JP5000525B2 - 安定化したリン酸カルシウム複合体 - Google Patents
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Description
齲蝕は、通常、歯垢の歯原性バクテリアによって食物の糖発酵から産生される有機酸による、歯の硬組織の脱灰によって開始される。齲蝕は、依然として公衆衛生の主要な問題である。さらに、修復された歯の表面は、修復部辺縁周辺で、さらなる齲蝕を受けやすいことがある。ほとんどの先進国では、フッ化物を使用することによって齲蝕の罹患率が低下したが、この疾患は依然として公衆衛生の主要な問題である。歯の浸食/腐食は、食物由来の酸または逆流酸による歯のミネラル損失である。歯の過敏症は、保護用石灰化層であるセメント質の損失による露出した象牙質細管に起因するものであり、歯石は、歯の表面上の、リン酸カルシウムミネラルの望ましくない付着である。したがって、これらの症状、齲蝕、歯の侵食/腐食、歯の過敏症、および歯石はすべて、リン酸カルシウム濃度の不均衡である。
一態様では、本発明は、ホスホペプチド(PP)で安定化したACPまたはACFP複合体を提供し、この複合体は、pH7.0未満で形成される。好ましくは、この複合体は、約5.0〜最大7.0未満の範囲のpHで形成される。より好ましくは、この複合体は、約5.0〜約6.0のpH範囲で形成される。好ましい実施形態では、この複合体は、pH約5.5で形成される。好ましい実施形態では、この複合体は歯科用途に適している。好ましい別の一実施形態では、この複合体は、再石灰化を促進するための、歯および/または歯肉への適用に適している。
(i)少なくとも1種のホスホペプチドを含む溶液を得るステップと、
(ii)pHを約7.0以下に維持しながら、カルシウムイオン、リン酸イオンおよび水酸化物イオンを含む溶液を混合するステップと
を含む、上記の安定なACP複合体の生成方法を提供する。
(i)少なくとも1種のホスホペプチドを含む溶液を得るステップと、
(ii)pHを約7.0以下に維持しながら、カルシウムイオン、リン酸イオン、水酸化物イオンおよびフッ化物イオンを含む溶液を混合するステップと
を含む、前述の安定なACFP複合体の生成方法を提供する。
(i)少なくとも1種のホスホペプチドを含む溶液を得るステップと、
(ii)pHを約7.0以下に維持しながら、カルシウムイオン、リン酸イオンおよび水酸化物イオンを含む溶液を混合するステップと
を含む、ホスホペプチドで安定化した非晶質リン酸カルシウム(ACP)複合体の生成方法が提供される。
(i)少なくとも1種のホスホペプチドを含む溶液を得るステップと、
(ii)pHを約7.0以下に維持しながら、カルシウムイオン、リン酸イオンおよび水酸化物イオンを含む溶液を混合するステップと
を含む、ホスホペプチドで安定化した非晶質フッ化リン酸カルシウム(ACFP)複合体の生成方法が提供される。
CPP−ACFPおよびCPP−ACP溶液の調製
3.25MのCaCl2、1.25MのNa2HPO4、1MのNaOHおよび1MのNaFの保存溶液を、約30アリコートで、カゼインのトリプシン消化物10〜15%w/vに、最終濃度約78mMのCa2+、48mMのリン酸塩および12mMのフッ化物の濃縮物が得られるまで添加した。溶液をゆっくり添加した(すなわち、1分当たり約1体積%未満を添加)。まず、リン酸溶液の1アリコートを添加し、次いでカルシウム溶液の1アリコートを添加した。pHを、NaOHを用いて十分に混合して、7.0、6.5、6.0、5.5および5.0に維持した。水酸化ナトリウム溶液を、通常はカルシウムイオンの各添加後に水酸化物イオンを添加し、pHスタットによって自動的に添加した。カルシウムイオン、リン酸イオン、水酸化物イオンおよびフッ化物イオンの添加後、溶液を0.1ミクロンのフィルタで濾過して1〜2倍の濃度にした。濃縮水を、所望により水洗して、塩および不活性(かつ苦味)ペプチドを除去することができる。フッ化物の添加なしに、CPP−ACP溶液を、上記のように調製した。
酸性pH値でのCPP−ACPおよびCPP−ACFPによるエナメル質表層下病変のインビトロ再石灰化の比較
摘出したヒトの第三大臼歯の研磨したエナメル質表面を、スラブ(8×4mm2)として切り取り、耐酸性マニキュア液で被覆して、1mmだけ分離した咬合半分および歯肉半分の近遠心ウィンドウ(1×7mm2)を形成した。比較に使用したプロトコルは、当業者には周知であり、その内容が参照によって本明細書に組み込まれる、Reynolds(1997),Remineralization of enamel subsurface lesions by casein phosphopeptide−stabilized calcium phosphate solutions.J Dent Res 76:1587−1595に記載されているものとした。表層下エナメル質の病変を、WhiteのCarbopol法(Reynolds、1997に記載)を使用してこれらのウィンドウ上に発症させた。エナメルスラブを、4×4mm2ブロックに半分に切断した。あるブロック上の歯肉半分の病変および別のブロック上の咬合半分の病変を、マニキュア液で封止して、脱灰した対照を作成した。
pH7.0および5.5でのCPP−ACPによるエナメル質のインサイチュ再石灰化の比較
この研究は、pH5.5で調製され、それに維持されたCPP−ACP0.5%w/vを含有する口内洗浄剤を、pH7.0で調製され、それに維持されたCPP−ACP0.5%w/vを含有する口内洗浄剤と比較し、口腔内モデルにおけるエナメル質再石灰化を高める能力を評価するための、二重盲目試験およびクロスオーバー設計である。研究の承認は、メルボルン大学Human Research Ethics CommitteeおよびRoyal Dental Hospital of Melbourne Ethics in Clinical Research Committeeから得た。スタッフおよび歯学科の大学院生(年齢21〜47歳)から4人の健康な成人被験者(男性2人および女性2人)を採用した。すべての被験者は、進行中の齲蝕活動、歯周病、または他の口腔病のない、少なくとも22本の本来の歯を有していた。被験者には、唾液分泌量に影響を与える抗生物質または薬剤を使用している者はいなかった。各被験者の未刺激性の唾液分泌量は、0.2ml/分を超えていた。未刺激性唾液分泌量は、被験者に頭を前下方に傾け、正確に2分間、予め秤量した遠心分離管中に唾液を流すように指示することによって測定した。刺激性唾液分泌量は、被験者に無糖のチューインガムを正確に2分間噛み、生成されるすべての唾液を、予め秤量した遠心分離管中に流すよう指示することによって測定した。
pH7.0またはpH5.5でのCPP−ACP0.5%(w/v)を含有する口内洗浄剤によるエナメル質表層下病変のインサイチュ再石灰化
(実施例4)
この実施例では、先により一般的に記載したように、本発明の複合体を異なる目的の組成物に配合することができる方法を例示するために、いくつかの配合物が提供される。これらは単に、本発明の様々な実施形態を使用して提供することができる配合物のタイプの具体例である。
Claims (24)
- ホスホペプチドで安定化した非晶質リン酸カルシウム(ACP)または非晶質フッ化リン酸カルシウム(ACFP)複合体であって、該複合体は、pH5.0〜最大7.0未満の範囲で形成され、該ACPまたはACFPが主に塩基形態である、複合体。
- 前記ホスホペプチドが、配列A−B−C−D−Eを含み、A、B、C、DおよびEが独立に、ホスホセリン、ホスホスレオニン、ホスホチロシン、ホスホヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギン酸である、請求項1に記載の複合体。
- 歯科用途に適する、請求項1に記載の複合体。
- 前記ホスホペプチドが、配列Ser(P)−Ser(P)−Ser(P)−Glu−Gluを含み、Ser(P)がホスホセリンであり、Gluがグルタミン酸である、請求項2に記載の複合体。
- 前記ホスホペプチドが、カゼインホスホペプチドである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の複合体。
- 前記カゼインホスホペプチドが、酵素加水分解または化学的加水分解によって全長カゼインタンパク質から単離される、請求項5に記載の複合体。
- 前記カゼインホスホペプチドが、αS1(59−79)、β(1−25)、αS2(46−70)およびαS2(1−21)からなる群から選択される、請求項5または6に記載の複合体。
- pH5.0〜6.0の範囲で形成される、請求項1〜7のいずれか一項に記載の複合体。
- pH5.5で形成される、請求項1〜8のいずれか一項に記載の複合体。
- (i)少なくとも1種のホスホペプチドを含む溶液を得るステップと、
(ii)pHを5.0〜最大7.0未満の範囲に維持しながら、カルシウムイオン、リン酸イオンおよび水酸化物イオンを含む溶液を混合するステップと
を含む、請求項1〜9のいずれか1項に記載のホスホペプチドで安定化した非晶質リン酸カルシウム(ACP)複合体の生成方法。 - 前記水酸化物イオンを、前記ホスホペプチド溶液中で滴定して、本質的に一定のpHに維持する、請求項10に記載の方法。
- 前記カルシウムイオンおよびリン酸イオンを、絶えず混合しながら、かつホスホペプチド溶液中のリン酸カルシウム沈殿物の形成を回避する速度で、ホスホペプチド溶液中で滴定する、請求項10または11に記載の方法。
- (i)少なくとも1種のホスホペプチドを含む溶液を得るステップと、
(ii)pHを5.0〜最大7.0未満の範囲に維持しながら、カルシウムイオン、リン酸イオンおよび水酸化物イオンを含む溶液を混合するステップと
を含む、請求項1〜9のいずれか1項に記載のホスホペプチドで安定化した非晶質フッ化リン酸カルシウム(ACFP)複合体の生成方法。 - 前記水酸化物イオンを、前記ホスホペプチド溶液中で滴定して、本質的に一定のpHに維持する、請求項13に記載の方法。
- 前記カルシウムイオンおよびリン酸イオンを、絶えず混合しながら、かつホスホペプチド溶液中のリン酸カルシウム沈殿物の形成を回避する速度で、ホスホペプチド溶液中で滴定する、請求項13または14に記載の方法。
- 前記ホスホペプチドが、配列A−B−C−D−Eを含み、A、B、C、DおよびEが独立に、ホスホセリン、ホスホスレオニン、ホスホチロシン、ホスホヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギン酸である、請求項10〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ホスホペプチドが、配列Ser(P)−Ser(P)−Ser(P)−Glu−Gluを含み、Ser(P)がホスホセリンであり、Gluがグルタミン酸である、請求項16に記載の方法。
- 前記ホスホペプチドが、カゼインホスホペプチドである、請求項10〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記カゼインホスホペプチドが、酵素加水分解または化学的加水分解によって、全長カゼインタンパク質から単離される、請求項18に記載の方法。
- 請求項1〜9のいずれか一項に記載の複合体を含む、齲蝕の治療または予防のための組成物。
- 請求項1〜9のいずれか一項に記載の複合体を含む、歯のエナメル質の再石灰化のための組成物。
- 請求項1〜9のいずれか一項に記載の複合体を含む、歯石の治療または予防のための組成物。
- 請求項1〜9のいずれか一項に記載の複合体を含む、象牙質知覚過敏症の治療または予防のための組成物。
- 請求項1〜9のいずれか一項に記載の複合体を含む、歯の侵食/腐食の治療または予防のための組成物。
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