JP4665184B2

JP4665184B2 - セルロース固体培地とその製造方法

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Publication number: JP4665184B2
Application number: JP2006510551A
Authority: JP
Inventors: 茂出口; 美紀子津留; 進伊藤; 弘毅掘越
Original assignee: Japan Agency for Marine Earth Science and Technology
Current assignee: Japan Agency for Marine Earth Science and Technology
Priority date: 2004-03-02
Filing date: 2005-02-28
Publication date: 2011-04-06
Anticipated expiration: 2025-02-28
Also published as: US7790457B2; WO2005083056A1; US20070172938A1; JPWO2005083056A1

Description

本発明は、微生物等の培養に用いる固体培地とその製造方法に関し、特に培地固化成分としてセルロースゲルを用いた固体培地とその製造方法に関する発明である。

微生物の培養方法としては、液体培地による方法と固体培地による方法がある。液体培地を用いる方法では、菌の生育が脆弱であったり、変異株が取得できない、或いは純度の低い菌しか単離することができないなどといった問題があった。一方、固体培地を用いる方法は、このような問題が少なく、明暸に分離したコロニーが形成されるため、微生物の単離とその純粋培養方法として優れており、古くから使用されている。この固体培地の固化成分としてはコッホの時代にさかのぼる古くから、寒天ゲルが使用されている。寒天ゲルは、例えば、「新生化学実験講座１７」（日本生化学会偏、１９９２年、東京化学同人社発行）の１５−２０頁に記載されているように、細菌の生育する広い温度範囲で硬く透明な固体であり、寒天を分解できる微生物はごく限られたものしかなく、液化が問題となることがほとんどないなどの優れた性質を有するため、培地固化剤として非常に優れたものであり、現在までこれに代わる優れた培地固化剤は見出されていないと言っても過言ではない。
しかしながら、このような寒天ゲルも温度、ｐＨ或いは塩濃度などの条件によっては、軟化したり溶解してしまうため、培地固化成分として使用できる範囲には一定の制限があった。時に、近年になり、新たな有用微生物を探索するために、より広い範囲の温度，ｐＨ、塩濃度などの培養条件下での微生物の培養が必要となり、このようなより広い範囲の培養条件下で使用可能な培地固化成分の開発が望まれている。例えば、今までに１２１℃という高温で生育可能な超好熱菌が見つかっており、このような超好熱菌の産生する酵素は、工業的に有用であると考えられるが、そのような微生物が増殖する温度は、寒天の軟化温度以上であるため固体培養ができず、もっぱら液体培養によって生産されている。しかし、液体培養では、既に述べたように、生育が脆弱であり、変異株が取得できない、単離された菌の純度が低いなど、固体培養と比べて著しい制限を受けることとなる。
従って、より幅広い培養条件下でも使用可能な培地固化成分を開発する試みが種々なされており、例えばジェランガムを培地固化成分として使う方法（例えば、Ｓｈｕｎｇｕ，Ｄ．，Ｖａｌｉａｎｔ，Ｍ．，Ｔｕｔｌａｎｅ，Ｖ．，Ｗｅｎｉｂｅｒｇ，Ｅ．，Ｗｅｉｓｓｂｅｒｇｅｒ，Ｂ．，Ｋｏｕｐａｌ，Ｌ．，Ｇａｄｅｂｕｓｃｈ，Ｈ．，ａｎｄＳｔａｐｌｅｙ，Ｅ．，”Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．”，１９８３，４６，８４０−８４５．を参照）、培地を含有したシリカゲルプレート上で培養を行う方法（例えば、新生化学実験講座１７、１５−２０頁、日本生化学会偏、１９９２年東京化学同人社発行を参照）などがある。しかしながら、ジェランガムを用いる方法では、培地中のカチオン（金属性陽イオン）が不足すると固まらない、或いは酸性度が増すと固まりにくくなる等の問題がある。また、シリカゲルプレートを使う方法では、アルカリ条件下での使用が困難であり、かつ保水性が悪く、プレート表面が乾燥しやすく、微生物の生育に悪影響を与えるという問題がある。つまり、幅広い温度、ｐＨ、塩濃度などの培養条件で十分に満足して利用可能な固体培地は依然として未開発であると言わざるを得ない。
本発明は、以上のような、温度、ｐＨ或いは塩濃度などの条件によっては使用することができない寒天培地などの従来の固体培地の問題点を解決し、より広い範囲の培養条件下で使用することができる固体培地とその製造方法を提供することを目的とするものである。

本発明者らは、以上のような従来の固体培地の問題点を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、培地固化成分としてセルロースゲルを用いることによってこれらの課題を解決できることを見出し、本発明を完成した。
即ち、本発明は、以下の内容をその要旨とするものである。
（１）培地固化成分としてセルロースゲルを含む固体培地。
（２）セルロースゲルの結晶化度が５〜７０％であることを特徴とする、前記（１）記載の固体培地。
（３）用いるセルロースの分子量が１０，０００〜２，０００，０００であることを特徴とする、前記（１）または（２）に記載の固体培地。
（４）セルロースゲルが、セルロースを骨格部分とし、セルロース濃度が０．０１％以上である多孔質のセルロースゲル構造体であることを特徴とする、前記（１）ないし（３）のいずれかに記載の固体培地。
（５）セルロースゲルが、空隙率が５０％以上の多孔質ゲル状構造体であることを特徴とする、前記（１）ないし（４）のいずれかに記載の固体培地。
（６）セルロースゲルが、セルロースをチオシアン酸塩水溶液中で加熱・溶解し、次いで冷却して得られる多孔質のゲル状材料であることを特徴とする、前記（１）ないし（５）のいずれかに記載の固体培地。
（７）溶媒に分散したセルロースを、機械的混合及び／又は加熱によって溶解又は膨潤させ、次いで冷却及び／又は溶媒の除去により固化させた後、これに栄養素成分を浸透させることを特徴とする、セルロースゲル固体培地の製造方法。
（８）溶媒に分散したセルロースを加熱することにより溶解し、次いで冷却して固化させ、溶媒成分を除去した後、栄養素成分を浸透させることを特徴とする、前記（７）に記載のセルロースゲル固体培地の製造方法。
（９）溶媒がチオシアン酸のアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩の水溶液であることを特徴とする、前記（７）または（８）に記載のセルロースゲル固体培地の製造方法。
（１０）溶媒がチオシアン酸カルシウムの水溶液であることを特徴とする、前記（７）ないし（９）のいずれかに記載のセルロースゲル固体培地の製造方法。
（１１）溶媒がチオシアン酸カルシウムの飽和水溶液で、加熱温度が７０〜２００℃であることを特徴とする、前記（７）ないし（１０）のいずれかに記載のセルロースゲル固体培地の製造方法。
（１２）培地固化成分としてセルロースゲルを用いた固体培地の表面で微生物または細胞を培養することを特徴とする、微生物または細胞の培養方法。
（１３）セルロースゲルを用いた固体培地で培養する微生物が極限環境微生物であることを特徴とする、前記（１２）に記載の微生物の培養方法。
このような培地固化成分としてセルロースゲルを用いた本発明の固体培地は、高い温度や広いｐＨ範囲、或いは広い塩濃度の範囲で安定な諸性質と形状を保持しており、良好な性質を有する固体培地が得られ、広範囲の培養条件下で軟化したり溶解することがなく使用することができる固体培地である。したがって、従来の代表的な固体培地である寒天を用いた固体培地では不可能であった、１００℃を超える高い温度や、ｐＨが３以下或いは１０以上という厳しい条件でも微生物等の培養が可能となる。

第１図は、本発明の固体培地に使用するセルロースゲルの表面状態を示す倍率１０，０００倍の走査型電子顕微鏡写真であり、第２図は、本発明の固体培地に使用するセルロースゲルの表面状態を示す倍率１００，０００倍の走査型電子顕微鏡写真である。

本発明で使用するセルロースゲルを得るためのセルロースは、植物あるいは微生物によって生産されるグルコースがβ−１−４グルコシド結合を介して直鎖状に結合した多糖類またはその種々の誘導体である。本発明のセルロースゲルを得るためのセルロース誘導体としては、分岐を持つものや、硝酸エステル、リン酸エステル、キサントゲン酸塩、亜硝酸エステル、硝酸エステル、硫酸エステル、ギ酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、酪酸エステル、吉草酸エステル、酢酸プロピオン酸エステル、酢酸酪酸エステル、トリフルオロ酢酸エステル、安息香酸エステル、トシルエステル、フェニルカルバニレート、アルキルケテンダイマーエステル、アルケニル無水コハク酸エステル等のエステル化誘導体；カルボキチメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、プロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、シアノエチルセルロース、ジエチルアミノエチルエチルセルロース、トリメチルアンモノイルヒドロキシプロピルセルロース、トリフェニルメチルセルロース等のエーテル化誘導体；フッ素、塩素、臭素、ヨウ素などを導入したハロゲン化誘導体；アミノ基を導入した誘導体、チオール基を導入した誘導体、高分子をグラフトした誘導体、ポリウロン酸型の酸化物誘導体等のセルロース誘導体であってもよい。またセルロースゲルを得た後に、化学修飾を施したものでもよい。これらのセルロースまたはその誘導体は、その分子量が１０，０００〜２，０００，０００のものが好ましく、特に、分子量が１０，０００〜１００，０００のα−セルロースが望ましい。
本発明で使用するセルロースゲルは、上記のようなセルロースまたはその誘導体を、溶媒に溶解または膨潤させ、次いで再結晶化または固化させることによって得ることができる。
セルロース類の溶媒への溶解は、セルロース分子の大きさ、セルロース分子中の水酸基やピラノース環の酸素原子の作用等が複雑に影響する。本発明で使用するセルロースゲルは、溶媒中にセルロース類を分散・混合し、必要に応じて加熱して溶解または膨潤させ、その後、必要に応じて冷却して固化させ、溶媒を除去して得ることができる。
このセルロースまたはその誘導体を溶解する溶媒としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸水溶液；水酸化リチウム、水酸化ナトリウムなどのアルカリ溶液；塩化亜鉛、チオシアン酸塩、液体アンモニア／チオシアン酸塩、液体アンモニア／ナトリウム、液体アンモニア／ヨウ化アンモニウム、ヒドラジン等の無機化合物の水溶液；［Ｃｕ（ＮＨ_３）_４］（ＯＨ）、［Ｃｕ（エチレンジアミン）_２］（ＯＨ）_２、［Ｃｏ（エチレンジアミン）_２］（ＯＨ）_２、［Ｎｉ（ＮＨ_３）_２］（ＯＨ）_２、［Ｎｉ（エチレンジアミン）_３］（ＯＨ）_２、［Ｃｄ（エチレンジアミン）_３］（ＯＨ）_２、［Ｚｎ（エチレンジアミン）_３］（ＯＨ）_２、Ｆｅ：酒石酸：ＮａＯＨ等の金属錯体溶液；ジメチルスルホキシド／ホルムアルデヒド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ホルムアルデヒド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／ホルムアルデヒド、ジメチルスルホキシド／クロラール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／クロラール、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／クロラール、ジメチルスルホキシド／クロラール／ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／クロラール／ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／クロラール／ピリジン、ジメチルスルホキシド／クロラール／トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／クロラール／トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／クロラール／トリエチルアミン、ジメチルスルホキシド／無水亜硫酸／ジエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／無水亜硫酸／ジエチルアミン、ジメチルスルホキシド／無水亜硫酸／トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／無水亜硫酸／トリエチルアミン、ジメチルスルホキシド／無水亜硫酸／ピペリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／無水亜硫酸／ピペリジン、ジメチルスルホキシド／無水亜硫酸／イソアミルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／無水亜硫酸／イソアミルアミン、ジメチルスルホキシド／Ｎ_２Ｏ_４、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／Ｎ_２Ｏ_４、ジメチルスルホキシド／ＮＯＣｌ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ＮＯＣｌ、ジメチルスルホキシド／ＮＯＳＯ_４Ｈ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ＮＯＳＯ_４Ｈ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／塩化リチウム、Ｎ−メチル−２−ピロリドン／塩化リチウム、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン／塩化リチウム、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／臭化リチウム、Ｎ−メチル−２−ピロリドン／臭化リチウム、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン／臭化リチウム、トリフルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸／クロロホルム、トリフルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸／酢酸、Ｎ−メチルモルフォリン−Ｎ−オキシド含水塩、Ｎ−メチルモルフォリン−Ｎ−オキシド含水塩／ジメチルスルホキシド、Ｎ−アルキルピリジウムハロゲン類等の有機溶媒から選ばれる１種又は２種以上の混合物などを使用することができる。
これらの中でも、チオシアン酸塩水溶液を溶媒として使用すると、セルロースを膨潤させてセルロースの結晶面の面間隔を増大させ、さらに加熱することによって溶解し、次いでこれを冷却すると固化してゲル状となり、本発明の固体培地に適した多孔質のゲル状構造体を形成するので、溶媒として最も好ましいものである。このようなチオシアン酸塩としては、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸カリウム等のチオシアン酸アルカリ金属塩、及びチオシアン酸カルシウム、チオシアン酸マグネシウム等のチオシアン酸アルカリ土類金属塩が好ましい。特に、チオシアン酸カルシウムを質量濃度で４０％以上含むチオシアン酸カルシウム水溶液、またはチオシアン酸ナトリウムを質量濃度で５０％以上含むチオシアン酸ナトリウム水溶液が好ましく、チオシアン酸カルシウムの飽和水溶液が最も望ましい。
また、ここで使う水としては、超純水、蒸留水、脱イオン水など精製水が使用されるが、水道水であってもよい。
セルロース溶解用の溶媒中へのセルロースの添加量は特に制限されないが、溶解するセルロースの分子量等によってその量を調整する。一般的に、溶媒に対して０．０１質量％以上、好ましくは０．０１〜２０質量％程度にするのが、操作の容易さの点で望ましい。溶媒中への分散方法は、特に制限はなく通常行なわれる種々の方法で溶媒中に分散すればよく、セルロースを溶媒に添加した後、単に撹拌する程度でもよい。本発明のセルロースゲルを得るには、セルロースを溶媒中に分散・混合して、必要に応じてさらに加熱して、セルロースを膨潤させ、更に溶解させる。次いで、膨潤し、又は溶解したセルロース溶液を、必要に応じて冷却して、固化させ、溶媒を除去して、本発明に使用するに適した多孔質のセルロースゲルを形成させる。この際、セルロースは、溶媒に対してその溶解度以上の量を添加してもよい。この場合は、加熱後であってもセルロースの一部が溶解しない状態のままで冷却固化されることとなるが、このようにして得られたセルロースゲルも多孔質のゲル状を示し、本発明の固体培地に好適に使用することができる。
溶媒としてチオシアン酸塩を使用する場合には、セルロースは溶媒中で７０℃以上に加熱してセルロースを膨潤させ溶解させることが好ましく、更には８０〜２００℃に加熱して溶解することがより好ましい。加熱手段は特に制限されないが、通常はオートクレーブやマイクロ波を使用して加熱するのが製造効率の面で望ましい。例えば、セルロースとして市販の微結晶セルロースを、溶媒としてチオシアン酸カルシウムの飽和水溶液を使用した場合、９５℃では約１分間の加熱でセルロースを溶解することができる。
次に、ゲル化したセルロースゲルから、セルロースの溶媒成分を洗浄して除去する。この溶媒がチオシアン酸塩の場合には、セルロースゲルの洗浄に用いる洗浄溶媒は、チオシアン酸塩を溶解するものであればよく、水や極性有機溶媒が挙げられる。このような洗浄溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトンの群から選ばれる１種または２種以上の混合物を用いるのが望ましい。ここで使う水は超純水、蒸留水、脱イオン水等精製水が使用されるが、水道水でもよい。洗浄方法は、特に制限されないが、流水中に浸漬したり、洗浄水を入れた容器中に浸漬し、洗浄水を適宜交換する方法などによって行なう。洗浄に際して電気透析を使用することが洗浄効率の面から望ましい。また、セルロースゲルの洗浄度は、洗浄液の電気伝導度を測定することによって確認することができる。
得られるセルロースゲルの結晶化度は５〜７０％であり、特に３０〜５０％であるのが望ましい。また、セルロースゲルに用いるセルロースの分子量は１０，０００〜２，０００，０００であり、１０，０００〜１００，０００のものが好ましい。
このようにして得られたセルロースゲルは、図１および図２に示すようにセルロースを骨格部分とし、ゲル中のセルロース濃度が０．０１％以上の非常に大きい空隙を有する多孔質のセルロースゲル構造体である。このような多孔質のセルロースゲル構造体の空隙率は５０％以上であり、更には空隙率が８０〜９９．９９％のものを用いることがより好ましい。このようなセルロースゲルに様々な栄養素成分を含んだ培地を接触させると、この培地が固体のセルロースゲルの内部の空隙部分に効率よく浸透して栄養素成分を取り込み、固体培地を形成することができる。
本発明のセルロースゲル固体培地は、従来の寒天培地に用いられる種々の培地がそのまま使用することができる。例えば、天然培地としては、肉汁、ペプトン、酵母エキス、麦芽エキス、血清などの天然物を主成分として含む天然培地や、市販の合成培地等を使用することができる。これらの培地を前記セルロースゲルに接触させることによって、これらの栄養素を含んだセルロースゲル固体培地とすることができる。
本発明のセルロースゲル固体培地は、その形状は特に制限されず、平板、斜面、高層培地などとして用いることができる。
得られた本発明のセルロースゲル固体培地は、低い温度からかなり高温まで、また広いｐＨ範囲にわたってその性質が安定しており、高い温度に加熱しても軟化したり溶解することがなく、安定してその形状を保持し、かつ保水性も良好で乾燥しにくく、優れた固体培地として使用することができる。具体的には−２０℃から２５０℃の温度範囲で使用することが可能であるが、０℃〜１５０℃の温度範囲での使用が好ましい。また、本発明のセルロースゲル固体培地は、ｐＨが１〜１４という広い範囲で安定して使用することができるが、ｐＨが２〜１２の範囲での使用が好ましい。さらに、本発明のセルロースゲル固体培地は、浸透させる培地の塩濃度には影響されず安定にその形状を保持しながら、任意の濃度の塩類を吸収して培地として使用することができる。
かくして製造されたセルロースゲルを用いた本発明の固体培地は、温度やｐＨについて幅広い培養条件下で使用可能であり、多くの種類の微生物や細胞の培養などの用途に幅広く使用することができる。
この本発明のセルロースゲルを用いた固体培地上で培養するのに適した微生物としては、例えば、セルラーゼ産生菌、キシラナーゼ産生菌、キチナーゼ産生菌、アミラーゼ産生菌、マンナナーゼ産生菌、マンノシダーゼ産生菌、アガラーゼ産生菌、プルラナーゼ産生菌、グルカナーゼ産生菌、ペクチナーゼ産生菌、ガラクトシダーゼ産生菌、アルギナーゼ産生菌、シクロデキストリン合成酵素産生菌、プロテアーゼ産生菌、リパーゼ産生菌、カタラーゼ産生菌、ポリアミンオキシダーゼ産生菌、ＲＮａｓｅ産生菌、ＤＮａｓｅ産生菌、ＤＮＡポリメラーゼ産生菌などが挙げられる。
また、本発明のセルロースゲルを用いた固体培地の特性を生かして、好熱菌、好冷菌、好アルカリ性菌、好酸性菌、好塩菌、好圧菌、有機溶媒耐性菌などの極限環境微生物を効率よく培養することができる。例えば、８０℃を超える高温で生育する超好熱菌や、ｐＨが２以下のような高酸性で生育する好酸性菌あるいはｐＨが１２以上の高アルカリ性で生育する好アルカリ性菌のような極限環境条件での微生物の培養に有用に使用することができる。
次に、本発明を実施例によって更に詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、実施例中で「％」は特に異なる注記をしない限り質量基準である。
以下の実施例において、微生物の培養に用いた各培地は下記のようにして調製したものを用いた。
（Ａ）ＬＢ培地（ｐＨ７）：
トリプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、塩化ナトリウム１０ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、これを水酸化ナトリウムにてｐＨを７に調整し、加熱滅菌して調製した。
（Ｂ）ＬＢ培地（ｐＨ２）：
トリプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、塩化ナトリウム１０ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、これを硫酸にてｐＨを２に調整し、加熱滅菌して調製した。
（Ｃ）ＬＢ培地（ｐＨ４．５）：
トリプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、塩化ナトリウム１０ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、これを硫酸にてｐＨを４．５に調整し、加熱滅菌して調製した。
（Ｄ）ＬＢ培地（ｐＨ９．５）：
トリプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、塩化ナトリウム１０ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、これを水酸化ナトリウムにてｐＨを９．５に調整し、加熱滅菌して調製した。
（Ｅ）ＬＢ培地（ｐＨ１２）：
トリプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、塩化ナトリウム１０ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、これを水酸化ナトリウムにてｐＨを１２に調整し、加熱滅菌して調製した。
（Ｆ）ＴＳＢ培地：
ＴＳＢ（ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅｓｏｙｂｒｏｔｈ）の３０ｇを１リットルの蒸留水に溶解した後、加熱滅菌して調製した。
（Ｇ）ＴＳＢ／炭酸ナトリウム培地：
ＴＳＢ（ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅｓｏｙｂｒｏｔｈ）の３０ｇと、別途滅菌した炭酸ナトリウム５ｇ（対蒸留水０．５％）を１リットルの蒸留水に溶解した後、加熱滅菌して調製した。
（Ｈ）ＴＳＢ培地（ｐＨ５．６）：
ＴＳＢ（ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅｓｏｙｂｒｏｔｈ）の３０ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、加熱滅菌した後、塩酸にてｐＨを５．６に調整して調製した。
（Ｉ）ＹＰＤ培地：
酵母エキス１０ｇ、バクトペプトン２０ｇ、グルコース２０ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、加熱滅菌して調製した。
（Ｊ）ＨＯＲＩＫＯＳＨＩ−ＩＩ培地：
可溶性でんぷん１０ｇ、ポリペプトン５ｇ、酵母エキス５ｇ、リン酸水素二カリウム１ｇ、硫酸マグネシウム七水和物０．２ｇを０．８ｍＬの蒸留水に溶解した後、水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ７．５に調整した。別途１０％炭酸水素ナトリウム水溶液を０．２リットル調製した。これらを加熱滅菌した後、混合して調製した。
（Ｋ）ＢＡ培地：
酵母エキス１ｇ、硫酸アンモニウム０．２ｇ、硫酸マグネシウム七水和物０．５ｇ、塩化カルシウム二水和物０．２５ｇ、およびリン酸二水素カリウム０．６ｇを０．５リットルの蒸留水に溶解後、ｐＨを硫酸で３に調整した。グルコース１ｇを０．５リットルの蒸留水に溶解した。これらを加熱滅菌した後、混合し１リットルとした。
（Ｌ）ＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳ培地：
酵母エキス１ｇ、硫酸アンモニウ厶１．３ｇ、リン酸二水素カリウム０．２８ｇ、硫酸マグネシウム七水和物０．２５ｔｇ、塩化カルシウム二水和物０．０７ｇ、塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物０．０２ｇ、塩化マンガン四水和物１．８ｍｇ、四ホウ酸ナトリウム４．５ｍｇ、硫酸亜鉛七水和物０．２２ｍｇ、塩化銅（ＩＩ）二水和物０．０５ｍｇ、モリブテン酸ナトリウム０．０３ｍｇ、酸化硫酸バナジウム（ＩＶ）二水和物０．０３ｍｇ、塩化コバルト（ＩＩ）六水和物０．０１ｍｇを１リットルの蒸留水に溶解した後、ｐＨを硫酸でｐＨ２に調整し、濾過滅菌して調製した。
（Ｍ）Ｎｕｔｒｉｅｎｔ培地（ｐＨ７）：
Ｎｕｔｒｉｅｎｔｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ製）の８ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、加熱滅菌して調製した。
（Ｎ）Ｎｕｔｒｉｅｎｔ培地（ｐＨ２）：
Ｎｕｔｒｉｅｎｔｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ製）の８ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、加熱滅菌後硫酸を用いてｐＨ２に調整したものを用いた。
（Ｏ）Ｎｕｔｒｉｅｎｔ培地（ｐＨ９．５）：
Ｎｕｔｒｉｅｎｔｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ製）の８ｇを１リットルの蒸留水に溶解し加熱滅菌後、別途滅菌した１０％炭酸ナトリウム水溶液と１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ９．５に調整した後、１リットルにメスアップした。
（Ｐ）Ｎｕｔｒｉｅｎｔ培地（ｐＨ１２）：
Ｎｕｔｒｉｅｎｔｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ製）の８ｇを１リットルの蒸留水に溶解し加熱滅菌後、別途滅菌した１０％炭酸ナトリウム水溶液と１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ１２に調整した後、１リットルにメスアップした。
（Ｑ）ＳＣＤ培地（ｐＨ７）：
カゼイン製ペプトン１５ｇ、大豆製ペプトン５ｇ、塩化ナトリウム５ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、加熱滅菌して用いた。（ｐＨ未調整でｐＨ６．９）
（Ｒ）ＳＣＤ培地（ｐＨ２）：
カゼイン製ペプトン１５ｇ、大豆製ペプトン５ｇ、塩化ナトリウム５ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、加熱滅菌後硫酸を用いてｐＨ２に調整したものを用いた。
（Ｓ）ＳＣＤ培地（ｐＨ４．５）：
カゼイン製ペプトン１５ｇ、大豆製ペプトン５ｇ、塩化ナトリウム５ｇを１リットルの蒸留水に溶解し、加熱滅菌後硫酸を用いてｐＨ４．５に調整したものを用いた。
（Ｔ）ＳＣＤ培地（ｐＨ１２）
カゼイン製ペプトン１５ｇ、大豆製ペプトン５ｇ、塩化ナトリウム５ｇを０．８リットルの蒸留水に溶解し、加熱滅菌後、別途滅菌した１０％炭酸ナトリウム水溶液と１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ１２調整した後、１リットルにメスアップした。
（Ｕ）ＴＭ培地：
硫酸０．５ミリリットル、硫酸マンガン（ＩＩ）五水和物２．２ｇ、硫酸亜鉛七水和物０．５ｇ、ホウ酸０．５ｇ、硫化銅０．０１６ｇ、モリブテン（ＩＶ）酸二ナトリウム二水和物０．０２５ｇ、塩化コバルト（ＩＩ）六水和物０．０４６ｇを蒸留水１リットルで溶解し、Ｎｉｔｓｃｈ’ｓｔｒａｃｅｅｌｅｍｅｎｔｓとした。
ニトリロ三酢酸１ｇ、硫酸カルシウム二水和物０．６ｇ、硫酸マグネシウム七水和物１ｇ、塩化ナトリウム０．０８ｇ、硝酸カリウム１．０３ｇ、硝酸ナトリウム６．８９ｇ、リン酸水素二ナトリウム１．１１ｇ、０．０３％塩化鉄（ＩＩＩ）水溶液１０ｍＬ、Ｎｉｔｓｃｈ’ｓｔｒａｃｅｅｌｅｍｅｎｔｓ１０ｍＬを１リットルの蒸留水に溶解した後、水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨを８．２に調整して調製し、Ｃａｓｔｅｎｈｏｌｚｂａｓａｌｓａｌｔｓｏｌｕｔｉｏｎとした。
ポリペプトン４ｇ、酵母エキス２ｇ、塩化ナトリウム１ｇ、Ｃａｓｔｅｎｈｏｌｚｂａｓａｌｓａｌｔｓｏｌｕｔｉｏｎ１０ｍＬを加え、１リットルの蒸留水に溶解した後、水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨ７．２に調整後、加熱滅菌して調製した。

（ｉ）セルロースゲルの調製
結晶性セルロース（フナセル、フナコシ製）を、チオシアン酸カルシウム四水和物（和光純薬製）の飽和水溶液（５９％）に３％の濃度になるように加え、室温で１時間撹拌して、セルロース分散液を得た。セルロース分散液２０ｍＬをガラス製シャーレ（外径９０ｍｍ、深さ１７ｍｍ）に分注した後、これをオートクレーブ（トミー精工製、ＫＳ−２４３）内に設置して１２０℃で１分間加熱し、セルロースを加熱溶解した。このセルロース溶液を一晩室温で放冷し、固化させた。次いで、メタノール、続いて流水で固化したセルロースのチオシアン酸カルシウムを洗浄後、蒸留水５Ｌを含む水槽中で、軽く撹拌しながら洗浄を続けた。１日に２度の頻度で水を交換しながら、洗浄液の電気伝導度が５μＳ／ｃｍ以下になった時点で洗浄を終了し、セルロースゲルを得た。
図１および図２に、このようにして得たセルロースゲルの走査型電子顕微鏡写真を示す。図１が１０，０００倍、図２が１００，０００倍の写真であり、これからこのセルロースゲルがセルロースを骨格部分とした網目構造の、大きな空隙を有する多孔質の構造体であることがわかった。
このセルロースゲルは、オートクレーブ内で１２０℃で、９時間の間加熱滅菌してもその形状に軟化や溶融等の変化は全く見られず、優れた熱安定性を有することがわかった。
比較のために、寒天を培地固化成分として用いた固体培地で同様の加熱試験を行なったところ、オートクレーブで１２０℃、１５分間の加熱滅菌によって固体培地が溶解した。また、同様にジェランガムを培地固化成分として用いた固体培地では、オートクレーブで１２０℃、１５分間の加熱滅菌によって溶解した。
（ｉｉ）セルロース固体培地の調製
上記の（ｉ）で得られたセルロースゲルを加熱滅菌した後、２倍濃度のＬＢ培地（ｐＨ７）の２０ｍＬを重層し、軽く撹拌しながら４時間放置した後、過剰の培地を除去して、ＬＢ（ｐＨ７）セルロース培地を得た。同様にしてＬＢ培地（ｐＨ７）の代わりに、ＬＢ培地（ｐＨ２）、ＬＢ（ｐＨ４．５）培地、ＬＢ（ｐＨ９．５）培地、ＬＢ培地（ｐＨ１２）、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ７）培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ２）培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ１２）培地、ＳＣＤ（ｐＨ４．５）培地、ＳＣＤ（ｐＨ７）培地、ＳＣＤ（ｐＨ２）培地、ＳＣＤ（ｐＨ１２）培地を用いて、それぞれＬＢ（ｐＨ２）セルロース培地、ＬＢ（ｐＨ４．５）セルロース培地、ＬＢ（ｐＨ９．５）セルロース培地、ＬＢ（ｐＨ１２）セルロース培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ７）セルロース培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ２）セルロース培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ１２）セルロース培地、ＳＣＤ（ｐＨ７）セルロース培地、ＳＣＤ（ｐＨ２）セルロース培地、ＳＣＤ（ｐＨ４．５）セルロース培地、ＳＣＤ（ｐＨ１２）セルロース培地を得た。
このようにして得た種々のセルロース培地をそれぞれ含むシャーレをビニールテープで密封し、それぞれを６０℃、７０℃、８０℃に保ったインキュベーター中に放置した。放置時間の経過とともにセルロース固体培地の状態を目視観察した。その結果は、表１に示すように、これらの条件下では７日が経過しても、セルロース固体培地はすべての温度とｐＨの条件で軟化・溶解することなく安定にその状態と形状を保持しており、固体培養に使用可能であった。
比較例１：
上記実施例１の（ｉｉ）と同様にして、培地固化成分としてセルロースゲルの代わりに寒天を用いて、ＬＢ（ｐＨ７）寒天培地、ＬＢ（ｐＨ２）寒天培地、ＬＢ（ｐＨ４．５）寒天培地、ＬＢ（ｐＨ９．５）寒天培地、ＬＢ（ｐＨ１２）寒天培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ７）寒天培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ２）寒天培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ９．５）寒天培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ１２）寒天培地、ＳＣＤ（ｐＨ７）寒天培地、ＳＣＤ（ｐＨ２）寒天培地、ＳＣＤ（ｐＨ４．５）寒天培地、ＳＣＤ（ｐＨ１２）寒天培地を調製した。これらの寒天培地を含むシャーレをビニールテープで密封し、６０℃、７０℃、８０℃に保ったインキュベーター中に放置した。放置時間の経過とともに寒天培地の状態を目視観察した。その結果、ＬＢ（ｐＨ２）寒天培地、ＬＢ（ｐＨ４．５）寒天培地、ＬＢ（ｐＨ９．５）寒天培地、ＬＢ（ｐＨ１２）寒天培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ７）寒天培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ２）寒天培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ９．５）寒天培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ１２）寒天培地、ＳＣＤ（ｐＨ２）寒天培地、ＳＣＤ（ｐＨ４．５）寒天培地、ＳＣＤ（ｐＨ１２）寒天培地は７０℃で、また８０℃ではすべての培地が軟化・溶解し、固体培養には使用できる状態ではなかった。
比較例２：
上記実施例１の（ｉｉ）と同様にして、培地固化成分としてセルロースゲルの代わりにジェランガムを用いて、ＬＢ（ｐＨ７）ジェランガム培地、ＬＢ（ｐＨ２）ジェランガム培地、ＬＢ（ｐＨ４．５）ジェランガム培地、ＬＢ（ｐＨ９．５）ジェランガム培地、ＬＢ（ｐＨ１２）ジェランガム培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ７）ジェランガム培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ２）ジェランガム培地を、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ１２）ジェランガム培地、ＳＣＤ（ｐＨ７）ジェランガム培地、ＳＣＤ（ｐＨ２）ジェランガム培地、ＳＣＤ（ｐＨ４．５）ジェランガム培地、ＳＣＤ（ｐＨ１２）ジェランガム培地を調製した。これらの培地を含むシャーレをビニールテープで密封し、６０℃、７０℃、８０℃に保ったインキュベーター中に放置した。放置時間の経過とともにジェランガム培地の状態を目視観察した。その結果、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ７）ジェランガム培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ２）ジェランガム培地、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ（ｐＨ１２）ジェランガム培地は６０℃で、ＳＣＤ（ｐＨ２）ジェランガム培地は７０℃で、また８０℃ではすべての培地が軟化・溶解し、固体培養には使用できる状態ではなかった。

（ｉｉｉ）セルロース固体培地による大腸菌の培養
実施例１と同様にしてＬＢ（ｐＨ７）セルロース培地を調製した。大腸菌Ｗ３１１０株（ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＷ３１１０）は、あらかじめＬＢ培地中、３７℃でＡ_６００が１〜１．５になるまで前培養を行った。この培養液を菌体濃度が１×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように０．９％生理食塩水で希釈し、その０．１ｍＬをＬＢ（ｐＨ７）セルロース培地上にスプレッダーを用いて植菌し、３７℃に保ったインキュベーター中で、１６〜１８時間培養した後、コロニー数をカウントした。比較の対照として、ＬＢ（ｐＨ７）寒天培地上でも培養を行い、ＬＢ（ｐＨ７）セルロース培地上でのコロニー数と比較した。その結果、大腸菌のコロニー数は、ＬＢ（ｐＨ７）セルロース培地、ＬＢ（ｐＨ７）寒天培地ともに１００個前後となり、大腸菌は、ＬＢ（ｐＨ７）セルロース培地上でも、ＬＢ（ｐＨ７）寒天培地上と同等の生育を示した。

（ｉｖ）セルロース固体培地による枯草菌の培養
実施例１と同様にしてＬＢ（ｐＨ７）セルロース培地を調製した。枯草菌１６８株（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ１６８）は、あらかじめＬＢ培地中、３７℃でＡ_６００が１〜１．５になるまで前培養を行った。この培養液を菌体濃度が１×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように０．９％生理食塩水で希釈し、その０．１ｍＬをＬＢ（ｐＨ７）セルロース培地上にスプレッダーを用いて植菌し、３７℃に保ったインキュベーター中で、１６〜１８時間培養した後、コロニー数をカウントした。比較の対照として、ＬＢ（ｐＨ７）寒天培地上でも培養を行い、ＬＢ（ｐＨ７）セルロース培地上でのコロニー数と比較した。その結果、枯草菌のコロニー数は、ＬＢ（ｐＨ７）セルロース培地、ＬＢ（ｐＨ７）寒天培地ともに１２０〜１５０個となり、枯草菌は、ＬＢ（ｐＨ７）セルロース培地上でも、ＬＢ（ｐＨ７）寒天培地上と同等の生育を示した。

（ｖ）セルロース固体培地による酵母菌の培養
ＬＢ（ｐＨ７）培地の代わりにＹＰＤ培地を用い、実施例１と同様にしてＹＰＤセルロース培地を調製した。サッカロミセスセレビシーＹＰＨ４９９株（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＹＰＨ４９９）は、あらかじめＹＰＤ液体培地中、２５℃でＡ_６００が３になるまで前培養を行った。この培養液を菌体濃度が１×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように０．９％生理食塩水で希釈し、その０．１ｍＬをＹＰＤセルロース培地上にスプレッダーを用いて植菌し、２５℃に保ったインキュベーター中で、２日間培養した後、コロニー数をカウントした。比較の対照として、ＹＰＤ寒天培地上でも培養を行い、ＹＰＤセルロース培地上でのコロニー数と比較した。酵母菌のコロニー数は、ＹＰＤセルロース培地上で１４０個前後、ＹＰＤ寒天培地では１３０個前後となり、本酵母はＹＰＤセルロース培地上でも、ＹＰＤ寒天培地上と同等の生育を示した。

（ｖｉ）セルロース固体培地による好アルカリ性バチルス属細菌の培養
ＬＢ（ｐＨ７）培地の代わりにＨＯＲＩＫＯＳＨＩ−ＩＩ培地を用い、実施例１と同様にしてＨＯＲＩＫＯＳＨＩ−ＩＩセルロース培地を調製した。好アルカリ性バチルスハロデュランスＣ−１２５株（ＢａｃｉｌｌｕｓｈａｌｏｄｕｒａｎｓＣ−１２５）は、あらかじめＨＯＲＩＫＯＳＨＩ−ＩＩ寒天培地で前培養を行った。コロニーを数個集め、１×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように１０ｍＭ硫酸マグネシウム水溶液で希釈し、その０．１ｍＬをＨＯＲＩＫＯＳＨＩ−ＩＩセルロース培地上にスプレッダーを用いて植菌し、３７℃に保ったインキュベーター中で、１６１８時間培養した後、コロニー数をカウントした。比較の対照として、ＨＯＲＩＫＯＳＨＩ−ＩＩ寒天培地上でも培養を行い、ＨＯＲＩＫＯＳＨＩ−ＩＩセルロース培地上でのコロニー数と比較した。ＨＯＲＩＫＯＳＨＩ−ＩＩセルロース培地でのコロニー数は１９１個であり、ＨＯＲＩＫＯＳＨＩ−ＩＩ寒天培地でのコロニー数は１８６個であり、ＢａｃｉｌｌｕｓｈａｌｏｄｕｒａｎｓＣ−１２５は、ＨＯＲＩＫＯＳＨＩ−ＩＩセルロース培地上でも、ＨＯＲＩＫＯＳＨＩ−ＩＩ寒天培地上と同等の生育を示した。
また、ＬＢ（ｐＨ７）培地の代わりにＴＳＢ／炭酸ナトリウム培地を用い、実施例１と同様にしてＴＳＢ／炭酸ナトリウムセルロース培地を調製した。好アルカリ性バチルスアガラドハランスＪＡＭＢ−６０２株（ＢａｃｉｌｌｕｓａｇａｒａｄｈａｅｒａｎｓＪＡＭＢ−６０２）は、あらかじめＴＳＢ／炭酸ナトリウム培地中で、３７℃でＡ_６００が１〜１．５になるまで前培養を行った。この培養液を、菌体濃度が１×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように０．９％生理食塩水で希釈し、その０．１ｍＬをＴＳＢ／炭酸ナトリウムセルロース培地上にスプレッダーを用いて植菌し、３７℃に保ったインキュベーター中で、１６〜１８時間培養した後、コロニー数をカウントした。比較の対照として、ＴＳＢ／炭酸ナトリウム寒天培地上でも培養を行い、ＴＳＢ／炭酸ナトリウムセルロース培地上での生育と比較した。ＢａｃｉｌｌｕｓａｇａｒａｄｈａｅｒａｎｓＪＡＭＢ−６０２は、ＴＳＢ／炭酸ナトリウムセルロース培地上でも、ＴＳＢ／炭酸ナトリウム寒天培地上と同等の生育を示し、約２００個のコロニーを形成した。

（ｖｉｉ）セルロース固体培地による担子菌の培養
ＬＢ（ｐＨ７）培地の代わりにＴＳＢ（ｐＨ５．６）培地を用い、実施例１と同様にしてＴＳＢ（ｐＨ５．６）セルロース培地を調製した。プレート中央部に、寒天培地上で前培養したイルペックスラクテウスＮＢＲＣ５３６７株（ＩｒｐｅｘｌａｃｔｅｕｓＮＢＲＣ５３６７）を植菌し、室温で８日間培養した。比較の対照として、ＴＳＢ（ｐＨ５．６）寒天培地上でも培養を行い、ＴＳＢ（ｐＨ５．６）セルロース培地上での生育と比較した。ＩｒｐｅｘｌａｃｔｅｕｓＮＢＲＣ５３６７は、ＴＳＢ（ｐＨ５．６）セルロース培地上でも、ＴＳＢ（ｐＨ５．６）寒天培地上と同等の生育を示した。
また、ＴＳＢ（ｐＨ５．６）セルロース培地では、ＩｒｐｅｘｌａｃｔｅｕｓＮＢＲＣ５３６７が産生するセルラーゼによって、セルロースが分解し、溶班（ハロー）を形成した。セルロース培地がセルラーゼ産生菌のスクリーニングに利用可能であることがわかった。

（ｖｉｉｉ）セルロース固体培地による好熱好酸性菌の培養
ＬＢ（ｐＨ７）培地の代わりにＢＡ培地を用い、実施例１と同様にしてＢＡセルロース培地を調製した。好熱好酸性アリシクロバチルスアシドカルダリスＪＣＭ５２６０株（ＡｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓＪＣＭ５２６０）は、あらかじめＢＡ培地中、７０℃でＡ_６００が０．５になるまで前培養を行った。この培養液０．１ｍＬをＢＡセルロース培地上にスプレッダーを用いて植菌し、７０℃で１８〜２４時間培養した。比較の対照として、ＢＡ寒天培地、ＢＡジェランガム培地上でも培養を行い、ＢＡセルロース培地上での生育と比較した。ＡｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓＪＣＭ５２６０は、ＢＡセルロース培地、ＢＡジェランガム倍地上ではコロニーを形成したが、ＢＡ寒天培地ではコロニー形成が見られなかった。
またＬＢ（ｐＨ７）培地の代わりにＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳ培地を用い、実施例１と同様にしてＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳセルロース培地を調製した。好熱好酸性サルホロバスアシドカルダリスＤＳＭ６３９株（ＳｕｌｆｏｌｏｂｕｓａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓＤＳＭ６３９）は、あらかじめＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳ培地中、７０℃でＡ_６００が０．８になるまで前培養を行った。この培養液を１０^３倍にＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳ培地で希釈し、その０．１ｍＬをＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳセルロース培地上にスプレッダーを用いて植菌し、７０℃で４日間培養した。比較の対照として、ＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳ寒天培地、ＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳジェランガム培地上でも培養を行い、ＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳセルロース培地上での生育と比較した。ＳｕｌｆｏｌｏｂｕｓａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓＤＳＭ６３９は、ＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳセルロース培地、ＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳジェランガム培地上ではコロニーを形成したが、ＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳ寒天培地ではコロニー形成が見られなかった。また８０℃でも６日間培養を行ったところ、ＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳセルロース培地上で５〜６個、ＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳジェランガム培地上で１個のコロニーを形成し、ＳＵＬＦＯＬＯＢＵＳセルロース培地上で、より良好な生育を示した。

（ｉｘ）セルロース固体培地による好熱菌の培養
ＬＢ（ｐＨ７）培地の代わりにＴＭ培地を用い、実施例１と同様にして、ＴＭセルロース培地を調製した。好熱菌サーマスサーモフィルスＨＢ８（ＴｈｅｒｍｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓＨＢ８）は、あらかじめＴＭ培地を用いて７０℃でＡ_６００が１〜１．５になるまで前培養を行った。この培養液を１０^５倍まで０．９％塩化ナトリウム水溶液で希釈し、その０．１ｍＬをＴＭセルロース培地上にスプレッダーを用いて植菌し、７０℃に保ったインキュベーター中で、１７時間培養した。比較の対照として、ＴＭ寒天培地でも培養を行い、ＴＭセルロース培地上での生育と比較した。ＴＭジェランガム培地については、室温で培地が固まらなかった。ＴＭセルロース培地、ＴＭ寒天培地上でコロニーを形成したが、ＴＭ寒天培地表面の軟化のため、コロニーの形状がまちまちであった。ＴＭセルロース培地上のコロニーは均一の形状であった。また８０℃でも２４時間培養を行ったところ、ＴＭセルロース培地上ではコロニーを形成したが、ＴＭ寒天培地は完全に溶解した。

本発明のセルロースゲルを使用する固体培地は、従来の代表的な固体培地である寒天培地では困難であった高い温度や広いｐＨ範囲、あるいは種々の塩濃度でも、軟化したり溶解することなく、その性質と形状を安定して保持することができる。したがって、さまざまな微生物の固体培養が可能となり、有用な酵素や化学物質を産生する新規な微生物を単離したり、生産するために利用することができる。

Claims

培地固化成分として、分子量１０，０００〜２，０００，０００のセルロースを０．０１〜２０質量％の濃度でチオシアン酸塩水溶液中に添加後、加熱・溶解し、次いで冷却・固化して得られる多孔質ゲル状材料であるセルロースゲルを含む微生物の培養のための固体培地。
セルロースゲルの結晶化度が５〜７０％であることを特徴とする、請求項第１項記載の固体培地。
セルロースゲルが、セルロースを骨格部分とし、セルロース濃度が０．０１〜２０質量％である多孔質のセルロースゲル構造体であることを特徴とする、請求項第１項又は第２項に記載の固体培地。
セルロースゲルが、空隙率が５０％以上の多孔質ゲル状構造体であることを特徴とする、請求項第１項ないし第３項のいずれかに記載の固体培地。
チオシアン酸塩水溶液に０．０１〜２０質量％の濃度で分散した分子量１０，０００〜２，０００，０００のセルロースを、加熱によって溶解又は膨潤させ、次いで冷却して固化させ、溶媒成分を除去した後、これに栄養素成分を浸透させることを特徴とする、微生物の培養のためのセルロースゲル固体培地の製造方法。
チオシアン酸塩水溶液がチオシアン酸のアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩の水溶液であることを特徴とする、請求項第５項に記載のセルロースゲル固体培地の製造方法。
チオシアン酸塩水溶液がチオシアン酸カルシウムの水溶液であることを特徴とする、請求項第５項又は第６項に記載のセルロースゲル固体培地の製造方法。
チオシアン酸塩水溶液がチオシアン酸カルシウムの飽和水溶液で、加熱温度が７０〜２００℃であることを特徴とする、請求項第５項ないし第７項のいずれかに記載のセルロースゲル固体培地の製造方法。
培地固化成分として分子量１０，０００〜２，０００，０００のセルロースを０．０１〜２０質量％の濃度でチオシアン酸塩水溶液に添加後、加熱・溶解し、次いで冷却・固化して得られる多孔質ゲル状材料であるセルロースゲルを用いた微生物の培養のための固体培地の表面で微生物を培養することを特徴とする、微生物の培養方法。
セルロースゲルを用いた固体培地で培養する微生物が極限環境微生物であることを特徴とする、請求項第９項に記載の微生物の培養方法。