JP4824550B2 - CD11b/CD18相互作用ドメインを含むかまたは欠く修飾ボルデテラアデニレートシクラーゼならびにその使用 - Google Patents
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a. 百日咳菌アデニレートシクラーゼのアミノ酸1166からアミノ酸1281に及ぶ百日咳菌のCD11b/CD18相互作用ドメイン(配列番号2)、または
b. 最良局所アラインメントを検索するためのアルゴリズムを用いて、ボルデテラ属のアデニレートシクラーゼの配列を百日咳菌のアデニレートシクラーゼの配列と一列に並べることにより同定した場合の、百日咳菌のCD11b/CD18相互作用ドメインに対応する上記ボルデテラ属のアデニレートシクラーゼのドメイン。
別の実施形態では、本発明のタンパク質はアシル化される。
a. 30〜500アミノ酸、好ましくは50〜300、さらに好ましくは50〜150アミノ酸を有するボルデテラアデニレートシクラーゼの断片であって、上記ボルデテラアデニレートシクラーゼのCD11b/CD18相互作用ドメインを含むか、またはCD11b/CD18と結合する能力を保有するのに十分な上記野生型CD11b/CD18相互作用ドメインの断片を含む断片、
b. 上記断片と少なくとも70%の同一性、好ましくは80%、さらに好ましくは90%の同一性を有する上記断片の変異体であって、CD11b/CD18と結合する能力を保有する変異体
であるポリペプチドである。
したがって本発明は、百日咳に関連した疾患症候のヒトまたは動物における予防または治療のための、および/またはボルデテラ感染に関連した疾患症候に対してヒトまたは動物を防御するためのワクチンまたは医薬の製造における上記のようなポリペプチドの使用に関する。
a. 生体から抽出されるCD11b発現細胞を提供し、
b. 上記CD11b発現細胞に対して上記ベクターをターゲッティングするための適切な条件下で本発明のベクターとともに上記CD11b発現細胞を培養する
ことを包含する方法にも関する。
本明細書中で用いる場合、「結合される」という用語は、当該分子とポリペプチドの物理的会合を可能にする任意の相互作用を意味する。好ましくは結合は、共有結合である。それは、直接共有結合または接合体を形成するための結合剤の使用による間接結合であり得る。化学結合法は、当該技術分野で周知である。化学結合は、例えばマレイミド、ペプチド、ジスルフィドまたはチオエーテル結合の中から選択され得る。例N−ピリジルスルホニル活性化スルフヒドリルを用いたジスルフィド結合が用いられ得る。
CD11b発現細胞の機能的特性は、これらの特定細胞に対してターゲッティングする薬剤のためのタンパク質様ベクターの製造における本発明の上記ポリペプチドの使用をさらに限定する。この情況において、本発明の特定の一実施形態では、いわゆる当該分子は薬剤の有効成分である。上記有効成分は、本発明のポリペプチドに化学的または遺伝子的に結合され得る。有益には、当該分子は、アデニレートシクラーゼ毒素に結合されると、炎症応答に関与する細胞、例えば好中球の表面に特異的にターゲッティングされる抗炎症薬である。
a. 生体から抽出されるCD11b発現細胞を提供し、
b. 上記CD11b発現細胞に対して上記ベクターをターゲッティングするための適切な条件下で当該分子として抗原またはエピトープを保有する本発明のベクターとともに上記CD11b発現細胞を培養する
ことを包含する方法に関する。
本発明は、上記の方法により得られる異種抗原またはエピトープを含むCD11b発現細胞も提供する。
a. 上記患者からCD11b発現細胞を抽出し;
b. 上記細胞に対して上記ベクターをターゲッティングするのに適した条件下で当該分子として抗原またはエピトープを保有する本発明のベクターとともに上記CD11b発現細胞をin vitro培養し;
c. 上記ベクターを含む効率的量の上記細胞を上記患者に再投与して、CD4+および/またはCD8+応答を初回刺激して、それにより上記抗原に対して上記患者を免疫感作する
ことを包含する方法を提供する。
したがって本発明は、当該分子としてエピトープまたは抗原を保有する本発明のベクターを、製薬上許容可能なビヒクルと組合せて含む医薬組成物にも関する。
本発明はさらに、病原体感染に対してヒトまたは動物を免疫感作するための方法であって、免疫防御および非毒性量の本発明のベクターを含むワクチンをこのようなヒトまたは動物に投与することを包含する方法に関する。
a. CD11b/CD18結合を欠く本発明のタンパク質;
b. CD11b/CD18インテグリンと結合し得る本発明のポリペプチド;あるいは
c. CD11b発現細胞に対して当該分子をターゲッティングするためのベクター。
好ましくは上記発現ベクターは、プラスミド、コスミド、ファージミドまたはウイルスDNAである。
好ましい一実施形態では、モノクローナル抗体は、CD11b/CD18相互作用ドメイン中に存在するエピトープに対して、好ましくはアミノ酸1166からアミノ酸1281に及ぶ百日咳菌アデニレートシクラーゼのCD11b/CD18相互作用ドメイン中に存在するエピトープに対して向けられる。
ヒト生物体において用いるために、本発明の抗体は、例えば抗体機能を有さないヒト免疫グロブリンの超可変部を上記の技法から得られるモノクローナル免疫グロブリンの超可変部と取り換えることにより、ヒト化され得る。
A.材料および方法
A.1 CyaA由来タンパク質の産生、精製および修飾
宿主としての大腸菌XL1−Blue株(Stratagene, Amsterdam, Netherlands)において、標準プロトコール(Sambrook et al., 1989)に従って、DNA操作を実施した。アシル化野生型プロCyaA(pACT7)、アシル化野生型CyaA(pT7CACT1)、ならびに独特のシステイン残基およびOVAエピトープをその触媒ドメイン中に保有する組換え解毒化CyaA−E5−CysOVA(pCACT−E5−CysOva)をコードするプラスミドは、すでに記載されている(Gmira et al., 2001; Guermonprez et al., 2001; Osicka et al., 2000; Sebo et al., 1991)。CyaA373−1706をコードするプラスミド(pTRCyaAΔ1〜373)は、pTRCAGの誘導体であって(Gmira et al., 2001)、この場合、毒素の触媒ドメインをコードするDNA配列(NdeIおよびBstBI間の部位を構成)が欠失され、アミノ酸配列:Met−Gly−Cys−Gly−Asnをコードする適切な合成二本鎖オリゴヌクレオチドに取り換えられた。
CyaA毒素(明礬中20 μg)を腹腔内的に、BALB/cマウスを最初に免疫感作した。約2週間間隔で、明礬中のCyaA10 μgでマウスを3回、追加免疫した。免疫感作プロトコールの間中、マウスを採血し、ELISAにより抗CyaA抗体の存在に関してそれらの血清を試験した。有意の血清力価が検出されたら、最終追加免疫をこれらのマウスに投与し、3日後にそれらの脾臓細胞をP3×63骨髄腫細胞(ATCC, Manassas, USA)と融合させた。ELISAにより、CyaA特異的モノクローナル抗体の産生に関して、生成ハイブリドーマをスクリーニングした。次に高産生性ハイブリドーマを選択し、単一細胞限界希釈によりクローン化し、その後、BALB/cヌードマウスにおいて腹水症を作るために用いて、多量の抗CyaAモノクローナル抗体を生成した。メーカーの使用説明書に従って、T−GelTM精製キット(Pierce, Bezons, France)を用いて、腹水からモノクローナル抗体を精製した。Bio-Radタンパク質検定(Bio-Rad, Marnes la Coquette, France)を用いて、抗体の独活を測定した。これらのモノクローナル抗体の内野2つをこの試験に用いた:即ち、アミノ酸1〜190内に局在するエピトープと反応する抗体5G12、ならびにアミノ酸1006〜1706内に局在するエピトープと反応する抗体6D7。
ヒトCD11b/CD18(CHO−CD11b細胞)、ヒトCD11c/CD18(CHO−CD11c)でトランスフェクトされた、またはベクター単独でトランスフェクト化された(CHO細胞)チャイニーズハムスター卵巣細胞を、D. Golenbock氏(Boston University School of Medicine, Boston, MA)の御厚意により提供され、前に記載されたようにネオマイシンの存在下で培養した(Ingalls et al., 1998)。
ヒトCD11b(ICRF44、マウスIgG1、κ)およびヒトCD11c(B−Ly6、マウスIgG1、κ)に特異的なモノクローナル抗体を、BD Pharmingen(Le Pont de Claix, France)から購入した。
Guermonprez et al., 2001に記載されたように、検定を実施した。要するに、2×105細胞を、4.5 mg/mlグルコースを含有するDMEM培地(Life Technologies, Cergy Pontoise, France)中の指示濃度のCyaA分子とともに、氷上で30分間、96ウエル培養プレート中で血清を伴わずにインキュベートした。洗浄後、抗CyaA触媒ドメインMab(5G12)または抗CyaA反復ドメインMab(6D7)を25 μg/mlで付加した。いくつかの実験では、細胞を指示濃度のCyaA分子とともに氷上で30分間予備インキュベートした。次にCyaA−ビオチン(30 nM)、抗CD11b Mab(2 μg/ml)または抗CD11c Mab(2 μg/ml)(BD Pharmigen)を、毒素の連続存在下で、別々に付加した。
本質的にGuermonprez et al., 2001に記載されたのと同様に、CyaA毒素に曝露された細胞中に蓄積された環状AMPを実施した。要するに、5×105細胞を、DMEM+グルコース中の指示濃度のCyaAとともに、37℃で20分間、インキュベートした。洗浄後、細胞サイトゾル中に蓄積されたcAMPを、0.1 N HClを用いた溶解により放出し、120℃で5分間煮沸した。0.1 N NaOHで中和後、cAMP−BSA接合体で予め被覆しておいた微量滴定プレートに試料を付加して、次に抗cAMPウサギ抗血清の適切な希釈液とともにインキュベートした。洗浄後、抗cAMP抗体が、アルカリ性ホスファターゼと結合した抗ウサギ抗体とともに明示された。既知のcAMP濃度を付加することにより得られる標準曲線との比較から、各試料のcAMP含量を確定した。
Osicka et al., 2000に前に記載されたように、CyaA分子の侵襲性活性を確定した。要するに、ヒツジ赤血球を毒素とともに30分間インキュベートし、赤血球中に転位され、細胞外付加トリプシンによる消化に対して防御されるAC活性として、侵襲性活性を測定した。
B.1 CyaAはCD11b + 細胞と特異的に結合し、CD11b + 細胞とのCyaA−ビオチンおよび抗CD11b結合を抑制する
CD11bとのその相互作用におけるCyaAの生物学的および構造的特性の役割を調べるために、2つの相補的検定;即ち結合検定および競合検定を開発した。結合検定は、ヒトCD11b/CD18を発現するトランスフェクト化CHO細胞(CHO−CD11b細胞)を伴う、または偽トランスフェクト化CHO細胞を伴うCyaA分子のインキュベーションと、その後の、触媒ドメインに特異的な抗CyaAモノクローナル抗体(5G12)を用いた細胞会合毒素の検出にある。図1Aに示したように、この検定を用いて、CD11b+細胞に関してCyaA結合を特異的に検出した。競合検定では、CyaA−ビオチンと競合するそれらの能力、あるいはCD11b+細胞との抗CD11bモノクローナル抗体(Mab)結合に関して、異なるCyaA分子(突然変異体または断片)を試験し得る。ここで、CHO−CD11b細胞を異なる濃度のCyaAとともに、氷上で30分間、インキュベートした。次にCyaAの連続存在下で、CyaA−ビオチン(30 nM)または抗CD11b Mab(2 μg/ml)を付加し、細胞とのそれらの結合をFACSにより評価した。図1Bに示したように、CyaAは、用量依存的に、CHO−CD11bとのCyaA−ビオチンおよび抗CD11b結合をともに効率的に抑制した。CHO細胞により発現されるその特異的受容体(CD11c)に関する別のリガンド(抗CD11c Mab)とCyaAは完全に競合できなかったため、この抑制作用はCD11bに特異的であった(図1C)。
CyaAはその侵襲性活性を実施し、そして溶血性膜チャンネルを形成するためには翻訳後パルミトイル化を必要とする、ということは十分に確立されているため、アシル化の欠如がCD11b+細胞とのCyaA相互作用に影響を及ぼすか否かを、われわれは試験した。結合検定において、CHO細胞またはCHO−CD11b細胞を、CyaAまたは非アシル化プロCyaAとともにインキュベートした。抗CyaA触媒ドメインMab(5G12)を用いて、結合を評価した。図2Aに示したように、低濃度では、CD11b+細胞とのCyaAおよびプロCyaA分子の両方の結合は、アシル化CyaAのわずかに効率的な結合と、かなり共通点があった。これは、細胞膜とのその相互作用増強、結合のためのCyaAのより良好に適合された立体配座および/またはCD11b受容体に対するCyaAのより高い親和性のためであり得る。実際、CyaA結合と比較して、プロCyaA結合は実質的により高いプロトキシン濃度で飽和に達した。この観察についての最も簡単な説明は、プロCyaAがCyaAより低親和性でCD11b細胞と結合する、というものである。高puroと貴信濃度では、プロCyaAの凝集体および/またはオリゴマーは細胞と結合し、その結果として、より多量のプロCyaAが抗体検出系により結合されることが見出される。これに対比して、対照CHO細胞とのCyaAまたはプロCyaAの極低結合が検出された(図2B)。
CD11b+細胞との毒素の相互作用におけるCyaAアシル化の役割をさらに分析するために、CHO−CD11b細胞との結合に関してCyaAと競合する非アシル化プロCyaAの能力をわれわれは試験した。図3Aに示したように、アシル化CyaAと比較した場合、非アシル化プロCyaAは、CD11b+細胞との結合に関してビオチニル化CyaAと競合する能力の有意の低減を示した。抑制の欠如がCD11bとの非効率的相互作用のためであったか否かを確定するために、CHO−CD11b細胞との抗CD11b結合を遮断するプロCyaAの能力を、われわれは評価した.実際、CyaAと比較して、プロCyaAはCHO−CD11b細胞との抗CD11b結合を抑制できなかった(図3B)。
帰納的には、CyaAは個々の活性を保有する2つの主要とメインからなる。N末端ドメインは、アデニレートシクラーゼ活性を保有し(アミノ酸1〜400)、一方、カルボキシ末端ヘモリシン部分(アミノ酸400〜1706)は、標的細胞へのACドメインの送達および百日咳菌の溶血活性に関与する。CD11b+細胞との結合におけるCyaAの2つの機能性ドメインの役割を調べるために、CHO−CD11b細胞との結合に関してCyaA−ビオチンと競合する残基1〜384によりコードされる触媒ドメイン、CyaA1〜384の、ならびに残基373〜1706によりコードされる溶血性部分CyaA373〜1706の能力を、われわれは試験した。図5Aに示したように、触媒ドメインはCHO−CD11b細胞とのCyaA−ビオチン結合を抑制できなかったが、一方、CyaA373〜1706は全長CyaAと同一結合抑制を示した。同様に触媒ドメインは、CHO−CD11b細胞との抗CD11b Mabの結合も抑制できなかった(図5B)。さらに、触媒ドメインに特異的な抗CyaA Mab(5G12)を用いた直接結合検定はCHO−CD11b細胞の表面とのCyaA1〜384のいかなる有意の会合も明示できなかったが、一方、CyaAの結合は容易に検出された(図6A)。CHO−CD11b細胞とのCyaA373〜1706の直接結合は、CyaAの最初の200アミノ酸内に位置するエピトープを認識する5G12Mabを用いて検出され得なかったが、しかし反復ドメインに特異的な別の抗CyaA Mab(6D7)を用いることにより、明らかに実証された(図6C)。さらにまたCyaAまたはCyaA373〜1706の極弱結合のみが、CD11bを欠くCHO細胞に関して6D7を用いて検出された(図6BおよびD)。要するに、これらの結果は、触媒ドメインがCD11bとのCyaA相互作用を必要としないということを、そしてCyaA/CD11b相互作用ドメインがCyaA373〜1706断片中に位置するということを明白に実証する。
CD11bと相互作用するCyaAの領域を同定するために、競合検定で試験されたC末端領域CyaA373〜1706の異なる亜断片(残基373〜1490または700〜1706または700〜1490または1006〜1706)を、われわれは発現し、精製した。しかしながらこれらのポリペプチドのうち、CHO−CD11b細胞とのCyaA−ビオチンの結合と有意なように競合し得るものはない。これは、これらの単離断片が変更された立体配座を取る、という事実のためである。したがってCyaAのCD11b結合ドメインを配置するための突然変異アプローチを、われわれは用いた。材料および方法の抗で詳述したように、毒性ポリペプチド全体を通した種々の限定位置でのFLAGエピトープ(アミノ酸配列:DYKDDDDKの)の挿入により、17の異なる修飾CyaA分子を構築した。CD11b結合ドメインのある位置での異種および高荷電ペプチドの挿入は、CD11bと相互作用するその能力を崩壊し得る、とわれわれは仮定した。17のFLAGタグ化CyaA分子を発現し、均質に精製して、CHO−CD11b細胞とのCyaA−ビオチンの結合を抑制する能力に関して試験した(2つの場合(CyaAΔ510〜515/FLAGおよびCyaAΔ1245〜1273/FLAG)、それぞれCyaAのアミノ酸510〜515または1245〜1273を欠失し、挿入FLAGエピトープに取り換えた、ということに留意)。図7に示したように、残基1166〜1281間に位置する3つの異なる部位でのFLAGエピトープの挿入は、CD11bとの相互作用を全体的に阻止した。対応する修飾CyaAは、30 nM濃度で試験した場合、本質的にはCD11b結合に関してCyaA−ビオチンと競合できなかった。これに対比して、全ての他のFLAGタグ化組換えCyaAはCD11b+細胞との結合に関してCyaA−ビオチンと競合し得たが、しかし種々の効率を有した。注目すべきは、タンパク質のカルボキシ末端近くに(即ち、位置1416、1623および1648)挿入されたFLAGエピトープを有する3つの組換えCyaA構築物もCD11b結合に関してCyaA−ビオチンと競合するそれらの能力も部分的に減損された。
アデニレートシクラーゼ毒素(ACTまたはCyaA)の生物学的活性は、完全に共有結合的翻訳後脂肪アシル化によっている。保存Lys−983残基のアシル化の不存在下では、CyaAはその触媒ドメインを赤血球サイトゾルにデリバリーできず、溶血性チャンネルを形成できない(Barry et al., 1991; Basar et al., 2001 Hackett et al., 1994)。CyaAは、さまざまな種類の赤血球に検出可能効率で浸透することが示された。しかしながら、その主要標的細胞は、CyaAに特に感受性である骨髄性細胞、例えば好中球および肺マクロファージであり、CyaAへの曝露時に無力化され、アポトーシスに委ねられるということが実証された(Confer and Eaton, 1982; Khelef and Guiso, 1995; Khelef et al., 1993)。実際近年、毒素は特定の細胞受容体αMβ2インテグリン(CD11b/CD18)を有し、これは免疫細胞、例えば好中球、マクロファージまたは樹状細胞上で専ら発現されるということ、そしてCD11bの発現はほとんどCyaAに対するこれらの細胞の高感受性を説明する、ということをわれわれは示した(Guermonprez et al., 2001)。本試験において、CyaAアシル化はCD11b+細胞とのその相互作用に主要な役割を演じる、ということを本発明者らは示した。実際、非アシル化プロCyaAはCyaAと同様に効率的にCD11b+細胞と結合し得るが、しかしそれはCHO−CD11b+細胞との結合に関してアシル化CyaAと競合するのに不十分であり、これらの細胞との抗CD11b Mab結合を完全に遮断し得た.これは、依然としてCD11bと相互作用しながら、相互作用の性質、特にプロCyaA−CD11b複合体の親和性および/または安定性が成熟CyaAのCD11b相互作用に関与するものとは有意に異なる、ということを示唆する。さらにプロCyaAは依然としてCD11b受容体と結合し得るが、しかしこの相互作用はプロトキシンの膜透過を可能にしない。それゆえ、それがcAMPへのATPの転化を触媒し得る細胞サイトゾルへの触媒ドメインのデリバリーに必要とされるCyaAの転位に足る立体配座を付与するために、アシル化が必要とされ得る。
Claims (18)
- CD11b/CD18に結合することができる多くとも500個のアミノ酸を有するボルデテラアデニレートシクラーゼ(CyaA)の断片であるポリペプチドであって、以下の:
(i)配列番号1の1166位〜1281位に亘るアミノ酸、又は
(ii)配列番号3の1165位〜1280位に亘るアミノ酸、
からなるボルデテラアデニレートシクラーゼの野生型CD11b/CD18相互作用ドメイン
を含む前記ポリペプチド。 - 請求項1に記載のポリペプチドと少なくとも90%の同一性を有し、かつ、CD11b/CD18と結合することができる、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドは、ボルデテラ種のアデニレートシクラーゼを特異的に認識する抗体を産生し得る、請求項1又は2に記載のポリペプチド。
- 百日咳菌(Bordetella pertussis)アデニレートシクラーゼを特異的に認識する抗体を産生し得る、請求項3に記載のポリペプチド。
- 以下の:
(a)配列番号1の1166位〜1281位に亘る配列から成る、又は
(b)百日咳菌アデニレートシクラーゼのアミノ酸1208〜アミノ酸1243に亘る配列を含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載のポリペプチド。 - アデニレートシクラーゼのアシル化ドメイン及び/又は疎水性ドメインをさらに含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載のポリペプチド。
- CD11b発現細胞に対して特異的に着目分子をターゲッティングするための蛋白質ベクターの製造における、請求項1〜6のいずれか1項に記載のポリペプチドの使用。
- CD11b/CD18発現細胞に対して着目分子をターゲッティングするための蛋白質ベクターであって、当該着目分子に結合された請求項1〜6のいずれか1項に記載のCD11b/CD18に結合し得るポリペプチドを含む、前記ベクター。
- 前記着目分子が、ペプチド、糖ペプチド、リポペプチド、多糖、オリゴ糖、核酸、脂質、及び化学物質からなる群から選択される、請求項8に記載の蛋白質ベクター。
- 前記着目分子が医薬の有効成分である、請求項8又は9に記載の蛋白質ベクター。
- 前記着目分子が化学結合により結合される、請求項8〜10のいずれか1項に記載の蛋白質ベクター。
- 前記着目分子が遺伝子工学的に結合される、請求項8〜10のいずれか1項に記載の蛋白質ベクター。
- 前記着目分子が抗原又はエピトープを含む、請求項8〜12のいずれか1項に記載の蛋白質ベクター。
- 前記着目分子が、抗原又はエピトープを含むペプチド又はポリペプチドである、請求項9に記載の蛋白質ベクター。
- 以下のポリペプチド:
a.請求項1〜6のいずれか1項に記載のポリペプチド;又は
b.請求項8〜10、及び12〜14の内のいずれか1項に記載の蛋白質ベクター;
の内の1つをコードする核酸。 - 宿主細胞内でコードされたポリペプチドを発現する、請求項15に記載の核酸を含む発現ベクター。
- プラスミド、コスミド、ファージミド又はウイルスDNAである、請求項16に記載の発現ベクター。
- 請求項15に記載の核酸あるいは請求項16又は17に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
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RU2471868C2 (ru) * | 2010-02-18 | 2013-01-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Мутантная аденилатциклаза, днк, кодирующая ее, бактерия семейства enterobacteriaceae, содержащая указанную днк, и способ получения l-аминокислот |
AU2011305775C1 (en) | 2010-09-20 | 2016-04-21 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Mosquitocidal Xenorhabdus, lipopeptide and methods |
EP2690172A1 (en) | 2012-07-23 | 2014-01-29 | Genticel | CYAA-based chimeric proteins comprising a heterologous polypeptide and their uses in the induction of immune responses |
EP2689786A1 (en) | 2012-07-23 | 2014-01-29 | Genticel | HPV/CYAA-based chimeric proteins and their uses in the induction of immune responses against HPV infection and HPV-induced disorders |
US20180256699A1 (en) * | 2014-12-08 | 2018-09-13 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Bordetella adenylate cyclase toxin vaccines and neutralizing antibodies |
KR20170137867A (ko) * | 2015-04-16 | 2017-12-13 | 인벤트프라이즈 엘엘씨 | 보르데텔라 퍼투시스 면역원성 백신 조성물 |
EP3323426A1 (en) | 2016-11-17 | 2018-05-23 | Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse | Immunogenic and vaccine compositions for use against bordetella bronchiseptica infection |
US20180133301A1 (en) * | 2016-11-17 | 2018-05-17 | École National Vétérinaire de Toulouse (E.N.V.T.) | Immunogenic and vaccine compositions for use against bordetella bronchiseptica infection |
WO2018091613A1 (en) | 2016-11-17 | 2018-05-24 | Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse | Immunogenic and vaccine compositions for use against bordetella bronchiseptica infection |
EP3342421A1 (en) | 2016-12-27 | 2018-07-04 | Genticel | Immunogenic composition comprising cyaa-derived polypeptide promoting a th1/th17-oriented immune response |
CN110711205A (zh) * | 2018-07-13 | 2020-01-21 | 北京中台恒基生物技术有限公司 | 一种肿瘤疫苗及其制备方法 |
EP3616717A1 (en) * | 2018-08-31 | 2020-03-04 | Mikrobiologicky ustav AV CR, v.v.i. | Recombinant antigen inducing antibodies for neutralization of bordetella adenylate cyclase toxin |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02265483A (ja) * | 1988-10-25 | 1990-10-30 | Inst Pasteur | アデニル酸シクラーゼ誘導体及びその生物学的使用 |
WO2002022169A2 (en) * | 2000-09-15 | 2002-03-21 | Institut Pasteur | VECTORS FOR MOLECULE DELIVERY TO CD11b EXPRESSING CELLS |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR920703098A (ko) * | 1989-11-29 | 1992-12-17 | 쟝 스테판느 | 신규 백신 |
DK0637335T3 (da) * | 1992-04-21 | 2007-11-26 | Pasteur Institut | Rekombinante mutanter til induktion af specifikke immunreaktioner |
FR2736064B1 (fr) * | 1995-06-30 | 1997-09-05 | Pasteur Institut | Epitopes protecteurs de l'adenyl cyclase-hemolysine(ac-hty). leur application au traitement ou a la prevention des infections par bordetella |
EP1489092A1 (en) | 2003-06-18 | 2004-12-22 | Institut Pasteur | Modified Bordetella adenylate cyclase comprising or lacking CD11b/CD18 interaction domain and uses thereof |
-
2003
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02265483A (ja) * | 1988-10-25 | 1990-10-30 | Inst Pasteur | アデニル酸シクラーゼ誘導体及びその生物学的使用 |
WO2002022169A2 (en) * | 2000-09-15 | 2002-03-21 | Institut Pasteur | VECTORS FOR MOLECULE DELIVERY TO CD11b EXPRESSING CELLS |
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