JP2003259884A - 新規ポリペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＤＧリパーゼが関与する疾患の治療薬の探索
および開発に有用なポリペプチド、該ポリペプチドをコ
ードするＤＮＡ、該ポリペプチドを認識する抗体、およ
びこれらの利用方法を提供する。 【解決手段】 ヒト脳よりＤＧリパーゼ活性を有するポ
リペプチドをコードするＤＮＡを取得し、該ポリペプチ
ドおよび該ポリペプチドを認識する抗体を製造する。さ
らに、該ポリペプチドまたは該抗体等を用いて、ＤＧリ
パーゼが関与する疾患の治療薬のスクリーニング系を構
築する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ジアシルグリセロ
ールリパーゼ活性を有するポリペプチド、該ポリペプチ
ドをコードするＤＮＡ、該ポリペプチドを認識する抗体
および該ポリペプチドの製造方法、ならびに、それらを
用いた診断薬、治療薬のスクリーニング方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】グリセロール骨格の２位にアラキドン酸
を結合したモノアシルグリセロールである２−アラキド
ノイルグリセロール（以下、２−ＡＧと略す。）は機能
性脂質分子の一つである（例えば、非特許文献１参
照）。２−ＡＧには、海馬における長期増強（ＬＴＰ）
抑制作用（例えば、非特許文献２参照）、脳損傷後にお
ける神経防護作用（例えば、非特許文献３参照）、培養
神経細胞の保護作用（例えば、非特許文献４参照）、な
らびに興奮性シナプス後電位（ＥＰＳＰ）の抑制作用
（例えば、非特許文献５参照）が知られている。また、
パーキンソン病の動物モデルにおいては、淡蒼球におけ
る２−ＡＧの上昇が報告されている（例えば、非特許文
献６参照）。また、２−ＡＧの免疫や炎症に関連する作
用として、リンパ球からのインターロイキン−２（ＩＬ
−２）の産生抑制作用（例えば、非特許文献７参照）、
混合リンパ球反応の抑制作用、ＣＤ３抗体刺激によるＴ
細胞増殖の抑制作用、リポ多糖刺激のＢ細胞増殖の抑制
作用（例えば、非特許文献８参照）、およびマクロファ
ージからの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）の産生抑制作用
（例えば、非特許文献９参照）が知られている。さら
に、２−ＡＧの循環器系に対する作用として、血管から
の一酸化窒素産生の促進（例えば、非特許文献１０参
照）および血圧の低下作用が知られている（例えば、非
特許文献１１参照）。２−ＡＧは、脳以外にも肝臓、脾
臓、肺、腎臓等多くの組織で高濃度に産生されているこ
とが知られている（例えば、非特許文献１２参照）。こ
れらのことから、２−ＡＧは生体内で重要な役割をして
いることが示唆されている。

【０００３】２−ＡＧは、マリファナの成分であるカン
ナビノイドが結合するカンナビノイド受容体に対する内
因性のリガンドである（例えば、非特許文献１３参
照）。カンナビノイド受容体には中枢で主に発現してい
るカンナビノイド１受容体（ＣＢ１）と、末梢で主に発
現しているカンナビノイド２受容体（ＣＢ２）が知られ
ている（例えば、非特許文献１４参照）。内因性のカン
ナビノイド受容体のリガンドとして報告されているＮ−
パルミトイルエタノールアミン（N-palmitoylethanolam
ine）やアナンダミド（anandamide）はＣＢ２には結合
しないが、２−ＡＧはＣＢ２のリガンドとなることが明
らかとなり、２−ＡＧはＣＢ２に対して最も重要な内因
性のリガンドであることがわかった（例えば、非特許文
献１５参照）。

【０００４】マリファナの成分でありカンナビノイド受
容体の作動薬のデルタ−９−テトラヒドロカンナビノー
ルは、ヒトにおいて鎮痛薬（例えば、非特許文献１６参
照）として報告されているとともに、カンナビノイドの
１つであるナビロン(nabilone)は米国で化学療法時の鎮
吐剤ならびにエイズ患者の食欲増進剤として使われてい
る。多発性硬化症のモデルにおいてはカンナビノイド受
容体作動薬を投与すると、振戦や痙攣が緩和された（例
えば、非特許文献１７参照）。ＣＢ１拮抗薬の作用とし
ては、記憶障害を改善すること（例えば、非特許文献１
８参照）やアルコールの摂取量を減弱させること（例え
ば、非特許文献１９参照）が報告されている。また、カ
ンナビノイド受容体拮抗薬は、組織障害によって誘発さ
れる痛みを増強することが報告されている（例えば、非
特許文献２０参照）。肺における作用として、ＣＢ１の
刺激により気道の収縮が見られることが報告されている
（例えば、非特許文献２１参照）。末梢で主に発現して
いるＣＢ２は、免疫や炎症に広く関与していることが報
告されている（例えば、非特許文献１４参照）。また、
カンナビノイド受容体の内因性リガンドは、種々の腫瘍
細胞の増殖や細胞増殖因子の産生に関係することが報告
されている（例えば、非特許文献２２参照）。

【０００５】２−ＡＧの生成経路に関しては、イノシト
ールリン脂質から生成することが示唆されている。細胞
が刺激を受けたとき、イノシトールリン脂質が分解され
て生成したジアシルグリセロール（ＤＧ）は、プロテイ
ンキナーゼＣの活性化を引き起こすが、その後、ジアシ
ルグリセロールキナーゼやジアシルグリセロールリパー
ゼ（以下、ＤＧリパーゼと略す。）によって代謝される
（例えば、非特許文献２３参照）。このうち、ＤＧリパ
ーゼは、ＤＧの１位の脂肪酸を加水分解する酵素であ
る。イノシトールリン脂質は２位の位置に主にアラキド
ン酸を含有しているので、イノシトールリン脂質由来の
ＤＧにＤＧリパーゼが作用すると２−ＡＧが生成する。
従って、ＤＧリパーゼは生体内における２−ＡＧ産生酵
素の有力な候補であり、脂質性情報伝達系におけるキー
エンザイムの一つである（例えば、非特許文献２４参
照）。ＤＧリパーゼはヒト血小板活性化時に作動するこ
とが見いだされ（例えば、非特許文献２５参照）、本酵
素はヒト血小板膜画分から初めて精製された（例えば、
非特許文献２６参照）。これらの知見は、ＤＧリパーゼ
がカンナビノイド受容体の内因性のリガンドである２−
ＡＧの生合成に重要な酵素であることを示唆している。

【０００６】以上のことから、ＤＧリパーゼ、活性促進
剤およびＤＧリパーゼ遺伝子の発現促進剤は２−ＡＧの
生合成を促進することで、精神分裂病、痛み、脳挫傷、
脊髄損傷、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎
症性大腸炎、自己免疫疾患、心筋梗塞、脳梗塞、高血
圧、嘔吐、食欲不振、悪性腫瘍等の予防ならびに治療
に、ＤＧリパーゼ阻害剤、ＤＧリパーゼの活性を阻害す
る抗体、ＤＧリパーゼの遺伝子発現の抑制剤は、２−Ａ
Ｇの生合成を阻害することで、うつ病、不安、パーキン
ソン病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘
息、過食、肥満、アルコール依存症等の予防ならびに治
療に用いることができる。

【０００７】ＤＧリパーゼをコードする遺伝子について
は、カビ由来のＤＧリパーゼ遺伝子（例えば、非特許文
献２７および非特許文献２８参照）およびヒト由来のＤ
ＧリパーゼｃＤＮＡ（例えば、非特許文献２９参照）が
報告されている。

【０００８】

【非特許文献１】「ケミストリー・アンド・フィジック
ス・オブ・リピッズ（Chemistry and Physics of Lipid
s）」，（アイルランド），２０００年，第１０８巻，
第１−２号，ｐ．８９−１０６

【０００９】

【非特許文献２】「ネイチャー（Nature）」，（イギリ
ス），１９９７年，第３８８巻，第６６４４号，ｐ．７
７３−７７８

【００１０】

【非特許文献３】「ネイチャー（Nature）」，（イギリ
ス），２００１年，第４１３巻，第６８５５号，ｐ．５
２７−５３１

【００１１】

【非特許文献４】「ニューロサイエンス・レターズ（Ne
uroscience Letters）」，（アイルランド），２０００
年，第２７８巻，第３号，ｐ．１５７−１６０

【００１２】

【非特許文献５】「ナウニン−シュミーデベルグズ・ア
ーカイブス・オブ・ファーマコロジー（Naunyn-Schmied
eberg's Archives of Pharmacology）」，（ドイツ）２
０００年，第３６１巻，第３号，ｐ．２６１−２７２

【００１３】

【非特許文献６】「ザ・ＦＡＳＥＢ・ジャーナル（The
FASEB Journal）」，（米国），２０００年，第１４
巻，第１０号，ｐ．１４２３−１４３１

【００１４】

【非特許文献７】「モレキュラー・ファーマコロジー
（Molecular Pharmacology）」，（米国），１９９８
年，第５３巻，第４号，ｐ．６７６−６８３

【００１５】

【非特許文献８】「ザ・ジャーナル・オブ・ファーマコ
ロジー・アンド・エクスペリメンタル・セラピューティ
クス（The Journal of Pharmacology and Experimental
Therapeutics）」，（米国），１９９５年，第２７５
巻，第２号，ｐ．５２９−５３６

【００１６】

【非特許文献９】「ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・
ファーマコロジー（European Journal of Pharmacolog
y）」，（オランダ），２０００年，第４０６巻，第１
号，ｐ．Ｒ５−７

【００１７】

【非特許文献１０】「ファーマコロジカル・リサーチ
（Pharmacological Research）」，（イギリス），２０
００年，第４２巻，第４号，ｐ．３１７−３２２

【００１８】

【非特許文献１１】「ハイパーテンション（Hypertensi
on）」，（米国），２０００年，第３５巻，第２号，
ｐ．６７９−６８４

【００１９】

【非特許文献１２】「ＦＥＢＳ・レターズ（FEBS Lette
rs）」，（オランダ），１９９８年，第４２９巻，第２
号，ｐ．１５２−１５６

【００２０】

【非特許文献１３】「バイオケミカル・アンド・バイオ
フィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Bioche
mical and Biophysical Research Communication
s）」，（米国），１９９５年，第２１５巻，第１号，
ｐ．８９−９７

【００２１】

【非特許文献１４】「イムノロジー・トゥデイ（Immuno
logy Today）」，（イギリス），１９９８年，第１９
巻，第８号，ｐ．３７３−３８１

【００２２】

【非特許文献１５】「ザ・ジャーナル・オブ・バイオロ
ジカル・ケミストリー（The Journal of Biological Ch
emistry）」，（米国），２０００年，第２７５巻，第
１号，ｐ．６０５−６１２

【００２３】

【非特許文献１６】「ヨーロピアン・アーカイブズ・オ
ブ・サイキアトリー・アンド・クリニカル・ニューロサ
イエンス（European Archives of Psychiatry and Clin
ical Neuroscience）」，（ドイツ），１９９０年，第
２４９巻，第１号，ｐ．１−６

【００２４】

【非特許文献１７】「ネイチャー（Nature）」，（イギ
リス），２０００年，第４０４巻，第６７７３号，ｐ．
８４−８７

【００２５】

【非特許文献１８】「サイコファーマコロジー（Psycho
pharmacology）」，（ドイツ），１９９６年，第１２６
巻，第２号，ｐ．１６５−１７２

【００２６】

【非特許文献１９】「サイコファーマコロジー（Psycho
pharmacology）」，（ドイツ），１９９７年，第１３２
巻，第１号，ｐ．１０４−１０６

【００２７】

【非特許文献２０】「ネイチャー（Nature）」，（イギ
リス），１９９８年，第３９４巻，第６６９０号，ｐ．
２７７−２８１

【００２８】

【非特許文献２１】「ネイチャー（Nature）」，（イギ
リス），２０００年，第４０８巻，第６８０８号，ｐ．
９６−１０１

【００２９】

【非特許文献２２】「プロスタグランジンズ・アンド・
アザー・リピッド・メディエーターズ（Prostaglandins
& Other Lipid Mediators）」，（米国），２０００
年，第６１巻，第１−２号，ｐ．４３−６１

【００３０】

【非特許文献２３】「化学と生物」，１９９２年，第３
０巻，第１１号，ｐ．７１４−７２２

【００３１】

【非特許文献２４】「化学と生物」，１９９９年，第３
７巻，第９号，ｐ．５６４−５６６

【００３２】

【非特許文献２５】「バイオサイエンス、バイオテクノ
ロジー、アンド・バイオケミストリー（Bioscience, Bi
otechnology, and Biochemistry）」，日本農芸化学
会，１９９４年，５８巻，第１号，ｐ．９３−９８

【００３３】

【非特許文献２６】「ジャーナル・オブ・バイオケミス
トリー（Journal of Biochemistry）」，日本生化学
会，１９９９年，１２５巻，第６号，ｐ．１０７７−１
０８５

【００３４】

【非特許文献２７】「バイオサイエンス、バイオテクノ
ロジー、アンド・バイオケミストリー（Bioscience, Bi
otechnology, and Biochemistry）」，日本農芸化学
会，１９９２年，５６巻，第２号，ｐ．３１５−３１９

【００３５】

【非特許文献２８】「ジーン（Gene）」，（オラン
ダ），１９９１年，第１０３巻，第１号，ｐ．６１−６
７

【００３６】

【非特許文献２９】森山達哉、他２名，「ヒト膜結合型
ジアシルグルセロールリパーゼのクローニングと発現解
析」，日本農芸化学会誌，２００１年，第７５巻，臨時
増刊号（２００１年度大会講演要旨集），ｐ９３

【００３７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、うつ
病、不安、パーキンソン病、精神分裂病、幻覚、痴呆、
記憶障害、マリファナ依存症、痛み、脳挫傷、脊髄損
傷、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎症性大
腸炎、自己免疫疾患、喘息、心筋梗塞、脳梗塞、高血
圧、嘔吐、食欲不振、過食、肥満、アルコール依存症、
悪性腫瘍等の診断、予防および治療に有用な、新規なヒ
ト由来ＤＧリパーゼ、該蛋白質をコードするＤＮＡ、該
蛋白質を認識する抗体、該蛋白質の製造方法およびこれ
らを用いた上記疾患の診断薬、予防薬および治療薬のス
クリーニング方法等を提供することにある。

【００３８】

【課題を解決するための手段】本発明は以下の（１）〜
（３８）を提供するものである。 （１） 配列番号１または１４で表されるアミノ酸配列
からなるポリペプチド。 （２） 配列番号１または１４で表されるアミノ酸配列
において１以上のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加さ
れ、かつ配列番号１または１４で表されるアミノ酸配列
と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を有し、か
つジアシルグリセロールリパーゼ活性を有するポリペプ
チド。

【００３９】（３） （１）または（２）記載のポリペ
プチドをコードするＤＮＡ。 （４） 配列番号２、３または１５で表される塩基配列
からなるＤＮＡ。 （５） 配列番号３または１５で表される塩基配列と相
補的な塩基配列を有するＤＮＡとストリンジェントな条
件下でハイブリダイズし、かつ配列番号３または１５で
表される塩基配列と８０％以上の相同性を有する塩基配
列を有し、かつジアシルグリセロールリパーゼ活性を有
するポリペプチドをコードするＤＮＡ。

【００４０】（６） （３）〜（５）のいずれか１項に
記載のＤＮＡの塩基配列と相補的な塩基配列を有するＤ
ＮＡ。 （７） （３）〜（６）のいずれか１項に記載のＤＮＡ
をベクターに組み込んで得られる組換え体ベクター。 （８） （３）〜（６）のいずれか１項に記載のＤＮＡ
と相同な配列からなるＲＮＡをベクターに組み込んで得
られる組換え体ベクター。

【００４１】（９） （３）〜（６）のいずれか１項に
記載のＤＮＡ、または（７）記載の組換え体ベクターを
保有する形質転換体。 （１０） 形質転換体が微生物、動物細胞、植物細胞お
よび昆虫細胞からなる群より選ばれる形質転換体であ
る、（９）記載の形質転換体。 （１１） 形質転換体が、非ヒトトランスジェニック動
物またはトランスジェニック植物である、（９）記載の
形質転換体。

【００４２】（１２） （３）〜（６）のいずれか１項
に記載のＤＮＡを欠損または変異させた非ヒトノックア
ウト動物。 （１３） （９）または（１０）記載の形質転換体を培
地に培養し、培養物中に（１）または（２）記載のポリ
ペプチドを生成蓄積させ、該培養物から該ポリペプチド
を採取することを特徴とする、該ポリペプチドの製造方
法。

【００４３】（１４） （１１）記載の非ヒトトランス
ジェニック動物を飼育し、（１）または（２）記載のポ
リペプチドを該動物中に生成蓄積させ、該動物中より該
ポリペプチドを採取することを特徴とする、該ポリペプ
チドの製造方法。 （１５） （１１）記載のトランスジェニック植物を栽
培し、（１）または（２）記載のポリペプチドを該植物
中に生成蓄積させ、該植物中より該ポリペプチドを採取
することを特徴とする、該ポリペプチドの製造方法。

【００４４】（１６） （３）〜（６）のいずれか１項
に記載のＤＮＡを用い、イン・ビトロ（in vitro）での
転写・翻訳系により（１）または（２）記載のポリペプ
チドを合成することを特徴とする、該ポリペプチドの製
造方法。 （１７） （３）〜（６）のいずれか１項に記載のＤＮ
Ａ、または（３）〜（６）のいずれか１項に記載のＤＮ
Ａの連続する少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有す
るＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを用いて、（１）ま
たは（２）記載のポリペプチドをコードするＤＮＡの発
現を検出および定量する方法。

【００４５】（１８） （３）〜（６）のいずれか１項
に記載のＤＮＡ、または（３）〜（６）のいずれか１項
に記載のＤＮＡの連続する少なくとも１５塩基以上の塩
基配列を有するＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを用い
て、（１）または（２）記載のポリペプチドをコードす
るＤＮＡの変異を検出および同定する方法。 （１９） （３）〜（６）のいずれか１項に記載のＤＮ
Ａ、または（３）〜（６）のいずれか１項に記載のＤＮ
Ａの連続する少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有す
るＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを用いて、（１）ま
たは（２）記載のポリペプチドをコードするＤＮＡのプ
ロモーター領域および／または転写制御領域を含むＤＮ
Ａを取得する方法。

【００４６】（２０） （３）〜（６）のいずれか１項
に記載のＤＮＡ、または（３）〜（６）のいずれか１項
に記載のＤＮＡの連続する少なくとも１５塩基以上の塩
基配列を有するＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを用い
て、（１）または（２）記載のポリペプチドをコードす
るＤＮＡの転写またはｍＲＮＡの翻訳を抑制する方法。

【００４７】（２１） （１）または（２）記載のポリ
ペプチドを認識する抗体。 （２２） （２１）記載の抗体を用いる、（１）または
（２）記載のポリペプチドの免疫学的検出法。 （２３） （１）または（２）記載のポリペプチドを含
有する医薬。 （２４）医薬が、精神分裂病、痛み、脳挫傷、脊髄損
傷、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎症性大
腸炎、自己免疫疾患、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔
吐、食欲不振、悪性腫瘍の予防および／または治療のた
めの医薬である（２３）記載の医薬。

【００４８】（２５） （３）〜（６）のいずれか１項
に記載のＤＮＡ、または（３）〜（６）のいずれか１項
に記載のＤＮＡの連続する少なくとも１５塩基以上の塩
基配列を有するＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを含有
する医薬。 （２６） 医薬が、うつ病、不安、パーキンソン病、精
神分裂病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、
痛み、脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化症、慢性関節リウ
マチ、乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫疾患、喘息、心筋
梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、過食、肥満、
アルコール依存症、悪性腫瘍の診断のための医薬である
（２５）記載の医薬。

【００４９】（２７） 医薬が、うつ病、不安、パーキ
ンソン病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、
喘息、過食、肥満、アルコール依存症の予防および／ま
たは治療のための医薬である（２５）記載の医薬。 （２８） （７）または（８）記載の組換え体ベクター
を含有する医薬。 （２９） 医薬が、精神分裂病、痛み、脳挫傷、脊髄損
傷、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎症性大
腸炎、自己免疫疾患、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔
吐、食欲不振、悪性腫瘍の予防および／または治療のた
めの医薬である（２８）記載の医薬。

【００５０】（３０） （２１）記載の抗体を含有する
医薬。 （３１） 医薬が、うつ病、不安、パーキンソン病、精
神分裂病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、
痛み、脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化症、慢性関節リウ
マチ、乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫疾患、喘息、心筋
梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、過食、肥満、
アルコール依存症、悪性腫瘍の診断のための医薬である
（３０）記載の医薬。

【００５１】（３２） 医薬がうつ病、不安、パーキン
ソン病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘
息、過食、肥満、アルコール依存症の予防および／また
は治療のための医薬である（３０）記載の医薬。 （３３） （１）または（２）記載のポリペプチドと被
験試料とを接触させ、被験試料による該ポリペプチドが
有するジアシルグリセロールリパーゼ活性の変動を測定
することを特徴とする、該ポリペプチドが有するジアシ
ルグリセロールリパーゼ活性を変動させる化合物のスク
リーニング方法。

【００５２】（３４） （１）または（２）記載のポリ
ペプチドを発現する細胞と被験試料とを接触させ、（２
１）記載の抗体を用い、被験試料による該ポリペプチド
の発現量の変動を定量することを特徴とする、該ポリペ
プチドをコードするＤＮＡの発現を変動させる化合物の
スクリーニング方法。 （３５） （１）または（２）記載のポリペプチドを発
現する細胞と被験試料とを接触させ、（３）〜（６）の
いずれか１項に記載のＤＮＡ、または（３）〜（６）の
いずれか１項に記載のＤＮＡの連続する少なくとも１５
塩基以上の塩基配列を有するＤＮＡまたはオリゴヌクレ
オチドを用い、該ポリペプチドをコードするＤＮＡの発
現を定量することを特徴とする、該ポリペプチドをコー
ドするＤＮＡの発現を変動させる化合物のスクリーニン
グ方法。

【００５３】（３６） （１９）記載の方法により取得
されるプロモーター領域および／または転写制御領域を
含むＤＮＡと、該プロモーター領域および／または転写
制御領域を含むＤＮＡの下流に連結させたレポーター遺
伝子とを含有するベクターを用いて動物細胞を形質転換
し、該形質転換体と被験試料とを接触させ、該レポータ
ー遺伝子の翻訳産物を定量することを特徴とする、該プ
ロモーター領域および／または転写制御領域による
（１）または（２）記載のポリペプチドをコードするＤ
ＮＡの転写効率を変動させる化合物のスクリーニング方
法。

【００５４】（３７） （１１）記載の非ヒトトランス
ジェニック動物に被験試料を投与し、（３）〜（６）の
いずれか１項に記載のＤＮＡ、または（３）〜（６）の
いずれか１項に記載のＤＮＡの連続する少なくとも１５
塩基以上の塩基配列を有するＤＮＡまたはオリゴヌクレ
オチドを用い、（１）または（２）記載のポリペプチド
をコードするＤＮＡの発現を定量することを特徴とす
る、該ポリペプチドをコードするＤＮＡの発現を変動さ
せる化合物のスクリーニング方法。

【００５５】（３８） （３３）〜（３７）のいずれか
１項に記載のスクリーニング方法により得られる化合
物。

【００５６】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチドは、ＤＧリ
パーゼ活性を有するポリペプチドであり、ＤＧの１位の
脂肪酸を加水分解する酵素活性を有する。生体内におい
ては、カンナビノイド受容体の内因性のリガンドである
２−ＡＧの生合成に関わる重要な酵素である。従って、
本発明のポリペプチドは、２−ＡＧ産生の促進ならび
に、２−ＡＧ産生酵素系の阻害剤および促進剤等の探
索、評価に利用することができる。

【００５７】本発明のポリペプチドとしては、配列番号
１または１４で表されるアミノ酸配列からなるポリペプ
チド、配列番号１または１４で表されるアミノ酸配列に
おいて１以上のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加さ
れ、かつ配列番号１または１４で表されるアミノ酸配列
とＢＬＡＳＴ〔J. Mol. Biol., 215, 403 (1990)〕やＦ
ＡＳＴＡ〔Methods Enzymol., 183, 63 (1990)〕等を用
いて計算したときに、８０％以上の相同性を有するアミ
ノ酸配列からなり、かつＤＧリパーゼ活性を有するポリ
ペプチドをあげることができる。なお、配列番号１４で
表されるアミノ酸配列は配列番号１で表されるアミノ酸
配列の１〜１７１番目の配列を欠失した配列と一致す
る。

【００５８】本明細書に記載される相同性の数値は、特
に明示した場合を除き、当業者に公知の相同性検索プロ
グラムを用いて算出される数値であってよいが、塩基配
列、アミノ酸配列については、好ましくはＢＬＡＳＴ
〔J. Mol. Biol., 215, 403 (1990)〕またはＦＡＳＴＡ
〔Methods Enzymol., 183, 63 (1990)〕においてデフォ
ルト（初期設定）のパラメータを用いて算出される数値
である。

【００５９】配列番号１または１４で表されるアミノ酸
配列において１以上のアミノ酸が欠失、置換または付加
されたアミノ酸配列からなり、かつＤＧリパーゼ活性を
有するポリペプチドは、Molecular Cloning, A Laborat
ory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Lab
oratory (1989)（以下、モレキュラー・クローニング第
２版と略す）、Current Protocols in Molecular Biolo
gy, John Wiley & Sons (1987-1997)（以下、カレント
・プロトコールズ・イン・モレキュラー・バイオロジー
と略す）、Nucleic Acids Res., 10, 6487 (1982)、Pro
c. Natl. Acad.Sci. USA, 79, 6409 (1982)、Gene, 34,
315 (1985)、Nucleic Acids Res., 13, 4431 (1985)、
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 488 (1985)等に記載
の部位特異的変異導入法を用いて、例えば配列番号1ま
たは１４で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド
をコードするＤＮＡに部位特異的変異を導入することに
より、取得することができる。欠失、置換もしくは付加
されるアミノ酸の数は特に限定されないが、上記の部位
特異的変異法等の周知の方法により欠失、置換もしくは
付加できる程度の数であり、１個から数十個、好ましく
は１〜２０個、より好ましくは１〜１０個、さらに好ま
しくは１〜５個である。

【００６０】また、本発明のポリペプチドがＤＧリパー
ゼ活性を有するためには、配列番号１または１４で表さ
れるアミノ酸配列と、ＢＬＡＳＴ〔J. Mol. Biol., 21
5, 403 (1990)〕やＦＡＳＴＡ〔Methods Enzymol., 18
3, 63 (1990)〕等を用いて計算したときに、少なくとも
８０％以上、特に９５％以上の相同性を有していること
が好ましい。

【００６１】配列番号１または１４で表されるアミノ酸
配列において１以上のアミノ酸が欠失、置換または付加
されたアミノ酸配列からなり、かつＤＧリパーゼ活性を
有するポリペプチドの例として、配列番号１４で表され
るアミノ酸配列のＮ末端にメチオニンを１つ付加した配
列である配列番号２０で表されるアミノ酸配列からなる
ポリペプチド、配列番号１の１〜１７１番目の配列中の
任意の数および位置のアミノ酸を欠失させたアミノ酸配
列からなるポリペプチドをあげることができる。

【００６２】本発明のＤＮＡは、本発明のポリペプチド
をコードするＤＮＡ、例えば、配列番号１で表されるア
ミノ酸配列からなるポリペプチドをコードする配列番号
２または３で表される塩基配列からなるＤＮＡ、配列番
号１４で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを
コードする配列番号１５で表される塩基配列からなるＤ
ＮＡがあげられる。一般に１つのアミノ酸に対して複数
種の遺伝暗号が存在するため、配列番号２、３または１
５とは異なる塩基配列を有するＤＮＡであっても本発明
のポリペプチドをコードしていれば本発明のＤＮＡに含
まれる。さらに本発明のＤＮＡは、配列番号３または１
５で表される塩基配列と相補的な塩基配列を有するＤＮ
Ａとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、か
つ配列番号３または１５で表される塩基配列と８０％以
上の相同性を有する塩基配列を有し、かつＤＧリパーゼ
活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡも含まれ
る。

【００６３】ストリンジェントな条件下でハイブリダイ
ズ可能なＤＮＡとは、配列番号３または１５で表される
塩基配列と相補的な塩基配列を有するＤＮＡをプローブ
として、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラー
ク・ハイブリダイゼーション法あるいはサザンブロット
ハイブリダイゼーション法等を用いることにより得られ
るＤＮＡを意味し、具体的には、コロニーあるいはプラ
ーク由来のＤＮＡを固定化したフィルターを用いて、
０．７〜１．０ｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウム存在下、６
５℃でハイブリダイゼーションを行った後、０．１〜２
倍濃度のＳＳＣ溶液（１倍濃度のＳＳＣ溶液の組成は、
１５０ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム、１５ｍｍｏｌ／ｌ
クエン酸ナトリウムよりなる）を用い、６５℃条件下で
フィルターを洗浄することにより同定できるＤＮＡをあ
げることができる。ハイブリダイゼーションは、モレキ
ュラー・クローニング第２版、カレント・プロトコール
ズ・イン・モレキュラー・バイオロジー、DNA Cloning
1: Core Techniques, A Practical Approach, Second E
dition, Oxford University (1995)等に記載されている
方法に準じて行うことができる。ハイブリダイズ可能な
ＤＮＡとして具体的には、ＢＬＡＳＴ〔J. Mol. Biol.,
215, 403 (1990)〕やＦＡＳＴＡ〔Methods Enzymol.,
183, 63 (1990)〕等を用いて計算したときに、配列番号
３または１５で表される塩基配列と少なくとも８０％以
上の相同性を有するＤＮＡ、好ましくは９５％以上の相
同性を有するＤＮＡをあげることができる。

【００６４】本発明のＤＮＡには、上記に記載した本発
明のポリペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列と相補
的な塩基配列を有するＤＮＡも含まれる。具体的には配
列番号２、３または１５で表わされる塩基配列と相補的
な塩基配列を有するＤＮＡをあげることができる。本発
明のポリペプチドをコードするＤＮＡは、後述する方法
で調製したときに、通常２本鎖ＤＮＡとして得られるの
で、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡと同時に
本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列と
相補的な塩基配列を有するＤＮＡも得ることができる。
２本鎖ＤＮＡを１００℃で５分間熱した後、氷上で急速
に冷却することにより、本発明のポリペプチドをコード
するＤＮＡと該ＤＮＡの塩基配列と相補的な塩基配列を
有するＤＮＡを分離することができる。

【００６５】以下、本発明を詳細に説明する。１．ＤＮＡの調製 (ａ）ＤＧリパーゼホモログのｃＤＮＡのクローニング ヒトＤＧリパーゼのアミノ酸配列（配列番号４）に相同
性を有するヒト由来のアミノ酸配列を、ＳｗｉｓｓＰｒ
ｏｔ、ＰＩＲ、ＰＲＦ／ＳＥＱＤＢ、ＧｅｎＰｅｐｔ等
のアミノ酸配列データベースに対して、ＢＬＡＳＴある
いはＦＡＳＴＡを用いて検索する。このようにして得ら
れるアミノ酸配列として、ヒトの脳由来のＫＩＡＡ０６
５９ ｃＤＮＡ〔DNA Res. 5, 169 (1998)、ＧｅｎＢａ
ｎｋ登録番号：ＡＢ０１４５５９、配列番号６〕がコー
ドするＫＩＡＡ０６５９蛋白質のアミノ酸配列（ＰＲＦ
／ＳＥＱＤＢ番号：２４１７２８４ＢＥ、配列番号５）
をあげることができる。したがって、ＫＩＡＡ０６５９
ｃＤＮＡは配列番号４のアミノ酸配列とは別のアミノ
酸配列を有するＤＧリパーゼ（以下、ＤＧリパーゼホモ
ログと呼ぶ）をコードするｃＤＮＡと考えられるが、蛋
白質のコード領域の途中から下流の領域しか含まない非
完全長のｃＤＮＡである。完全長のｃＤＮＡの塩基配列
は、ＫＩＡＡ０６５９ ｃＤＮＡの塩基配列の情報をも
とに、ＫＩＡＡ０６５９ ｃＤＮＡよりも５’側の領域
を含むｃＤＮＡ断片を単離し、その塩基配列とＫＩＡＡ
０６５９ ｃＤＮＡの塩基配列から明らかにすることが
できる。

【００６６】ＫＩＡＡ０６５９ ｃＤＮＡよりも５’側
の領域を含むｃＤＮＡ断片は、ヒト脳由来のｃＤＮＡあ
るいはｃＤＮＡライブラリーをテンプレートにして、ｃ
ＤＮＡの５’端に付加したアダプターあるいはｃＤＮＡ
ライブラリーのベクターの塩基配列に特異的なプライマ
ーとＫＩＡＡ０６５９ ｃＤＮＡの塩基配列の一部分と
相補的な配列を有するＫＩＡＡ０６５９特異的なプライ
マーを用いてＰＣＲを行う、５’−ＲＡＣＥ（rapid am
plification of cDNA ends）法〔Proc. Natl.Acad. Sc
i. USA， 85, 8998 (1988)〕により単離することができ
る。ヒト脳ｃＤＮＡとしては、オリゴキャップ法〔Gen
e, 138, 171 (1994)〕により合成したヒト脳ｃＤＮＡ、
例えばキャップサイトｃＤＮＡｄＴ（Cap Site cDNA d
T、ニッポンジーン社）が好ましい。

【００６７】得られたｃＤＮＡ断片の塩基配列を、ＰＲ
ＩＳＭ３７００（アプライドバイオシステムズ社製）等
のＤＮＡシークエンサーを用いて、その塩基配列を解析
し、ＫＩＡＡ０６５９ ｃＤＮＡの塩基配列と合わせる
ことにより、ＫＩＡＡ０６５９の完全長ｃＤＮＡの塩基
配列（配列番号２）および該ｃＤＮＡがコードするＤＧ
リパーゼホモログのアミノ酸配列（配列番号１）を明ら
かにすることができる。得られたＫＩＡＡ０６５９の完
全長ｃＤＮＡの塩基配列をもとに設計したプライマーを
用いて、ヒト脳由来のｃＤＮＡをテンプレートにして、
ＤＧリパーゼホモログをコードするＤＮＡを、ＰＣＲに
より増幅し、単離することができる。プライマーとして
は、例えば配列番号３で表わされる塩基配列の１〜３０
番目に相当する塩基配列からなるＤＮＡおよび配列番号
３で表わされる塩基配列の３１００〜３１２９番目に相
当する塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡ、あ
るいは配列番号２で表わされる塩基配列の１〜３０番目
に相当する塩基配列からなるＤＮＡおよび配列番号２で
表わされる塩基配列の５７３１〜５７６０番目に相当す
る塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡをあげる
ことができる。

【００６８】以上のようにして得られるヒトのＤＧリパ
ーゼホモログをコードするＤＮＡとして、配列番号２で
表わされる塩基配列を有するＤＮＡ、配列番号３で表わ
される塩基配列（配列番号２で表わされる塩基配列の１
２２〜３２５０番目の配列に相当する）を有するＤＮＡ
をあげることができる。これらのＤＮＡがコードするヒ
トのＤＧリパーゼホモログとして配列番号１で表わされ
るアミノ酸配列を有するポリぺプチドをあげることがで
きる。また、（ｂ）に後述するように配列番号１５で表
わされる塩基配列（配列番号３で表わされる塩基配列の
５１４〜３１００番目の配列に相当する）を有するＤＮ
Ａも本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡに含まれ
る。配列番号１５で表わされる塩基配列がコードする、
配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するポリぺプ
チドはＤＧリパーゼ活性を有し、本発明のポリペプチド
に含まれる。

【００６９】ヒト以外の由来のＤＧリパーゼホモログを
コードするＤＮＡは、ヒト以外の生物のｃＤＮＡライブ
ラリーを作製し、以上のようにして得られたヒトＤＧリ
パーゼホモログをコードするＤＮＡをプローブにして、
ストリンジェントな条件下でプラークハイブリダイゼー
ションやコロニーハイブリダイゼーションを行い、ハイ
ブリダイズするポジティブなｃＤＮＡクローンとして得
ることができる。ｃＤＮＡライブラリーの作製およびプ
ラークハイブリダイゼーションやコロニーハイブリダイ
ゼーションはモレキュラークローニング第２版に記載の
方法により行うことができる。また、ＧｅｎＢａｎｋ等
の塩基配列データベース上から、配列番号２の塩基配列
あるいは配列番号２の塩基配列と相補的な塩基配列と連
続する１５０ｂｐ以上の領域で８０％以上の相同性を有
するヒト以外の生物のＤＮＡの配列を相同性検索によっ
て検索し、得られた塩基配列を有するＤＮＡ断片を、そ
の生物のｃＤＮＡをテンプレートにしたＰＣＲによって
増幅し単離する。この断片をプローブにしてその生物の
ｃＤＮＡライブラリーに対して、ストリンジェントな条
件下でプラークハイブリダイゼーションやコロニーハイ
ブリダイゼーションを行うことによっても、ハイブリダ
イズするポジティブなｃＤＮＡクローンとして得ること
ができる。得られたｃＤＮＡクローンが不完全長でＤＧ
リパーゼホモログ全体をコードしていないと考えられる
場合は、５’−ＲＡＣＥあるいは３’−ＲＡＣＥによ
り、さらに５’側、３’側の領域を含むｃＤＮＡ断片を
得ることができる。配列番号２の塩基配列あるいは配列
番号２の塩基配列と相補的な塩基配列と連続する１５０
ｂｐ以上の領域で８０％以上の相同性を有するヒト以外
の生物のＤＮＡの配列としては、マウス新生児肝臓ｃＤ
ＮＡクローンの配列（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番
号：ＢＧ０６１２６８）、マウスｃＤＮＡクローンの配
列（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＡＷ４５７２
８０）、マウスｃＤＮＡクローンの配列（ＧｅｎＢａｎ
ｋアクセッション番号：ＢＦ５３９６１１）、ニワトリ
脳下垂体／視床下部／松果体ｃＤＮＡクローンの配列
（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＢＩ３９４３３
５）、ブタｃＤＮＡクローンの配列（ＧｅｎＢａｎｋア
クセッション番号：ＢＧ８３３９９７）、ラットｃＤＮ
Ａクローンの配列（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番
号：ＡＩ０３０９８９）等をあげることができる。

【００７０】（ｂ)部分断片およびオリゴヌクレオチド
の調製 上述の方法で取得した本発明のＤＮＡの塩基配列情報に
基づいて、アプライド・バイオシステムズ（Applied Bi
osystems）社等のＤＮＡ合成機により、本発明のＤＮＡ
の連続した少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有す
る、センス・ヌクレオチド、アンチセンス・ヌクレオチ
ド等のオリゴヌクレオチドを調製することができる。

【００７１】また、本発明のＤＮＡの塩基配列の任意の
部分配列を選び、この部分配列の５’末端の２０塩基の
配列を有するＤＮＡおよび部分配列の３’端の２０塩基
の配列と相補的な配列を有するＤＮＡをＤＮＡ合成機を
用いて作製し、これらのＤＮＡをプライマーとして、配
列番号２で表わされる塩基配列を有するＤＮＡをテンプ
レートとしたＰＣＲ（polymerase chain reaction）に
より、選択した任意の部分配列を有するＤＮＡを増幅
し、単離することができる。ＰＣＲはモレキュラー・ク
ローニング第２版に記載の方法で行うことができる。ま
た、２ｋｂ以上の長い断片は、TaKaRa EX Taq、TaKaRa
LA Taq（いずれも宝酒造社製）等の耐熱性ＤＮＡポリメ
ラーゼを用いたＬＡ ＰＣＲにより、通常の、ＴａｑＤ
ＮＡポリメラーゼを用いるＰＣＲよりも効率的に増幅す
ることができる。また、本発明のＤＮＡを適当な制限酵
素で切断後、切断された断片を単離することにより、部
分断片を得ることもできる。

【００７２】また、これらの部分断片がコードするＤＧ
リパーゼの部分長ポリペプチドを、下記２．に記載した
方法に準じて、宿主細胞で発現させ、該部分長ポリペプ
チドがＤＧリパーゼ活性を有しているかを調べ、ＤＧリ
パーゼ活性を有していた場合は、この部分断片は本発明
のポリペプチドをコードするＤＮＡに含まれる。このよ
うな本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡである、
配列番号２で表される塩基配列を有するＤＮＡの部分断
片として、配列番号１５で表される塩基配列を有するＤ
ＮＡをあげることができる。配列番号１５で表される塩
基配列を有するＤＮＡは、配列番号１５で表わされる塩
基配列の１〜３０番目に相当する塩基配列からなるＤＮ
Ａおよび配列番号１５で表わされる塩基配列の２５８７
〜２６１６番目に相当する塩基配列と相補的な塩基配列
からなるＤＮＡをプライマーとしたＰＣＲにより、調製
することができる。

【００７３】該オリゴヌクレオチドとしては、本発明の
ＤＮＡの有する塩基配列中の連続した１５〜６０塩基、
好ましくは２０〜６０塩基と同じ配列を有するＤＮＡを
あげることができる。ＰＣＲのプライマーとして用いる
場合には、融解温度（Tm）および塩基数が極端に変わる
ことのない１組のオリゴクレオチドが好ましい。例え
ば、ＰＣＲのセンスプライマーとして用いることのでき
るセンス・ヌクレオチドとして、配列番号１１に示す塩
基配列（配列番号２の塩基配列の１４９６〜１５２１番
目に相当する）、配列番号１６に示す塩基配列（配列番
号２の塩基配列の６１９〜６４８番目に相当する）を有
するＤＮＡ、ＰＣＲのアンチセンスプライマーとして用
いることのできるアンチセンス・ヌクレオチドとして、
配列番号１２に示す塩基配列（配列番号２の塩基配列の
２２８４〜２３０８番目と相補的な塩基配列に相当す
る）を有するＤＮＡ、配列番号１７に示す塩基配列（配
列番号２の塩基配列の３２４４〜３２６８番目と相補的
な塩基配列に相当する）を有するＤＮＡをあげることが
できる。

【００７４】さらに、これらオリゴヌクレオチドの誘導
体（以下、オリゴヌクレオチド誘導体という）もオリゴ
ヌクレオチドとして利用することができる。該オリゴヌ
クレオチド誘導体としては、オリゴヌクレオチド中のリ
ン酸ジエステル結合がホスフォロチオエート結合に変換
されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド
中のリン酸ジエステル結合がＮ３’−Ｐ５’ホスフォア
ミデート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、
オリゴヌクレオチド中のリボースとリン酸ジエステル結
合がペプチド核酸結合に変換されたオリゴヌクレオチド
誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがＣ−５プロ
ピニルウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導
体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがＣ−５チアゾー
ルウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オ
リゴヌクレオチド中のシトシンがＣ−５プロピニルシト
シンで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌ
クレオチド中のシトシンがフェノキサジン修飾シトシン
（phenoxazine-modified cytosine)で置換されたオリゴ
ヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリボース
が２’−Ｏ−プロピルリボースで置換されたオリゴヌク
レオチド誘導体、あるいはオリゴヌクレオチド中のリボ
ースが２’−メトキシエトキシリボースで置換されたオ
リゴヌクレオチド誘導体等をあげることができる〔細胞
工学, 16, 1463 (1997)〕。

【００７５】２．本発明のポリペプチドの製造 以下に本発明のポリペプチドの製造法について述べる。

【００７６】本発明のポリペプチドは、モレキュラー・
クローニング第２版やカレント・プロトコールズ・イン
・モレキュラー・バイオロジー等に記載された方法等を
用い、例えば以下の方法により、本発明のＤＮＡを宿主
細胞中で発現させて、製造することができる。上記１．
の記載の方法で、本発明のポリペプチドをコードするＤ
ＮＡから、該ポリペプチドをコードする部分を含む適当
な長さのＤＮＡ断片を調製する。なお、配列番号１４で
表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドのようにＮ
末端がメチオニンでないポリペプチドを発現させる場合
は、ＤＮＡ断片をＰＣＲを用いて調製する際に、該ポリ
ペプチドをコードする領域の５’末端に開始コドン（AT
G）が付加するように、センスプライマーの設計を工夫
することが好ましい。

【００７７】また、必要に応じて、本発明のポリペプチ
ドをコードする部分の塩基配列を、宿主細胞の発現に最
適なコドンとなるように塩基を置換したＤＮＡを調製す
る。該ＤＮＡは本発明のポリペプチドの効率的製造に有
用である。該ＤＮＡ断片、または全長ｃＤＮＡを適当な
発現ベクターのプロモーターの下流に挿入することによ
り、組換え体ベクターを作製する。

【００７８】該組換え体ベクターを、該発現ベクターに
適合した宿主細胞に導入する。宿主細胞としては、細
菌、酵母、動物細胞、昆虫細胞、植物細胞等、目的とす
る遺伝子を発現できるものであればいずれも用いること
ができる。発現ベクターとしては、上記宿主細胞におい
て自立複製可能ないしは染色体中への組込が可能で、本
発明のポリペプチドをコードするＤＮＡを転写できる位
置にプロモーターを含有しているものが用いられる。

【００７９】細菌等の原核生物を宿主細胞として用いる
場合は、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡを含
有してなる組換えベクターは原核生物中で自立複製可能
であると同時に、プロモーター、リボソーム結合配列、
本発明のＤＮＡ、転写終結配列より構成されたベクター
であることが好ましい。プロモーターを制御する遺伝子
が含まれていてもよい。

【００８０】発現ベクターとしては、例えば、pKK223-3
〔アマシャム・バイオサイエンス（Amersham Bioscienc
es）社製〕、pSE280〔インビトロジェン（Invitrogen）
製〕、pKYP10（特開昭58-110600）、pKYP200〔Agric. B
iol. Chem., 48, 669 (1984)〕、pLSA1〔Agric. Biol.
Chem., 53, 277 (1989)〕、pGEL1〔Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 82, 4306 (1985)〕、pBluescript II SK(-)
〔ストラタジーン（STRATAGENE）社製〕、pTrs30〔Esch
erichia coli JM109/pTrS30 （FERM BP-5407）より調
製〕、pTrs32〔Escherichia coli JM109/pTrS32（FERM
BP-5408）より調製〕、pGHA2〔Escherichia coli IGHA2
（FERM BP-400）より調製、特開昭60-221091〕、pGKA2
〔Escherichia coli IGKA2（FERM BP-6798）より調製、
特開昭60-221091〕、pTerm2（US4686191、US4939094、U
S5160735）、pSupex、pUB110、pTP5、pC194、pEG400
〔J. Bacteriol., 172, 2392 (1990)〕、pGEX-5X-3（ア
マシャム・バイオサイエンス社製）、pET14〔ノバジェ
ン（Novagen）社製〕等をあげることができる。

【００８１】プロモーターとしては、宿主細胞中で機能
するものであればいかなるものでもよい。例えば、trp
プロモーター（P_trp）、lacプロモーター、P_Lプロモー
ター、P_Rプロモーター、T7プロモーター等の、大腸菌や
ファージ等に由来するプロモーターをあげることができ
る。またP_trpを２つ直列させたプロモーター（P_trp×
２）、tacプロモーター、lacT7プロモーター、let Iプ
ロモーターのように人為的に設計改変されたプロモータ
ー等も用いることができる。

【００８２】リボソーム結合配列であるシャイン−ダル
ガノ（Shine-Dalgarno）配列と開始コドンとの間を適当
な距離（例えば６〜１８塩基）に調節したプラスミドを
用いることが好ましい。本発明の組換えベクターにおい
ては、本発明のＤＮＡの発現には転写終結配列は必ずし
も必要ではないが、構造遺伝子の直下に転写終結配列を
配置することが好ましい。

【００８３】宿主細胞としては、エシェリヒア属、セラ
チア属、バチルス属、ブレビバクテリウム属、コリネバ
クテリウム属、ミクロバクテリウム属、シュードモナス
属等に属する微生物、例えば、Escherichia coli XL1-B
lue、Escherichia coli XL2-Blue、Escherichia coli D
H1、Escherichia coli MC1000、Escherichia coli KY32
76、Escherichia coli W1485、Escherichia coli JM10
9、Escherichia coli HB101、Escherichia coli No.4
9、Escherichia coli W3110、Escherichia coli GI69
8、Escherichia coli TB1、Serratia ficaria、Serrati
a fonticola、Serratia liquefaciens、Serratia marce
scens、Bacillus subtilis、Bacillus amyloliquefacie
ns、Brevibacterium ammoniagenes、Brevibacterium im
mariophilum ATCC14068、Brevibacterium saccharolyti
cum ATCC14066、Brevibacterium flavum ATCC14067、Br
evibacterium lactofermentum ATCC13869、Corynebacte
rium glutamicum ATCC13032、Corynebacterium glutami
cum ATCC13869、Corynebacterium acetoacidophilum AT
CC13870、Microbacterium ammoniaphilum ATCC15354、P
seudomonas putida 、Pseudomonas sp. D-0110等をあげ
ることができる。

【００８４】組換え体ベクターの導入方法としては、上
記宿主細胞へＤＮＡを導入する方法であればいずれも用
いることができ、例えば、カルシウムイオンを用いる方
法〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 2110 (197
2)〕、プロトプラスト法（特開昭63-2483942）、または
Gene, 17, 107 (1982)やMol. Gen. Genet., 168, 111
(1979)に記載の方法等をあげることができる。

【００８５】酵母を宿主細胞として用いる場合には、発
現ベクターとして、例えば、YEP13（ATCC37115）、YEp2
4（ATCC37051）、YCp50（ATCC37419）、pHS19、pHS15等
をあげることができる。プロモーターとしては、酵母菌
株中で発現できるものであればいずれのものを用いても
よく、例えば、ヘキソースキナーゼ等の解糖系の遺伝子
のプロモーター、PHO5プロモーター、PGKプロモータ
ー、GAPプロモーター、ADHプロモーター、gal 1プロモ
ーター、gal 10プロモーター、ヒートショックポリペプ
チドプロモーター、MFα1プロモーター、CUP 1プロモー
ター等をあげることができる。

【００８６】宿主細胞としては、Saccharomyces属、Sch
izosaccharomyces属、Kluyveromyces属、Trichosporon
属、Schwanniomyces属、Pichia属、Candida属等に属す
る微生物、例えば、Saccharomyces cerevisiae、Schizo
saccharomyces pombe、Kluyveromyces lactis、Trichos
poron pullulans、Schwanniomyces alluvius、Candidau
tilis等をあげることができる。

【００８７】組換えベクターの導入方法としては、酵母
にＤＮＡを導入する方法であればいずれも用いることが
でき、例えば、エレクトロポレーション法〔Methods En
zymol., 194, 182 (1990)〕、スフェロプラスト法〔Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA, 75, 1929 (1978)〕、酢酸リ
チウム法〔J. Bacteriol., 153, 163 (1983)〕、Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 75, 1929 (1978)記載の方法等
をあげることができる。

【００８８】動物細胞を宿主として用いる場合には、発
現ベクターとして、例えば、pcDNA3.1(+)（インビトロ
ジェン社製）、pcDNA3.1/Hygro(-)（インビトロジェン
社製）、pAGE107〔特開平３−２２、Cytotechnology,
3, 133 (1990)〕、pAS3-3（特開平２−２２７０７
５）、pCDM8〔Nature, 329, 840 (1987)〕、pREP4（イ
ンビトロジェン社製）、pAGE103〔J. Biochem., 101, 1
307 (1987)〕、pAGE210等をあげることができる。

【００８９】プロモーターとしては、動物細胞中で機能
するものであればいずれも用いることができ、例えば、
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）のＩＥ（immediate ea
rly）遺伝子のプロモーター、ＳＶ４０の初期プロモー
ター、レトロウイルスのプロモーター、メタロチオネイ
ンプロモーター、ヒートショックプロモーター、ＳＲα
プロモーター等をあげることができる。また、ヒトＣＭ
ＶのＩＥ遺伝子のエンハンサーをプロモーターと共に用
いてもよい。

【００９０】宿主細胞としては、ヒトの細胞であるナマ
ルバ（Namalwa）細胞、サルの細胞であるＣＯＳ−１細
胞（ＡＴＣＣ番号 ＣＲＬ−１６５０）、チャイニーズ
・ハムスターの細胞であるＣＨＯ細胞、ＨＢＴ５６３７
（特開昭６３−２９９）等をあげることができる。動物
細胞への組換えベクターの導入方法としては、動物細胞
にＤＮＡを導入する方法であればいずれも用いることが
でき、例えば、エレクトロポレーション法〔Cytotechno
logy, 3, 133 (1990)〕、リン酸カルシウム法（特開平
２−２２７０７５）、リポフェクション法〔Proc. Nat
l. Acad. Sci. USA, 84, 7413 (1987)〕、Virology, 5
2, 456 (1973)に記載の方法等をあげることができる。

【００９１】昆虫細胞を宿主として用いる場合には、例
えばカレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・
バイオロジー、Baculovirus Expression Vectors, A La
boratory Manual, W. H. Freeman and Company, New Yo
rk (1992)、Bio/Technology(N. Y.), 6, 47 (1988)等に
記載された方法によって、ポリペプチドを発現すること
ができる。

【００９２】即ち、組換え遺伝子導入ベクターおよびバ
キュロウイルスを昆虫細胞に共導入して昆虫細胞培養上
清中に組換えウイルスを得た後、さらに組換えウイルス
を昆虫細胞に感染させ、ポリペプチドを発現させること
ができる。該方法において用いられる遺伝子導入ベクタ
ーとしては、例えば、pVL1392、pVL1393、pBlueBacIII
（共にインビトロジェン社製）等をあげることができ
る。

【００９３】バキュロウイルスとしては、例えば、夜盗
蛾科昆虫に感染するウイルスであるアウトグラファ・カ
リフォルニカ・ヌクレアー・ポリヘドロシス・ウイルス
(Autographa californica nuclear polyhedrosis viru
s)等を用いることができる。昆虫細胞としては、Spodop
tera frugiperdaの卵巣細胞であるSf9、Sf21〔共にBacu
lovirus Expression Vectors, A Laboratory Manual,
W. H. Freeman and Company, New York (1992)〕、Tric
hoplusia niの卵巣細胞であるHigh 5（インビトロジェ
ン社製）等を用いることができる。

【００９４】組換えウイルスを調製するための、昆虫細
胞への上記組換え遺伝子導入ベクターと上記バキュロウ
イルスの共導入方法としては、例えば、リン酸カルシウ
ム法（特開平２−２２７０７５）、リポフェクション法
〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413 (1987)〕等
をあげることができる。植物細胞を宿主細胞として用い
る場合には、発現ベクターとして、例えば、Tiプラスミ
ド、タバコモザイクウイルスベクター等をあげることが
できる。

【００９５】プロモーターとしては、植物細胞中で発現
できるものであればいずれのものを用いてもよく、例え
ば、カリフラワーモザイクウイルスの３５Ｓプロモータ
ー、イネアクチン１プロモーター等をあげることができ
る。宿主細胞としては、タバコ、ジャガイモ、トマト、
ニンジン、ダイズ、アブラナ、アルファルファ、イネ、
コムギ、オオムギ等の植物細胞等をあげることができ
る。

【００９６】組換えベクターの導入方法としては、植物
細胞にＤＮＡを導入する方法であればいずれも用いるこ
とができ、例えば、アグロバクテリウム（Agrobacteriu
m）（特開昭５９−１４０８８５、特開昭６０−７００
８０、ＷＯ９４／００９７７）、エレクトロポレーショ
ン法（特開昭６０−２５１８８７）、パーティクルガン
（遺伝子銃）を用いる方法（特許第２６０６８５６、特
許第２５１７８１３）等をあげることができる。

【００９７】遺伝子を導入した植物の細胞や器官は、ジ
ャーファーメンターを用いて大量培養することができ
る。また、遺伝子導入した植物細胞を再分化させること
により、遺伝子が導入された植物個体（トランスジェニ
ック植物）を造成することもできる。動物個体を用いて
本発明のポリペプチドを生産することもできる。例え
ば、公知の方法〔Am. J. .Clin. Nutr., 63, 639S (199
6)、Am. J. Clin. Nutr., 63,627S (1996)、Bio/Techno
logy (N. Y.), 9, 830 (1991)〕に準じて、遺伝子を導
入した動物中に本発明のポリペプチドを生産することが
できる。

【００９８】プロモーターとしては、動物で発現できる
ものであればいずれも用いることができるが、例えば、
乳腺細胞特異的なプロモーターであるαカゼインプロモ
ーター、βカゼインプロモーター、βラクトグロブリン
プロモーター、ホエー酸性プロテインプロモーター等が
好適に用いられる。遺伝子の発現方法としては、直接発
現以外に、モレキュラー・クローニング第２版に記載さ
れている方法等に準じて、分泌生産、融合タンパク質発
現等を行うことができる。

【００９９】酵母、動物細胞、昆虫細胞または植物細胞
により発現させた場合には、糖あるいは糖鎖が付加され
たポリペプチドを得ることができる。以上のようにして
得られる本発明の形質転換体を培地に培養し、培養物中
に本発明のポリペプチドを生成蓄積させ、該培養物から
採取することにより、本発明のポリペプチドを製造する
ことができる。

【０１００】本発明の形質転換体を培地に培養する方法
は、宿主の培養に用いられる通常の方法に従って行うこ
とができる。本発明の形質転換体が大腸菌等の原核生物
あるいは酵母等の真核生物を宿主として得られた形質転
換体である場合、該形質転換体を培養する培地として、
該形質転換体が資化し得る炭素源、窒素源、無機塩類等
を含有し、該形質転換体の培養を効率的に行える培地で
あれば天然培地、合成培地のいずれを用いてもよい。

【０１０１】炭素源としては、該形質転換体が資化し得
るものであればよく、グルコース、フラクトース、スク
ロース、これらを含有する糖蜜、デンプンあるいはデン
プン加水分解物等の炭水化物、酢酸、プロピオン酸等の
有機酸、エタノール、プロパノール等のアルコール類等
を用いることができる。窒素源としては、アンモニア、
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム等の無機酸もしくは有機酸のア
ンモニウム塩、その他の含窒素化合物、ならびに、ペプ
トン、肉エキス、酵母エキス、コーンスチープリカー、
カゼイン加水分解物、大豆粕および大豆粕加水分解物、
各種発酵菌体およびその消化物等を用いることができ
る。

【０１０２】無機塩としては、リン酸二水素カリウム、
リン酸水素二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグ
ネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガ
ン、硫酸銅、炭酸カルシウム等を用いることができる。
培養は、振盪培養または深部通気攪拌培養等の好気的条
件下で行う。培養温度は１５〜４０℃がよく、培養時間
は、通常１６時間〜７日間である。培養中のｐＨは３．
０〜９．０に保持することが好ましい。ｐＨの調整は、
無機または有機の酸、アルカリ溶液、尿素、炭酸カルシ
ウム、アンモニア等を用いて行う。

【０１０３】また、培養中必要に応じて、アンピシリン
やテトラサイクリン等の抗生物質を培地に添加してもよ
い。プロモーターとして誘導性のプロモーターを用いた
組換えベクターで形質転換した微生物を培養するときに
は、必要に応じてインデューサーを培地に添加してもよ
い。例えば、lacプロモーターを用いた組換えベクター
で形質転換した微生物を培養するときにはイソプロピル
−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド等を、trpプロモー
ターを用いた組換えベクターで形質転換した微生物を培
養するときにはインドールアクリル酸等を培地に添加し
てもよい。

【０１０４】動物細胞を宿主として得られた形質転換体
を培養する培地としては、一般に使用されているＲＰＭ
Ｉ１６４０培地〔J. A. M. A., 199, 519 (1967)〕、イ
ーグル（Eagle）のＭＥＭ培地〔Science, 122, 501 (19
52)〕、ダルベッコ改変ＭＥＭ培地〔Virology, 8, 396
(1959)〕、１９９培地〔Proc. Soc. Exp. Biol. Med.,
73, 1 (1950)〕またはこれら培地に牛胎児血清等を添加
した培地等を用いることができる。

【０１０５】培養は、通常ｐＨ６〜８、３０〜４０℃、
５％ＣＯ₂存在下等の条件下で１〜７日間行う。また、
培養中必要に応じて、カナマイシン、ペニシリン等の抗
生物質を培地に添加してもよい。昆虫細胞を宿主として
得られた形質転換体を培養する培地としては、一般に使
用されているTNM-FH培地〔Cell Culture, Academic Pre
ss, 457-460 (1979)〕、Sf-900 II SFM培地（インビト
ロジェン社製）、ExCell400、ExCell405〔いずれもJRH
バイオサイエンシーズ（JRH Biosciences）社製〕、グ
レース（Grace）のインセクト培地〔Nature, 195, 788
(1962)〕等を用いることができる。

【０１０６】培養は、通常ｐＨ６〜７、２５〜３０℃等
の条件下で、１〜５日間行う。また、培養中必要に応じ
て、ゲンタマイシン等の抗生物質を培地に添加してもよ
い。植物細胞を宿主として得られた形質転換体は、細胞
として、または植物の細胞や器官に分化させて培養する
ことができる。該形質転換体を培養する培地としては、
一般に使用されているムラシゲ・アンド・スクーグ培
地、ホワイト(White)培地、またはこれら培地にオーキ
シン、サイトカイニン等、植物ホルモンを添加した培地
等を用いることができる。

【０１０７】培養は、通常ｐＨ５〜９、２０〜４０℃の
条件下で３〜６０日間行う。 また、培養中必要に応じて、カナマイシン、ハイグロマ
イシン等の抗生物質を培地に添加してもよい。上記のと
おり、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡを組み
込んだ組換え体ベクターを保有する微生物、動物細胞、
あるいは植物細胞由来の形質転換体を、通常の培養方法
に従って培養し、該ポリペプチドを生成蓄積させ、該培
養物より該ポリペプチドを採取することにより、該ポリ
ペプチドを製造することができる。

【０１０８】遺伝子の発現方法としては、直接発現以外
に、モレキュラー・クローニング第２版に記載されてい
る方法等に準じて、分泌生産、融合ポリペプチド発現等
を行うことができる。本発明のポリペプチドの生産方法
としては、宿主細胞内に生産させる方法、宿主細胞外に
分泌させる方法、あるいは宿主細胞外膜上に生産させる
方法があり、使用する宿主細胞や、生産させるポリペプ
チドの構造を変えることにより、該方法を選択すること
ができる。

【０１０９】本発明のポリペプチドが宿主細胞内あるい
は宿主細胞外膜上に生産される場合、ポールソンらの方
法〔J. Biol. Chem., 264, 17619 (1989)〕、ロウらの
方法〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 8227 (198
9)、Genes Develop., 4, 1288（1990)〕、または特開平
５−３３６９６３、ＷＯ９４／２３０２１等に記載の方
法を準用することにより、該ポリペプチドを宿主細胞外
に積極的に分泌させることができる。

【０１１０】即ち、遺伝子組換えの手法を用いて、本発
明のポリペプチドの活性部位を含むポリペプチドの手前
にシグナルペプチドを付加した形で発現させることによ
り、本発明のポリペプチドを宿主細胞外に積極的に分泌
させることができる。また、特開平２−２２７０７５に
記載されている方法に準じて、ジヒドロ葉酸還元酵素遺
伝子等を用いた遺伝子増幅系を利用して生産量を上昇さ
せることもできる。

【０１１１】上記のとおり、本発明のポリペプチドをコ
ードするＤＮＡを組み込んだ組換え体ベクターを保有す
る微生物、動物細胞、あるいは植物細胞由来の形質転換
体を、通常の培養方法に従って培養し、該ポリペプチド
を生成蓄積させ、該培養物より該ポリペプチドを採取す
ることにより、該ポリペプチドを製造することができ
る。

【０１１２】さらに、遺伝子導入した動物または植物の
細胞を再分化させることにより、遺伝子が導入された動
物個体（トランスジェニック非ヒト動物）または植物個
体（トランスジェニック植物）を造成し、これらの個体
を用いて本発明のポリペプチドを製造することもでき
る。形質転換体が動物個体または植物個体の場合は、通
常の方法に従って、飼育または栽培し、該ポリペプチド
を生成蓄積させ、該動物個体または植物個体より該ポリ
ペプチドを採取することにより、該ポリペプチドを製造
することができる。

【０１１３】動物個体を用いて本発明のポリペプチドを
製造する方法としては、例えば公知の方法〔Am. J. Cli
n. Nutr., 63, 639S (1996)、Am. J. Clin. Nutr., 63,
627S (1996)、Bio/Technology (N. Y.), 9, 830 (199
1)〕に準じて遺伝子を導入して造成した動物中に本発明
のポリペプチドを生産する方法があげられる。動物個体
の場合は、例えば、本発明のポリペプチドをコードする
ＤＮＡを導入したトランスジェニック非ヒト動物を飼育
し、該ポリペプチドを該動物中に生成・蓄積させ、該動
物中より該ポリペプチドを採取することにより、該ポリ
ペプチドを製造することができる。該動物中の生成・蓄
積場所としては、例えば、該動物のミルク（特開昭６３
−３０９１９２）、卵等をあげることができる。この際
に用いられるプロモーターとしては、動物で発現できる
ものであればいずれも用いることができるが、例えば、
乳腺細胞特異的なプロモーターであるαカゼインプロモ
ーター、βカゼインプロモーター、βラクトグロブリン
プロモーター、ホエー酸性プロテインプロモーター等が
好適に用いられる。

【０１１４】植物個体を用いて本発明のポリペプチドを
製造する方法としては、例えば本発明のポリペプチドを
コードするＤＮＡを導入したトランスジェニック植物を
公知の方法〔組織培養, 20 (1994)、組織培養, 21 (199
5)、Trends Biotechnol., 15, 45 (1997)〕に準じて栽
培し、該ポリペプチドを該植物中に生成・蓄積させ、該
植物中より該ポリペプチドを採取することにより、該ポ
リペプチドを生産する方法があげられる。

【０１１５】本発明のポリペプチドの製造法として他
に、本発明のＤＮＡを用いたイン・ビトロ（in vitro）
での転写・翻訳系による製造法がある。イン・ビトロ転
写・翻訳系とは、無細胞システムを用いてＤＮＡからｍ
ＲＮＡへの転写、およびｍＲＮＡから蛋白質への翻訳を
行うことによりポリペプチドを生産する系のことであ
り、目的のＤＮＡまたは目的のｍＲＮＡから目的のポリ
ペプチドを生産できる無細胞システムであればどのよう
なものでも用いることができる。代表的な無細胞翻訳系
として、例えば、ウサギの網状赤血球溶解液(rabbit re
ticulocyte lysate)や小麦胚芽抽出液(wheat germ lysa
te)を用いた系などがあげられる。イン・ビトロ転写・
翻訳系は各社からキットが販売されており、市販のキッ
トを用いてポリペプチドを比較的容易に製造できるよう
になっている。市販キットとして例えば、In Vitro Exp
ress ^TM Translation Kit(スタラタジーン社製)があげ
られる。また、本発明のポリペプチドは、公知の方法
〔J. Biomol. NMR, 6, 129 (1995)、Science, 242, 116
2 (1988)、J. Biochem., 110, 166 (1991)〕に準じたイ
ン・ビトロ転写・翻訳系を用いて生産することもでき
る。

【０１１６】本発明の形質転換体により製造されたポリ
ペプチドを単離精製するためには、通常の酵素の単離精
製法を用いることができる。例えば本発明のポリペプチ
ドが、細胞内に溶解状態で発現した場合には、培養終了
後、細胞を遠心分離により回収し、水系緩衝液にけん濁
後、超音波破砕機、フレンチプレス、マントンガウリン
ホモゲナイザー、ダイノミル等により細胞を破砕し、無
細胞抽出液を得る。該無細胞抽出液を遠心分離すること
により得られる上清から、通常の酵素の単離精製法、即
ち、溶媒抽出法、硫安等による塩析法、脱塩法、有機溶
媒による沈殿法、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）−
セファロース、DIAION HPA-75（三菱化学社製）等のレ
ジンを用いた陰イオン交換クロマトグラフィー法、Ｓ−
セファロース（Sepharose） ＦＦ（アマシャム・バイオ
サイエンス社製）等のレジンを用いた陽イオン交換クロ
マトグラフィー法、ブチルセファロース、フェニルセフ
ァロース等のレジンを用いた疎水性クロマトグラフィー
法、分子篩を用いたゲルろ過法、アフィニティークロマ
トグラフィー法、クロマトフォーカシング法、等電点電
気泳動等の電気泳動法等の手法を単独あるいは組み合わ
せて用い、精製標品を得ることができる。

【０１１７】また、該ポリペプチドが細胞内に不溶体を
形成して発現した場合は、同様に細胞を回収後、破砕
し、遠心分離を行うことにより、沈殿画分としてポリペ
プチドの不溶体を回収する。回収したポリペプチドの不
溶体を蛋白質変性剤で可溶化する。該可溶化液を希釈ま
たは透析し、該可溶化液中の蛋白質変性剤の濃度を下げ
ることにより、該ポリペプチドを正常な立体構造に戻
す。該操作の後、上記と同様の単離精製法により該ポリ
ペプチドの精製標品を得ることができる。

【０１１８】本発明のポリペプチド、あるいは該ポリペ
プチドに糖鎖の付加されたポリペプチド等の誘導体が細
胞外に分泌された場合には、培養上清に該ポリペプチド
あるいは該ポリペプチドの誘導体を回収することができ
る。即ち、該培養物を上記と同様の遠心分離等の手法に
より処理することにより培養上清を取得し、該培養上清
から、上記と同様の単離精製法を用いることにより、精
製標品を得ることができる。

【０１１９】このようにして取得されるポリペプチドと
して、例えば、配列番号１で表されるアミノ酸配列を有
するポリペプチドをあげることができる。また、本発明
のポリペプチドは、Fmoc法（フルオレニルメチルオキシ
カルボニル法）、tBoc法（ｔ-ブチルオキシカルボニル
法）等の化学合成法によっても製造することができる。
また、アドバンスト・ケムテック（Advanced ChemTec
h）社、アプライド・バイオシステムズ（Applied Biosy
stems）社、島津製作所等のペプチド合成機を利用して
化学合成することもできる。

【０１２０】以上のようにして得られたポリペプチドが
ＤＧリパーゼ活性を有していることは、¹⁴Ｃ標識したス
テアロイル側鎖もつ［¹⁴Ｃ］ステアロイルＤＧを基質に
した既報〔J. Biochem. 125, 1077 (1999)〕の方法によ
り調べることができる。

【０１２１】３．本発明のポリペプチドを認識する抗体
の調製 本発明のポリペプチドまたは該ポリペプチドの部分断片
ポリペプチドの精製標品、あるいは本発明のポリペプチ
ドの一部のアミノ酸配列を有するペプチドを抗原として
用いることにより、ポリクローナル抗体、モノクローナ
ル抗体等、本発明のポリペプチドを認識する抗体を作製
することができる。

【０１２２】（１）ポリクローナル抗体の作製 本発明のポリペプチドまたは該ポリペプチドの部分断片
ポリペプチドの精製標品、あるいは本発明のポリペプチ
ドの一部のアミノ酸配列を有するペプチドを抗原として
用い、動物に投与することにより本発明のポリペプチド
を認識するポリクローナル抗体を作製することができ
る。

【０１２３】投与する動物として、ウサギ、ヤギ、ラッ
ト、マウス、ハムスター等を用いることができる。該抗
原の投与量は動物1匹当たり５０〜１００μｇ好まし
い。ペプチドを用いる場合は、ペプチドをキーホール・
リンペット・ヘモシアニン（keyhole limpet haemocyan
in；以下、ＫＬＨと略す。）や牛チログロブリン等のキ
ャリア蛋白に共有結合させたものを抗原とするのが望ま
しい。抗原とするペプチドは、ペプチド合成機で合成す
ることができる。

【０１２４】該抗原の投与は、１回目の投与の後１〜２
週間おきに３〜１０回行う。各投与後、３〜７日目に眼
底静脈叢より採血し、該血清が免疫に用いた抗原と反応
することを酵素免疫測定法〔酵素免疫測定法（ELISA
法）：医学書院刊（1976年）、Antibodies-A Laborator
y Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)〕等
で確認する。

【０１２５】免疫に用いた抗原に対し、その血清が充分
な抗体価を示した非ヒト哺乳動物より血清を取得し、該
血清を分離、精製することによりポリクローナル抗体を
取得することができる。分離、精製する方法としては、
遠心分離、４０〜５０％飽和硫酸アンモニウムによる塩
析、カプリル酸沈殿〔Antibodies, A Laboratory manua
l, Cold SpringHarbor Laboratory (1988)〕、またはＤ
ＥＡＥ−セファロースカラム、陰イオン交換カラム、プ
ロテインＡまたはＧ−カラムあるいはゲル濾過カラム等
を用いるクロマトグラフィー等を、単独または組み合わ
せて処理する方法があげられる。

【０１２６】（２）モノクローナル抗体の作製 （ａ）抗体産生細胞の調製 免疫に用いた本発明のポリペプチドの部分断片ポリペプ
チドに対し、その血清が十分な抗体価を示したラットを
抗体産生細胞の供給源として供する。

【０１２７】該抗体価を示したラットに抗原物質を最終
投与した後３〜７日目に、脾臓を摘出する。該脾臓をＭ
ＥＭ培地中で細断し、ピンセットでほぐし、１，２００
ｒｐｍで５分間遠心分離した後、上清を捨てる。得られ
た沈殿画分の脾細胞をトリス−塩化アンモニウム緩衝液
（ｐＨ７．６５）で１〜２分間処理し赤血球を除去した
後、ＭＥＭ培地で３回洗浄し、得られた脾細胞を抗体産
生細胞として用いる。

【０１２８】(ｂ）骨髄腫細胞の調製 骨髄腫細胞としては、マウスまたはラットから取得した
株化細胞を使用する。例えば、８−アザグアニン耐性マ
ウス（BALB/c由来）骨髄腫細胞株P3-X63Ag8-U1〔Curr.
Topics. Microbiol. Immunol., 81, 1 (1978)、Eur. J.
Immunol., 6,511 (1976)〕、SP2/0-Ag14〔Nature, 27
6, 269 (1978)〕、P3-X63-Ag8653〔J. Immunol., 123,
1548 (1979)〕、P3-X63-Ag8〔Nature, 256, 495 (197
5)〕等を用いることができる。これらの細胞株は、８−
アザグアニン培地〔ＲＰＭＩ１６４０培地にグルタミン
（１．５ｍｍｏｌ／ｌ）、２−メルカプトエタノール
（５×１０^-5ｍｏｌ／ｌ）、ゲンタマイシン（１０μｇ
／ｍｌ）および牛胎児血清（ＣＳＬ社製、１０％）を加
えた培地（以下、正常培地という）に、さらに８−アザ
グアニン（１５μｇ／ｍｌ）を加えた培地〕で継代する
が、細胞融合の３〜４日前に正常培地で培養し、融合に
は該細胞を２×１０⁷個以上用いる。]

【０１２９】(ｃ）ハイブリドーマの作製 (ａ）で取得した抗体産生細胞と（ｂ）で取得した骨髄
腫細胞をＭＥＭ培地またはＰＢＳ（リン酸二ナトリウム
１．８３ｇ、リン酸一カリウム０．２１ｇ、食塩７．６
５ｇ、蒸留水１リットル、ｐＨ７．２）でよく洗浄し、
細胞数が、抗体産生細胞：骨髄腫細胞＝５〜１０：１に
なるよう混合し、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離した
後、上清を捨てる。

【０１３０】得られた沈殿画分の細胞群をよくほぐし、
該細胞群に、攪拌しながら、３７℃で、１０⁸抗体産生
細胞あたり、ポリエチレングライコール−１０００（Ｐ
ＥＧ−１０００）２ｇ、ＭＥＭ培地２ｍｌおよびジメチ
ルスルホキシド０．７ｍｌを混合した溶液を０．２〜１
ｍｌ添加し、さらに１〜２分間毎にＭＥＭ培地１〜２ｍ
ｌを数回添加する。

【０１３１】添加後、ＭＥＭ培地を加えて全量が５０ｍ
ｌになるように調製する。該調製液を９００ｒｐｍで５
分間遠心分離後、上清を捨てる。得られた沈殿画分の細
胞を、ゆるやかにほぐした後、メスピペットによる吸込
み、吹出しでゆるやかにＨＡＴ培地〔正常培地にヒポキ
サンチン（１０^-4ｍｏｌ／ｌ）、チミジン（１．５×１
０^-5ｍｏｌ／ｌ）およびアミノプテリン（４×１０^-7ｍ
ｏｌ／ｌ）を加えた培地〕１００ｍｌ中に懸濁する。

【０１３２】該懸濁液を９６ウェル培養用プレートに１
００μｌ／ウェルずつ分注し、５％ＣＯ₂インキュベー
ター中、３７℃で７〜１４日間培養する。培養後、培養
上清の一部をとりアンチボディイズ〔Antibodies, A La
boratorymanual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cha
pter 14 (1988)〕等に述べられている酵素免疫測定法に
より、本発明のポリペプチドの部分断片ポリペプチドに
特異的に反応するハイブリドーマを選択する。

【０１３３】酵素免疫測定法の具体例として、以下の方
法をあげることができる。免疫の際、抗原に用いた本発
明のポリペプチドの部分断片ポリペプチドを適当なプレ
ートにコートし、ハイブリドーマ培養上清もしくは後述
の（ｄ）で得られる精製抗体を第一抗体として反応さ
せ、さらに第二抗体としてビオチン、酵素、化学発光物
質あるいは放射線化合物等で標識した抗ラットまたは抗
マウスイムノグロブリン抗体を反応させた後に標識物質
に応じた反応を行い、本発明のポリペプチドに特異的に
反応するものを本発明のモノクローナル抗体を生産する
ハイブリドーマとして選択する。

【０１３４】該ハイブリドーマを用いて、限界希釈法に
よりクローニングを２回繰り返し〔１回目は、ＨＴ培地
（ＨＡＴ培地からアミノプテリンを除いた培地）、２回
目は、正常培地を使用する〕、安定して強い抗体価の認
められたものを本発明のモノクローナル抗体を産生する
ハイブリドーマ株として選択する。 （ｄ）モノクローナル抗体の調製 プリスタン処理〔２，６，１０，１４−テトラメチルペ
ンタデカン（Pristane）０．５ｍｌを腹腔内投与し、２
週間飼育する〕した８〜１０週令のマウスまたはヌード
マウスに、（ｃ）で取得した本発明のポリペプチドモノ
クローナル抗体産生ハイブリドーマ細胞５〜２０×１０
⁶細胞／匹を腹腔内に注射する。１０〜２１日間でハイ
ブリドーマは腹水癌化する。

【０１３５】該腹水癌化したマウスから腹水を採取し、
３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して固形分を除去す
る。得られた上清より、ポリクローナル抗体で用いた方
法と同様の方法でモノクローナル抗体を精製、取得する
ことができる。抗体のサブクラスの決定は、マウスモノ
クローナル抗体タイピングキットまたはラットモノクロ
ーナル抗体タイピングキットを用いて行う。ポリペプチ
ド量は、ローリー法あるいは280nmでの吸光度より算出
する。

【０１３６】４．本発明の抗体の利用 （１）本発明のポリペプチドの検出および定量 本発明のポリペプチドを特異的に認識する抗体を用い、
抗原抗体反応を行わせることにより、本発明のポリペプ
チドまたは該ポリペプチドを含む細胞または組織を免疫
学的に検出することができる。該検出法は、うつ病、不
安、パーキンソン病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファ
ナ依存症、喘息、過食、肥満、アルコール依存症等の本
発明のポリペプチドの発現量が増加している疾患あるい
は、精神分裂病、痛み、脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化
症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫
疾患、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、悪
性腫瘍等の本発明のポリペプチドの発現量が減少してい
る疾患の診断に利用することができる。また、該検出方
法は、本発明のポリペプチドの定量にも用いられる。

【０１３７】免疫学的に検出および定量する方法として
は、蛍光抗体法、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）、放
射性物質標識免疫抗体法（ＲＩＡ）、免疫組織染色法や
免疫細胞染色法、ウェスタンブロッティング法、ドット
ブロッティング法、免疫沈降法、サンドイッチＥＬＩＳ
Ａ法〔単クローン抗体実験マニュアル（講談社サイエン
ティフィック）(1987)、続生化学実験講座５, 免疫生化
学研究法（東京化学同人）(1986)〕等があげられる。

【０１３８】蛍光抗体法とは、本発明のポリペプチドを
細胞内あるいは細胞外に発現した微生物、動物細胞ある
いは昆虫細胞または組織に、本発明の抗体を反応させ、
さらにフルオレシン・イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）
などの蛍光物質でラベルした抗マウスＩｇＧ抗体あるい
はその断片を反応させた後、蛍光色素をフローサイトメ
ーターで測定する方法である。

【０１３９】酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）とは、該
ポリペプチドを細胞内あるいは細胞外に発現した微生
物、動物細胞あるいは昆虫細胞または組織に、本発明の
抗体を反応させ、さらにペルオキシダーゼ、ビオチンな
どの酵素標識などを施した抗マウスＩｇＧ抗体あるいは
結合断片を反応させた後、発色色素を吸光光度計で測定
する方法である。

【０１４０】放射性物質標識免疫抗体法（ＲＩＡ）と
は、該ポリペプチドを細胞内あるいは細胞外に発現した
微生物、動物細胞あるいは昆虫細胞または組織に、本発
明の抗体を反応させ、さらに放射線標識を施した抗マウ
スＩｇＧ抗体あるいはその断片を反応させた後、シンチ
レーションカウンターなどで測定する方法である。免疫
細胞染色法、免疫組織染色法とは、該ポリペプチドを細
胞内あるいは細胞外に発現した微生物、動物細胞あるい
は昆虫細胞または組織に、該ポリペプチドを特異的に認
識する抗体を反応させ、さらにＦＩＴＣなどの蛍光物
質、ペルオキシダーゼ、ビオチンなどの酵素標識を施し
た抗マウスＩｇＧ抗体あるいはその断片を反応させた
後、顕微鏡を用いて観察する方法である。

【０１４１】ウェスタンブロッティング法とは、該ポリ
ペプチドを細胞内あるいは細胞外に発現した微生物、動
物細胞あるいは昆虫細胞または組織の抽出液をＳＤＳ−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動〔Antibodies- A Labo
ratory Manual, Cold SpringHarbor Laboratory,（198
8）〕で分画した後、該ゲルをＰＶＤＦ膜あるいはニト
ロセルロース膜にブロッティングし、該膜に本発明の該
ポリペプチドを特異的に認識する抗体を反応させ、さら
にＦＩＴＣなどの蛍光物質、ペルオキシダーゼ、ビオチ
ンなどの酵素標識を施した抗マウスＩｇＧ抗体あるいは
その断片を反応させた後、標識物質に応じた反応を行う
方法である。

【０１４２】ドットブロッティング法とは、該ポリペプ
チドを細胞内あるいは細胞外に発現した微生物、動物細
胞あるいは昆虫細胞または組織の抽出液をニトロセルロ
ース膜にブロッティングし、該膜に本発明の抗体を反応
させ、さらにＦＩＴＣなどの蛍光物質、ペルオキシダー
ゼ、ビオチンなどの酵素標識を施した抗マウスＩｇＧ抗
体あるいは結合断片を反応させた後、標識物質に応じた
反応を行う方法である。

【０１４３】免疫沈降法とは、本発明のポリペプチドを
細胞内あるいは細胞外に発現した微生物、動物細胞ある
いは昆虫細胞または組織の抽出液を該ポリペプチドを特
異的に認識する抗体と反応させた後、プロテインＧ−セ
ファロース等イムノグロブリンに特異的な結合能を有す
る担体を加えて抗原抗体複合体を沈降させる方法であ
る。

【０１４４】サンドイッチＥＬＩＳＡ法とは、本発明の
ポリペプチドを特異的に認識する抗体を吸着させたプレ
ートに、該ポリペプチドを細胞内あるいは細胞外に発現
した微生物、動物細胞あるいは昆虫細胞または組織の抽
出液を反応させた後、ＦＩＴＣなどの蛍光物質、または
ペルオキシダーゼやビオチンなどの酵素で標識した本発
明のポリペプチドを特異的に認識する抗体（上記抗体と
は抗原認識部位が異なる）を反応させ、標識物質に応じ
た反応を行う方法である。

【０１４５】（２）診断および治療への利用 ヒト生体試料ならびヒト初代培養細胞での、本発明のポ
リペプチドの発現量の変化ならびに発現している該ポリ
ペプチドの構造変化を同定することは、将来、疾患を発
症する危険性や既に発症した疾患の原因を知る上で有用
である。本発明の抗体を用いて、本発明のポリペプチド
の発現量の変化ならびに発現している該ポリペプチドの
構造変化を検出し、うつ病、不安、パーキンソン病、幻
覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘息、過食、
肥満、アルコール依存症等の本発明のポリペプチドの発
現量が増加している疾患あるいは、精神分裂病、痛み、
脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、
乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫疾患、心筋梗塞、脳梗
塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、悪性腫瘍等の本発明のポ
リペプチドの発現量が減少している疾患の診断を行うこ
とができる。

【０１４６】該ポリペプチドの発現量や構造変化を検出
して診断する方法としては、上記の蛍光抗体法、酵素免
疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）、放射性物質標識免疫抗体法
（ＲＩＡ）、免疫組織染色法や免疫細胞染色法、ウェス
タンブロッティング法、ドットブロッティング法、免疫
沈降法、サンドイッチＥＬＩＳＡ法等があげられる。上
記方法による診断に供する検体としては、うつ病、不
安、パーキンソン病、精神分裂病、幻覚、痴呆、記憶障
害、マリファナ依存症、痛み、脳挫傷、脊髄損傷、多発
性硬化症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎症性大腸炎、自
己免疫疾患、喘息、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔吐、
食欲不振、過食、肥満、アルコール依存症、悪性腫瘍
等、本発明のポリペプチドの発現変動が伴う疾患の患者
より取得した組織、血液、血清、尿、便、唾液等の生体
試料そのものあるいは、該生体試料から取得した細胞な
らびに細胞抽出液が用いられる。また、生体試料から取
得した組織を、パラフィンあるいはクリオスタット切片
として単離したものを用いることもできる。

【０１４７】免疫学的に検出する方法としては、マイク
ロタイタープレートを用いるＥＬＩＳＡ法・蛍光抗体
法、ウェスタンブロッティング法、免疫組織染色法等が
あげられる。免疫学的に定量する方法としては、液相中
で本発明のポリペプチドと反応する抗体のうちエピトー
プが異なる2種類のモノクローナル抗体を用いたサンド
イッチＥＬＩＳＡ法、^１２５Ｉ等の放射性同位体で標識
した本発明のポリペプチドと本発明のポリペプチドを認
識する抗体とを用いるラジオイムノアッセイ法等があげ
られる。

【０１４８】本発明のポリペプチドの発現量の変化を伴
う疾患は以下のようにして診断できる。まず、複数の患
者および健常者の検体について本発明のポリペプチドの
発現量を上記にあげた検出方法で測定して比較し、患者
および健常者の該ポリペプチドの発現レベルの範囲を決
定する。被験者の検体の該ポリペプチドの発現レベル
を、健常者の発現レベルおよび患者の発現レベルとそれ
ぞれ比較し、どちらの発現レベルの範囲に入るかを調べ
ることにより診断を行う。うつ病、不安、パーキンソン
病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘息、
過食、肥満、アルコール依存症等の本発明のポリペプチ
ドの発現量が増加している疾患の場合は、健常者よりも
高いレベルの発現であれば、該疾患であると診断するこ
とができ、精神分裂病、痛み、脳挫傷、脊髄損傷、多発
性硬化症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎症性大腸炎、自
己免疫疾患、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不
振、悪性腫瘍等の本発明のポリペプチドの発現量が減少
している疾患の場合は、健常者よりも低いレベルの発現
であれば、該疾患であると診断することができる。

【０１４９】本発明のポリペプチドは、生体内で多彩な
生理作用を有すると考えられているカンナビノイド受容
体アゴニストである２−ＡＧの産生に関与していると考
えられており、本発明のポリペプチドの活性を阻害する
ことにより、うつ病、不安、パーキンソン病、幻覚、痴
呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘息、過食、肥満、
アルコール依存症等の予防または治療が可能となる。

【０１５０】本発明の抗体のなかでＤＧリパーゼの活性
を阻害する抗体は、うつ病、不安、パーキンソン病、幻
覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘息、過食、
肥満、アルコール依存症等の予防薬または治療薬として
利用することができる。

【０１５１】５．本発明のポリペプチドを生産する組換
えウイルスベクターの調製法 以下に、本発明のポリペプチドを特定のヒト組織内で生
産するための組換えウイルスベクターの調製法について
述べる。

【０１５２】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
として、例えばヒトＤＧリパーゼホモログ遺伝子の完全
長ｃＤＮＡをもとに、必要に応じて、該ポリペプチドを
コードする部分を含む適当な長さのＤＮＡ断片を調製す
る。完全長ｃＤＮＡ、あるいは該ＤＮＡ断片をウイルス
ベクター内のプロモーターの下流に挿入することによ
り、組換えウイルスベクターを造成する。

【０１５３】ＲＮＡウイルスベクターの場合には、ヒト
ＤＧリパーゼホモログ遺伝子の完全長ｃＤＮＡに相同な
ｃＲＮＡ、若しくは該ポリペプチドをコードする部分を
含む適当な長さのＤＮＡ断片に相同なＲＮＡ断片を調整
し、それらを、ウイルスベクター内のプロモーターの下
流に挿入することにより、組換えウイルスを造成する。
ＲＮＡ断片は、二本鎖の他、ウイルスベクターの種類に
応じて、センス鎖若しくはアンチセンス鎖のどちらか一
方の一本鎖を選択する。例えば、レトロウイルスベクタ
ーの場合は、センス鎖に相同するＲＮＡを、センダイウ
イルスベクターの場合は、逆にアンチセンス鎖に相同な
ＲＮＡを選択する。

【０１５４】該組換えウイルスベクターを、該ベクター
に適合したパッケージング細胞に導入する。パッケージ
ング細胞はウイルスのパッケージングに必要な蛋白質を
コードする遺伝子の少なくとも1つを欠損している組換
えウイルスベクターの該欠損する蛋白質を補給できる細
胞は全て用いることができ、例えばヒト腎臓由来のＨＥ
Ｋ２９３細胞、マウス繊維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３などを用
いることができる。パッケージング細胞で補給する蛋白
質としては、レトロウイルスベクターの場合はマウスレ
トロウイルス由来のgag、pol、envなどの蛋白質が、レ
ンチウイルスベクターの場合はヒト免疫不全ウイルス由
来のgag、pol、env、vpr、vpu、vif、tat、rev、nefな
どの蛋白質、アデノウイルスベクターの場合はアデノウ
イルス由来のE1A・E1Bなどの蛋白質が、アデノ随伴ウイ
ルスの場合はRep（p5、p19、p40）、Vp（Cap）などの蛋
白質が、センダイウイルスの場合はNP、P/C、L、M、F、
HNなどの蛋白質があげられる。

【０１５５】ウイルスベクターとしては上記パッケージ
ング細胞において組換えウイルスが生産でき、標的細胞
で本発明のＤＮＡを転写できる位置にプロモーターを含
有しているものが用いられる。プラスミドベクターとし
てはMFG〔Proc. Natl. Acad.Sci. USA, 92, 6733 (199
5)〕、pBabePuro〔Nucleic Acids Res., 18, 3587 (199
0)〕、LL-CG、CL-CG、CS-CG、CLG〔Journal of Virolog
y, 72, 8150 (1998)〕、pAdex1〔Nucleic Acids Res.,
23, 3816 (1995)〕等が用いられる。プロモーターとし
ては、ヒト組織中で発現できるものであればいずれも用
いることができ、例えば、ヒトＣＭＶのＩＥ遺伝子のプ
ロモーター、ＳＶ４０の初期プロモーター、レトロウイ
ルスのプロモーター、メタロチオネインプロモーター、
ヒートショック蛋白質プロモーター、ＳＲαプロモータ
ー等をあげることができる。また、ヒトＣＭＶのＩＥ遺
伝子のエンハンサーをプロモーターと共に用いてもよ
い。

【０１５６】パッケージング細胞への組換えウイルスベ
クターの導入法としては、例えば、リン酸カルシウム法
（特開平２−２２７０７５）、リポフェクション法〔Pr
oc.Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413 (1987)〕等をあげ
ることができる。

【０１５７】６．本発明のポリペプチドをコードするＤ
ＮＡの発現を検出および定量する方法 本発明のＤＮＡ、該ＤＮＡの部分断片、または該ＤＮＡ
由来のオリゴヌクレオチドを用いて、本発明のポリペプ
チドをコードするＤＮＡを検出、定量することができ
る。また、該ＤＮＡに由来するｍＲＮＡの構造変化を検
出することもできる。以下に本発明のＤＮＡ、該ＤＮＡ
の部分断片、または該ＤＮＡ由来のオリゴヌクレオチド
を用いて、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡを
検出、定量する方法について述べる。

【０１５８】当該方法に用いられるＤＮＡとしては、例
えば配列番号２で表される塩基配列を有するＤＮＡ、該
塩基配列と相補的な配列を有するＤＮＡもしくはそれら
から得られる部分断片、該ＤＮＡ由来のオリゴヌクレオ
チド等があげられる。本発明のポリペプチドをコードす
るＤＮＡの発現量や該ＤＮＡに由来するｍＲＮＡの構造
変化を検出する方法としては、例えば（１）ノーザンブ
ロット法（２）イン・サイチュ（in situ）ハイブリダ
イゼーション法、（３）定量的ＰＣＲ法、（４）デファ
レンシャル・ハイブリダイゼーション法、（５）ＤＮＡ
チップ法、（６）リボヌクレアーゼ保護アッセイ法など
の方法等があげられる。

【０１５９】上記方法による分析に供する検体として
は、培養細胞あるいは各種組織、血清、唾液等の生体試
料、（３）に記載した形質転換体から取得したＤＮＡ、
ｍＲＮＡあるいは全ＲＮＡが用いられる。以後、該ｍＲ
ＮＡおよび全ＲＮＡを検体由来ＲＮＡと称する。また、
生体試料から取得した組織を、パラフィンあるいはクリ
オスタット切片として単離したものを用いることもでき
る。

【０１６０】ノーザンブロット法では、検体由来ＲＮＡ
をゲル電気泳動で分離後、ナイロンフィルター等の支持
体に転写し、本発明のＤＮＡより調製した標識プローブ
を用いて、ハイブリダイゼーションならびに洗浄を行う
ことで、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡのｍ
ＲＮＡに特異的に結合したバンドを検出することによ
り、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡのｍＲＮ
Ａの発現量ならびに構造の変化を検出することができ
る。ハイブリダイゼーションを行う際には、プローブと
検体由来ＲＮＡ中の本発明のポリペプチドをコードする
ＤＮＡのｍＲＮＡが安定なハイブリッドを形成する条件
でインキュベーションする。偽陽性を防ぐためには、ハ
イブリダイゼーションならびに洗浄工程は高ストリンジ
ェントな条件で行うことが望ましい。高ストリンジェン
トな条件は、温度、イオン強度、塩基組成、プローブの
長さ、およびホルムアミド濃度等の多数の因子により決
定されるが、例えば、０．７〜１．０ｍｏｌ／ｌの塩化
ナトリウム存在下、６５℃でハイブリダイゼーションを
行った後、０．１〜２倍濃度のＳＳＣ溶液を用い、６５
℃条件下でフィルターを洗浄する条件をあげることがで
きる。

【０１６１】ノーザンブロット法に用いる標識プローブ
は、例えば、公知の方法(ニック・トランスレーショ
ン、ランダム・プライミングまたはキナージング)によ
り放射性同位体、ビオチン、蛍光基、化学発光基等を、
本発明のＤＮＡあるいは該ＤＮＡの配列から設計したオ
リゴヌクレオチドに取り込ませることで調製できる。標
識プローブの結合量は本発明のポリペプチドをコードす
るＤＮＡのｍＲＮＡの発現量を反映することから、結合
した標識プローブの量を定量することで本発明のポリペ
プチドをコードするＤＮＡのｍＲＮＡの発現量を定量す
ることができる。また、標識プローブ結合部位を分析す
ることで、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡの
ｍＲＮＡの構造変化を知ることができる。

【０１６２】上記標識プローブおよび、生体から取得し
た組織をパラフィンあるいはクリオスタット切片として
単離したものを用いてハイブリダイゼーションならびに
洗浄の工程を行うイン・サイチュ・ハイブリダイゼーシ
ョン法によって、本発明のポリペプチドをコードするＤ
ＮＡのｍＲＮＡの発現量を検出することができる。イン
・サイチュ・ハイブリダイゼーション法で、偽陽性を防
ぐためには、ハイブリダイゼーションならびに洗浄工程
は高ストリンジェントな条件で行うことが望ましい。こ
の条件は、温度、イオン強度、塩基組成、プローブの長
さ、およびホルムアミド濃度等の多数の因子により決定
される。これらの因子は、例えばカレント・プロトコー
ルズ・イン・モレキュラー・バイオロジーに記載されて
いる。

【０１６３】定量的ＰＣＲ法やデファレンシャル・ハイ
ブリダイゼーション法あるいはＤＮＡチップ法等による
本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡのｍＲＮＡの
検出法は、検体由来ＲＮＡ、オリゴｄＴプライマーまた
はランダムプライマーおよび逆転写酵素を用いてｃＤＮ
Ａを合成することに基づいた方法で行うことができる
（以後、該ｃＤＮＡを検体由来ｃＤＮＡと称する）。検
体由来ＲＮＡがｍＲＮＡの場合は、上記いずれのプライ
マーも用いることができるが、該検体由来ＲＮＡが全Ｒ
ＮＡである場合は、オリゴｄＴプライマーを用いること
が必要である。

【０１６４】定量的ＰＣＲ法では、検体由来ｃＤＮＡを
テンプレートとし本発明の本発明のポリペプチドをコー
ドするＤＮＡが有する塩基配列に基づき設計したプライ
マーを用いてreverse transcription（逆転写）−ＰＣ
Ｒ(以下、ＲＴ−ＰＣＲと略す)を行うことで、本発明の
ポリペプチドをコードするＤＮＡのｍＲＮＡ由来のＤＮ
Ａ断片が増幅される。該増幅ＤＮＡ断片の量は本発明の
ポリペプチドをコードするＤＮＡのｍＲＮＡの発現量を
反映することから、アクチンやグリセルアルデヒド−３
−リン酸デヒドロゲナーゼ（glycerardehyde-3-phospha
te dehydrogenase、以下Ｇ３ＰＤＨと略す）等をコード
するＤＮＡを内部コントロールとして置くことで本発明
のポリペプチドをコードするＤＮＡのｍＲＮＡの量を定
量することが可能である。また、該増幅ＤＮＡ断片をゲ
ル電気泳動により分離することで、本発明のポリペプチ
ドをコードするＤＮＡのｍＲＮＡの構造の変化を知るこ
ともできる。本検出法では、標的配列を特異的にかつ効
率的に増幅する適当なプライマーを用いることが望まし
い。適当なプライマーは、プライマー間の結合やプライ
マー内の結合を起こさず、アニーリング温度で標的ｃＤ
ＮＡと特異的に結合して、変性条件で標的ｃＤＮＡから
はずれる等の条件に基づき設計することができる。増幅
ＤＮＡ断片の定量は増幅産物が指数関数的に増加してい
るＰＣＲ反応の内に行うことが必要である。このような
ＰＣＲ反応は、各反応ごとに生産される該増幅ＤＮＡ断
片を回収してゲル電気泳動で定量分析することで知るこ
とができる。

【０１６５】検体由来ｃＤＮＡをプローブとして、本発
明のＤＮＡを固定化させたフィルターあるいはスライド
ガラスやシリコンなどの基盤に対してハイブリダイゼー
ションならびに洗浄を行うことで、本発明のポリペプチ
ドをコードするＤＮＡのｍＲＮＡの発現量の変動を検出
することができる。このような原理に基づく方法には、
ディファレンシャルハイブリダイゼーション法〔Trends
Genet., 7, 314 (1991)〕やＤＮＡチップ法〔Genome R
es., 6, 639 (1996)〕と呼ばれる方法がある。いずれの
方法もフィルターあるいは基盤上にアクチンやＧ３ＰＤ
Ｈなどの内部コントロールを固定化することで、対照検
体と標的検体の間での本発明のポリペプチドをコードす
るＤＮＡのｍＲＮＡの発現の違いを正確に検出すること
ができる。また対照検体と標的検体由来のＲＮＡをもと
にそれぞれ異なる標識のｄＮＴＰ（ｄＡＴＰ、ｄＧＴ
Ｐ、ｄＣＴＰ、ｄＴＴＰの混合物）を用いて標識ｃＤＮ
Ａ合成を行い、１枚のフィルターあるいは１枚の基盤に
２つの標識ｃＤＮＡプローブを同時にハイブリダイズさ
せることで正確な本発明のポリペプチドをコードする遺
伝子のｍＲＮＡの発現量の定量を行うことができる。

【０１６６】リボヌクレアーゼ保護アッセイ法では、ま
ず本発明のＤＮＡの３’端にＴ７プロモーター、ＳＰ６
プロモーターなどのプロモーター配列を結合し、標識し
たＮＴＰ（ＡＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰの混合物）
およびＲＮＡポリメラーゼを用いたイン・ビトロの転写
系により、標識したアンチセンスＲＮＡを合成する。該
標識アンチセンスＲＮＡは、検体由来ＲＮＡと結合させ
て、ＲＮＡ−ＲＮＡハイブリッドを形成させた後、リボ
ヌクレアーゼで消化し、消化から保護されたＲＮＡ断片
をゲル電気泳動によりバンドを形成させ検出する。得ら
れたバンドを定量することで、本発明のポリペプチドを
コードするＤＮＡのｍＲＮＡの発現量を定量することが
できる。

【０１６７】上記の方法を用いて、本発明のＤＮＡの発
現量の変化あるいは該ＤＮＡに由来するｍＲＮＡの構造
変化を検出し、うつ病、不安、パーキンソン病、幻覚、
痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘息、過食、肥
満、アルコール依存症等の本発明のＤＮＡの発現量が増
加している疾患または、精神分裂病、痛み、脳挫傷、脊
髄損傷、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎症
性大腸炎、自己免疫疾患、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、
嘔吐、食欲不振、悪性腫瘍等の本発明のＤＮＡの発現量
が減少している疾患、あるいは該ＤＮＡに由来するｍＲ
ＮＡの構造変化を伴う疾患の診断を行うことができる。

【０１６８】疾患の診断に供する検体としては患者より
取得した組織、血液等の生体試料あるいは該生体試料か
ら細胞を取得して試験管内の適当な培地中で培養した初
代培養細胞試料から取得したｍＲＮＡあるいは全ＲＮＡ
が用いられる。また、生体試料から取得した組織を、パ
ラフィンあるいはクリオスタット切片として単離したも
のを用いることもできる。

【０１６９】本発明のＤＮＡの発現量の変化を伴う疾患
は以下のようにして診断できる。まず、複数の患者およ
び健常者の検体について本発明のポリペプチドをコード
するＤＮＡの発現量を上記にあげた検出方法で測定して
比較し、患者および健常者の該ＤＮＡの発現レベルの範
囲を決定する。被験者の検体の該ＤＮＡの発現レベル
を、健常者の発現レベルおよび患者の発現レベルとそれ
ぞれ比較し、どちらの発現レベルの範囲に入るかを調べ
ることにより診断を行う。うつ病、不安、パーキンソン
病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘息、
過食、肥満、アルコール依存症等の本発明のＤＮＡの発
現量が増加している疾患の場合は、健常者よりも高いレ
ベルの発現であれば、該疾患であると診断することがで
き、精神分裂病、痛み、脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化
症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫
疾患、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、悪
性腫瘍等の本発明のＤＮＡの発現量が減少している疾患
の場合は、健常者よりも低いレベルの発現であれば、該
疾患であると診断することができる。

【０１７０】本発明のＤＮＡに由来するｍＲＮＡの構造
変化を伴う疾患は、被験者の検体のｍＲＮＡを上述の方
法により検出して、健常者のｍＲＮＡの構造と比較し、
構造変化の有無を調べることにより、診断を行うことが
できる。

【０１７１】７．本発明のポリペプチドをコードするＤ
ＮＡの変異を検出および同定する方法 以下に本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡを用い
て該ＤＮＡの変異および多型を検出する方法について述
べる。

【０１７２】当該方法に用いられるＤＮＡとしては、例
えば配列番号２で表される塩基配列を有するＤＮＡもし
くはそれらから得られるＤＮＡ断片等があげられる。本
発明のポリペプチドをコードする遺伝子座中に存在する
疾患の原因となる変異の存在の有無を評価するための最
も明確な試験は、対照集団からの遺伝子と疾患患者から
の遺伝子とを直接比較することである。

【０１７３】具体的には疾患患者ならび健常者から、生
体試料あるいは該生体試料から樹立した初代培養細胞由
来の試料を集め、該生体試料ならびに該初代培養細胞由
来試料中からＤＮＡを抽出する（以後、該ＤＮＡを検体
由来ＤＮＡと称する）。該検体由来ＤＮＡあるいは、本
発明のＤＮＡが有する塩基配列に基づき設計したプライ
マーを用いて増幅した本発明のポリペプチドをコードす
るＤＮＡを試料ＤＮＡとして用いることができる。別法
として、該検体由来ｃＤＮＡをテンプレートとして、本
発明のＤＮＡが有する塩基配列に基づき設計したプライ
マーによりＰＣＲを行うことで本発明のポリペプチドを
コードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ断片を増幅して試料
ＤＮＡとして用いることができる。

【０１７４】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
に疾患の原因となる変異があるかどうかを検出する方法
として、野生型対立遺伝子を有するＤＮＡ鎖と変異対立
遺伝子を有するＤＮＡ鎖とのハイブリダイズにより形成
されるヘテロ二本鎖を検出する方法を用いることができ
る。ヘテロ二本鎖を検出する方法には、（１）ポリアク
リルアミドゲル電気泳動によるヘテロ二本鎖検出法〔Tr
ends Genet., 7, 5 (1991)〕、（２）一本鎖コンフォメ
ーション多型解析法（ＳＳＣＰ解析；single strand co
nformation polymorphism analysis）〔Genomics, 16,
325 (1993)〕、（３）ミスマッチの化学的切断法（ＣＣ
Ｍ法, chemical cleavage of mismatches）〔Human Mol
ecular Genetics, BIOS Scientific Publishers Limite
d (1996)〕、（４）ミスマッチの酵素的切断法〔Nat. G
enet., 9, 103 (1995)〕、（５）変性ゲル電気泳動法
（denaturing gradient gel electrophoresis：ＤＧＧ
Ｅ法）〔Mutat. Res., 288, 103 (1993)〕等の方法があ
げられる。

【０１７５】検体由来ＤＮＡあるいは検体由来ｃＤＮＡ
をテンプレートに、本発明のポリペプチドをコードする
ＤＮＡを配列番号２で表される塩基配列に基づき設計し
たプライマーにより、２００ｂｐよりも小さい断片とし
て増幅し、ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行う。本
発明のポリペプチドをコードするＤＮＡの変異によりヘ
テロ二本鎖が形成された場合は、変異を持たないホモ二
本鎖よりも移動度が遅く、それらは余分なバンドとして
検出することができる。特製のゲル〔ハイドロ−リンク
（Hydro-link）、ＭＤＥなど〕を用いた方が分離度はよ
い。２００ｂｐよりも小さい断片の検索ならば、挿入、
欠失、ほとんどの１塩基置換を検出可能である。ヘテロ
二本鎖解析は、次に述べる一本鎖コンフォメーション多
型解析と組み合わせた一枚のゲルで行うことが望まし
い。

【０１７６】ＳＳＣＰ解析では、検体由来ＤＮＡあるい
は検体由来ｃＤＮＡをテンプレートに、配列番号２で表
される塩基配列に基づき設計したプライマーにより、２
００ｂｐよりも小さい断片として増幅した本発明のポリ
ペプチドをコードするＤＮＡを変性後、未変性ポリアク
リルアミドゲル中で泳動する。ＤＮＡ増幅を行う際にプ
ライマーを放射性同位体あるいは蛍光色素で標識する
か、または未標識の増幅産物を銀染色することにより、
増幅した本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡをバ
ンドとして検出することができる。野生型のパターンと
の相違を明らかにするために、コントロールの検体も同
時に泳動すると、変異を持った断片を移動度の違いから
検出できる。

【０１７７】ＣＣＭ法では、検体由来ＤＮＡあるいは検
体由来ｃＤＮＡをテンプレートに、本発明のポリペプチ
ドをコードするＤＮＡを配列番号２で表される塩基配列
に基づき設計したプライマーで増幅したＤＮＡ断片を、
本発明のＤＮＡに放射性同位体あるいは蛍光色素をとり
込ませた標識ＤＮＡとハイブリダイズさせ、四酸化オス
ミウムで処理することでミスマッチしている場所のＤＮ
Ａの一方の鎖を切断させ変異を検出することができる。
ＣＣＭ法は最も感度の高い検出法の1つであり、キロベ
ースの長さの検体にも適応できる。

【０１７８】上記四酸化オスミウムの代わりにＴ４エン
ドヌクレアーゼVIIのような細胞内でミスマッチの修復
に関与する酵リゾル素とリボヌクレアーゼＡと組み合わ
せることで、酵素的にミスマッチを切断することもでき
る。ＤＧＧＥ法では、検体由来ＤＮＡあるいは検体由来
ｃＤＮＡをテンプレートに、本発明のポリペプチドをコ
ードするＤＮＡを配列番号２で表される塩基配列に基づ
き設計したプライマーで増幅したＤＮＡ断片を化学的変
性剤の濃度勾配や温度勾配を有するゲルを用いて電気泳
動する。増幅したＤＮＡ断片はゲル内を一本鎖に変性す
る位置まで移動し、変性後は移動しなくなる。本発明の
ポリペプチドをコードするＤＮＡに変異がある場合とな
い場合では増幅したＤＮＡのゲル内での移動度が異なる
ことから、変異の存在を検出することが可能である。検
出感度を上げるにはそれぞれのプライマーにポリ（G:
C）端末を付けるとよい。

【０１７９】疾患の原因遺伝子を検出する別の方法とし
て、蛋白質短縮試験（protein truncation test：PTT
法）〔Genomics, 20, 1 (1994)〕がある。該試験により
蛋白質の欠損を生み出すフレームシフト突然変異、スプ
ライス部位突然変異、ナンセンス突然変異を特異的に検
出することができる。ＰＴＴ法では、配列番号２で表さ
れた塩基配列を有するＤＮＡの５’末端にＴ７プロモー
ター配列と真核生物翻訳開始配列をつないだ特殊なプラ
イマーを設計し、該プライマーを用いて検体由来ＲＮＡ
よりＲＴ−ＰＣＲ法でｃＤＮＡを作成する。該ｃＤＮＡ
を用い、イン・ビトロ転写、翻訳を行うと、蛋白質が生
産される。該蛋白質をゲルに泳動して、該蛋白質の泳動
位置が完全長蛋白質に相当する位置にあれば欠損を生み
出す変異は存在せず、該蛋白質に欠損がある場合は、完
全長蛋白質より短い位置に該蛋白質は泳動され、該位置
より欠損の程度を知ることができる。

【０１８０】検体由来ＤＮＡならびに検体由来ｃＤＮＡ
の塩基配列を決定するために本発明のＤＮＡが有する塩
基配列に基づいて設計したプライマーを用いることが可
能である。決定された塩基配列を解析することにより、
検体由来ＤＮＡあるいは検体由来ｃＤＮＡに腎疾患の原
因となる変異があるか否かを判別できる。本発明のポリ
ペプチドをコードする遺伝子のコード領域以外の変異
は、該遺伝子の付近またはその中のイントロンおよび調
節配列のような、非コード領域を検査することによって
検出し得る。非コード領域中の変異に起因する疾患は、
上記に記載した方法に従い対照検体と比較した場合の、
疾患患者における異常なサイズの、または異常な生産量
のｍＲＮＡを検出することで確認することができる。

【０１８１】このようにして非コード領域における変異
の存在が示唆された該遺伝子については、配列番号２で
表される塩基配列を有するＤＮＡをハイブリダイゼーシ
ョンのプローブとして用いることにより、クローン化す
ることができる。非コード領域における変異は上述のい
ずれかの方法に準じて探索することができる。見い出さ
れた変異は、Handbook of Human Genetics Linkage. Th
e John Hopkins University Press, Baltimore（1994）
に記載された方法に従い統計処理を行うことで、疾患と
の連鎖があるSNPs(シングル・ヌクレオチド・ポリモル
フィズム）として同定することができる。また、疾患の
病歴を持つ家族から、先に示した方法に従いＤＮＡを取
得し、変異および多型を検出することで、疾患の原因遺
伝子を同定することができる。

【０１８２】８．本発明のＤＮＡを用いて疾患の発生の
可能性および予後を診断する方法 当該方法に用いられるＤＮＡとしては、例えば配列番号
２で表される塩基配列を有するＤＮＡもしくはそれらか
ら得られるＤＮＡ断片等があげられる。

【０１８３】うつ病、不安、パーキンソン病、精神分裂
病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、痛み、
脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、
乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫疾患、喘息、心筋梗塞、
脳梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、過食、肥満、アルコ
ール依存症、悪性腫瘍等のＤＧリパーゼが関与する疾患
の原因は、ヒトのいずれかの組織における遺伝子の変異
を検出することによって確認し得る。例えば、生殖細胞
系に変異がある場合、当該変異を遺伝した個人は、疾患
を発症し易い傾向である可能性がある。当該変異は、該
個人の体のいずれかの組織からのＤＮＡを試験すること
によって検出し得る。例えば、採血しその血液の細胞か
らＤＮＡを抽出し、このＤＮＡを用い、遺伝子の変異を
試験することにより、疾患を診断することができる。ま
た、胎児細胞、胎盤細胞または羊膜細胞を用い、遺伝子
の変異を試験することにより、出生前診断を行うことが
できる。

【０１８４】また疾患を発症した患者から、病巣部位の
生体組織を取得してＤＮＡを試験することにより、疾患
の種類を診断し、投与する薬物の選択などに利用するこ
とができる。組織中の遺伝子の変異を検出するために
は、周囲の正常組織から遊離した病巣部位の組織を単離
することが有用である。取得した組織をトリプシンなど
で処理し、得られた細胞を適当な培地で培養する。培養
した細胞からは染色体ＤＮＡならびにｍＲＮＡを抽出す
ることができる。

【０１８５】以後、診断を目的としてヒト検体から上記
いずれかの方法で取得したＤＮＡを診断検体由来ＤＮＡ
と称する。また、診断を目的としてヒト検体から上記い
ずれかの方法で取得したＲＮＡより合成したｃＤＮＡを
診断検体由来ｃＤＮＡと称する。本発明のＤＮＡおよび
診断検体由来ＤＮＡあるいは診断検体由来ｃＤＮＡを用
い、疾患の原因遺伝子を検出する方法に準じた方法によ
り、疾患の診断を行うことができる。

【０１８６】また、本発明のＤＮＡおよび診断検体由来
ＤＮＡあるいは診断検体由来ｃＤＮＡを利用した疾患の
診断には（１）制限酵素部位の検出、（２）対立遺伝子
特異的なオリゴヌクレオチドプローブを利用する方法
（ＡＳＯ：allele specific oligonucleotide hybridiz
ation）、（３）対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチ
ドを用いたＰＣＲ（ＡＲＭＳ：amplification refracto
ry mutation system）、（４）オリゴヌクレオチドライ
ゲーションアッセイ（ＯＬＡ：oligonucleotideligatio
n assay）、（５）ＰＣＲ−ＰＨＦＡ法（PCR-preferent
ial homoduplexformation assay）、（6）オリゴＤＮＡ
アレイを用いる方法〔蛋白質核酸酵素、43, 2004 (199
8)〕等の方法も用いることができる。

【０１８７】単一塩基変化により制限酵素部位が消失あ
るいは発生する場合は、診断検体由来ＤＮＡあるいは診
断検体由来ｃＤＮＡを、本発明のＤＮＡが有する配列に
基づき設計したプライマーで増幅し、該制限酵素で消化
し、得られた制限酵素切断ＤＮＡ断片を正常人の場合と
比較することで簡便に変異を検出することができる。し
かし単一塩基変化が起こることはまれであるので、診断
目的には、本発明のＤＮＡが有する配列情報ならびに別
途同定された変異の情報を組合せることでオリゴヌクレ
オチドプローブを設計し、該オリゴヌクレオチドプロー
ブをフィルターに結合させハイブリダイズを行うリバー
スドットブロット法で変異を検出する。

【０１８８】短い合成ＤＮＡプローブは、完全に対合す
る配列とだけハイブリダイズする。この特徴を利用し
て、対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドプローブを
用いて、１塩基の変異を容易に検出することができる。
診断目的には、本発明のＤＮＡが有する配列と同定され
た変異に基づき設計したオリゴヌクレオチドをフィルタ
ーに結合させ、診断検体由来ＤＮＡあるいは診断検体由
来ｃＤＮＡから本発明のＤＮＡが有する配列を用いて設
計したプライマーと標識したｄＮＴＰを用いたＰＣＲで
作成したプローブを用いてハイブリダイズを行うリバー
スドットブロットが用いられることが好ましい。スライ
ドガラスやシリコンなどの基盤に直接、本発明のＤＮＡ
が有する配列と該変異に基づき設計したオリゴヌクレオ
チドを合成して、高密度のアレイを作ることからなるＤ
ＮＡチップ法は、少量の診断検体由来ＤＮＡあるいは診
断検体由来ｃＤＮＡについて多様な変異をより簡便に検
出できるため大規模な診断目的に適した変異検出法であ
る。

【０１８９】塩基変異は、以下のオリゴヌクレオチドラ
イゲーションアッセイ（ＯＬＡ）法によっても検出でき
る。変異部位を挟んで両側にハイブリダイズする本発明
のＤＮＡが有する配列より設計した２０塩基程度のオリ
ゴヌクレオチドを２本作成する。診断検体由来ＤＮＡあ
るいは診断検体由来ｃＤＮＡをテンプレートとして用
い、本発明のＤＮＡが有する配列から設計したプライマ
ーを用い、ＰＣＲにより本発明のＤＮＡ断片を増幅す
る。該増幅断片と上記オリゴヌクレオチドとをハイブリ
ダイズさせる。ハイブリダイズ後に、ＤＮＡリガーゼで
２本のオリゴヌクレオチドを連結させる。例えば、一方
のオリゴヌクレオチドにはビオチンを、他方のオリゴヌ
クレオチドにジゴキシゲニンのような異なる標識をつけ
ると、連結反応が起こったかどうかを速やかに検出する
ことが可能である。ＯＬＡは電気泳動や遠心分離操作が
不要なために、多くのサンプルを効率的に短期間で診断
するのに適した変異検出法である。

【０１９０】また、以下のＰＣＲ−ＰＨＦＡ法により微
量な変異遺伝子を定量的かつ容易に検出することができ
る。ＰＣＲ−ＰＨＦＡ法は、ＰＣＲ、非常に高い特異性
を示す液相でのハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡと
同様の操作でＰＣＲ産物を検出するＥＤ−ＰＣＲ（enzy
matic detection of PCR product）の３つを組み合わせ
たものである。ジニトロフェニル（dinitrophenyl；Ｄ
ＮＰ）標識およびビオチン標識したプライマーセットを
用いて、本発明のＤＮＡをテンプレートにＰＣＲ増幅を
行い、両末端標識増幅物を調製する。これに対して、標
識を持たない同じ配列を有するプライマーセットと診断
検体由来ＤＮＡあるいは診断検体由来ｃＤＮＡをテンプ
レートに増幅して得た非標識増幅物を２０〜１００倍の
大過剰量混合する。そして熱変性後、１℃／５分〜１０
分程度の緩やかな温度勾配で冷却し、完全な相補鎖を優
先的に形成させる。こうして再形成された標識ＤＮＡは
ビオチンを介してストレプトアビジン固定化ウエルに捕
獲吸着し、ＤＮＰを介して酵素標識抗ＤＮＰ抗体を結合
させて酵素による発色反応により検出する。検体中に標
識ＤＮＡと同じ配列の遺伝子が存在しない場合は、元の
二本鎖の標識ＤＮＡが優先的に再形成されて発色を示
す。これに対し、同じ配列の遺伝子が存在する場合は、
相補鎖の置換がランダムに生じるため再形成される標識
ＤＮＡは減少するので、発色は著しく低下する。これに
より、既知の変異・多型遺伝子の検出および定量が可能
となる。

【０１９１】９．本発明のポリペプチドをコードするＤ
ＮＡのプロモーター領域および/または転写制御領域の
取得 モレキュラー・クローニング第２版に記載の方法によ
り、ヒトの細胞や組織から単離した染色体ＤＮＡを用い
て作製したゲノムＤＮＡライブラリーに対して、本発明
のＤＮＡ、該ＤＮＡ由来の部分ＤＮＡ断片、またはオリ
ゴヌクレオチドをプローブにして、プラークハイブリダ
イゼーション等の方法でスクリーニングすることによ
り、本発明のＤＮＡのヒトのゲノムＤＮＡを得ることが
できる。ゲノムＤＮＡの塩基配列とｃＤＮＡの塩基配列
を比較することにより該遺伝子のエキソン／イントロン
構造を明らかにすることができる。また、特にｃＤＮＡ
の5'側の部分をプローブにすることにより、本発明のＤ
ＮＡのプロモーター領域および/または転写制御領域な
どの遺伝子の転写を制御するゲノム遺伝子領域の塩基配
列を明らかにすることができ、本発明のＤＮＡのプロモ
ータ領域および/または転写制御領域を単離、取得する
ことができる。この取得したプロモータ領域および/ま
たは転写制御領域の配列は本発明のＤＮＡの転写の制御
機構を解析するのに役立つ他、該ＤＮＡの転写効率を変
動させる化合物のスクリーニングなどに利用することが
できる。

【０１９２】尚、同様の方法を用いて、他の非ヒト哺乳
動物においてもゲノム遺伝子を取得することができる。

【０１９３】１０．本発明のポリペプチドをコードする
ＤＮＡの転写および翻訳を抑制する方法 本発明のＤＮＡは、アンチセンスＲＮＡ／ＤＮＡ技術
〔バイオサイエンスとインダストリー, 50, 322 (199
2)、化学, 46, 681 (1991)、Biotechnology, 9, 358 (1
992)、Trends Biotechnol., 10, 87 (1992) 、Trends B
iotechnol., 10, 152 (1992)、細胞工学, 16, 1463 (19
97)〕、トリプル・ヘリックス技術〔TrendsBiotechno
l., 10, 132 (1992)〕等を用い、本発明のポリペプチド
をコードするＤＮＡの転写または翻訳を抑制することが
できる。例えば、本発明のＤＮＡ、該ＤＮＡの一部の配
列を有するＤＮＡ、またはオリゴヌクレオチドを投与す
ることにより、本発明のポリペプチドの生産を抑制する
ことができる。即ち、本発明のＤＮＡ、該ＤＮＡの一部
の配列を有するＤＮＡ、ならびにオリゴヌクレオチドま
たはその誘導体を用いることにより、本発明のポリペプ
チドをコードするＤＮＡの転写、または本発明のポリペ
プチドをコードするｍＲＮＡの翻訳を、それぞれ抑制で
きる。

【０１９４】該抑制方法は、うつ病、不安、パーキンソ
ン病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘
息、過食、肥満、アルコール依存症等の治療または予防
に利用することができる。本発明のポリペプチドは、生
体内で多彩な生理作用を有すると考えられているカンナ
ビノイド受容体アゴニストである２−ＡＧの産生を促進
するので、本発明のＤＮＡ、該ＤＮＡの連続した１５塩
基以上の配列を有するＤＮＡならびにオリゴヌクレオチ
ドまたはその誘導体は、本発明のＤＮＡの転写および本
発明のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの翻訳を抑制
することで、うつ病、不安、パーキンソン病、幻覚、痴
呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘息、過食、肥満、
アルコール依存症等の予防薬または治療薬として利用で
きる。

【０１９５】１１．本発明のポリペプチドを含有する医
薬 本発明のポリペプチドは、精神分裂病、痛み、脳挫傷、
脊髄損傷、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎
症性大腸炎、自己免疫疾患、心筋梗塞、脳梗塞、高血
圧、嘔吐、食欲不振、悪性腫瘍等、本発明のポリペプチ
ドの発現減少を伴う疾患の治療または予防のための医薬
として利用することができる。

【０１９６】本発明のポリペプチドは、生体内で多彩な
生理作用を有すると考えられているカンナビノイド受容
体アゴニストである２−ＡＧの産生に関与しているた
め、本発明のポリペプチドにより、２−ＡＧの産生が促
進される。従って、本発明のポリペプチドは、精神分裂
病、痛み、脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化症、慢性関節
リウマチ、乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫疾患、心筋梗
塞、脳梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、悪性腫瘍等の予
防薬または治療薬として利用できる。

【０１９７】本発明のポリペプチドを含有する医薬製剤
は、活性成分として該ポリペプチド単独で、あるいは任
意の他の治療のための有効成分との混合物として含有す
ることができる。また、それら医薬製剤は、活性成分を
薬理学的に許容される一種もしくはそれ以上の担体と一
緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られてい
る任意の方法により製造される。

【０１９８】投与経路は、治療に際し最も効果的なもの
を使用するのが望ましく、経口または、例えば静脈内等
の非経口をあげることができる。投与形態としては、錠
剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、注射剤等がある。経口
投与に適当な、例えばシロップ剤のような液体調製物
は、水、蔗糖、ソルビット、果糖等の糖類、ポリエチレ
ングリコール、プロピレングリコール等のグリコール
類、ごま油、オリーブ油、大豆油等の油類、p-ヒドロキ
シ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレー
バー、ペパーミント等のフレーバー類等を使用して製造
できる。また、錠剤、散剤および顆粒剤等は、乳糖、ブ
ドウ糖、蔗糖、マンニット等の賦形剤、澱粉、アルギン
酸ソーダ等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タル
ク等の滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプ
ロピルセルロース、ゼラチン等の結合剤、脂肪酸エステ
ル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤等を用いて製
造できる。

【０１９９】非経口投与に適当な製剤は、好ましくは受
容者の血液と等張である活性化合物を含む滅菌水性剤か
らなる。例えば、注射剤の場合は、塩溶液、ブドウ糖溶
液または塩水とブドウ糖溶液の混合物からなる担体等を
用いて注射用の溶液を調製する。また、これら非経口剤
においても、経口剤で例示した希釈剤、防腐剤、フレー
バー類、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性
剤、可塑剤等から選択される１種もしくはそれ以上の補
助成分を添加することもできる。

【０２００】また、噴霧剤は該ポリペプチドそのもの、
ないしは受容者の口腔および気道粘膜を刺激せず、かつ
該蛋白質を微細な粒子として分散させ吸収を容易にさせ
る担体等を用いて調製する。担体として具体的には乳
糖、グリセリン等が例示される。該蛋白質および用いる
担体の性質により、エアロゾル、ドライパウダー等の製
剤が可能である。また、これらの非経口剤においても経
口剤で添加剤として例示した成分を添加することもでき
る。

【０２０１】本発明のポリペプチドの投与量および投与
回数は、投与形態、患者の年齢、体重、治療すべき症状
の性質もしくは重篤度により異なるが、通常経口の場
合、成人一人当り０．０１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは０．
０５〜５０ｍｇを一日一回ないし数回投与する。静脈内
投与等の非経口投与の場合、成人一人当り０．００１〜
１００ｍｇ、好ましくは０．０１〜１０ｍｇを一日一回
ないし数回投与する。しかしながら、これら投与量およ
び投与回数に関しては、前述の種々の条件により変動す
る。

【０２０２】本発明のＤＮＡ、該ＤＮＡの連続した１５
塩基以上の配列を有するＤＮＡならびにオリゴヌクレオ
チドまたはその誘導体を含有する医薬、本発明の抗体を
含有する医薬も、上記の本発明のポリペプチドを含有す
る医薬に準じて製造および投与することができる。本発
明のＤＮＡ、該ＤＮＡの連続した１５塩基以上の配列を
有するＤＮＡならびにオリゴヌクレオチドまたはその誘
導体を含有する医薬、本発明の抗体を含有する医薬が診
断のための医薬の場合は、目的の診断法に応じて、本発
明のＤＮＡあるいはポリペプチドの定量あるいは変異の
検出を行うのに必要な試薬、例えば緩衝剤、塩、反応用
酵素、本発明の抗体を認識する標識された抗体、検出用
発色剤等を含んでもよい。

【０２０３】１２．本発明のＤＮＡを含有する遺伝子治
療剤 本発明のＤＮＡを含有する遺伝子治療剤は、本発明のポ
リペプチドの産生を促すことにより、ＤＧリパーゼ活性
に対するアゴニストとして作用する。即ち、本発明のＤ
ＮＡを含有してなる遺伝子治療剤は、精神分裂病、痛
み、脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化症、慢性関節リウマ
チ、乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫疾患、心筋梗塞、脳
梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、悪性腫瘍等の予防薬ま
たは治療薬として利用できる。

【０２０４】本発明のＤＮＡを含有するウイルスベクタ
ーを用いた遺伝子治療剤は、５項で作製した組換えウイ
ルスベクターおよび遺伝子治療剤に用いる基剤を調合す
ることにより製造することができる〔Nat. Genet., 8,
42(1994)〕。遺伝子治療剤に用いる基剤としては、通常
注射剤に用いる基剤であればどのようなものでもよく、
蒸留水、塩化ナトリウムまたは塩化ナトリウムと無機塩
との混合物等の塩溶液、マンニトール、ラクトース、デ
キストラン、グルコース等の糖溶液、グリシン、アルギ
ニン等のアミノ酸溶液、有機酸溶液又は塩溶液とグルコ
ース溶液との混合溶液等があげられる。また常法に従
い、これらの基剤に浸透圧調整剤、pH調整剤、ゴマ油、
ダイズ油等の植物油又はレシチンもしくは非イオン界面
活性剤等の界面活性剤等の助剤を用いて、溶液、懸濁
液、分散液として注射剤を調製してもよい。これらの注
射剤を、粉末化、凍結乾燥等の操作により用時溶解用製
剤として調製することもできる。本発明の遺伝子治療剤
は、液体の場合はそのままで、個体の場合は必要により
滅菌処理をした上記の基剤に遺伝子治療の直前に溶解し
て治療に使用することができる。

【０２０５】上記遺伝子治療剤に用いるウイルスベクタ
ーは、レトロウイルスベクターに限定されず、レンチウ
イルスベクター等も用いることができる。適当なサイズ
の本発明のＤＮＡを、アデノウイルス・ヘキソン蛋白質
に特異的なポリリジン-コンジュゲート抗体と組み合わ
せてコンプレックスを作製し、得られたコンプレックス
をアデノウイルスベクターに結合させることにより、ウ
イルスベクターを調製することができる。該ウイルスベ
クターは安定に標的細胞に到達し、エンドソームにより
細胞内に取り込まれ、細胞内で分解され効率的に遺伝子
を発現させることができる。

【０２０６】（−）鎖ＲＮＡウイルスであるセンダイウ
イルスをベースにしたウイルスベクターも開発されてお
り（ＷＯ９７／１６５３８、ＷＯ９７／１６５３９）、
遺伝子治療を目的として本発明のＤＮＡと相同なＲＮＡ
を組み込んだセンダイウイルスベクターを作製すること
ができる。本発明のＤＮＡは、非ウイルス遺伝子移入法
によっても移入することができる。

【０２０７】当該分野で公知の非ウイルス遺伝子移入法
には、リン酸カルシウム共沈法〔Virology, 52, 456 (1
973)；Science, 209, 1414 (1980)〕、マイクロインジ
ェクション法〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA，77, 5399
(1980)；Proc. Natl. Acad.Sci. USA，77, 7380 (198
0)；Cell, 27, 223 (1981)；Nature, 294, 92 (198
1)〕、リポソームを介した膜融合−介在移入法〔Proc.
Natl. Acad. Sci. USA， 84, 7413 (1987)；Biochemist
ry, 28, 9508 (1989)；J. Biol. Chem., 264, 12126
(1989)；Hum. Gene Ther., 3, 267 (1992)；Science,
249, 1285 (1990)；Circulation, 83, 2007 (1992)〕あ
るいは直接ＤＮＡ取り込みおよび受容体−媒介ＤＮＡ移
入法〔Science, 247, 1465 (1990)；J. Biol. Chem., 2
66, 14338 (1991)；Proc. Natl. Acad. Sci. USA， 87,
3655 (1991)；J. Biol. Chem., 264,16985 (1989)；Bi
oTechniques, 11, 474 (1991)；Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA，87, 3410 (1990)；Proc. Natl. Acad. Sci. US
A，88, 4255 (1991)；Proc. Natl. Acad. Sci. USA，8
7, 4033 (1990)；Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 88
50 (1991)；Hum. Gene Ther., 3, 147 (1991)〕等をあ
げることができる。

【０２０８】リポソームを介した膜融合−介在移入法で
はリポソーム調製物を標的とする組織に直接投与するこ
とにより、当該組織の局所的な遺伝子の取り込みおよび
発現が可能であることが腫瘍に関する研究において報告
されている〔Hum. Gene Ther. 3, 399 (1992)〕。従っ
て同様の効果がＤＧリパーゼが関与する疾患病巣でも期
待される。ＤＮＡを病巣に直接ターゲッティングするに
は、直接ＤＮＡ取り込み技術が好ましい。受容体−媒介
ＤＮＡ移入は、例えば、ポリリジンを介して、蛋白質リ
ガンドにＤＮＡ(通常、共有的に閉環したスーパーコイ
ル化プラスミドの形態をとる)をコンジュゲートするこ
とによって行う。リガンドは、標的細胞または組織の細
胞表面上の対応するリガンド受容体の存在に基づいて選
択する。当該リガンド−ＤＮＡコンジュゲートは、所望
により、血管に直接注射することができ、受容体結合お
よびＤＮＡ−蛋白質コンプレックスの内在化が起こる標
的組織に指向し得る。ＤＮＡの細胞内破壊を防止するた
めに、アデノウイルスを同時感染させて、エンドソーム
機能を崩壊させることもできる。

【０２０９】１３．本発明のポリペプチドをコードする
ＤＮＡを用いたスクリーニング方法 本発明のポリペプチドを発現している細胞株に種々の被
験化合物を添加し、本発明のＤＮＡを用いて、ｍＲＮＡ
の発現の増減を検定することで該ＤＮＡの転写もしくは
翻訳を抑制または促進する化合物をスクリーニングする
ことができる。該ＤＮＡのｍＲＮＡの発現の増減は、上
記したＰＣＲ法、ノーザンブロット法、リボヌクレアー
ゼ保護アッセイ法等により検出できる。

【０２１０】本発明のポリペプチドを発現している細胞
株に種々の被験化合物を添加し、本発明のポリペプチド
を特異的に認識する抗体を用いて、該ポリペプチドの発
現の増減を検定することで該ＤＮＡの転写もしくは翻訳
を促進する化合物をスクリーニングすることができる。
該ポリペプチドの発現の増減は、上記した蛍光抗体法、
酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）、放射性物質標識免疫
抗体法（ＲＩＡ）、免疫組織染色法、免疫細胞染色法、
ウェスタンブロッティング法、ドットブロッティング
法、免疫沈降法、サンドイッチＥＬＩＳＡ法等により検
出できる。

【０２１１】また、本発明のポリペプチドをコードする
ＤＮＡのプロモータ領域および転写制御領域の下流に、
クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（Ｃ
ＡＴ）遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子または緑色蛍光蛋
白質（ＧＦＰ）などをレポーター遺伝子として連結した
レポータープラスミドを構築し、適当な細胞宿主に導入
して形質転換体を得た後、その形質転換体に種々の被験
物質を添加し、レポーター遺伝子の発現の増減を解析す
ることにより、本発明のポリペプチドをコードするＤＮ
Ａの発現を転写レベルで制御する化合物をスクリーニン
グすることができる。

【０２１２】また、本発明のＤＮＡを導入して作製され
た非ヒトトランスジェニック動物に種々の被験物質を投
与して、本発明のＤＮＡを用いて、脳、膵臓、大腸等の
発現局所におけるｍＲＮＡの発現の増減を検定すること
で該ＤＮＡの転写もしくは翻訳を抑制または促進する化
合物をスクリーニングすることができる。該ＤＮＡのｍ
ＲＮＡの発現の増減は、上記したＰＣＲ法、ノーザンブ
ロット法、リボヌクレアーゼ保護アッセイ法、イン・サ
イチュ・ハイブリダイゼーション法等により検出でき
る。

【０２１３】尚、上記スクリーニング方法により得られ
た本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡの発現を転
写レベルで制御する化合物は、うつ病、不安、パーキン
ソン病、精神分裂病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファ
ナ依存症、痛み、脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化症、慢
性関節リウマチ、乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫疾患、
喘息、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、過
食、肥満、アルコール依存症、悪性腫瘍等、本発明のポ
リペプチドをコードするＤＮＡの発現変動を伴う疾患の
治療または予防のための医薬として利用することができ
る。

【０２１４】１４．本発明のポリペプチドを用いたスク
リーニング方法 本発明のポリペプチドあるいは該ポリペプチドの部分ペ
プチドを発現した形質転換体と種々の被験物質とを共存
させ、該形質転換体におけるＤＧリパーゼの活性化の変
動を解析することにより、本発明のポリペプチドに作用
する医薬をスクリーニングすることができる。また、精
製した該ポリペプチドあるいは該ポリペプチドの部分ペ
プチドも該ポリペプチドに特異的に作用する医薬のスク
リーニングに利用することができる。該スクリーニング
によって得られた化合物は、うつ病、不安、パーキンソ
ン病、精神分裂病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ
依存症、痛み、脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化症、慢性
関節リウマチ、乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫疾患、喘
息、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、過
食、肥満、アルコール依存症、悪性腫瘍等の治療または
予防のための医薬として利用することができる。

【０２１５】以下、２種のスクリーニング法について説
明する。 スクリーニング法（１） 本発明のポリペプチドあるいは該ポリペプチドの部分ペ
プチドを生産するように形質転換した微生物、動物細
胞、または昆虫細胞（以後探索用形質転換体と称する）
と被験物質とを水性媒体中で共存させ、ＤＧリパーゼの
活性を測定する。形質転換していない宿主の微生物、動
物細胞、または昆虫細胞を対照群として比較し、該形質
転換体におけるＤＧリパーゼの活性化の程度を変動させ
る被験物質を選択することで目的の物質を取得すること
ができる。また、該探索用形質転換体に特異的に結合す
る化合物あるいはポリペプチドの、該探索用形質転換体
に対する結合を阻害することを指標にして、上記と同様
の方法により、目的の物質を競合スクリーニングするこ
とができる。

【０２１６】精製した本発明のポリペプチドまたは該ポ
リペプチドの一部を構成するポリペプチドは、該ポリペ
プチドに特異的に結合する物質を選択するのに用いるこ
とができる。該物質を定量するには、本発明のポリペプ
チドを特異的に認識する抗体を用いて上記の免疫学的方
法により行うことができる。また、該ポリペプチドある
いは該ポリペプチドのポリペプチドに結合する該物質の
結合を阻害することを指標に、該物質を競合スクリーニ
ングすることができる。

【０２１７】スクリーニング法（２） 該ポリペプチドの一部を構成するペプチドを多数、プラ
スチックピンまたはある種の固体支持体上で高密度に合
成し、該ペプチドに選択的に結合する化合物あるいはポ
リペプチドを効率的にスクリーニングすることができる
（ＷＯ８４／０３５６４）。

【０２１８】その他、本発明のポリペプチドを発現する
形質転換体を用いて、遺伝子の発現を解析することによ
り、本発明のポリペプチドにより転写制御を受ける遺伝
子をスクリーニングすることができる。本発明のスクリ
ーニング方法により得られた化合物のうち、ＤＧリパー
ゼ活性を促進する物質は、精神分裂病、痛み、脳挫傷、
脊髄損傷、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎
症性大腸炎、自己免疫疾患、心筋梗塞、脳梗塞、高血
圧、嘔吐、食欲不振、悪性腫瘍等の予防薬または治療薬
として用いることができ、ＤＧリパーゼ活性を抑制する
物質は、うつ病、不安、パーキンソン病、幻覚、痴呆、
記憶障害、マリファナ依存症、喘息、過食、肥満、アル
コール依存症等の予防薬または治療薬として用いること
ができる。

【０２１９】１５．本発明のＤＮＡを用いたノックアウ
ト非ヒト動物の作製 本発明のＤＮＡを含有してなる組換えベクターを用い、
目的とする非ヒト動物、例えばウシ、ヒツジ、ヤギ、ブ
タ、ウマ、マウス、ニワトリ等の胚性幹細胞(embryonic
stem cell)において、染色体上の本発明のポリペプチ
ドをコードするＤＮＡを公知の相同組換えの手法〔例え
ば、Nature, 326, 295 (1987)、Cell, 51, 503 (1987)
等〕により欠損、不活化または任意の配列と置換した変
異クローンを作製することができる〔例えば、Nature,
350, 243 (1991)〕。胚性幹細胞の変異クローンを用
い、動物の受精卵の胚盤胞(blastocyst)への注入キメラ
法または集合キメラ法等の手法により、胚性幹細胞クロ
ーンと正常細胞からなるキメラ個体を調製することがで
きる。このキメラ個体と正常個体の掛け合わせにより、
全身の細胞の染色体上の本発明のポリペプチドをコード
するＤＮＡに任意の変異を有する個体を得ることがで
き、さらにその個体の掛け合わせにより相同染色体の双
方に変異が入ったホモ個体の中から、本発明のポリペプ
チドをコードするＤＮＡの発現が一部または完全に抑制
された個体としてノックアウト非ヒト動物を得ることが
できる。

【０２２０】また、染色体上の本発明のポリペプチドを
コードするＤＮＡの任意の位置へ変異を導入することに
より、ノックアウト非ヒト動物を作製することも可能で
ある。例えば染色体上の本発明のポリペプチドをコード
するＤＮＡの翻訳領域中へ塩基を置換、欠失、挿入等さ
せて変異を導入することにより、その産物の活性を改変
させることも可能である。また、その発現制御領域への
同様な変異を導入することにより、発現の程度、時期、
組織特異性等を改変させることも可能である。さらにCr
e-loxP系との組合せにより、より積極的に発現時期、発
現部位、発現量等を制御することも可能である。このよ
うな例として、脳のある特定の領域で発現されるプロモ
ータを利用して、その領域でのみ目的遺伝子を欠失させ
た例〔Cell, 87, 1317 (1996)〕やCreを発現するアデノ
ウィルスを用いて、目的の時期に、臓器特異的に目的遺
伝子を欠失させた例〔Science, 278, 5335 (1997)〕が
知られている。

【０２２１】従って、染色体上の本発明のポリペプチド
をコードするＤＮＡについても、このように任意の時期
や組織で発現を制御できる、または任意の挿入、欠失、
置換をその翻訳領域や発現制御領域に有する、ノックア
ウト非ヒト動物を作製することができる。ノックアウト
非ヒト動物は、脳、膵臓、大腸等、本発明のポリペプチ
ドが発現している任意の部位に、任意の時期、任意の程
度に、本発明のポリペプチドに起因する種々の疾患を誘
導することができる。

【０２２２】このように、本発明のノックアウト非ヒト
動物は、本発明のポリペプチドに起因する種々の疾患の
治療や予防において極めて有用な動物モデルとなる。特
にその治療薬、予防薬、また機能性食品、健康食品等の
評価用モデルとして非常に有用である。

【０２２３】

【実施例】実施例１ ＤＧリパーゼホモログｃＤＮＡの
探索と同定、塩基配列決定 アミノ酸配列データベースに対して、ヒトＤＧリパーゼ
のアミノ酸配列（配列番号４）と相同性を有するアミノ
酸配列をＢＬＡＳＴにてホモロジー検索したところ、Ｋ
ＩＡＡ０６５９蛋白質のアミノ酸配列（ＰＲＦ／ＳＥＱ
ＤＢ登録番号：２４１７２８４ＢＥ、配列番号５）のＮ
端側の領域がホモロジーを示し、ＫＩＡＡ０６５９蛋白
質はヒトのＤＧリパーゼホモログであることが予想され
た。しかし、ＫＩＡＡ０６５９蛋白質をコードするヒト
の脳由来のＫＩＡＡ０６５９ ｃＤＮＡ（ＧｅｎＢａｎ
ｋアクセッション番号：ＡＢ０１４５５９、配列番号
６）は完全長ではなく、データベース中のＫＩＡＡ０６
５９蛋白質のアミノ酸配列もＮ端側の領域が欠失した部
分配列であることが推定されていた。

【０２２４】まず、ヒト脳由来のマラソン・レディー・
ｃＤＮＡライブラリー（クロンテック社製）をテンプレ
ートにして３’−ＲＡＣＥ法にてＫＩＡＡ０６５９遺伝
子の転写産物の３’側領域に相当するｃＤＮＡ断片を取
得した。３’−ＲＡＣＥ法に用いた遺伝子特異的プライ
マー（配列番号７）はＫＩＡＡ０６５９ ｃＤＮＡ（配
列番号６）の２５２０番目から２５４４番目までの塩基
配列に相当する。増幅した約２０００ｂｐのＤＮＡ断片
をゲルから切り出し、キアクイック・ゲル抽出キット
〔QIAQuick Gel Extraction Kit；キアゲン（QIAGEN）
社製〕により精製し、pGEM-T Easyベクターシステムズ
〔pGEM-T Easy Vector Systems；プロメガ（Promega）
社製〕を用いてpGEM-T Easyベクターにクローン化し
た。得られたＤＮＡ断片の塩基配列（配列番号８）を、
東洋紡ジーンアナリシス株式会社に依頼して決定したと
ころ３’−ＲＡＣＥ法に用いた遺伝子特異的プライマー
に相当する配列（配列番号７）を有し、ＫＩＡＡ０６５
９ ｃＤＮＡの塩基配列の３’末端の３残基が欠損し、
欠損部分の下流にポリＡ配列が存在することを除いて、
ＫＩＡＡ０６５９ ｃＤＮＡの配列と一致した。従っ
て、得られた３’−ＲＡＣＥ産物はＫＩＡＡ０６５９
ｃＤＮＡの３’側領域に相当することが明らかであっ

【０２２５】次に、このクローンの５’側領域を取得す
るためにヒト脳由来のマラソン・レディー・ｃＤＮＡラ
イブラリー（クロンテック社製）をテンプレートにして
５’−ＲＡＣＥ法を行ったが、５’側領域を取得できな
かった。そこで、完全長のｃＤＮＡクローンを多く含む
とされるヒト脳由来のｃＤＮＡライブラリーであるキャ
ップサイトｃＤＮＡｄＴ（ニッポンジーン社製）をテン
プレートにしてＰＣＲを行い、５’側領域のｃＤＮＡ断
片を増幅し、上記の３’側領域の断片と同様にしてクロ
ーン化した。用いた遺伝子特異的プライマー（配列番号
９）はＫＩＡＡ０６５９ ｃＤＮＡ（配列番号６）の１
８９番目から２０８番目までの塩基配列のアンチセンス
鎖配列に相当する。得られたＤＮＡ断片の塩基配列（配
列番号１０）を、東洋紡ジーンアナリシス株式会社に依
頼して決定したところ、３’端にＫＩＡＡ０６５９ ｃ
ＤＮＡの１〜２０８番目を含む新規な塩基配列であっ
た。この配列の５’端側の塩基配列を解析したところ、
翻訳開始点と考えられるＡＴＧが同定された。

【０２２６】得られた５’側領域の配列と、既知のＫＩ
ＡＡ０６５９ ｃＤＮＡの配列、及び３’−ＲＡＣＥ法
にて得た転写産物の３’側領域の配列の重複部位を除い
て結合させた配列（配列番号２）は１０４２アミノ酸か
らなる単一のポリペプチド鎖（配列番号１）をコードし
ていた。このアミノ酸配列の１〜６８７番目の領域はヒ
トＤＧリパーゼのアミノ酸配列と相同性を示した（図
１）。アミノ酸配列の親水性プロットおよび膜貫通ドメ
インの予測プログラムＳＯＳＵＩ〔Bioinformatics, 1
4, 378 (1998)〕を用いた解析結果から、このアミノ酸
配列のＮ末端の領域には、ヒトＤＧリパーゼと同様に４
つの膜貫通ドメインと推定される配列（配列番号１の１
６〜３８番目、５７〜６９番目、９７〜１１９番目、１
３５〜１５７番目）を有することがわかった。また、Ｍ
ＯＴＩＦプログラム（京都大学化学研究所バイオインフ
ォマテクスセンターのゲノムネット（GenomeNet）サー
ビス、http://motif.genome.ad.jp）による機能的モチ
ーフ検索によってリパーゼの活性中心のコンセンサス配
列〔(Leu/Ile/Val)-Xaa-(Leu/Ile/Val/Phe/Tyr)-(Leu/I
le/Val/Met/Ser/Thr)-Gly-(His/Tyr/Trp/Val)-Ser-Xaa-
Gly-(Gly/Ser/Thr/Ala/Cys)〕と一致する配列（Leu-Ile
-Val-Val-Gly-His-Ser-Leu-Gly-Ala）がこのアミノ酸配
列の４６６〜４７５番目に存在することがわかった。こ
の配列はヒトＤＧリパーゼおよびカビのＤＧリパーゼで
のコンセンサス配列に相当する配列（ヒト：Leu-Val-Il
e-Val-Gly-His-Ser-Leu-Gly-Ala、カビ：Leu-Val-Val-V
al-Gly-His-Ser-Leu-Gly-Ala）ともよく一致していた。
これらの知見から配列番号１のアミノ酸配列を有する蛋
白質は４回膜貫通型のＤＧリパーゼと考えられた。アミ
ノ酸配列から推定されるＤＧリパーゼホモログの分子量
は１１５ｋＤａとなり、等電点は５．９２となった。な
お、得られたＤＧリパーゼホモログのアミノ酸配列は配
列番号４のヒトＤＧリパーゼのアミノ酸配列よりも長
く、Ｃ端側にヒトＤＧリパーゼとは相同性がない領域が
存在するが、ＭＯＴＩＦプログラムによる機能的モチー
フ検索の結果、Ｃ端側領域にシャペロニンサブユニット
ｃｐｎ６０のコンセンサス配列〔Ala-(Ala/Ser)-Xaa-(A
sp/Glu/Gln)-Glu-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Gly-Gly-(Gly/Al
a)〕と一致する配列（Ala-Ala-Ala-Asn-Asp-Glu-Glu-Gl
u-Glu-Val-Gly-Gly-Gly、配列番号１の８７４〜８８５
番目に相当する）が存在することがわかった。配列番号
３に、配列番号２の塩基配列のうちの、配列番号１のア
ミノ酸配列からなるポリペプチドをコードしている領域
（ストップコドンを含む）の塩基配列を示した。

【０２２７】実施例２ ヒトＤＧリパーゼホモログ遺伝
子の発現組織解析（１） ヒトＤＧリパーゼホモログ遺伝子がヒトのどのような組
織で発現しているのかを確認するために、ヒトの各種組
織（心臓、脳、胎盤、肺、骨格筋、腎臓、肝臓、膵臓、
脾臓、胸腺、前立腺、精巣、卵巣、小腸、大腸、白血
球）由来のｍＲＮＡから得たファースト・ストランドの
ｃＤＮＡのパネルであるＭＴＣパネル（クロンテック社
製）をテンプレートにし、ヒトＤＧリパーゼホモログｃ
ＤＮＡの塩基配列をもとにしたプライマー（配列番号１
１と配列番号１２）を用いてＰＣＲを行った。コントロ
ールとしてＧ３ＰＤＨ遺伝子についても同様にＰＣＲを
行った。ＰＣＲの後、アガロースゲル電気泳動を行い、
特異的に増幅した約８００ｂｐの長さのバンド（配列番
号２の１４９６〜２３０８番目、配列番号６の１９２〜
１００４番目に相当する）量を確認する事によって各種
ヒト組織での本遺伝子のｍＲＮＡレベルでの発現量を見
積もった。その結果、脳や膵臓、大腸において強い発現
が見られたのに対し、脾臓、胸腺、卵巣、小腸、白血球
では発現が見られなかった（図２）。

【０２２８】実施例３ ヒトＤＧリパーゼホモログ遺伝
子の発現組織解析（２） ヒトＤＧリパーゼホモログ遺伝子の発現を、ヒトの各種
組織由来のｍＲＮＡを用いてノーザンブロット法を用い
て調べた。ヒトＤＧリパーゼホモログｃＤＮＡの部分断
片（配列番号２の１から１７２０番目に相当する塩基配
列からなる）２５ｎｇを用いて、ランダムプライマーＤ
ＮＡラベリングキット（タカラバイオ社製）により［α
−^３２Ｐ］ｄＣＴＰ（パーキンエルマーライフサイエン
ス社製）により放射線ラベルしプローブＤＮＡを得た。
これをＮＩＣＫカラム（アマシャムバイオサイエンシズ
社製）で精製した。エクスプレスハイブ（ExpressHyb）
ハイブリダイゼーション溶液（クロンテック社製）をあ
らかじめ６８℃に保温しておき、ヒト脳ＭＴＮブロット
IIおよびＶ、ヒト１２レーンＭＴＮブロット（クロンテ
ック社製）を入れた。ハイブリダイゼーション溶液１ｍ
Ｌあたり１ｍｇの加熱急冷したサケ精子ＤＮＡを加え、
３０分間保温した。これに放射線ラベルしたプローブＤ
ＮＡを加え、さらに１時間、６８℃で保温した。その
後、ハイブリダイゼーション溶液を除去し、０．０５％
ＳＤＳを含む２×ＳＳＰＥ（0.3mol/L NaCl、20mmol/L
NaH₂PO₄、2mmol/L EDTA、pH7.4）で室温にて３０分間、
２回メンブレンを洗浄した。さらに、０．１％ＳＤＳを
含む０．１×ＳＳＰＥ（２×ＳＳＰＥを１／２０の濃度
に希釈した溶液）で５０℃、４０分間、２回メンブレン
を洗浄した。その後、ストレージフォスファスクリーン
（STORAGE PHOSPHOR SCREEN、コダック社製）に一晩露
光し、タイフーン（TYPHOON）８６００バリアブルモー
ドイメージャー（アマシャムファルマシアバイオテク社
製）で検出した。

【０２２９】その結果、脳、心臓、骨格筋、肝臓、など
で発現が確認されたが、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、小
腸、胎盤、肺、末梢血リンパ球などでは発現が検出され
なかった（図３）。脳内での部位では小脳、大脳皮質、
延髄、後頭葉、前頭葉、側頭葉、扁桃、尾状核、被殻、
海馬、視床などで発現が見られたが、脊髄、脳梁にはほ
とんど発現していないことが明らかとなった（図４およ
び図５）。

【０２３０】実施例４ ヒトＤＧリパーゼホモログに対
するポリクローナル抗体の取得 ヒトＤＧリパーゼホモログのアミノ酸配列の９４１〜９
５６番目の配列のＮ末端にシステインを付加した配列
（配列番号１３）からなるペプチドを化学合成し、これ
をＫＬＨにカップリングしたものをアジュバンドと共に
２匹のウサギに２週間おきに６回注射した。１２週間後
まで抗原を用いたＥＬＩＳＡによって抗体価を測定した
（図６）。２匹のうちの１匹の抗体価が十分に上昇して
いることを確認した後、免疫開始１２週目にこのウサギ
から全血採血を行った。得られた全血から遠心分離法に
よって血清を得た。

【０２３１】実施例５ ヒトＤＧリパーゼホモログの部
分長ポリペプチドの哺乳類細胞での発現とＤＧリパーゼ
活性の検出 実施例１で得られたヒトＤＧリパーゼホモログのアミノ
酸配列のうち、Ｎ末端近傍の膜貫通ドメインを除いた、
配列番号１４で表されるアミノ酸配列（配列番号１の１
７２〜１０４２番目の配列に相当する）を有する部分長
ポリペプチドを以下のようにして、哺乳類細胞で発現さ
せ、該部分長ポリペプチドが、ＤＧリパーゼ活性を有す
ることを確認した。配列番号１５に、ヒトＤＧリパーゼ
ホモログｃＤＮＡの、該部分長ポリペプチドをコードす
る領域の塩基配列を示した。

【０２３２】該部分長ポリペプチドをコードする部分長
ヌクレオチド配列をまずはじめにＰＣＲにて増幅した。
配列番号１６と配列番号１７に示すプライマーを用い
て、クロンテック社製ヒト胎児脳由来マラソン・レディ
ーｃＤＮＡをテンプレートとしてＰＣＲを行った。その
結果、推定される大きさ（約２６００ｂｐ）のＰＣＲ産
物が増幅したので、これをアガロースゲルより切り出
し、精製した後、Ａアディションキット（キアゲン社
製）によってＰＣＲ産物の末端にＡ残基を付加した。こ
れをpGEM-T Easyベクター（プロメガ社製）にＴ／Ａク
ローニングした。こうしてサブクローニングされたイン
サート部位の配列決定を行い塩基配列（配列番号２の６
１９〜３２６８番目に相当する）を確認した後、これを
テンプレートとして発現用ベクターに挿入するためのＤ
ＮＡをセンスプライマー（配列番号１８）およびアンチ
センスプライマー（配列番号１９）を用いてＰＣＲにて
増幅した。センスプライマー（配列番号１８）には開始
コドン（ATG）及び制限酵素BamHI認識サイトを、アンチ
センスプライマー（配列番号１９）には制限酵素NotI認
識サイトをそれぞれ含むように設計した。得られたＰＣ
Ｒ産物を制限酵素BamHI及びNotIにて２重切断し、これ
を同じく制限酵素BamHI及びNotIにて２重切断した哺乳
類細胞発現用ベクターであるpcDNA3（インビトロジェン
社製）に方向性を保ったままライゲーションした。こう
してヒトＤＧリパーゼホモログの部分長ポリペプチドを
哺乳類細胞で発現させるためのベクターpcDNA3-solubeD
GL2を構築した。配列番号２０にベクターとライゲーシ
ョンしたＤＮＡがコードするポリペプチドのアミノ酸配
列（配列番号１４で表されるアミノ酸配列のＮ末端に開
始コドン由来のメチオニンが付加した配列）を、配列番
号２１に該ＤＮＡのコード領域の塩基配列を示した。

【０２３３】pcDNA3-solubeDGL2をリン酸カルシウム法
〔Mol. Cell Biol., 7 2745 (1987)〕にてＣＯＳ−１細
胞に導入した（導入後の細胞を、以下、形質転換細胞と
よぶ）。４８時間後、細胞をラバーポリスマンで回収
し、ＰＢＳで３回洗浄後、細胞のペレットに１ｍＬのホ
モジネート用バッファー〔１０mmol/L Tris/HCl pH7.
4、1mmol/L EDTA, 0.15 mol/Lショ糖、100μmol/L ロイ
ペプチン、50μmol/L Ｎ−アセチル−Ｌ−ロイシル−Ｌ
−ロイシル−Ｌ−ノルロイシナル(ALLN、カルビオケム
社製)、1mmol/L ４−（２−アミノエチル）ベンゼンス
ルホニル・フルオライド・ハイドロクロライド（AEBS
F、カルビオケム社製）〕を加え、懸濁した。懸濁物を
ガラス製ダウンス（Dounce）型ホモジナイザー〔ホィー
トン（Wheaton）社製〕にて10ストローク操作すること
により破砕した。破砕物をエッペンドルフチューブへ移
し替え、バスソニック（ブランソン社）にて30秒超音波
処理した。こうして得られた破砕物を50倍希釈してプロ
テイン・アッセイ・キットＩ〔バイオ・ラッド（BioRa
d）社製〕にて蛋白質の定量を行った。ベクターの導入
をしなかったＣＯＳ−１細胞（以下、コントロール細胞
とよぶ）についても、上記と同様の操作を行った。コン
トロール細胞破砕物と形質転換細胞破砕物との蛋白質の
濃度を、ともに10 mg/mLに合わせた（以下、これらの溶
液を破砕液とよぶ）。

【０２３４】形質転換細胞の破砕液およびコントロール
細胞の破砕液５μLをＳＤＳサンプルバッファーに加
え、１００℃で５分間ボイルし、７．５％ゲル濃度のＳ
ＤＳ−ＰＡＧＥを行った。実施例４で得られた抗血清を
１次抗体として用いたウェスタンブロッティング法によ
ってヒトＤＧリパーゼホモログの部分長ポリペプチドの
検出を行った。形質転換細胞には、コントロール細胞に
は見られない特異的な約１００ｋＤａのバンドが検出さ
れ（図７）、ヒトＤＧリパーゼホモログの部分長ポリペ
プチドの発現が確認された。

【０２３５】上記で得られた形質転換細胞の破砕液を酵
素源として、［^１４Ｃ］ステアロイルＤＧを基質にした
既報〔J. Biochem. 125, 1077 (1999)〕の方法にてＤＧ
リパーゼ活性を測定した。その結果、コントロール細胞
の破砕液を酵素源とした場合と比べて形質転換細胞の破
砕液を酵素源とした場合、ＤＧリパーゼ活性が約２倍上
昇した。この活性はＤＧリパーゼの特異的な阻害剤とし
て知られているＲＨＣ−８０２６７〔バイオモル（BIOM
OL）社製〕によって完全に阻害された（図８）。これら
のことから配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有す
るヒトＤＧリパーゼホモログの部分長ポリペプチドはＤ
Ｇリパーゼ活性を有していることが明らかとなった。

【０２３６】

【発明の効果】本発明によれば、ＤＧリパーゼが関与す
る疾患の治療薬の探索、開発に有用なポリペプチド、該
ポリペプチドをコードするＤＮＡ、該ポリペプチドを認
識する抗体、およびこれらの利用方法を提供することが
できる。また、本発明のポリペプチドおよびＤＮＡを用
いることにより、生体内で多彩な生理作用を有すると考
えられるカンナビノイド受容体アゴニストである２−Ａ
Ｇ産生酵素系の活性化剤や阻害剤等をスクリーニングす
ることができる。

【０２３７】

【配列表フリーテキスト】配列番号７−ＫＩＡＡ０６５
９特異的な３’−ＲＡＣＥ用プライマー 配列番号９−ＫＩＡＡ０６５９特異的な５’−ＲＡＣＥ
用プライマー 配列番号１１−ＫＩＡＡ０６５９特異的なＰＣＲ用プラ
イマー 配列番号１２−ＫＩＡＡ０６５９特異的なＰＣＲ用プラ
イマー 配列番号１３−ヒトＤＧリパーゼホモログのアミノ酸配
列の９４１〜９５６とＮ末に付加したシステインからな
るペプチド 配列番号１６−ヒトＤＧリパーゼホモログの部分長ポリ
ペプチドをコードするＤＮＡの増幅用のセンスプライマ
ー 配列番号１７−ヒトＤＧリパーゼホモログの部分長ポリ
ペプチドをコードするＤＮＡの増幅用のアンチセンスプ
ライマー 配列番号１８−発現ベクターのための挿入ＤＮＡの増幅
用のセンスプライマー 配列番号１９−発現ベクターのための挿入ＤＮＡの増幅
用のセンスプライマー 配列番号２０−Ｎ末にメチオニン残基を付加したヒトＤ
Ｇリパーゼホモログの部分長ポリペプチド 配列番号２１−Ｎ末にメチオニン残基を付加したヒトＤ
Ｇリパーゼホモログの部分長ポリペプチドをコードする
ＤＮＡ

【０２３８】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. <120> Novel polypetide <130> H14-1964S3 <150> JP 2002-000281 <151> 2002-01-07 <160> 21 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 1042 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Pro Gly Ile Val Val Phe Arg Arg Arg Trp Ser Val Gly Ser Asp 1 5 10 15 Asp Leu Val Leu Pro Ala Ile Phe Leu Phe Leu Leu His Thr Thr Trp 20 25 30 Phe Val Ile Leu Ser Val Val Leu Phe Gly Leu Val Tyr Asn Pro His 35 40 45 Glu Ala Cys Ser Leu Asn Leu Val Asp His Gly Arg Gly Tyr Leu Gly 50 55 60 Ile Leu Leu Ser Cys Met Ile Ala Glu Met Ala Ile Ile Trp Leu Ser 65 70 75 80 Met Arg Gly Gly Ile Leu Tyr Thr Glu Pro Arg Asp Ser Met Gln Tyr 85 90 95 Val Leu Tyr Val Arg Leu Ala Ile Leu Val Ile Glu Phe Ile Tyr Ala 100 105 110 Ile Val Gly Ile Val Trp Leu Thr Gln Tyr Tyr Thr Ser Cys Asn Asp 115 120 125 Leu Thr Ala Lys Asn Val Thr Leu Gly Met Val Val Cys Asn Trp Val 130 135 140 Val Ile Leu Ser Val Cys Ile Thr Val Leu Cys Val Phe Asp Pro Thr 145 150 155 160 Gly Arg Thr Phe Val Lys Leu Arg Ala Thr Lys Arg Arg Gln Arg Asn 165 170 175 Leu Arg Thr Tyr Asn Leu Arg His Arg Leu Glu Glu Gly Gln Ala Thr 180 185 190 Ser Trp Ser Arg Arg Leu Lys Val Phe Leu Cys Cys Thr Arg Thr Lys 195 200 205 Asp Ser Gln Ser Asp Ala Tyr Ser Glu Ile Ala Tyr Leu Phe Ala Glu 210 215 220 Phe Phe Arg Asp Leu Asp Ile Val Pro Ser Asp Ile Ile Ala Gly Leu 225 230 235 240 Val Leu Leu Arg Gln Arg Gln Arg Ala Lys Arg Asn Ala Val Leu Asp 245 250 255 Glu Ala Asn Asn Asp Ile Leu Ala Phe Leu Ser Gly Met Pro Val Thr 260 265 270 Arg Asn Thr Lys Tyr Leu Asp Leu Lys Asn Ser Gln Glu Met Leu Arg 275 280 285 Tyr Lys Glu Val Cys Tyr Tyr Met Leu Phe Ala Leu Ala Ala Tyr Gly 290 295 300 Trp Pro Met Tyr Leu Met Arg Lys Pro Ala Cys Gly Leu Cys Gln Leu 305 310 315 320 Ala Arg Ser Cys Ser Cys Cys Leu Cys Pro Ala Arg Pro Arg Phe Ala 325 330 335 Pro Gly Val Thr Ile Glu Glu Asp Asn Cys Cys Gly Cys Asn Ala Ile 340 345 350 Ala Ile Arg Arg His Phe Leu Asp Glu Asn Met Thr Ala Val Asp Ile 355 360 365 Val Tyr Thr Ser Cys His Asp Ala Val Tyr Glu Thr Pro Phe Tyr Val 370 375 380 Ala Val Asp His Asp Lys Lys Lys Val Val Ile Ser Ile Arg Gly Thr 385 390 395 400 Leu Ser Pro Lys Asp Ala Leu Thr Asp Leu Thr Gly Asp Ala Glu Arg 405 410 415 Leu Pro Val Glu Gly His His Gly Thr Trp Leu Gly His Lys Gly Met 420 425 430 Val Leu Ser Ala Glu Tyr Ile Lys Lys Lys Leu Glu Gln Glu Met Val 435 440 445 Leu Ser Gln Ala Phe Gly Arg Asp Leu Gly Arg Gly Thr Lys His Tyr 450 455 460 Gly Leu Ile Val Val Gly His Ser Leu Gly Ala Gly Thr Ala Ala Ile 465 470 475 480 Leu Ser Phe Leu Leu Arg Pro Gln Tyr Pro Thr Leu Lys Cys Phe Ala 485 490 495 Tyr Ser Pro Pro Gly Gly Leu Leu Ser Glu Asp Ala Met Glu Tyr Ser 500 505 510 Lys Glu Phe Val Thr Ala Val Val Leu Gly Lys Asp Leu Val Pro Arg 515 520 525 Ile Gly Leu Ser Gln Leu Glu Gly Phe Arg Arg Gln Leu Leu Asp Val 530 535 540 Leu Gln Arg Ser Thr Lys Pro Lys Trp Arg Ile Ile Val Gly Ala Thr 545 550 555 560 Lys Cys Ile Pro Lys Ser Glu Leu Pro Glu Glu Val Glu Val Thr Thr 565 570 575 Leu Ala Ser Thr Arg Leu Trp Thr His Pro Ser Asp Leu Thr Ile Ala 580 585 590 Leu Ser Ala Ser Thr Pro Leu Tyr Pro Pro Gly Arg Ile Ile His Val 595 600 605 Val His Asn His Pro Ala Glu Gln Cys Cys Cys Cys Glu Gln Glu Glu 610 615 620 Pro Thr Tyr Phe Ala Ile Trp Gly Asp Asn Lys Ala Phe Asn Glu Val 625 630 635 640 Ile Ile Ser Pro Ala Met Leu His Glu His Leu Pro Tyr Val Val Met 645 650 655 Glu Gly Leu Asn Lys Val Leu Glu Asn Tyr Asn Lys Gly Lys Thr Ala 660 665 670 Leu Leu Ser Ala Ala Lys Val Met Val Ser Pro Thr Glu Val Asp Leu 675 680 685 Thr Pro Glu Leu Ile Phe Gln Gln Gln Pro Leu Pro Thr Gly Pro Pro 690 695 700 Met Pro Thr Gly Leu Ala Leu Glu Leu Pro Thr Ala Asp His Arg Asn 705 710 715 720 Ser Ser Val Arg Ser Lys Ser Gln Ser Glu Met Ser Leu Glu Gly Phe 725 730 735 Ser Glu Gly Arg Leu Leu Ser Pro Val Val Ala Ala Ala Ala Arg Gln 740 745 750 Asp Pro Val Glu Leu Leu Leu Leu Ser Thr Gln Glu Arg Leu Ala Ala 755 760 765 Glu Leu Gln Ala Arg Arg Ala Pro Leu Ala Thr Met Glu Ser Leu Ser 770 775 780 Asp Thr Glu Ser Leu Tyr Ser Phe Asp Ser Arg Arg Ser Ser Gly Phe 785 790 795 800 Arg Ser Ile Arg Gly Ser Pro Ser Leu His Ala Val Leu Glu Arg Asp 805 810 815 Glu Gly His Leu Phe Tyr Ile Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Asn Pro 820 825 830 Ser Leu Ser Ser Arg Thr Glu Leu Leu Ala Ala Asp Ser Leu Ser Lys 835 840 845 His Ser Gln Asp Thr Gln Pro Leu Glu Ala Ala Leu Gly Ser Gly Gly 850 855 860 Val Thr Pro Glu Arg Pro Pro Ser Ala Ala Ala Asn Asp Glu Glu Glu 865 870 875 880 Glu Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Ala Ser Arg Gly Glu Leu Ala 885 890 895 Leu His Asn Gly Arg Leu Gly Asp Ser Pro Ser Pro Gln Val Leu Glu 900 905 910 Phe Ala Glu Phe Ile Asp Ser Leu Phe Asn Leu Asp Ser Lys Ser Ser 915 920 925 Ser Phe Gln Asp Leu Tyr Cys Met Val Val Pro Glu Ser Pro Thr Ser 930 935 940 Asp Tyr Ala Glu Gly Pro Lys Ser Pro Ser Gln Gln Glu Ile Leu Leu 945 950 955 960 Arg Ala Gln Phe Glu Pro Asn Leu Val Pro Lys Pro Pro Arg Leu Phe 965 970 975 Ala Gly Ser Ala Asp Pro Ser Ser Gly Ile Ser Leu Ser Pro Ser Phe 980 985 990 Pro Leu Ser Ser Ser Gly Glu Leu Met Asp Leu Thr Pro Thr Gly Leu 995 1000 1005 Ser Ser Gln Glu Cys Leu Ala Ala Asp Lys Ile Arg Thr Ser Thr Pro 1010 1015 1020 Thr Gly His Gly Ala Ser Pro Ala Lys Gln Asp Glu Leu Val Ile Ser 1025 1030 1035 1040 Ala Arg <210> 2 <211> 5788 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <222> (1)..(5788) <223> /organism="Homo sapiens" <220> <221> CDS <222> (122)..(3250) <400> 2 agtgaatcgg ggccttgggg agcccaggat ggaggtggcg gtcgcggcgg cgggccgagc 60 cctgcggcgg gcgggaggag gtgagcacca ggcccactga gcctctgcag agccaccagc 120 c atg ccc ggg atc gtg gtg ttc cgg cgg cgc tgg tct gtg ggc agt gat 169 Met Pro Gly Ile Val Val Phe Arg Arg Arg Trp Ser Val Gly Ser Asp 1 5 10 15 gac ctc gtc cta ccg gcc atc ttc ctc ttt ctc ctg cat acc acc tgg 217 Asp Leu Val Leu Pro Ala Ile Phe Leu Phe Leu Leu His Thr Thr Trp 20 25 30 ttt gtg atc ctg tcc gtg gtg ctc ttc ggc ctg gtc tat aac ccg cac 265 Phe Val Ile Leu Ser Val Val Leu Phe Gly Leu Val Tyr Asn Pro His 35 40 45 gag gcc tgc tcc ctg aac ctg gtg gac cac ggc cgc ggc tac ctg ggc 313 Glu Ala Cys Ser Leu Asn Leu Val Asp His Gly Arg Gly Tyr Leu Gly 50 55 60 atc ctg ctg agc tgc atg atc gct gag atg gcc atc atc tgg ctg agc 361 Ile Leu Leu Ser Cys Met Ile Ala Glu Met Ala Ile Ile Trp Leu Ser 65 70 75 80 atg cgc ggg ggc atc ctc tac acg gag ccc cgt gac tcc atg cag tac 409 Met Arg Gly Gly Ile Leu Tyr Thr Glu Pro Arg Asp Ser Met Gln Tyr 85 90 95 gtg ctc tac gtg cgc ctg gcc atc ctg gtg atc gag ttc atc tac gcc 457 Val Leu Tyr Val Arg Leu Ala Ile Leu Val Ile Glu Phe Ile Tyr Ala 100 105 110 atc gtg ggc atc gtc tgg ctc act cag tac tac acc tcc tgc aac gac 505 Ile Val Gly Ile Val Trp Leu Thr Gln Tyr Tyr Thr Ser Cys Asn Asp 115 120 125 ctc act gcc aag aat gtc acc ctc gga atg gtt gtc tgc aac tgg gta 553 Leu Thr Ala Lys Asn Val Thr Leu Gly Met Val Val Cys Asn Trp Val 130 135 140 gtc atc ctc agt gtg tgc atc act gtc ctc tgc gtc ttc gac ccc acg 601 Val Ile Leu Ser Val Cys Ile Thr Val Leu Cys Val Phe Asp Pro Thr 145 150 155 160 ggc cgc acc ttt gtc aag ctg aga gcc acc aag agg agg cag cgt aac 649 Gly Arg Thr Phe Val Lys Leu Arg Ala Thr Lys Arg Arg Gln Arg Asn 165 170 175 ctg cgg acc tac aac ctg cgg cac cgc tta gag gag ggt caa gcc acc 697 Leu Arg Thr Tyr Asn Leu Arg His Arg Leu Glu Glu Gly Gln Ala Thr 180 185 190 agc tgg tcg cgc cgg ctc aaa gtg ttc ctc tgc tgc acg cgg acg aag 745 Ser Trp Ser Arg Arg Leu Lys Val Phe Leu Cys Cys Thr Arg Thr Lys 195 200 205 gac tcc cag tca gat gcc tac tca gaa atc gcc tac ctc ttt gcg gag 793 Asp Ser Gln Ser Asp Ala Tyr Ser Glu Ile Ala Tyr Leu Phe Ala Glu 210 215 220 ttc ttc cgg gac ctt gac att gtg cca tcc gac atc att gct ggc ctg 841 Phe Phe Arg Asp Leu Asp Ile Val Pro Ser Asp Ile Ile Ala Gly Leu 225 230 235 240 gtg ctg ctc cgg cag cgg cag cgg gcc aag cgc aac gcc gtg ctg gac 889 Val Leu Leu Arg Gln Arg Gln Arg Ala Lys Arg Asn Ala Val Leu Asp 245 250 255 gag gca aac aat gac atc ttg gcc ttc ctg tct ggg atg ccg gtg acc 937 Glu Ala Asn Asn Asp Ile Leu Ala Phe Leu Ser Gly Met Pro Val Thr 260 265 270 aga aac acc aag tac ctc gac ctc aag aat tca caa gag atg ctc cgc 985 Arg Asn Thr Lys Tyr Leu Asp Leu Lys Asn Ser Gln Glu Met Leu Arg 275 280 285 tac aaa gag gtc tgc tac tac atg ctc ttt gcc ctg gct gcc tac ggg 1033 Tyr Lys Glu Val Cys Tyr Tyr Met Leu Phe Ala Leu Ala Ala Tyr Gly 290 295 300 tgg ccc atg tac ctg atg cgg aag ccc gcc tgc ggc ctc tgc caa ctg 1081 Trp Pro Met Tyr Leu Met Arg Lys Pro Ala Cys Gly Leu Cys Gln Leu 305 310 315 320 gct cgg tcc tgc tcg tgt tgc ctg tgt cct gcg agg ccg cgg ttc gcc 1129 Ala Arg Ser Cys Ser Cys Cys Leu Cys Pro Ala Arg Pro Arg Phe Ala 325 330 335 cct gga gtc acc atc gag gaa gac aac tgc tgt ggc tgt aat gcc att 1177 Pro Gly Val Thr Ile Glu Glu Asp Asn Cys Cys Gly Cys Asn Ala Ile 340 345 350 gcc atc cgg cgc cac ttc ctg gac gag aac atg act gcg gtg gac atc 1225 Ala Ile Arg Arg His Phe Leu Asp Glu Asn Met Thr Ala Val Asp Ile 355 360 365 gtc tat acc tcc tgc cat gat gcg gtc tat gaa acg ccc ttc tac gtg 1273 Val Tyr Thr Ser Cys His Asp Ala Val Tyr Glu Thr Pro Phe Tyr Val 370 375 380 gcg gtg gac cat gac aag aag aaa gtg gtg atc agt atc cgg ggg acc 1321 Ala Val Asp His Asp Lys Lys Lys Val Val Ile Ser Ile Arg Gly Thr 385 390 395 400 ctg tcc ccc aag gat gcc ctg act gac ctg acg ggt gat gct gag cgc 1369 Leu Ser Pro Lys Asp Ala Leu Thr Asp Leu Thr Gly Asp Ala Glu Arg 405 410 415 ctc ccc gtg gag ggg cac cac ggc acc tgg ctg ggc cac aag ggt atg 1417 Leu Pro Val Glu Gly His His Gly Thr Trp Leu Gly His Lys Gly Met 420 425 430 gtc ctc tca gct gag tac atc aag aag aaa ctg gag cag gag atg gtc 1465 Val Leu Ser Ala Glu Tyr Ile Lys Lys Lys Leu Glu Gln Glu Met Val 435 440 445 ctg tcc cag gcc ttt ggg cga gac ctg ggc cgc gga acc aaa cac tac 1513 Leu Ser Gln Ala Phe Gly Arg Asp Leu Gly Arg Gly Thr Lys His Tyr 450 455 460 ggc ctg att gtg gtg ggc cac tcc ctg ggc gcg ggc act gct gcc atc 1561 Gly Leu Ile Val Val Gly His Ser Leu Gly Ala Gly Thr Ala Ala Ile 465 470 475 480 ctc tcc ttc ctt ctg cgc cca cag tat ccg acc ctc aag tgc ttt gcc 1609 Leu Ser Phe Leu Leu Arg Pro Gln Tyr Pro Thr Leu Lys Cys Phe Ala 485 490 495 tac tcc ccg cca ggg ggc ctg ctg agt gag gat gcg atg gag tat tcc 1657 Tyr Ser Pro Pro Gly Gly Leu Leu Ser Glu Asp Ala Met Glu Tyr Ser 500 505 510 aag gag ttc gtg act gct gtg gtt ctg ggc aaa gac ctc gtc ccc agg 1705 Lys Glu Phe Val Thr Ala Val Val Leu Gly Lys Asp Leu Val Pro Arg 515 520 525 att ggc ctc tct cag ctg gaa ggc ttc cgc aga cag ctc ctg gat gtc 1753 Ile Gly Leu Ser Gln Leu Glu Gly Phe Arg Arg Gln Leu Leu Asp Val 530 535 540 ctg cag cga agc acc aag ccc aaa tgg cgg atc atc gtg ggg gcc acc 1801 Leu Gln Arg Ser Thr Lys Pro Lys Trp Arg Ile Ile Val Gly Ala Thr 545 550 555 560 aaa tgc atc ccc aag tcg gag ctg cct gag gag gta gag gtg acc acc 1849 Lys Cys Ile Pro Lys Ser Glu Leu Pro Glu Glu Val Glu Val Thr Thr 565 570 575 ctg gcc agc acg cgg ctc tgg acc cac ccc agc gac cta act ata gcc 1897 Leu Ala Ser Thr Arg Leu Trp Thr His Pro Ser Asp Leu Thr Ile Ala 580 585 590 ctc tca gcc agc act cca ctc tac ccg ccc ggc cgc atc atc cac gtg 1945 Leu Ser Ala Ser Thr Pro Leu Tyr Pro Pro Gly Arg Ile Ile His Val 595 600 605 gtc cac aac cac cct gca gag cag tgc tgc tgc tgt gag cag gag gag 1993 Val His Asn His Pro Ala Glu Gln Cys Cys Cys Cys Glu Gln Glu Glu 610 615 620 ccc aca tac ttt gcc atc tgg ggc gac aac aag gcc ttc aat gag gtg 2041 Pro Thr Tyr Phe Ala Ile Trp Gly Asp Asn Lys Ala Phe Asn Glu Val 625 630 635 640 atc atc tcg cca gcc atg ctg cat gag cac ctg ccc tat gtg gtc atg 2089 Ile Ile Ser Pro Ala Met Leu His Glu His Leu Pro Tyr Val Val Met 645 650 655 gag ggg ctc aac aag gtg ctg gag aac tac aac aag ggg aag acc gct 2137 Glu Gly Leu Asn Lys Val Leu Glu Asn Tyr Asn Lys Gly Lys Thr Ala 660 665 670 ctg ctc tct gca gcc aag gtc atg gtg agc cct acc gag gtg gac ctg 2185 Leu Leu Ser Ala Ala Lys Val Met Val Ser Pro Thr Glu Val Asp Leu 675 680 685 act cct gag ctc atc ttc cag cag cag cca ctc ccc acg ggg ccg ccc 2233 Thr Pro Glu Leu Ile Phe Gln Gln Gln Pro Leu Pro Thr Gly Pro Pro 690 695 700 atg ccc act ggc ctt gcc ctg gag ctg ccg act gca gac cac cgc aac 2281 Met Pro Thr Gly Leu Ala Leu Glu Leu Pro Thr Ala Asp His Arg Asn 705 710 715 720 agc agc gtc agg agc aag tcc cag tct gag atg agc ctg gag ggc ttc 2329 Ser Ser Val Arg Ser Lys Ser Gln Ser Glu Met Ser Leu Glu Gly Phe 725 730 735 tcg gag ggg cgg ctg ctg tcg cca gtg gtt gcg gcg gcg gcc cgc cag 2377 Ser Glu Gly Arg Leu Leu Ser Pro Val Val Ala Ala Ala Ala Arg Gln 740 745 750 gac ccg gtg gag ctg ctg ctg ctg tct acc cag gag cgg ctg gca gcg 2425 Asp Pro Val Glu Leu Leu Leu Leu Ser Thr Gln Glu Arg Leu Ala Ala 755 760 765 gag ctg cag gcc cgg cgg gca cca ctg gcc acc atg gag agc ctc tcg 2473 Glu Leu Gln Ala Arg Arg Ala Pro Leu Ala Thr Met Glu Ser Leu Ser 770 775 780 gac act gag tcc ctg tac agc ttc gac tcg cgc cgc tcc tca ggc ttc 2521 Asp Thr Glu Ser Leu Tyr Ser Phe Asp Ser Arg Arg Ser Ser Gly Phe 785 790 795 800 cgc agc atc cgg ggc tcc ccc agc ctc cac gct gtg ctg gag cgt gat 2569 Arg Ser Ile Arg Gly Ser Pro Ser Leu His Ala Val Leu Glu Arg Asp 805 810 815 gaa ggc cac ctc ttc tac att gac cct gcc atc ccc gag gaa aac cca 2617 Glu Gly His Leu Phe Tyr Ile Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Asn Pro 820 825 830 tcc ctg agc tcg cgc act gag ctg ctg gcg gcc gac agc ctg tcc aag 2665 Ser Leu Ser Ser Arg Thr Glu Leu Leu Ala Ala Asp Ser Leu Ser Lys 835 840 845 cac tca cag gac acg cag ccc ctg gag gcg gcc ctg ggc agt ggc ggc 2713 His Ser Gln Asp Thr Gln Pro Leu Glu Ala Ala Leu Gly Ser Gly Gly 850 855 860 gtc act cct gag cgg ccc ccc agt gct gcg gcc aat gac gag gag gaa 2761 Val Thr Pro Glu Arg Pro Pro Ser Ala Ala Ala Asn Asp Glu Glu Glu 865 870 875 880 gag gtt ggc ggt ggg ggt ggc ggg ccg gcc tcc cgc ggg gag ctg gcg 2809 Glu Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Ala Ser Arg Gly Glu Leu Ala 885 890 895 ctg cac aat ggg cgc ctg ggg gac tcg ccc agt cct cag gtg ctg gaa 2857 Leu His Asn Gly Arg Leu Gly Asp Ser Pro Ser Pro Gln Val Leu Glu 900 905 910 ttc gcc gag ttc atc gac agc ctc ttc aac ctg gac agc aag agc agc 2905 Phe Ala Glu Phe Ile Asp Ser Leu Phe Asn Leu Asp Ser Lys Ser Ser 915 920 925 tcc ttc caa gac ctc tac tgc atg gtg gtg ccc gag agc ccc acc agt 2953 Ser Phe Gln Asp Leu Tyr Cys Met Val Val Pro Glu Ser Pro Thr Ser 930 935 940 gac tac gct gag ggc ccc aag tcc ccc agc cag caa gag atc ctg ctc 3001 Asp Tyr Ala Glu Gly Pro Lys Ser Pro Ser Gln Gln Glu Ile Leu Leu 945 950 955 960 cgt gcc cag ttc gag ccc aac ctg gtg ccc aag ccc cca cgg ctc ttt 3049 Arg Ala Gln Phe Glu Pro Asn Leu Val Pro Lys Pro Pro Arg Leu Phe 965 970 975 gcc ggc tca gcc gac ccc tcc tcg ggc atc tca ctc tcg ccc tcc ttc 3097 Ala Gly Ser Ala Asp Pro Ser Ser Gly Ile Ser Leu Ser Pro Ser Phe 980 985 990 ccg ctc agc tcc tcg ggt gag ctc atg gac ctg acg ccc acg ggc ctc 3145 Pro Leu Ser Ser Ser Gly Glu Leu Met Asp Leu Thr Pro Thr Gly Leu 995 1000 1005 agt agc cag gaa tgc ctg gcg gct gac aag atc cgg act tct acc 3190 Ser Ser Gln Glu Cys Leu Ala Ala Asp Lys Ile Arg Thr Ser Thr 1010 1015 1020 ccc act ggc cac gga gcc agc ccc gcc aag caa gat gag ctg gtc 3235 Pro Thr Gly His Gly Ala Ser Pro Ala Lys Gln Asp Glu Leu Val 1025 1030 1035 atc tca gca cgc tag caccccagtt gcgtggccag ccgggcccag gcaggagcag 3290 Ile Ser Ala Arg 1040 gtggccctgt gggcacctgg tgcctgcccc ctgccgggca gctttaagga cagaccccca 3350 ggggcagttt agcctcaggc acaggcatcg ctgctgagct gggggtccgc atccctacct 3410 cagcttagga cccccagagc caaggtggct gggatctggc cccacagatg gggaaagatg 3470 gggaagggtg tggagtgggg aggagcctgg gcagcctgct gggtgggcca cactcagcct 3530 gactgccctc catgggggca ttctggcacc ccctgctcca ggacaggcca tgggcaagct 3590 gcctcccatc actgcctgct ggctgctctc ccaggggcca ggtggagagc agtgcccccc 3650 gacacatgta ttctcatctg tggtccaggc cggcatcgtc ctggccaccc cccagatctg 3710 gtgcctgctg gccggccccc tggggtgccc ctgccgaggt ggcctgcagt gctgtacatg 3770 tttacagaag ctgctgggct tggctcagga tgtgttctgg gcttgcaagc cccccgccca 3830 atcatgtgtt cagtagccat cctctgagca gggcccaagg cagccagggg cctggagggg 3890 ccagaggagg gtggggtcag ggccgcccct tctctgcctt gtgcctctca tgctgcctcc 3950 tctgcccatg ggtcctgggc acccaggcct gccctgcctg ctggctactt cctggcttac 4010 cttctacccc caaggatcct caccacccaa agggtggtgg gcactgctgt gaccacccca 4070 gctgcagagt cagtgccctg ggtggaagga aggcactgag agcccccttc ctctgagggc 4130 cccacctcac cccttggtgt cacccccacc acgcctaggc agctctgggc cctgggatct 4190 ggaaccaaca cacccctgtt cccctcagct ttccctcctc gctggcctgg gcaccctcct 4250 gggagcaggc cttcctccct cccaccccca atgtcctgtt ggtaggaggt ggggccaaga 4310 gtggggtatg gtgggccttg gctggagacc tctgtccact gcccagggag gggcctgggg 4370 ctgggagcag tcccggttta gcctgaggtc cccatagggc ttcctcccct gctgggtttg 4430 ggaagcagtt agggagatag cgacccggag tttccccaga agcggggtgg gagggtgtgc 4490 atgctagtgt tggcgcgtat gcatgtgcat gagtgtgcac cgttcctaag gaaggggcct 4550 ctggggctgc ccaccctacc tgccctgcct gcctgctgcc cctcccagcc tgccaagaaa 4610 acggtagggg agcatgatgg ggcctttgag gcagggtcgc agggacaagc tcagctttag 4670 gcaccatctg ttcccatcgc gcctgctgct gtgacccgtt ttggaaaact ggtgtgtacc 4730 gaggcgctga ctgcacggct gaccgcctgc tcgtgccttc attctgcagc ggcatggtcc 4790 ctcccattct ggctccacct gcagcctccc tgggtggcct aggctccccc gaccaagaga 4850 cctccctctc atgatcactg gtacctgggg gcctgaattc tggcccccgg ctccccacac 4910 agctgggact ggcctggatg gctgtcctgg gagcccctgc ccaccctgac agagggagct 4970 gggcctcccc tcatcctctg taactcccgc cttcaccaga ctcaaggaca ccctggccct 5030 gctgaggcat acagagcttc agcccagcac agaagcaaga caaaatcagt ggctcttaga 5090 gtttagaaaa caagacagac tctcagatga aagatctgac aagcaccgtg gccagtcaca 5150 gggagagact tgatgtctgg ccttttaatt cctcctctgc cagggtgggt cctgggacct 5210 ctaatgtggg catgtcgtcc accccaggac aagccatcag ggacagaccc cccaccccca 5270 aggctgcagc cacaccatgt ttcaggcttg gggctggggc aggcttgggc tcaatcctgg 5330 gcacccaggg gcagcccacc cctaacctgg ctcctaccca cctcgccctt gaaggatggg 5390 cctgctgcac gtctccctcc tccaccccat accacactgg ggggtctgag ccacccccct 5450 cagccccgtt cggctcagac cgacccccac tccatcccca gacctgcagc acaagtgcgc 5510 gggcctgtcc tcccaggggc ctgggcgact ccatatgcaa tcagtagcga gcagccgggc 5570 cccacagacc ctcatgcact ctcttacgtg ccattctccc cagacttttt ttgtacttaa 5630 tgtatgaaag atccaaacta atattgctgt aaaaaggaga gacaaattaa tatagcttat 5690 tctataaata tatctgtata taaaggtttc tgtatattgt atagagctgt gtataaactg 5750 gatgtagaag aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa 5788 <210> 3 <211> 3129 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <222> (1)..(3129) <223> /organism="Homo sapiens" <220> <221> CDS <222> (1)..(3129) <400> 3 atg ccc ggg atc gtg gtg ttc cgg cgg cgc tgg tct gtg ggc agt gat 48 Met Pro Gly Ile Val Val Phe Arg Arg Arg Trp Ser Val Gly Ser Asp 1 5 10 15 gac ctc gtc cta ccg gcc atc ttc ctc ttt ctc ctg cat acc acc tgg 96 Asp Leu Val Leu Pro Ala Ile Phe Leu Phe Leu Leu His Thr Thr Trp 20 25 30 ttt gtg atc ctg tcc gtg gtg ctc ttc ggc ctg gtc tat aac ccg cac 144 Phe Val Ile Leu Ser Val Val Leu Phe Gly Leu Val Tyr Asn Pro His 35 40 45 gag gcc tgc tcc ctg aac ctg gtg gac cac ggc cgc ggc tac ctg ggc 192 Glu Ala Cys Ser Leu Asn Leu Val Asp His Gly Arg Gly Tyr Leu Gly 50 55 60 atc ctg ctg agc tgc atg atc gct gag atg gcc atc atc tgg ctg agc 240 Ile Leu Leu Ser Cys Met Ile Ala Glu Met Ala Ile Ile Trp Leu Ser 65 70 75 80 atg cgc ggg ggc atc ctc tac acg gag ccc cgt gac tcc atg cag tac 288 Met Arg Gly Gly Ile Leu Tyr Thr Glu Pro Arg Asp Ser Met Gln Tyr 85 90 95 gtg ctc tac gtg cgc ctg gcc atc ctg gtg atc gag ttc atc tac gcc 336 Val Leu Tyr Val Arg Leu Ala Ile Leu Val Ile Glu Phe Ile Tyr Ala 100 105 110 atc gtg ggc atc gtc tgg ctc act cag tac tac acc tcc tgc aac gac 384 Ile Val Gly Ile Val Trp Leu Thr Gln Tyr Tyr Thr Ser Cys Asn Asp 115 120 125 ctc act gcc aag aat gtc acc ctc gga atg gtt gtc tgc aac tgg gta 432 Leu Thr Ala Lys Asn Val Thr Leu Gly Met Val Val Cys Asn Trp Val 130 135 140 gtc atc ctc agt gtg tgc atc act gtc ctc tgc gtc ttc gac ccc acg 480 Val Ile Leu Ser Val Cys Ile Thr Val Leu Cys Val Phe Asp Pro Thr 145 150 155 160 ggc cgc acc ttt gtc aag ctg aga gcc acc aag agg agg cag cgt aac 528 Gly Arg Thr Phe Val Lys Leu Arg Ala Thr Lys Arg Arg Gln Arg Asn 165 170 175 ctg cgg acc tac aac ctg cgg cac cgc tta gag gag ggt caa gcc acc 576 Leu Arg Thr Tyr Asn Leu Arg His Arg Leu Glu Glu Gly Gln Ala Thr 180 185 190 agc tgg tcg cgc cgg ctc aaa gtg ttc ctc tgc tgc acg cgg acg aag 624 Ser Trp Ser Arg Arg Leu Lys Val Phe Leu Cys Cys Thr Arg Thr Lys 195 200 205 gac tcc cag tca gat gcc tac tca gaa atc gcc tac ctc ttt gcg gag 672 Asp Ser Gln Ser Asp Ala Tyr Ser Glu Ile Ala Tyr Leu Phe Ala Glu 210 215 220 ttc ttc cgg gac ctt gac att gtg cca tcc gac atc att gct ggc ctg 720 Phe Phe Arg Asp Leu Asp Ile Val Pro Ser Asp Ile Ile Ala Gly Leu 225 230 235 240 gtg ctg ctc cgg cag cgg cag cgg gcc aag cgc aac gcc gtg ctg gac 768 Val Leu Leu Arg Gln Arg Gln Arg Ala Lys Arg Asn Ala Val Leu Asp 245 250 255 gag gca aac aat gac atc ttg gcc ttc ctg tct ggg atg ccg gtg acc 816 Glu Ala Asn Asn Asp Ile Leu Ala Phe Leu Ser Gly Met Pro Val Thr 260 265 270 aga aac acc aag tac ctc gac ctc aag aat tca caa gag atg ctc cgc 864 Arg Asn Thr Lys Tyr Leu Asp Leu Lys Asn Ser Gln Glu Met Leu Arg 275 280 285 tac aaa gag gtc tgc tac tac atg ctc ttt gcc ctg gct gcc tac ggg 912 Tyr Lys Glu Val Cys Tyr Tyr Met Leu Phe Ala Leu Ala Ala Tyr Gly 290 295 300 tgg ccc atg tac ctg atg cgg aag ccc gcc tgc ggc ctc tgc caa ctg 960 Trp Pro Met Tyr Leu Met Arg Lys Pro Ala Cys Gly Leu Cys Gln Leu 305 310 315 320 gct cgg tcc tgc tcg tgt tgc ctg tgt cct gcg agg ccg cgg ttc gcc 1008 Ala Arg Ser Cys Ser Cys Cys Leu Cys Pro Ala Arg Pro Arg Phe Ala 325 330 335 cct gga gtc acc atc gag gaa gac aac tgc tgt ggc tgt aat gcc att 1056 Pro Gly Val Thr Ile Glu Glu Asp Asn Cys Cys Gly Cys Asn Ala Ile 340 345 350 gcc atc cgg cgc cac ttc ctg gac gag aac atg act gcg gtg gac atc 1104 Ala Ile Arg Arg His Phe Leu Asp Glu Asn Met Thr Ala Val Asp Ile 355 360 365 gtc tat acc tcc tgc cat gat gcg gtc tat gaa acg ccc ttc tac gtg 1152 Val Tyr Thr Ser Cys His Asp Ala Val Tyr Glu Thr Pro Phe Tyr Val 370 375 380 gcg gtg gac cat gac aag aag aaa gtg gtg atc agt atc cgg ggg acc 1200 Ala Val Asp His Asp Lys Lys Lys Val Val Ile Ser Ile Arg Gly Thr 385 390 395 400 ctg tcc ccc aag gat gcc ctg act gac ctg acg ggt gat gct gag cgc 1248 Leu Ser Pro Lys Asp Ala Leu Thr Asp Leu Thr Gly Asp Ala Glu Arg 405 410 415 ctc ccc gtg gag ggg cac cac ggc acc tgg ctg ggc cac aag ggt atg 1296 Leu Pro Val Glu Gly His His Gly Thr Trp Leu Gly His Lys Gly Met 420 425 430 gtc ctc tca gct gag tac atc aag aag aaa ctg gag cag gag atg gtc 1344 Val Leu Ser Ala Glu Tyr Ile Lys Lys Lys Leu Glu Gln Glu Met Val 435 440 445 ctg tcc cag gcc ttt ggg cga gac ctg ggc cgc gga acc aaa cac tac 1392 Leu Ser Gln Ala Phe Gly Arg Asp Leu Gly Arg Gly Thr Lys His Tyr 450 455 460 ggc ctg att gtg gtg ggc cac tcc ctg ggc gcg ggc act gct gcc atc 1440 Gly Leu Ile Val Val Gly His Ser Leu Gly Ala Gly Thr Ala Ala Ile 465 470 475 480 ctc tcc ttc ctt ctg cgc cca cag tat ccg acc ctc aag tgc ttt gcc 1488 Leu Ser Phe Leu Leu Arg Pro Gln Tyr Pro Thr Leu Lys Cys Phe Ala 485 490 495 tac tcc ccg cca ggg ggc ctg ctg agt gag gat gcg atg gag tat tcc 1536 Tyr Ser Pro Pro Gly Gly Leu Leu Ser Glu Asp Ala Met Glu Tyr Ser 500 505 510 aag gag ttc gtg act gct gtg gtt ctg ggc aaa gac ctc gtc ccc agg 1584 Lys Glu Phe Val Thr Ala Val Val Leu Gly Lys Asp Leu Val Pro Arg 515 520 525 att ggc ctc tct cag ctg gaa ggc ttc cgc aga cag ctc ctg gat gtc 1632 Ile Gly Leu Ser Gln Leu Glu Gly Phe Arg Arg Gln Leu Leu Asp Val 530 535 540 ctg cag cga agc acc aag ccc aaa tgg cgg atc atc gtg ggg gcc acc 1680 Leu Gln Arg Ser Thr Lys Pro Lys Trp Arg Ile Ile Val Gly Ala Thr 545 550 555 560 aaa tgc atc ccc aag tcg gag ctg cct gag gag gta gag gtg acc acc 1728 Lys Cys Ile Pro Lys Ser Glu Leu Pro Glu Glu Val Glu Val Thr Thr 565 570 575 ctg gcc agc acg cgg ctc tgg acc cac ccc agc gac cta act ata gcc 1776 Leu Ala Ser Thr Arg Leu Trp Thr His Pro Ser Asp Leu Thr Ile Ala 580 585 590 ctc tca gcc agc act cca ctc tac ccg ccc ggc cgc atc atc cac gtg 1824 Leu Ser Ala Ser Thr Pro Leu Tyr Pro Pro Gly Arg Ile Ile His Val 595 600 605 gtc cac aac cac cct gca gag cag tgc tgc tgc tgt gag cag gag gag 1872 Val His Asn His Pro Ala Glu Gln Cys Cys Cys Cys Glu Gln Glu Glu 610 615 620 ccc aca tac ttt gcc atc tgg ggc gac aac aag gcc ttc aat gag gtg 1920 Pro Thr Tyr Phe Ala Ile Trp Gly Asp Asn Lys Ala Phe Asn Glu Val 625 630 635 640 atc atc tcg cca gcc atg ctg cat gag cac ctg ccc tat gtg gtc atg 1968 Ile Ile Ser Pro Ala Met Leu His Glu His Leu Pro Tyr Val Val Met 645 650 655 gag ggg ctc aac aag gtg ctg gag aac tac aac aag ggg aag acc gct 2016 Glu Gly Leu Asn Lys Val Leu Glu Asn Tyr Asn Lys Gly Lys Thr Ala 660 665 670 ctg ctc tct gca gcc aag gtc atg gtg agc cct acc gag gtg gac ctg 2064 Leu Leu Ser Ala Ala Lys Val Met Val Ser Pro Thr Glu Val Asp Leu 675 680 685 act cct gag ctc atc ttc cag cag cag cca ctc ccc acg ggg ccg ccc 2112 Thr Pro Glu Leu Ile Phe Gln Gln Gln Pro Leu Pro Thr Gly Pro Pro 690 695 700 atg ccc act ggc ctt gcc ctg gag ctg ccg act gca gac cac cgc aac 2160 Met Pro Thr Gly Leu Ala Leu Glu Leu Pro Thr Ala Asp His Arg Asn 705 710 715 720 agc agc gtc agg agc aag tcc cag tct gag atg agc ctg gag ggc ttc 2208 Ser Ser Val Arg Ser Lys Ser Gln Ser Glu Met Ser Leu Glu Gly Phe 725 730 735 tcg gag ggg cgg ctg ctg tcg cca gtg gtt gcg gcg gcg gcc cgc cag 2256 Ser Glu Gly Arg Leu Leu Ser Pro Val Val Ala Ala Ala Ala Arg Gln 740 745 750 gac ccg gtg gag ctg ctg ctg ctg tct acc cag gag cgg ctg gca gcg 2304 Asp Pro Val Glu Leu Leu Leu Leu Ser Thr Gln Glu Arg Leu Ala Ala 755 760 765 gag ctg cag gcc cgg cgg gca cca ctg gcc acc atg gag agc ctc tcg 2352 Glu Leu Gln Ala Arg Arg Ala Pro Leu Ala Thr Met Glu Ser Leu Ser 770 775 780 gac act gag tcc ctg tac agc ttc gac tcg cgc cgc tcc tca ggc ttc 2400 Asp Thr Glu Ser Leu Tyr Ser Phe Asp Ser Arg Arg Ser Ser Gly Phe 785 790 795 800 cgc agc atc cgg ggc tcc ccc agc ctc cac gct gtg ctg gag cgt gat 2448 Arg Ser Ile Arg Gly Ser Pro Ser Leu His Ala Val Leu Glu Arg Asp 805 810 815 gaa ggc cac ctc ttc tac att gac cct gcc atc ccc gag gaa aac cca 2496 Glu Gly His Leu Phe Tyr Ile Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Asn Pro 820 825 830 tcc ctg agc tcg cgc act gag ctg ctg gcg gcc gac agc ctg tcc aag 2544 Ser Leu Ser Ser Arg Thr Glu Leu Leu Ala Ala Asp Ser Leu Ser Lys 835 840 845 cac tca cag gac acg cag ccc ctg gag gcg gcc ctg ggc agt ggc ggc 2592 His Ser Gln Asp Thr Gln Pro Leu Glu Ala Ala Leu Gly Ser Gly Gly 850 855 860 gtc act cct gag cgg ccc ccc agt gct gcg gcc aat gac gag gag gaa 2640 Val Thr Pro Glu Arg Pro Pro Ser Ala Ala Ala Asn Asp Glu Glu Glu 865 870 875 880 gag gtt ggc ggt ggg ggt ggc ggg ccg gcc tcc cgc ggg gag ctg gcg 2688 Glu Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Ala Ser Arg Gly Glu Leu Ala 885 890 895 ctg cac aat ggg cgc ctg ggg gac tcg ccc agt cct cag gtg ctg gaa 2736 Leu His Asn Gly Arg Leu Gly Asp Ser Pro Ser Pro Gln Val Leu Glu 900 905 910 ttc gcc gag ttc atc gac agc ctc ttc aac ctg gac agc aag agc agc 2784 Phe Ala Glu Phe Ile Asp Ser Leu Phe Asn Leu Asp Ser Lys Ser Ser 915 920 925 tcc ttc caa gac ctc tac tgc atg gtg gtg ccc gag agc ccc acc agt 2832 Ser Phe Gln Asp Leu Tyr Cys Met Val Val Pro Glu Ser Pro Thr Ser 930 935 940 gac tac gct gag ggc ccc aag tcc ccc agc cag caa gag atc ctg ctc 2880 Asp Tyr Ala Glu Gly Pro Lys Ser Pro Ser Gln Gln Glu Ile Leu Leu 945 950 955 960 cgt gcc cag ttc gag ccc aac ctg gtg ccc aag ccc cca cgg ctc ttt 2928 Arg Ala Gln Phe Glu Pro Asn Leu Val Pro Lys Pro Pro Arg Leu Phe 965 970 975 gcc ggc tca gcc gac ccc tcc tcg ggc atc tca ctc tcg ccc tcc ttc 2976 Ala Gly Ser Ala Asp Pro Ser Ser Gly Ile Ser Leu Ser Pro Ser Phe 980 985 990 ccg ctc agc tcc tcg ggt gag ctc atg gac ctg acg ccc acg ggc ctc 3024 Pro Leu Ser Ser Ser Gly Glu Leu Met Asp Leu Thr Pro Thr Gly Leu 995 1000 1005 agt agc cag gaa tgc ctg gcg gct gac aag atc cgg act tct acc ccc 3072 Ser Ser Gln Glu Cys Leu Ala Ala Asp Lys Ile Arg Thr Ser Thr Pro 1010 1015 1020 act ggc cac gga gcc agc ccc gcc aag caa gat gag ctg gtc atc tca 3120 Thr Gly His Gly Ala Ser Pro Ala Lys Gln Asp Glu Leu Val Ile Ser 1025 1030 1035 1040 gca cgc tag 3129 Ala Arg <210> 4 <211> 672 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Pro Gly Met Val Leu Phe Gly Arg Arg Trp Ala Ile Ala Ser Asp 1 5 10 15 Asp Leu Val Phe Pro Gly Phe Phe Glu Leu Val Val Arg Val Leu Trp 20 25 30 Trp Ile Gly Ile Leu Thr Leu Tyr Leu Met His Arg Gly Lys Leu Asp 35 40 45 Cys Ala Gly Gly Ala Leu Leu Ser Ser Tyr Leu Ile Val Leu Met Ile 50 55 60 Leu Leu Ala Val Val Ile Cys Thr Val Ser Ala Ile Met Cys Val Ser 65 70 75 80 Met Arg Gly Thr Ile Cys Asn Pro Gly Pro Arg Lys Ser Met Ser Lys 85 90 95 Leu Leu Tyr Ile Arg Leu Ala Leu Phe Phe Pro Glu Met Val Trp Ala 100 105 110 Ser Leu Gly Ala Ala Trp Val Ala Asp Gly Val Gln Cys Asp Arg Thr 115 120 125 Val Val Asn Gly Ile Ile Ala Thr Val Val Val Ser Trp Ile Ile Ile 130 135 140 Ala Ala Thr Val Val Ser Ile Ile Ile Val Phe Asp Pro Leu Gly Gly 145 150 155 160 Lys Met Ala Pro Tyr Ser Ser Ala Gly Pro Ser His Leu Asp Ser His 165 170 175 Asp Ser Ser Gln Leu Leu Asn Gly Leu Lys Thr Ala Ala Thr Ser Val 180 185 190 Trp Glu Thr Arg Ile Lys Leu Leu Cys Cys Cys Ile Gly Lys Asp Asp 195 200 205 His Thr Arg Val Ala Phe Ser Ser Thr Ala Glu Leu Phe Ser Thr Tyr 210 215 220 Phe Ser Asp Thr Asp Leu Val Pro Ser Asp Ile Ala Ala Gly Leu Ala 225 230 235 240 Leu Leu His Gln Gln Gln Asp Asn Ile Arg Asn Asn Gln Glu Pro Ala 245 250 255 Gln Val Val Cys His Ala Pro Gly Ser Ser Gln Glu Ala Asp Leu Gly 260 265 270 Ala Glu Leu Glu Asn Cys His His Tyr Met Gln Phe Ala Ala Ala Ala 275 280 285 Tyr Gly Trp Pro Leu Tyr Ile Tyr Arg Asn Pro Leu Thr Gly Leu Cys 290 295 300 Arg Ile Gly Gly Asp Cys Cys Arg Ser Arg Thr Thr Asp Tyr Asp Leu 305 310 315 320 Val Gly Gly Asp Gln Leu Asn Cys His Phe Gly Ser Ile Leu His Thr 325 330 335 Thr Gly Leu Gln Tyr Arg Asp Phe Ile His Val Ser Phe His Asp Lys 340 345 350 Val Tyr Glu Leu Pro Phe Leu Val Ala Leu Asp His Arg Lys Glu Ser 355 360 365 Val Val Val Ala Val Arg Gly Thr Met Ser Leu Gln Asp Val Leu Thr 370 375 380 Asp Leu Ser Ala Glu Ser Glu Val Leu Asp Val Glu Cys Glu Val Gln 385 390 395 400 Asp Arg Leu Ala His Lys Gly Ile Ser Gln Ala Ala Arg Tyr Val Tyr 405 410 415 Gln Arg Leu Ile Asn Asp Gly Ile Leu Ser Gln Ala Phe Ser Ile Ala 420 425 430 Pro Glu Tyr Arg Leu Val Ile Val Gly His Ser Leu Gly Gly Gly Ala 435 440 445 Ala Ala Leu Leu Ala Thr Met Leu Arg Ala Ala Tyr Pro Gln Val Arg 450 455 460 Cys Tyr Ala Phe Ser Pro Pro Arg Gly Leu Trp Ser Lys Ala Leu Gln 465 470 475 480 Glu Tyr Ser Gln Ser Phe Ile Val Ser Leu Val Leu Gly Lys Asp Val 485 490 495 Ile Pro Arg Leu Ser Val Thr Asn Leu Glu Asp Leu Lys Arg Arg Ile 500 505 510 Leu Arg Val Val Ala His Cys Asn Lys Pro Lys Tyr Lys Ile Leu Leu 515 520 525 His Gly Leu Trp Tyr Glu Leu Phe Gly Gly Asn Pro Asn Asn Leu Pro 530 535 540 Thr Glu Leu Asp Gly Gly Asp Gln Glu Val Leu Thr Gln Pro Leu Leu 545 550 555 560 Gly Glu Gln Ser Leu Leu Thr Arg Trp Ser Pro Ala Tyr Ser Phe Ser 565 570 575 Ser Asp Ser Pro Leu Asp Ser Ser Pro Lys Tyr Pro Pro Leu Tyr Pro 580 585 590 Pro Gly Arg Ile Ile His Leu Gln Glu Glu Gly Ala Ser Gly Arg Phe 595 600 605 Gly Cys Cys Ser Ala Ala His Tyr Ser Ala Lys Trp Ser His Glu Ala 610 615 620 Glu Phe Ser Lys Ile Leu Ile Gly Pro Lys Met Leu Thr Asp His Met 625 630 635 640 Pro Asp Ile Leu Met Arg Ala Leu Asp Ser Val Val Ser Asp Arg Ala 645 650 655 Ala Cys Val Ser Cys Pro Ala Gln Gly Val Ser Ser Val Asp Val Ala 660 665 670 <210> 5 <211> 647 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Ser Ile Arg Gly Thr Leu Ser Pro Lys Asp Ala Leu Thr Asp Leu Thr 1 5 10 15 Gly Asp Ala Glu Arg Leu Pro Val Glu Gly His His Gly Thr Trp Leu 20 25 30 Gly His Lys Gly Met Val Leu Ser Ala Glu Tyr Ile Lys Lys Lys Leu 35 40 45 Glu Gln Glu Met Val Leu Ser Gln Ala Phe Gly Arg Asp Leu Gly Arg 50 55 60 Gly Thr Lys His Tyr Gly Leu Ile Val Val Gly His Ser Leu Gly Ala 65 70 75 80 Gly Thr Ala Ala Ile Leu Ser Phe Leu Leu Arg Pro Gln Tyr Pro Thr 85 90 95 Leu Lys Cys Phe Ala Tyr Ser Pro Pro Gly Gly Leu Leu Ser Glu Asp 100 105 110 Ala Met Glu Tyr Ser Lys Glu Phe Val Thr Ala Val Val Leu Gly Lys 115 120 125 Asp Leu Val Pro Arg Ile Gly Leu Ser Gln Leu Glu Gly Phe Arg Arg 130 135 140 Gln Leu Leu Asp Val Leu Gln Arg Ser Thr Lys Pro Lys Trp Arg Ile 145 150 155 160 Ile Val Gly Ala Thr Lys Cys Ile Pro Lys Ser Glu Leu Pro Glu Glu 165 170 175 Val Glu Val Thr Thr Leu Ala Ser Thr Arg Leu Trp Thr His Pro Ser 180 185 190 Asp Leu Thr Ile Ala Leu Ser Ala Ser Thr Pro Leu Tyr Pro Pro Gly 195 200 205 Arg Ile Ile His Val Val His Asn His Pro Ala Glu Gln Cys Cys Cys 210 215 220 Cys Glu Gln Glu Glu Pro Thr Tyr Phe Ala Ile Trp Gly Asp Asn Lys 225 230 235 240 Ala Phe Asn Glu Val Ile Ile Ser Pro Ala Met Leu His Glu His Leu 245 250 255 Pro Tyr Val Val Met Glu Gly Leu Asn Lys Val Leu Glu Asn Tyr Asn 260 265 270 Lys Gly Lys Thr Ala Leu Leu Ser Ala Ala Lys Val Met Val Ser Pro 275 280 285 Thr Glu Val Asp Leu Thr Pro Glu Leu Ile Phe Gln Gln Gln Pro Leu 290 295 300 Pro Thr Gly Pro Pro Met Pro Thr Gly Leu Ala Leu Glu Leu Pro Thr 305 310 315 320 Ala Asp His Arg Asn Ser Ser Val Arg Ser Lys Ser Gln Ser Glu Met 325 330 335 Ser Leu Glu Gly Phe Ser Glu Gly Arg Leu Leu Ser Pro Val Val Ala 340 345 350 Ala Ala Ala Arg Gln Asp Pro Val Glu Leu Leu Leu Leu Ser Thr Gln 355 360 365 Glu Arg Leu Ala Ala Glu Leu Gln Ala Arg Arg Ala Pro Leu Ala Thr 370 375 380 Met Glu Ser Leu Ser Asp Thr Glu Ser Leu Tyr Ser Phe Asp Ser Arg 385 390 395 400 Arg Ser Ser Gly Phe Arg Ser Ile Arg Gly Ser Pro Ser Leu His Ala 405 410 415 Val Leu Glu Arg Asp Glu Gly His Leu Phe Tyr Ile Asp Pro Ala Ile 420 425 430 Pro Glu Glu Asn Pro Ser Leu Ser Ser Arg Thr Glu Leu Leu Ala Ala 435 440 445 Asp Ser Leu Ser Lys His Ser Gln Asp Thr Gln Pro Leu Glu Ala Ala 450 455 460 Leu Gly Ser Gly Gly Val Thr Pro Glu Arg Pro Pro Ser Ala Ala Ala 465 470 475 480 Asn Asp Glu Glu Glu Glu Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Ala Ser 485 490 495 Arg Gly Glu Leu Ala Leu His Asn Gly Arg Leu Gly Asp Ser Pro Ser 500 505 510 Pro Gln Val Leu Glu Phe Ala Glu Phe Ile Asp Ser Leu Phe Asn Leu 515 520 525 Asp Ser Lys Ser Ser Ser Phe Gln Asp Leu Tyr Cys Met Val Val Pro 530 535 540 Glu Ser Pro Thr Ser Asp Tyr Ala Glu Gly Pro Lys Ser Pro Ser Gln 545 550 555 560 Gln Glu Ile Leu Leu Arg Ala Gln Phe Glu Pro Asn Leu Val Pro Lys 565 570 575 Pro Pro Arg Leu Phe Ala Gly Ser Ala Asp Pro Ser Ser Gly Ile Ser 580 585 590 Leu Ser Pro Ser Phe Pro Leu Ser Ser Ser Gly Glu Leu Met Asp Leu 595 600 605 Thr Pro Thr Gly Leu Ser Ser Gln Glu Cys Leu Ala Ala Asp Lys Ile 610 615 620 Arg Thr Ser Thr Pro Thr Gly His Gly Ala Ser Pro Ala Lys Gln Asp 625 630 635 640 Glu Leu Val Ile Ser Ala Arg 645 <210> 6 <211> 4459 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <222> (1)..(4459) <223> /organism="Homo sapiens" /clone="HK01892" /tissue_type="brain" <220> <221> CDS <222> (1)..(1946) <400> 6 tc agt atc cgg ggg acc ctg tcc ccc aag gat gcc ctg act gac ctg 47 Ser Ile Arg Gly Thr Leu Ser Pro Lys Asp Ala Leu Thr Asp Leu 1 5 10 15 acg ggt gat gct gag cgc ctc ccc gtg gag ggg cac cac ggc acc tgg 95 Thr Gly Asp Ala Glu Arg Leu Pro Val Glu Gly His His Gly Thr Trp 20 25 30 ctg ggc cac aag ggt atg gtc ctc tca gct gag tac atc aag aag aaa 143 Leu Gly His Lys Gly Met Val Leu Ser Ala Glu Tyr Ile Lys Lys Lys 35 40 45 ctg gag cag gag atg gtc ctg tcc cag gcc ttt ggg cga gac ctg ggc 191 Leu Glu Gln Glu Met Val Leu Ser Gln Ala Phe Gly Arg Asp Leu Gly 50 55 60 cgc gga acc aaa cac tac ggc ctg att gtg gtg ggc cac tcc ctg ggc 239 Arg Gly Thr Lys His Tyr Gly Leu Ile Val Val Gly His Ser Leu Gly 65 70 75 gcg ggc act gct gcc atc ctc tcc ttc ctt ctg cgc cca cag tat ccg 287 Ala Gly Thr Ala Ala Ile Leu Ser Phe Leu Leu Arg Pro Gln Tyr Pro 80 85 90 95 acc ctc aag tgc ttt gcc tac tcc ccg cca ggg ggc ctg ctg agt gag 335 Thr Leu Lys Cys Phe Ala Tyr Ser Pro Pro Gly Gly Leu Leu Ser Glu 100 105 110 gat gcg atg gag tat tcc aag gag ttc gtg act gct gtg gtt ctg ggc 383 Asp Ala Met Glu Tyr Ser Lys Glu Phe Val Thr Ala Val Val Leu Gly 115 120 125 aaa gac ctc gtc ccc agg att ggc ctc tct cag ctg gaa ggc ttc cgc 431 Lys Asp Leu Val Pro Arg Ile Gly Leu Ser Gln Leu Glu Gly Phe Arg 130 135 140 aga cag ctc ctg gat gtc ctg cag cga agc acc aag ccc aaa tgg cgg 479 Arg Gln Leu Leu Asp Val Leu Gln Arg Ser Thr Lys Pro Lys Trp Arg 145 150 155 atc atc gtg ggg gcc acc aaa tgc atc ccc aag tcg gag ctg cct gag 527 Ile Ile Val Gly Ala Thr Lys Cys Ile Pro Lys Ser Glu Leu Pro Glu 160 165 170 175 gag gta gag gtg acc acc ctg gcc agc acg cgg ctc tgg acc cac ccc 575 Glu Val Glu Val Thr Thr Leu Ala Ser Thr Arg Leu Trp Thr His Pro 180 185 190 agc gac cta act ata gcc ctc tca gcc agc act cca ctc tac ccg ccc 623 Ser Asp Leu Thr Ile Ala Leu Ser Ala Ser Thr Pro Leu Tyr Pro Pro 195 200 205 ggc cgc atc atc cac gtg gtc cac aac cac cct gca gag cag tgc tgc 671 Gly Arg Ile Ile His Val Val His Asn His Pro Ala Glu Gln Cys Cys 210 215 220 tgc tgt gag cag gag gag ccc aca tac ttt gcc atc tgg ggc gac aac 719 Cys Cys Glu Gln Glu Glu Pro Thr Tyr Phe Ala Ile Trp Gly Asp Asn 225 230 235 aag gcc ttc aat gag gtg atc atc tcg cca gcc atg ctg cat gag cac 767 Lys Ala Phe Asn Glu Val Ile Ile Ser Pro Ala Met Leu His Glu His 240 245 250 255 ctg ccc tat gtg gtc atg gag ggg ctc aac aag gtg ctg gag aac tac 815 Leu Pro Tyr Val Val Met Glu Gly Leu Asn Lys Val Leu Glu Asn Tyr 260 265 270 aac aag ggg aag acc gct ctg ctc tct gca gcc aag gtc atg gtg agc 863 Asn Lys Gly Lys Thr Ala Leu Leu Ser Ala Ala Lys Val Met Val Ser 275 280 285 cct acc gag gtg gac ctg act cct gag ctc atc ttc cag cag cag cca 911 Pro Thr Glu Val Asp Leu Thr Pro Glu Leu Ile Phe Gln Gln Gln Pro 290 295 300 ctc ccc acg ggg ccg ccc atg ccc act ggc ctt gcc ctg gag ctg ccg 959 Leu Pro Thr Gly Pro Pro Met Pro Thr Gly Leu Ala Leu Glu Leu Pro 305 310 315 act gca gac cac cgc aac agc agc gtc agg agc aag tcc cag tct gag 1007 Thr Ala Asp His Arg Asn Ser Ser Val Arg Ser Lys Ser Gln Ser Glu 320 325 330 335 atg agc ctg gag ggc ttc tcg gag ggg cgg ctg ctg tcg cca gtg gtt 1055 Met Ser Leu Glu Gly Phe Ser Glu Gly Arg Leu Leu Ser Pro Val Val 340 345 350 gcg gcg gcg gcc cgc cag gac ccg gtg gag ctg ctg ctg ctg tct acc 1103 Ala Ala Ala Ala Arg Gln Asp Pro Val Glu Leu Leu Leu Leu Ser Thr 355 360 365 cag gag cgg ctg gca gcg gag ctg cag gcc cgg cgg gca cca ctg gcc 1151 Gln Glu Arg Leu Ala Ala Glu Leu Gln Ala Arg Arg Ala Pro Leu Ala 370 375 380 acc atg gag agc ctc tcg gac act gag tcc ctg tac agc ttc gac tcg 1199 Thr Met Glu Ser Leu Ser Asp Thr Glu Ser Leu Tyr Ser Phe Asp Ser 385 390 395 cgc cgc tcc tca ggc ttc cgc agc atc cgg ggc tcc ccc agc ctc cac 1247 Arg Arg Ser Ser Gly Phe Arg Ser Ile Arg Gly Ser Pro Ser Leu His 400 405 410 415 gct gtg ctg gag cgt gat gaa ggc cac ctc ttc tac att gac cct gcc 1295 Ala Val Leu Glu Arg Asp Glu Gly His Leu Phe Tyr Ile Asp Pro Ala 420 425 430 atc ccc gag gaa aac cca tcc ctg agc tcg cgc act gag ctg ctg gcg 1343 Ile Pro Glu Glu Asn Pro Ser Leu Ser Ser Arg Thr Glu Leu Leu Ala 435 440 445 gcc gac agc ctg tcc aag cac tca cag gac acg cag ccc ctg gag gcg 1391 Ala Asp Ser Leu Ser Lys His Ser Gln Asp Thr Gln Pro Leu Glu Ala 450 455 460 gcc ctg ggc agt ggc ggc gtc act cct gag cgg ccc ccc agt gct gcg 1439 Ala Leu Gly Ser Gly Gly Val Thr Pro Glu Arg Pro Pro Ser Ala Ala 465 470 475 gcc aat gac gag gag gaa gag gtt ggc ggt ggg ggt ggc ggg ccg gcc 1487 Ala Asn Asp Glu Glu Glu Glu Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Ala 480 485 490 495 tcc cgc ggg gag ctg gcg ctg cac aat ggg cgc ctg ggg gac tcg ccc 1535 Ser Arg Gly Glu Leu Ala Leu His Asn Gly Arg Leu Gly Asp Ser Pro 500 505 510 agt cct cag gtg ctg gaa ttc gcc gag ttc atc gac agc ctc ttc aac 1583 Ser Pro Gln Val Leu Glu Phe Ala Glu Phe Ile Asp Ser Leu Phe Asn 515 520 525 ctg gac agc aag agc agc tcc ttc caa gac ctc tac tgc atg gtg gtg 1631 Leu Asp Ser Lys Ser Ser Ser Phe Gln Asp Leu Tyr Cys Met Val Val 530 535 540 ccc gag agc ccc acc agt gac tac gct gag ggc ccc aag tcc ccc agc 1679 Pro Glu Ser Pro Thr Ser Asp Tyr Ala Glu Gly Pro Lys Ser Pro Ser 545 550 555 cag caa gag atc ctg ctc cgt gcc cag ttc gag ccc aac ctg gtg ccc 1727 Gln Gln Glu Ile Leu Leu Arg Ala Gln Phe Glu Pro Asn Leu Val Pro 560 565 570 575 aag ccc cca cgg ctc ttt gcc ggc tca gcc gac ccc tcc tcg ggc atc 1775 Lys Pro Pro Arg Leu Phe Ala Gly Ser Ala Asp Pro Ser Ser Gly Ile 580 585 590 tca ctc tcg ccc tcc ttc ccg ctc agc tcc tcg ggt gag ctc atg gac 1823 Ser Leu Ser Pro Ser Phe Pro Leu Ser Ser Ser Gly Glu Leu Met Asp 595 600 605 ctg acg ccc acg ggc ctc agt agc cag gaa tgc ctg gcg gct gac aag 1871 Leu Thr Pro Thr Gly Leu Ser Ser Gln Glu Cys Leu Ala Ala Asp Lys 610 615 620 atc cgg act tct acc ccc act ggc cac gga gcc agc ccc gcc aag caa 1919 Ile Arg Thr Ser Thr Pro Thr Gly His Gly Ala Ser Pro Ala Lys Gln 625 630 635 gat gag ctg gtc atc tca gca cgc tag caccccagtt gcgtggccag 1966 Asp Glu Leu Val Ile Ser Ala Arg 640 645 ccgggcccag gcaggagcag gtggccctgt gggcacctgg tgcctgcccc ctgccgggca 2026 gctttaagga cagaccccca ggggcagttt agcctcaggc acaggcatcg ctgctgagct 2086 gggggtccgc atccctacct cagcttagga cccccagagc caaggtggct gggatctggc 2146 cccacagatg gggaaagatg gggaagggtg tggagtgggg aggagcctgg gcagcctgct 2206 gggtgggcca cactcagcct gactgccctc catgggggca ttctggcacc ccctgctcca 2266 ggacaggcca tgggcaagct gcctcccatc actgcctgct ggctgctctc ccaggggcca 2326 ggtggagagc agtgcccccc gacacatgta ttctcatctg tggtccaggc cggcatcgtc 2386 ctggccaccc cccagatctg gtgcctgctg gccggccccc tggggtgccc ctgccgaggt 2446 ggcctgcagt gctgtacatg tttacagaag ctgctgggct tggctcagga tgtgttctgg 2506 gcttgcaagc cccccgccca atcatgtgtt cagtagccat cctctgagca gggcccaagg 2566 cagccagggg cctggagggg ccagaggagg gtggggtcag ggccgcccct tctctgcctt 2626 gtgcctctca tgctgcctcc tctgcccatg ggtcctgggc acccaggcct gccctgcctg 2686 ctggctactt cctggcttac cttctacccc caaggatcct caccacccaa agggtggtgg 2746 gcactgctgt gaccacccca gctgcagagt cagtgccctg ggtggaagga aggcactgag 2806 agcccccttc ctctgagggc cccacctcac cccttggtgt cacccccacc acgcctaggc 2866 agctctgggc cctgggatct ggaaccaaca cacccctgtt cccctcagct ttccctcctc 2926 gctggcctgg gcaccctcct gggagcaggc cttcctccct cccaccccca atgtcctgtt 2986 ggtaggaggt ggggccaaga gtggggtatg gtgggccttg gctggagacc tctgtccact 3046 gcccagggag gggcctgggg ctgggagcag tcccggttta gcctgaggtc cccatagggc 3106 ttcctcccct gctgggtttg ggaagcagtt agggagatag cgacccggag tttccccaga 3166 agcggggtgg gagggtgtgc atgctagtgt tggcgcgtat gcatgtgcat gagtgtgcac 3226 cgttcctaag gaaggggcct ctggggctgc ccaccctacc tgccctgcct gcctgctgcc 3286 cctcccagcc tgccaagaaa acggtagggg agcatgatgg ggcctttgag gcagggtcgc 3346 agggacaagc tcagctttag gcaccatctg ttcccatcgc gcctgctgct gtgacccgtt 3406 ttggaaaact ggtgtgtacc gaggcgctga ctgcacggct gaccgcctgc tcgtgccttc 3466 attctgcagc ggcatggtcc ctcccattct ggctccacct gcagcctccc tgggtggcct 3526 aggctccccc gaccaagaga cctccctctc atgatcactg gtacctgggg gcctgaattc 3586 tggcccccgg ctccccacac agctgggact ggcctggatg gctgtcctgg gagcccctgc 3646 ccaccctgac agagggagct gggcctcccc tcatcctctg taactcccgc cttcaccaga 3706 ctcaaggaca ccctggccct gctgaggcat acagagcttc agcccagcac agaagcaaga 3766 caaaatcagt ggctcttaga gtttagaaaa caagacagac tctcagatga aagatctgac 3826 aagcaccgtg gccagtcaca gggagagact tgatgtctgg ccttttaatt cctcctctgc 3886 cagggtgggt cctgggacct ctaatgtggg catgtcgtcc accccaggac aagccatcag 3946 ggacagaccc cccaccccca aggctgcagc cacaccatgt ttcaggcttg gggctggggc 4006 aggcttgggc tcaatcctgg gcacccaggg gcagcccacc cctaacctgg ctcctaccca 4066 cctcgccctt gaaggatggg cctgctgcac gtctccctcc tccaccccat accacactgg 4126 ggggtctgag ccacccccct cagccccgtt cggctcagac cgacccccac tccatcccca 4186 gacctgcagc acaagtgcgc gggcctgtcc tcccaggggc ctgggcgact ccatatgcaa 4246 tcagtagcga gcagccgggc cccacagacc ctcatgcact ctcttacgtg ccattctccc 4306 cagacttttt ttgtacttaa tgtatgaaag atccaaacta atattgctgt aaaaaggaga 4366 gacaaattaa tatagcttat tctataaata tatctgtata taaaggtttc tgtatattgt 4426 atagagctgt gtataaactg gatgtagaag cac 4459 <210> 7 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> KIAA0659-specific primer for 3'-RACE <400> 7 ccgcccaatc atgtgttcag tagcc 25 <210> 8 <211> 1965 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <222> (1)..(1965) <223> /organism="Homo sapiens" /tissue_type="brain" <400> 8 ccgcccaatc atgtgttcag tagccatcct ctgagcaggg cccaaggcag ccaggggcct 60 ggaggggcca gaggagggtg gggtcagggc cgccccttct ctgccttgtg cctctcatgc 120 tgcctcctct gcccatgggt cctgggcacc caggcctgcc ctgcctgctg gctacttcct 180 ggcttacctt ctacccccaa ggatcctcac cacccaaagg gtggtgggca ctgctgtgac 240 caccccagct gcagagtcag tgccctgggt ggaaggaagg cactgagagc ccccttcctc 300 tgagggcccc acctcacccc ttggtgtcac ccccaccacg cctaggcagc tctgggccct 360 gggatctgga accaacacac ccctgttccc ctcagctttc cctcctcgct ggcctgggca 420 ccctcctggg agcaggcctt cctccctccc acccccaatg tcctgttggt aggaggtggg 480 gccaagagtg gggtatggtg ggccttggct ggagacctct gtccactgcc cagggagggg 540 cctggggctg ggagcagtcc cggtttagcc tgaggtcccc atagggcttc ctcccctgct 600 gggtttggga agcagttagg gagatagcga cccggagttt ccccagaagc ggggtgggag 660 ggtgtgcatg ctagtgttgg cgcgtatgca tgtgcatgag tgtgcaccgt tcctaaggaa 720 ggggcctctg gggctgccca ccctacctgc cctgcctgcc tgctgcccct cccagcctgc 780 caagaaaacg gtaggggagc atgatggggc ctttgaggca gggtcgcagg gacaagctca 840 gctttaggca ccatctgttc ccatcgcgcc tgctgctgtg acccgttttg gaaaactggt 900 gtgtaccgag gcgctgactg cacggctgac cgcctgctcg tgccttcatt ctgcagcggc 960 atggtccctc ccattctggc tccacctgca gcctccctgg gtggcctagg ctcccccgac 1020 caagagacct ccctctcatg atcactggta cctgggggcc tgaattctgg cccccggctc 1080 cccacacagc tgggactggc ctggatggct gtcctgggag cccctgccca ccctgacaga 1140 gggagctggg cctcccctca tcctctgtaa ctcccgcctt caccagactc aaggacaccc 1200 tggccctgct gaggcataca gagcttcagc ccagcacaga agcaagacaa aatcagtggc 1260 tcttagagtt tagaaaacaa gacagactct cagatgaaag atctgacaag caccgtggcc 1320 agtcacaggg agagacttga tgtctggcct tttaattcct cctctgccag ggtgggtcct 1380 gggacctcta atgtgggcat gtcgtccacc ccaggacaag ccatcaggga cagacccccc 1440 acccccaagg ctgcagccac accatgtttc aggcttgggg ctggggcagg cttgggctca 1500 atcctgggca cccaggggca gcccacccct aacctggctc ctacccacct cgcccttgaa 1560 ggatgggcct gctgcacgtc tccctcctcc accccatacc acactggggg gtctgagcca 1620 cccccctcag ccccgttcgg ctcagaccga cccccactcc atccccagac ctgcagcaca 1680 agtgcgcggg cctgtcctcc caggggcctg ggcgactcca tatgcaatca gtagcgagca 1740 gccgggcccc acagaccctc atgcactctc ttacgtgcca ttctccccag actttttttg 1800 tacttaatgt atgaaagatc caaactaata ttgctgtaaa aaggagagac aaattaatat 1860 agcttattct ataaatatat ctgtatataa aggtttctgt atattgtata gagctgtgta 1920 taaactggat gtagaagaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 1965 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> KIAA0659-specific primer for 5'-RACE <400> 9 tagtgtttgg ttccgcggcc 20 <210> 10 <211> 1512 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <222> (1)..(1512) <223> /organism="Homo sapiens" /tissue_type="brain" <400> 10 agtgaatcgg ggccttgggg agcccaggat ggaggtggcg gtcgcggcgg cgggccgagc 60 cctgcggcgg gcgggaggag gtgagcacca ggcccactga gcctctgcag agccaccagc 120 catgcccggg atcgtggtgt tccggcggcg ctggtctgtg ggcagtgatg acctcgtcct 180 accggccatc ttcctctttc tcctgcatac cacctggttt gtgatcctgt ccgtggtgct 240 cttcggcctg gtctataacc cgcacgaggc ctgctccctg aacctggtgg accacggccg 300 cggctacctg ggcatcctgc tgagctgcat gatcgctgag atggccatca tctggctgag 360 catgcgcggg ggcatcctct acacggagcc ccgtgactcc atgcagtacg tgctctacgt 420 gcgcctggcc atcctggtga tcgagttcat ctacgccatc gtgggcatcg tctggctcac 480 tcagtactac acctcctgca acgacctcac tgccaagaat gtcaccctcg gaatggttgt 540 ctgcaactgg gtagtcatcc tcagtgtgtg catcactgtc ctctgcgtct tcgaccccac 600 gggccgcacc tttgtcaagc tgagagccac caagaggagg cagcgtaacc tgcggaccta 660 caacctgcgg caccgcttag aggagggtca agccaccagc tggtcgcgcc ggctcaaagt 720 gttcctctgc tgcacgcgga cgaaggactc ccagtcagat gcctactcag aaatcgccta 780 cctctttgcg gagttcttcc gggaccttga cattgtgcca tccgacatca ttgctggcct 840 ggtgctgctc cggcagcggc agcgggccaa gcgcaacgcc gtgctggacg aggcaaacaa 900 tgacatcttg gccttcctgt ctgggatgcc ggtgaccaga aacaccaagt acctcgacct 960 caagaattca caagagatgc tccgctacaa agaggtctgc tactacatgc tctttgccct 1020 ggctgcctac gggtggccca tgtacctgat gcggaagccc gcctgcggcc tctgccaact 1080 ggctcggtcc tgctcgtgtt gcctgtgtcc tgcgaggccg cggttcgccc ctggagtcac 1140 catcgaggaa gacaactgct gtggctgtaa tgccattgcc atccggcgcc acttcctgga 1200 cgagaacatg actgcggtgg acatcgtcta tacctcctgc catgatgcgg tctatgaaac 1260 gcccttctac gtggcggtgg accatgacaa gaagaaagtg gtgatcagta tccgggggac 1320 cctgtccccc aaggatgccc tgactgacct gacgggtgat gctgagcgcc tccccgtgga 1380 ggggcaccac ggcacctggc tgggccacaa gggtatggtc ctctcagctg agtacatcaa 1440 gaagaaactg gagcaggaga tggtcctgtc ccaggccttt gggcgagacc tgggccgcgg 1500 aaccaaacac ta 1512 <210> 11 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> KIAA0659-specific primer for PCR <400> 11 cgcggaacca aacactacgg cctgat 26 <210> 12 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> KIAA0659-specific primer for PCR <400> 12 agactgggac ttgctcctga cgctg 25 <210> 13 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> a peptide consiting of 941-956 of the amino acid sequence of the human DG lipase homologue and a cysteine residue added to its N-t erminal <400> 13 Cys Ser Pro Thr Ser Asp Tyr Ala Glu Gly Pro Lys Ser Pro Ser Gln 1 5 10 15 Gln <210> 14 <211> 871 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Arg Arg Gln Arg Asn Leu Arg Thr Tyr Asn Leu Arg His Arg Leu Glu 1 5 10 15 Glu Gly Gln Ala Thr Ser Trp Ser Arg Arg Leu Lys Val Phe Leu Cys 20 25 30 Cys Thr Arg Thr Lys Asp Ser Gln Ser Asp Ala Tyr Ser Glu Ile Ala 35 40 45 Tyr Leu Phe Ala Glu Phe Phe Arg Asp Leu Asp Ile Val Pro Ser Asp 50 55 60 Ile Ile Ala Gly Leu Val Leu Leu Arg Gln Arg Gln Arg Ala Lys Arg 65 70 75 80 Asn Ala Val Leu Asp Glu Ala Asn Asn Asp Ile Leu Ala Phe Leu Ser 85 90 95 Gly Met Pro Val Thr Arg Asn Thr Lys Tyr Leu Asp Leu Lys Asn Ser 100 105 110 Gln Glu Met Leu Arg Tyr Lys Glu Val Cys Tyr Tyr Met Leu Phe Ala 115 120 125 Leu Ala Ala Tyr Gly Trp Pro Met Tyr Leu Met Arg Lys Pro Ala Cys 130 135 140 Gly Leu Cys Gln Leu Ala Arg Ser Cys Ser Cys Cys Leu Cys Pro Ala 145 150 155 160 Arg Pro Arg Phe Ala Pro Gly Val Thr Ile Glu Glu Asp Asn Cys Cys 165 170 175 Gly Cys Asn Ala Ile Ala Ile Arg Arg His Phe Leu Asp Glu Asn Met 180 185 190 Thr Ala Val Asp Ile Val Tyr Thr Ser Cys His Asp Ala Val Tyr Glu 195 200 205 Thr Pro Phe Tyr Val Ala Val Asp His Asp Lys Lys Lys Val Val Ile 210 215 220 Ser Ile Arg Gly Thr Leu Ser Pro Lys Asp Ala Leu Thr Asp Leu Thr 225 230 235 240 Gly Asp Ala Glu Arg Leu Pro Val Glu Gly His His Gly Thr Trp Leu 245 250 255 Gly His Lys Gly Met Val Leu Ser Ala Glu Tyr Ile Lys Lys Lys Leu 260 265 270 Glu Gln Glu Met Val Leu Ser Gln Ala Phe Gly Arg Asp Leu Gly Arg 275 280 285 Gly Thr Lys His Tyr Gly Leu Ile Val Val Gly His Ser Leu Gly Ala 290 295 300 Gly Thr Ala Ala Ile Leu Ser Phe Leu Leu Arg Pro Gln Tyr Pro Thr 305 310 315 320 Leu Lys Cys Phe Ala Tyr Ser Pro Pro Gly Gly Leu Leu Ser Glu Asp 325 330 335 Ala Met Glu Tyr Ser Lys Glu Phe Val Thr Ala Val Val Leu Gly Lys 340 345 350 Asp Leu Val Pro Arg Ile Gly Leu Ser Gln Leu Glu Gly Phe Arg Arg 355 360 365 Gln Leu Leu Asp Val Leu Gln Arg Ser Thr Lys Pro Lys Trp Arg Ile 370 375 380 Ile Val Gly Ala Thr Lys Cys Ile Pro Lys Ser Glu Leu Pro Glu Glu 385 390 395 400 Val Glu Val Thr Thr Leu Ala Ser Thr Arg Leu Trp Thr His Pro Ser 405 410 415 Asp Leu Thr Ile Ala Leu Ser Ala Ser Thr Pro Leu Tyr Pro Pro Gly 420 425 430 Arg Ile Ile His Val Val His Asn His Pro Ala Glu Gln Cys Cys Cys 435 440 445 Cys Glu Gln Glu Glu Pro Thr Tyr Phe Ala Ile Trp Gly Asp Asn Lys 450 455 460 Ala Phe Asn Glu Val Ile Ile Ser Pro Ala Met Leu His Glu His Leu 465 470 475 480 Pro Tyr Val Val Met Glu Gly Leu Asn Lys Val Leu Glu Asn Tyr Asn 485 490 495 Lys Gly Lys Thr Ala Leu Leu Ser Ala Ala Lys Val Met Val Ser Pro 500 505 510 Thr Glu Val Asp Leu Thr Pro Glu Leu Ile Phe Gln Gln Gln Pro Leu 515 520 525 Pro Thr Gly Pro Pro Met Pro Thr Gly Leu Ala Leu Glu Leu Pro Thr 530 535 540 Ala Asp His Arg Asn Ser Ser Val Arg Ser Lys Ser Gln Ser Glu Met 545 550 555 560 Ser Leu Glu Gly Phe Ser Glu Gly Arg Leu Leu Ser Pro Val Val Ala 565 570 575 Ala Ala Ala Arg Gln Asp Pro Val Glu Leu Leu Leu Leu Ser Thr Gln 580 585 590 Glu Arg Leu Ala Ala Glu Leu Gln Ala Arg Arg Ala Pro Leu Ala Thr 595 600 605 Met Glu Ser Leu Ser Asp Thr Glu Ser Leu Tyr Ser Phe Asp Ser Arg 610 615 620 Arg Ser Ser Gly Phe Arg Ser Ile Arg Gly Ser Pro Ser Leu His Ala 625 630 635 640 Val Leu Glu Arg Asp Glu Gly His Leu Phe Tyr Ile Asp Pro Ala Ile 645 650 655 Pro Glu Glu Asn Pro Ser Leu Ser Ser Arg Thr Glu Leu Leu Ala Ala 660 665 670 Asp Ser Leu Ser Lys His Ser Gln Asp Thr Gln Pro Leu Glu Ala Ala 675 680 685 Leu Gly Ser Gly Gly Val Thr Pro Glu Arg Pro Pro Ser Ala Ala Ala 690 695 700 Asn Asp Glu Glu Glu Glu Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Ala Ser 705 710 715 720 Arg Gly Glu Leu Ala Leu His Asn Gly Arg Leu Gly Asp Ser Pro Ser 725 730 735 Pro Gln Val Leu Glu Phe Ala Glu Phe Ile Asp Ser Leu Phe Asn Leu 740 745 750 Asp Ser Lys Ser Ser Ser Phe Gln Asp Leu Tyr Cys Met Val Val Pro 755 760 765 Glu Ser Pro Thr Ser Asp Tyr Ala Glu Gly Pro Lys Ser Pro Ser Gln 770 775 780 Gln Glu Ile Leu Leu Arg Ala Gln Phe Glu Pro Asn Leu Val Pro Lys 785 790 795 800 Pro Pro Arg Leu Phe Ala Gly Ser Ala Asp Pro Ser Ser Gly Ile Ser 805 810 815 Leu Ser Pro Ser Phe Pro Leu Ser Ser Ser Gly Glu Leu Met Asp Leu 820 825 830 Thr Pro Thr Gly Leu Ser Ser Gln Glu Cys Leu Ala Ala Asp Lys Ile 835 840 845 Arg Thr Ser Thr Pro Thr Gly His Gly Ala Ser Pro Ala Lys Gln Asp 850 855 860 Glu Leu Val Ile Ser Ala Arg 865 870 <210> 15 <211> 2616 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <222> (1)..(2616) <223> /organism="Homo sapiens" /tissue_type="brain" <220> <221> CDS <222> (1)..(2616) <400> 15 agg agg cag cgt aac ctg cgg acc tac aac ctg cgg cac cgc tta gag 48 Arg Arg Gln Arg Asn Leu Arg Thr Tyr Asn Leu Arg His Arg Leu Glu 1 5 10 15 gag ggt caa gcc acc agc tgg tcg cgc cgg ctc aaa gtg ttc ctc tgc 96 Glu Gly Gln Ala Thr Ser Trp Ser Arg Arg Leu Lys Val Phe Leu Cys 20 25 30 tgc acg cgg acg aag gac tcc cag tca gat gcc tac tca gaa atc gcc 144 Cys Thr Arg Thr Lys Asp Ser Gln Ser Asp Ala Tyr Ser Glu Ile Ala 35 40 45 tac ctc ttt gcg gag ttc ttc cgg gac ctt gac att gtg cca tcc gac 192 Tyr Leu Phe Ala Glu Phe Phe Arg Asp Leu Asp Ile Val Pro Ser Asp 50 55 60 atc att gct ggc ctg gtg ctg ctc cgg cag cgg cag cgg gcc aag cgc 240 Ile Ile Ala Gly Leu Val Leu Leu Arg Gln Arg Gln Arg Ala Lys Arg 65 70 75 80 aac gcc gtg ctg gac gag gca aac aat gac atc ttg gcc ttc ctg tct 288 Asn Ala Val Leu Asp Glu Ala Asn Asn Asp Ile Leu Ala Phe Leu Ser 85 90 95 ggg atg ccg gtg acc aga aac acc aag tac ctc gac ctc aag aat tca 336 Gly Met Pro Val Thr Arg Asn Thr Lys Tyr Leu Asp Leu Lys Asn Ser 100 105 110 caa gag atg ctc cgc tac aaa gag gtc tgc tac tac atg ctc ttt gcc 384 Gln Glu Met Leu Arg Tyr Lys Glu Val Cys Tyr Tyr Met Leu Phe Ala 115 120 125 ctg gct gcc tac ggg tgg ccc atg tac ctg atg cgg aag ccc gcc tgc 432 Leu Ala Ala Tyr Gly Trp Pro Met Tyr Leu Met Arg Lys Pro Ala Cys 130 135 140 ggc ctc tgc caa ctg gct cgg tcc tgc tcg tgt tgc ctg tgt cct gcg 480 Gly Leu Cys Gln Leu Ala Arg Ser Cys Ser Cys Cys Leu Cys Pro Ala 145 150 155 160 agg ccg cgg ttc gcc cct gga gtc acc atc gag gaa gac aac tgc tgt 528 Arg Pro Arg Phe Ala Pro Gly Val Thr Ile Glu Glu Asp Asn Cys Cys 165 170 175 ggc tgt aat gcc att gcc atc cgg cgc cac ttc ctg gac gag aac atg 576 Gly Cys Asn Ala Ile Ala Ile Arg Arg His Phe Leu Asp Glu Asn Met 180 185 190 act gcg gtg gac atc gtc tat acc tcc tgc cat gat gcg gtc tat gaa 624 Thr Ala Val Asp Ile Val Tyr Thr Ser Cys His Asp Ala Val Tyr Glu 195 200 205 acg ccc ttc tac gtg gcg gtg gac cat gac aag aag aaa gtg gtg atc 672 Thr Pro Phe Tyr Val Ala Val Asp His Asp Lys Lys Lys Val Val Ile 210 215 220 agt atc cgg ggg acc ctg tcc ccc aag gat gcc ctg act gac ctg acg 720 Ser Ile Arg Gly Thr Leu Ser Pro Lys Asp Ala Leu Thr Asp Leu Thr 225 230 235 240 ggt gat gct gag cgc ctc ccc gtg gag ggg cac cac ggc acc tgg ctg 768 Gly Asp Ala Glu Arg Leu Pro Val Glu Gly His His Gly Thr Trp Leu 245 250 255 ggc cac aag ggt atg gtc ctc tca gct gag tac atc aag aag aaa ctg 816 Gly His Lys Gly Met Val Leu Ser Ala Glu Tyr Ile Lys Lys Lys Leu 260 265 270 gag cag gag atg gtc ctg tcc cag gcc ttt ggg cga gac ctg ggc cgc 864 Glu Gln Glu Met Val Leu Ser Gln Ala Phe Gly Arg Asp Leu Gly Arg 275 280 285 gga acc aaa cac tac ggc ctg att gtg gtg ggc cac tcc ctg ggc gcg 912 Gly Thr Lys His Tyr Gly Leu Ile Val Val Gly His Ser Leu Gly Ala 290 295 300 ggc act gct gcc atc ctc tcc ttc ctt ctg cgc cca cag tat ccg acc 960 Gly Thr Ala Ala Ile Leu Ser Phe Leu Leu Arg Pro Gln Tyr Pro Thr 305 310 315 320 ctc aag tgc ttt gcc tac tcc ccg cca ggg ggc ctg ctg agt gag gat 1008 Leu Lys Cys Phe Ala Tyr Ser Pro Pro Gly Gly Leu Leu Ser Glu Asp 325 330 335 gcg atg gag tat tcc aag gag ttc gtg act gct gtg gtt ctg ggc aaa 1056 Ala Met Glu Tyr Ser Lys Glu Phe Val Thr Ala Val Val Leu Gly Lys 340 345 350 gac ctc gtc ccc agg att ggc ctc tct cag ctg gaa ggc ttc cgc aga 1104 Asp Leu Val Pro Arg Ile Gly Leu Ser Gln Leu Glu Gly Phe Arg Arg 355 360 365 cag ctc ctg gat gtc ctg cag cga agc acc aag ccc aaa tgg cgg atc 1152 Gln Leu Leu Asp Val Leu Gln Arg Ser Thr Lys Pro Lys Trp Arg Ile 370 375 380 atc gtg ggg gcc acc aaa tgc atc ccc aag tcg gag ctg cct gag gag 1200 Ile Val Gly Ala Thr Lys Cys Ile Pro Lys Ser Glu Leu Pro Glu Glu 385 390 395 400 gta gag gtg acc acc ctg gcc agc acg cgg ctc tgg acc cac ccc agc 1248 Val Glu Val Thr Thr Leu Ala Ser Thr Arg Leu Trp Thr His Pro Ser 405 410 415 gac cta act ata gcc ctc tca gcc agc act cca ctc tac ccg ccc ggc 1296 Asp Leu Thr Ile Ala Leu Ser Ala Ser Thr Pro Leu Tyr Pro Pro Gly 420 425 430 cgc atc atc cac gtg gtc cac aac cac cct gca gag cag tgc tgc tgc 1344 Arg Ile Ile His Val Val His Asn His Pro Ala Glu Gln Cys Cys Cys 435 440 445 tgt gag cag gag gag ccc aca tac ttt gcc atc tgg ggc gac aac aag 1392 Cys Glu Gln Glu Glu Pro Thr Tyr Phe Ala Ile Trp Gly Asp Asn Lys 450 455 460 gcc ttc aat gag gtg atc atc tcg cca gcc atg ctg cat gag cac ctg 1440 Ala Phe Asn Glu Val Ile Ile Ser Pro Ala Met Leu His Glu His Leu 465 470 475 480 ccc tat gtg gtc atg gag ggg ctc aac aag gtg ctg gag aac tac aac 1488 Pro Tyr Val Val Met Glu Gly Leu Asn Lys Val Leu Glu Asn Tyr Asn 485 490 495 aag ggg aag acc gct ctg ctc tct gca gcc aag gtc atg gtg agc cct 1536 Lys Gly Lys Thr Ala Leu Leu Ser Ala Ala Lys Val Met Val Ser Pro 500 505 510 acc gag gtg gac ctg act cct gag ctc atc ttc cag cag cag cca ctc 1584 Thr Glu Val Asp Leu Thr Pro Glu Leu Ile Phe Gln Gln Gln Pro Leu 515 520 525 ccc acg ggg ccg ccc atg ccc act ggc ctt gcc ctg gag ctg ccg act 1632 Pro Thr Gly Pro Pro Met Pro Thr Gly Leu Ala Leu Glu Leu Pro Thr 530 535 540 gca gac cac cgc aac agc agc gtc agg agc aag tcc cag tct gag atg 1680 Ala Asp His Arg Asn Ser Ser Val Arg Ser Lys Ser Gln Ser Glu Met 545 550 555 560 agc ctg gag ggc ttc tcg gag ggg cgg ctg ctg tcg cca gtg gtt gcg 1728 Ser Leu Glu Gly Phe Ser Glu Gly Arg Leu Leu Ser Pro Val Val Ala 565 570 575 gcg gcg gcc cgc cag gac ccg gtg gag ctg ctg ctg ctg tct acc cag 1776 Ala Ala Ala Arg Gln Asp Pro Val Glu Leu Leu Leu Leu Ser Thr Gln 580 585 590 gag cgg ctg gca gcg gag ctg cag gcc cgg cgg gca cca ctg gcc acc 1824 Glu Arg Leu Ala Ala Glu Leu Gln Ala Arg Arg Ala Pro Leu Ala Thr 595 600 605 atg gag agc ctc tcg gac act gag tcc ctg tac agc ttc gac tcg cgc 1872 Met Glu Ser Leu Ser Asp Thr Glu Ser Leu Tyr Ser Phe Asp Ser Arg 610 615 620 cgc tcc tca ggc ttc cgc agc atc cgg ggc tcc ccc agc ctc cac gct 1920 Arg Ser Ser Gly Phe Arg Ser Ile Arg Gly Ser Pro Ser Leu His Ala 625 630 635 640 gtg ctg gag cgt gat gaa ggc cac ctc ttc tac att gac cct gcc atc 1968 Val Leu Glu Arg Asp Glu Gly His Leu Phe Tyr Ile Asp Pro Ala Ile 645 650 655 ccc gag gaa aac cca tcc ctg agc tcg cgc act gag ctg ctg gcg gcc 2016 Pro Glu Glu Asn Pro Ser Leu Ser Ser Arg Thr Glu Leu Leu Ala Ala 660 665 670 gac agc ctg tcc aag cac tca cag gac acg cag ccc ctg gag gcg gcc 2064 Asp Ser Leu Ser Lys His Ser Gln Asp Thr Gln Pro Leu Glu Ala Ala 675 680 685 ctg ggc agt ggc ggc gtc act cct gag cgg ccc ccc agt gct gcg gcc 2112 Leu Gly Ser Gly Gly Val Thr Pro Glu Arg Pro Pro Ser Ala Ala Ala 690 695 700 aat gac gag gag gaa gag gtt ggc ggt ggg ggt ggc ggg ccg gcc tcc 2160 Asn Asp Glu Glu Glu Glu Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Ala Ser 705 710 715 720 cgc ggg gag ctg gcg ctg cac aat ggg cgc ctg ggg gac tcg ccc agt 2208 Arg Gly Glu Leu Ala Leu His Asn Gly Arg Leu Gly Asp Ser Pro Ser 725 730 735 cct cag gtg ctg gaa ttc gcc gag ttc atc gac agc ctc ttc aac ctg 2256 Pro Gln Val Leu Glu Phe Ala Glu Phe Ile Asp Ser Leu Phe Asn Leu 740 745 750 gac agc aag agc agc tcc ttc caa gac ctc tac tgc atg gtg gtg ccc 2304 Asp Ser Lys Ser Ser Ser Phe Gln Asp Leu Tyr Cys Met Val Val Pro 755 760 765 gag agc ccc acc agt gac tac gct gag ggc ccc aag tcc ccc agc cag 2352 Glu Ser Pro Thr Ser Asp Tyr Ala Glu Gly Pro Lys Ser Pro Ser Gln 770 775 780 caa gag atc ctg ctc cgt gcc cag ttc gag ccc aac ctg gtg ccc aag 2400 Gln Glu Ile Leu Leu Arg Ala Gln Phe Glu Pro Asn Leu Val Pro Lys 785 790 795 800 ccc cca cgg ctc ttt gcc ggc tca gcc gac ccc tcc tcg ggc atc tca 2448 Pro Pro Arg Leu Phe Ala Gly Ser Ala Asp Pro Ser Ser Gly Ile Ser 805 810 815 ctc tcg ccc tcc ttc ccg ctc agc tcc tcg ggt gag ctc atg gac ctg 2496 Leu Ser Pro Ser Phe Pro Leu Ser Ser Ser Gly Glu Leu Met Asp Leu 820 825 830 acg ccc acg ggc ctc agt agc cag gaa tgc ctg gcg gct gac aag atc 2544 Thr Pro Thr Gly Leu Ser Ser Gln Glu Cys Leu Ala Ala Asp Lys Ile 835 840 845 cgg act tct acc ccc act ggc cac gga gcc agc ccc gcc aag caa gat 2592 Arg Thr Ser Thr Pro Thr Gly His Gly Ala Ser Pro Ala Lys Gln Asp 850 855 860 gag ctg gtc atc tca gca cgc tag 2616 Glu Leu Val Ile Ser Ala Arg 865 870 <210> 16 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> a sense primer for amplification of a DNA encoding a partial-leng th polypetide of human DG lipase homologue <400> 16 gctgagagcc accaagagga ggcagcgtaa 30 <210> 17 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> an antisense primer for amplification of a DNA encoding a partial -length polypetide of human DG lipase homologue <400> 17 ggccacgcaa ctggggtgct agcgt 25 <210> 18 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> a sense primer for amplification of an insert DNA for an expressi on vector <400> 18 cgggatccat gaggaggcag cgtaacctgc ggacc 35 <210> 19 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> an antisense primer for amplification of an insert DNA for an exp ression vector <400> 19 ttcctttttt cgccggcgtg gccacgcaac tggggtgcta gc 42 <210> 20 <211> 872 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> a partial-length polypetide of human DG lipase homologue wherein an methionine residue is added at its N-terminus <400> 20 Met Arg Arg Gln Arg Asn Leu Arg Thr Tyr Asn Leu Arg His Arg Leu 1 5 10 15 Glu Glu Gly Gln Ala Thr Ser Trp Ser Arg Arg Leu Lys Val Phe Leu 20 25 30 Cys Cys Thr Arg Thr Lys Asp Ser Gln Ser Asp Ala Tyr Ser Glu Ile 35 40 45 Ala Tyr Leu Phe Ala Glu Phe Phe Arg Asp Leu Asp Ile Val Pro Ser 50 55 60 Asp Ile Ile Ala Gly Leu Val Leu Leu Arg Gln Arg Gln Arg Ala Lys 65 70 75 80 Arg Asn Ala Val Leu Asp Glu Ala Asn Asn Asp Ile Leu Ala Phe Leu 85 90 95 Ser Gly Met Pro Val Thr Arg Asn Thr Lys Tyr Leu Asp Leu Lys Asn 100 105 110 Ser Gln Glu Met Leu Arg Tyr Lys Glu Val Cys Tyr Tyr Met Leu Phe 115 120 125 Ala Leu Ala Ala Tyr Gly Trp Pro Met Tyr Leu Met Arg Lys Pro Ala 130 135 140 Cys Gly Leu Cys Gln Leu Ala Arg Ser Cys Ser Cys Cys Leu Cys Pro 145 150 155 160 Ala Arg Pro Arg Phe Ala Pro Gly Val Thr Ile Glu Glu Asp Asn Cys 165 170 175 Cys Gly Cys Asn Ala Ile Ala Ile Arg Arg His Phe Leu Asp Glu Asn 180 185 190 Met Thr Ala Val Asp Ile Val Tyr Thr Ser Cys His Asp Ala Val Tyr 195 200 205 Glu Thr Pro Phe Tyr Val Ala Val Asp His Asp Lys Lys Lys Val Val 210 215 220 Ile Ser Ile Arg Gly Thr Leu Ser Pro Lys Asp Ala Leu Thr Asp Leu 225 230 235 240 Thr Gly Asp Ala Glu Arg Leu Pro Val Glu Gly His His Gly Thr Trp 245 250 255 Leu Gly His Lys Gly Met Val Leu Ser Ala Glu Tyr Ile Lys Lys Lys 260 265 270 Leu Glu Gln Glu Met Val Leu Ser Gln Ala Phe Gly Arg Asp Leu Gly 275 280 285 Arg Gly Thr Lys His Tyr Gly Leu Ile Val Val Gly His Ser Leu Gly 290 295 300 Ala Gly Thr Ala Ala Ile Leu Ser Phe Leu Leu Arg Pro Gln Tyr Pro 305 310 315 320 Thr Leu Lys Cys Phe Ala Tyr Ser Pro Pro Gly Gly Leu Leu Ser Glu 325 330 335 Asp Ala Met Glu Tyr Ser Lys Glu Phe Val Thr Ala Val Val Leu Gly 340 345 350 Lys Asp Leu Val Pro Arg Ile Gly Leu Ser Gln Leu Glu Gly Phe Arg 355 360 365 Arg Gln Leu Leu Asp Val Leu Gln Arg Ser Thr Lys Pro Lys Trp Arg 370 375 380 Ile Ile Val Gly Ala Thr Lys Cys Ile Pro Lys Ser Glu Leu Pro Glu 385 390 395 400 Glu Val Glu Val Thr Thr Leu Ala Ser Thr Arg Leu Trp Thr His Pro 405 410 415 Ser Asp Leu Thr Ile Ala Leu Ser Ala Ser Thr Pro Leu Tyr Pro Pro 420 425 430 Gly Arg Ile Ile His Val Val His Asn His Pro Ala Glu Gln Cys Cys 435 440 445 Cys Cys Glu Gln Glu Glu Pro Thr Tyr Phe Ala Ile Trp Gly Asp Asn 450 455 460 Lys Ala Phe Asn Glu Val Ile Ile Ser Pro Ala Met Leu His Glu His 465 470 475 480 Leu Pro Tyr Val Val Met Glu Gly Leu Asn Lys Val Leu Glu Asn Tyr 485 490 495 Asn Lys Gly Lys Thr Ala Leu Leu Ser Ala Ala Lys Val Met Val Ser 500 505 510 Pro Thr Glu Val Asp Leu Thr Pro Glu Leu Ile Phe Gln Gln Gln Pro 515 520 525 Leu Pro Thr Gly Pro Pro Met Pro Thr Gly Leu Ala Leu Glu Leu Pro 530 535 540 Thr Ala Asp His Arg Asn Ser Ser Val Arg Ser Lys Ser Gln Ser Glu 545 550 555 560 Met Ser Leu Glu Gly Phe Ser Glu Gly Arg Leu Leu Ser Pro Val Val 565 570 575 Ala Ala Ala Ala Arg Gln Asp Pro Val Glu Leu Leu Leu Leu Ser Thr 580 585 590 Gln Glu Arg Leu Ala Ala Glu Leu Gln Ala Arg Arg Ala Pro Leu Ala 595 600 605 Thr Met Glu Ser Leu Ser Asp Thr Glu Ser Leu Tyr Ser Phe Asp Ser 610 615 620 Arg Arg Ser Ser Gly Phe Arg Ser Ile Arg Gly Ser Pro Ser Leu His 625 630 635 640 Ala Val Leu Glu Arg Asp Glu Gly His Leu Phe Tyr Ile Asp Pro Ala 645 650 655 Ile Pro Glu Glu Asn Pro Ser Leu Ser Ser Arg Thr Glu Leu Leu Ala 660 665 670 Ala Asp Ser Leu Ser Lys His Ser Gln Asp Thr Gln Pro Leu Glu Ala 675 680 685 Ala Leu Gly Ser Gly Gly Val Thr Pro Glu Arg Pro Pro Ser Ala Ala 690 695 700 Ala Asn Asp Glu Glu Glu Glu Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Ala 705 710 715 720 Ser Arg Gly Glu Leu Ala Leu His Asn Gly Arg Leu Gly Asp Ser Pro 725 730 735 Ser Pro Gln Val Leu Glu Phe Ala Glu Phe Ile Asp Ser Leu Phe Asn 740 745 750 Leu Asp Ser Lys Ser Ser Ser Phe Gln Asp Leu Tyr Cys Met Val Val 755 760 765 Pro Glu Ser Pro Thr Ser Asp Tyr Ala Glu Gly Pro Lys Ser Pro Ser 770 775 780 Gln Gln Glu Ile Leu Leu Arg Ala Gln Phe Glu Pro Asn Leu Val Pro 785 790 795 800 Lys Pro Pro Arg Leu Phe Ala Gly Ser Ala Asp Pro Ser Ser Gly Ile 805 810 815 Ser Leu Ser Pro Ser Phe Pro Leu Ser Ser Ser Gly Glu Leu Met Asp 820 825 830 Leu Thr Pro Thr Gly Leu Ser Ser Gln Glu Cys Leu Ala Ala Asp Lys 835 840 845 Ile Arg Thr Ser Thr Pro Thr Gly His Gly Ala Ser Pro Ala Lys Gln 850 855 860 Asp Glu Leu Val Ile Ser Ala Arg 865 870 <210> 21 <211> 2619 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> a DNA encoding a partial-length polypetide of human DG lipase hom ologue wherein an methionine residue is added at its N-terminus <220> <221> CDS <222> (1)..(2619) <223> <400> 21 atg agg agg cag cgt aac ctg cgg acc tac aac ctg cgg cac cgc tta 48 Met Arg Arg Gln Arg Asn Leu Arg Thr Tyr Asn Leu Arg His Arg Leu 1 5 10 15 gag gag ggt caa gcc acc agc tgg tcg cgc cgg ctc aaa gtg ttc ctc 96 Glu Glu Gly Gln Ala Thr Ser Trp Ser Arg Arg Leu Lys Val Phe Leu 20 25 30 tgc tgc acg cgg acg aag gac tcc cag tca gat gcc tac tca gaa atc 144 Cys Cys Thr Arg Thr Lys Asp Ser Gln Ser Asp Ala Tyr Ser Glu Ile 35 40 45 gcc tac ctc ttt gcg gag ttc ttc cgg gac ctt gac att gtg cca tcc 192 Ala Tyr Leu Phe Ala Glu Phe Phe Arg Asp Leu Asp Ile Val Pro Ser 50 55 60 gac atc att gct ggc ctg gtg ctg ctc cgg cag cgg cag cgg gcc aag 240 Asp Ile Ile Ala Gly Leu Val Leu Leu Arg Gln Arg Gln Arg Ala Lys 65 70 75 80 cgc aac gcc gtg ctg gac gag gca aac aat gac atc ttg gcc ttc ctg 288 Arg Asn Ala Val Leu Asp Glu Ala Asn Asn Asp Ile Leu Ala Phe Leu 85 90 95 tct ggg atg ccg gtg acc aga aac acc aag tac ctc gac ctc aag aat 336 Ser Gly Met Pro Val Thr Arg Asn Thr Lys Tyr Leu Asp Leu Lys Asn 100 105 110 tca caa gag atg ctc cgc tac aaa gag gtc tgc tac tac atg ctc ttt 384 Ser Gln Glu Met Leu Arg Tyr Lys Glu Val Cys Tyr Tyr Met Leu Phe 115 120 125 gcc ctg gct gcc tac ggg tgg ccc atg tac ctg atg cgg aag ccc gcc 432 Ala Leu Ala Ala Tyr Gly Trp Pro Met Tyr Leu Met Arg Lys Pro Ala 130 135 140 tgc ggc ctc tgc caa ctg gct cgg tcc tgc tcg tgt tgc ctg tgt cct 480 Cys Gly Leu Cys Gln Leu Ala Arg Ser Cys Ser Cys Cys Leu Cys Pro 145 150 155 160 gcg agg ccg cgg ttc gcc cct gga gtc acc atc gag gaa gac aac tgc 528 Ala Arg Pro Arg Phe Ala Pro Gly Val Thr Ile Glu Glu Asp Asn Cys 165 170 175 tgt ggc tgt aat gcc att gcc atc cgg cgc cac ttc ctg gac gag aac 576 Cys Gly Cys Asn Ala Ile Ala Ile Arg Arg His Phe Leu Asp Glu Asn 180 185 190 atg act gcg gtg gac atc gtc tat acc tcc tgc cat gat gcg gtc tat 624 Met Thr Ala Val Asp Ile Val Tyr Thr Ser Cys His Asp Ala Val Tyr 195 200 205 gaa acg ccc ttc tac gtg gcg gtg gac cat gac aag aag aaa gtg gtg 672 Glu Thr Pro Phe Tyr Val Ala Val Asp His Asp Lys Lys Lys Val Val 210 215 220 atc agt atc cgg ggg acc ctg tcc ccc aag gat gcc ctg act gac ctg 720 Ile Ser Ile Arg Gly Thr Leu Ser Pro Lys Asp Ala Leu Thr Asp Leu 225 230 235 240 acg ggt gat gct gag cgc ctc ccc gtg gag ggg cac cac ggc acc tgg 768 Thr Gly Asp Ala Glu Arg Leu Pro Val Glu Gly His His Gly Thr Trp 245 250 255 ctg ggc cac aag ggt atg gtc ctc tca gct gag tac atc aag aag aaa 816 Leu Gly His Lys Gly Met Val Leu Ser Ala Glu Tyr Ile Lys Lys Lys 260 265 270 ctg gag cag gag atg gtc ctg tcc cag gcc ttt ggg cga gac ctg ggc 864 Leu Glu Gln Glu Met Val Leu Ser Gln Ala Phe Gly Arg Asp Leu Gly 275 280 285 cgc gga acc aaa cac tac ggc ctg att gtg gtg ggc cac tcc ctg ggc 912 Arg Gly Thr Lys His Tyr Gly Leu Ile Val Val Gly His Ser Leu Gly 290 295 300 gcg ggc act gct gcc atc ctc tcc ttc ctt ctg cgc cca cag tat ccg 960 Ala Gly Thr Ala Ala Ile Leu Ser Phe Leu Leu Arg Pro Gln Tyr Pro 305 310 315 320 acc ctc aag tgc ttt gcc tac tcc ccg cca ggg ggc ctg ctg agt gag 1008 Thr Leu Lys Cys Phe Ala Tyr Ser Pro Pro Gly Gly Leu Leu Ser Glu 325 330 335 gat gcg atg gag tat tcc aag gag ttc gtg act gct gtg gtt ctg ggc 1056 Asp Ala Met Glu Tyr Ser Lys Glu Phe Val Thr Ala Val Val Leu Gly 340 345 350 aaa gac ctc gtc ccc agg att ggc ctc tct cag ctg gaa ggc ttc cgc 1104 Lys Asp Leu Val Pro Arg Ile Gly Leu Ser Gln Leu Glu Gly Phe Arg 355 360 365 aga cag ctc ctg gat gtc ctg cag cga agc acc aag ccc aaa tgg cgg 1152 Arg Gln Leu Leu Asp Val Leu Gln Arg Ser Thr Lys Pro Lys Trp Arg 370 375 380 atc atc gtg ggg gcc acc aaa tgc atc ccc aag tcg gag ctg cct gag 1200 Ile Ile Val Gly Ala Thr Lys Cys Ile Pro Lys Ser Glu Leu Pro Glu 385 390 395 400 gag gta gag gtg acc acc ctg gcc agc acg cgg ctc tgg acc cac ccc 1248 Glu Val Glu Val Thr Thr Leu Ala Ser Thr Arg Leu Trp Thr His Pro 405 410 415 agc gac cta act ata gcc ctc tca gcc agc act cca ctc tac ccg ccc 1296 Ser Asp Leu Thr Ile Ala Leu Ser Ala Ser Thr Pro Leu Tyr Pro Pro 420 425 430 ggc cgc atc atc cac gtg gtc cac aac cac cct gca gag cag tgc tgc 1344 Gly Arg Ile Ile His Val Val His Asn His Pro Ala Glu Gln Cys Cys 435 440 445 tgc tgt gag cag gag gag ccc aca tac ttt gcc atc tgg ggc gac aac 1392 Cys Cys Glu Gln Glu Glu Pro Thr Tyr Phe Ala Ile Trp Gly Asp Asn 450 455 460 aag gcc ttc aat gag gtg atc atc tcg cca gcc atg ctg cat gag cac 1440 Lys Ala Phe Asn Glu Val Ile Ile Ser Pro Ala Met Leu His Glu His 465 470 475 480 ctg ccc tat gtg gtc atg gag ggg ctc aac aag gtg ctg gag aac tac 1488 Leu Pro Tyr Val Val Met Glu Gly Leu Asn Lys Val Leu Glu Asn Tyr 485 490 495 aac aag ggg aag acc gct ctg ctc tct gca gcc aag gtc atg gtg agc 1536 Asn Lys Gly Lys Thr Ala Leu Leu Ser Ala Ala Lys Val Met Val Ser 500 505 510 cct acc gag gtg gac ctg act cct gag ctc atc ttc cag cag cag cca 1584 Pro Thr Glu Val Asp Leu Thr Pro Glu Leu Ile Phe Gln Gln Gln Pro 515 520 525 ctc ccc acg ggg ccg ccc atg ccc act ggc ctt gcc ctg gag ctg ccg 1632 Leu Pro Thr Gly Pro Pro Met Pro Thr Gly Leu Ala Leu Glu Leu Pro 530 535 540 act gca gac cac cgc aac agc agc gtc agg agc aag tcc cag tct gag 1680 Thr Ala Asp His Arg Asn Ser Ser Val Arg Ser Lys Ser Gln Ser Glu 545 550 555 560 atg agc ctg gag ggc ttc tcg gag ggg cgg ctg ctg tcg cca gtg gtt 1728 Met Ser Leu Glu Gly Phe Ser Glu Gly Arg Leu Leu Ser Pro Val Val 565 570 575 gcg gcg gcg gcc cgc cag gac ccg gtg gag ctg ctg ctg ctg tct acc 1776 Ala Ala Ala Ala Arg Gln Asp Pro Val Glu Leu Leu Leu Leu Ser Thr 580 585 590 cag gag cgg ctg gca gcg gag ctg cag gcc cgg cgg gca cca ctg gcc 1824 Gln Glu Arg Leu Ala Ala Glu Leu Gln Ala Arg Arg Ala Pro Leu Ala 595 600 605 acc atg gag agc ctc tcg gac act gag tcc ctg tac agc ttc gac tcg 1872 Thr Met Glu Ser Leu Ser Asp Thr Glu Ser Leu Tyr Ser Phe Asp Ser 610 615 620 cgc cgc tcc tca ggc ttc cgc agc atc cgg ggc tcc ccc agc ctc cac 1920 Arg Arg Ser Ser Gly Phe Arg Ser Ile Arg Gly Ser Pro Ser Leu His 625 630 635 640 gct gtg ctg gag cgt gat gaa ggc cac ctc ttc tac att gac cct gcc 1968 Ala Val Leu Glu Arg Asp Glu Gly His Leu Phe Tyr Ile Asp Pro Ala 645 650 655 atc ccc gag gaa aac cca tcc ctg agc tcg cgc act gag ctg ctg gcg 2016 Ile Pro Glu Glu Asn Pro Ser Leu Ser Ser Arg Thr Glu Leu Leu Ala 660 665 670 gcc gac agc ctg tcc aag cac tca cag gac acg cag ccc ctg gag gcg 2064 Ala Asp Ser Leu Ser Lys His Ser Gln Asp Thr Gln Pro Leu Glu Ala 675 680 685 gcc ctg ggc agt ggc ggc gtc act cct gag cgg ccc ccc agt gct gcg 2112 Ala Leu Gly Ser Gly Gly Val Thr Pro Glu Arg Pro Pro Ser Ala Ala 690 695 700 gcc aat gac gag gag gaa gag gtt ggc ggt ggg ggt ggc ggg ccg gcc 2160 Ala Asn Asp Glu Glu Glu Glu Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Ala 705 710 715 720 tcc cgc ggg gag ctg gcg ctg cac aat ggg cgc ctg ggg gac tcg ccc 2208 Ser Arg Gly Glu Leu Ala Leu His Asn Gly Arg Leu Gly Asp Ser Pro 725 730 735 agt cct cag gtg ctg gaa ttc gcc gag ttc atc gac agc ctc ttc aac 2256 Ser Pro Gln Val Leu Glu Phe Ala Glu Phe Ile Asp Ser Leu Phe Asn 740 745 750 ctg gac agc aag agc agc tcc ttc caa gac ctc tac tgc atg gtg gtg 2304 Leu Asp Ser Lys Ser Ser Ser Phe Gln Asp Leu Tyr Cys Met Val Val 755 760 765 ccc gag agc ccc acc agt gac tac gct gag ggc ccc aag tcc ccc agc 2352 Pro Glu Ser Pro Thr Ser Asp Tyr Ala Glu Gly Pro Lys Ser Pro Ser 770 775 780 cag caa gag atc ctg ctc cgt gcc cag ttc gag ccc aac ctg gtg ccc 2400 Gln Gln Glu Ile Leu Leu Arg Ala Gln Phe Glu Pro Asn Leu Val Pro 785 790 795 800 aag ccc cca cgg ctc ttt gcc ggc tca gcc gac ccc tcc tcg ggc atc 2448 Lys Pro Pro Arg Leu Phe Ala Gly Ser Ala Asp Pro Ser Ser Gly Ile 805 810 815 tca ctc tcg ccc tcc ttc ccg ctc agc tcc tcg ggt gag ctc atg gac 2496 Ser Leu Ser Pro Ser Phe Pro Leu Ser Ser Ser Gly Glu Leu Met Asp 820 825 830 ctg acg ccc acg ggc ctc agt agc cag gaa tgc ctg gcg gct gac aag 2544 Leu Thr Pro Thr Gly Leu Ser Ser Gln Glu Cys Leu Ala Ala Asp Lys 835 840 845 atc cgg act tct acc ccc act ggc cac gga gcc agc ccc gcc aag caa 2592 Ile Arg Thr Ser Thr Pro Thr Gly His Gly Ala Ser Pro Ala Lys Gln 850 855 860 gat gag ctg gtc atc tca gca cgc tag 2619 Asp Glu Leu Val Ile Ser Ala Arg 865 870

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒトＤＧリパーゼホモログとヒトＤＧリパー
ゼの相同性を示す。上段がヒトＤＧリパーゼホモログ、
下段がヒトＤＧリパーゼのアミノ酸配列を示し、｜は両
者で一致するアミノ酸、*は相同性のあるアミノ酸を表
わす。

【図２】 ヒトＤＧリパーゼホモログ遺伝子の各種組織
におけるｍＲＮＡレベルの発現をＲＴ−ＰＣＲ法により
定量した結果を示す。上段がヒトＤＧリパーゼホモログ
遺伝子、下段はコントロールのＧ３ＰＤＨ遺伝子の発現
量である。Ｍは鎖長マーカーを表す。

【図３】 ヒトＤＧリパーゼホモログの各種組織におけ
るｍＲＮＡレベルの発現を、ヒト１２レーンＭＴＮブロ
ットを用いてノーザンブロット法により検出した結果を
示す。

【図４】 ヒトＤＧリパーゼホモログの各種組織におけ
るｍＲＮＡレベルの発現を、ヒト脳ＭＴＮブロットIIを
用いてノーザンブロット法により検出した結果を示す。

【図５】 ヒトＤＧリパーゼホモログの各種組織におけ
るｍＲＮＡレベルの発現を、ヒト脳ＭＴＮブロットＶを
用いてノーザンブロット法により検出した結果を示す。

【図６】 ヒトＤＧリパーゼホモログの部分ペプチドを
抗原として免疫したウサギの、抗体価を継時的にＥＬＩ
ＳＡにより測定した結果を示す。横軸が免疫開始からの
時間（週）、縦軸が抗体価（ＥＬＩＳＡでの４９２ｎｍ
の吸光度）を示す。

【図７】 ヒトＤＧリパーゼホモログの部分長ポリペプ
チドの発現をウェスタンブロッティング法により検出し
た結果を示す。右レーンが形質転換細胞、左レーンがコ
ントロール細胞での検出で、左の線は、９７ｋＤａの分
子量マーカーのバンドの位置を示す。

【図８】 ヒトＤＧリパーゼホモログの部分長ポリペプ
チドのＤＧリパーゼ活性を示す。○はコントロール細胞
の破砕液、●は形質転換細胞の破砕液、▲は形質転換細
胞の破砕液にＲＨＣ−８０２６７を添加したものを、そ
れぞれ酵素源としたときの活性を示す。横軸は、酵素源
として加えた細胞の破砕液中の蛋白質の量（μｇ）を、
縦軸は、放射能量（ｃｐｍ）すなわちＤＧリパーゼ活性
を示す。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 1/08 ４Ｂ０６５ Ａ６１Ｐ 1/04 3/00 ４Ｃ０８４ 1/08 3/04 ４Ｃ０８５ 3/00 9/10 ４Ｃ０８７ 3/04 9/12 ４Ｈ０４５ 9/10 11/06 9/12 17/02 11/06 17/06 17/02 19/02 17/06 19/08 19/02 25/16 19/08 25/18 25/16 25/22 25/18 25/24 25/22 25/28 25/24 25/32 25/28 25/36 25/32 29/00 25/36 １０１ 29/00 35/00 １０１ 37/06 35/00 43/00 １１１ 37/06 Ｃ０７Ｋ 16/40 43/00 １１１ Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ０７Ｋ 16/40 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 9/20 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 9/20 1/44 Ｃ１２Ｐ 21/02 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 1/44 33/50 Ｚ 1/68 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/50 5/00 Ｂ 33/53 Ｃ Ａ６１Ｋ 37/54 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA29 AA40 BB03 BB20 CB17 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 FB01 FB02 FB03 4B024 AA01 AA08 AA10 BA11 CA04 CA05 CA06 CA09 DA01 DA02 DA05 DA11 DA12 EA04 FA10 GA11 GA18 GA19 HA03 HA08 HA12 HA14 4B050 CC01 CC04 DD11 LL01 4B063 QA01 QA12 QA17 QA18 QQ20 QQ22 QQ44 QR08 QR12 QR14 QR32 QR33 QR41 QR42 QR55 QR58 QR59 QR62 QR66 QR69 QR77 QR80 QR82 QS12 QS25 QS34 QS36 QS39 QX02 QX07 4B064 AG01 CA01 CA19 CB30 CC24 DA01 4B065 AA01X AA57X AA72X AA88X AA90X AA93Y AB01 AC14 BA01 CA31 CA44 4C084 AA02 AA06 AA07 AA13 BA01 BA08 BA22 CA18 CA53 DC22 NA14 ZA08 ZA12 ZA15 ZA18 ZA36 ZA42 ZA59 ZA66 ZA70 ZA71 ZA89 ZA96 ZB08 ZB11 ZB15 ZB26 ZC20 ZC39 4C085 AA13 AA14 BB11 CC02 CC04 CC05 CC07 CC08 CC21 CC31 DD23 DD62 DD63 EE01 4C087 AA01 AA02 AA03 BC83 CA12 NA14 ZA08 ZA12 ZA15 ZA18 ZA36 ZA42 ZA59 ZA66 ZA70 ZA71 ZA89 ZA96 ZB08 ZB11 ZB15 ZB26 ZC20 ZC39 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA45 DA75 DA86 EA21 EA22 EA23 EA28 FA72 FA74

Claims (38)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号１または１４で表されるアミノ
   酸配列からなるポリペプチド。
2. 【請求項２】 配列番号１または１４で表されるアミノ
   酸配列において１以上のアミノ酸が欠失、置換若しくは
   付加され、かつ配列番号１または１４で表されるアミノ
   酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を有
   し、かつジアシルグリセロールリパーゼ活性を有するポ
   リペプチド。
3. 【請求項３】 請求項１または２記載のポリペプチドを
   コードするＤＮＡ。
4. 【請求項４】 配列番号２、３または１５で表される塩
   基配列からなるＤＮＡ。
5. 【請求項５】 配列番号３または１５で表される塩基配
   列と相補的な塩基配列を有するＤＮＡとストリンジェン
   トな条件下でハイブリダイズし、かつ配列番号３または
   １５で表される塩基配列と８０％以上の相同性を有する
   塩基配列を有し、かつジアシルグリセロールリパーゼ活
   性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ。
6. 【請求項６】 請求項３〜５のいずれか１項に記載のＤ
   ＮＡの塩基配列と相補的な塩基配列を有するＤＮＡ。
7. 【請求項７】 請求項３〜６のいずれか１項に記載のＤ
   ＮＡをベクターに組み込んで得られる組換え体ベクタ
   ー。
8. 【請求項８】 請求項３〜６のいずれか１項に記載のＤ
   ＮＡと相同な配列からなるＲＮＡをベクターに組み込ん
   で得られる組換え体ベクター。
9. 【請求項９】 請求項３〜６のいずれか１項に記載のＤ
   ＮＡ、または請求項７記載の組換え体ベクターを保有す
   る形質転換体。
10. 【請求項１０】 形質転換体が微生物、動物細胞、植物
    細胞および昆虫細胞からなる群より選ばれる形質転換体
    である、請求項９記載の形質転換体。
11. 【請求項１１】 形質転換体が、非ヒトトランスジェニ
    ック動物またはトランスジェニック植物である、請求項
    ９記載の形質転換体。
12. 【請求項１２】 請求項３〜６のいずれか１項に記載の
    ＤＮＡを欠損または変異させた非ヒトノックアウト動
    物。
13. 【請求項１３】 請求項９または１０記載の形質転換体
    を培地に培養し、培養物中に請求項１または２記載のポ
    リペプチドを生成蓄積させ、該培養物から該ポリペプチ
    ドを採取することを特徴とする、該ポリペプチドの製造
    方法。
14. 【請求項１４】 請求項１１記載の非ヒトトランスジェ
    ニック動物を飼育し、請求項１または２記載のポリペプ
    チドを該動物中に生成蓄積させ、該動物中より該ポリペ
    プチドを採取することを特徴とする、該ポリペプチドの
    製造方法。
15. 【請求項１５】 請求項１１記載のトランスジェニック
    植物を栽培し、請求項１または２記載のポリペプチドを
    該植物中に生成蓄積させ、該植物中より該ポリペプチド
    を採取することを特徴とする、該ポリペプチドの製造方
    法。
16. 【請求項１６】 請求項３〜６のいずれか１項に記載の
    ＤＮＡを用い、イン・ビトロ（in vitro）での転写・翻
    訳系により請求項１または２記載のポリペプチドを合成
    することを特徴とする、該ポリペプチドの製造方法。
17. 【請求項１７】 請求項３〜６のいずれか１項に記載の
    ＤＮＡ、または請求項３〜６のいずれか１項に記載のＤ
    ＮＡの連続する少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有
    するＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを用いて、請求項
    １または２記載のポリペプチドをコードするＤＮＡの発
    現を検出または定量する方法。
18. 【請求項１８】 請求項３〜６のいずれか１項に記載の
    ＤＮＡ、または請求項３〜６のいずれか１項に記載のＤ
    ＮＡの連続する少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有
    するＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを用いて、請求項
    １または２記載のポリペプチドをコードするＤＮＡの変
    異を検出または同定する方法。
19. 【請求項１９】 請求項３〜６のいずれか１項に記載の
    ＤＮＡ、または請求項３〜６のいずれか１項に記載のＤ
    ＮＡの連続する少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有
    するＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを用いて、請求項
    １または２記載のポリペプチドをコードするＤＮＡのプ
    ロモーター領域および／または転写制御領域を含むＤＮ
    Ａを取得する方法。
20. 【請求項２０】 請求項３〜６のいずれか１項に記載の
    ＤＮＡ、または請求項３〜６のいずれか１項に記載のＤ
    ＮＡの連続する少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有
    するＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを用いて、請求項
    １または２記載のポリペプチドをコードするＤＮＡの転
    写またはｍＲＮＡの翻訳を抑制する方法。
21. 【請求項２１】 請求項１または２記載のポリペプチド
    を認識する抗体。
22. 【請求項２２】 請求項２１記載の抗体を用いる、請求
    項１または２記載のポリペプチドの免疫学的検出法。
23. 【請求項２３】 請求項１または２記載のポリペプチド
    を含有する医薬。
24. 【請求項２４】 医薬が精神分裂病、痛み、脳挫傷、脊
    髄損傷、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎症
    性大腸炎、自己免疫疾患、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、
    嘔吐、食欲不振、悪性腫瘍の予防および／または治療の
    ための医薬である請求項２３記載の医薬。
25. 【請求項２５】 請求項３〜６のいずれか１項に記載の
    ＤＮＡ、または請求項３〜６のいずれか１項に記載のＤ
    ＮＡの連続する少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有
    するＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを含有する医薬。
26. 【請求項２６】 医薬が、うつ病、不安、パーキンソン
    病、精神分裂病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依
    存症、痛み、脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化症、慢性関
    節リウマチ、乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫疾患、喘
    息、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、過
    食、肥満、アルコール依存症、悪性腫瘍の診断のための
    医薬である請求項２５記載の医薬。
27. 【請求項２７】 医薬がうつ病、不安、パーキンソン
    病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘息、
    過食、肥満、アルコール依存症の予防および／または治
    療のための医薬である請求項２５記載の医薬。
28. 【請求項２８】 請求項７または８記載の組換え体ベク
    ターを含有する医薬。
29. 【請求項２９】 医薬が精神分裂病、痛み、脳挫傷、脊
    髄損傷、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、乾癬、炎症
    性大腸炎、自己免疫疾患、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、
    嘔吐、食欲不振、悪性腫瘍の予防および／または治療の
    ための医薬である請求項２８記載の医薬。
30. 【請求項３０】 請求項２１記載の抗体を含有する医
    薬。
31. 【請求項３１】 医薬が、うつ病、不安、パーキンソン
    病、精神分裂病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依
    存症、痛み、脳挫傷、脊髄損傷、多発性硬化症、慢性関
    節リウマチ、乾癬、炎症性大腸炎、自己免疫疾患、喘
    息、心筋梗塞、脳梗塞、高血圧、嘔吐、食欲不振、過
    食、肥満、アルコール依存症、悪性腫瘍の診断のための
    医薬である請求項３０記載の医薬。
32. 【請求項３２】 医薬がうつ病、不安、パーキンソン
    病、幻覚、痴呆、記憶障害、マリファナ依存症、喘息、
    過食、肥満、アルコール依存症の予防および／または治
    療のための医薬である請求項３０記載の医薬。
33. 【請求項３３】 請求項１または２記載のポリペプチド
    と被験試料とを接触させ、被験試料による該ポリペプチ
    ドが有するジアシルグリセロールリパーゼ活性の変動を
    測定することを特徴とする、該ポリペプチドが有するジ
    アシルグリセロールリパーゼ活性を変動させる化合物の
    スクリーニング方法。
34. 【請求項３４】 請求項１または２記載のポリペプチド
    を発現する細胞と被験試料とを接触させ、請求項２１記
    載の抗体を用い、被験試料による該ポリペプチドの発現
    量の変動を定量することを特徴とする、該ポリペプチド
    をコードするＤＮＡの発現を変動させる化合物のスクリ
    ーニング方法。
35. 【請求項３５】 請求項１または２記載のポリペプチド
    を発現する細胞と被験試料とを接触させ、請求項３〜６
    のいずれか１項に記載のＤＮＡ、または請求項３〜６の
    いずれか１項に記載のＤＮＡの連続する少なくとも１５
    塩基以上の塩基配列を有するＤＮＡまたはオリゴヌクレ
    オチドを用い、該ポリペプチドをコードするＤＮＡの発
    現を定量することを特徴とする、該ポリペプチドをコー
    ドするＤＮＡの発現を変動させる化合物のスクリーニン
    グ方法。
36. 【請求項３６】 請求項１９記載の方法により取得され
    るプロモーター領域および／または転写制御領域を含む
    ＤＮＡと、該プロモーター領域および／または転写制御
    領域を含むＤＮＡの下流に連結させたレポーター遺伝子
    とを含有するベクターを用いて動物細胞を形質転換し、
    該形質転換体と被験試料とを接触させ、該レポーター遺
    伝子の翻訳産物を定量することを特徴とする、該プロモ
    ーター領域および／または転写制御領域による請求項１
    または２記載のポリペプチドをコードするＤＮＡの転写
    効率を変動させる化合物のスクリーニング方法。
37. 【請求項３７】 請求項１１記載の非ヒトトランスジェ
    ニック動物に被験試料を投与し、請求項３〜６のいずれ
    か１項に記載のＤＮＡ、または請求項３〜６のいずれか
    １項に記載のＤＮＡの連続する少なくとも１５塩基以上
    の塩基配列を有するＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを
    用い、請求項１または２記載のポリペプチドをコードす
    るＤＮＡの発現を定量することを特徴とする、該ポリペ
    プチドをコードするＤＮＡの発現を変動させる化合物の
    スクリーニング方法。
38. 【請求項３８】 請求項３３〜３７のいずれか１項に記
    載のスクリーニング方法により得られる化合物。