JP4921164B2 - ヒトc型肝炎ウイルスの全長ゲノムを含む核酸構築物及び該核酸構築物を導入した組換え全長ウイルスゲノム複製細胞、並びにc型肝炎ウイルス粒子の作製方法 - Google Patents
ヒトc型肝炎ウイルスの全長ゲノムを含む核酸構築物及び該核酸構築物を導入した組換え全長ウイルスゲノム複製細胞、並びにc型肝炎ウイルス粒子の作製方法 Download PDFInfo
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Description
(a) 配列番号13に示す塩基配列からなるRNA。
(b) 配列番号13に示す塩基配列において1〜100個の塩基が欠失、置換又は付加された塩基配列からなるRNAであって、自律複製能及びウイルス粒子産生能を有するRNA。
(a) 上記[4]記載の細胞
(b) 上記[8]記載のC型肝炎ウイルス感染細胞、並びに
(c) 上記[6]記載のC型肝炎ウイルス粒子及びC型肝炎ウイルス感受性細胞、
のうちの少なくとも1つを培養し、得られる培養物中のレプリコンRNA又はウイルス粒子を検出することを含む、抗C型肝炎ウイルス物質をスクリーニングする方法。
1.全長HCVレプリコンRNA
C型肝炎ウイルス(HCV)のゲノムは、約9600ヌクレオチドからなる(+)鎖の一本鎖RNAである。このゲノムRNAは、5'非翻訳領域(5'NTR又は5'UTRとも表記する)、構造領域と非構造領域とから構成される翻訳領域、及び3'非翻訳領域(3'NTR又は3'UTRとも表記する)からなる。その構造領域にはHCVの構造タンパク質がコードされており、非構造領域には複数の非構造タンパク質がコードされている。
本発明に係る全長HCVレプリコンRNAは、当業者に公知である任意の遺伝子工学的手法を用いて作製することができる。限定するものではないが、全長HCVレプリコンRNAは、例えば遺伝子型2aのC型肝炎ウイルスとしてJFH-1株を用いる場合には以下のような方法で作製することができる。
上記のようにして作製される全長HCVレプリコンRNAを細胞に導入することにより、全長HCVレプリコンRNAを複製することができ、好ましくは持続的に複製することができる(すなわち、レプリコンRNAの複製能を有する)組換え細胞を得ることができる。本明細書では、全長HCVレプリコンRNAを複製している組換え細胞を「全長HCVレプリコンRNA複製細胞」と称する。
本発明のHCVウイルス粒子は、細胞(好ましくはHCV感受性細胞)への感染能を有する。本発明は、全長HCVレプリコンRNA複製細胞又は全長HCVゲノムRNA複製細胞を培養し、得られた培養物(好ましくは、培養上清)中のウイルス粒子を他の細胞(好ましくはHCV感受性細胞)に感染させることを含む、C型肝炎ウイルス感染細胞を製造する方法にも関する。本発明において、HCV感受性細胞とは、HCVに対し感染性を有する細胞であり、好ましくは肝臓細胞またはリンパ球系細胞であるが、これらに限定されるものでは無い。具体的には、肝臓細胞としては初代肝臓細胞や、Huh7細胞、HepG2細胞、IMY-N9細胞、HeLa細胞、203細胞などが挙げられ、リンパ球系細胞としてはMolt4細胞や、HPB-Ma細胞、Daudi細胞などが挙げられるが、これらに限定されるものでは無い。
本発明の全長HCVレプリコンRNA複製細胞では、全長HCVレプリコンRNAが高効率で複製される。また本発明の全長HCVゲノムRNA複製細胞でも、全長HCVゲノムRNAが高効率で複製される。従って、本発明の全長HCVレプリコンRNA複製細胞又は全長HCVゲノムRNA複製細胞を用いて、全長HCVレプリコンRNA又は全長HCVゲノムRNAを高効率で製造することができる。
具体的には、本発明の上記試験系の利用例としては以下が挙げられる。
HCVの増殖及び感染を抑制する物質としては、例えば、直接的若しくは間接的にHCVの増殖及び感染に影響を及ぼす有機化合物、あるいはHCVゲノム若しくはその相補鎖の標的配列にハイブリダイズすることによりHCVの増殖若しくはHCVタンパク質の翻訳に直接的又は間接的に影響を及ぼすアンチセンスオリゴヌクレオチド等が挙げられる。
前記各種物質としては、合理的ドラッグデザイン又はハイスループットスクリーニングを用いて得られた物質(例えば単離精製された酵素)等が挙げられる。
例えばHCVウイルス増殖のために重要な役割を果たす宿主細胞性タンパク質を同定するために、本発明に係る全長HCVレプリコンRNA複製細胞又は全長HCVゲノムRNA複製細胞を使用することができる。
(5) C型肝炎ウイルス感染の診断薬又は治療薬の開発、製造及び評価のために使用可能な抗原としてのウイルスタンパク質の製造
(6) C型肝炎ウイルス感染のワクチンの開発、製造及び評価のために使用可能な抗原としてのウイルスタンパク質及び弱毒化HCVの製造
(7) C型肝炎ウイルス感染の診断又は治療用のポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体の製造
(A) 発現ベクターの構築
劇症肝炎の患者から分離したC型肝炎ウイルスであるJFH-1株(遺伝子型2a)のゲノム全長cDNAを含むDNA(JFH-1クローン)を、pUC19プラスミド中でT7 RNAプロモーター配列の下流に挿入したプラスミドDNAを作製した。
全長HCVゲノムRNA合成及び全長HCVレプリコンRNA合成に用いる鋳型DNAを作製するために、上記のとおり構築した発現ベクターpJFH1、pJFH1/GND、pFGREP-JFH1、pFGREP-JFH1/GNDを、それぞれ制限酵素XbaIで切断した。次いで、これらのXbaI切断断片のそれぞれについて、10〜20μgを50μlの反応液中に含有させ、Mung Bean Nuclease 20 Uを用いて30℃で30分間インキュベートすることにより、さらに処理した。Mung Bean Nucleaseは、二本鎖DNA中の一本鎖部分を選択的に分解する反応を触媒する酵素である。通常、上記XbaI切断断片をそのまま鋳型として用いてRNA合成を行うと、XbaIの認識配列の一部であるCUAGの4塩基が3'末端に余分に付加されたレプリコンRNAが合成されてしまう。そこで本実施例では、XbaI切断断片をMung Bean Nucleaseで処理することにより、XbaI切断断片からCTAGの4塩基を除去した。この後、XbaI切断断片を含むMung Bean Nuclease処理後の溶液について、通常法に従ったタンパク質除去処理により、CTAGの4塩基が除去されたXbaI切断断片を精製して、これを鋳型DNAとした。
(C) 細胞内における全長HCVゲノムRNAの複製とウイルス粒子の産生
上記の通り合成した全長HCVゲノムRNA(rJFH1、rJFH1/GND)のそれぞれを、様々な量で、Huh7細胞から抽出したトータル細胞性RNAと混合して、RNA総量が10μgとなるように調製した。次いでその混合RNAをエレクトロポレーション法によりHuh7細胞に導入した。エレクトロポレーション処理を行ったHuh7細胞を培養ディッシュに播種し、12時間、24時間、48時間及び72時間培養した後に、細胞を回収して、細胞からRNAを抽出して、ノーザンブロットで解析した。ノーザンブロット解析は、Molecular Cloning, A laboratory Manual, 2nd edition, J. Sambrook, E.F. Fritsch, T. Maniatis著、Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)の記載に従って行った。具体的には、培養後の細胞から抽出したRNAを変性アガロース電気泳動に供し、泳動終了後にRNAをポジティブチャージナイロン膜に転写した。pJFH1から作製した32PラベルしたDNAまたはRNAプローブを、前記のとおり膜に転写したRNAに対しハイブリダイゼーションさせ、次いでその膜を洗浄し、それをフィルムに感光させることにより、JFH-1クローンの全長HCVゲノムRNAに特異的なRNAバンドを検出した。
上記に従ってエレクトロポレーション処理を行ったHuh7細胞を培養ディッシュに播種し、12時間、24時間、48時間、及び72時間培養した後、培養上清中のHCVコアタンパク質を測定した。測定はオーソHCV抗原IRMAテストによって行った(非特許文献9)。図3に示す通り、rJFH1をトランスフェクションして48時間後及び72時間後の培養上清中にコアタンパク質が検出された。このコアタンパク質がウイルス粒子として分泌されているかどうかを確認するため、rJFH1をトランスフェクションした72時間後の培養液をショ糖密度勾配により分画した。60%(重量/重量)ショ糖溶液(50mM Tris pH7.5/0.1M NaCl/1mM EDTAに溶解)2ml、50%ショ糖溶液1ml、40%ショ糖溶液1ml、30%ショ糖溶液1ml、20%ショ糖溶液1ml、10%ショ糖溶液1mlを遠心チューブに重層し、さらにその上にサンプルの培養上清を4ml重層した。これをベックマンローターS W41Tiで400,000RPM、4℃、16時間遠心した。遠心終了後遠心チューブの底から0.5mlずつ分画回収した。各分画の密度、HCVコア蛋白濃度、全長HCVゲノムRNA量を定量した。全長HCVゲノムRNAの定量的RT-PCRによる検出は、Takeuchi T, Katsume A, Tanaka T, Abe A, Inoue K, Tsukiyama-Kohara K, Kawaguchi R, Tanaka S, Kohara M. Real-Time detection system for quantification of Hepatitis C virus genome. Gastroenterology 116: 636-642 (1999)に従い、全長HCVゲノムRNAの5'非翻訳領域のRNAを検出することによって行った。具体的には、細胞から抽出したRNAに含まれる全長HCVゲノムRNAを、合成プライマー、R6-130-S17: 5’-CGGGAGAGCCATAGTGG-3’(配列番号16)、R6-290-R19: 5’-AGTACCACAAGGCCTTTCG-3’(配列番号17)、TaqMan Probe: R6-148-S21FT, 5’-CTGCGGAACCGGTGAGTACAC-3’(配列番号18)とEZ rTth RNA PCR kitを用いてPCR増幅し、次いでABI Prism 7700 sequence detector systemにより検出した。
実施例1で作製したrFGREP-JFH1及びrFGREP-JFH1/GNDを、実施例2と同様にしてHuh7細胞へトランスフェクションして全長HCVレプリコンRNA複製細胞の作製を行い、さらに全長HCVレプリコンRNA複製細胞クローンの樹立を試みた。
上記のトランスフェクションの結果、トランスフェクションしたレプリコンRNA 1μg当たりのコロニー形成能は、rFGREP-JFH1をトランスフェクションしたHuh7細胞では、G418濃度が1.0 mg/mlの場合、368 CFU (Colony Forming Unit; コロニー形成単位)/μg・RNAであった(図5の左側)。これに対して、rFGREP-JFH1/GNDをトランスフェクションしたHuh7細胞では、コロニー形成が認められなかった(図5の右側)。このことは、rFGREP-JFH1レプリコンRNAをトランスフェクションしたHuh7細胞のコロニー形成能は、rFGREP-JFH1から発現されるNS5B(RNAポリメラーゼ)の活性に依存することを示した。つまり、コロニーを形成した細胞では、rFGREP-JFH1から発現されるNS5BのはたらきによりrFGREP-JFH1レプリコンRNAが自律複製することによって、ネオマイシン耐性遺伝子が持続的に発現されG418耐性が維持される結果、細胞増殖が可能になったものと考えられた。
上記(E)に従ってrFGREP-JFH1のHuh7細胞へのトランスフェクションにより樹立した全長HCVレプリコンRNA複製細胞クローンから、酸性フェノール抽出法によりトータルRNAを抽出した。次いでこのトータルRNAをノーザンブロット法により解析した。プローブとしてはpFGREP-JFH1特異的プローブを用いた。対照としては、トランスフェクションを行っていないHuh7細胞から同様に抽出したトータルRNA(図6中、「Huh7」として示す)、Huh7細胞から抽出したトータルRNAに試験管内で合成したレプリコンRNAを10の7乗コピー加えたサンプル(図6中、「107」として示す)、及びHuh7細胞から抽出したトータルRNAに試験管内で合成したレプリコンRNAを10の8乗コピー加えたサンプル(図6中、「108」として示す)を用いた。図6中、1〜4は細胞クローンの番号である。
(E)に従って得られた細胞クローン1〜8(図7中ではFGR-JFH1/2-1〜FGR-JFH1/2-8と表記)について、その細胞クローンのG418に対する耐性がネオマイシン耐性遺伝子の宿主細胞ゲノムへの組み込みによるものでないことを確認するために、ネオマイシン耐性遺伝子特異的プライマー(センスプライマー、NEO-S3:5'-AACAAGATGGATTGCACGCA-3' (配列番号19),アンチセンスプライマー、NEO-R:5'-CGTCAAGAAGGCGATAGAAG-3' (配列番号20))を用いて、細胞クローンから抽出した宿主細胞のゲノムDNAを鋳型とするPCR増幅を行った。この結果、図7に示すとおり、ネオマイシン耐性遺伝子の増幅が示された陽性クローンは認められなかった。
rFGREP-JFH1をトランスフェクションし樹立した細胞クローンから常法によりタンパク質を抽出して、SDS-PAGE及びウェスタンブロット法による解析を行った。調べた細胞クローンは、上記(G)で用いたものと同じである。合成した全長HCVゲノムRNAをHuh7細胞に一過性にトランスフェクションして得られた細胞抽出液を陽性対照とした(図8、図9及び図10中、JFH-1として示す)。HCVのサブジェノミックRNAレプリコン(SGR-JFH1)をトランスフェクションして得られたクローン細胞抽出液をcoreタンパク質の陰性対照として、及びNS3、NS5aタンパク質の陽性対照として用いた(図8、図9及び図10中、SGR-JFH1として示す)。トランスフェクションしていないHuh7細胞抽出液は全ての陰性対照として用いた(図8、図9及び図10中、Huh7として示す)。それぞれの細胞クローンから抽出したタンパク質試料をPVDF膜(Immobilon- P , Millipore社製)にブロッティングし、抗core特異的抗体及び抗NS3特異的抗体(Dr. Moradpour より分与されたもの; Wolk B, et al, J. Virology. 2000; 74: 2293-2304)を用いて、全長HCVレプリコンRNAにコードされているcoreタンパク質及びNS3タンパク質を検出した。図8及び図9に示される通り、rFGREP-JFH1をトランスフェクションし樹立した細胞クローン1〜4では、それぞれのタンパク質について陽性対照と同じ大きさのタンパク質が検出された。トランスフェクションしていないHuh7細胞ではcoreタンパク質、及びNS3タンパク質も検出されなかったため、細胞クローン1〜4では、トランスフェクションされた全長HCVレプリコンRNAが自律複製し、さらにcoreタンパク質やNS3タンパク質が発現されていることが確認された。
上記(E)に従ってrFGREP-JFH1をHuh7細胞へトランスフェクションし、樹立した全長HCVレプリコンRNA複製細胞クローン2及び3(FGR-JFH1/2-3)の培養上清を回収して、上記(D)と同様の方法で、培養上清中のHCVウイルス粒子を測定した。この結果を図11に示す。図11中、網掛けの円は各フラクション(画分)の比重(g/ml)を示す。また黒塗りの円は、coreタンパク質の量(fmol/L)を示す。白抜きの円は、全長HCVレプリコンRNAの力価(×0.1コピー/mL)を示す。
(H)で用いた細胞クローン1〜8(FGR-JFH1/2-1、FGR-JFH1/2-2、FGR-JFH1/2-3、FGR-JFH1/2-4、FGR-JFH1/2-5、FGR-JFH1/2-6、FGR-JFH1/2-7、FGR-JFH1/2-8)のそれぞれの培養上清をHuh7細胞に添加して、培養上清中のウイルス粒子をHuh7細胞に感染させた。感染翌日に感染させたHuh7細胞の培養液にG418を0.3mg/ml添加し、さらに21日間培養した。培養終了後に細胞を固定し、クリスタルバイオレットで染色したところ、FGR-JFH1/2-3、FGR-JFH1/2-5、FGR-JFH1/2-6の培養上清を用いて感染させた細胞についてコロニー形成が観察された。一方、対照に用いたサブジェノミックレプリコン細胞SGR-JFH1/4-1(非特許文献6記載)の培養上清を用いて感染させた細胞ではコロニー形成はみられなかった。図12に、FGR-JFH1/2-3とSGR-JFH1/4-1の培養上清4mlまたは8mlをHuh7細胞に添加し、21日間培養した後に染色した培養ディッシュの写真を示す。FGR-JFH1/2-3の培養上清4mlを添加した細胞を播種したディッシュには3コロニー、FGR-JFH1/2-3の培養上清8mlを添加した細胞を播種したディッシュには9コロニーの形成を確認した。しかし、SGR-JFH1/4-1の培養上清を添加した細胞を播種したディッシュではコロニー形成はみられなかった。
配列番号2の配列は、JFH-1クローン由来のHCVゲノムRNAのcoreタンパク質コード配列を示す。
配列番号3の配列は、JFH-1クローン由来のHCVゲノムRNAのE1タンパク質コード配列を示す。
配列番号4の配列は、JFH-1クローン由来のHCVゲノムRNAのE2タンパク質コード配列を示す。
配列番号5の配列は、JFH-1クローン由来のHCVゲノムRNAのNS2タンパク質コード配列を示す。
配列番号7の配列は、JFH-1クローン由来のHCVゲノムRNAのNS4Aタンパク質コード配列を示す。
配列番号8の配列は、JFH-1クローン由来のHCVゲノムRNAのNS4Bタンパク質コード配列を示す。
配列番号9の配列は、JFH-1クローン由来のHCVゲノムRNAのNS5Aタンパク質コード配列を示す。
配列番号10の配列は、JFH-1クローン由来のHCVゲノムRNAのNS5Bタンパク質コード配列を示す。
配列番号12の配列は、JFH-1クローン由来の全長HCVゲノムRNAを示す。
配列番号13の配列は、JFH-1クローン由来の全長HCVゲノムRNAを含むレプリコンRNAを示す。
配列番号14の配列は、アミノ酸モチーフGDDをGNDに変異させた、JFH-1クローン由来の全長HCVゲノムRNAを示す。
配列番号15の配列は、アミノ酸モチーフGDDをGNDに変異させた、JFH-1クローン由来の全長HCVゲノムRNAを含むレプリコンRNAを示す。
配列願号21の配列は、発現ベクターpFGREP-JFH1/Luc由来のレプリコンRNAを示す。
配列願号22の配列は、発現ベクターpFGREP-JFH1/Luc/GND由来のレプリコンRNAを示す。
配列願号23の配列は、発現ベクターpFGREP-JFH1/EGFP由来のレプリコンRNAを示す。
配列願号24の配列は、発現ベクターpFGREP-JFH1/EGFP/GND由来のレプリコンRNAを示す。
配列願号25の配列は、発現ベクターpFGREP-JFH1/SEAP由来のレプリコンRNAを示す。
配列願号26の配列は、発現ベクターpFGREP-JFH1/SEAP/GND由来のレプリコンRNAを示す。
Claims (16)
- 配列番号1に示す塩基配列からなる5'非翻訳領域、配列番号2に示す塩基配列からなるcoreタンパク質コード配列、配列番号3に示す塩基配列からなるE1タンパク質コード配列、配列番号4に示す塩基配列からなるE2タンパク質コード配列、配列番号5に示す塩基配列からなるNS2タンパク質コード配列、配列番号6に示す塩基配列からなるNS3タンパク質コード配列、配列番号7に示す塩基配列からなるNS4Aタンパク質コード配列、配列番号8に示す塩基配列からなるNS4Bタンパク質コード配列、配列番号9に示す塩基配列からなるNS5Aタンパク質コード配列、配列番号10に示す塩基配列からなるNS5Bタンパク質コード配列、及び配列番号11に示す塩基配列からなる3'非翻訳領域と、少なくとも1つの選択マーカー遺伝子及び/又は少なくとも1つのリポーター遺伝子と、少なくとも1つのIRES配列と、を含む塩基配列からなる、自律複製能及び感染性ウイルス粒子産生能を有するレプリコンRNA。
- 前記塩基配列が、前記の5'非翻訳領域、少なくとも1つの選択マーカー遺伝子及び/又は少なくとも1つのリポーター遺伝子、少なくとも1つのIRES配列、coreタンパク質コード配列、E1タンパク質コード配列、E2タンパク質コード配列、NS2タンパク質コード配列、NS3タンパク質コード配列、NS4Aタンパク質コード配列、NS4Bタンパク質コード配列、NS5Aタンパク質コード配列、NS5Bタンパク質コード配列、及び3'非翻訳領域を、5'から3'方向へこの順番で含む、請求項1記載のレプリコンRNA。
- 以下の(a)又は(b)のRNAからなる、自律複製能及び感染性ウイルス粒子産生能を有するレプリコンRNA。
(a) 配列番号13に示す塩基配列からなるRNA。
(b) 配列番号13に示す塩基配列において1〜100個の塩基が欠失、置換又は付加された塩基配列からなるRNAであって、自律複製能及びウイルス粒子産生能を有するRNA。 - 請求項1〜3のいずれか1項記載のレプリコンRNAを細胞に導入することを含む、該レプリコンRNAを複製しかつウイルス粒子を産生する細胞を製造する方法。
- 請求項1〜3のいずれか1項記載のレプリコンRNAを含む、レプリコンRNAを複製しかつウイルス粒子を産生する細胞。
- 前記細胞がヒト肝由来細胞、ヒト子宮頸由来細胞、又はヒト胎児腎由来細胞である、請求項5記載の細胞。
- 前記細胞がHuh7細胞、HepG2細胞、IMY-N9細胞、HeLa細胞、又は293細胞である、請求項5記載の細胞。
- 請求項5〜7のいずれか1項記載の細胞を培養してウイルス粒子を産生させることを含む、C型肝炎ウイルス粒子の製造方法。
- 請求項1〜3のいずれか1項記載のレプリコンRNAを含むC型肝炎ウイルス粒子。
- 被験物質の存在下で、下記(a)及び(b):
(a) 請求項5〜7のいずれか1項記載の細胞、および
(b) 請求項9記載のC型肝炎ウイルス粒子及びC型肝炎ウイルス感受性細胞、
のうちの少なくとも一方を培養し、得られる培養物中のレプリコンRNA又はウイルス粒子を検出することを含む、抗C型肝炎ウイルス物質をスクリーニングする方法。 - 請求項9記載のC型肝炎ウイルス粒子を含有する、C型肝炎ワクチン。
- 請求項9記載のC型肝炎ウイルス粒子を抗原として使用して、C型肝炎ワクチンを製造する方法。
- 配列番号12に示す塩基配列からなるRNAを細胞に導入することを含む、該RNAを複製しかつ感染性C型肝炎ウイルス粒子を産生する細胞を製造する方法。
- 配列番号12に示す塩基配列からなるRNAを細胞に導入し、その細胞を培養して感染性C型肝炎ウイルス粒子を産生させることを含む、感染性C型肝炎ウイルス粒子の製造方法。
- 請求項14に記載の方法により製造されるC型肝炎ウイルス粒子を含有する、C型肝炎ワクチン。
- 被験物質の存在下で、下記(a)及び(b):
(a) 請求項13に記載の方法により製造される細胞、および
(b) 請求項14に記載の方法により製造されるC型肝炎ウイルス粒子及びC型肝炎ウイルス感受性細胞、
のうちの少なくとも一方を培養し、得られる培養物中のC型肝炎ウイルスゲノムRNA又はウイルス粒子を検出することを含む、抗C型肝炎ウイルス物質をスクリーニングする方法。
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CN102199613A (zh) | 2010-03-25 | 2011-09-28 | 国立大学法人东京大学 | 感染性丙型肝炎病毒高生产hcv突变体及其应用 |
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US9186383B2 (en) | 2011-05-31 | 2015-11-17 | Japan As Represented By Director-General Of National Institute Of Infectious Diseases | Mutant replicon derived from genome of hepatitis C virus J6CF strain |
EP2752485A4 (en) | 2011-08-31 | 2015-06-24 | Japan As Represented By The Director General Of Nat Inst Of Infectious Diseases | NUCLEIC ACID RECOMBINANT PRODUCT COMPRISING NUCLEIC ACID DERIVED FROM GENOTYPE 3A GENE VHC GENOME |
EP2788490A1 (en) * | 2011-12-05 | 2014-10-15 | Duke University | Identification and cloning of transmitted hepatitic c virus (hcv) genomes by single genome amplification |
WO2014051111A1 (ja) * | 2012-09-28 | 2014-04-03 | 国立大学法人 神戸大学 | C型肝炎ウイルス粒子形成促進剤及びc型肝炎ウイルス粒子の産生方法 |
CN109609505A (zh) * | 2019-01-14 | 2019-04-12 | 中国科学院成都生物研究所 | 一种体内筛选的剪切rna的锤头状核酶 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002171978A (ja) * | 2000-12-01 | 2002-06-18 | Tokyoto Igaku Kenkyu Kiko | 劇症c型肝炎ウイルス株の遺伝子 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5428145A (en) | 1991-08-09 | 1995-06-27 | Immuno Japan, Inc. | Non-A, non-B, hepatitis virus genome, polynucleotides, polypeptides, antigen, antibody and detection systems |
JPH06121689A (ja) | 1991-08-09 | 1994-05-06 | Tetsuo Nakamura | 非a非b型肝炎ウイルス遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペ プタイド、抗原、抗体検出系 |
DE19915178A1 (de) | 1999-04-03 | 2000-10-05 | Univ Mainz Johannes Gutenberg | Hepatitis C Virus Zellkultursystem |
WO2000075338A2 (en) * | 1999-06-04 | 2000-12-14 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | CLONED GENONE OF INFECTIOUS HEPATITIS C VIRUS OF GENOTYPE 2a AND USES THEREOF |
ATE408013T1 (de) | 1999-06-04 | 2008-09-15 | Us Gov Health & Human Serv | Infektiöses cdna klon des gb-virus b und dessen verwendungen |
US20030009775A1 (en) | 2001-05-25 | 2003-01-09 | Glenn Jeffrey S. | Mouse model for hepatitis C |
JP3811854B2 (ja) | 2002-05-10 | 2006-08-23 | 清水建設株式会社 | 制震機構 |
JP2004045489A (ja) | 2002-07-09 | 2004-02-12 | Fuji Photo Film Co Ltd | 感光性樹脂転写材料を用いた金属酸化物構造体の製造方法 |
CN1711352A (zh) * | 2002-11-13 | 2005-12-21 | 华盛顿大学 | 丙型肝炎病毒复制的高允许性细胞系 |
US7935676B2 (en) * | 2003-05-26 | 2011-05-03 | Toray Industries Inc. | Nucleic acid construct containing a nucleic acid derived from the genome of hepatitis C virus (HCV) of genotype 2A, and a cell having such nucleic acid construct introduced therein |
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