JP2002171978A - 劇症ｃ型肝炎ウイルス株の遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 劇症肝炎を発症させたＣ型肝炎ウイルスの全
ウイルスゲノム配列を解明し、その遺伝子配列検索の手
がかりを提供すること。 【解決手段】 Ｃ型肝炎ウイルス劇症肝炎株の全ゲノム
配列及びアミノ酸配列に関する。かかる全ゲノム配列
は、従来のＨＣＶ株が有する遺伝子情報と異なる遺伝子
情報を有するものであり、そのような遺伝子を解明する
ことにより、新たなＨＣＶウイルスの遺伝子診断法の確
立、更にはＨＣＶウイルスによる劇症肝炎に対する治療
方法の開発への指針を与えるものである

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス
による劇症肝炎を罹患した患者より検出されたＣ型肝炎
ウイルスの遺伝子及び該遺伝子によりコードされるポリ
ペプチドに関する。

【０００２】

【従来の技術】わが国では、劇症肝炎の原因の９０％以
上がウイルス性肝炎といわれているが、そのなかでもＡ
型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）又はＢ型肝炎ウイルス（ＨＢ
Ｖ）によるものが多く、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に
よるものはそれ程多いものではない。しかしながら、稀
ではあるが、ＨＣＶ感染による劇症肝炎も報告されてお
り、したがってＨＣＶは、劇症肝炎を発症する原因ウイ
ルスともなり得る可能性を秘めている。

【０００３】ところで、Ｃ型肝炎は、Ａ型肝炎又はＢ型
肝炎と異なり、一般的には、ＨＣＶに感染しても、強い
急性肝炎となることは少なく、感染の急性期であって
も、まったく無症状のまま進行し、その後に慢性感染す
ることが多い。したがって、他のウイルス感染症におけ
る強毒、弱毒株の相違が、ウイルスゲノムの突然変異に
よることなどから考えると、一般的に前記のような慢性
感染の経過を示すＨＣＶと、劇症肝炎を発症させるＨＣ
Ｖとの間には、ウイルスゲノム上に遺伝子情報の違いが
あるものと推測することができる。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】そのため、ＨＣＶ感染
による劇症肝炎患者から分離したＨＣＶの全ウイルスゲ
ノムをクローニングし、その配列を決定し、劇症肝炎を
引き起こすＨＣＶの遺伝子を解明することは、新たなＨ
ＣＶウイルスの培養法の確立、感染性ＨＣＶのｃＤＮＡ
クローンの確立、ＨＣＶウイルスの病原性の相違を決定
する遺伝子領域の探索、又は新たなＨＣＶウイルスの遺
伝子診断法の確立、更にはＨＣＶウイルスによる劇症肝
炎に対する治療方法の開発等にとって、極めて重要なこ
とと考えられる。したがって、本発明は前記の点に鑑
み、劇症肝炎を発症させたＣ型肝炎ウイルスの全ウイル
スゲノム配列を解明して、その遺伝子配列検索の手がか
りを提供することを課題とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】かかる課題を解決するた
めに、本発明者は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染に
よる劇症肝炎患者から分離したＨＣＶの全ウイルスゲノ
ムのクローニングし、その塩基配列を決定し、これまで
報告されているウイルスゲノム配列と比較を行った。そ
の結果、劇症Ｃ型肝炎患者から分離されたウイルス株
は、慢性肝炎患者から分離されたウイルス株とは異なる
遺伝子情報を有する、全長９６７８塩基長を有する、配
列番号１に示す塩基配列を有するものであり、該塩基配
列の３４１番から９４３９番に、配列番号２に示す３０
３３個のアミノ酸残基をコードする長い翻訳領域が存在
することを確認するとともに、配列番号２に示すアミノ
酸配列のうち、特にアミノ酸番号１６１〜１９１で表さ
れるアミノ酸配列が公知のＨＣＶのものと異なる特徴的
部分であることを見出し、本発明を完成させた。

【０００６】即ち、本発明は、以下の発明を包含する。 （１）配列番号２に示すアミノ酸配列のうち、アミノ酸
番号１６１〜１９１で表されるアミノ酸配列を含むポリ
ペプチド。 （２）アミノ酸残基数が３１〜３０３３である前記
（１）に記載のポリペプチド。 （３）配列番号２に示すアミノ酸配列からなるポリペプ
チド。 （４）前記（１）〜（３）のいずれかに記載のポリペプ
チドをコードする塩基配列を含むＤＮＡ。 （５）配列番号１に示す塩基配列のうち、ヌクレオチド
番号８２１〜９１３で表される塩基配列と同一又は相補
的な塩基配列を含むＤＮＡ。 （６）塩基数が９３〜９６７８である前記（４）又は
（５）に記載のＤＮＡ。 （７）配列番号１に示す塩基配列と同一又は相補的な塩
基配列からなるＤＮＡ。

【０００７】本発明により提供される劇症肝炎を発症さ
せたＨＣＶのゲノム配列は、従来の慢性Ｃ型肝炎患者か
ら分離されたウイルス株とは異なった遺伝子情報を有す
ることから、その病原性が異なるものである。したがっ
て、本塩基配列の翻訳領域より、従来のＨＣＶ株とは異
なる遺伝子情報をもつ遺伝子配列を決定し、それを利用
することにより、前記する、新たなＨＣＶウイルスの遺
伝子診断法の確立、更にはＨＣＶウイルスによる劇症肝
炎に対する遺伝子治療法の開発に一つの指針を与えるも
のである。

【０００８】例えば、慢性感染の経過を示す公知のＨＣ
Ｖについては、既に、クローニングされた遺伝子をもと
に作成された組換え体ウイルス蛋白質を抗原に用いて輸
血用血液中に存在する抗ウイルス抗体を検出する系が構
築されており（Kuo G. et al., Science, 244, 362 (19
89)）、また、逆転写反応によりＲＮＡ遺伝子をそれと
相補的なｃＤＮＡに置換した後、その一部をポリメラー
ゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法によって増幅するというＲＴ−
ＰＣＲ法によってＨＣＶ遺伝子を高感度に検出する系が
確立されている（Okamoto H. et al., Japan. J. Exp.
Med., 60, 215(1990)）。そして、これらの方法によっ
てＨＣＶが感染している輸血用血液を発見することが可
能になっている。したがって、これらの方法に本発明を
適用することにより、従来法では検出することができな
かった劇症肝炎を発症させるＨＣＶの検出が可能になる
と考えられる。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチドは、配列番
号２に示すアミノ酸番号１〜３０３３からなるアミノ酸
配列のうち、アミノ酸番号１６１〜１９１で表されるア
ミノ酸配列を含むものであり、該ポリペプチドを構成す
るアミノ酸残基の数は、通常３１〜３０３３である。

【００１０】本発明のポリペプチドは、配列番号２に示
すアミノ酸配列のうち、アミノ酸番号１６１〜１９１で
表されるアミノ酸配列が特に公知のＨＣＶと異なる特徴
的部分である。したがって、前記アミノ酸配列以外の部
分においては、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は
付加されていてもよい。前記のアミノ酸の欠失、置換又
は付加は、出願前周知技術である部位特異的変異誘発法
により実施することができる。

【００１１】かかる１又は数個のアミノ酸が欠失、置換
又は付加されたアミノ酸配列からなるポリペプチドは、
Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edi
tion, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)
（以下「モレキュラー・クローニング第２版」とい
う。）、Current Protocols in Molecular Biology, Su
pplement 1〜38, John Wiley & Sons (1987-1997)（以
下「カレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・
バイオロジー」という。）、Nucleic Acids Research,
10, 6487 (1982)、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 6
409 (1982)、Gene, 34, 315 (1985)、Nucleic Acids Re
search, 13, 4431 (1985)、Proc. Natl. Acad.Sci. US
A, 82, 488 (1985)、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81,
5662 (1984)、Science, 224, 1431 (1984)、WO85/0081
7、Nature, 316, 601 (1985)等に記載の方法に準じて調
製することができる。

【００１２】本発明のＤＮＡは、前記ポリペプチドをコ
ードする塩基配列を含むＤＮＡであり、例えば、配列番
号１に示すヌクレオチド番号１〜９６７８からなる塩基
配列のうち、ヌクレオチド番号８２１〜９１３で表され
る塩基配列と同一又は相補的な塩基配列を含むＤＮＡが
挙げられる。本発明のＤＮＡの塩基数は、通常９３〜９
６７８である。

【００１３】前記の配列番号１に示す塩基配列のうち、
ヌクレオチド番号８２１〜９１３で表される塩基配列と
同一又は相補的な塩基配列を含むＤＮＡは、ヌクレオチ
ド番号８２１〜９１３で表される塩基配列を含む、配列
番号１に示す塩基配列の全配列又は部分配列からなるＤ
ＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズしう
るＤＮＡを包含する。

【００１４】前記の「ストリンジェントな条件下でハイ
ブリダイズしうるＤＮＡ」とは、前記ヌクレオチド番号
８２１〜９１３で表される塩基配列を含む、配列番号１
に示す塩基配列の全配列又は部分配列からなるＤＮＡを
プローブとして、コロニー・ハイブリダイゼーション
法、プラーク・ハイブリダイゼーション法、サザンブロ
ットハイブリダイゼーション法等を用いることにより得
られるＤＮＡを意味し、具体的には、コロニー又はプラ
ーク由来のＤＮＡを固定化したフィルターを用いて、
０．７〜１．０ＭのＮａＣｌ存在下、６５℃でハイブリ
ダイゼーションを行った後、０．１〜２倍濃度のＳＳＣ
（saline-sodium citrate）溶液（１倍濃度のＳＳＣ溶
液の組成は、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、１５ｍＭクエ
ン酸ナトリウムよりなる）を用い、６５℃条件下でフィ
ルターを洗浄することにより同定できるＤＮＡが挙げら
れる。

【００１５】ハイブリダイゼーションは、モレキュラー
・クローニング第２版、カレント・プロトコールズ・イ
ン・モレキュラー・バイオロジー、DNA Cloning 1: Cor
e Techniques, A Practical Approach, Second Editio
n, Oxford University Press(1995)等の実験書に記載さ
れている方法に準じて行うことができる。ハイブリダイ
ズしうるＤＮＡとしては、具体的には、前記ヌクレオチ
ド番号８２１〜９１３で表される塩基配列を含む、配列
番号１に示す塩基配列の全配列又は部分配列と少なくと
も８０％以上の相同性を有するＤＮＡ、好ましくは９５
％以上の相同性を有するＤＮＡが挙げられる。

【００１６】劇症Ｃ型肝炎ウイルスのクローニングは、
例えば、次のようにして行うことができる。劇症Ｃ型肝
炎患者の血清から全ＲＮＡを調製する方法として、酸性
グアニジンイソチオシアネート・フェノール・クロロホ
ルム（acid-guanidinium-isothiocyanate-phenol-chlor
oform; AGPC）法〔Analytical Biochemistry, 162, 156
(1987)、実験医学 9, 1937 (1991)、日本ジーン社製Ｉ
ＳＯＧＥＮ−ＬＳ〕、チオシアン酸グアニジン−トリフ
ルオロ酢酸セシウム法〔Methods in Enzymology, 154,
3 (1987)〕等を用いることができる。

【００１７】全ＲＮＡからポリ（Ａ）⁺ＲＮＡとしてｍ
ＲＮＡを調製する方法として、オリゴ（ｄＴ）固定化セ
ルロースカラム法（モレキュラー・クローニング第２
版）やオリゴｄＴラテックスを用いる方法等を用いるこ
とができる。ファースト・トラック・ｍＲＮＡ単離キッ
ト〔Fast Track mRNA Isolation Kit；インビトロジェ
ン（Invitrogen）社製〕、クイック・プレップ・ｍＲＮ
Ａ精製キット〔Quick Prep mRNA Purification Kit；フ
ァルマシア（Pharmacia）社製〕等のキットを用いて血
清等から直接ｍＲＮＡを調製することもできる。得られ
た全ＲＮＡ又はｍＲＮＡを用い、常法によりｃＤＮＡラ
イブラリーを作製する。

【００１８】ｃＤＮＡライブラリー作製法としては、モ
レキュラー・クローニング第２版やカレント・プロトコ
ールズ・イン・モレキュラー・バイオロジー、ＤＮＡCl
oning1: Core Techniques, A Practical Approach, Sec
ond Edition, Oxford University Press (1995) 等に記
載された方法、あるいは市販のキット、例えばマウス白
血病ウイルスリバーストランスクリプターゼ（Superscr
ipt II、Life Technologies社製；ロックビル、メリー
ランド）、スーパースクリプト・プラスミド・システム
・フォー・ｃＤＮＡ・シンセシス・アンド・プラスミド
・クローニング〔SuperScript Plasmid System for cDN
A Synthesis and Plasmid Cloning；ギブコＢＲＬ（Gib
co BRL）社製〕やザップ−ｃＤＮＡ・シンセシス・キッ
ト〔ZAP-cDNA Synthesis Kit、ストラタジーン社製〕を
用いる方法等が挙げられる。

【００１９】ｃＤＮＡライブラリーを作製するためのク
ローニングベクターとしては、大腸菌Ｋ１２株中で自律
複製できるものであれば、ファージベクター、プラスミ
ドベクター等いずれでも使用できる。具体的には、ZAP
Express〔ストラタジーン社製、Strategies, 5, 58 (19
92)〕、pBluescript II SK(+)〔Nucleic Acids Researc
h, 17, 9494 (1989)〕、Lambda ZAP II（ストラタジー
ン社製）、λgt10、λgt11〔ＤＮＡ Cloning, A Practi
cal Approach, 1, 49 (1985)〕、λTriplEx （クローン
テック社製）、λExCell（ファルマシア社製）、pT7T31
8U（ファルマシア社製）、pcD2〔Mol. Cell. Biol., 3,
280 (1983)〕、ｐＵＣ１８〔Gene, 33, 103 (198
5)〕、ｐＡＭｏ〔J.Biol. Chem., 268, 22782-22787 (1
993) 、別名pAMoPRC3Sc（特開平05-336963号）〕等が挙
げられる。

【００２０】宿主微生物としては、大腸菌Escherichia
coliに属する微生物であればいずれも用いることができ
る。具体的には、Escherichia coli XL1-Blue MRF'〔ス
トラタジーン社製、Strategies, 5, 81 (1992)〕、Esch
erichia coli C600〔Genetics, 39, 440 (1954)〕、Esc
herichia coli Y1088〔Science, 222, 778 (1983)〕、E
scherichia coli Y1090〔Science, 222, 778 (198
3)〕、Escherichia coli NM522〔J. Mol. Biol., 166,
1 (1983)〕、Escherichia coli K802〔J. Mol. Biol.,
16, 118 (1966)〕、Escherichia coli JM105〔Gene, 3
8, 275 (1985)〕、Escherichia coli SOLRTM Strain
（ストラタジーン社製）、Escherichia coli LE392（モ
レキュラー・クローニング第２版）等を用いることがで
きる。

【００２１】前記方法により作製したｃＤＮＡライブラ
リーに加え、市販のｃＤＮＡライブラリーも利用するこ
とができる。前記で作製したｃＤＮＡライブラリーよ
り、本発明のＤＮＡを有するｃＤＮＡクローンを、アイ
ソトープ又は蛍光標識したプローブを用いたコロニー・
ハイブリダイゼーション法又はプラーク・ハイブリダイ
ゼーション法〔モレキュラー・クローニング第２版〕等
により選択することができる。

【００２２】プローブとしては、一部明らかになってい
る塩基配列に基いたプライマーを用いて、ＰＣＲ〔ＰＣ
Ｒ Protocols, Academic Press (1990)〕を利用した方
法でｃＤＮＡの一部を増幅した断片や、一部明らかにな
っている塩基配列に基いたオリゴヌクレオチドを利用す
ることができる。

【００２３】プライマーとして、全長ｃＤＮＡの５’末
端側及び３’末端側の両方の塩基配列がＥＳＴ等により
明らかになっている場合には、その塩基配列に基いて調
製したプライマーを用いることができる。前記により選
択された本発明のＤＮＡを有するｃＤＮＡクローンよ
り、前記の方法に準じてｍＲＮＡからｃＤＮＡを合成す
る。

【００２４】また、該ｃＤＮＡの両端にアダプターを付
加し、このアダプターの塩基配列と一部明らかになって
いる塩基配列に基づいたプライマーでＰＣＲを行う５’
−ＲＡＣＥ(rapid amplification of cDNA ends)及び
３’−ＲＡＣＥ〔Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 85, 899
8 (1988)〕により、プライマーに用いた配列よりも５’
末端側及び３’末端側のｃＤＮＡ断片を得ることができ
る。得られたｃＤＮＡ断片をつなぎあわせることによ
り、本発明の全長ＤＮＡを取得することができる。

【００２５】前記の方法により取得されたＤＮＡの塩基
配列は、該ＤＮＡ断片をそのまま又は適当な制限酵素等
で切断後常法によりベクターに組み込み、通常用いられ
る塩基配列解析方法、例えばサンガー(Sanger)らのジデ
オキシ法〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74, 5463 (19
77)〕、あるいはパーキン・エルマー社（PerkinElmer：
３７３Ａ・ＤＮＡシークエンサー）、ファルマシア社、
ライコア（LI-COR）社等の塩基配列分析装置を用いて分
析することにより決定することができる。

【００２６】前記方法により得られた塩基配列情報に基
づき、ＤＮＡ合成機で化学合成することにより目的とす
るＤＮＡを調製することもできる。ＤＮＡ合成機として
は、チオホスファイト法を利用した島津製作所社製のＤ
ＮＡ合成機、フォスフォアミダイト法を利用したパーキ
ン・ エルマー社製のＤＮＡ合成機ｍｏｄｅｌ３９２等が
挙げられる。

【００２７】得られた塩基配列の新規性に関しては、BL
AST 等の相同性検索プログラムを用いて、GenBank、EMB
L及びDDBJ等の塩基配列データベースを検索することに
より確認することができる。新規な塩基配列について
は、アミノ酸配列に変換した後、ＦＡＳＴＡ、フレーム
サーチ（FrameSearch）等の相同性検索プログラムを用
いて、GenPept 、PIR、Swiss-Prot等のアミノ酸配列デ
ータベースを検索することにより、相同性をもつ既存の
遺伝子を検索することができる。

【００２８】前記記載の方法により取得した本発明のＤ
ＮＡを宿主細胞中で発現させ、本発明のポリペプチドを
製造するために、モレキュラー・クローニング第２版、
カレント・プロトコールズ・インモレキュラー・バイオ
ロジー等に記載された方法を用いることができる。すな
わち、本発明のＤＮＡを適当な発現ベクターのプロモー
ター下流に挿入した組換えベクターを造成し、該ベクタ
ーを宿主細胞に導入することにより、本発明のポリペプ
チドを発現する形質転換体を取得し、該形質転換体を培
養することにより、本発明のポリペプチドを製造するこ
とができる。

【００２９】宿主細胞としては、細菌、酵母、動物細
胞、昆虫細胞、植物細胞等、目的とする遺伝子を発現で
きるものであればいずれも用いることができる。発現ベ
クターとしては、前記宿主細胞において自律複製可能な
いしは染色体中への組込みが可能で、本発明のＤＮＡを
転写できる位置にプロモーターを含有しているものが用
いられる。

【００３０】細菌等の原核生物を宿主細胞として用いる
場合、本発明のポリペプチド遺伝子発現ベクターは原核
生物中で自律複製可能であると同時に、プロモーター、
リボソーム結合配列、本発明のＤＮＡ及び転写終結配列
より構成された組換えベクターであることが好ましい。
プロモーターを制御する遺伝子が含まれていてもよい。

【００３１】発現ベクターとしては、例えば、ｐＳＥ２
８０（インビトロジェン社製）、ｐＧＥＭＥＸ−１（Pr
omega社製）、ｐＱＥ−８（QIAGEN社製）、ｐＫＹＰ１
０（特開昭５８−１１０６００号）、ｐＫＹＰ２００
〔Agric. Biol. Chem., 48, 669 (1984)〕、ｐＬＳＡ１
〔Agric. Biol. Chem., 53, 277 (1989)〕、ｐＧＥＬ１
〔Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 82, 4306 (1985)〕、
pBluescript II SK(-)（STRATAGENE社）、ｐＴｒｓ３０
（ＦＥＲＭ ＢＰ−５４０７）、ｐＴｒｓ３２（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−５４０８）、ｐＧＨＡ２（ＦＥＲＭ ＢＰ−
４００）、ｐＧＫＡ２（ＦＥＲＭ Ｂ−６７９８）、ｐ
Ｔｅｒｍ２（特開平３−２２９７９号、ＵＳ４６８６１
９１、ＵＳ４９３９０９４、ＵＳ５１６０７３５）、ｐ
ＫＫ２３３−３（アマシャム・ファルマシア・バイオテ
ク社製）、ｐＧＥＸ（Pharmacia社製）、ｐＥＴシステ
ム（Novagen社製）、ｐＳｕｐｅｘ、ｐＴｒｘＦｕｓ（I
nvitrogen社）、ｐＭＡＬ−ｃ２（New England Biolabs
社）等が挙げられる。

【００３２】プロモーターとしては、宿主細胞中で発現
できるものであればいかなるものでもよい。例えば大腸
菌を宿主とした場合は、trpプロモーター（Ｐtrp）、la
c プロモーター（Ｐlac）、P_Lプロモーター、T7プロモ
ーター、Ｐ_Rプロモーター等の、大腸菌やファージ等に
由来するプロモーター等が挙げられる。また、Ｐtrpを
２つ直列させたプロモーター（Ｐtrp×２）、tacプロモ
ーター、T7lacプロモーター、let I プロモーターのよ
うに人為的に設計改変されたプロモーター等も用いるこ
とができる。枯草菌を宿主とした場合は、枯草菌のファ
ージであるＳＰＯ１やＳＰＯ２のプロモーター、ｐｅｎ
Ｐプロモーター等が挙げられる。

【００３３】リボソーム結合配列としては、シャイン−
ダルガノ（Shine-Dalgarno）配列と開始コドンとの間を
適当な距離（例えば６〜１８塩基）に調節したプラスミ
ドを用いることが好ましい。本発明のＤＮＡの発現には
転写終結配列は必ずしも必要ではないが、構造遺伝子の
直下に転写終結配列を配置することが好ましい。

【００３４】宿主細胞としては、エシェリヒア属、セラ
チア属、バチルス属、ブレビバクテリウム属、コリネバ
クテリウム属、ミクロバクテリウム属、シュードモナス
属等に属する微生物、例えば、Escherichia coli XL1-B
lue、Escherichia coli XL2-Blue、Escherichia coli D
H1、Escherichia coli MC1000、Escherichia coli KY32
76、Escherichia coli W1485、Escherichia coli JM10
9、Escherichia coli HB101、Escherichia coli No.4
9、Escherichia coli W3110、Escherichia coli NY49、
Serratia ficaria、Serratia fonticola、Serratia liq
uefaciens、Serratia marcescens 、Bacillus subtilis
、Bacillus amyloliquefaciens、Brevibacterium ammm
oniagenes、Brevibacterium immariophilum ATCC1406
8、Brevibacterium saccharolyticum ATCC14066、Coryn
ebacterium glutamicum ATCC13032、Corynebacterium g
lutamicum ATCC14067、Corynebacterium glutamicum AT
CC13869、Corynebacterium acetoacidophilum ATCC1387
0、Microbacterium ammoniaphilum ATCC15354、Pseudom
onas sp. D-0110等が挙げられる。

【００３５】組換えベクターの導入方法としては、前記
宿主細胞へＤＮＡを導入する方法であればいずれも用い
ることができ、例えば、カルシウムイオンを用いる方法
〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 2110 (1972)〕、
プロトプラスト法（特開昭63-248394号）、エレクトロ
ポレーション法〔Gene, 17, 107 (1982)、Molecular &G
eneral Genetics, 168, 111 (1979)〕等が挙げられる。
酵母菌株を宿主細胞として用いる場合には、発現ベクタ
ーとして、例えば、YEp13（ATCC37115）、YEp24（ATCC3
7051）、YCp50（ATCC37419）、pHS19、pHS15等を用いる
ことができる。

【００３６】プロモーターとしては、酵母菌株中で発現
できるものであればいずれのものを用いてもよく、例え
ば、PH05プロモーター、PGKプロモーター、GAPプロモー
ター、ADHプロモーター、gal 1プロモーター、gal 10プ
ロモーター、ヒートショックポリペプチドプロモータ
ー、MFα1プロモーター、CUP 1プロモーター等のプロモ
ーターが挙げられる。

【００３７】宿主細胞としては、サッカロマイセス属、
シゾサッカロマイセス属、クルイベロミセス属、トリコ
スポロン属、シワニオミセス属、ピヒア属等に属する酵
母菌株が挙げられ、具体的には、Saccharomyces cerevi
siae、Schizosaccharomycespombe 、Kluyveromyces lac
tis、Trichosporon pullulans、Schwanniomyces alluvi
us、Pichia pastoris等が挙げられる。

【００３８】組換えベクターの導入方法としては、酵母
にＤＮＡを導入する方法であればいずれも用いることが
でき、例えば、エレクトロポレーション法〔Methods in
Enzymology, 194, 182 (1990)〕、スフェロプラスト法
〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 4889 (1984)〕、
酢酸リチウム法〔Journal of Bacteriology, 153, 163
(1983)〕等が挙げられる。

【００３９】動物細胞を宿主として用いる場合には、発
現ベクターとして、例えば、ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ（イ
ンビトロジェン社製）、ｐｃＤＮＡＩ、pAMoERC3Sc、ｐ
ＣＤＭ８〔Nature, 329, 840 (1987)〕、ｐＡＧＥ１０
７〔特開平3-22979号、Cytotechnology, 3, 133 (1990)
〕、ｐＲＥＰ４（インビトロジェン社製）、ｐＡＧＥ
１０３〔Journal of Biochemistry, 101, 1307 (198
7)〕、ｐＡＭｏ、ｐＡＭｏＡ、ｐＡＳ３−３（特開平2-
227075号）等が用いられる。

【００４０】プロモーターとしては、動物細胞中で発現
できるものであればいずれも用いることができ、例え
ば、サイトメガロウイルス（CMV）のIE（immediate ear
ly）遺伝子のプロモーター、SV40の初期プロモーター又
はメタロチオネインのプロモーター、レトロウイルスの
プロモーター、ヒートショックプロモーター、ＳＲαプ
ロモーター等が挙げられる。また、ヒトCMVのIE遺伝子
のエンハンサーをプロモーターと共に用いてもよい。

【００４１】動物細胞としては、マウス・ミエローマ細
胞、ラット・ミエローマ細胞、マウス・ハイブリドーマ
細胞、ヒトの細胞であるナマルバ（Namalwa）細胞又はN
amalwa KJM-1細胞、ヒト胎児腎臓細胞、ヒト白血病細
胞、アフリカミドリザル腎臓細胞、チャイニーズ・ハム
スターの細胞であるCHO細胞、HBT5637（特開昭63-299
号）等が挙げられる。マウス・ミエローマ細胞として
は、SP2/0、NSO等、ラット・ミエローマ細胞としてはYB
2/0等、ヒト胎児腎臓細胞としてはHEK293(ATCC: CRL-15
73)等、ヒト白血病細胞としては、BALL-1等、アフリカ
ミドリザル腎臓細胞としてはCOS-1、COS-7等が挙げられ
る。

【００４２】組換えベクターの導入方法としては、動物
細胞にＤＮＡを導入する方法であればいずれも用いるこ
とができ、例えば、エレクトロポレーション法〔Cytote
chnology, 3, 133(1990)〕、リン酸カルシウム法（特開
平2-227075号）、リポフェクション法〔Proc. Natl. Ac
ad. Sci. USA, 84, 7413 (1987)〕、Virology, 52, 456
(1973)に記載の方法等が挙げられる。

【００４３】昆虫細胞を宿主として用いる場合には、例
えばバキュロウイルス・イクスプレッション・ベクター
ズ、ア・ラボラトリー・マニュアル〔Baculovirus Expr
ession Vectors, A Laboratory Manual, W. H. Freeman
and Company, New York (1992)〕、モレキュラー・バ
イオロジー、ア・ラボラトリー・マニュアル(Molecular
Biology, A Laboratory Manual）、カレント・プロト
コールズ・イン・モレキュラー・バイオロジー、Bio/Te
chnology, 6, 47 (1988)等に記載された方法によって、
ポリペプチドを発現することができる。

【００４４】即ち、組換え遺伝子導入ベクター及びバキ
ュロウイルスを昆虫細胞に共導入して昆虫細胞培養上清
中に組換えウイルスを得た後、更に組換えウイルスを昆
虫細胞に感染させ、ポリペプチドを発現させることがで
きる。該方法において用いられる遺伝子導入ベクターと
しては、例えば、pVL1392、pVL1393、pBlueBacIII（と
もにインビトロジェン社製）等が挙げられる。バキュロ
ウイルスとしては、例えば、夜盗蛾科昆虫に感染するウ
イルスであるアウトグラファ・カリフォルニカ・ヌクレ
アー・ポリヘドロシス・ウイルス(Autographa californ
ica nuclear polyhedrosis virus) 等を用いることがで
きる。

【００４５】昆虫細胞としては、Spodoptera frugiperd
aの卵巣細胞、Trichoplusia niの卵巣細胞、カイコ卵巣
由来の培養細胞等を用いることができる。Spodoptera f
rugiperdaの卵巣細胞としてはSf9、Sf21（バキュロウイ
ルス・イクスプレッション・ベクターズ、ア・ラボラト
リー・マニュアル）等、Trichoplusia niの卵巣細胞と
してはHigh 5、BTI-TN-5B1-4（インビトロジェン社製）
等、カイコ卵巣由来の培養細胞としてはBombyx mori N4
等が挙げられる。

【００４６】組換えウイルスを調製するための、昆虫細
胞への前記組換え遺伝子導入ベクターと前記バキュロウ
イルスの共導入方法としては、例えば、リン酸カルシウ
ム法（特開平2-227075号）、リポフェクション法〔Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413 (1987)〕等が挙げ
られる。遺伝子の発現方法としては、直接発現以外に、
モレキュラー・クローニング第２版に記載されている方
法等に準じて、分泌生産、融合蛋白質発現等を行うこと
ができる。酵母、動物細胞又は昆虫細胞により発現させ
た場合には、糖又は糖鎖が付加されたポリペプチドを得
ることができる。

【００４７】以上のようにして得られる形質転換体を培
地に培養し、培養物中に本発明のポリペプチドを生成蓄
積させ、該培養物から採取することにより、本発明のポ
リペプチドを製造することができる。本発明の形質転換
体を培地に培養する方法は、宿主の培養に用いられる通
常の方法に従って行われる。

【００４８】大腸菌又は酵母等の微生物を宿主として得
られた形質転換体を培養する培地としては、微生物が資
化し得る炭素源、窒素源、無機塩類等を含有し、形質転
換体の培養を効率的に行える培地であれば天然培地、合
成培地のいずれを用いてもよい。炭素源としては、グル
コース、フルクトース、スクロース、糖蜜、デンプン、
デンプン加水分解物等の炭水化物、酢酸、プロピオン酸
等の有機酸、エタノール、プロパノール等のアルコール
類が用いられる。

【００４９】窒素源としては、アンモニア、塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸
アンモニウム等の無機酸もしくは有機酸のアンモニウム
塩又はその他の含窒素化合物の他、ペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、コーンスチープリカー、カゼイン加水
分解物、大豆粕及び大豆粕加水分解物、各種発酵菌体又
はその消化物等が用いられる。無機物としては、リン酸
水素二カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸マグネ
シウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一
鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム等が用いら
れる。

【００５０】培養は、通常振盪培養又は深部通気攪拌培
養等の好気的条件下、１５〜４０℃で１６〜９６時間行
う。培養期間中、ｐＨは３.０〜９.０に保持する。ｐＨ
の調整は、無機又は有機の酸、アルカリ溶液、尿素、炭
酸カルシウム、アンモニア等を用いて行う。培養中は必
要に応じて、アンピシリンやテトラサイクリン等の抗生
物質を培地に添加してもよい。

【００５１】プロモーターとして誘導性のプロモーター
を用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養する
ときには、必要に応じてインデューサーを培地に添加し
てもよい。例えば、lacプロモーターを用いた発現ベク
ターで形質転換した微生物を培養するときにはイソプロ
ピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）等
を、trpプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換
した微生物を培養するときにはインドール酢酸（ＩＡ
Ａ）等を培地に添加してもよい。

【００５２】動物細胞を宿主として得られた形質転換体
を培養する培地としては、一般に使用されているＲＰＭ
Ｉ１６４０培地、ＥａｇｌｅのＭＥＭ培地又はこれら培
地に牛胎児血清等を添加した培地等が用いられる。培養
は、通常５％ＣＯ₂存在下、３５〜３７℃で３〜７日間
行い、培養中は必要に応じて、カナマイシン、ペニシリ
ン等の抗生物質を培地に添加してもよい。

【００５３】昆虫細胞を宿主細胞として得られた形質転
換体を培養する培地としては、一般に使用されているTN
M-FH培地［ファーミンジェン（Pharmingen）社製］、Sf
900IISFM［ライフテクノロジーズ（Life Technologie
s）社製］、ExCell400 、ExCell405［いずれもJRHバイ
オサイエンシーズ（JRH Biosciences）社製］等が用い
られる。

【００５４】培養条件は、pH６〜７、培養温度２５〜３
０℃がよく、培養時間は通常１〜５日間である。また、
培養中は必要に応じて、ゲンタマイシン等の抗生物質を
培地に添加してもよい。前記形質転換体の培養液から、
前記方法により発現させた本発明のポリペプチドを単離
精製するためには、通常の酵素の単離、精製法を用いれ
ばよい。例えば、本発明のポリペプチドが、細胞内に溶
解状態で発現した場合には、培養終了後、細胞を遠心分
離により回収し水系緩衝液に懸濁後、超音波破砕機、フ
レンチプレス、マントンガウリンホモゲナイザー、ダイ
ノミル等により細胞を破砕し、無細胞抽出液を得る。

【００５５】前記無細胞抽出液を遠心分離することによ
り得られた上清から、通常の酵素の単離精製法、即ち、
溶媒抽出法、硫安等による塩析法、脱塩法、有機溶媒に
よる沈殿法、ジエチルアミノエチル（DEAE）−セファロ
ース、DIAION HPA-75 （三菱化学社製）等レジンを用い
た陰イオン交換クロマトグラフィー法、S-SepharoseFF
（ファルマシア社製）等のレジンを用いた陽イオン交換
クロマトグラフィー法、ブチルセファロース、フェニル
セファロース等のレジンを用いた疎水性クロマトグラフ
ィー法、分子篩を用いたゲルろ過法、アフィニティーク
ロマトグラフィー法、クロマトフォーカシング法、等電
点電気泳動等の電気泳動法等の手法を単独又は組み合わ
せて用い、精製標品を得ることができる。

【００５６】また、前記ポリペプチドが細胞内に不溶体
を形成して発現した場合は、同様に細胞を回収後破砕
し、遠心分離を行うことにより得られた沈殿画分より、
通常の方法により該ポリペプチドを回収後、該ポリペプ
チドの不溶体を蛋白質変性剤で可溶化する。前記可溶化
液を、蛋白質変性剤を含まない又は蛋白質変性剤の濃度
が蛋白質が変性しない程度に希薄な溶液に希釈、あるい
は透析し、該ポリペプチドを正常な立体構造に構成させ
た後、前記と同様の単離精製法により精製標品を得るこ
とができる。

【００５７】本発明のポリペプチド又はその糖修飾体等
の誘導体が細胞外に分泌された場合には、培養上清に該
ポリペプチド又はその糖鎖付加体等の誘導体を回収する
ことができる。即ち、該培養物を前記と同様の遠心分離
等の手法により処理することにより可溶性画分を取得
し、該可溶性画分から、前記と同様の単離精製法を用い
ることにより、精製標品を得ることができる。

【００５８】また、本発明のポリペプチドを他のタンパ
ク質との融合タンパク質として生産し、融合したタンパ
ク質に親和性をもつ物質を用いたアフィニティークロマ
トグラフィーを利用して精製することもできる。例え
ば、ロウらの方法〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86,
8227(1989)、Genes Develop., 4, 1288 (1990)〕、特開
平05-336963号、特開平06-823021号に記載の方法に準じ
て、本発明のポリペプチドをプロテインＡとの融合タン
パク質として生産し、イムノグロブリンＧを用いるアフ
ィニティークロマトグラフィーにより精製することがで
きる。また、本発明のポリペプチドをＦｌａｇペプチド
との融合タンパク質として生産し、抗Ｆｌａｇ抗体を用
いるアフィニティークロマトグラフィーにより精製する
ことができる〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 8227
(1989)、Genes Develop., 4, 1288（1990) 〕。更に、
該ポリペプチド自身に対する抗体を用いたアフィニティ
ークロマトグラフィーで精製することもできる。

【００５９】更に、本発明のポリペプチドは、該ポリペ
プチドの有するアミノ酸配列情報に基づいて、Ｆｍｏｃ
法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、ｔＢｏ
ｃ法（ｔ−ブチルオキシカルボニル法）等の化学合成法
によっても製造することができる。また、アドバンスト
・ケムテック（Advanced ChemTech）社、パーキン・エ
ルマー社、ファルマシア社、プロテイン・テクノロジー
・インストゥルメント（Protein Technology Instrumen
t）社、シンセセル・ベガ(Synthecell-Vega)社、パーセ
プティブ（PerSeptive）社、島津製作所等のペプチド合
成機を利用し化学合成することもできる。

【００６０】精製した本発明のポリペプチドの構造解析
は、蛋白質化学で通常用いられる方法、例えば遺伝子ク
ローニングのためのタンパク質構造解析（平野久著、東
京化学同人発行、１９９３年）に記載の方法により実施
可能である。トランスジェニック動物とは、外来遺伝子
を動物の発生初期に導入して得られる動物のことであ
り、例えばマウス、ラット、又はウシ、ヒツジなどの家
畜などが挙げられる。以下にトランスジェニックマウス
の作製について述べる。

【００６１】トランスジェニックマウスはHogan, B.ら
［Manupulating the mouseembryo. Alaboratory manua
l. 2nd ed. 1994. Cold Spring Harbor Laboratory Pre
ss, New York.]及びYamamura, K.ら［J. Biochem., 96,
357-363 (1984)]の方法に準じて製造することができ
る。すなわち、ホルモン処理した雌のC57BL/6マウスを
交配させた後、受精卵を取り出し、受精卵の雄性前核内
に、調製したベクター部分を含まない導入遺伝子のフラ
グメントをマイクロガラスピペットを用いてマイクロイ
ンジェクションする。得られた遺伝子導入卵のうち、生
き残った数百個の偽妊娠雌マウスの卵管に移植し、トラ
ンスジェニックマウスを作製する。

【００６２】更に、本発明のポリペプチドを認識する抗
体は、以下のようにして作製することができる。まず、
前記で得られた該蛋白質を抗原として免疫する。免疫す
る方法としては、動物の皮下、静脈内又は腹腔内に抗原
をそのまま投与してもよいが、抗原性の高いキャリアタ
ンパク質を結合させて投与したり、又は適当なアジュバ
ントとともに抗原を投与することが好ましい。

【００６３】キャリアタンパク質としては、スカシガイ
ヘモシアニン、キーホールリンペットヘモシアニン、牛
血清アルブミン、牛チログロブリン等が挙げられ、アジ
ュバンドとしては、フロインドの完全アジュバント(Com
plete Freund's Adjuvant)、水酸化アルミニウムゲルと
百日咳菌ワクチン等が挙げられる。免疫動物としては、
ウサギ、ヤギ、３〜２０週令のマウス、ラット、ハムス
ターなどの非ヒト哺乳動物が挙げられる。

【００６４】抗原の投与は、１回目の投与の後、１〜２
週間毎に３〜１０回行う。抗原の投与量は動物１匹当た
り５０〜１００μｇが好ましい。各投与後、３〜７日目
に免疫動物の眼底静脈叢又は尾静脈より採血し、該血清
の抗原との反応性について、酵素免疫測定法［酵素免疫
測定法（ELISA法）：医学書院刊（１９７６年）］など
で確認する。そして、該血清が十分な抗体価を示した非
ヒト哺乳動物を、血清又は抗体産生細胞の供給源とす
る。

【００６５】ポリクローナル抗体は、該血清を分離、精
製することにより調製することができる。モノクローナ
ル抗体は、該抗体産生細胞と非ヒト哺乳動物由来の骨髄
腫細胞とを融合させてハイブリドーマを作製し、該ハイ
ブリドーマを培養するか、動物に投与して該細胞を腹水
癌化させ、該培養液又は腹水を分離、精製することによ
り調製することができる。抗体産生細胞は、抗原投与さ
れた非ヒト哺乳動物の脾細胞、リンパ節、末梢血などか
ら採取する。

【００６６】骨髄腫細胞としては、マウスから得られた
株化細胞である、8-アザグアニン耐性マウス（BALB/c由
来）骨髄腫細胞株P3-X63Ag8-U1(P3-U1)［G.Kohlerら；
ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジィ(Euro
p. J. Immunol.), 6, 511(1976)］、SP2/0-Ag14(SP-2)
［M.Shulmanら；ネイチャー(Nature), 276, 269(197
8)］、P3-X63-Ag8653(653)［J.F.Kearneyら；ジャーナ
ル・オブ・イムノロジィ(J.Immunol.), 123, 1548(197
9)］、P3-X63-Ag8(X63) ［G.Kohlerら；ネイチャー(Nat
ure), 256, 495(1975)］など、イン・ビトロ（in vitr
o）で増殖可能な骨髄腫細胞であればいかなるものでも
よい。これらの細胞株の培養及び継代についてはアンチ
ボディーズ・ア・ラボラトリー・マニュアル［Antibodi
es -A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Labora
tory, 1988、以下「アンチボディーズ・ア・ラボラトリ
ー・マニュアル」という。］に従い、細胞融合時までに
2×10⁷個以上の細胞数を確保する。

【００６７】前記で得られた抗体産生細胞と骨髄腫細胞
とを洗浄した後、ポリエチレングリコール−1000(PEG-1
000)などの細胞凝集性媒体を加え、細胞を融合させ、培
地中に懸濁させる。細胞の洗浄にはＭＥＭ培地又はＰＢ
Ｓ（リン酸水素二ナトリウム1.83g、リン酸二水素カリ
ウム0.21g、食塩7.65g、蒸留水1リットル、pH7.2）など
を用いる。また、融合細胞を懸濁させる培地としては、
目的の融合細胞のみを選択的に得られるように、HAT培
地｛正常培地［RPMI-1640培地に1.5mMグルタミン、5×1
0^-5M 2-メルカプトエタノール、10μg/mlジェンタマイ
シン及び、10%牛胎児血清(FCS)（CSL 社製）を加えた培
地］に10^-4Mヒポキサンチン、1.5×10^-5Mチミジン及び4
×10^-7Mアミノプテリンを加えた培地｝を用いる。

【００６８】培養後、培養上清の一部をとり、酵素免疫
測定法により、抗原蛋白質に反応し、非抗原蛋白質に反
応しないサンプルを選択する。ついで、限界希釈法によ
りクローニングを行い、酵素免疫測定法により安定して
高い抗体価の認められたものをモノクローナル抗体産生
ハイブリドーマ株として選択する。

【００６９】酵素免疫測定法 抗原蛋白質又は抗原蛋白質を発現した細胞などを９６ウ
ェルプレートにコートし、ハイブリドーマ培養上清もし
くは精製抗体を第一抗体として反応させる。第一抗体反
応後、プレートを洗浄して第二抗体を添加する。第二抗
体とは、第一抗体のイムノグロブリンを認識できる抗体
を、ビオチン、酵素、化学発光物質又は放射線化合物等
で標識した抗体である。具体的にはハイブリドーマ作製
の際にマウスを用いたのであれば、第二抗体としては、
マウスイムノグロブリンを認識できる抗体を用いる。反
応後、第二抗体を標識した物質に応じた反応を行い、抗
原に特異的に反応するモノクローナル抗体を生産するハ
イブリドーマとして選択する。

【００７０】モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ細
胞を培養して得られる培養液、又はプリスタン処理〔2,
6,10,14-テトラメチルペンタデカン(Pristane)0.5mlを
腹腔内投与し、2 週間飼育する〕した8〜10週令のマウ
ス又はヌードマウスに、モノクローナル抗体産生ハイブ
リドーマ細胞を腹腔内投与して腹水癌化させた腹水か
ら、分離、精製することにより調製できる。

【００７１】モノクローナル抗体を分離、精製する方法
としては、遠心分離、40〜50%飽和硫酸アンモニウムに
よる塩析、カプリル酸沈殿法、DEAE-セファロースカラ
ム、陰イオン交換カラム、プロテインＡ又はＧ- カラム
又はゲル濾過カラム等を用いるクロマトグラフィー等
を、単独又は組み合わせて行う方法が挙げられる。この
方法により、IgG 又はIgM 画分を回収し、精製モノクロ
ーナル抗体を取得することができる。

【００７２】

【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
る。 （実施例１） １．劇症Ｃ型肝炎ウイルスのクローニング： （１）患者背景：輸血、薬剤性肝障害、アルコール性肝
障害などの既往歴のない男性（３２歳）が急性の肝障害
を発症し治療のため入院した。入院後直ちに肝性昏睡と
なり、劇症肝炎と診断された。急性期の血清よりＨＣＶ
が検出され、その他のウイルスマーカーは検出できず、
ＨＣＶ感染による劇症肝炎と診断された。その後の治療
により患者は回復し、肝機能正常となり、ウイルスも検
出されなくなった。その経過を図１に示す。

【００７３】（２）ウイルスの全ＲＮＡの調製及びｃＤ
ＮＡの合成 患者の急性期に採取した血清２５０μｌより、全ＲＮＡ
を、酸性グアニジンイソチオシアネート・フェノール・
クロロホルム（acid-guanidinium-isothiocyanate-phen
ol-chloroform; AGPC）（ＩＳＯＧＥＮ−ＬＳ；日本ジ
ーン社製）を使用し、抽出し、イソプロパノールにより
沈殿させ、エタノールにて洗浄後、２０μｌのＤＥＰＣ
−処理水（和光純薬工業社製）を加え、溶解した。前記
で得た全ＲＮＡの２０μｌ溶液のうち１０μｌを、ラン
ダムプライマー（６−ｍｅｒ）による逆転写、及びマウ
ス白血病ウイルスリバーストランスクリプターゼ（Supe
rscript II、Life Technologies社製；ロックビル、メ
リーランド）による処理を、３７℃にて１時間行い、ｃ
ＤＮＡを合成した。

【００７４】（３）ＨＣＶの単離 ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行うべく、１μｌの
ｃＤＮＡをＴａＫａＲａ ＬＡ Ｔａｑ ポリメラーゼ
（宝酒造社製）に付した。劇症肝炎患者から分離したＨ
ＣＶゲノムの全領域を得るために、ＨＣ−Ｊ６（アクセ
ッション番号：Ｄ００９４４）のシークエンスをもとに
デザインした２０−ｍｅｒのＰＣＲプライマーを使用
し、５’末端及び３’末端を除くＨＣＶゲノム全領域を
含む１２個のＨＣＶ ｃＤＮＡフラグメント（ＤＮＡ断
片）に増幅した。

【００７５】その１２個の各ＤＮＡ断片のＨＣＶゲノム
配列に相当する場所を、ＨＣ−Ｊ６の核酸配列に従っ
て、その核酸配列の始まりと終わりを番号付けすると、
６４〜４６６、３３７〜８２９、６３７〜１３０３、１
１５８〜２３４８、２３０５〜３４９１、３４８９〜４
６４８、４５６６〜５９５１、５９０２〜６９８３、６
９６７〜８０１５、７９７２〜８８７２、８７００〜９
２６２、９２５１〜９６１３であった。なお、ＰＣＲの
条件は、９５℃３０秒間の変性、６０℃３０秒間のアニ
ーリング、及び７０℃１分間の反応を各４０サイクル行
うことによるＰＣＲを行った。

【００７６】続いて、５’−ＲＡＣＥ法及び３’−ＲＡ
ＣＥ法を用いて、５’末端側及び３’末端側のウイルス
ＲＮＡの核酸配列を決定した。即ち、５’末端配列を決
定するために、ｃＤＮＡを５’−非翻訳領域（５’−Ｕ
ＴＲ）プライマー（アンチセンス）により合成し、ター
ミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼによ
り合成したｃＤＮＡの５’末端にポリＣ配列を付加した
後、次いでＰＣＲ（ｃＤＮＡ末端の増幅のための５’−
ＲＡＣＥシステム：Life Technologies社製；Version
2.0）により増幅した。

【００７７】また、３’末端配列を決定するために、抽
出したＲＮＡを、ポリ−Ａ−ポリメラーゼ（宝酒造社
製）を使用してポリアデニル化し、（Ｔ）₃₃含有の３８
−ｍｅｒオリゴヌクレオチドによりｃＤＮＡに変換し、
３’−ＵＴＲプライマー及び逆転写に使用するプライマ
ーにより増幅した。増幅生成物をアガロースゲル電気泳
動により分離し、次いで、ｐＧＥＭ−Ｔ ＥＡＳＹベク
ター（Ｐｒｏｍｅｇａ社，マジソン、ウィスコンシン
州）中にクローニングし、Big Dye Terminator Mix及び
自動ＤＮＡシークエンサーmodel310（PE Biosystems
社、カリフォルニア州）によりシークエンスした。

【００７８】以上により、全ウイルスゲノム配列を得、
これをＪＦＨ−１株と命名した。得られたＪＦＨ−１株
は、全長９６７８塩基長であり、その塩基配列を配列番
号１に示した。以上により決定された全ウイルスゲノム
の塩基配列は、その３４１番から９４３９番の間に、３
０３３個のアミノ酸残基をコードする長い翻訳領域を有
するものであった。そのアミノ酸配列を配列番号２に示
した。

【００７９】比較のために、遺伝子型２ａのＨＣＶに感
染している慢性肝炎患者６名よりＨＣＶを分離し、前記
と同様にＨＣＶのｃＤＮＡをクローニングしてその塩基
配列を決定した。これらの全ウイルスゲノムを、それぞ
れＪＣＨ−１株〜ＪＣＨ−６株と称する。なお、これら
の株の塩基配列は、ＪＣＨ−１株＝９６８１塩基長；Ｊ
ＣＨ−２株＝９６７７塩基長；ＪＣＨ−３株＝９６７８
塩基長；ＪＣＨ−４株＝９６７６塩基長；ＪＣＨ−５株
＝９６９１塩基長及びＪＣＨ−６株＝９６８６塩基長で
あった。

【００８０】２．ウイルスゲノムの塩基配列の解析 劇症肝炎患者から分離したＪＦＨ−１株と、慢性肝炎患
者から分離したＪＣＨ−１株〜ＪＣＨ−６株、及び、す
でにその塩基配列が解明されているＨＣ−Ｊ６株（アク
セッション番号：Ｄ００９４４）との遺伝子配列上の違
いを知るために、６パラメーター法（Gojoboriら、J. M
ed. Evol., 1982; 18: 414-423）及びＮ−Ｊ（Neighbor
-Joining）法（Saitouら、Mol. Biol. Evol., 1987; 4:
406-425）による分子系統樹による解析を行った。その
結果を図２に示す。

【００８１】図中に示した結果から判明するように、慢
性肝炎患者から分離された全てのクローンが、クラスタ
ーを形成するが、劇症肝炎患者から分離したＪＦＨ−１
株は、他の遺伝子型（１ａ，１ｂ，２ｂ，２ｃ）に比べ
ると、遺伝子型２ａに近いものの、明らかに慢性肝炎患
者から分離されたクローンのクラスターからは独立して
いる。更に、ＨＣＶゲノム上の遺伝子領域ごとに、その
各分離株の遺伝子的な違いを知るために、全ての分離株
間の遺伝子距離と、ＪＦＨ−１株と他の株間の遺伝子距
離を、核酸については６パラメーター法で、またアミノ
酸は木村の２パラメーター法(Kimura, Proc. Natl. Aca
d. Sci., U.S.A. 1969; 63: 1181-1188)で計算した。

【００８２】劇症肝炎患者から分離されたＪＦＨ−１株
と、他の慢性肝炎患者から分離された株間の、遺伝子距
離の平均を、全ての分離株間の遺伝子距離の平均で割っ
て得られる比を求めて、ＪＦＨ−１株が各遺伝子領域で
どの程度他の分離株と異なっているかを検討した。核酸
についての結果を表１に、アミノ酸についての結果を表
２に示す。

【００８３】

【表１】

【００８４】ＵＴＲ：比翻訳領域 Ｅ：エンベローブ領域 ＮＳ：比構造領域 ＊：遺伝子距離の平均は、ＪＦＨ−１株と他の遺伝子型
２ａ株との間で計算した。 ＊＊：遺伝子距離の平均は、ＪＦＨ−１株を含む、遺伝
子型２ａ株との間の全ての間で計算した。 ＊＊＊：ＨＣ−Ｊ６株を含まないデータである。

【００８５】

【表２】

【００８６】ＮＡ：計算せず ＵＴＲ：比翻訳領域 Ｅ：エンベローブ領域 ＮＳ：比構造領域 ＊：遺伝子距離の平均は、ＪＦＨ−１株と他の遺伝子型
２ａ株との間で計算した。 ＊＊：遺伝子距離の平均は、ＪＦＨ−１株を含む、遺伝
子型２ａ株との間の全ての間で計算した。 ＊＊＊：ＨＣ−Ｊ６株を含まないデータである。

【００８７】以上のデータから判断すると、核酸での計
算では、ＪＦＨ−１株と他の株間の平均遺伝子距離は、
０．１１３６±０．００７３であり、全分離株のＨＣＶ
の遺伝子全長における平均遺伝子距離は、０．０９６９
±０．０１４０であり、その比は１．１７３であった。
各領域別に見ると、平均遺伝子距離の比が最も高いの
は、５’−ＵＲＴであり、その比は１．３８７であっ
た。

【００８８】また、アミノ酸での計算では、全翻訳領域
のＪＦＨ−１株と他の株間の平均遺伝子距離は、０．０
９１８±０．００５２であり、全分離株のＨＣＶの遺伝
子全長における平均遺伝子距離は、０．０７１６±０．
０１３９であり、その比は１．２８２であった。各領域
別に見ると、平均遺伝子距離の比が高いのは、コア、Ｎ
Ｓ３、ＮＳ５ａであり、その比はそれぞれ１．５６０，
１．４６４，１．５９６であった。したがって、劇症肝
炎患者から分離されたＪＦＨ−１株には、これらの領域
に、他のＨＣＶ分離株と異なる遺伝子情報を有すること
が考えられる。

【００８９】（実施例２）劇症肝炎分離株（ＪＦＨ−
１）の遺伝子配列の解析からアミノ酸ではコア、ＮＳ
３、ＮＳ５ａの各領域が特に慢性肝炎の分離株の配列と
異なっていることが示された。これらの変異によるＪＦ
Ｈ−１株の性質の変化が劇症肝炎の発症機序に関与して
いる可能性を考え、ＪＦＨ−１株と慢性肝炎分離株との
ウイルス蛋白質の発現を検討した。

【００９０】コア蛋白質はウイルスのキャプシドを形成
すると考えられている構造蛋白質だが、最近の報告では
感染細胞内で感染細胞の様々な遺伝子発現を調節してい
る多機能蛋白質と考えられている。コア蛋白質はそのＣ
末端がプロセッシングされるが、その切断部位により分
子量の異なる２種類のコア蛋白質が作られる。１９１ア
ミノ酸からなるコア蛋白質をＰ２３と呼び、１７９又は
１８２アミノ酸からなるコア蛋白質をＰ２１と呼ぶ。ウ
イルス粒子のキャプシドを形成しているのはＰ２１と考
えられるが、Ｐ２１とＰ２３は異なる機能と性質を持つ
ことが予想されている。劇症肝炎分離株ＪＦＨ−１のコ
ア蛋白質Ｐ２１とＰ２３の発現について検討した。

【００９１】実験１：劇症肝炎分離株ＪＦＨ−１と慢性
肝炎５例から分離したウイルス株（ＪＣＨ−１〜５）及
びすでに報告されているＪ６ＣＦ株のコア領域のアミノ
酸配列を図３に示す。このアミノ酸配列を発現するウイ
ルス遺伝子を図４（Ａ）に示すようにＴ７プロモーター
配列とポリＡシグナル配列の間に挿入した。この発現ベ
クターを鋳型として、TNT Coupled Reticulocyte Lysat
e System (Promega)を用いてコア蛋白質を発現させ、Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥにて電気泳動し、ＰＶＤＦ膜に転写して
抗コアモノクローナル抗体で検出した。結果を図４
（Ｂ）に示す。ＪＦＨ−１株からはＰ２１とＰ２３の２
種類のコア蛋白質が検出されたが、慢性肝炎分離株から
は主にＰ２３のみが検出された。

【００９２】実験２：次にＪＦＨ−１株とＪＣＨ−１株
のキメラ遺伝子を作製することによりＪＦＨ−１株のど
の部分の変異がＰ２１／Ｐ２３の発現の変化に関与して
いるかを検討した。図５（Ａ）に示すように、ＪＦＨ−
１株とＪＣＨ−１株を６０番目、９０番目、１６０番目
のアミノ酸で入れ替えたキメラ遺伝子を作製した。即
ち、１〜６０番のアミノ酸配列と６１番以降のアミノ酸
配列とのキメラペプチド、１〜９０番のアミノ酸配列と
９１番以降のアミノ酸配列とのキメラペプチド、及び１
〜１６０番のアミノ酸配列と１６１番以降のアミノ酸配
列とのキメラペプチドをそれぞれコードするキメラ遺伝
子を作製した。図５（Ａ）に示すコア遺伝子領域の斜線
部はＪＣＨ−１株と同一の部分、白塗りの部分はＪＦＨ
−１株と同一の部分を示す。実験１と同じ方法でこの遺
伝子を発現させた。結果を図５（Ｂ）に示す。この結果
からＪＦＨ−１株と同じＰ２１／Ｐ２３の発現パターン
を示すためにはコア蛋白質の１６１番アミノ酸以降の配
列が重要であることがわかった。また、ＪＣＨ−１株と
同じ発現パターンを示すためにもコア蛋白質の１６１番
アミノ酸以降の配列が重要であることがわかった。１６
１番目以降のアミノ酸配列でＪＦＨ−１株とＪＣＨ−１
株で異なるのは１６４番がＪＦＨ−１株：Ｙ、ＪＣＨ−
１株：Ｆ、１７２番がＪＦＨ−１株：Ｆ、ＪＣＨ−１
株：Ｃ、１７３番がＪＦＨ−１株：Ｐ、ＪＣＨ−１株：
Ｓ、１８７番がＪＦＨ−１株：Ｖ、ＪＣＨ−１株：Ｔで
あった。即ち、この４ヶ所の変異すべて又はいくつかの
組み合わせでＰ２１／Ｐ２３の発現パターンが決まるこ
とが明らかとなった。

【００９３】実験３：実験１と２では発現ベクターはコ
ア領域の遺伝子のみを挿入したものを用いたため、コア
蛋白質の２ヶ所のプロセッシング部位のうちＰ２１を切
り出してくるもののみを検討できた。次にコア領域の更
に下流つまりＥ１やＥ２蛋白質も発現させた状態でＰ２
１／Ｐ２３の発現パターンの変化を検討した。図６
（Ａ）に示すように、ウイルス遺伝子のうち構造遺伝子
領域全体を含んだ発現ベクターを構築した。コア領域の
みを発現する発現ベクターとともに実験１，２と同じ方
法で蛋白質を発現させ、コア蛋白質を検出した。結果を
図６（Ｂ）に示す。コア領域のみを発現する場合に比べ
構造遺伝子全体を発現させると、Ｐ２１がＰ２３と比べ
より多く作られるようになるが、ＪＦＨ−１株ではＪＣ
Ｈ−１株よりもＰ２１がより多く作られＰ２３はより少
なく検出された。

【００９４】実験４：Ｐ２１／Ｐ２３の発現パターンの
変化を細胞内で確認するために実験１で用いた発現ベク
ターを細胞内に導入して細胞内で発現させた。発現ベク
ターＤＮＡをＦｕＧｅｎｅ６（ロッシュ・ダイアグノス
ティックス）を用いて２９３−Ｔ細胞に導入し細胞を回
収、破砕して、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにて電気泳動し、ＰＶ
ＤＦ膜に転写して抗コアモノクローナル抗体で検出し
た。結果を図５に示す。ＪＦＨ−１株ではＰ２１とＰ２
３の両方を検出したが、ＪＣＨ−１株からは主にＰ２３
を検出した。

【００９５】以上の実験１〜４の結果からＪＦＨ−１株
は他の慢性肝炎から分離した株と比較してコア蛋白質の
発現パターンが異なることが明らかとなった。ＨＣＶの
コア蛋白質にはＰ２１とＰ２３の２種類があるが、ＪＦ
Ｈ−１株ではＰ２１がより作られやすいことが示され
た。Ｐ２１はウイルス粒子のキャプシドを形成する蛋白
質であり、ＪＦＨ−１株ではＰ２１がより多く作られる
ことにより、感染細胞内でウイルス粒子がより多く産生
されることが考えられる。

【００９６】次に、ウイルスのＲＮＡ複製に必要な非構
造蛋白質の発現について検討した。ＲＮＡ複製はＲＮＡ
ｒｅｐｌｉｃａｓｅ活性を持つＮＳ５ｂにより行われ
るが、ＮＳ５ｂを含む非構造蛋白質は複合体を形成して
ウイルスＲＮＡ複製を行っていると考えられている。そ
こで、まずＮＳ５ｂの発現を検討し、更にＮＳ５ｂの発
現に重要であるＮＳ３の発現を検討した。

【００９７】実験５：ＮＳ５ｂの発現を検討するために
ＪＦＨ−１株とＪＣＨ−１株の翻訳領域全体を挿入した
発現ベクターを構築した（図８（Ａ））。この発現ベク
ターを実験４と同じ方法で培養細胞に導入してその細胞
を回収、破砕してＳＤＳ−ＰＡＧＥにて電気泳動し、Ｐ
ＶＤＦ膜に転写してウエスタンブロット法で検出した。
図８（Ｂ）の下段に示すようにコア蛋白質はＪＦＨ−１
株とＪＣＨ−１株ともに同じくらいの発現量を示した
が、上段に示すＮＳ５ｂの発現量は明らかにＪＦＨ−１
株の方が多かった。

【００９８】実験６：次にＮＳ５ｂのプロセッシングに
必要なＮＳ３から下流のウイルス遺伝子のみを挿入した
発現ベクターを作製してＮＳ３とＮＳ５ｂの発現を検討
した（図９（Ａ））。方法は実験５と同じである。結果
を図９（Ｂ）に示す。ＮＳ３の発現量はＪＦＨ−１株の
方が多い。しかし、同じ抗体で検出されるＮＳ３のＮ端
側の分解産物が検出され、その量はＪＣＨ−１株の方が
多かった。つまり、ＪＦＨ−１株のＮＳ３の方が安定で
あることが示された。更に、この発現ベクターを用いた
場合のＮＳ５ｂの発現量を検討した。やはりＪＦＨ−１
株の方がＮＳ５ｂの発現量が多いことが明らかとなっ
た。実験５及び実験６の結果から、ＪＦＨ−１株はＪＣ
Ｈ−１株に比べＮＳ３の安定性が高いため、ＮＳ５ｂが
より多く作られることが示された。ＪＦＨ−１株感染細
胞ではＮＳ５ｂがより多く作られることによりＲＮＡ複
製がより効率よく行われ、ウイルス複製とウイルスの産
生も慢性肝炎株よりも効率よく行われることが示され
た。ＪＦＨ−１株のＮＳ３の遺伝子領域には慢性肝炎分
離株と比べ２１ヶ所の特異的なアミノ酸配列の変異があ
る。このアミノ酸変異がＮＳ３の安定性に関与している
可能性がある。また、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ
４ｂ、ＮＳ５ａ、ＮＳ５ｂの非構造蛋白質は複合体を形
成していることが示されている。このため、ＮＳ３以外
の非構造蛋白質領域のアミノ酸変異もＮＳ３の安定性の
変化に関与している可能性がある。

【００９９】以上の結果から、ＪＦＨ−１株は慢性肝炎
からの分離株と比べてコア、ＮＳ３、ＮＳ５ａ領域に変
異が多く、特にコア領域の変異はコア蛋白質のプロセッ
シングに関係しており、Ｐ２１とＰ２３の発現パターン
を変化させた。この変化によりウイルス粒子産生の変化
が推測された。この変化に関与しているＪＦＨ−１株の
配列はコア蛋白質のアミノ酸配列で１６１番目から１９
１番目のなかの慢性肝炎と比べ４個のアミノ酸の変異で
あると考えられた。また、ＪＦＨ−１株はＮＳ５ｂの発
現も慢性肝炎分離株より多く、ＲＮＡ複製がより効率的
に行われることが考えられた。このＮＳ５ｂの発現の変
化にはＮＳ３のアミノ酸の配列の変異が関与していると
考えられた。これらの変異によるウイルスの性質の変化
が劇症肝炎の病態に関係していると考えられた。

【０１００】

【発明の効果】本発明が提供する全ゲノム配列を有する
劇症肝炎患者から分離されたＪＦＨ−１株は、他の慢性
肝炎患者から分離されたウイルス株とは異なった遺伝子
情報を有することより、その病原性が異なっているもの
と考えられる。したがって、従来のＨＣＶ株が有する遺
伝子情報と異なる、劇症肝炎患者から分離されたこのＪ
ＦＨ−１株の遺伝子情報を利用することにより、新たな
ＨＣＶウイルスの培養法の確立、感染性ＨＶＣのｃＤＮ
Ａクローンの確立、ＨＣＶウイルスの病原性の相違を決
定する遺伝子領域の探索、新たなＨＣＶウイルスの遺伝
子診断法の確立、更にはＨＣＶウイルスによる劇症肝炎
に対する治療方法の開発等を行うことが可能となる。

【０１０１】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> TORAY INDUSTRIES, INC.；TOKYO METROPOLITAN ORGANIZATION FOR MEDICA L RESEARCH <120> GENE OF HEPATITIS C VIRUS ISOLATED FROM A FULMINANT HEPATITIS PATIENT <130> P00-0789 <160> 2 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 9678 <212> DNA <213> HUMAN BEING <220> <221> CDS <222> (341)..(9439) <400> 1 acctgcccct aataggggcg acactccgcc atgaatcact cccctgtgag gaactactgt 60 cttcacgcag aaagcgccta gccatggcgt tagtatgagt gtcgtacagc ctccaggccc 120 ccccctcccg ggagagccat agtggtctgc ggaaccggtg agtacaccgg aattgccggg 180 aagactgggt cctttcttgg ataaacccac tctatgcccg gccatttggg cgtgcccccg 240 caagactgct agccgagtag cgttgggttg cgaaaggcct tgtggtactg cctgataggg 300 cgcttgcgag tgccccggga ggtctcgtag accgtgcacc atg agc aca aat cct 355 Met Ser Thr Asn Pro 1 5 aaa cct caa aga aaa acc aaa aga aac acc aac cgt cgc cca gaa gac 403 Lys Pro Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn Arg Arg Pro Glu Asp 10 15 20 gtt aag ttc ccg ggc ggc ggc cag atc gtt ggc gga gta tac ttg ttg 451 Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Ile Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu 25 30 35 ccg cgc agg ggc ccc agg ttg ggt gtg cgc acg aca agg aaa act tcg 499 Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu Gly Val Arg Thr Thr Arg Lys Thr Ser 40 45 50 gag cgg tcc cag cca cgt ggg aga cgc cag ccc atc ccc aaa gat cgg 547 Glu Arg Ser Gln Pro Arg Gly Arg Arg Gln Pro Ile Pro Lys Asp Arg 55 60 65 cgc tcc act ggc aag gcc tgg gga aaa cca ggt cgc ccc tgg ccc cta 595 Arg Ser Thr Gly Lys Ala Trp Gly Lys Pro Gly Arg Pro Trp Pro Leu 70 75 80 85 tat ggg aat gag gga ctc ggc tgg gca gga tgg ctc ctg tcc ccc cga 643 Tyr Gly Asn Glu Gly Leu Gly Trp Ala Gly Trp Leu Leu Ser Pro Arg 90 95 100 ggc tct cgc ccc tcc tgg ggc ccc act gac ccc cgg cat agg tcg cgc 691 Gly Ser Arg Pro Ser Trp Gly Pro Thr Asp Pro Arg His Arg Ser Arg 105 110 115 aac gtg ggt aaa gtc atc gac acc cta acg tgt ggc ttt gcc gac ctc 739 Asn Val Gly Lys Val Ile Asp Thr Leu Thr Cys Gly Phe Ala Asp Leu 120 125 130 atg ggg tac atc ccc gtc gta ggc gcc ccg ctt agt ggc gcc gcc aga 787 Met Gly Tyr Ile Pro Val Val Gly Ala Pro Leu Ser Gly Ala Ala Arg 135 140 145 gct gtc gcg cac ggc gtg aga gtc ctg gag gac ggg gtt aat tat gca 835 Ala Val Ala His Gly Val Arg Val Leu Glu Asp Gly Val Asn Tyr Ala 150 155 160 165 aca ggg aac cta ccc ggt ttc ccc ttt tct atc ttc ttg ctg gcc ctg 883 Thr Gly Asn Leu Pro Gly Phe Pro Phe Ser Ile Phe Leu Leu Ala Leu 170 175 180 ttg tcc tgc atc acc gtt ccg gtc tct gct gcc cag gtg aag aat acc 931 Leu Ser Cys Ile Thr Val Pro Val Ser Ala Ala Gln Val Lys Asn Thr 185 190 195 agt agc agc tac atg gtg acc aat gac tgc tcc aat gac agc atc act 979 Ser Ser Ser Tyr Met Val Thr Asn Asp Cys Ser Asn Asp Ser Ile Thr 200 205 210 tgg cag ctc gag gct gcg gtt ctc cac gtc ccc ggg tgc gtc ccg tgc 1027 Trp Gln Leu Glu Ala Ala Val Leu His Val Pro Gly Cys Val Pro Cys 215 220 225 gag aga gtg ggg aat acg tca cgg tgt tgg gtg cca gtc tcg cca aac 1075 Glu Arg Val Gly Asn Thr Ser Arg Cys Trp Val Pro Val Ser Pro Asn 230 235 240 245 atg gct gtg cgg cag ccc ggt gcc ctc acg cag ggt ctg cgg acg cac 1123 Met Ala Val Arg Gln Pro Gly Ala Leu Thr Gln Gly Leu Arg Thr His 250 255 260 atc gat atg gtt gtg atg tcc gcc acc ttc tgc tct gct ctc tac gtg 1171 Ile Asp Met Val Val Met Ser Ala Thr Phe Cys Ser Ala Leu Tyr Val 265 270 275 ggg gac ctc tgt ggc ggg gtg atg ctc gcg gcc cag gtg ttc atc gtc 1219 Gly Asp Leu Cys Gly Gly Val Met Leu Ala Ala Gln Val Phe Ile Val 280 285 290 tcg ccg cag tac cac tgg ttt gtg caa gaa tgc aat tgc tcc atc tac 1267 Ser Pro Gln Tyr His Trp Phe Val Gln Glu Cys Asn Cys Ser Ile Tyr 295 300 305 cct ggc acc atc act gga cac cgc atg gca tgg gac atg atg atg aac 1315 Pro Gly Thr Ile Thr Gly His Arg Met Ala Trp Asp Met Met Met Asn 310 315 320 325 tgg tcg ccc acg gcc acc atg atc ctg gcg tac gtg atg cgc gtc ccc 1363 Trp Ser Pro Thr Ala Thr Met Ile Leu Ala Tyr Val Met Arg Val Pro 330 335 340 gag gtc atc ata gac atc gtt agc ggg gct cac tgg ggc gtc atg ttc 1411 Glu Val Ile Ile Asp Ile Val Ser Gly Ala His Trp Gly Val Met Phe 345 350 355 ggc ttg gcc tac ttc tct atg cag gga gcg tgg gcg aag gtc att gtc 1459 Gly Leu Ala Tyr Phe Ser Met Gln Gly Ala Trp Ala Lys Val Ile Val 360 365 370 atc ctt ctg ctg gcc gct ggg gtg gac gcg ggc acc acc acc gtt gga 1507 Ile Leu Leu Leu Ala Ala Gly Val Asp Ala Gly Thr Thr Thr Val Gly 375 380 385 ggc gct gtt gca cgt tcc acc aac gtg att gcc ggc gtg ttc agc cat 1555 Gly Ala Val Ala Arg Ser Thr Asn Val Ile Ala Gly Val Phe Ser His 390 395 400 405 ggc cct cag cag aac att cag ctc att aac acc aac ggc agt tgg cac 1603 Gly Pro Gln Gln Asn Ile Gln Leu Ile Asn Thr Asn Gly Ser Trp His 410 415 420 atc aac cgt act gcc ttg aat tgc aat gac tcc ttg aac acc ggc ttt 1651 Ile Asn Arg Thr Ala Leu Asn Cys Asn Asp Ser Leu Asn Thr Gly Phe 425 430 435 ctc gcg gcc ttg ttc tac acc aac cgc ttt aac tcg tca ggg tgt cca 1699 Leu Ala Ala Leu Phe Tyr Thr Asn Arg Phe Asn Ser Ser Gly Cys Pro 440 445 450 ggg cgc ctg tcc gcc tgc cgc aac atc gag gct ttc cgg ata ggg tgg 1747 Gly Arg Leu Ser Ala Cys Arg Asn Ile Glu Ala Phe Arg Ile Gly Trp 455 460 465 ggc acc cta cag tac gag gat aat gtc acc aat cca gag gat atg agg 1795 Gly Thr Leu Gln Tyr Glu Asp Asn Val Thr Asn Pro Glu Asp Met Arg 470 475 480 485 ccg tac tgc tgg cac tac ccc cca aag ccg tgt ggc gta gtc ccc gcg 1843 Pro Tyr Cys Trp His Tyr Pro Pro Lys Pro Cys Gly Val Val Pro Ala 490 495 500 agg tct gtg tgt ggc cca gtg tac tgt ttc acc ccc agc ccg gta gta 1891 Arg Ser Val Cys Gly Pro Val Tyr Cys Phe Thr Pro Ser Pro Val Val 505 510 515 gtg ggc acg acc gac aga cgt gga gtg ccc acc tac aca tgg gga gag 1939 Val Gly Thr Thr Asp Arg Arg Gly Val Pro Thr Tyr Thr Trp Gly Glu 520 525 530 aat gag aca gat gtc ttc cta ctg aac agc acc cga ccg ccg cag ggc 1987 Asn Glu Thr Asp Val Phe Leu Leu Asn Ser Thr Arg Pro Pro Gln Gly 535 540 545 tca tgg ttc ggc tgc acg tgg atg aac tcc act ggt ttc acc aag act 2035 Ser Trp Phe Gly Cys Thr Trp Met Asn Ser Thr Gly Phe Thr Lys Thr 550 555 560 565 tgt ggc gcg cca cct tgc cgc acc aga gct gac ttc aac gcc agc acg 2083 Cys Gly Ala Pro Pro Cys Arg Thr Arg Ala Asp Phe Asn Ala Ser Thr 570 575 580 gac ttg ttg tgc cct acg gat tgt ttt agg aag cat cct gat gcc act 2131 Asp Leu Leu Cys Pro Thr Asp Cys Phe Arg Lys His Pro Asp Ala Thr 585 590 595 tat att aag tgt ggt tct ggg ccc tgg ctc aca cca aag tgc ctg gtc 2179 Tyr Ile Lys Cys Gly Ser Gly Pro Trp Leu Thr Pro Lys Cys Leu Val 600 605 610 cac tac cct tac aga ctc tgg cat tac ccc tgc aca gtc aat ttt acc 2227 His Tyr Pro Tyr Arg Leu Trp His Tyr Pro Cys Thr Val Asn Phe Thr 615 620 625 atc ttc aag ata aga atg tat gta ggg ggg gtt gag cac agg ctc acg 2275 Ile Phe Lys Ile Arg Met Tyr Val Gly Gly Val Glu His Arg Leu Thr 630 635 640 645 gcc gca tgc aac ttc act cgt ggg gat cgc tgc gac ttg gag gac agg 2323 Ala Ala Cys Asn Phe Thr Arg Gly Asp Arg Cys Asp Leu Glu Asp Arg 650 655 660 gac agg agt cag ctg tct cct ctg ttg cac tct acc acg gaa tgg gcc 2371 Asp Arg Ser Gln Leu Ser Pro Leu Leu His Ser Thr Thr Glu Trp Ala 665 670 675 atc ctg ccc tgc acc tac tca gac tta ccc gct ttg tca act ggt ctt 2419 Ile Leu Pro Cys Thr Tyr Ser Asp Leu Pro Ala Leu Ser Thr Gly Leu 680 685 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Leu Leu Met 790 795 800 805 gca ctg ccc cgg cag gct tat gcc tat gac gca cct gtg cac gga cag 2803 Ala Leu Pro Arg Gln Ala Tyr Ala Tyr Asp Ala Pro Val His Gly Gln 810 815 820 ata ggc gtg ggt ttg ttg ata ttg atc acc ctc ttc aca ctc acc ccg 2851 Ile Gly Val Gly Leu Leu Ile Leu Ile Thr Leu Phe Thr Leu Thr Pro 825 830 835 ggg tat aag acc ctc ctc ggc cag tgt ctg tgg tgg ttg tgc tat ctc 2899 Gly Tyr Lys Thr Leu Leu Gly Gln Cys Leu Trp Trp Leu Cys Tyr Leu 840 845 850 ctg acc ctg ggg gaa gcc atg att cag gag tgg gta cca ccc atg cag 2947 Leu Thr Leu Gly Glu Ala Met Ile Gln Glu Trp Val Pro Pro Met Gln 855 860 865 gtg cgc ggc ggc cgc gat ggc atc gcg tgg gcc gtc act ata ttc tgc 2995 Val Arg Gly Gly Arg Asp Gly Ile Ala Trp Ala Val Thr Ile Phe Cys 870 875 880 885 ccg ggt gtg gtg ttt gac att acc aaa tgg ctt ttg gcg ttg ctt ggg 3043 Pro Gly Val Val Phe Asp Ile Thr Lys Trp Leu Leu Ala Leu Leu Gly 890 895 900 cct gct tac ctc tta agg gcc gct ttg aca cat gtg ccg tac ttc gtc 3091 Pro Ala Tyr Leu Leu Arg Ala Ala Leu Thr His Val Pro Tyr Phe Val 905 910 915 aga gct cac gct ctg ata agg gta tgc gct ttg gtg aag cag ctc gcg 3139 Arg Ala His Ala Leu Ile Arg Val Cys Ala Leu Val Lys Gln Leu Ala 920 925 930 ggg ggt agg tat gtt cag gtg gcg cta ttg gcc ctt ggc agg tgg act 3187 Gly Gly Arg Tyr Val Gln Val Ala Leu Leu Ala Leu Gly Arg Trp Thr 935 940 945 ggc acc tac atc tat gac cac ctc aca cct atg tcg gac tgg gcc gct 3235 Gly Thr Tyr Ile Tyr Asp His Leu Thr Pro Met Ser Asp Trp Ala Ala 950 955 960 965 agc ggc ctg cgc gac tta gcg gtc gcc gtg gaa ccc atc atc ttc agt 3283 Ser Gly Leu Arg Asp Leu Ala Val Ala Val Glu Pro Ile Ile Phe Ser 970 975 980 ccg atg gag aag aag gtc atc gtc tgg gga gcg gag acg gct gca tgt 3331 Pro Met Glu Lys Lys Val Ile Val Trp Gly Ala Glu Thr Ala Ala Cys 985 990 995 ggg gac att cta cat gga ctt ccc gtg tcc gcc cga ctc ggc cag gag 3379 Gly Asp Ile Leu His Gly Leu Pro Val Ser Ala Arg Leu Gly Gln Glu 1000 1005 1010 atc ctc ctc ggc cca gct gat ggc tac acc tcc aag ggg tgg aag ctc 3427 Ile Leu Leu Gly Pro Ala Asp Gly Tyr Thr Ser Lys Gly Trp Lys Leu 1015 1020 1025 ctt gct ccc atc act gct tat gcc cag caa aca cga ggc ctc ctg ggc 3475 Leu Ala Pro Ile Thr Ala Tyr Ala Gln Gln Thr Arg Gly Leu Leu Gly 1030 1035 1040 1045 gcc ata gtg gtg agt atg acg ggg cgt gac agg aca gaa cag gcc ggg 3523 Ala Ile Val Val Ser Met Thr Gly Arg Asp Arg Thr Glu Gln Ala Gly 1050 1055 1060 gaa gtc caa atc ctg tcc aca gtc tct cag tcc ttc ctc gga aca acc 3571 Glu Val Gln Ile Leu Ser Thr Val Ser Gln Ser Phe Leu Gly Thr Thr 1065 1070 1075 atc tcg ggg gtt ttg tgg act gtt tac cac gga gct ggc aac aag act 3619 Ile Ser Gly Val Leu Trp Thr Val Tyr His Gly Ala Gly Asn Lys Thr 1080 1085 1090 cta gcc ggc tta cgg ggt ccg gtc acg cag atg tac tcg agt gct gag 3667 Leu Ala Gly Leu Arg Gly Pro Val Thr Gln Met Tyr Ser Ser Ala Glu 1095 1100 1105 ggg gac ttg gta ggc tgg ccc agc ccc cct ggg acc aag tct ttg gag 3715 Gly Asp Leu Val Gly Trp Pro Ser Pro Pro Gly Thr Lys Ser Leu Glu 1110 1115 1120 1125 ccg tgc aag tgt gga gcc gtc 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1225 1230 1235 agt gga aag agc acc aag gtc cct gtc gcg tat gcc gcc cag ggg tac 4099 Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val Pro Val Ala Tyr Ala Ala Gln Gly Tyr 1240 1245 1250 aaa gta cta gtg ctt aac ccc tcg gta gct gcc acc ctg ggg ttt ggg 4147 Lys Val Leu Val Leu Asn Pro Ser Val Ala Ala Thr Leu Gly Phe Gly 1255 1260 1265 gcg tac cta tcc aag gca cat ggc atc aat ccc aac att agg act gga 4195 Ala Tyr Leu Ser Lys Ala His Gly Ile Asn Pro Asn Ile Arg Thr Gly 1270 1275 1280 1285 gtc agg acc gtg atg acc ggg gag gcc atc acg tac tcc aca tat ggc 4243 Val Arg Thr Val Met Thr Gly Glu Ala Ile Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly 1290 1295 1300 aaa ttt ctc gcc gat ggg ggc tgc gct agc ggc gcc tat gac atc atc 4291 Lys Phe Leu Ala Asp Gly Gly Cys Ala Ser Gly Ala Tyr Asp Ile Ile 1305 1310 1315 ata tgc gat gaa tgc cac gct gtg gat gct acc tcc att ctc ggc atc 4339 Ile Cys Asp Glu Cys His Ala Val Asp Ala Thr Ser Ile Leu Gly Ile 1320 1325 1330 gga acg gtc ctt gat caa gca gag aca gcc ggg gtc aga cta act gtg 4387 Gly Thr Val Leu Asp Gln 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Val Ala Ala Ser Glu Tyr Ala Glu Val Thr Gln His Gly 2090 2095 2100 tcg tac tcc tat gta aca gga ctg acc act gac aat ctg aaa att cct 6691 Ser Tyr Ser Tyr Val Thr Gly Leu Thr Thr Asp Asn Leu Lys Ile Pro 2105 2110 2115 tgc caa cta cct tct cca gag ttt ttc tcc tgg gtg gac ggt gtg cag 6739 Cys Gln Leu Pro Ser Pro Glu Phe Phe Ser Trp Val Asp Gly Val Gln 2120 2125 2130 atc cat agg ttt gca ccc aca cca aag ccg ttt ttc cgg gat gag gtc 6787 Ile His Arg Phe Ala Pro Thr Pro Lys Pro Phe Phe Arg Asp Glu Val 2135 2140 2145 tcg ttc tgc gtt ggg ctt aat tcc tat gct gtc ggg tcc cag ctt ccc 6835 Ser Phe Cys Val Gly Leu Asn Ser Tyr Ala Val Gly Ser Gln Leu Pro 2150 2155 2160 2165 tgt gaa cct gag ccc gac gca gac gta ttg agg tcc atg cta aca gat 6883 Cys Glu Pro Glu Pro Asp Ala Asp Val Leu Arg Ser Met Leu Thr Asp 2170 2175 2180 ccg ccc cac atc acg gcg gag act gcg gcg cgg cgc ttg gca cgg gga 6931 Pro Pro His Ile Thr Ala Glu Thr Ala Ala Arg Arg Leu Ala Arg Gly 2185 2190 2195 tca cct cca tct gag gcg agc tcc tca gtg 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Val Lys Ala 2730 2735 2740 cta gcg gcc tgc aag gct gcg ggg ata gtt gcg ccc aca atg ctg gta 8611 Leu Ala Ala Cys Lys Ala Ala Gly Ile Val Ala Pro Thr Met Leu Val 2745 2750 2755 tgc ggc gat gac cta gta gtc atc tca gaa agc cag ggg act gag gag 8659 Cys Gly Asp Asp Leu Val Val Ile Ser Glu Ser Gln Gly Thr Glu Glu 2760 2765 2770 gac gag cgg aac ctg aga gcc ttc acg gag gcc atg acc agg tac tct 8707 Asp Glu Arg Asn Leu Arg Ala Phe Thr Glu Ala Met Thr Arg Tyr Ser 2775 2780 2785 gcc cct cct ggt gat ccc ccc aga ccg gaa tat gac ctg gag cta ata 8755 Ala Pro Pro Gly Asp Pro Pro Arg Pro Glu Tyr Asp Leu Glu Leu Ile 2790 2795 2800 2805 aca tcc tgt tcc tca aat gtg tct gtg gcg ttg ggc ccg cgg ggc cgc 8803 Thr Ser Cys Ser Ser Asn Val Ser Val Ala Leu Gly Pro Arg Gly Arg 2810 2815 2820 cgc aga tac tac ctg acc aga gac cca acc act cca ctc gcc cgg gct 8851 Arg Arg Tyr Tyr Leu Thr Arg Asp Pro Thr Thr Pro Leu Ala Arg Ala 2825 2830 2835 gcc tgg gaa aca gtt aga cac tcc cct atc aat tca tgg ctg gga aac 8899 Ala Trp Glu Thr Val Arg His Ser Pro Ile Asn Ser Trp Leu Gly Asn 2840 2845 2850 atc atc cag tat gct cca acc ata tgg gtt cgc atg gtc cta atg aca 8947 Ile Ile Gln Tyr Ala Pro Thr Ile Trp Val Arg Met Val Leu Met Thr 2855 2860 2865 cac ttc ttc tcc att ctc atg gtc caa gac acc ctg gac cag aac ctc 8995 His Phe Phe Ser Ile Leu Met Val Gln Asp Thr Leu Asp Gln Asn Leu 2870 2875 2880 2885 aac ttt gag atg tat gga tca gta tac tcc gtg aat cct ttg gac ctt 9043 Asn Phe Glu Met Tyr Gly Ser Val Tyr Ser Val Asn Pro Leu Asp Leu 2890 2895 2900 cca gcc ata att gag agg tta cac ggg ctt gac gcc ttt tct atg cac 9091 Pro Ala Ile Ile Glu Arg Leu His Gly Leu Asp Ala Phe Ser Met His 2905 2910 2915 aca tac tct cac cac gaa ctg acg cgg gtg gct tca gcc ctc aga aaa 9139 Thr Tyr Ser His His Glu Leu Thr Arg Val Ala Ser Ala Leu Arg Lys 2920 2925 2930 ctt ggg gcg cca ccc ctc agg gtg tgg aag agt cgg gct cgc gca gtc 9187 Leu Gly Ala Pro Pro Leu Arg Val Trp Lys Ser Arg Ala Arg Ala Val 2935 2940 2945 agg gcg tcc ctc atc tcc cgt gga ggg aaa gcg gcc gtt tgc ggc cga 9235 Arg Ala Ser Leu Ile Ser Arg Gly Gly Lys Ala Ala Val Cys Gly Arg 2950 2955 2960 2965 tat ctc ttc aat tgg gcg gtg aag acc aag ctc aaa ctc act cca ttg 9283 Tyr Leu Phe Asn Trp Ala Val Lys Thr Lys Leu Lys Leu Thr Pro Leu 2970 2975 2980 ccg gag gcg cgc cta ctg gac tta tcc agt tgg ttc acc gtc ggc gcc 9331 Pro Glu Ala Arg Leu Leu Asp Leu Ser Ser Trp Phe Thr Val Gly Ala 2985 2990 2995 ggc ggg ggc gac att ttt cac agc gtg tcg cgc gcc cga ccc cgc tca 9379 Gly Gly Gly Asp Ile Phe His Ser Val Ser Arg Ala Arg Pro Arg Ser 3000 3005 3010 tta ctc ttc ggc cta ctc cta ctt ttc gta ggg gta ggc ctc ttc cta 9427 Leu Leu Phe Gly Leu Leu Leu Leu Phe Val Gly Val Gly Leu Phe Leu 3015 3020 3025 ctc ccc gct cgg tagagcggca cacactaggt acactccata gctaactgtt 9479 Leu Pro Ala Arg 3030 cctttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttctttt tttttttttt 9539 ccctctttct tcccttctca tcttattcta ctttctttct tggtggctcc atcttagccc 9599 tagtcacggc tagctgtgaa aggtccgtga gccgcatgac tgcagagagt gccgtaactg 9659 gtctctctgc agatcatgt 9678 <210> 2 <211> 3033 <212> PRT <213> HUMAN BEING <400> 2 Met Ser Thr Asn Pro Lys Pro Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn 1 5 10 15 Arg Arg Pro Glu Asp Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Ile Val Gly 20 25 30 Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu Gly Val Arg Thr 35 40 45 Thr Arg Lys Thr Ser Glu Arg Ser Gln Pro Arg Gly Arg Arg Gln Pro 50 55 60 Ile Pro Lys Asp Arg Arg Ser Thr Gly Lys Ala Trp Gly Lys Pro Gly 65 70 75 80 Arg Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu Gly Leu Gly Trp Ala Gly Trp 85 90 95 Leu Leu Ser Pro Arg Gly Ser Arg Pro Ser Trp Gly Pro Thr Asp Pro 100 105 110 Arg His Arg Ser Arg Asn Val Gly Lys Val Ile Asp Thr Leu Thr Cys 115 120 125 Gly Phe Ala Asp Leu Met Gly Tyr Ile Pro Val Val Gly Ala Pro Leu 130 135 140 Ser Gly Ala Ala Arg Ala Val Ala His Gly Val Arg Val Leu Glu Asp 145 150 155 160 Gly Val Asn Tyr Ala Thr Gly Asn Leu Pro Gly Phe Pro Phe Ser Ile 165 170 175 Phe Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Ile Thr Val Pro Val Ser Ala Ala 180 185 190 Gln Val Lys Asn Thr Ser Ser Ser Tyr Met Val Thr Asn Asp Cys Ser 195 200 205 Asn Asp Ser Ile Thr Trp Gln Leu Glu Ala Ala Val Leu His Val Pro 210 215 220 Gly Cys Val Pro Cys Glu Arg Val Gly Asn Thr Ser Arg Cys Trp Val 225 230 235 240 Pro Val Ser Pro Asn Met Ala Val Arg Gln Pro Gly Ala Leu Thr Gln 245 250 255 Gly Leu Arg Thr His Ile Asp Met Val Val Met Ser Ala Thr Phe Cys 260 265 270 Ser Ala Leu Tyr Val Gly Asp Leu Cys Gly Gly Val Met Leu Ala Ala 275 280 285 Gln Val Phe Ile Val Ser Pro Gln Tyr His Trp Phe Val Gln Glu Cys 290 295 300 Asn Cys Ser Ile Tyr Pro Gly Thr Ile Thr Gly His Arg Met Ala Trp 305 310 315 320 Asp Met Met Met Asn Trp Ser Pro Thr Ala Thr Met Ile Leu Ala Tyr 325 330 335 Val Met Arg Val Pro Glu Val Ile Ile Asp Ile Val Ser Gly Ala His 340 345 350 Trp Gly Val Met Phe Gly Leu Ala Tyr Phe Ser Met Gln Gly Ala Trp 355 360 365 Ala Lys Val Ile Val Ile Leu Leu Leu Ala Ala Gly Val Asp Ala Gly 370 375 380 Thr Thr Thr Val Gly Gly Ala Val Ala Arg Ser Thr Asn Val Ile Ala 385 390 395 400 Gly Val Phe Ser His Gly Pro Gln Gln Asn Ile Gln Leu Ile Asn Thr 405 410 415 Asn Gly Ser Trp His Ile Asn Arg Thr Ala Leu Asn Cys Asn Asp Ser 420 425 430 Leu Asn Thr Gly Phe Leu Ala Ala Leu Phe Tyr Thr Asn Arg Phe Asn 435 440 445 Ser Ser Gly Cys Pro Gly Arg Leu Ser Ala Cys Arg Asn Ile Glu Ala 450 455 460 Phe Arg Ile Gly Trp Gly Thr Leu Gln Tyr Glu Asp Asn Val Thr Asn 465 470 475 480 Pro Glu Asp Met Arg Pro Tyr Cys Trp His Tyr Pro Pro Lys Pro Cys 485 490 495 Gly Val Val Pro Ala Arg Ser Val Cys Gly Pro Val Tyr Cys Phe Thr 500 505 510 Pro Ser Pro Val Val Val Gly Thr Thr Asp Arg Arg Gly Val Pro Thr 515 520 525 Tyr Thr Trp Gly Glu Asn Glu Thr Asp Val Phe Leu Leu Asn Ser Thr 530 535 540 Arg Pro Pro Gln Gly Ser Trp Phe Gly Cys Thr Trp Met Asn Ser Thr 545 550 555 560 Gly Phe Thr Lys Thr Cys Gly Ala Pro Pro Cys Arg Thr Arg Ala Asp 565 570 575 Phe Asn Ala Ser Thr Asp Leu Leu Cys Pro Thr Asp Cys Phe Arg Lys 580 585 590 His Pro Asp Ala Thr Tyr Ile Lys Cys Gly Ser Gly Pro Trp Leu Thr 595 600 605 Pro Lys Cys Leu Val His Tyr Pro Tyr Arg Leu Trp His Tyr Pro Cys 610 615 620 Thr Val Asn Phe Thr Ile Phe Lys Ile Arg Met Tyr Val Gly Gly Val 625 630 635 640 Glu His Arg Leu Thr Ala Ala Cys Asn Phe Thr Arg Gly Asp Arg Cys 645 650 655 Asp Leu Glu Asp Arg Asp Arg Ser Gln Leu Ser Pro Leu Leu His Ser 660 665 670 Thr Thr Glu Trp Ala Ile Leu Pro Cys Thr Tyr Ser Asp Leu Pro Ala 675 680 685 Leu Ser Thr Gly Leu Leu His Leu His Gln Asn Ile Val Asp Val Gln 690 695 700 Tyr Met Tyr Gly Leu Ser Pro Ala Ile Thr Lys Tyr Val Val Arg Trp 705 710 715 720 Glu Trp Val Val Leu Leu Phe Leu Leu Leu Ala Asp Ala Arg Val Cys 725 730 735 Ala Cys Leu Trp Met Leu Ile Leu Leu Gly Gln Ala Glu Ala Ala Leu 740 745 750 Glu Lys Leu Val Val Leu His Ala Ala Ser Ala Ala Asn Cys His Gly 755 760 765 Leu Leu Tyr Phe Ala Ile Phe Phe Val Ala Ala Trp His Ile Arg Gly 770 775 780 Arg Val Val Pro Leu Thr Thr Tyr Cys Leu Thr Gly Leu Trp Pro Phe 785 790 795 800 Cys Leu Leu Leu Met Ala Leu Pro Arg Gln Ala Tyr Ala Tyr Asp Ala 805 810 815 Pro Val His Gly Gln Ile Gly Val Gly Leu Leu Ile Leu Ile Thr Leu 820 825 830 Phe Thr Leu Thr Pro Gly Tyr Lys Thr Leu Leu Gly Gln Cys Leu Trp 835 840 845 Trp Leu Cys Tyr Leu Leu Thr Leu Gly Glu Ala Met Ile Gln Glu Trp 850 855 860 Val Pro Pro Met Gln Val Arg Gly Gly Arg Asp Gly Ile Ala Trp Ala 865 870 875 880 Val Thr Ile Phe Cys Pro Gly Val Val Phe Asp Ile Thr Lys Trp Leu 885 890 895 Leu Ala Leu Leu Gly Pro Ala Tyr Leu Leu Arg Ala Ala Leu Thr His 900 905 910 Val Pro Tyr Phe Val Arg Ala His Ala Leu Ile Arg Val Cys Ala Leu 915 920 925 Val Lys Gln Leu Ala Gly Gly Arg Tyr Val Gln Val Ala Leu Leu Ala 930 935 940 Leu Gly Arg Trp Thr Gly Thr Tyr Ile Tyr Asp His Leu Thr Pro Met 945 950 955 960 Ser Asp Trp Ala Ala Ser Gly Leu Arg Asp Leu Ala Val Ala Val Glu 965 970 975 Pro Ile Ile Phe Ser Pro Met Glu Lys Lys Val Ile Val Trp Gly Ala 980 985 990 Glu Thr Ala Ala Cys Gly Asp Ile Leu His Gly Leu Pro Val Ser Ala 995 1000 1005 Arg Leu Gly Gln Glu Ile Leu Leu Gly Pro Ala Asp Gly Tyr Thr Ser 1010 1015 1020 Lys Gly Trp Lys Leu Leu Ala Pro Ile Thr Ala Tyr Ala Gln Gln Thr 1025 1030 1035 1040 Arg Gly Leu Leu Gly Ala Ile Val Val Ser Met Thr Gly Arg Asp Arg 1045 1050 1055 Thr Glu Gln Ala Gly Glu Val Gln Ile Leu Ser Thr Val Ser Gln Ser 1060 1065 1070 Phe Leu Gly Thr Thr Ile Ser Gly Val Leu Trp Thr Val Tyr His Gly 1075 1080 1085 Ala Gly Asn Lys Thr Leu Ala Gly Leu Arg Gly Pro Val Thr Gln Met 1090 1095 1100 Tyr Ser Ser Ala Glu Gly Asp Leu Val Gly Trp Pro Ser Pro Pro Gly 1105 1110 1115 1120 Thr Lys Ser Leu Glu Pro Cys Lys Cys Gly Ala Val Asp Leu Tyr Leu 1125 1130 1135 Val Thr Arg Asn Ala Asp Val Ile Pro Ala Arg Arg Arg Gly Asp Lys 1140 1145 1150 Arg Gly Ala Leu Leu Ser Pro Arg Pro Ile Ser Thr Leu Lys Gly Ser 1155 1160 1165 Ser Gly Gly Pro Val Leu Cys Pro Arg Gly His Val Val Gly Leu Phe 1170 1175 1180 Arg Ala Ala Val Cys Ser Arg Gly Val Ala Lys Ser Ile Asp Phe Ile 1185 1190 1195 1200 Pro Val Glu Thr Leu Asp Val Val Thr Arg Ser Pro Thr Phe Ser Asp 1205 1210 1215 Asn Ser Thr Pro Pro Ala Val Pro Gln Thr Tyr Gln Val Gly Tyr Leu 1220 1225 1230 His Ala Pro Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val Pro Val Ala Tyr 1235 1240 1245 Ala Ala Gln Gly Tyr Lys Val Leu Val Leu Asn Pro Ser Val Ala Ala 1250 1255 1260 Thr Leu Gly Phe Gly Ala Tyr Leu Ser Lys Ala His Gly Ile Asn Pro 1265 1270 1275 1280 Asn Ile Arg Thr Gly Val Arg Thr Val Met Thr Gly Glu Ala Ile Thr 1285 1290 1295 Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe Leu Ala Asp Gly Gly Cys Ala Ser Gly 1300 1305 1310 Ala Tyr Asp Ile Ile Ile Cys Asp Glu Cys His Ala Val Asp Ala Thr 1315 1320 1325 Ser Ile Leu Gly Ile Gly Thr Val Leu Asp Gln Ala Glu Thr Ala Gly 1330 1335 1340 Val Arg Leu Thr Val Leu Ala Thr Ala Thr Pro Pro Gly Ser Val Thr 1345 1350 1355 1360 Thr Pro His Pro Asp Ile Glu Glu Val Gly Leu Gly Arg Glu Gly Glu 1365 1370 1375 Ile Pro Phe Tyr Gly Arg Ala Ile Pro Leu Ser Cys Ile Lys Gly Gly 1380 1385 1390 Arg His Leu Ile Phe Cys His Ser Lys Lys Lys Cys Asp Glu Leu Ala 1395 1400 1405 Ala Ala Leu Arg Gly Met Gly Leu Asn Ala Val Ala Tyr Tyr Arg Gly 1410 1415 1420 Leu Asp Val Ser Ile Ile Pro Ala Gln Gly Asp Val Val Val Val Ala 1425 1430 1435 1440 Thr Asp Ala Leu Met Thr Gly Tyr Thr Gly Asp Phe Asp Ser Val Ile 1445 1450 1455 Asp Cys Asn Val Ala Val Thr Gln Ala Val Asp Phe Ser Leu Asp Pro 1460 1465 1470 Thr Phe Thr Ile Thr Thr Gln Thr Val Pro Gln Asp Ala Val Ser Arg 1475 1480 1485 Ser Gln Arg Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Arg Gln Gly Thr Tyr Arg 1490 1495 1500 Tyr Val Ser Thr Gly Glu Arg Ala Ser Gly Met Phe Asp Ser Val Val 1505 1510 1515 1520 Leu Cys Glu Cys Tyr Asp Ala Gly Ala Ala Trp Tyr Asp Leu Thr Pro 1525 1530 1535 Ala Glu Thr Thr Val Arg Leu Arg Ala Tyr Phe Asn Thr Pro Gly Leu 1540 1545 1550 Pro Val Cys Gln Asp His Leu Glu Phe Trp Glu Ala Val Phe Thr Gly 1555 1560 1565 Leu Thr His Ile Asp Ala His Phe Leu Ser Gln Thr Lys Gln Ala Gly 1570 1575 1580 Glu Asn Phe Ala Tyr Leu Val Ala Tyr Gln Ala Thr Val Cys Ala Arg 1585 1590 1595 1600 Ala Lys Ala Pro Pro Pro Ser Trp Asp Ala Met Trp Lys Cys Leu Ala 1605 1610 1615 Arg Leu Lys Pro Thr Leu Ala Gly Pro Thr Pro Leu Leu Tyr Arg Leu 1620 1625 1630 Gly Pro Ile Thr Asn Glu Val Thr Leu Thr His Pro Gly Thr Lys Tyr 1635 1640 1645 Ile Ala Thr Cys Met Gln Ala Asp Leu Glu Val Met Thr Ser Thr Trp 1650 1655 1660 Val Leu Ala Gly Gly Val Leu Ala Ala Val Ala Ala Tyr Cys Leu Ala 1665 1670 1675 1680 Thr Gly Cys Val Ser Ile Ile Gly Arg Leu His Val Asn Gln Arg Val 1685 1690 1695 Val Val Ala Pro Asp Lys Glu Val Leu Tyr Glu Ala Phe Asp Glu Met 1700 1705 1710 Glu Glu Cys Ala Ser Arg Ala Ala Leu Ile Glu Glu Gly Gln Arg Ile 1715 1720 1725 Ala Glu Met Leu Lys Ser Lys Ile Gln Gly Leu Leu Gln Gln Ala Ser 1730 1735 1740 Lys Gln Ala Gln Asp Ile Gln Pro Ala Met Gln Ala Ser Trp Pro Lys 1745 1750 1755 1760 Val Glu Gln Phe Trp Ala Arg His Met Trp Asn Phe Ile Ser Gly Ile 1765 1770 1775 Gln Tyr Leu Ala Gly Leu Ser Thr Leu Pro Gly Asn Pro Ala Val Ala 1780 1785 1790 Ser Met Met Ala Phe Ser Ala Ala Leu Thr Ser Pro Leu Ser Thr Ser 1795 1800 1805 Thr Thr Ile Leu Leu Asn Ile Met Gly Gly Trp Leu Ala Ser Gln Ile 1810 1815 1820 Ala Pro Pro Ala Gly Ala Thr Gly Phe Val Val Ser Gly Leu Val Gly 1825 1830 1835 1840 Ala Ala Val Gly Ser Ile Gly Leu Gly Lys Val Leu Val Asp Ile Leu 1845 1850 1855 Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ile Ser Gly Ala Leu Val Ala Phe Lys Ile 1860 1865 1870 Met Ser Gly Glu Lys Pro Ser Met Glu Asp Val Ile Asn Leu Leu Pro 1875 1880 1885 Gly Ile Leu Ser Pro Gly Ala Leu Val Val Gly Val Ile Cys Ala Ala 1890 1895 1900 Ile Leu Arg Arg His Val Gly Pro Gly Glu Gly Ala Val Gln Trp Met 1905 1910 1915 1920 Asn Arg Leu Ile Ala Phe Ala Ser Arg Gly Asn His Val Ala Pro Thr 1925 1930 1935 His Tyr Val Thr Glu Ser Asp Ala Ser Gln Arg Val Thr Gln Leu Leu 1940 1945 1950 Gly Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Leu Arg Arg Leu His Asn Trp Ile 1955 1960 1965 Thr Glu Asp Cys Pro Ile Pro Cys Ser Gly Ser Trp Leu Arg Asp Val 1970 1975 1980 Trp Asp Trp Val Cys Thr Ile Leu Thr Asp Phe Lys Asn Trp Leu Thr 1985 1990 1995 2000 Ser Lys Leu Phe Pro Lys Leu Pro Gly Leu Pro Phe Ile Ser Cys Gln 2005 2010 2015 Lys Gly Tyr Lys Gly Val Trp Ala Gly Thr Gly Ile Met Thr Thr Arg 2020 2025 2030 Cys Pro Cys Gly Ala Asn Ile Ser Gly Asn Val Arg Leu Gly Ser Met 2035 2040 2045 Arg Ile Thr Gly Pro Lys Thr Cys Met Asn Thr Trp Gln Gly Thr Phe 2050 2055 2060 Pro Ile Asn Cys Tyr Thr Glu Gly Gln Cys Ala Pro Lys Pro Pro Thr 2065 2070 2075 2080 Asn Tyr Lys Thr Ala Ile Trp Arg Val Ala Ala Ser Glu Tyr Ala Glu 2085 2090 2095 Val Thr Gln His Gly Ser Tyr Ser Tyr Val Thr Gly Leu Thr Thr Asp 2100 2105 2110 Asn Leu Lys Ile Pro Cys Gln Leu Pro Ser Pro Glu Phe Phe Ser Trp 2115 2120 2125 Val Asp Gly Val Gln Ile His Arg Phe Ala Pro Thr Pro Lys Pro Phe 2130 2135 2140 Phe Arg Asp Glu Val Ser Phe Cys Val Gly Leu Asn Ser Tyr Ala Val 2145 2150 2155 2160 Gly Ser Gln Leu Pro Cys Glu Pro Glu Pro Asp Ala Asp Val Leu Arg 2165 2170 2175 Ser Met Leu Thr Asp Pro Pro His Ile Thr Ala Glu Thr Ala Ala Arg 2180 2185 2190 Arg Leu Ala Arg Gly Ser Pro Pro Ser Glu Ala Ser Ser Ser Val Ser 2195 2200 2205 Gln Leu Ser Ala Pro Ser Leu Arg Ala Thr Cys Thr Thr His Ser Asn 2210 2215 2220 Thr Tyr Asp Val Asp Met Val Asp Ala Asn Leu Leu Met Glu Gly Gly 2225 2230 2235 2240 Val Ala Gln Thr Glu Pro Glu Ser Arg Val Pro Val Leu Asp Phe Leu 2245 2250 2255 Glu Pro Met Ala Glu Glu Glu Ser Asp Leu Glu Pro Ser Ile Pro Ser 2260 2265 2270 Glu Cys Met Leu Pro Arg Ser Gly Phe Pro Arg Ala Leu Pro Ala Trp 2275 2280 2285 Ala Arg Pro Asp Tyr Asn Pro Pro Leu Val Glu Ser Trp Arg Arg Pro 2290 2295 2300 Asp Tyr Gln Pro Pro Thr Val Ala Gly Cys Ala Leu Pro Pro Pro Lys 2305 2310 2315 2320 Lys Ala Pro Thr Pro Pro Pro Arg Arg Arg Arg Thr Val Gly Leu Ser 2325 2330 2335 Glu Ser Thr Ile Ser Glu Ala Leu Gln Gln Leu Ala Ile Lys Thr Phe 2340 2345 2350 Gly Gln Pro Pro Ser Ser Gly Asp Ala Gly Ser Ser Thr Gly Ala Gly 2355 2360 2365 Ala Ala Glu Ser Gly Gly Pro Thr Ser Pro Gly Glu Pro Ala Pro Ser 2370 2375 2380 Glu Thr Gly Ser Ala Ser Ser Met Pro Pro Leu Glu Gly Glu Pro Gly 2385 2390 2395 2400 Asp Pro Asp Leu Glu Ser Asp Gln Val Glu Leu Gln Pro Pro Pro Gln 2405 2410 2415 Gly Gly Gly Val Ala Pro Gly Ser Gly Ser Gly Ser Trp Ser Thr Cys 2420 2425 2430 Ser Glu Glu Asp Asp Thr Thr Val Cys Cys Ser Met Ser Tyr Ser Trp 2435 2440 2445 Thr Gly Ala Leu Ile Thr Pro Cys Ser Pro Glu Glu Glu Lys Leu Pro 2450 2455 2460 Ile Asn Pro Leu Ser Asn Ser Leu Leu Arg Tyr His Asn Lys Val Tyr 2465 2470 2475 2480 Cys Thr Thr Ser Lys Ser Ala Ser Gln Arg Ala Lys Lys Val Thr Phe 2485 2490 2495 Asp Arg Thr Gln Val Leu Asp Ala His Tyr Asp Ser Val Leu Lys Asp 2500 2505 2510 Ile Lys Leu Ala Ala Ser Lys Val Ser Ala Arg Leu Leu Thr Leu Glu 2515 2520 2525 Glu Ala Cys Gln Leu Thr Pro Pro His Ser Ala Arg Ser Lys Tyr Gly 2530 2535 2540 Phe Gly Ala Lys Glu Val Arg Ser Leu Ser Gly Arg Ala Val Asn His 2545 2550 2555 2560 Ile Lys Ser Val Trp Lys Asp Leu Leu Glu Asp Pro Gln Thr Pro Ile 2565 2570 2575 Pro Thr Thr Ile Met Ala Lys Asn Glu Val Phe Cys Val Asp Pro Ala 2580 2585 2590 Lys Gly Gly Lys Lys Pro Ala Arg Leu Ile Val Tyr Pro Asp Leu Gly 2595 2600 2605 Val Arg Val Cys Glu Lys Met Ala Leu Tyr Asp Ile Thr Gln Lys Leu 2610 2615 2620 Pro Gln Ala Val Met Gly Ala Ser Tyr Gly Phe Gln Tyr Ser Pro Ala 2625 2630 2635 2640 Gln Arg Val Glu Tyr Leu Leu Lys Ala Trp Ala Glu Lys Lys Asp Pro 2645 2650 2655 Met Gly Phe Ser Tyr Asp Thr Arg Cys Phe Asp Ser Thr Val Thr Glu 2660 2665 2670 Arg Asp Ile Arg Thr Glu Glu Ser Ile Tyr Gln Ala Cys Ser Leu Pro 2675 2680 2685 Glu Glu Ala Arg Thr Ala Ile His Ser Leu Thr Glu Arg Leu Tyr Val 2690 2695 2700 Gly Gly Pro Met Phe Asn Ser Lys Gly Gln Thr Cys Gly Tyr Arg Arg 2705 2710 2715 2720 Cys Arg Ala Ser Gly Val Leu Thr Thr Ser Met Gly Asn Thr Ile Thr 2725 2730 2735 Cys Tyr Val Lys Ala Leu Ala Ala Cys Lys Ala Ala Gly Ile Val Ala 2740 2745 2750 Pro Thr Met Leu Val Cys Gly Asp Asp Leu Val Val Ile Ser Glu Ser 2755 2760 2765 Gln Gly Thr Glu Glu Asp Glu Arg Asn Leu Arg Ala Phe Thr Glu Ala 2770 2775 2780 Met Thr Arg Tyr Ser Ala Pro Pro Gly Asp Pro Pro Arg Pro Glu Tyr 2785 2790 2795 2800 Asp Leu Glu Leu Ile Thr Ser Cys Ser Ser Asn Val Ser Val Ala Leu 2805 2810 2815 Gly Pro Arg Gly Arg Arg Arg Tyr Tyr Leu Thr Arg Asp Pro Thr Thr 2820 2825 2830 Pro Leu Ala Arg Ala Ala Trp Glu Thr Val Arg His Ser Pro Ile Asn 2835 2840 2845 Ser Trp Leu Gly Asn Ile Ile Gln Tyr Ala Pro Thr Ile Trp Val Arg 2850 2855 2860 Met Val Leu Met Thr His Phe Phe Ser Ile Leu Met Val Gln Asp Thr 2865 2870 2875 2880 Leu Asp Gln Asn Leu Asn Phe Glu Met Tyr Gly Ser Val Tyr Ser Val 2885 2890 2895 Asn Pro Leu Asp Leu Pro Ala Ile Ile Glu Arg Leu His Gly Leu Asp 2900 2905 2910 Ala Phe Ser Met His Thr Tyr Ser His His Glu Leu Thr Arg Val Ala 2915 2920 2925 Ser Ala Leu Arg Lys Leu Gly Ala Pro Pro Leu Arg Val Trp Lys Ser 2930 2935 2940 Arg Ala Arg Ala Val Arg Ala Ser Leu Ile Ser Arg Gly Gly Lys Ala 2945 2950 2955 2960 Ala Val Cys Gly Arg Tyr Leu Phe Asn Trp Ala Val Lys Thr Lys Leu 2965 2970 2975 Lys Leu Thr Pro Leu Pro Glu Ala Arg Leu Leu Asp Leu Ser Ser Trp 2980 2985 2990 Phe Thr Val Gly Ala Gly Gly Gly Asp Ile Phe His Ser Val Ser Arg 2995 3000 3005 Ala Arg Pro Arg Ser Leu Leu Phe Gly Leu Leu Leu Leu Phe Val Gly 3010 3015 3020 Val Gly Leu Phe Leu Leu Pro Ala Arg 3025 3030

【図面の簡単な説明】

【図１】劇症肝炎患者の経過を示す図である。

【図２】分子系統樹による解析の結果を示す図である。

【図３】劇症肝炎分離株ＪＦＨ−１と慢性肝炎５例から
分離したウイルス株（ＪＣＨ−１〜５）及びすでに報告
されているＪ６ＣＦ株のコア領域のアミノ酸配列を示す
図である。

【図４】図３に示したアミノ酸配列を発現するウイルス
遺伝子をＴ７プロモーター配列とポリＡシグナル配列(p
A)の間に挿入した発現ベクターの概略図（Ａ）、及び該
発現ベクターを鋳型としてコア蛋白質を発現させて電気
泳動し、ＰＶＤＦ膜に転写して抗コアモノクローナル抗
体で検出した結果（Ｂ）を示す。

【図５】ＪＦＨ−１株とＪＣＨ−１株を６０番目、９０
番目、１６０番目のアミノ酸で入れ替えたキメラ遺伝子
をＴ７プロモーター配列とポリＡシグナル配列(pA)の間
に挿入した発現ベクターの概略図（Ａ）、及び該発現ベ
クターを鋳型としてコア蛋白質を発現させて電気泳動
し、ＰＶＤＦ膜に転写して抗コアモノクローナル抗体で
検出した結果（Ｂ）を示す。

【図６】コア領域のみを発現する発現ベクター及び構造
遺伝子領域全体を含んだ発現ベクターの概略図（Ａ）、
及び該発現ベクターを鋳型としてコア蛋白質を発現させ
て電気泳動し、ＰＶＤＦ膜に転写して抗コアモノクロー
ナル抗体で検出した結果（Ｂ）を示す。

【図７】実験１で用いた発現ベクターを細胞内に導入し
て細胞内で発現させて電気泳動し、ＰＶＤＦ膜に転写し
て抗コアモノクローナル抗体で検出した結果を示す図で
ある。

【図８】ＪＦＨ−１株とＪＣＨ−１株の翻訳領域全体を
挿入した発現ベクターの概略図（Ａ）、及び該発現ベク
ターを細胞内に導入して細胞内で発現させて電気泳動
し、ＰＶＤＦ膜に転写してウエスタンブロット法で検出
した結果（Ｂ）を示す。

【図９】ＮＳ３から下流のウイルス遺伝子のみを挿入し
た発現ベクターの概略図（Ａ）、及び該発現ベクターを
細胞内に導入して細胞内で発現させて電気泳動し、ＰＶ
ＤＦ膜に転写してウエスタンブロット法で検出した結果
（Ｂ）を示す。

【符号の説明】

ＡＬＴ アラニンアミノトランスフェラーゼ ＰＴ プロトロンビン時間 FH.ami 劇症肝炎分離株ＪＦＨ−１のコア領域のアミノ
酸配列 CH1.ami 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−１のコア領域のアミ
ノ酸配列 CH2.ami 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−２のコア領域のアミ
ノ酸配列 CH3.ami 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−３のコア領域のアミ
ノ酸配列 CH4.ami 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−４のコア領域のアミ
ノ酸配列 CH5.ami 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−５のコア領域のアミ
ノ酸配列 J6CF.ami Ｊ６ＣＦ株のコア領域のアミノ酸配列 FH 劇症肝炎分離株ＪＦＨ−１ CH1-5 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−１〜５ CH1 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−１ CH2 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−２ CH3 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−３ CH4 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−４ CH5 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−５ FH ORF 劇症肝炎分離株ＪＦＨ−１の翻訳領域全体を挿
入した発現ベクター CH1 ORF 慢性肝炎分離株ＪＣＨ−１の翻訳領域全体を
挿入した発現ベクター Cont. 陰性コントロール、ＨＣＶのｃＤＮＡを挿入し
ていない発現ベクター Myc human c-myc gene protein HA ヒトインフルエンザウイルスのhemagglutinin prot
ein

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 古坂 明弘 東京都目黒区三田１−４−４ エビスビュ ータワー2616 (72)発明者 長井 幸三 東京都中央区日本橋室町２丁目２番１号 東レ株式会社東京事業場内 (72)発明者 森山 雅美 東京都中央区日本橋室町２丁目２番１号 東レ株式会社東京事業場内 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA32 BA80 CA04 DA03 GA11 HA11 4H045 AA10 BA10 CA02 HA07

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２に示すアミノ酸配列のうち、
   アミノ酸番号１６１〜１９１で表されるアミノ酸配列を
   含むポリペプチド。
2. 【請求項２】 アミノ酸残基数が３１〜３０３３である
   請求項１記載のポリペプチド。
3. 【請求項３】 配列番号２に示すアミノ酸配列からなる
   ポリペプチド。
4. 【請求項４】 請求項１〜３のいずれか１項に記載のポ
   リペプチドをコードする塩基配列を含むＤＮＡ。
5. 【請求項５】 配列番号１に示す塩基配列のうち、ヌク
   レオチド番号８２１〜９１３で表される塩基配列と同一
   又は相補的な塩基配列を含むＤＮＡ。
6. 【請求項６】 塩基数が９３〜９６７８である請求項４
   又は５記載のＤＮＡ。
7. 【請求項７】 配列番号１に示す塩基配列と同一又は相
   補的な塩基配列からなるＤＮＡ。