JP4691295B2 - サリチル酸アミド誘導体 - Google Patents
サリチル酸アミド誘導体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4691295B2 JP4691295B2 JP2001516889A JP2001516889A JP4691295B2 JP 4691295 B2 JP4691295 B2 JP 4691295B2 JP 2001516889 A JP2001516889 A JP 2001516889A JP 2001516889 A JP2001516889 A JP 2001516889A JP 4691295 B2 JP4691295 B2 JP 4691295B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- formula
- acid amide
- salicylic acid
- amide derivative
- same meaning
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 0 *OC(C1OC11)(C(NC(c(cccc2)c2O)=O)=CC1=O)O Chemical compound *OC(C1OC11)(C(NC(c(cccc2)c2O)=O)=CC1=O)O 0.000 description 4
- DFKNOVFTOGVHCA-UHFFFAOYSA-N COc(cc1NC(c(cccc2)c2O)=O)ccc1OC Chemical compound COc(cc1NC(c(cccc2)c2O)=O)ccc1OC DFKNOVFTOGVHCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DJSICXICJKSEMB-UHFFFAOYSA-N Oc(cccc1)c1C(NC(C(C1OC11)=O)=CC1=O)=O Chemical compound Oc(cccc1)c1C(NC(C(C1OC11)=O)=CC1=O)=O DJSICXICJKSEMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D303/00—Compounds containing three-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D303/02—Compounds containing oxirane rings
- C07D303/12—Compounds containing oxirane rings with hydrocarbon radicals, substituted by singly or doubly bound oxygen atoms
- C07D303/14—Compounds containing oxirane rings with hydrocarbon radicals, substituted by singly or doubly bound oxygen atoms by free hydroxyl radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D303/00—Compounds containing three-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D303/02—Compounds containing oxirane rings
- C07D303/36—Compounds containing oxirane rings with hydrocarbon radicals, substituted by nitrogen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/336—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having three-membered rings, e.g. oxirane, fumagillin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/60—Salicylic acid; Derivatives thereof
- A61K31/609—Amides, e.g. salicylamide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
- C07C237/28—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a non-condensed six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
- C07C237/38—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a non-condensed six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having the nitrogen atom of the carboxamide group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
- C07C237/28—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a non-condensed six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
- C07C237/40—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a non-condensed six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having the nitrogen atom of the carboxamide group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D303/00—Compounds containing three-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D303/02—Compounds containing oxirane rings
- C07D303/12—Compounds containing oxirane rings with hydrocarbon radicals, substituted by singly or doubly bound oxygen atoms
- C07D303/18—Compounds containing oxirane rings with hydrocarbon radicals, substituted by singly or doubly bound oxygen atoms by etherified hydroxyl radicals
- C07D303/20—Ethers with hydroxy compounds containing no oxirane rings
- C07D303/22—Ethers with hydroxy compounds containing no oxirane rings with monohydroxy compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D303/00—Compounds containing three-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D303/02—Compounds containing oxirane rings
- C07D303/12—Compounds containing oxirane rings with hydrocarbon radicals, substituted by singly or doubly bound oxygen atoms
- C07D303/32—Compounds containing oxirane rings with hydrocarbon radicals, substituted by singly or doubly bound oxygen atoms by aldehydo- or ketonic radicals
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
技術分野
本発明は、新規なサリチル酸アミド誘導体、その製造方法及びその誘導体を有効成分とする薬剤に関する。さらに詳しく言えば、ＮＦ−κＢ活性化阻害作用を有し、抗炎症剤、免疫抑制剤として有用な新規なサリチル酸アミド誘導体、その誘導体の製造中間体、それらの製造方法、及び前記サリチル酸アミド誘導体またはその塩を有効成分とする医薬に関する。
背景技術
抗炎症剤として、従来、ステロイド剤、プロスタグランジン合成阻害剤等が使用されている。また、免疫抑制剤として、シクロスポリンやＦＫ５０６（タクロリムス）等が使用されている。しかしこれらの薬剤は効果と副作用の点で問題点が指摘されている。
特に一般に強い副作用を有するものが多く、その抗炎症剤、免疫抑制剤としての使用に当たって大きな制約となっている。
そこで、副作用が少なく、かつ新規な化学構造及び作用機作を有する新規薬剤を発見または創製することが望まれており、従来使用されている薬剤とは異なる化学構造及び作用機作を有し、かつ優れた抗炎症活性、免疫抑制活性を示す新しい化合物の発見または創製をするための研究が行なわれている。
ＮＦ−κＢは、免疫グロブリンκ鎖遺伝子のエンハンサーに結合する核蛋白質として同定され（Ｃｅｌｌ ４６，７０５−７１６，１９８６）、当初はＢ細胞に特異的な転写因子と考えられたが、その後各種の細胞に存在することが明らかになった。ＮＦ−κＢは２つのサブユニットからなるヘテロ２量体であり、約３００のアミノ酸のＲｅｌホモロジードメイン（ＲＨＤ）を有するｐ５０、ｐ５２とＲｅｌＡ、ｃ−Ｒｅｌ、ＲｅｌＢのさまざまな組み合わせで構成されている（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４，６４９−６８１，１９９６）。
ＮＦ−κＢは、生体防御反応の中心的な転写因子で、ＮＦ−κＢにより誘導される遺伝子は免疫グロブリン以外にサイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦなど）、細胞接着因子（Ｅ−セレクチン、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１など）、一酸化窒素（ＮＯ）合成酵素、Ｆａｓリガンドなど免疫応答や炎症反応に深く関わっているものが多い（Ｃｅｌｌ，８７，１３−２０，１９９６）。
ＮＦ−κＢの活性化を引き起こす因子としては、ＴＮＦ−α以外にＩＬ−１、抗原刺激、ＴＰＡ、ＵＶ、活性酸素などが知られている（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２，１４１−１７９，１９９４）。そこで、細胞をＴＮＦ−α等で刺激し、その時誘導されるＮＦ−κＢの活性化を阻害する低分子物質を発見すれば、抗炎症剤、免疫抑制剤に発展することができる。
発明の開示
本発明者らは、前記課題に鑑み鋭意スクリーニングを重ねた結果、特定構造を有する新規なサリチル酸アミド誘導体、すなわち後述の式（１ａ）で示される化合物（ＤＨＭ２ＥＱ）及び式（１ｂ）で示される化合物（ＤＨＭ３ＥＱ）がＮＦ−κＢの活性化阻害作用を有することを見出し本発明を完成した。
すなわち、本発明は以下の新規なサリチル酸アミド誘導体、それらの製造方法及びそれらを有効成分とする医薬を提供するものである。
［１］ 式（１）
［式中、Ｒ１は水素原子、またはＣ２〜４のアルカノイル基を表わし、
Ｒ２は、次式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）または（Ｇ）で示される基を表わし：
Ｒ３はＣ１〜４のアルキル基を表わす。］
で示されるサリチル酸アミド誘導体。
［２］ 式（１ａ）または（１ｂ）
で示される化合物である前項１記載のサリチル酸アミド誘導体。
［３］ 式（２）
（式中の記号は前項１と同じ意味を表わす。）で示される化合物である前項１記載のサリチル酸アミド誘導体。
［４］ 式（３）
（式中の記号は前項１と同じ意味を表わす。）で示される化合物である前項１記載のサリチル酸アミド誘導体。
［５］ 式（４）
（式中の記号は前項１と同じ意味を表わす。）で示される化合物である前項１記載のサリチル酸アミド誘導体。
［６］ 式（５）
で示される化合物である前項１記載のサリチル酸アミド誘導体。
［７］ 式（６）
（式中の記号は前項１と同じ意味を表わす。）で示される化合物である前項１記載のサリチル酸アミド誘導体。
［８］ ２，５−ジメトキシアニリンを式（７）
（式中、Ｒ１は前項１と同じ意味を表わし、Ｘはハロゲン原子表わす。）
で示されるＯ−アルカノイルサリチロイルハライドと反応させることを特徴する式（２）
（式中の記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。
［９］ 式（２）
（式中の記号は前項１と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体を式Ｃ６Ｈ３Ｉ（ＯＡｃ）２（式中、Ａｃはアセチル基を表わす。）で示される化合物の存在下、Ｒ３ＯＨ（Ｒ３はＣ１〜４のアルキル基である。）で示されるアルカノールと反応させることを特徴とする式（３）
（式中の記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。
［１０］ 式（３）
（式中の記号は前項１と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体をエポキシ化反応に付すことを特徴とする式（４）
（式中の記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。
［１１］ 式（４）
（式中の記号は前項１と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体を脱ジアルキルケタール化反応に付すことを特徴とする式（５）
（式中の記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。
［１２］ 式（４）
（式中の記号は前項１と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体を還元反応に付すことを特徴とする式（６）
（式中の記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。
［１３］ 式（５）
で示されるサリチル酸アミド誘導体を還元反応に付すことを特徴とする式（１ａ）
で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。
［１４］ 式（６）
（式中の記号は前項１と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体を脱ジアルキルケタール化反応に付すことを特徴とする式（１ｂ）
で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。
［１５］ 前項２に記載の式（１ａ）または（１ｂ）で示されるサリチル酸アミド誘導体またはその塩を有効成分とする薬剤。
［１６］ 前項２に記載の式（１ａ）または（１ｂ）で示されるサリチル酸アミド誘導体またはその塩を有効成分とするＮＦ−κＢ活性化阻害剤。
［１７］ 前項２に記載の式（１ａ）または（１ｂ）で示されるサリチル酸アミド誘導体またはその塩を有効成分とする抗炎症剤または免疫抑制剤。
発明の詳細な説明
前記式（１）のＲ２中のＲ３が表わすＣ１〜４のアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル基およびこれらの異性体基が挙げられ、メチル基、エチル基が好ましい。
前記式（２）、（３）中、Ｒ１が表わすＣ２〜４のアルカノイル基としては、アセチル、プロピオニル、ブタノイル基及びこれらの異性体基が挙げられ、アセチル基が好ましい。
前記式（７）中のＸが表わすハロゲン原子としてはフッ素、塩素、臭素及びヨウ素原子が挙げられ、塩素原子、臭素原子が好ましい。
［本発明化合物の製造方法］
本発明の化合物（サリチル酸アミド誘導体）は、Ｗｉｐｆらの合成法（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１２号，１５４９〜１５６１頁，１９９５年）に準じて製造することができる。
次に本発明化合物の製造方法を下記の反応工程式に基いて説明する。
以下の工程中、式（１ａ）及び（１ｂ）で示される化合物及び式（２）〜（６）で示される製造中間体化合物は新規化合物である。
工程ａ：Ｎ−（２−アルカノイルベンゾイル）−２，５−ジメトキシアニリンの調製
２，５−ジメトキシアニリンを溶媒（ピリジンなど）に溶解し、−７８〜５０℃、好ましくは氷冷下で、式（７）のＯ−アルカノイルサリチロイルハライドの酢酸エチル溶液を加えて、撹拌下で反応させる。水を加えて反応を停止させた後、酢酸エチルを加え、塩酸、水、重曹水、水で順次洗浄し、乾燥後、減圧濃縮、真空乾燥することにより式（２）で示されるＮ−（２−アルコキシベンゾイル）−２，５−ジメトキシアニリン化合物が得られる。この化合物は精製せず、次の工程に使用できる。
工程ｂ：３−（Ｏ−アルカノイルサリチロイルアミド）−４，４−ジアルコキシ−２，５−シクロヘキサジエノン化合物の調製
上記で得られた式（２）の化合物をメタノールなどの溶媒に溶解し、−２０〜５０℃、好ましくは氷冷下、ジアセトキシヨードベンゼンを加え、室温で撹拌下反応させる。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、重曹水、食塩水で洗浄し、溶剤を減圧濃縮して得られた残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、式（３）で示される３−（Ｏ−アルカノイルサリチロイルアミド）−４，４−ジアルコキシ−２，５−シクロヘキサジエノン化合物が得られる。
工程ｃ：５，６−エポキシ−４，４−ジアルコキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン化合物の調製
式（３）で示される３−（Ｏ−アルカノイルサリチロイルアミド）−４，４−ジアルコキシ−２，５−シクロヘキサジエノンを溶剤（テトラヒドロフラン、メタノールなど）に溶解し、−２０〜５０℃、好ましくは氷冷下、過酸化水素水及び水酸化ナトリウムを加え、撹拌しながら反応させる。反応液に酢酸エチルを加え、塩酸溶液、チオ硫酸ナトリウム水溶液、食塩水で順次洗浄し、乾燥後、真空乾燥する。残存する原料化合物を除去するため、残渣をアセトンに溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸を加え、室温で撹拌して原料化合物を分解する。メタノールを減圧留去して得られた残渣に酢酸エチルを加え、水で洗浄する。酢酸エチル層を乾燥して得られた残留物をカラムクロマトグラフィーにて精製して式（４）で示される５，６−エポキシ−４，４−ジアルコキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン化合物が得られる。
工程ｄ：５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオンの調製
式（４）の５，６−エポキシ−４，４−ジアルコキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン化合物を塩化メチレンに溶解し、氷冷下無機酸または有機酸（三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体など）を加え、撹拌しながら反応させる。反応液に溶剤（酢酸エチルなど）を加え、水で洗浄し、酢酸エチル層を濃縮した後、得られた残渣をメタノールで洗浄して式（５）で示される５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオンが得られる。
工程ｅ：５，６−エポキシ−４−ヒドロキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン（ＤＨＭ２ＥＱ）の調製
式（５）で示される５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオンを、溶媒（メタノール、エタノール、ＴＨＦなど）に懸濁し、−７８〜５０℃、好ましくは氷冷下、還元剤（水素化ホウ素ナトリウムなど）を加え反応させる。反応液に溶剤（酢酸エチル、塩化メチレンなど）を加え、塩酸、水で順次洗浄し、溶剤層を乾燥後、減圧濃縮して、メタノールにて懸濁撹拌洗浄して、式（Ｉａ）で示される５，６−エポキシ−４−ヒドロキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン（ＤＨＭ２ＥＱ）が得られる。
工程ｆ：３，３−ジアルコキシ−４，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミドシクロヘキセンの調製
式（４）の５，６−エポキシ−４，４−ジアルコキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン化合物をメタノールなどの溶剤と重曹水混合溶媒に溶解し、−７８〜５０℃、好ましくは、氷冷下、還元剤（水素化ホウ素ナトリウムなど）を加え、撹拌下に反応させる。反応液に溶剤（酢酸エチルなど）を加え、塩酸、水で洗浄し、溶剤層を乾燥後、減圧濃縮、真空乾燥し、カラムクロマトグラフィーなどで精製して、式（６）で示される３，３−ジアルコキシ−４，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミドシクロヘキセンを得る。
工程ｇ：５，６−エポキシ−４−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン（ＤＨＭ３ＥＱ）の調製
式（６）で示される３，３−ジアルコキシ−４，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミドシクロヘキセンを溶剤（アセトンなど）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸を加え、室温で撹拌反応させる。反応液に溶剤（酢酸エチルなど）を加え、水で洗浄し、溶剤層を乾燥し、減圧濃縮して、精製して、式（１ｂ）の５，６−エポキシ−４−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン（ＤＨＭ３ＥＱ）を得ることができる。
［薬理活性］
本発明化合物の生物学的活性はＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱについて以下の試験により確認された。
Ａ）ＮＦ−κＢ活性化阻害活性
ＮＦ−κＢ産生抑制活性は以下に示すルシフェラーゼ・レポーター・ジーン・アッセイ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｒｅｐｏｒｔｅｒ ｇｅｎｅ ａｓｓａｙ）により測定した。
［ルシフェラーゼ・レポーター・ジーン・アッセイ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｒｅｐｏｒｔｅｒ ｇｅｎｅ ａｓｓａｙ）］
ルシフェラーゼＤＮＡを用いるレポーターを作製し、プロモーター／レポーターアッセイによりＮＦ−κＢ阻害活性を測定した。
１）プラスミド（ｐｌａｓｍｉｄ）
ルシフェラーゼ・アッセイ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｓｓａｙ）のプラスミド（ｐｌａｓｍｉｄ）としてＩｇκ遺伝子由来の３×κＢ及びＨＳＶ−ＴＫプロモータ（ｐｒｏｍｏｔｅｒ）にホタル由来ルシフェラーゼ・ジーン（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ）を連結した３×κＢＴＫ−Ｌｕｃ（東京大学医科学研究所、井上純一郎博士より供与）を用いた。また、β−ガラクトシダーゼ・アッセイ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ａｓｓａｙ）には、β−アクチン・プロモータ（β−ａｃｔｉｎ・ｐｒｏｍｏｔｅｒ）にβ−ガラクトシダーゼ遺伝子（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｇｅｎｅ）を連結したプラスミド（ｐｌａｓｍｉｄ）（東京大学医科学研究所、井上純一郎 博士より供与）を用いた。
２）トランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）及びルシフェラーゼ・アッセイ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｓｓａｙ）
トランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）はＤＥＡＥ・デキストラン法（ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔｒａｎ ｍｅｔｈｏｄ）で行なった。２×１０６ｃｅｌｌｓの細胞を１×ＴＢＳ（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（２５ｍＭ），ＮａＣｌ（１３７ｍＭ），ＫＣｌ（５ｍＭ），Ｎａ２ＨＰＯ４（０．５ｍＭ）で１回洗浄し、１μｇのプラスミド（ｐｌａｓｍｉｄ）を含むトランスフェクション・バッファ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ）（２×ＴＢＳ（２００μｌ），１００×Ｃａ２＋・Ｍｇ２＋（ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ）（７８ｍＭ，４μｌ），ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ（７６ｍＭ），ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔｒａｎ（１ｍｇ／ｍｌ，２００μｌ）中に、１０分ごとタッピング（ｔａｐｐｉｎｇ）しながら３０分間室温でインキュベートした。その後、１×ＴＢＳで洗浄し、１２個のウェルプレート（ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ）（ｃｏｓｔａｒ：Ｎ．Ｙ．，Ｕ．Ｓ．Ａ）に１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで撒き、３７℃でインキュベートした。翌日、種々の濃度のＤＨＭ２ＥＱまたはＤＨＭ３ＥＱを添加し、２時間インキュベートした後、さらにＴＮＦ−α（２０ｎｇ／ｍｌ）を添加し、６時間インキュベートした。細胞を３５００ｒｐｍ、５分間遠心し、上清を除去後、リシス・バッファ（ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（２５ｍＭ，ｐＨ７．８），ＤＴＴ（２ｍＭ），１，２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ′，Ｎ−四酢酸（２ｍＭ），１０％グリセリン，１％トリトンＸ−１００（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）を５０μｌ加え、氷中で３０分可溶化した。つぎに、１５０００ｒｐｍ、５分間遠心し、上清をサンプルとした。
１０μｌのサンプルに対し、１００μｌの発光基質溶液（トリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）（２０ｍＭ），（ＭｇＣＯ３）・４Ｍｇ（ＯＨ）２・５Ｈ２Ｏ（１．０７ｍＭ），ＭｇＳＯ４（２．６７ｍＭ），ＥＤＴＡ（０．１ｍＭ），ＤＴＴ（３３．３ｍＭ），Ｃｏｅｎｚｙｍｅ Ａ（２７０μＭ），ルシフェリン（ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ）（４７０μＭ），ＡＴＰ（５３０μＭ）を加え、発光量をＬｕｍａｔ ＬＢ９５０１（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ：Ｂａｄ Ｗｉｌｄｂａｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で定量した。さらに、測定値をβ−ガラクトシダーゼ・アッセイ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ａｓｓａｙ）により補正し、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）の活性値とした。
３）β−ガラクトシダーゼ・アッセイ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ａｓｓａｙ）
β−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ）ＤＮＡはトランスフェクション効率を測定し、正規化するために行なうものである。
２０μｌのサンプルを２３０μｌのＺバッファ（ＫＣｌ（１０ｍＭ），ＭｇＳＯ４（１ｍＭ），２−メルカプトエタノール（２−Ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ）（５０ｍＭ），ＮａＰＯ４（１００ｍＭ：ｐＨ７．５）に加え、さらに５０μｌのｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ；ｏ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−β−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ，Ｓｉｇｍａ社），ＮａＰＯ４（１００ｍＭ，ｐＨ７．５）溶液（２ｍｇ／ｍｌ）を加え、３７℃でインキュベートした。溶液が黄色く呈色したところで、Ｎａ２ＣＯ３（１Ｍ）を２５０μｌ加え、４２０ｎｍの吸収波長を分光光度計（日立製作所）にて測定した。
Ｂ）コラーゲン誘発関節炎抑制作用
タイプＩＩコラーゲンを等容量のフロイントのコンプリートアジュバントと共に乳化して１．５ｍｇ／ｍｌの投与液を作成した。これをマウスの尾根部の皮内に０．１ｍｌ接種して感作した（１５０μｇ／マウス）。３週間後に同様の操作方法で乳化したタイプＩＩコラーゲンの０．１ｍｌをマウスの腹腔内に投与して追加免疫を行ない、関節炎を誘発させた（１５０μｇ／マウス）。
ＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱの２ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇの投与量で、６匹／群のマウスを用い初回免疫の日より０．１ｍｌ／１０ｇ体重の割合で３回／週、合計１８回／６週間、腹腔内投与した。なお、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ群、６匹／群）には同様のスケジュールで０．５％ＣＭＣ溶液を投与し、コラーゲン関節炎を誘発しない正常（Ｎｏｒｍａｌ）群（４匹／群）もあわせて設けた。コラーゲン誘発関節炎の抑制効果は前肢及び後肢の発赤、腫脹及び強直の程度による０〜４のスコア（四肢の合計の最高点は１６点）により評価した。スコア０は全く症状がみられない場合、スコア１は四肢の指など小関節が１本のみ発赤、腫脹を示す場合、スコア２は小関節が２本以上、あるいは手首、足首などの比較的大きな関節が発赤、腫脹を示す場合、スコア３は１本の手や足全体が発赤、腫脹を示す場合、さらにスコア４は１本の手や足の全体的な腫脹が最大限に達し、しかも関節の強直を伴っていると判断した場合をそれぞれ示す。結果を図２（Ａ）、図２（Ｂ）に示す。
図１（Ａ）及び（Ｂ）の結果から明らかなように、本発明による新規化合物ＤＨＭ２ＥＱでは１μｇ／ｍｌから（図１（Ａ））、及びＤＨＭ３ＥＱでは１０μｇ／ｍｌ（図１（Ｂ））でＮＦ−κＢの活性化を阻害した。また、図２（Ａ）、図２（Ｂ）から明らかなように、ＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱ、特にＤＨＭ２ＥＱは慢性関節リウマチのマウス動物実験モデルである、コラーゲン誘発関節炎を抑制することからイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）においての有効性も証明された。
産業上の利用可能性
［医薬としての適用］
前述のように本発明の化合物のＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱは、ＮＦ−κＢ活性化阻害活性、及びイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）でコラーゲン誘発関節炎抑制作用を示した。したがって式（１ａ）及び（１ｂ）で示される化合物は抗炎症剤、免疫抑制剤として有用であると考えられる。
前記式（１ａ）及び（１ｂ）で示される化合物は、弱酸性物質であり、それらの塩としては第４級アンモニウム塩などの有機塩基の塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウムのようなアルカリ金属との塩があり、これらの塩の形でも利用できる。
式（１ａ）及び（１ｂ）で示される化合物またはその塩は、経口投与のための固体組成物や液体組成物、非経口投与のための注射剤、外用剤、坐剤等に調整して投与することができる。投与量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常成人１日当たり約１ｍｇ〜１００ｍｇを１日１〜数回にわけて投与する。
経口投与のための固体組成物には、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等が含まれる。組成物は、常法に従って、不活性な希釈剤以外の添加物、例えば潤滑剤、崩壊剤、溶解補助剤を含有してもよい。錠剤または丸剤は必要により胃溶性あるいは腸溶性物質のフィルムで被膜していてもよい。
経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含む。この組成物は、不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有してもよい。
本発明による非経口投与のための注射剤には無菌の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤が含まれる。注射剤には、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでいてもよい。
非経口投与のためその他の組成物としては、外用液剤、軟膏、塗布剤、直腸内投与のための坐剤等が含まれる。
発明を実施するための最良の形態
次に実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
実施例１：Ｎ−（２−アセトキシベンゾイル）−２，５−ジメトキシアニリンの合成
２，５−ジメトキシアニリン（１０．０ｇ，６５．３ｍｍｏｌ）をピリジン（１００ｍｌ）に溶解し、氷冷下Ｏ−アセチルサリチロイルクロリド（１３．０ｇ，６５．３ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（５０ｍｌ）溶液を１５分間かけて加えた後、同温度で１５分間撹拌した。反応液に水（１０ｍｌ）を加えて反応を停止させた後、酢酸エチル（５００ｍｌ）を加え、３規定塩酸（５００ｍｌ）、水（５００ｍｌ）、２％重曹水（５００ｍｌ）、水（５００ｍｌ）の順に洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、減圧濃縮、真空乾燥すると、表題化合物（１９．８ｇ）が淡黄色シロップとして得られた。この化合物は精製せず、このまま次の工程に使用した。分取用薄層クロマトグラフィーによって精製した表題化合物の物性は次のとおりである。
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３４０９，１７７３，１６７１，１６０３，１５３５，１４７８，１２８３，１２２１，１１７９ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２２４（１８１００），３０９（７８９０）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：３１６（Ｍ＋Ｈ）＋、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ ２．３７（３Ｈ，ｓ），３．８２（３Ｈ，ｓ），３．８７（３Ｈ，ｓ），６．６２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．８ ａｎｄ ８．８Ｈｚ），６．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．３７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．５２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ７．２Ｈｚ），７．９９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ８．０Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），８．９３（１Ｈ，ｂｒ ｓ）。
実施例２：３−（Ｏ−アセチルサリチロイル）アミド−４，４−ジメトキシ−２，５−シクロヘキサジエノンの合成
実施例１で得た、Ｎ−（２−アセトキシベンゾイル）−２，５−ジメトキシアニリン（１９．８ｇ）をメタノール（４００ｍｌ）に溶解し、氷冷下ジアセトキシヨードベンゼン（２７．３ｇ，８４．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して得られた茶色シロップ状残渣に酢酸エチル（１Ｌ）を加え、５％重曹水（１Ｌ）、１０％食塩水（１Ｌ）で洗浄した。酢酸エチル層を減圧濃縮して得られた茶色シロップ状残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１ｋｇ，ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）にて精製し、固体１２．８ｇを得た。これをメタノール３０ｍｌにて懸濁撹拌洗浄し、表題化合物１０．９ｇを白色固体として得た（収率：２工程５０％）。
融点：１５０〜１５２℃、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３４５１，１７６９，１６９４，１５２０，１１９８ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２３８（１４２００），３１３（１３８００）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：３３２（Ｍ＋Ｈ）＋、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ ２．４７（３Ｈ，ｓ），３．３１（６Ｈ，ｓ），６．４８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ １０．８Ｈｚ），６．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ），７．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．３９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．５７（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），８．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．６ ａｎｄ ７．６Ｈｚ），８．８９（１Ｈ，ｂｒ ｓ）。
実施例３：５，６−エポキシ−４，４−ジメトキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノンの合成
３−（Ｏ−アセチルサリチロイルアミド）−４，４−ジメトキシ−２，５−シクロヘキサジエノン（１０．９ｇ，３３．０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２００ｍｌ）に溶解し、氷冷下、３０％過酸化水素水（６０ｍｌ）および１規定水酸化ナトリウム（１６５ｍｌ）を加え、同温度で２時間撹拌した。原料化合物は残存していたが反応を続けると目的物の分解が進行するため、反応処理を行なうことにした。反応液に酢酸エチル（５００ｍｌ）を加え、１規定塩酸（３００ｍｌ）、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液（３００ｍｌ×２）、１０％食塩水（３００ｍｌ）で順次洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、真空乾燥すると淡黄色シロップ状残渣が得られた。ＴＬＣ上目的物と近いスポットを持つ原料化合物を除去しやすくするため、残渣をアセトン（１００ｍｌ）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸（１００ｍｇ）を加え、室温で１．５時間撹拌し原料化合物を分解した。メタノールを減圧留去して得られた残渣に酢酸エチル（２００ｍｌ）を加え、水（２００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥して得られた褐色シロップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４００ｇ、トルエン／酢酸エチル＝１／１）にて精製し、６．５８ｇの黄色固体を得た。この固体をメタノール（２０ｍｌ）で懸濁撹拌洗浄し、表題化合物５．３４ｇを白色固体として得た（収率：５３％）。
融点：１４７〜１４９℃、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３２６４，１６７４，１６５１，１５３０，１２３６，１１１９，１０５３，１０５３ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２４２（５１００），３１４（１９６００）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：３０６（Ｍ＋Ｈ）＋、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ ３．３５（３Ｈ，ｓ），３．５８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４ ａｎｄ ４．４Ｈｚ），３．７５（３Ｈ，ｓ），３．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），６．９４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．０４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０．８ ａｎｄ ８．４Ｈｚ），７．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．２ ａｎｄ ８．４Ｈｚ），７．４９（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），８．６５（１Ｈ，ｂｒ ｓ），１１．３７（１Ｈ，ｓ）。
実施例４：５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオンの合成
５，６−エポキシ−４，４−ジメトキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン（１．０ｇ，３．２７ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２５ｍｌ）に溶解し、氷冷下三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（１ｍｌ）を加え、同温度で３０分間撹拌した。反応液に酢酸エチル（３００ｍｌ）を加え、水（２００ｍｌ）にて洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、真空乾燥して得られた茶色固体をメタノール（５ｍｌ）にて洗浄すると、表題化合物（３９９ｍｇ）が薄茶色固体として得られた（収率：４７％）。
融点：２１０℃（分解）、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３４５３，３２０２，１７１３，１６６７，１６４２，１６１１，１５３７，１２３１ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２５０（１１９００），３２６（１５０００）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：２５９（Ｍ−）、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ ３．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４ ａｎｄ ４．０Ｈｚ），４．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．０７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．５１（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１．６ ａｎｄ ８．４Ｈｚ），７．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），８．０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．６ ａｎｄ ８．４Ｈｚ），１０．８３（１Ｈ，ｂｒ ｓ），１０．８８（１Ｈ，ｂｒ ｓ）。
実施例５：ＤＨＭ２ＥＱの合成
５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオン（８１．８ｍｇ，０．３１６ｍｍｏｌ）を、メタノール（１０ｍｌ）に懸濁し、氷冷下、水素化ホウ素ナトリウム（１１．９ｍｇ，０．３１６ｍｍｏｌ）を加え、同温度で１０分間撹拌した。反応液に酢酸エチル（５０ｍｌ）を加え、１規定塩酸（５０ｍｌ）、水（５０ｍｌ）で順次洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、減圧濃縮して得られた薄茶色固体をメタノール（１ｍｌ）にて懸濁撹拌洗浄すると、ＤＨＭ２ＥＱ（４５．３ｍｇ）が白色固体として得られた（収率：７２％）。
外観及び性質：白色粉末、弱酸性物質、
融点：１８５℃（分解）、
ＴＬＣのＲｆ値：０．４５（シリカゲル（Ａｒｔ．１．０５７１５、メルク社製）の薄層クロマトグラフィーで展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（１０：１）で展開）、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３３６０，１６６３，１６３４，１６０９，１５２６，１２０４，１０７１ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２４２（５９５０），３１４（２０４００）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：２６２（Ｍ＋Ｈ）＋、
分子式：Ｃ１３Ｈ１１ＮＯ５、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ ３．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４ ａｎｄ ４．４Ｈｚ），３．８５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４ ａｎｄ ４．０Ｈｚ），４．８３（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．７０（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．９９（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），７．４５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ８．８Ｈｚ），１０．８３（１Ｈ，ｂｒ ｓ），１０．８８（１Ｈ，ｂｒ ｓ）。
実施例６：３，３−ジメトキシ−４，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミドシクロヘキセンの合成
５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオン（２００ｍｇ，０．６５５ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）と５％重曹水（５ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、氷冷下水素化ホウ素ナトリウム（２４．８ｍｇ，０．６５５ｍｍｏｌ）を加え、同温度で３０分間撹拌した。反応液に酢酸エチル（５０ｍｌ）を加え、１規定塩酸（５０ｍｌ）、水（５０ｍｌ）で順次洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、減圧濃縮、真空乾燥して得られたシロップ（２０６ｍｇ）を分取用薄層クロマトグラフィーにてトルエン／アセトン＝１／１の展開溶媒にて展開すると、表題化合物（９７ｍｇ）が無色透明なシロップとして得られた（収率：４８％）。
融点：１７０〜１７２℃、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３３６６，３２８５，１６５７，１５３７，１２３６，１１２８，１０６３，１０４６ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２４２（８１８０），２６２（９１９０），３００（７６１０）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：３０８（Ｍ＋Ｈ）＋、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ ２．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），３．２７（３Ｈ，ｓ），３．４９（１Ｈ，ｓ），３．６３（１Ｈ，ｓ），３．６４（３Ｈ，ｓ），３．６４（１Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），４．７６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ １０．０Ｈｚ），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），６．８９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．５ ａｎｄ ８．３Ｈｚ），７．４３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），８．２３（１Ｈ，ｓ），１１．８７（１Ｈ，ｓ）、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ ３．２８（３Ｈ，ｓ），３．５１（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝２．４ ａｎｄ ４．８Ｈｚ），３．５７（３Ｈ，ｓ），３．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），４．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０．４ ａｎｄ ８．４Ｈｚ），６．９３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝０．４ ａｎｄ ７．８Ｈｚ），７．３６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ７．８Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ７．８Ｈｚ）。
実施例７：ＤＨＭ３ＥＱの合成
３，３−ジメトキシ−４，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミドシクロヘキセン（８７．０ｍｇ，０．２８３ｍｍｏｌ）をアセトン（２ｍｌ）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸（５ｍｇ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液に酢酸エチル（２０ｍｌ）を加え、水（１５ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、減圧濃縮して得られた白色固体を酢酸エチル（１ｍｌ）にて懸濁撹拌洗浄すると、ＤＨＭ３ＥＱ（５５．１ｍｇ）が白色固体として得られた（収率：７４％）。
外観及び性質：白色粉末、弱酸性物質、
融点：１７８〜１８２℃、
ＴＬＣのＲｆ値：０．３６（シリカゲル（Ａｒｔ．１．０５７１５、メルク社製）の薄層クロマトグラフィーで展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（１０：１）で展開して測定）、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３４５７，３１０２，１６９６，１６２０，１５５９，１３８１，１２３３ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２４８（１２０００），３０１（９３６０）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：２６２（Ｍ＋Ｈ）＋、
分子式：Ｃ１３Ｈ１１ＮＯ５、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ ３．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），３．８４（１Ｈ，ｂｒ），４．８７（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．９７（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），７．４２（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），１０．６０（１Ｈ，ｂｒ ｓ），１１．７１（１Ｈ，ｂｒ ｓ）。
【図面の簡単な説明】
図１（Ａ）及び（Ｂ）は、各々ＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱのＮＦ−κＢ産生抑制活性を示すグラフである。
図２（Ａ）及び（Ｂ）は、各々ＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱのマウスのコラーゲン誘発関節炎に対する効果を示すグラフである。
本発明は、新規なサリチル酸アミド誘導体、その製造方法及びその誘導体を有効成分とする薬剤に関する。さらに詳しく言えば、ＮＦ−κＢ活性化阻害作用を有し、抗炎症剤、免疫抑制剤として有用な新規なサリチル酸アミド誘導体、その誘導体の製造中間体、それらの製造方法、及び前記サリチル酸アミド誘導体またはその塩を有効成分とする医薬に関する。
背景技術
抗炎症剤として、従来、ステロイド剤、プロスタグランジン合成阻害剤等が使用されている。また、免疫抑制剤として、シクロスポリンやＦＫ５０６（タクロリムス）等が使用されている。しかしこれらの薬剤は効果と副作用の点で問題点が指摘されている。
特に一般に強い副作用を有するものが多く、その抗炎症剤、免疫抑制剤としての使用に当たって大きな制約となっている。
そこで、副作用が少なく、かつ新規な化学構造及び作用機作を有する新規薬剤を発見または創製することが望まれており、従来使用されている薬剤とは異なる化学構造及び作用機作を有し、かつ優れた抗炎症活性、免疫抑制活性を示す新しい化合物の発見または創製をするための研究が行なわれている。
ＮＦ−κＢは、免疫グロブリンκ鎖遺伝子のエンハンサーに結合する核蛋白質として同定され（Ｃｅｌｌ ４６，７０５−７１６，１９８６）、当初はＢ細胞に特異的な転写因子と考えられたが、その後各種の細胞に存在することが明らかになった。ＮＦ−κＢは２つのサブユニットからなるヘテロ２量体であり、約３００のアミノ酸のＲｅｌホモロジードメイン（ＲＨＤ）を有するｐ５０、ｐ５２とＲｅｌＡ、ｃ−Ｒｅｌ、ＲｅｌＢのさまざまな組み合わせで構成されている（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４，６４９−６８１，１９９６）。
ＮＦ−κＢは、生体防御反応の中心的な転写因子で、ＮＦ−κＢにより誘導される遺伝子は免疫グロブリン以外にサイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦなど）、細胞接着因子（Ｅ−セレクチン、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１など）、一酸化窒素（ＮＯ）合成酵素、Ｆａｓリガンドなど免疫応答や炎症反応に深く関わっているものが多い（Ｃｅｌｌ，８７，１３−２０，１９９６）。
ＮＦ−κＢの活性化を引き起こす因子としては、ＴＮＦ−α以外にＩＬ−１、抗原刺激、ＴＰＡ、ＵＶ、活性酸素などが知られている（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２，１４１−１７９，１９９４）。そこで、細胞をＴＮＦ−α等で刺激し、その時誘導されるＮＦ−κＢの活性化を阻害する低分子物質を発見すれば、抗炎症剤、免疫抑制剤に発展することができる。
発明の開示
本発明者らは、前記課題に鑑み鋭意スクリーニングを重ねた結果、特定構造を有する新規なサリチル酸アミド誘導体、すなわち後述の式（１ａ）で示される化合物（ＤＨＭ２ＥＱ）及び式（１ｂ）で示される化合物（ＤＨＭ３ＥＱ）がＮＦ−κＢの活性化阻害作用を有することを見出し本発明を完成した。
すなわち、本発明は以下の新規なサリチル酸アミド誘導体、それらの製造方法及びそれらを有効成分とする医薬を提供するものである。
［１］ 式（１）
Ｒ２は、次式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）または（Ｇ）で示される基を表わし：
で示されるサリチル酸アミド誘導体。
［２］ 式（１ａ）または（１ｂ）
［３］ 式（２）
［４］ 式（３）
［５］ 式（４）
［６］ 式（５）
［７］ 式（６）
［８］ ２，５−ジメトキシアニリンを式（７）
で示されるＯ−アルカノイルサリチロイルハライドと反応させることを特徴する式（２）
［９］ 式（２）
［１０］ 式（３）
［１１］ 式（４）
［１２］ 式（４）
［１３］ 式（５）
［１４］ 式（６）
［１５］ 前項２に記載の式（１ａ）または（１ｂ）で示されるサリチル酸アミド誘導体またはその塩を有効成分とする薬剤。
［１６］ 前項２に記載の式（１ａ）または（１ｂ）で示されるサリチル酸アミド誘導体またはその塩を有効成分とするＮＦ−κＢ活性化阻害剤。
［１７］ 前項２に記載の式（１ａ）または（１ｂ）で示されるサリチル酸アミド誘導体またはその塩を有効成分とする抗炎症剤または免疫抑制剤。
発明の詳細な説明
前記式（１）のＲ２中のＲ３が表わすＣ１〜４のアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル基およびこれらの異性体基が挙げられ、メチル基、エチル基が好ましい。
前記式（２）、（３）中、Ｒ１が表わすＣ２〜４のアルカノイル基としては、アセチル、プロピオニル、ブタノイル基及びこれらの異性体基が挙げられ、アセチル基が好ましい。
前記式（７）中のＸが表わすハロゲン原子としてはフッ素、塩素、臭素及びヨウ素原子が挙げられ、塩素原子、臭素原子が好ましい。
［本発明化合物の製造方法］
本発明の化合物（サリチル酸アミド誘導体）は、Ｗｉｐｆらの合成法（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１２号，１５４９〜１５６１頁，１９９５年）に準じて製造することができる。
次に本発明化合物の製造方法を下記の反応工程式に基いて説明する。
以下の工程中、式（１ａ）及び（１ｂ）で示される化合物及び式（２）〜（６）で示される製造中間体化合物は新規化合物である。
２，５−ジメトキシアニリンを溶媒（ピリジンなど）に溶解し、−７８〜５０℃、好ましくは氷冷下で、式（７）のＯ−アルカノイルサリチロイルハライドの酢酸エチル溶液を加えて、撹拌下で反応させる。水を加えて反応を停止させた後、酢酸エチルを加え、塩酸、水、重曹水、水で順次洗浄し、乾燥後、減圧濃縮、真空乾燥することにより式（２）で示されるＮ−（２−アルコキシベンゾイル）−２，５−ジメトキシアニリン化合物が得られる。この化合物は精製せず、次の工程に使用できる。
工程ｂ：３−（Ｏ−アルカノイルサリチロイルアミド）−４，４−ジアルコキシ−２，５−シクロヘキサジエノン化合物の調製
上記で得られた式（２）の化合物をメタノールなどの溶媒に溶解し、−２０〜５０℃、好ましくは氷冷下、ジアセトキシヨードベンゼンを加え、室温で撹拌下反応させる。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、重曹水、食塩水で洗浄し、溶剤を減圧濃縮して得られた残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、式（３）で示される３−（Ｏ−アルカノイルサリチロイルアミド）−４，４−ジアルコキシ−２，５−シクロヘキサジエノン化合物が得られる。
工程ｃ：５，６−エポキシ−４，４−ジアルコキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン化合物の調製
式（３）で示される３−（Ｏ−アルカノイルサリチロイルアミド）−４，４−ジアルコキシ−２，５−シクロヘキサジエノンを溶剤（テトラヒドロフラン、メタノールなど）に溶解し、−２０〜５０℃、好ましくは氷冷下、過酸化水素水及び水酸化ナトリウムを加え、撹拌しながら反応させる。反応液に酢酸エチルを加え、塩酸溶液、チオ硫酸ナトリウム水溶液、食塩水で順次洗浄し、乾燥後、真空乾燥する。残存する原料化合物を除去するため、残渣をアセトンに溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸を加え、室温で撹拌して原料化合物を分解する。メタノールを減圧留去して得られた残渣に酢酸エチルを加え、水で洗浄する。酢酸エチル層を乾燥して得られた残留物をカラムクロマトグラフィーにて精製して式（４）で示される５，６−エポキシ−４，４−ジアルコキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン化合物が得られる。
工程ｄ：５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオンの調製
式（４）の５，６−エポキシ−４，４−ジアルコキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン化合物を塩化メチレンに溶解し、氷冷下無機酸または有機酸（三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体など）を加え、撹拌しながら反応させる。反応液に溶剤（酢酸エチルなど）を加え、水で洗浄し、酢酸エチル層を濃縮した後、得られた残渣をメタノールで洗浄して式（５）で示される５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオンが得られる。
工程ｅ：５，６−エポキシ−４−ヒドロキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン（ＤＨＭ２ＥＱ）の調製
式（５）で示される５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオンを、溶媒（メタノール、エタノール、ＴＨＦなど）に懸濁し、−７８〜５０℃、好ましくは氷冷下、還元剤（水素化ホウ素ナトリウムなど）を加え反応させる。反応液に溶剤（酢酸エチル、塩化メチレンなど）を加え、塩酸、水で順次洗浄し、溶剤層を乾燥後、減圧濃縮して、メタノールにて懸濁撹拌洗浄して、式（Ｉａ）で示される５，６−エポキシ−４−ヒドロキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン（ＤＨＭ２ＥＱ）が得られる。
工程ｆ：３，３−ジアルコキシ−４，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミドシクロヘキセンの調製
式（４）の５，６−エポキシ−４，４−ジアルコキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン化合物をメタノールなどの溶剤と重曹水混合溶媒に溶解し、−７８〜５０℃、好ましくは、氷冷下、還元剤（水素化ホウ素ナトリウムなど）を加え、撹拌下に反応させる。反応液に溶剤（酢酸エチルなど）を加え、塩酸、水で洗浄し、溶剤層を乾燥後、減圧濃縮、真空乾燥し、カラムクロマトグラフィーなどで精製して、式（６）で示される３，３−ジアルコキシ−４，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミドシクロヘキセンを得る。
工程ｇ：５，６−エポキシ−４−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン（ＤＨＭ３ＥＱ）の調製
式（６）で示される３，３−ジアルコキシ−４，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミドシクロヘキセンを溶剤（アセトンなど）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸を加え、室温で撹拌反応させる。反応液に溶剤（酢酸エチルなど）を加え、水で洗浄し、溶剤層を乾燥し、減圧濃縮して、精製して、式（１ｂ）の５，６−エポキシ−４−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン（ＤＨＭ３ＥＱ）を得ることができる。
［薬理活性］
本発明化合物の生物学的活性はＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱについて以下の試験により確認された。
Ａ）ＮＦ−κＢ活性化阻害活性
ＮＦ−κＢ産生抑制活性は以下に示すルシフェラーゼ・レポーター・ジーン・アッセイ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｒｅｐｏｒｔｅｒ ｇｅｎｅ ａｓｓａｙ）により測定した。
［ルシフェラーゼ・レポーター・ジーン・アッセイ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｒｅｐｏｒｔｅｒ ｇｅｎｅ ａｓｓａｙ）］
ルシフェラーゼＤＮＡを用いるレポーターを作製し、プロモーター／レポーターアッセイによりＮＦ−κＢ阻害活性を測定した。
１）プラスミド（ｐｌａｓｍｉｄ）
ルシフェラーゼ・アッセイ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｓｓａｙ）のプラスミド（ｐｌａｓｍｉｄ）としてＩｇκ遺伝子由来の３×κＢ及びＨＳＶ−ＴＫプロモータ（ｐｒｏｍｏｔｅｒ）にホタル由来ルシフェラーゼ・ジーン（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ）を連結した３×κＢＴＫ−Ｌｕｃ（東京大学医科学研究所、井上純一郎博士より供与）を用いた。また、β−ガラクトシダーゼ・アッセイ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ａｓｓａｙ）には、β−アクチン・プロモータ（β−ａｃｔｉｎ・ｐｒｏｍｏｔｅｒ）にβ−ガラクトシダーゼ遺伝子（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｇｅｎｅ）を連結したプラスミド（ｐｌａｓｍｉｄ）（東京大学医科学研究所、井上純一郎 博士より供与）を用いた。
２）トランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）及びルシフェラーゼ・アッセイ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｓｓａｙ）
トランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）はＤＥＡＥ・デキストラン法（ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔｒａｎ ｍｅｔｈｏｄ）で行なった。２×１０６ｃｅｌｌｓの細胞を１×ＴＢＳ（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（２５ｍＭ），ＮａＣｌ（１３７ｍＭ），ＫＣｌ（５ｍＭ），Ｎａ２ＨＰＯ４（０．５ｍＭ）で１回洗浄し、１μｇのプラスミド（ｐｌａｓｍｉｄ）を含むトランスフェクション・バッファ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ）（２×ＴＢＳ（２００μｌ），１００×Ｃａ２＋・Ｍｇ２＋（ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ）（７８ｍＭ，４μｌ），ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ（７６ｍＭ），ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔｒａｎ（１ｍｇ／ｍｌ，２００μｌ）中に、１０分ごとタッピング（ｔａｐｐｉｎｇ）しながら３０分間室温でインキュベートした。その後、１×ＴＢＳで洗浄し、１２個のウェルプレート（ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ）（ｃｏｓｔａｒ：Ｎ．Ｙ．，Ｕ．Ｓ．Ａ）に１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで撒き、３７℃でインキュベートした。翌日、種々の濃度のＤＨＭ２ＥＱまたはＤＨＭ３ＥＱを添加し、２時間インキュベートした後、さらにＴＮＦ−α（２０ｎｇ／ｍｌ）を添加し、６時間インキュベートした。細胞を３５００ｒｐｍ、５分間遠心し、上清を除去後、リシス・バッファ（ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（２５ｍＭ，ｐＨ７．８），ＤＴＴ（２ｍＭ），１，２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ′，Ｎ−四酢酸（２ｍＭ），１０％グリセリン，１％トリトンＸ−１００（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）を５０μｌ加え、氷中で３０分可溶化した。つぎに、１５０００ｒｐｍ、５分間遠心し、上清をサンプルとした。
１０μｌのサンプルに対し、１００μｌの発光基質溶液（トリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）（２０ｍＭ），（ＭｇＣＯ３）・４Ｍｇ（ＯＨ）２・５Ｈ２Ｏ（１．０７ｍＭ），ＭｇＳＯ４（２．６７ｍＭ），ＥＤＴＡ（０．１ｍＭ），ＤＴＴ（３３．３ｍＭ），Ｃｏｅｎｚｙｍｅ Ａ（２７０μＭ），ルシフェリン（ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ）（４７０μＭ），ＡＴＰ（５３０μＭ）を加え、発光量をＬｕｍａｔ ＬＢ９５０１（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ：Ｂａｄ Ｗｉｌｄｂａｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で定量した。さらに、測定値をβ−ガラクトシダーゼ・アッセイ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ａｓｓａｙ）により補正し、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）の活性値とした。
３）β−ガラクトシダーゼ・アッセイ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ａｓｓａｙ）
β−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ）ＤＮＡはトランスフェクション効率を測定し、正規化するために行なうものである。
２０μｌのサンプルを２３０μｌのＺバッファ（ＫＣｌ（１０ｍＭ），ＭｇＳＯ４（１ｍＭ），２−メルカプトエタノール（２−Ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ）（５０ｍＭ），ＮａＰＯ４（１００ｍＭ：ｐＨ７．５）に加え、さらに５０μｌのｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ；ｏ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−β−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ，Ｓｉｇｍａ社），ＮａＰＯ４（１００ｍＭ，ｐＨ７．５）溶液（２ｍｇ／ｍｌ）を加え、３７℃でインキュベートした。溶液が黄色く呈色したところで、Ｎａ２ＣＯ３（１Ｍ）を２５０μｌ加え、４２０ｎｍの吸収波長を分光光度計（日立製作所）にて測定した。
Ｂ）コラーゲン誘発関節炎抑制作用
タイプＩＩコラーゲンを等容量のフロイントのコンプリートアジュバントと共に乳化して１．５ｍｇ／ｍｌの投与液を作成した。これをマウスの尾根部の皮内に０．１ｍｌ接種して感作した（１５０μｇ／マウス）。３週間後に同様の操作方法で乳化したタイプＩＩコラーゲンの０．１ｍｌをマウスの腹腔内に投与して追加免疫を行ない、関節炎を誘発させた（１５０μｇ／マウス）。
ＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱの２ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇの投与量で、６匹／群のマウスを用い初回免疫の日より０．１ｍｌ／１０ｇ体重の割合で３回／週、合計１８回／６週間、腹腔内投与した。なお、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ群、６匹／群）には同様のスケジュールで０．５％ＣＭＣ溶液を投与し、コラーゲン関節炎を誘発しない正常（Ｎｏｒｍａｌ）群（４匹／群）もあわせて設けた。コラーゲン誘発関節炎の抑制効果は前肢及び後肢の発赤、腫脹及び強直の程度による０〜４のスコア（四肢の合計の最高点は１６点）により評価した。スコア０は全く症状がみられない場合、スコア１は四肢の指など小関節が１本のみ発赤、腫脹を示す場合、スコア２は小関節が２本以上、あるいは手首、足首などの比較的大きな関節が発赤、腫脹を示す場合、スコア３は１本の手や足全体が発赤、腫脹を示す場合、さらにスコア４は１本の手や足の全体的な腫脹が最大限に達し、しかも関節の強直を伴っていると判断した場合をそれぞれ示す。結果を図２（Ａ）、図２（Ｂ）に示す。
図１（Ａ）及び（Ｂ）の結果から明らかなように、本発明による新規化合物ＤＨＭ２ＥＱでは１μｇ／ｍｌから（図１（Ａ））、及びＤＨＭ３ＥＱでは１０μｇ／ｍｌ（図１（Ｂ））でＮＦ−κＢの活性化を阻害した。また、図２（Ａ）、図２（Ｂ）から明らかなように、ＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱ、特にＤＨＭ２ＥＱは慢性関節リウマチのマウス動物実験モデルである、コラーゲン誘発関節炎を抑制することからイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）においての有効性も証明された。
産業上の利用可能性
［医薬としての適用］
前述のように本発明の化合物のＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱは、ＮＦ−κＢ活性化阻害活性、及びイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）でコラーゲン誘発関節炎抑制作用を示した。したがって式（１ａ）及び（１ｂ）で示される化合物は抗炎症剤、免疫抑制剤として有用であると考えられる。
前記式（１ａ）及び（１ｂ）で示される化合物は、弱酸性物質であり、それらの塩としては第４級アンモニウム塩などの有機塩基の塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウムのようなアルカリ金属との塩があり、これらの塩の形でも利用できる。
式（１ａ）及び（１ｂ）で示される化合物またはその塩は、経口投与のための固体組成物や液体組成物、非経口投与のための注射剤、外用剤、坐剤等に調整して投与することができる。投与量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常成人１日当たり約１ｍｇ〜１００ｍｇを１日１〜数回にわけて投与する。
経口投与のための固体組成物には、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等が含まれる。組成物は、常法に従って、不活性な希釈剤以外の添加物、例えば潤滑剤、崩壊剤、溶解補助剤を含有してもよい。錠剤または丸剤は必要により胃溶性あるいは腸溶性物質のフィルムで被膜していてもよい。
経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含む。この組成物は、不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有してもよい。
本発明による非経口投与のための注射剤には無菌の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤が含まれる。注射剤には、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでいてもよい。
非経口投与のためその他の組成物としては、外用液剤、軟膏、塗布剤、直腸内投与のための坐剤等が含まれる。
発明を実施するための最良の形態
次に実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
実施例１：Ｎ−（２−アセトキシベンゾイル）−２，５−ジメトキシアニリンの合成
２，５−ジメトキシアニリン（１０．０ｇ，６５．３ｍｍｏｌ）をピリジン（１００ｍｌ）に溶解し、氷冷下Ｏ−アセチルサリチロイルクロリド（１３．０ｇ，６５．３ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（５０ｍｌ）溶液を１５分間かけて加えた後、同温度で１５分間撹拌した。反応液に水（１０ｍｌ）を加えて反応を停止させた後、酢酸エチル（５００ｍｌ）を加え、３規定塩酸（５００ｍｌ）、水（５００ｍｌ）、２％重曹水（５００ｍｌ）、水（５００ｍｌ）の順に洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、減圧濃縮、真空乾燥すると、表題化合物（１９．８ｇ）が淡黄色シロップとして得られた。この化合物は精製せず、このまま次の工程に使用した。分取用薄層クロマトグラフィーによって精製した表題化合物の物性は次のとおりである。
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３４０９，１７７３，１６７１，１６０３，１５３５，１４７８，１２８３，１２２１，１１７９ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２２４（１８１００），３０９（７８９０）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：３１６（Ｍ＋Ｈ）＋、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ ２．３７（３Ｈ，ｓ），３．８２（３Ｈ，ｓ），３．８７（３Ｈ，ｓ），６．６２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．８ ａｎｄ ８．８Ｈｚ），６．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．３７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．５２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ７．２Ｈｚ），７．９９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ８．０Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），８．９３（１Ｈ，ｂｒ ｓ）。
実施例２：３−（Ｏ−アセチルサリチロイル）アミド−４，４−ジメトキシ−２，５−シクロヘキサジエノンの合成
実施例１で得た、Ｎ−（２−アセトキシベンゾイル）−２，５−ジメトキシアニリン（１９．８ｇ）をメタノール（４００ｍｌ）に溶解し、氷冷下ジアセトキシヨードベンゼン（２７．３ｇ，８４．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して得られた茶色シロップ状残渣に酢酸エチル（１Ｌ）を加え、５％重曹水（１Ｌ）、１０％食塩水（１Ｌ）で洗浄した。酢酸エチル層を減圧濃縮して得られた茶色シロップ状残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１ｋｇ，ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）にて精製し、固体１２．８ｇを得た。これをメタノール３０ｍｌにて懸濁撹拌洗浄し、表題化合物１０．９ｇを白色固体として得た（収率：２工程５０％）。
融点：１５０〜１５２℃、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３４５１，１７６９，１６９４，１５２０，１１９８ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２３８（１４２００），３１３（１３８００）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：３３２（Ｍ＋Ｈ）＋、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ ２．４７（３Ｈ，ｓ），３．３１（６Ｈ，ｓ），６．４８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ １０．８Ｈｚ），６．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ），７．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．３９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．５７（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），８．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．６ ａｎｄ ７．６Ｈｚ），８．８９（１Ｈ，ｂｒ ｓ）。
実施例３：５，６−エポキシ−４，４−ジメトキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノンの合成
３−（Ｏ−アセチルサリチロイルアミド）−４，４−ジメトキシ−２，５−シクロヘキサジエノン（１０．９ｇ，３３．０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２００ｍｌ）に溶解し、氷冷下、３０％過酸化水素水（６０ｍｌ）および１規定水酸化ナトリウム（１６５ｍｌ）を加え、同温度で２時間撹拌した。原料化合物は残存していたが反応を続けると目的物の分解が進行するため、反応処理を行なうことにした。反応液に酢酸エチル（５００ｍｌ）を加え、１規定塩酸（３００ｍｌ）、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液（３００ｍｌ×２）、１０％食塩水（３００ｍｌ）で順次洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、真空乾燥すると淡黄色シロップ状残渣が得られた。ＴＬＣ上目的物と近いスポットを持つ原料化合物を除去しやすくするため、残渣をアセトン（１００ｍｌ）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸（１００ｍｇ）を加え、室温で１．５時間撹拌し原料化合物を分解した。メタノールを減圧留去して得られた残渣に酢酸エチル（２００ｍｌ）を加え、水（２００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥して得られた褐色シロップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４００ｇ、トルエン／酢酸エチル＝１／１）にて精製し、６．５８ｇの黄色固体を得た。この固体をメタノール（２０ｍｌ）で懸濁撹拌洗浄し、表題化合物５．３４ｇを白色固体として得た（収率：５３％）。
融点：１４７〜１４９℃、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３２６４，１６７４，１６５１，１５３０，１２３６，１１１９，１０５３，１０５３ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２４２（５１００），３１４（１９６００）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：３０６（Ｍ＋Ｈ）＋、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ ３．３５（３Ｈ，ｓ），３．５８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４ ａｎｄ ４．４Ｈｚ），３．７５（３Ｈ，ｓ），３．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），６．９４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．０４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０．８ ａｎｄ ８．４Ｈｚ），７．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．２ ａｎｄ ８．４Ｈｚ），７．４９（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），８．６５（１Ｈ，ｂｒ ｓ），１１．３７（１Ｈ，ｓ）。
実施例４：５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオンの合成
５，６−エポキシ−４，４−ジメトキシ−３−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセノン（１．０ｇ，３．２７ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２５ｍｌ）に溶解し、氷冷下三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（１ｍｌ）を加え、同温度で３０分間撹拌した。反応液に酢酸エチル（３００ｍｌ）を加え、水（２００ｍｌ）にて洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、真空乾燥して得られた茶色固体をメタノール（５ｍｌ）にて洗浄すると、表題化合物（３９９ｍｇ）が薄茶色固体として得られた（収率：４７％）。
融点：２１０℃（分解）、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３４５３，３２０２，１７１３，１６６７，１６４２，１６１１，１５３７，１２３１ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２５０（１１９００），３２６（１５０００）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：２５９（Ｍ−）、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ ３．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４ ａｎｄ ４．０Ｈｚ），４．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．０７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．５１（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１．６ ａｎｄ ８．４Ｈｚ），７．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），８．０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．６ ａｎｄ ８．４Ｈｚ），１０．８３（１Ｈ，ｂｒ ｓ），１０．８８（１Ｈ，ｂｒ ｓ）。
実施例５：ＤＨＭ２ＥＱの合成
５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオン（８１．８ｍｇ，０．３１６ｍｍｏｌ）を、メタノール（１０ｍｌ）に懸濁し、氷冷下、水素化ホウ素ナトリウム（１１．９ｍｇ，０．３１６ｍｍｏｌ）を加え、同温度で１０分間撹拌した。反応液に酢酸エチル（５０ｍｌ）を加え、１規定塩酸（５０ｍｌ）、水（５０ｍｌ）で順次洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、減圧濃縮して得られた薄茶色固体をメタノール（１ｍｌ）にて懸濁撹拌洗浄すると、ＤＨＭ２ＥＱ（４５．３ｍｇ）が白色固体として得られた（収率：７２％）。
外観及び性質：白色粉末、弱酸性物質、
融点：１８５℃（分解）、
ＴＬＣのＲｆ値：０．４５（シリカゲル（Ａｒｔ．１．０５７１５、メルク社製）の薄層クロマトグラフィーで展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（１０：１）で展開）、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３３６０，１６６３，１６３４，１６０９，１５２６，１２０４，１０７１ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２４２（５９５０），３１４（２０４００）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：２６２（Ｍ＋Ｈ）＋、
分子式：Ｃ１３Ｈ１１ＮＯ５、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ ３．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４ ａｎｄ ４．４Ｈｚ），３．８５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４ ａｎｄ ４．０Ｈｚ），４．８３（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．７０（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．９９（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），７．４５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ８．８Ｈｚ），１０．８３（１Ｈ，ｂｒ ｓ），１０．８８（１Ｈ，ｂｒ ｓ）。
実施例６：３，３−ジメトキシ−４，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミドシクロヘキセンの合成
５，６−エポキシ−２−サリチロイルアミド−２−シクロヘキセン−１，４−ジオン（２００ｍｇ，０．６５５ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）と５％重曹水（５ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、氷冷下水素化ホウ素ナトリウム（２４．８ｍｇ，０．６５５ｍｍｏｌ）を加え、同温度で３０分間撹拌した。反応液に酢酸エチル（５０ｍｌ）を加え、１規定塩酸（５０ｍｌ）、水（５０ｍｌ）で順次洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、減圧濃縮、真空乾燥して得られたシロップ（２０６ｍｇ）を分取用薄層クロマトグラフィーにてトルエン／アセトン＝１／１の展開溶媒にて展開すると、表題化合物（９７ｍｇ）が無色透明なシロップとして得られた（収率：４８％）。
融点：１７０〜１７２℃、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３３６６，３２８５，１６５７，１５３７，１２３６，１１２８，１０６３，１０４６ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２４２（８１８０），２６２（９１９０），３００（７６１０）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：３０８（Ｍ＋Ｈ）＋、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ ２．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），３．２７（３Ｈ，ｓ），３．４９（１Ｈ，ｓ），３．６３（１Ｈ，ｓ），３．６４（３Ｈ，ｓ），３．６４（１Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），４．７６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ １０．０Ｈｚ），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），６．８９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．５ ａｎｄ ８．３Ｈｚ），７．４３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），８．２３（１Ｈ，ｓ），１１．８７（１Ｈ，ｓ）、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ ３．２８（３Ｈ，ｓ），３．５１（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝２．４ ａｎｄ ４．８Ｈｚ），３．５７（３Ｈ，ｓ），３．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），４．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０．４ ａｎｄ ８．４Ｈｚ），６．９３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝０．４ ａｎｄ ７．８Ｈｚ），７．３６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ７．８Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ７．８Ｈｚ）。
実施例７：ＤＨＭ３ＥＱの合成
３，３−ジメトキシ−４，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−２−サリチロイルアミドシクロヘキセン（８７．０ｍｇ，０．２８３ｍｍｏｌ）をアセトン（２ｍｌ）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸（５ｍｇ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液に酢酸エチル（２０ｍｌ）を加え、水（１５ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル層を芒硝乾燥した後、減圧濃縮して得られた白色固体を酢酸エチル（１ｍｌ）にて懸濁撹拌洗浄すると、ＤＨＭ３ＥＱ（５５．１ｍｇ）が白色固体として得られた（収率：７４％）。
外観及び性質：白色粉末、弱酸性物質、
融点：１７８〜１８２℃、
ＴＬＣのＲｆ値：０．３６（シリカゲル（Ａｒｔ．１．０５７１５、メルク社製）の薄層クロマトグラフィーで展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（１０：１）で展開して測定）、
赤外線吸収スペクトル：νｍａｘ（ＫＢｒ）３４５７，３１０２，１６９６，１６２０，１５５９，１３８１，１２３３ｃｍ−１、
紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）２４８（１２０００），３０１（９３６０）、
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：２６２（Ｍ＋Ｈ）＋、
分子式：Ｃ１３Ｈ１１ＮＯ５、
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ ３．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），３．８４（１Ｈ，ｂｒ），４．８７（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．９７（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），７．４２（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），１０．６０（１Ｈ，ｂｒ ｓ），１１．７１（１Ｈ，ｂｒ ｓ）。
【図面の簡単な説明】
図１（Ａ）及び（Ｂ）は、各々ＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱのＮＦ−κＢ産生抑制活性を示すグラフである。
図２（Ａ）及び（Ｂ）は、各々ＤＨＭ２ＥＱ及びＤＨＭ３ＥＱのマウスのコラーゲン誘発関節炎に対する効果を示すグラフである。
Claims (17)
- 式（１）
［式中、Ｒ１は水素原子、またはＣ２〜４のアルカノイル基を表わし、
Ｒ２は、次式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）または（Ｇ）で示される基を表わし：
Ｒ３はＣ１〜４のアルキル基を表わす。］
で示されるサリチル酸アミド誘導体。 - 式（１ａ）または（１ｂ）
で示される化合物である請求の範囲１記載のサリチル酸アミド誘導体。 - 式（２）
（式中の記号は請求の範囲１と同じ意味を表わす。）で示される化合物である請求の範囲１記載のサリチル酸アミド誘導体。 - 式（３）
（式中の記号は請求の範囲１と同じ意味を表わす。）で示される化合物である請求の範囲１記載のサリチル酸アミド誘導体。 - 式（４）
（式中の記号は請求の範囲１と同じ意味を表わす。）で示される化合物である請求の範囲１記載のサリチル酸アミド誘導体。 - 式（５）
で示される化合物である請求の範囲１記載のサリチル酸アミド誘導体。 - 式（６）
（式中の記号は請求の範囲１と同じ意味を表わす。）で示される化合物である請求の範囲１記載のサリチル酸アミド誘導体。 - ２，５−ジメトキシアニリンを式（７）
（式中、Ｒ１は請求の範囲１と同じ意味を表わし、Ｘはハロゲン原子表わす。）で示されるＯ−アルカノイルサリチロイルハライドと反応させることを特徴する式（２）
（式中の記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。 - 式（２）
（式中の記号は請求の範囲１と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体を式Ｃ６Ｈ３Ｉ（ＯＡｃ）２（式中、Ａｃはアセチル基を表わす。）で示される化合物の存在下、Ｒ３ＯＨ（Ｒ３はＣ１〜４のアルキル基である。）で示されるアルカノールと反応させることを特徴とする式（３）
（式中の記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。 - 式（３）
（式中の記号は請求の範囲１と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体をエポキシ化反応に付すことを特徴とする式（４）
（式中の記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。 - 式（４）
（式中の記号は請求の範囲１と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体を脱ジアルキルケタール化反応に付すことを特徴とする式（５）
（式中の記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。 - 式（４）
（式中の記号は請求の範囲１と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体を還元反応に付すことを特徴とする式（６）
（式中の記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。 - 式（５）
で示されるサリチル酸アミド誘導体を還元反応に付すことを特徴とする式（１ａ）
で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。 - 式（６）
（式中の記号は請求の範囲１と同じ意味を表わす。）で示されるサリチル酸アミド誘導体を脱ジアルキルケタール化反応に付すことを特徴とする式（１ｂ）
で示されるサリチル酸アミド誘導体の製造方法。 - 請求の範囲２に記載の式（１ａ）または（１ｂ）で示されるサリチル酸アミド誘導体またはその塩を有効成分とする薬剤。
- 請求の範囲２に記載の式（１ａ）または（１ｂ）で示されるサリチル酸アミド誘導体またはその塩を有効成分とするＮＦ−κＢ活性化阻害剤。
- 請求の範囲２に記載の式（１ａ）または（１ｂ）で示されるサリチル酸アミド誘導体またはその塩を有効成分とする抗炎症剤または免疫抑制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001516889A JP4691295B2 (ja) | 1999-08-11 | 2000-08-09 | サリチル酸アミド誘導体 |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1999227389 | 1999-08-11 | ||
| JP22738999 | 1999-08-11 | ||
| PCT/JP2000/005332 WO2001012588A1 (fr) | 1999-08-11 | 2000-08-09 | Derives de salicylamide |
| JP2001516889A JP4691295B2 (ja) | 1999-08-11 | 2000-08-09 | サリチル酸アミド誘導体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP4691295B2 true JP4691295B2 (ja) | 2011-06-01 |
Family
ID=16860062
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001516889A Expired - Fee Related JP4691295B2 (ja) | 1999-08-11 | 2000-08-09 | サリチル酸アミド誘導体 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6566394B1 (ja) |
| EP (1) | EP1219596B1 (ja) |
| JP (1) | JP4691295B2 (ja) |
| KR (1) | KR100709317B1 (ja) |
| CN (1) | CN1185212C (ja) |
| AT (1) | ATE344234T1 (ja) |
| AU (1) | AU774221B2 (ja) |
| CA (1) | CA2393883C (ja) |
| DE (1) | DE60031705T2 (ja) |
| WO (1) | WO2001012588A1 (ja) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA82827C2 (en) * | 2000-12-18 | 2008-05-26 | Inhibitors against the production and release of inflammatory cytokines | |
| DE10222895A1 (de) * | 2002-05-23 | 2003-12-11 | Bosch Gmbh Robert | Hochdruckspeicher für Kraftstoffeinspritzsysteme mit integriertem Druckregelventil |
| CA2487891A1 (en) * | 2002-06-05 | 2003-12-18 | Institute Of Medicinal Molecular Design, Inc. | Inhibitors against the activation of ap-1 and nfat |
| JPWO2003103648A1 (ja) * | 2002-06-05 | 2005-10-06 | 株式会社医薬分子設計研究所 | 糖尿病治療薬 |
| CN1658854A (zh) * | 2002-06-05 | 2005-08-24 | 株式会社医药分子设计研究所 | 免疫关联蛋白激酶抑制剂 |
| CA2488367A1 (en) * | 2002-06-06 | 2003-12-18 | Institute Of Medicinal Molecular Design, Inc. | Antiallergic agents |
| JP4743382B2 (ja) * | 2002-06-06 | 2011-08-10 | 株式会社医薬分子設計研究所 | Ｏ−置換ヒドロキシアリール誘導体 |
| US20060089395A1 (en) * | 2002-06-10 | 2006-04-27 | Susumu Muto | Nf-kb activation inhibitors |
| CA2488974A1 (en) * | 2002-06-10 | 2003-12-18 | Institute Of Medicinal Molecular Design, Inc. | Medicament for treatment of cancer |
| EA011707B1 (ru) * | 2002-06-11 | 2009-04-28 | Инститьют Оф Медисинал Молекьюлар Дизайн. Инк. | Лекарственное средство для лечения нейродегенеративных заболеваний |
| US20060183794A1 (en) * | 2002-06-26 | 2006-08-17 | Kazuo Umezawa | Drug composition containing nf-kb inhibitor |
| US7959161B2 (en) * | 2002-11-12 | 2011-06-14 | Nok Corporation | Rubber-like elastic part |
| US20060167086A1 (en) * | 2003-02-14 | 2006-07-27 | Kazuo Umezawa | Medicinal composition |
| JPWO2005013966A1 (ja) * | 2003-08-06 | 2007-09-27 | 株式会社シグナル・クリエーション | マクロファージ活性化阻害剤 |
| JP2007182397A (ja) * | 2006-01-05 | 2007-07-19 | Keio Gijuku | ＮＦ−κＢ阻害剤 |
| CN102414190B (zh) * | 2009-03-27 | 2015-06-03 | 普罗菲克图斯生物科学股份有限公司 | NF-κB的抑制剂 |
| CN102439000A (zh) * | 2009-05-01 | 2012-05-02 | 普罗菲克图斯生物科学股份有限公司 | 抑制核因子-κ(B)-(NF-κB)的苯甲酰胺和萘甲酰胺衍生物 |
| US20120088827A1 (en) | 2009-06-18 | 2012-04-12 | Profectus Biosciences, Inc. | Oxabicyclo[4.1.0]Hept-B-en-S-yl Carbamoyl Derivatives Inhibiting The Nuclear Factor-Kappa (B) - (NF-KB) |
| CN103588732B (zh) * | 2013-12-02 | 2015-03-25 | 深圳万和制药有限公司 | 水杨酸酰胺衍生物的结晶 |
| CN103588731B (zh) * | 2013-12-02 | 2015-09-02 | 深圳万和制药有限公司 | 水杨酸酰胺衍生物及制备方法 |
| RU2703735C1 (ru) * | 2018-11-09 | 2019-10-22 | Общество с ограниченной ответственностью "ПеритонТрит" | Фармацевтическая композиция, содержащая DHMEQ или его аналоги |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09157266A (ja) * | 1995-12-04 | 1997-06-17 | Microbial Chem Res Found | 新規抗生物質エポキシキノマイシンａおよびｂとその製造法 |
| JPH1045738A (ja) * | 1996-07-29 | 1998-02-17 | Microbial Chem Res Found | 抗生物質エポキシキノマイシンｃおよびｄとその製造法ならびに抗リウマチ剤 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6445738A (en) * | 1987-08-13 | 1989-02-20 | Fujikura Ltd | Production of optical fiber preform |
-
2000
- 2000-08-09 KR KR1020027001552A patent/KR100709317B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-08-09 AU AU64727/00A patent/AU774221B2/en not_active Ceased
- 2000-08-09 AT AT00951914T patent/ATE344234T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-08-09 CN CNB008114870A patent/CN1185212C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-09 DE DE60031705T patent/DE60031705T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-09 EP EP00951914A patent/EP1219596B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-09 US US10/049,158 patent/US6566394B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-08-09 JP JP2001516889A patent/JP4691295B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-08-09 WO PCT/JP2000/005332 patent/WO2001012588A1/ja active IP Right Grant
- 2000-08-09 CA CA2393883A patent/CA2393883C/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09157266A (ja) * | 1995-12-04 | 1997-06-17 | Microbial Chem Res Found | 新規抗生物質エポキシキノマイシンａおよびｂとその製造法 |
| JPH1045738A (ja) * | 1996-07-29 | 1998-02-17 | Microbial Chem Res Found | 抗生物質エポキシキノマイシンｃおよびｄとその製造法ならびに抗リウマチ剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU774221B2 (en) | 2004-06-17 |
| KR20020031402A (ko) | 2002-05-01 |
| WO2001012588A1 (fr) | 2001-02-22 |
| CA2393883A1 (en) | 2001-02-22 |
| CA2393883C (en) | 2010-07-06 |
| DE60031705D1 (de) | 2006-12-14 |
| EP1219596A1 (en) | 2002-07-03 |
| ATE344234T1 (de) | 2006-11-15 |
| US6566394B1 (en) | 2003-05-20 |
| CN1185212C (zh) | 2005-01-19 |
| AU6472700A (en) | 2001-03-13 |
| DE60031705T2 (de) | 2007-10-04 |
| CN1368954A (zh) | 2002-09-11 |
| EP1219596B1 (en) | 2006-11-02 |
| EP1219596A4 (en) | 2004-08-18 |
| KR100709317B1 (ko) | 2007-04-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4691295B2 (ja) | サリチル酸アミド誘導体 | |
| US11236045B2 (en) | Substituted sulfoximine compounds | |
| TW442490B (en) | Tricyclic erythromycin derivatives | |
| AU658629B2 (en) | Novel isoxazole derivative and salt thereof | |
| JP2006515829A5 (ja) | ||
| KR20030077551A (ko) | 항종양제로서의 테트랄론 유도체 | |
| US4431663A (en) | Treatment of psychosis with meta-sulfonamido-benzamide derivatives | |
| EP0623023A1 (en) | Retroreverse pyrrole-amidino oligopeptide anticancer agent analogues, preparation of same, and pharmaceutical compositions containing such analogues | |
| JP2873417B2 (ja) | フェニルアルカン酸エステル中間体の製造方法 | |
| JPH07215952A (ja) | カテコール誘導体 | |
| JPH11152286A (ja) | フェニルアルカン酸エステルの塩酸塩、およびその製造方法 | |
| US4831055A (en) | Benzoic acid derivatives | |
| CN115043782B (zh) | 4h-3,1-苯并噁嗪-4-酮衍生物及其制备方法和应用 | |
| US20040133001A1 (en) | Peptide deformylase inhibitors | |
| JP3179895B2 (ja) | 新規なコハク酸誘導体 | |
| JPH04330060A (ja) | ピリジン−２，４−および−２，５−ジカルボン酸のジ（ニトロキシアルキル）アミド、その製造方法およびその使用 | |
| WO1991011444A1 (fr) | Compose de piperazine, sa production et son utilisation en medecine | |
| JPS6342625B2 (ja) | ||
| JPH1072421A (ja) | イミド誘導体 | |
| JPH0118916B2 (ja) | ||
| JPS5978194A (ja) | ２−フエニルイミダゾ〔２，１−ｂ〕ベンゾチアゾ−ルの新規誘導体およびその製造法 | |
| KR790000981B1 (ko) | N-(메톡시메틸-푸릴메틸)-6,7-벤조모르판 및 모르피난의 제조방법 | |
| JPH01131172A (ja) | アミン誘導体およびその塩、それらの製造法、並びにそれらを含有する抗潰瘍剤 | |
| JPH10120680A (ja) | 新規インドリジン化合物 | |
| JPH0569830B2 (ja) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20060524 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20060524 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070720 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110125 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110221 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140225 Year of fee payment: 3 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |