JP5025887B2 - ラパマイシン類似体を含む医療装置 - Google Patents

Description

本出願は、参照してここに組み込まれる、１９９８年９月２４日に出願され、現在米国特許第６，０１５，８１５号となっている、米国特許願通し番号第０９／１５９，９４５号の分割出願である、１９９９年１１月２日出願の米国特許願通し番号第０９／４３３，００１号の一部継続出願である。

本発明は、免疫調節活性を有する新規化合物及びそれらの新規化合物の製造のために有用な合成中間体、特にマクロライド系免疫調節物質に関する。より特定すると、本発明は、ラパマイシンの半合成類似体、それらの製造のための方法、そのような化合物を含む医薬組成物、及びそれらを用いた治療の方法に関する。

化合物、シクロスポリン（サイクロスポリンＡ）は、臓器移植及び免疫調節の分野への導入によって広く使用されるようになり、移植処置の成功率の大きな上昇をもたらした。最近、強力な免疫調節作用を有するいくつかのクラスの大環状化合物が発見された。１９８６年６月１１日公開の欧州特許願第１８４，１６２号の中でＯｋｕｈａｒａらは、Ｓ．ツクバエンシス（ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）の系統から単離された２３員大環状ラクトンである免疫抑制剤ＦＫ−５０６を含む、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属から単離されたいくつかの大環状化合物を開示している。

Ｃ−２１位のアルキル置換基がＦＫ−５０６とは異なる、ＦＲ−９００５２０及びＦＲ−９００５２３などの他の関連天然産物がＳ．ヒグロスコピクス・ヤクシマナエンシス（ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ｙａｋｕｓｈｉｍｎａｅｎｓｉｓ）から単離されている。Ｓ．ツクバエンシス（ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）によって産生されるもう１つの類似体、ＦＲ−９００５２５は、ピペコリン酸部分がプロリン基で置換されている点がＦＫ−５０６とは異なる。腎毒性のような、シクロスポリン及びＦＫ−５０６に関連する望ましくない副作用の故に、局所的に有効であるが全身的には無効の免疫抑制剤（米国特許第５，４５７，１１１号）を含めて、改善された効果と安全性を有する免疫抑制性化合物の探索が続けられてきた。

ラパマイシンは、ストレプトミセス・ヒグロスコピクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）によって産生される大環状トリエン抗生物質であり、インビトロ及びインビボの両方で、抗真菌活性、特にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）に対して抗真菌活性を有することが認められた（Ｃ．Ｖｅｚｉｎａら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．１９７５，２８，７２１；Ｓ．Ｎ．Ｓｅｈｇａｌら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．１９７５，２８，７２７；Ｈ．Ａ．Ｂａｋｅｒら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．１９７８，３１，５３９；米国特許第３，９２９，９９２号；及び米国特許第３，９９３，７４９号）。

ラパマイシン単独（米国特許第４，８８５，１７１号）又はピシバニルと組み合わせたラパマイシン（米国特許第４，４０１，６５３号）は、抗腫瘍作用を有することが示されている。１９７７年に、ラパマイシンはまた、単独で、多発性硬化症についてのモデルである実験的アレルギー性脳脊髄炎モデルにおいて免疫抑制剤として有効であることも示され、ＩｇＥ様抗体の形成を有効に阻害することが明らかにされた（Ｒ．Ｍａｒｔｅｌら、Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９７７，５５，４８）。

ラパマイシンの免疫抑制作用はまた、ＦＡＳＥＢ，１９８９，３，３４１１の中で、組織不適合性げっ歯類において臓器移植の生存期間を延長させる能力を持つことが開示されている（Ｒ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．Ｒｅｓ．，１９８９，１７，８７７）。Ｔ細胞の活性化を阻害するラパマイシンの能力は、Ｍ．Ｓｔｒａｕｃｈ（ＦＡＳＥＢ，１９８９，３，３４１１）によって開示された。ラパマイシンのこれらやその他の生物学的作用はＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｒｅｖｉｅｗｓ，１９９２，６，３９−８７の中で総説されている。

ラパマイシンは、動物モデルにおいて新生内膜増殖を低減し、ヒトにおいて再狭窄の割合を低下させることが示された。ラパマイシンはまた、関節リウマチの治療のための薬剤としての選択を支持する特徴である抗炎症作用も示すことを明らかにした証拠が公表されている。細胞増殖と炎症の両方が、バルーン血管形成及びステント設置後の再狭窄病変の形成における原因因子であると考えられるので、再狭窄の予防のためにラパマイシン及びその類似体が提案された。

ラパマイシンの一エステル及び二エステル誘導体（３１位及び４２位でのエステル化）は、抗真菌薬として（米国特許第４，３１６，８８５号）及びラパマイシンの水溶性プロドラッグとして（米国特許第４，６５０，８０３号）有用であることが示されている。

ラパマイシン及び３０−脱メトキシラパマイシンの発酵と精製が文献の中で記述されている（Ｃ．Ｖｅｚｉｎａら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（東京）１９７５，２８（１０），７２１；Ｓ．Ｎ．Ｓｅｈｇａｌら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（東京）１９７５，２８（１０），７２７；１９８３，３６（４）、３５１；Ｎ．Ｌ．Ｐａｖｉａら、Ｊ．Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，１９９１，５４（１），１６７−１７７）。

ラパマイシンの数多くの化学修飾が試みられてきた。これらは、ラパマイシンの一及び二エステル誘導体（ＷＯ９２／０５１７９号）；ラパマイシンの２７−オキシム（ＥＰ０４６７６０６号）；ラパマイシンの４２−オキソ類似体（米国特許第５，０２３，２６２号）；ニ環式ラパマイシン（米国特許第５，１２０，７２５号）；ラパマイシン二量体（米国特許第５，１２０，７２７号）；ラパマイシンのシリルエーテル（米国特許第５，１２０，８４２号）；及びアリールスルホネート及びスルファメート（米国特許第５，１７７，２０３号）の製造を含む。ラパマイシンは最近、その天然に生じる鏡像異性形態で合成された（Ｋ．Ｃ．Ｎｉｃｏｌａｏｕら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９３、１１５、４４１９−４４２０；Ｓ．Ｌ．Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９３、１１５、７９０６−７９０７；Ｓ．Ｊ．Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９３、１１５、９３４５−９３４６）。

ラパマイシンは、ＦＫ−５０６と同様に、ＦＫＢＰ−１２に結合することが知られている（Ｓｉｅｋｉｅｒｋａ，Ｊ．Ｊ．；Ｈｕｎｇ，Ｓ．Ｈ．Ｙ．；Ｐｏｅ，Ｍ．；Ｌｉｎ，Ｃ．Ｓ．；Ｓｉｇａｌ，Ｎ．Ｈ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８９、３４１，７５５−７５７；Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｍ．Ｗ．；Ｇａｌａｔ，Ａ．；Ｕｅｈｌｉｎｇ，Ｄ．Ｅ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ、Ｓ．Ｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８９，３４１，７５８−７６０；Ｄｕｍｏｎｔ，Ｆ．Ｊ．；Ｍｅｌｉｎｏ，Ｍ．Ｒ．；Ｓｔａｒｕｃｈ，Ｍ．Ｊ．；Ｋｏｐｒａｋ，Ｓ．Ｌ．；Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｐ．Ａ．；Ｓｉｇａｌ，Ｎ．Ｈ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０，１４４，１４１８−１４２４；Ｂｉｅｒｅｒ，Ｂ．Ｅ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．；Ｂｕｒａｋｏｆｆ，Ｓ．Ｊ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１，２１，４３９−４４５；Ｆｒｅｔｚ，Ｈ．；Ａｌｂｅｒｓ，Ｍ．Ｗ．；Ｇａｌａｔ，Ａ．；Ｓｔａｎｄａｅｒｔ，Ｒ．Ｆ．；Ｌａｎｅ，Ｗ．Ｓ．；Ｂｕｒａｋｏｆｆ，Ｓ．Ｊ．；Ｂｉｅｒｅｒ，Ｂ．Ｅ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９１，１１３，１４０９−１４１１）。最近になって、ラパマイシン／ＦＫＢＰ−１２複合体は、ＦＫ−５０６／ＦＫＢＰ−１２複合体が阻害するタンパク質、カルシニューリンとは異なる、さらにもう１つ別のタンパク質に結合することが発見された（Ｂｒｏｗｎ，Ｅ．Ｊ．；Ａｌｂｅｒｓ，Ｍ．Ｗ．；Ｓｈｉｎ，Ｔ．Ｂ．；Ｉｃｈｉｋａｗａ，Ｋ．；Ｋｅｉｔｈ，Ｃ．Ｔ．；Ｌａｎｅ，Ｗ．Ｓ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ、Ｓ．Ｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９９４，３６９，７５６−７５８；Ｓａｂａｔｉｎｉ，Ｄ．Ｍ．；Ｅｒｄｊｕｍｅｎｔ−Ｂｒｏｍａｇｅ，Ｈ．；Ｌｕｉ，Ｍ．；Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．；Ｓｎｙｄｅｒ，Ｓ．Ｈ．Ｃｅｌｌ，１９９４，７８，３５−４３）。

経皮的経管的冠状動脈形成術（ＰＴＣＡ）は、１９７０年代にＡｎｄｒｅａｓ Ｇｒｕｎｔｚｉｇによって開発された。最初のイヌの冠状動脈拡張は１９７５年９月２４日に実施された；ＰＴＣＡの使用を示した試験は、翌年のアメリカ心臓学会の年次総会で発表された。その後まもなく、スイスのチューリッヒで初めてのヒト患者が試験され、続いてサンフランシスコとニューヨークで最初のアメリカ人の患者が検討された。この処置は、閉塞性冠状動脈疾患を有する患者の治療に関する介入的心臓学の現場を変えたが、それは長期的な解決法を提供することはできなかった。患者は血管閉塞に関連する胸痛の一時的な軽減を得たに過ぎず、しばしばこの処置の繰り返しが必要であった。再狭窄病変の存在はこの新しい処置の有用性を大きく制限すると判断された。１９８０年代後半に、血管形成術後の血管の開存性を維持するためにステントが導入された。ステントの設置は、今日、実施される血管形成術の９０％に関わっている。ステント導入以前は、再狭窄の割合はバルーン血管形成術で治療される患者の３０％から５０％にわたった。ステント内再狭窄の拡張後の再発率は、選択された患者のサブセットにおいて７０％の高さに上ることがあるが、新たなステントの設置の場合の血管造影での再狭窄率は約２０％である。ステント及び／又は設置は再狭窄率を１５％から２０％低下させた。このパーセンテージはおそらく、純粋に機械的なステント設置によって得られる最良の成績である。再狭窄病変は主として新生内膜肥厚によって引き起こされ、この新生内膜肥厚は、時間的経過及び組織病理学的像の両方においてアテローム性動脈硬化症とは明らかに異なる。再狭窄は、血管内腔に重大な衝撃を与える新生内膜組織を伴った、損傷した冠状動脈壁の治癒過程である。血管近接照射療法はステント内再狭窄病変に対して有効であると思われる。放射線療法は、しかしながら、実用性と費用の制限があり、また安全性及び耐容性についても長年にわたる疑問がある。

従って、再狭窄の割合を少なくとも現在のレベルの５０％低下させることが望ましい。介入装置の分野で、薬剤溶出ステントを製造し、評価することに多大の努力が注がれているのはこの理由からである。そのような装置は、もしそれらが成功すれば、主としてそのようなシステムは処置前後の処置又は慢性経口薬物療法の形態での補助療法を必要としないことから、多くの利点を有する。

本発明の１つの局面では、構造式：

によって表わされる化合物又は医薬適合性のその塩又はプロドラッグを開示する。

本発明のもう１つの目的は、発酵によって得られる出発物質からそのような化合物を製造するための合成方法、ならびにそのような合成方法において有用な化学的中間体を提供することである。

本発明のさらなる目的は、有効成分として上記化合物の少なくとも１つを含有する医薬組成物を提供することである。

本発明のさらにもう１つの目的は、再狭窄、移植後組織拒絶反応、免疫及び自己免疫機能不全、真菌増殖及び癌を含む、様々な疾患状態を治療する方法を提供することである。

もう１つの局面では、本発明は、その表面上に、例えば薬剤などの治療物質を含む被覆物を有する支持構造を含む医療装置を提供する。本発明における使用に適した医療装置のための支持構造は、冠状動脈ステント、末梢血管ステント、カテーテル、動静脈移植片、バイパス移植片及び血管系において使用される薬剤送達バルーンを含むが、これらに限定されない。本発明における使用に適した薬剤は、

又は医薬適合性のその塩又はプロドラッグを含むが、これらに限定されず、上記化合物は、

又は医薬適合性のその塩又はプロドラッグ（以下代替的にＡ−１７９５７８と称する）、及び

又は医薬適合性のその塩又はプロドラッグ；

又は医薬適合性のその塩又はプロドラッグ（以下代替的にＳＤＺ ＲＡＤ又は４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシンと称する）；

又は医薬適合性のその塩又はプロドラッグ（以下代替的にＡ−９４５０７と称する）
を含む。

本発明における使用に適した被覆物は、治療物質、すなわち薬剤が実質的にその中に可溶である何らかのポリマー材料を含有しうるポリマー被覆物を含むが、これらに限定されない。前記被覆物は、親水性、疎水性、生分解性、又は非生分解性でありうる。この医療装置は血管系における再狭窄を低減させる。Ａ−１７９５７８などの薬剤の直接冠状動脈送達は、再狭窄の割合を約０％から２５％のレベルに低下させると期待される。

（発明の詳細な説明）
（用語の定義）
ここで使用する、「プロドラッグ」の語は、例えば血液中で加水分解によって、インビボで上記式の親化合物に速やかに変換される化合物を指す。いずれも参照してここに組み込まれる、Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉとＶ．Ｓｔｅｌｌａ、「Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ」、ｔｈｅ Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ、第１４巻、及びＥｄｗａｒｄ Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編集、「Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ」Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，１９８７において詳細な考察が為されている。

ここで使用する、「医薬適合性のプロドラッグ」の語は、健全な医学的判断の範囲内で、不当な毒性、刺激及びアレルギー反応を伴わずにヒト及び下等哺乳類の組織と接触して使用するのに適しており、妥当な利益／危険度比に相応し、それらの意図される用途のために有効である本発明の化合物のプロドラッグ、ならびに可能な場合は、本発明の化合物の両性イオン性形態を指す。本発明の特に好ましい医薬適合性のプロドラッグは、本発明の化合物のＣ−３１ヒドロキシル基のプロドラッグエステルである。

ここで使用する、「プロドラッグエステル」の語は、生理的条件下で加水分解されるいくつかのエステル形成基のいずれかを指す。プロドラッグエステル基の例は、アセチル、エタノイル、ピバロイル、ピバロイルオキシメチル、アセトキシメチル、フタリジル、メトキシメチル、インダニル等、ならびに本発明の化合物のＣ−３１ヒドロキシル基への天然又は非天然に生じるアミノ酸のカップリングから誘導されるエステル基を含む。

「支持構造」の語は、１又はそれ以上の治療薬又は治療物質、例えば１又はそれ以上の薬剤及び／又は他の化合物を含みうる、医薬適合性の担体又は賦形剤を含有することができる又は支持することができる骨格（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ）を意味する。この支持構造は、典型的には金属又はポリマー材料で形成される。治療薬又は治療物質を含有することができる、生分解性ポリマーを含むポリマー材料で形成される適切な支持構造は、限定を伴わずに、参照してここに組み込まれる、米国特許第６，４１３，２７２号及び同第５，５２７，３３７号に開示されているものを含む。

（実施形態）
本発明の１つの実施形態では、式：

の化合物である。

本発明のもう１つの実施形態では、式：

の化合物である。

（本発明の化合物の製造）
本発明の化合物及び方法は、本発明の化合物を製造することができる方法を例示した下記の合成スキームと関連付けてより良く理解される。

本発明の化合物は様々な合成経路によって製造しうる。代表的手順をスキーム１に示す。

スキーム１に示すように、ラパマイシンのＣ−４２ヒドロキシルをトリフルオロメタンスルホネート又はフルオロスルホネート脱離基に変換することによってＡを得た。２，６−ルチジン又は、好ましくはジイソプロピルエチルアミンなどの障害型非求核性塩基の存在下に脱離基をテトラゾールで置換することによってエピマーＢ及びＣを生成し、それらをフラッシュカラムクロマトグラフィーによって分離し、精製した。

（合成方法）
下記の実施例を参照することにより、上記がより良く理解される。下記の実施例は本発明の化合物を製造しうる方法を例示するものであって、付属の特許請求の範囲において定義される本発明の範囲を限定することを意図しない。

４２−Ｅｐｉ−（テトラゾリル）−ラパマイシン（弱い極性の異性体）
（実施例１Ａ）
窒素ガス体下に−７８℃でジクロロメタン（０．６ｍＬ）中のラパマイシン（１００ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の溶液を２，６−ルチジン（５３μＬ、０．４６ｍｍｏｌ、４．３当量）及び無水トリフルオロメタンスルホン酸（３７μＬ、０．２２ｍｍｏｌ）で連続的に処理し、その後１５分間攪拌して、室温に温め、シリカゲル（６ｍＬ）のパッドを通してジエチルエーテルで溶出した。トリフレートを含む分画をプールし、濃縮して、表題化合物を琥珀色の泡として得た。

（実施例１Ｂ）
４２−Ｅｐｉ−（テトラゾリル）−ラパマイシン（弱い極性の異性体）
酢酸イソプロピル（０．３ｍＬ）中の実施例１Ａの溶液をジイソプロピルエチルアミン（８７ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−テトラゾール（３５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）で連続的に処理し、その後１８時間攪拌した。この混合物を水（１０ｍＬ）とエーテル（１０ｍＬ）に分配した。その有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗い、乾燥した（Ｎａ_２ＳＯ_４）。有機物を濃縮して粘性の黄色固体を得、それを、ヘキサン（１０ｍＬ）、ヘキサン：エーテル（４：１（１０ｍＬ）、３：１（１０ｍＬ）、２：１（１０ｍＬ）、１：１（１０ｍＬ））、エーテル（３０ｍＬ）、ヘキサン：アセトン（１：１（３０ｍＬ））で溶出するシリカゲル（３．５ｇ、７０−２３０ｍＬ）でのクロマトグラフィーによって精製した。異性体の１つはエーテル分画中で収集した。

ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ ９６６（Ｍ）⁻；

４２−Ｅｐｉ−（テトラゾリル）−ラパマイシン（より強い極性の異性体）
（実施例２Ａ）
４２−Ｅｐｉ−（テトラゾリル）−ラパマイシン（より強い極性の異性体）
実施例１Ｂにおけるヘキサン：アセトン（１：１）移動相を用いたクロマトグラフィーカラムから、よりゆっくりと移動するバンドを収集して、表題化合物を得た。

ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ ９６６（Ｍ）⁻。

生物活性のインビトロアッセイ
本発明の化合物の免疫抑制活性を、ラパマイシン及び２つのラパマイシン類似体；４０−ｅｐｉ−Ｎ−［２’−ピリドン］−ラパマイシン及び４０−ｅｐｉ−Ｎ−［４’−ピリドン］−ラパマイシン（いずれも米国特許第５，５２７，９０７号に開示されている）と比較した。Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｎ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ，ＸＩＸ（５）：３６−３９、Ｓｕｐｐｌ．６（１９８７）の中でＫｉｎｏ，Ｔ．らによって述べられているヒト混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを用いて活性を測定した。アッセイの結果は、表１に示すように、本発明の化合物がナノモル濃度で有効な免疫モジュレーターであることを明らかにしている。

実施例１及び実施例２の薬物動態を、カニクイザル（１群当り３匹）における２．５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与後に特徴付けた。各々の化合物は、２０％エタノール：３０％プロピレングリコール：２％クレモホルＥＬ：４８％の水媒質中５％デキストロースにおける２．５ｍｇ／ｍＬ溶液として調製した。１ｍＬ／ｋｇの静脈内用量を、緩徐ボーラス（〜１−２分間）としてサルの伏在静脈に投与した。投与前及び投与後０．１（ＩＶのみ）、０．２５、０．５、１、１．５、２、４、６、９、１２、２４及び３０時間目に、各々の動脈の大腿動脈又は静脈から血液試料を採取した。ＥＤＴＡで防腐した試料を十分に混合し、その後の分析のために抽出した。

血液のアリコート（１．０ｍＬ）を、内標準を含む水（０．５ｍＬ）中の２０％メタノールで溶血した。溶血した試料を酢酸エチルとヘキサンの混合物（１：１（ｖ／ｖ）、６．０ｍＬ）で抽出した。その有機層を、室温で窒素流下に蒸発乾固させた。試料をメタノール：水（１：１、１５０μＬ）中で再形成した。紫外吸収検出を伴う逆相ＨＰＬＣを用いて表題化合物（５０μＬ注入）を夾雑物から分離した。操作期間中を通じて試料を低温（４℃）に保持した。各々の試験からのすべての試料をＨＰＬＣで単一バッチとして分析した。

実施例１、実施例２及び内標準の曲線下面積（ＡＵＣ）の測定は、Ｓｃｉｅｘ ＭａｃＱｕａｎ（登録商標）ソフトウエアを用いて実施した。検量線は、ピーク面積比（親薬剤／内標準）対理論的濃度の最小二乗線形回帰を用いてスパイク血液標準のピーク面積比から導いた。この方法は、標準曲線の範囲にわたって両方の化合物について線形であり（相関＞０．９９）、推定定量限界は０．１ｎｇ／ｍＬであった。最大血液濃度（Ｃ_ＭＡＸ）及び最大血液濃度に達するまでの時間（Ｔ_ＭＡＸ）を、認められた血液濃度−時間データから直接読み取った。ＣＳＴＲＩＰを使用して血液濃度データを多指数曲線適合（ｍｕｌｔｉ−ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｃｕｒｖｅ ｆｉｔｔｉｎｇ）に供し、薬物動態パラメータの推定値を得た。推定パラメータを、ＮＯＮＬＩＮ８４を用いてさらに定義した。投与後０−ｔ時間目（血液濃度測定可能な最終時点）までの血液濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ_０−ｔ）を、血液−時間プロフィールに関する直線台形則（ｌｉｎｅａｒ ｔｒａｐｅｚｏｉｄａｌ ｒｕｌｅ）を用いて算定した。残余面積を無限に外挿して、末期排出速度定数（β）で除した採集測定血液濃度（Ｃ_ｔ）として決定し、ＡＵＣ_０−ｔに加えて、曲線下総面積（ＡＵＣ_０−ｔ）を求めた。

図１及び表２に示すように、実施例１及び実施例２のいずれもが、ラパマイシンと比較して、意外にも実質的に短い末期排出半減期（ｔ_１／２）を有していた。従って、本発明の化合物だけが十分な効果（表１）とより短い末期半減期（表２）を提供する。

治療の方法
実施例で規定するものを含むがこれらに限定されない、本発明の化合物は、哺乳類（特にヒト）において免疫調節活性を有する。免疫抑制剤として、本発明の化合物は、心臓、腎臓、肝臓、骨髄、皮膚、角膜、肺、膵臓、小腸、四肢、筋肉、神経、十二指腸、小腸、膵島細胞等のような器官又は組織の移植による拒否反応；骨髄移植によって引き起こされる対宿主性移植片病；慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎等のような自己免疫疾患などの、免疫を介した疾患の治療及び予防のために有用である。さらなる使用は、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎及びさらなる湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、じんま疹、血管性水腫、脈管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、エリテマトーデス、座瘡及び円形脱毛症などの、炎症性及び過増殖性皮膚疾患及び免疫を介した疾病の皮膚症状発現；角結膜炎、春季結膜炎、ベーチェット病に関連するブドウ膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮性ジストロフィー、角膜白斑、及び眼天疱瘡などの様々な眼疾患（自己免疫及びその他）の治療及び予防を含む。さらに、喘息（例えば気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息及び塵埃喘息）、特に慢性又は難治性喘息（例えば遅発型喘息及び気道過敏症）、気管支炎、アレルギー性鼻炎等のような状態を含む、可逆性閉塞性気道疾患は、本発明の化合物の標的となる。胃潰瘍、虚血性疾患によって引き起こされる血管損傷及び血栓症などの粘膜及び血管の炎症。さらに、内膜平滑筋細胞過形成、特に生物又は機械を介した血管損傷後の再狭窄及び血管閉塞は、本発明の化合物によって治療又は予防することができる。ここで述べる化合物又は薬剤は、ポリマー化合物で被覆したステントに適用することができる。ステントのポリマー被覆物への化合物又は薬剤の組み込みは、ポリマー被覆したステントを、化合物又は薬剤を含む溶液中に十分な時間（例えば５分間など）浸し、その後被覆ステントを乾燥することにより、好ましくは十分な時間（例えば３０分間など）空気乾燥することにより、実施できる。その後、バルーンカテーテルからの展開によって化合物又は薬剤を含むポリマー被覆ステントを冠状動脈血管に送達することができる。ステントに加えて、本発明の薬剤を血管系に導入するために使用できる他の装置は、移植片、カテーテル及びバルーンを含むが、これらに限定されない。さらに、本発明の薬剤の代わりに使用できる他の化合物又は薬剤は、Ａ−９４５０７及びＳＤＺ ＲＡＤを含むが、これらに限定されない。本発明において使用するとき、該被覆物は、治療物質、すなわち薬剤が実質的にそれに可溶であるいかなるポリマー材料も含みうる。被覆物の目的は、治療物質のための制御放出賦形剤として働くこと又は病変部位において送達される治療物質の貯蔵所となることである。被覆物はポリマーであり得、さらに親水性、疎水性、生分解性又は非生分解性でありうる。ポリマー被覆物のための材料は、ポリカルボン酸、セルロース系ポリマー、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、無水マレイン酸ポリマー、ポリアミド、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、グリコサミノグリカン、多糖類、ポリエステル、ポリウレタン、シリコーン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシブチレートバレレート、ポリアクリルアミド、ポリエーテル、及び前記の混合物及びコポリマーから成る群より選択されうる。ポリウレタン分散（ＢＡＹＨＹＤＲＯＬ等）及びアクリル酸ラテックス分散などのポリマー分散から調製される被覆物も、本発明の治療物質に関して使用できる。

本発明において使用できる生分解性ポリマーは、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ（ＤＬ−乳酸）、ポリカプロラクトン、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリグリコリド、ポリ（ジアキサノン）、ポリ（ヒドロキシバレレート）、ポリオルトエステルなどのポリマー；ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリヒドロキシ（ブチレート−コ−バレレート）、ポリグリコリド−コ−トリメチレンカーボネートなどのコポリマー；ポリ無水物；ポリホスホエステル；ポリホスホエステル−ウレタン；ポリアミノ酸；ポリシアノアクリレート；フィブリン、フィブリノーゲン、セルロース、デンプン、コラーゲン及びヒアルロン酸などの生体分子；及び前記の混合物を含む。本発明における使用に適した生体安定材料は、ポリウレタン、シリコーン、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリアミド、ポリカプロラクタム、ポリイミド、ポリビニルクロリド、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルアルコール、アクリルポリマー及びコポリマー、ポリアクリロニトリル、オレフィンとビニルモノマーのポリスチレンコポリマー（スチレンアクリロニトリルコポリマー、エチレンメチルメタクリレートコポリマー、エチレンビニルアセテートなど）、ポリエーテル、レーヨン、セルロース系物質（酢酸セルロース、硝酸セルロース、プロピオン酸セルロース等など）、パリレン及びその誘導体；及び前記の混合物及びコポリマーを含む。

本発明において使用できるもう１つのポリマーは、ポリ（ＭＰＣ_ｗ：ＬＡＭ_ｘ：ＨＰＭＡ_ｙ：ＴＳＭＡ_ｚ）［式中、ｗ、ｘ、ｙ及びｚはポリマーを製造するための供給材料において使用されるモノマーの分子比を表わし、ＭＰＣは２−メタクリオイルオキシエチルホスホリルコリン単位を表わし、ＬＭＡはラウリルメタクリレート単位を表わし、ＨＰＭＡは２−ヒドロキシプロピルメタクリレート単位を表わし、及びＴＳＭＡは３−トリメトキシシリルプロピルメタクリレートを表わす］である。薬剤含浸ステントは、先に血栓及び／又はじゅく状硬化斑によって閉塞した冠状動脈の開存性を維持するために使用できる。抗増殖薬の送達はステント内再狭窄の割合を低下させる。

他の治療可能な状態は、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性腸炎、セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病及び潰瘍性大腸炎などの腸の炎症／アレルギー；多発性筋炎、ギヤン−バレー症候群、メニエール病、多発性神経炎、多発神経炎、単神経炎及び神経根障害などの神経疾患；甲状腺機能亢進症及びバセドー病などの内分泌疾患；赤芽球ろう、再生不良性貧血、低形成貧血、特発性血小板現象性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、顆粒球減少症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血及び赤血球形成不全などの血液疾患；骨粗しょう症などの骨疾患；サルコイドーシス、肺線維症及び特発性間質性肺炎などの呼吸器系疾患；皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常性魚鱗癬、光線過敏症及び皮膚Ｔ細胞リンパ腫などの皮膚疾患；動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症候群、結節性多発動脈炎及び心筋症などの循環器系疾患；強皮症、ヴェーゲナー肉芽腫症及びシュエーグレン症候群などの膠原病；好酸球性筋膜炎；歯肉、歯周組織、歯槽骨及びセメント質の病変などの歯周病；糸球体腎炎などのネフローゼ症候群；脱毛を予防すること又は発毛を与えること及び／又は毛発生及び毛成長を促進することによる男性型脱毛症又は老人性脱毛症；筋ジストロフィー；膿皮症及びセザリー症候群；アジソン病；例えば保存（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ）、移植又は虚血性疾患（例えば血栓症及び心筋梗塞）のときに起こる器官（心臓、肝臓、腎臓及び消化管など）の虚血−再灌流損傷などの器官傷害のような、活性酸素を介した疾患；内毒素性ショック、偽膜性腸炎及び薬剤又は放射線によって引き起こされる大腸炎などの腸疾患；虚血性急性腎不全及び慢性腎不全などの腎疾患；肺−酸素又は薬剤（例えばパラコート及びブレオマイシン）によって引き起こされる中毒症、肺癌及び肺気腫などの肺疾患；白内障、シデローシス、網膜炎、色素変性症、老年性黄斑変性、硝子体瘢痕化及び角膜アルカリ熱傷などの眼疾患；多形性紅斑、線状ＩｇＡ水疱症及びセメント皮膚炎などの皮膚炎；及び歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、環境汚染（例えば大気汚染）によって引き起こされる疾患、廊下、発癌現象、癌の転移及び低圧病などのその他の疾患；ヒスタミン又はロイコトリエン−Ｃ_４放出によって引き起こされる疾患；腸、血管又は神経ベーチェット病及び口腔、皮膚、眼、外陰部、間接、精巣上体、肺、腎臓等を冒すベーチェット病などのベーチェット病を含むが、これらに限定されない。さらに、本発明の化合物は、免疫原性疾患（例えば自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変及び硬化性胆管炎などの慢性自己免疫性肝疾患）、部分的肝切除、急性肝壊死（例えば毒素、ウイルス性肝炎、ショック又は無酸素症によって引き起こされる壊死）、Ｂ型ウイルス性肝炎、非Ａ／非Ｂ型肝炎、肝硬変（アルコール性肝硬変など）及び劇症肝不全、遅発型肝不全及び「慢性状態の中での急性（ａｃｕｔｅ−ｏｎ−ｃｈｒｏｎｉｃ）」肝不全（慢性肝疾患がある状態での急性肝不全）などの肝不全の治療及び予防のために有用であり、及びさらに、化学療法効果の増強のようなそれらの有用な作用の故に様々な疾患のために有用であり、サイトメガロウイルス感染、特にＨＣＭＶ感染のために、また抗炎症作用の故にネフローゼ、強皮症、肺線維症、動脈硬化症、うっ血性心不全、心室肥大、術後癒着及び瘢痕化、卒中、心筋梗塞及び虚血と再灌流に関連する損傷等のような硬化性及び線維症性疾患のために有用である。

加えて、本発明の化合物はＦＫ−５０６拮抗特性を有する。本発明の化合物は、それ故、免疫抑制又は免疫抑制に関わる疾患の治療において使用しうる。免疫抑制に関わる疾患の例は、ＡＩＤＳ、癌、真菌感染、老年痴呆、外傷（創傷治癒、手術及びショックを含む）、慢性細菌感染、及びある種の中枢神経系疾患を含む。治療すべき免疫抑制は、免疫抑制性大環状化合物、例えばＦＫ−５０６又はラパマイシンなどの１２−（２−シクロヘキシル−１−メチルビニル）−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［２２．３．１．０^４，９］オクタコス−１８−エンの誘導体の過量によって引き起こされうる。患者によるそのような薬剤の過量投与は、処方された時間に自分の薬剤を服用するのを忘れたことに気づいたときに極めて一般的であり、深刻な副作用を導くことがある。

増殖性疾患を治療する本発明の化合物の能力は、Ｂｕｎｃｈｍａｎ ＥＴとＣＡ Ｂｒｏｏｋｓｈｉｒｅ，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｅｄ．２３ ９６７−９６８（１９９１）；Ｙａｍａｇｉｓｈｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９１ ８４０−８４６（１９９３）；及びＳｈｉｃｈｉｒｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８７ １８６７−１８７１（１９９１）の中に述べられている方法に従って明らかにすることができる。増殖性疾患は、平滑筋増殖、全身性硬化症、肝硬変、成人呼吸促進症候群、特発性信金長、エリテマトーデス、糖尿病性網膜症又は他の網膜症、乾癬、強皮症、前立腺過形成、心臓肥厚、動脈損傷後の再狭窄又は血管の他の病的狭窄を含む。さらに、これらの化合物はいくつかの成長因子に対する細胞応答に拮抗し、それ故抗血管新生特性を有しており、そのためにそれらは、ある種の腫瘍の増殖、ならびに肺、肝臓及び腎臓の線維症性疾患を制御する又は逆転させる有用な薬剤となる。

本発明の水性液体組成物は、自己免疫疾患（例えば円錐角膜、角膜エン、角膜上皮性ジストロフィー、角膜白斑、モーレン潰瘍、強膜炎及びグレーブス眼症を含む）及び角膜移植後の拒絶反応などの眼の様々な疾患の治療及び予防のために特に有用である。

上記又は他の治療において使用するとき、本発明の化合物の１つの治療上有効な量を、純粋な形態で、又はそのような形態が存在する場合は、医薬適合性の塩、エステル又はプロドラッグ形態で使用しうる。また、該化合物は、対象化合物を１又はそれ以上の医薬適合性の賦形剤と組み合わせて含有する医薬組成物として投与しうる。本発明の化合物の「治療上有効な量」の語句は、医学的治療に適用される妥当な利益／危険度比で疾患を治療するために十分な化合物の量を意味する。しかし、本発明の化合物又は組成物の総一日使用量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定される。特定患者についての明細な治療上有効な用量レベルは、治療する疾患及び疾患の重症度；使用する特定化合物の活性；使用する特定組成物；患者の年齢、体重、全般的健康状態、性別及び食事；投与時間、投与経路及び使用する特定化合物の排泄速度；治療期間；使用する特定化合物と組み合わせて又は同時に用いる薬剤；及び医学技術分野において周知の同様の因子に依存する。例えば、化合物の用量を、所望治療効果を達成するために必要であるよりも低いレベルから出発し、所望効果が達成されるまで徐々に用量を増加させることは十分に当分野の技術範囲内である。

ヒト又は下等動物に投与される本発明の化合物の総一日量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日から約１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲をとりうる。経口投与のためには、より好ましい用量は約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日から約３ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内でありうる。ステントからの局所送達のためには、患者が摂取する一日量はステントの長さに依存する。例えば、１５ｍｍの冠状動脈ステントは約１μｇから約１２０μｇの量の薬剤を含むことができ、数時間から数週間の期間にわたってその薬剤を送達しうる。所望する場合は、有効一日量を投与のために多回用量に分けてもよい；その結果として、単回用量組成物は、そのような量又は一日量を構成するためのその多回分割量を含有しうる。局所投与は、適用部位に依存して０．００１％ｍｇ／ｋｇ／日から３％ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量を含みうる。

医薬組成物
本発明の医薬組成物は、経口的、直腸的、非経口的、槽内、膣内、腹腔内、局所外用的（粉末、軟膏、ドロップ又は経皮パッチなどによって）、口腔粘膜経路で、経口又は経鼻スプレーとして、又は血管系内に設置されたステントにおけるように局所的に投与しうる、本発明の化合物及び医薬適合性の担体又は賦形剤を含有する。「医薬適合性の担体」の語句は、非毒性の固体、半固体又は液体充填剤、希釈剤、被包材料又は何らかの種類の製剤補助物質を意味する。ここで使用する、「非経口」の語は、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下及び関節内注射、注入及び、例えば血管系におけるような、設置を含む投与様式を指す。

非経口注射のための本発明の医薬組成物は、医薬適合性の無菌水性又は非水性溶液、分散、懸濁液又は乳剤ならびに使用の直前に無菌注射用溶液又は分散に再形成するための無菌粉末を含む。適切な水性及び非水性担体、希釈剤、溶剤又は賦形剤の例は、水、エタノール、ポリオル（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等のような）、カルボキシメチルセルロース及びそれらの適切な混合物、植物油（オリーブ油など）、及びオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルを含む。例えばレシチンなどの被覆材料の使用によって、分散の場合は必要な粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。

これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤などの佐剤を含有しうる。様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等を含めることによって微生物の作用の防止を確保しうる。また、糖類、塩化ナトリウム等のような等張剤を含むことも望ましいと考えられる。一ステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの、吸収を遅延させる物質を含めることによって注射用製薬形態の持続的な吸収をもたらすことができる。

一部の場合は、薬剤の作用を持続させるために、皮下又は筋肉内注射からの薬剤の吸収を緩徐化することが望ましい。これは、水溶解度の低い結晶性又は無定形物質の液状懸濁液を使用することによって実現しうる。薬剤の吸収速度はその溶解速度に依存し、溶解速度は結晶の大きさ及び結晶形態に依存しうる。また、非経口投与される薬剤形態の遅延吸収は、薬剤を油性賦形剤に溶解する又は懸濁することによって実現される。

注射用デポー剤は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に薬剤のミクロ被包マトリックスを形成することによって作製される。薬剤対ポリマーの比率及び使用する個々のポリマーの性質に依存して、薬剤放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例は、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）を含む。注射用デポー製剤はまた、体組織と適合性のリポソーム又はミクロ乳剤中に薬剤を捕獲することによっても製造される。

注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通してろ過することによって、若しくは使用の直前に無菌水又は他の無菌注射用媒質に溶解する又は分散することができる無菌固体組成物の形態の滅菌薬を組み込むことによって、滅菌することができる。

経口投与用の固体剤型は、カプセル、錠剤、丸剤、粉末及び顆粒を含む。そのような固体剤型では、活性化合物を、クエン酸ナトリウム又はリン酸ニカルシウムなどの少なくとも１つの不活性な医薬適合性の賦形剤又は担体、及び／又はａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール及びケイ酸などの充填剤又は増量剤、ｂ）例えばカルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及びアカシアなどの結合剤、グリセロールなどの湿潤剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、一部のシリケート及び炭酸ナトリウム、ｅ）パラフィンなどの分解遅延剤、ｆ）第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、ｇ）例えばセチルアルコール及び一ステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、ｈ）カオリン及びベントナイト粘度などの吸収剤、及びｉ）滑石、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム及びそれらの混合物と混合する。

同様の種類の固体組成物も、ラクトース又は乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコール等のような賦形剤を使用して軟、半固体及び硬充填ゼラチンカプセル又は液体充填カプセル中の充填剤として使用しうる。

錠剤、糖衣丸、カプセル、丸剤及び顆粒剤の固体剤型は、腸溶剤皮及び医薬製剤技術分野において周知の他の被覆物などの被覆物及び外皮と共に製造することができる。それらは任意に乳白剤を含んでいてもよく、また、任意に遅延的に、腸管の一定部位においてのみ又は腸管の一定部位において優先的に有効成分を放出する組成物でありうる。使用しうる包埋組成物の例は、ポリマー物質及びろうを含む。薬剤を含有するそれらの包埋組成物を、ステント、移植片、カテーテル及びバルーンなどの医療装置上に配置することができる。

該活性化合物はまた、適宜に１又はそれ以上の上記賦形剤を伴うミクロ被包形態でありうる。

経口投与のための液体剤型は、医薬適合性の乳剤、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシルを含む。活性化合物に加えて、液体剤型は、例えば水又は他の溶媒、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル、及びそれらの混合物などの可溶化剤及び乳化剤のような、当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含みうる。

不活性希釈剤のほかに、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤及び懸濁防止剤、甘味料、香味料及び香料などの佐剤を含みうる。

懸濁液は、活性化合物に加えて、例えばエトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天及びトラガカント、及びそれらの混合物のような懸濁防止剤を含みうる。

局所外用投与は、肺及び眼の表面を含む、皮膚又は粘膜への投与を含む。吸入用のものを含む、局所外用投与のための組成物は、加圧又は非加圧のいずれでもよい乾燥粉末として製造しうる。非加圧粉末組成物では、微細分割形態の有効成分を、例えば直径１００μｍまでの大きさを有する粒子を含有する、より大きなサイズの医薬適合性の不活性担体と混合して使用しうる。適切な不活性担体は、ラクトースなどの糖類を含む。望ましくは、有効成分の粒子の少なくとも９５重量％が０．０１μｍから１０μｍの範囲内の有効粒径を有する。皮膚への局所外用使用のための組成物はまた、軟膏、クリーム、ローション及びゲルを含む。

また、該組成物は加圧してもよく、窒素又は液化ガス推進薬などの圧縮気体を含みうる。液化推進薬媒質及び実際には組成物全体が、好ましくはその有効成分が実質的な度合でその中に溶解しない。加圧組成物はまた、界面活性剤を含みうる。界面活性剤は、液体又は固体非イオン性界面活性であるか、又は固体陰イオン性界面活性剤でありうる。ナトリウム塩の形態の固体陰イオン性界面活性剤を使用することが好ましい。

局所外用投与のさらなる形態は、自己免疫疾患、アレルギー又は炎症状態などの免疫を介した眼の状態の治療、及び角膜移植のためなどの、眼に対する投与である。本発明の化合物は、該化合物が、例えば前眼房、後眼房、硝子体、眼房水、硝子体液、角膜、虹彩／毛様体、水晶体、脈絡膜／網膜及び強膜のような、角膜及び眼の内部領域に浸透するのに十分な期間、眼表面と接触して保持されるように、医薬適合性の眼賦形剤中で送達される。医薬適合性の眼賦形剤は、例えば軟膏、植物油又は被包材料でありうる。

直腸又は膣投与のための組成物は、好ましくは、本発明の化合物を、室温では固体であるが体温では液体であり、それ故直腸又は膣腔内で溶融して活性化合物を放出する、ココアバター、ポリエチレングリコール又は坐薬用ろうなどの適切な非刺激性賦形剤又は担体と混合することによって製造できる坐薬又は停留浣腸である。

本発明の組成物はまた、リポソームの形態でも投与することができる。当技術分野において既知であるように、リポソームは一般にリン脂質又は他の脂質物質から誘導される。リポソームは、水性媒質中に分散している単層膜又は多重膜水和液晶によって形成される。リポソームを形成することができる非毒性で生理的に許容される代謝性のいかなる脂質も使用できる。リポソーム形態の本発明の組成物は、本発明の化合物に加えて、安定剤、防腐剤、賦形剤等を含むことができる。好ましい脂質は、天然及び合成の、リン脂質及びホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームを形成するための方法は当技術分野において既知である。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ編集、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第ＸＩＶ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９７６）３３頁以降参照。

本発明の化合物はまた、１又はそれ以上の免疫抑制剤と同時投与してもよい。本発明の範囲内の免疫抑制剤は、ＩＭＵＲＡＮ（登録商標）アザチオプリンナトリウム、ブレキナールナトリウム、ＳＰＡＮＩＤＩＮ（登録商標）グスペリムストリヒドロクロリド（ｇｕｓｐｅｒｉｍｕｓ ｔｒｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）（デオキシスペルグアリンとしても知られる）、ミゾリビン（ブレジニンとしても知られる）、ＣＥＬＬＣＥＰＴ（登録商標）ミコフェノレートモフェチル、ＮＥＯＲＡＬ（登録商標）シクロスポリンＡ（ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ（登録商標）の商標の下にシクロスポリンＡの様々な製剤として市販されている）、ＰＲＯＧＲＡＦ（登録商標）タクロリムス（ＦＫ−５０６としても知られる）、シロリムス及びＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、レフルノミド（ＨＷＡ−４８６としても知られる）、プレドニゾロン及びその誘導体などの糖質コルチコイド、オルトクローン（ＯＫＴ３）及びＺｅｎａｐａｘ（登録商標）などの抗体療法、及びサイモグロブリンなどの抗胸腺細胞グロブリンを含むが、これらに限定されない。

この実施例の目的は、ステントを含むブタ冠状動脈における新生内膜形成へのラパマイシン類似体の作用を調べることであった。この実施例は、ラパマイシン類似体Ａ−１７９５７８が、配合されて、Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓ ＢｉｏｄｉｖｉＹｓｉｏ ＰＣ冠状動脈ステントから送達されたとき、ブタ冠状動脈における新生内膜肥厚及び管腔サイズに好ましい作用を及ぼすことを例示する。この所見は、そのような組合せが、ヒトにおいて適切に適用された場合、新生内膜肥厚を制限することによって実質的な臨床的利益となりうることを示唆する。

薬剤Ａ−１７９５７８はラパマイシン類似体である。この実施例で述べる試験は、ラパマイシン類似体Ａ−１７９５７８がブタ冠状動脈ステントモデルにおいて新生内膜肥厚を軽減する能力を評価するために設計された。このモデルにおけるＡ−１７９５７８の効果は、経皮的血管再生後のステントにおける冠状動脈再狭窄の制限と治療のためのその臨床的潜在能を示唆する。家畜ブタを使用したのは、このモデルが、ヒト被験者において新生内膜肥厚を制限することを意図した他の検討と同等の結果を生じると思われるからである。

この実施例は、若齢家畜ブタに設置した冠状動脈ステントから溶出したＡ−１７９５７８を試験し、これらの結果を対照ステントと比較した。対照ステントは、その支柱を覆うポリマーだけを含んだ。ポリマー自体は新生内膜肥厚を実質的な度合まで刺激しないはずであるので、これは重要である。溶出した薬剤は消失するので、ポリマーに対する炎症応答は、おそらく、再狭窄過程が停止はしないが緩徐化する遅発型「キャッチアップ現象」を生じると考えられる。この現象は、後日ヒト被験者において再狭窄をもたらす。

ステントを各々のブタにおいて２つの血管内に移植した。このモデルで使用したブタは一般に２ヶ月から４ヶ月齢で、体重３０ｋｇから４０ｋｇであった。２つの冠状動脈ステントは、１．１〜１．２の「正常」ステント：動脈比を視覚的に評価することによって各々のブタに移植した。

処置の当日から、ブタに経口アスピリン（一日３２５ｍｇ）を投与し、試験の残りの期間中継続した。ケタミン（３０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（３ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射、次いで静脈内注射によって全身麻酔を実施した。導入時のさらなる投薬は、筋肉内投与したアトロピン（１ｍｇ）及びフロシリン（１ｇ）を含んだ。ステント設置処置の間、ヘパリン１０，０００単位の動脈内ボーラスを投与した。

右外頸動脈での切開及び８Ｆシースの設置によって動脈アクセスを得た。処置後、動物を、コレステロール又は他の特殊補助栄養を含まない通常食で飼育した。

ＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏステントを３．０ｍｍの名目血管標的サイズで使用した。図２参照。ブタ１頭当り２つの冠状動脈をステントの展開に無作為に割り当てた。ステントは、薬剤溶出ステント（ポリマープラス薬剤ステント）又はポリマーだけで被覆したステント（ポリマー単独ステント）のいずれかであった。標準ガイドカテーテル及びワイヤによってステントを送達した。ステントのバルーンを、３０秒間未満、適切なサイズに膨張させた。

各々のブタに、別々の冠状動脈内にポリマー単独ステント１箇所及びポリマープラス薬剤ステント１箇所を設置し、従って各ブタは、薬剤ステント１つと対照ステント１つを有することになった。

標準偏差０．１５ｍｍ、検出力０．９５及びβ０．０２で、０．２ｍｍの新生内膜の厚さの想定差を検出するために合計２０頭のブタの標本サイズを選択した。

組織病理学的検査と定量のために２８日目に動物を安楽死させた。灌流ポンプ系から心臓を切除した後、近位冠状動脈へのアクセスのために左心耳を切除した。損傷を有する冠状動脈セグメントを、心外膜を除いて切開した。病変を含むセグメントを単離し、それによってどちらかの末端に無関係な血管を含む十分な組織を得た。各々ざっと２．５ｃｍの長さの前記セグメントを標準合成樹脂包埋手法によって包埋し、処理した。その後、前記組織をヘマトキシリン−エオシン及びエラスチカ−ワンギーソン手法で処理し、染色した。

低及び高拡大能光学顕微鏡を使用して、検定解析ソフトウエアを用いるコンピュータに接続した検定十字線及びデジタル顕微鏡検査システムにより、顕微鏡像の平面で長さの測定を行った。

血管損傷の重症度及び新生内膜応答を検定デジタル顕微鏡検査によって測定した。内弾性板の完全性の重要さは当業者に周知である。ステント設置血管における組織病理学的損傷スコアは、新生内膜の厚さに緊密に相関することが確認された。このスコアは損傷の深さに関係しており、次の通りである：

スコア 損傷の説明
０ 内弾性板は無傷；内皮は典型的に露出、中膜は圧迫されているが、裂傷してはいない。
１ 内弾性板裂傷；中膜は典型的には圧迫されているが、裂傷してはいない。
２ 内弾性板裂傷；中膜は可視的に裂傷；外弾性板は無傷であるが、圧迫されている。
３ 外弾性板裂傷；典型的には外弾性板を超えて広がる中膜の大きな裂傷；時としてコイルワイヤが外膜に存在する。

損傷のこの定量的測定を各ステント切断面のすべてのステントワイヤに関して評価し、デジタル検定画像も、各ステントワイヤ部位で新生内膜の厚さを測定するために使用した。内腔面積、内弾性板で封じ込められた面積、及び外弾性板内の面積も測定した。

所与の切断面についての各ステントワイヤ部位で、新生内膜の厚さの平均を求め、各々の切断面に関する平均損傷スコアを得た。新生内膜の厚さの測定は、ステントワイヤの半管腔側で実施した。すべての場合に新生内膜はこの厚さを含むからである。

ステント中央セグメントを測定、分析及び比較のために使用した。近位及び遠位セグメントについてもデータを記録した（及びこの報告のデータの章に含めた）。

この試験に関するデータ解析方法は、軽度から中等度損傷が処置の差を検出するのに十分な感受性があるため、処置／対照群の間での動脈損傷変動を考慮に入れる必要がなかった。ポリマー単独ステント（対照群）とポリマープラス薬剤ステント（処置群）の間の変数を比較するために対応あるｔ検定を実施した。本試験において予定された時点以前に死亡した動物はなかった。

表３は、使用したブタ及び動脈を示す。表３の中で、ＬＣＸは左冠状動脈の回旋枝を意味し、ＬＡＤは左前室間動脈を意味し、及びＲＣＡは右冠状動脈を意味する。

表４は、近位、中央及び遠位セグメントを含む、平均損傷及び各々のステントについての新生内膜の厚さに関するすべてのデータの要約結果を示す。表４はまた、管腹サイズ、狭窄パーセント、及び内弾性板（ＩＥＬ）と外弾性板（ＥＥＬ）によって測定した動脈サイズも示す。

試験群（ポリマープラス薬剤ステント）又は対照群（ポリマー単独ステント）内で近位、中央又は遠位セグメント間に新生内膜の面積又は厚さについての統計的有意さは存在しなかった。この所見はこれまでの試験とよく一致しており、従って試験装置（ポリマープラス薬剤ステント）対対照装置（ポリマー単独ステント）の統計的比較のために中央セグメントだけを使用することが可能である。

表５は、試験群と対照群間の統計的ｔ検定比較を示す。新生内膜の厚さ、新生内膜面積、管腔サイズ、及び管腔狭窄パーセントにおいて統計的有意差が存在し、薬剤溶出ステントが明らかに良好であった。逆に、平均損傷スコア、外弾性板又は内弾性板面積については試験群（ポリマープラス薬剤ステント）と対照群（ポリマー単独ステント）の間で統計的有意差は存在しなかった。

ステント設置セグメントに対して近位及び遠位の標準動脈を観察し、定量した。これらの血管はすべての場合に正常であると思われ、対照群（ポリマー単独ステント）と試験群（ポリマープラス薬剤ステント）の両方において損傷していなかった。図３Ａ及び３Ｂ参照。下記のデータは、対照群のステントと試験群のステントの間で統計的有意差がないことを示している。

近位標準直径（ｍｍ） 遠位標準直径（ｍｍ）
対照（平均±ＳＤ） ４．４６±１．２０ ３．９６±１．１６
試験（平均±ＳＤ） ４．２６±１．２６ ３．４１±０．９６

このデータは、統計的に有意の差が存在すること、及びこれらの差はＡ−１７９５７８を溶出するステントに優位であることを示唆している。本発明のステントは、より低い新生内膜面積、より低い新生内膜の厚さ、及びより大きな管腔面積をもたらす。新生内膜又は損傷パラメータに関して試験群（ポリマープラス薬剤ステント）及び対照群（ポリマー単独ステント）内での有意差は存在しなかった。試験群と比較して対照群に関する動脈サイズ（ステントを含む）の有意差はなかった。これら後者の所見は、薬剤を含むポリマー被覆物の動脈再造形特性に有意差がないことを示唆する。

ポリマープラス薬剤ステントとポリマー単独ステントの両方に関して、多くとも、軽度の炎症が認められた。この所見は、ポリマーが、薬剤充填なしでも、十分に生体適合性を示すことを示唆している。他の試験は、薬剤がポリマーから完全に消失したとき、ポリマー自体が新生内膜を生じさせるのに十分な炎症を引き起こすことを示している。この現象が、臨床的遅発型再狭窄の遅発キャッチアップ現象の原因であると考えられる。この実施例におけるポリマーは冠状動脈において炎症を引き起こさなかったので、薬剤が枯渇した後のポリマーに関する遅発型の問題は考えられない。

結論として、ポリマーと共に化合物Ａ−１７９５７８を含有するステントは、冠状動脈に設置したときブタモデルにおいて新生内膜肥厚の低減を示した。

この実施例の目的は、ホスホリルコリン側鎖基を含む生体適合性ポリマーで被覆した３１６Ｌ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｌｉｓｈｅｄ Ｓｔａｉｎｌｅｓｓ Ｓｔｅｅｌ ＣｏｕｐｏｎｓからのＡ−１７９５７８薬剤の放出速度を調べることである。

ＨＰＬＣバイアルの蓋からのゴム隔壁をバイアルから取り外し、「テフロン」面が見えるようにガラスバイアルに入れた。これらの隔壁を被験試料の支持体として用いた。被験試料は、あらかじめホスホリルコリン側鎖基を含む生体適合性ポリマー（ＰＣポリマー）で被覆しておいた３１６Ｌステンレススチールクーポンであった。冠状動脈ステントは一般に３１６Ｌステンレススチールで作られており、薬剤を充填するための貯蔵部位を提供するためにＰＣポリマーで被覆することができる。ステントを刺激するのに用いる被覆クーポンを隔壁上に置いた。ガラス製ハミルトン注射器を使用することにより、Ａ−１７９５７８とエタノールの溶液（１０μｌ）を各々のクーポンの表面に適用した。この溶液は、１００％エタノール（３．０ｍｌ）中に溶解したＡ−１７９５７８（３０．６ｍｇ）を含んだ。各々の適用と適用の間に注射器をエタノールで洗浄した。ガラスバイアルのふたをゆるくバイアル上にのせ、適切な換気を確保した。クーポンを少なくとも１時間半乾燥させた。１２のクーポンをこのようにして充填した―６個は装置に充填した薬剤の平均量を測定するために使用し、６個は装置から薬剤を放出するのに必要な時間を測定するために使用した。

クーポンに充填したＡ−１７９５７８の総量を測定するために、クーポンをバイアルから取り出し、５０／５０アセトニトリル／０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０、５．０ｍｌ）中に入れた。クーポンを１時間、５２１０ Ｂｒａｎｓｏｎ音波破砕器にかけた。その後クーポンを溶液から取り除き、溶液をＨＰＬＣによって検定した。

次の時間間隔―５、１５、３０及び６０分の各々で、ｐＨ６．０の０．０１Ｍリン酸緩衝液の新鮮アリコート（１０．０ｍｌ）に個々のクーポンを液浸し、取り出して、放出時間試験を実施した。残りの時点、１２０、１８０、２４０、３００、３６０分については、５．０ｍｌの容量の緩衝液を使用した。薬剤放出期間中の混合を促進するために、試料を低速に設定したＥｂｅｒｂａｃｈ振とう装置上に置いた。最後の試料の試験が完了した後、すべての溶液アリコートをＨＰＬＣによって検定した。

下記のように設定したＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄシリーズ１１００装置でＨＰＬＣ分析を実施した：
注入量＝１００μｌ
取得時間＝４０分間
流量＝１．０ｍｌ／分
カラム温度＝４０℃
波長＝２７８ｎｍ
移動相＝６５％アセトニトリル／３５％Ｈ_２Ｏ
カラム＝ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ Ｓ５μｍ、４．６×２５０ｍｍ Ｐａｒｔ Ｎｏ．Ａ１２０５２５４６ＷＴ
上記実験からの結果は下記の放出データを示した。

この実施例の目的は、１５ｍｍ ＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏ薬剤送達ステントへのＡ−１７９５７８の充填とステントからの放出を調べることであった。

ステントに薬剤を充填するために、５０ｍｇ／ｍｌ濃度のエタノール中のＡ−１７９５７８の溶液を調製し、１２のバイアル中に分散した。１２の個別ポリマー被覆ステントを、ステントを垂直な位置に保持するように設計された固定装置にのせ、ステントを薬剤溶液中に垂直に５分間液浸した。ステントと固定装置をバイアルから取り出し、ステントを吸収剤物質に接触させることによって過剰の薬剤溶液を吸い取って除去した。次にステントを逆垂直位置で３０分間空気乾燥させた。

ステントを固定装置からはずし、各々のステントを５０／５０アセトニトリル／リン酸緩衝液（ｐＨ５．１、２．０ｍｌ）中に入れ、１時間音波破砕した。ステントを溶液から取り出し、溶液を薬剤濃度に関して検定して、最初にステント上に存在した薬剤の量を算定した。この方法は、独立して、ステント被覆物から薬剤の少なくとも９５％を除去することが示された。平均すると、ステントは６０μｇ±２０μｇの薬剤を含んだ。

薬剤充填したステントを固定装置にのせ、個々のバイアルの０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０、１．９ｍｌ）中に入れた。これらの試料を低速に設定したＥｂｅｒｂａｃｈ振とう装置上に置いて、前後攪拌を与えた。緩衝液中で薬剤飽和に近づくのを避けるため、ステントを次の時点で周期的に新鮮緩衝液バイアルに移した：１５、３０、４５、６０、１２０、１３５、１５０、１６５、１８０、２４０、３９０分。検討した薬剤放出期間の最後に、溶解緩衝液バイアルをＨＰＬＣにより薬剤濃度に関して検定した。薬剤の累積放出％を時間の関数として表わしたデータを下記の表に示す：

上記の詳細な説明及び付随する実施例は単なる例示であり、本発明の範囲の限定とみなされるべきではなく、本発明の範囲は付属の特許請求の範囲及びその等価物によってのみ定義されることは明白である。開示した実施形態への様々な変更及び修正が当業者には明らかである。そのような変更及び修正は、限定を伴わずに本発明の化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、製剤及び／又は使用方法に関するものを含めて、本発明の精神と範囲から逸脱することなく実施しうる。

図１は、サルに投与したテトラゾール含有ラパマイシン類似体の血中濃度±ＳＥＭ（ｎ＝３）を示す。 図２は、本発明における使用に適したステントを示す側面図である。 図３Ａは、ポリマーだけで被覆したステントが設置された血管セグメントの断面図である。 図３Ｂは、ポリマープラス薬剤で被覆したステントが設置された血管セグメントの断面図である。

Claims (7)

1. 支持構造、及び治療物質：
   

   

   又は医薬適合性のその塩若しくはプロドラッグを含む医療装置であって、
   前記プロドラッグが、アセチル基、エタノイル基、ピバロイル基、ピバロイルオキシメチル基、アセトキシメチル基、フタリジル基、メトキシメチル基もしくはインダニル基のＣ−３１ヒドロキシル基上における置換により形成されるエステルであるか、またはＣ−３１ヒドロキシル基への天然のアミノ酸のカップリングにより形成されるエステルであり、
   前記医療装置が、該治療物質を数時間から数週間の期間にわたり制御放出し、
   前記支持構造が、冠状動脈ステント、末梢血管ステント、カテーテル、動静脈移植片、バイパス移植片及び血管系において使用される薬剤送達バルーンから成る群より選択される、前記医療装置。
2. 前記支持構造が、前記治療物質を含有する被覆物をさらに含む、請求項１に記載の医療装置。
3. 前記被覆物がポリマーである、請求項２に記載の医療装置。
4. 前記ポリマー被覆物が生体安定である、請求項３に記載の医療装置。
5. 前記ポリマー被覆物が生分解性である、請求項３に記載の医療装置。
6. 前記治療物質が、
   

   

   又は医薬適合性のその塩若しくはプロドラッグである、請求項１に記載の医療装置。
7. 前記治療物質が、
   

   

   又は医薬適合性のその塩若しくはプロドラッグである、請求項１に記載の医療装置。

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