3) また、本発明は、前記(1)記載のサッカロマイセス・セレビシエ変異株の培養物を提供するものである。
(4) また、本発明は、前記(1)記載のサッカロマイセス・セレビシエ変異株の培養物から調製した酵母エキスを提供するものである。
(5) また、本発明は、RNA含量が35重量%以上であることを特徴とする、前記(4)記載の酵母エキスを提供するものである。
(6) また、本発明は、イノシン酸(IMP)及びグアニル酸(GMP)の合計含量が20重量%以上であることを特徴とする、前記(4)記載の酵母エキスを提供するものである。
このようなサッカロマイセス・セレビシエ変異株は、例えば、以下のようにして取得することができる。
本発明者らは、まず、市販の酵母を含む約200株の入手可能なサッカロマイセス・セレビシエ酵母の、それぞれのRNA含有量を測定した。具体的には、各サッカロマイセス・セレビシエ酵母を、それぞれ10mLのYPD培地(2%ペプトン、1%酵母エキス、2%グルコース)に植菌し、30℃のインキュベーター中で一晩前培養した。得られた前培養液を初発菌数が1×107cells/mLとなるように50mLのYPD培地に植菌し、30℃のインキュベーター中で16時間、攪拌数200rpmで振とう培養した。得られた培養物から、菌体を回収し、該菌体中のRNA含有量を後記実施例1と同様にして測定した。
この結果、大部分の酵母中のRNA含有量は、乾燥菌体重量当たり約10重量%未満であり、10重量%以上であった株は5株であった。これらの5株に加え、対照として乾燥菌体重量当たり約10重量%未満であった1株を選抜した。
選抜された6株のそれぞれのRNA含有量を再度同じ方法により測定した。測定の結果得られた各酵母中のRNA含有量を表1に示す。
最もRNA含有量が高かったNo.6株は、一倍体酵母であり、安定性に問題があった。一方、No.6株の親株は、二倍体酵母であったが、非常に増殖性が悪く、工業上利用性に劣る酵母であった。
そこで、No.6株に対して、その親株を用いて戻し交配をすることにより、増殖性が良好であり、二倍体で安定なRNA高含有変異株を作製した。
具体的には、まず、No.6株の親株に対して四分子解析(Tetrad Analysis)を行い、増殖性が良好であり、かつRNA含有量が乾燥菌体重量当たり14重量%以上である胞子を選抜した。この選抜された胞子とNo.6株を掛け合わせて、再度四分子解析を行い、増殖が良好であり、かつRNA含有量が乾燥菌体重量当たり14重量%以上である胞子を選抜した。この選抜された胞子を、戻し交配終了株とした。
なお、各酵母のRNA含有量は後記実施例1と同様にして測定した。また、各酵母の増殖性は、培養後の培地を15,000rpmにおいて遠心分離処理し、沈殿として得られた菌体の乾燥重量から、培地100mL当たりに対する菌体濃度を算出し、判断した。
ABYC1591株は、RNA含量が乾燥菌体重量当たり14重量%以上であること以外は、サッカロマイセス・セレビシエの一般的な菌学的性質と同一である。
ABYC1591株を2%寒天含有YPD平板培地にて、30℃で2日間培養して得られたコロニーは、下記の形態的特徴を有する。
(1)大きさ:直径約2mm、(2)色調:白〜クリーム色、(3)形状:全縁で半レンズ状に隆起した円形、(4)表面形状:スムース、(5)透明度:不透明、(6)粘稠性:バター様。
まず、2%寒天含有YPD平板培地に、ABYC1591株を植菌し、30℃のインキュベーターにて一晩静置培養行い、継代培養プレートを作製し、4℃にて保存した。
該継代培養プレートから1白金耳のABYC1591株コロニーを採取し、50mLのYPD培地に植菌し、30℃で1晩培養したものを前培養液とした。その後、5L容量のジャーファーメンター(丸菱バイオエンジ社製)に、1.5LのYPD培地を入れ、さらに、前培養液を添加して、初発菌数が1×107cells/mLとなるように植菌し、30℃、撹拌数200rpm、通気量1vvmとして、回分培養を行った。回分培養時の培地中のpHは、アンモニア水を用いて4.5に維持した。
まず、分取した培養物を遠心分離処理することにより、含有されていた酵母を沈殿として回収し、蒸留水で洗浄した。その後、660nmの吸光度(OD660)が50〜100程度となるように適量の蒸留水を加えて懸濁したものを、測定サンプルとした。250μLの測定サンプルと、250μLの3.3Mの塩化ナトリウム溶液とを混合し、100℃で1時間加熱した。室温まで放冷後、750mLの蒸留水を添加したものをブランク溶液とした。
次に、150μLのブランク溶液に、200μLの0.1Mリン酸ナトリウムバッファー(pH5.3)、50μLの0.01M塩化亜鉛溶液、100μLの39.7U/mLヌクレアーゼP1溶液(ヤマサ社製)をそれぞれ添加し、60℃で2時間反応させて、該ブランク溶液中の核酸を分解した。分解後の溶液をサンプル溶液とした。
ブランク溶液とサンプル溶液の両液を、Ultrafree(登録商標)−MC遠心式フィルターユニット(10,000NMWL、ミリポア社製)を用いて限外濾過し、各溶液中の核酸含量を、HPLCを用いて測定した。核酸成分は2ナトリウム塩7水和物として計算した。なお、HPLCは、下記の条件にて行った。
HPLC装置:LC−10ADVP(島津製作所製)
カラム:日立ゲル#3013−N充填カラム
検出器:SPD−10AVP(島津製作所製)
移動相:67mM NH4Cl、10mM KH2PO4、20mM K2HPO4、6%アセトニトリル溶液
インジェクション:10μL
カラム温度:35℃
流量:1.0mL/min
検出波長:254nm
分析時間:30分間
まず、実施例1と同様にして、YPD培地にABYC1591株を植菌して培養し、培養開始後18時間目の培養物を得た。得られた培養物中のABYC1591株に含有されるRNA量を、実施例1と同様にして測定したところ、乾燥菌体重量当たり14.6重量%であった。
次に、この培養物を遠心分離処理することにより、含有されていた酵母を沈殿として回収し、蒸留水で洗浄した。その後、菌体濃度が10〜15%となるように適量の蒸留水を加えて酵母懸濁液を作成した。殺菌後、pH5となるように該酵母懸濁液を調製し、細胞壁溶解酵素を添加して、50℃で17時間保温した。その後、該酵母懸濁液を遠心分離処理することにより、上清エキスを回収し、pH5.5となるように調製後、RNA分解酵素及び脱アミノ酵素を添加して、50℃で17時間酵素反応を行った。80℃達温にて酵素を失活させた後、濾過・殺菌し、乾燥させて酵母エキスを調製した。
得られた酵母エキス中のRNA含量を、実施例1と同様にして測定したところ、43.4重量%であった。また、呈味成分であるイノシン酸及びグアニル酸の合計含量は24.4重量%であった。
この結果から、本発明のサッカロマイセス・セレビシエ変異株を用いることにより、RNA含量の高い良好な酵母エキスを調製し得ることが明らかである。
ABYC1591株に代えて、サッカロマイセス・セレビシエS288C株を用いた以外は、実施例1と同様にして、培養物を得た。得られた培養物中のS288C株に含有されるRNA量を、実施例1と同様にして測定したところ、乾燥菌体重量当たり8.5重量%であった。
次に、実施例2と同様にして、この培養物から酵母エキスを調製し、酵母エキス中のRNA含量を測定した。この結果、S288C株の培養物から調製された酵母エキス中のRNA含量は17.2重量%であり、呈味成分であるイノシン酸及びグアニル酸の合計含量は7.9重量%であった。
具体的には、両酵母エキスを、40度のお湯に対しそれぞれ1%になるように溶解し、酵母エキス溶解液を調製した。これらの酵母エキス溶解液を試飲したところ、実施例2の酵母エキス溶解液は、比較例1の酵母エキス溶解液に比べて、濃厚で旨味に深みがあった。
また、両酵母エキスを、市販コンソメスープに対しそれぞれ1%となるように添加した。この結果、実施例2の酵母エキス添加スープは、比較例1の酵母エキス添加スープに比べて、より旨味の深い良好な味を示した。
これらの結果は、実施例2の酵母エキスが、RNA含量とイノシン酸及びグアニル酸の合計含量において、比較例1の酵母エキスの2倍以上有しているためと推察される。
Claims (6)
- サッカロマイセス・セレビシエABYC1591株(FERM BP−10925)であることを特徴とする、サッカロマイセス・セレビシエ変異株。
- 請求項1に記載のサッカロマイセス・セレビシエ変異株を培養し、当該変異株菌体内に、乾燥菌体重量当たり14重量%以上のRNAを含有させることを特徴とする、RNA高含有酵母の製造方法。
- 請求項1に記載のサッカロマイセス・セレビシエ変異株の培養物。
- 請求項1に記載のサッカロマイセス・セレビシエ変異株の培養物から調製した酵母エキス。
- RNA含量が35重量%以上であることを特徴とする、請求項4記載の酵母エキス。
- イノシン酸(IMP)及びグアニル酸(GMP)の合計含量が20重量%以上であることを特徴とする、請求項4記載の酵母エキス。
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