FI111011B - Mikro-organismien kiinteä kasvualusta, sen valmistus ja käyttö - Google Patents
Mikro-organismien kiinteä kasvualusta, sen valmistus ja käyttö Download PDFInfo
- Publication number
- FI111011B FI111011B FI970163A FI970163A FI111011B FI 111011 B FI111011 B FI 111011B FI 970163 A FI970163 A FI 970163A FI 970163 A FI970163 A FI 970163A FI 111011 B FI111011 B FI 111011B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- hydrogel
- medium
- cellulose ethers
- cellulose
- gel
- Prior art date
Links
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims description 26
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 title description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 49
- 229920003086 cellulose ether Polymers 0.000 claims description 48
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 15
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 13
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 12
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 10
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims description 10
- -1 hydroxypropyl groups Chemical group 0.000 claims description 10
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 8
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 8
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 claims description 8
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- HGINCPLSRVDWNT-UHFFFAOYSA-N Acrolein Chemical compound C=CC=O HGINCPLSRVDWNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 claims description 6
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 6
- 239000012790 adhesive layer Substances 0.000 claims description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 4
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 claims description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 claims description 4
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 claims description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 4
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 claims description 4
- 229920000536 2-Acrylamido-2-methylpropane sulfonic acid Polymers 0.000 claims description 3
- XHZPRMZZQOIPDS-UHFFFAOYSA-N 2-Methyl-2-[(1-oxo-2-propenyl)amino]-1-propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(C)(C)NC(=O)C=C XHZPRMZZQOIPDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 3
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 claims description 3
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 claims description 3
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 claims description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 3
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 claims description 3
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 claims description 3
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 claims description 3
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 claims description 3
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 claims description 2
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 125000006289 hydroxybenzyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 claims description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 claims description 2
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 2
- 238000009736 wetting Methods 0.000 claims description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N glyoxal Chemical compound O=CC=O LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N methacrylamide Chemical compound CC(=C)C(N)=O FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- FPBFWDHYZMVTJD-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-2-(prop-2-enoylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)(C)NC(=O)C=C FPBFWDHYZMVTJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229920000877 Melamine resin Polymers 0.000 claims 1
- 229920001807 Urea-formaldehyde Polymers 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 claims 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical class [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 claims 1
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 claims 1
- WVJOGYWFVNTSAU-UHFFFAOYSA-N dimethylol ethylene urea Chemical compound OCN1CCN(CO)C1=O WVJOGYWFVNTSAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims 1
- IVJISJACKSSFGE-UHFFFAOYSA-N formaldehyde;1,3,5-triazine-2,4,6-triamine Chemical compound O=C.NC1=NC(N)=NC(N)=N1 IVJISJACKSSFGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940015043 glyoxal Drugs 0.000 claims 1
- 125000005395 methacrylic acid group Chemical group 0.000 claims 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 claims 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ODGAOXROABLFNM-UHFFFAOYSA-N polynoxylin Chemical compound O=C.NC(N)=O ODGAOXROABLFNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- KUKFKAPJCRZILJ-UHFFFAOYSA-N prop-2-enenitrile;prop-2-enoic acid Chemical compound C=CC#N.OC(=O)C=C KUKFKAPJCRZILJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 35
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 21
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 13
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 8
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 7
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 5
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 4
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 4
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 3
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 3
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 238000010559 graft polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 3
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DXPPIEDUBFUSEZ-UHFFFAOYSA-N 6-methylheptyl prop-2-enoate Chemical compound CC(C)CCCCCOC(=O)C=C DXPPIEDUBFUSEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical class C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004159 Potassium persulphate Substances 0.000 description 2
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- NUHCTOLBWMJMLX-UHFFFAOYSA-N bromothymol blue Chemical compound BrC1=C(O)C(C(C)C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C(=C(Br)C(O)=C(C(C)C)C=2)C)=C1C NUHCTOLBWMJMLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- UIWXSTHGICQLQT-UHFFFAOYSA-N ethenyl propanoate Chemical compound CCC(=O)OC=C UIWXSTHGICQLQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002816 microbial assay Methods 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- USHAGKDGDHPEEY-UHFFFAOYSA-L potassium persulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O USHAGKDGDHPEEY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000019394 potassium persulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 2
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 229920002126 Acrylic acid copolymer Polymers 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 1
- JMEHWNYTJLIYDX-UHFFFAOYSA-N CCCC(CC(C(C)C)S(=O)(=O)O)C(=O)C=C Chemical class CCCC(CC(C(C)C)S(=O)(=O)O)C(=O)C=C JMEHWNYTJLIYDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000017309 Hypericum perforatum Nutrition 0.000 description 1
- 244000141009 Hypericum perforatum Species 0.000 description 1
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOPVAWVHGAWUPS-UHFFFAOYSA-M [2-hydroxy-3-(2-methylprop-2-enoyloxy)propyl]-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC(=C)C(=O)OCC(O)C[N+](C)(C)C LOPVAWVHGAWUPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000005396 acrylic acid ester group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 239000012805 animal sample Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 125000005605 benzo group Chemical group 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012954 diazonium Substances 0.000 description 1
- 150000001989 diazonium salts Chemical class 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229940023064 escherichia coli Drugs 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000002309 gasification Methods 0.000 description 1
- 125000000350 glycoloyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000591 gum Polymers 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- USUBUUXHLGKOHN-UHFFFAOYSA-N methyl 2-methylidenehexanoate Chemical compound CCCCC(=C)C(=O)OC USUBUUXHLGKOHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229920001290 polyvinyl ester Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012966 redox initiator Substances 0.000 description 1
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 1
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 1
- SKMHHHHLLBKNKR-UHFFFAOYSA-M sodium;prop-2-enamide;prop-2-enoate Chemical compound [Na+].NC(=O)C=C.[O-]C(=O)C=C SKMHHHHLLBKNKR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 1
- RRHXZLALVWBDKH-UHFFFAOYSA-M trimethyl-[2-(2-methylprop-2-enoyloxy)ethyl]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC(=C)C(=O)OCC[N+](C)(C)C RRHXZLALVWBDKH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229920001567 vinyl ester resin Chemical class 0.000 description 1
- 239000004552 water soluble powder Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/22—Processes using, or culture media containing, cellulose or hydrolysates thereof
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S524/00—Synthetic resins or natural rubbers -- part of the class 520 series
- Y10S524/916—Hydrogel compositions
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
111011
Mikro-organismien kiinteä kasvualusta, sen valmistus ja käyttö
Keksinnön kohteena on käyttövalmis mikrobien elatusaine, 5 joka sisältää selluloosaeetteripohjaista hydrogeeliä ja ravinteita. Elatusaine voidaan kuivata kiinteälle pohjal-j le, säilyttää kuivattuna ja kostuttaa käyttöönotettaessa joko suoraan tutkittavalla näytteellä tai vedellä. Elatusainealusta voidaan upottaa tutkittavaan näytelluokseen 10 tai painaa tutkittavaa kosteaa näytepintaa vasten, minkä jälkeen alustaa inkuboidaan sopivassa lämpötilassa, kunnes mikro-organismit ovat kasvaneet visuaalisesti tunnistettaviksi pesäkkeiksi.
15 Infektioita ja kontaminaatiota aiheuttavien mikro-organismien määrän ja lajin määritys on tärkeää valittaessa joko sopivaa hoitomuotoa lääkinnässä tai torjuntamuotoa elintarviketeollisuudessa ja muualla ympäristöhygieniassa. Tätä tarkoitusta varten on kehitetty lukuisia elä-20 tusaineita ja elatusainealustoja eri bakteerien ja sienten osoittamiseksi.
Sairauksia diagnostisoivassa mikrobiologiassa pyritään määrittämään ja tunnistamaan infektioita aiheuttavat mik-25 ro-organismit, mm. bakteerit (sekä aerobit että anaerobit bakteerit) ja sienet (hiivat ja homeet), mahdollisimman tarkkaan erilaisista ihmis- ja eläinperäisistä näytteistä (esim. virtsa, veri, seerumi, plasma, aivo-selkäydinneste, pleuraneste, askitesneste, märkä, haavaerite, yskös, 30 uloste ja nielunäyte), jotta voitaisiin valita tehokas parantava hoitomuoto. Mikrobeista joudutaan määrittämään usein myös herkkyys eri antimikrobilääkkeille. Tähänkin käytetään erilaisia elatusaineita ja elatusainealustoja.
ψ 4 35 Mikro-organismit aiheuttavat ongelmia myös useilla eri teollisuuden alueilla. Jos ne pääsevät kerääntymään prosesseihin, niistä aiheutuvat terveysriskit ja saastu-misongelmat tulevat hankaliksi hoitaa. Mikrobit pystyvät # t * 1 111011 2 yleensä tehokkaasti vastustamaan puhdistusta desinfektio-ja antiseptisten aineiden sekä antibioottien vaikutusta suojaavan, mikrobisolujen ja prosessiliuosten kiinteän materian muodostaman ns. biofilmikerroksen sisällä, jossa 5 ne voivat säilyä hengissä pitkiäkin aikoja.
Useat tuotantoprosessit vaativat korkeaa hygieenistä tasoa, koska lieväkin mikro-organismien kasvusto voi pilata koko tuotteen. Alentunut hygienia aiheuttaa ongelmia var-10 sinkin elintarviketeollisuudessa, terveydenhuollossa, sairaanhoidossa ja vesijärjestelmissä. Muunlaisia ongelmia kuten esim. bakteerien aikaansaamaa limamuodostusta prosessiteollisuuden laitteissa ja putkistoissa voi esiintyä erityisesti puunjalostusteollisuudessa, ja ho-15 meitä voi esiintyä kaikkialla ilmanvaihtokanavissa. Teollisuudessa on todettu, että mikrobit ovat osaltaan myös muiden ongelmien aiheuttajia, kuten esimerkiksi korroosion synnyssä. Mikrobeja ja niiden aiheuttamia ongelmia tavataan muualtakin, kuten esimerkiksi kylpyhuoneen kaa-20 keleistä, saunan lauteilta ja uima-altaista. Sairaaloissa tauteja aiheuttavat mikrobit voivat esim. kolonisoitua ilmanvaihtojärjestelmään ja aiheuttaa näin sairaalainfektioita. Siksi jatkuva hygienian seuranta mikrobipitoi-suuksia määrittämällä onkin käytössä useimmissa tiloissa, 25 joissa on tiedostettava hygienian taso.
Mikro-organismien klassiset viljelymenetelmät perustuvat kasvualustoihin, joissa geeliytyvänä aineena on merilevistä eristetty agar-agar. Elatusainealustat on joko itse 30 valmistettava kuivasta jauheesta työläästi tai ostettava käyttövalmiina. Kaupan olevat käyttövalmiit elatusainealustat ovat valmiina paisuneessa, vettyneessä muodossa. Itsevalmistettujen ja teollisten agar-agaria sisältävien kosteiden elatusainealustojen säilyvyysaika on rajalli-35 nen, koska ne kuivuvat helposti eikä niitä voi kostuttaa uudelleen. Jotta kosteus ja steriiliys säilyisivät mahdollisimman kauan, tällaisia elatusainealustoja on varas- 3 111011 toitava hyvin tiiviissä pakkauksissa, jotka vaativat runsaasti tilaa.
US-patentin 3,046,201 mukaisessa elatusainealustassa käy-5 tetään agar-agarin sijasta silloitettuja polyakryyliami-dihydrogeelejä tai polyakryyliamidin ja gelatiinin, sili-kageelin tai tärkkelyksen seoksia geeliytyvinä aineina. Geeliä ei kuivata eikä sillä ole näytteen nestettä absorboivaa ominaisuutta.
10 US-patentin 3,360,440 mukaisessa menetelmässä valmistetaan kuivageeli sekoittamalla ravinteet selluloosaeette-riin ja lyofilisoimalla seos. Ennen lyofilisointia seokseen voidaan lisätä mikro-organismeja, jolloin saadaan 15 käyttövalmis säilyvä viljelmä. Kuivageeli resuspendoidaan steriilillä vedellä ennen käyttöä mikrobien määritykseen tai, mikäli mikrobeja on lisätty ennen lyofilisointia, mikrobien kasvatusta. Mikrobimäärityksissä näytteen mikrobit imeytyvät geelin sisään ja kasvavat siten morfolo-20 gialtaan eri näköisinä kuin tavallisilla alustoilla, joissa kasvu tapahtuu geelin pinnalla. Tämä vaikeuttaa huomattavasti tulosten luettavuutta ja siten heikentää määritysten luotettavuutta. Lisäksi lyofilisointi menetelmänä on monivaiheinen ja vaatii suhteellisen kalliita 25 laitteistoja.
Mainitun US-patentin 3,360,440 mukaisessa testipakkauksessa vesi ja kuivattu geeli on sisällytetty säiliön eri osiin. Resuspendoinnin jälkeen geeli voidaan siirtää ha-30 lutulle alustalle painamalla säiliön seinämää. Testipak-. kaus on monimutkainen eikä se ole käyttövalmis.
4 * Tämän lisäksi tunnetaan menetelmiä, joissa absorboivaan < kalvoon, jona voidaan käyttää suodatinpaperia tai muuta 35 vastaavaa imukykyistä kantajakerrosta, imeytetään ravinteet ja geeli. Geeli voidaan myös levittää kalvon pinnal-: le tai geelin korvaa bakteereita läpäisemätön kalvo.
4 4 1Π011 Näissä menetelmissä absorboiva kalvo pitää kasvulle tarvittavan kosteuden sisällään. Tällaisia menetelmiä kuvataan patenttijulkaisuissa US 3,881,993, EP 0 374 905, US 3,814,670 ja EP 0 006 192, joita tarkastellaan lähemmin 5 seuraavassa.
US-patentin 3,881,993 mukaisessa menetelmässä absorboivalle alustalle, joka toimii myös tukirakenteena, on imeytetty ravinteet, reagenssit ja geeliytyvä aine ja 10 alusta on kuivattu ali- tai ylipaineessa. Geeliytyvänä aineena käytetään inerttiä kumia, lineaarisia polysakkarideja tai natriumalginaattia. EP-julkaisun 0 374 905 mukaisessa menetelmässä geeliytyvät aineet imeytetään filtteripaperin sisään. Geeliytyvänä aineena käytetään 15 natriumalginaattia. Menetelmän mukaista testialustaa käytetään märkänä. US-patentin 3,814,670 mukainen menetelmä on edellisten kaltainen, poikkeuksena se, että geeliker-ros levitetään absorboivan kalvon pinnalle. Geeliytyvinä aineina voidaan käyttää agaria, gelatiinia, selluloosaku-20 meja, karrageeneja, alginaatteja, albumiineja, polysakka rideja tai polypeptideja. Kasvualusta on kuivattu. EP-julkaisu 0 006 192 kuvaa kuivattua kasvualustaa, jossa elatusainekartongin päällä on muovikalvo, joka on vinyy-liasetaatin tai akryylihappoestereiden homopolymeeri, 25 vinyylipropionaatin ja vinyyliasetaatin, vinyylipropio-naatin ja vinyylikloridin, vinyyliasetaatin ja maleiini-happoestereiden, akryylinitriilin, akryylihappoestereiden ja vinyylipropionaatin tai butadieenin ja styreenin kopo-lymeeri. Avaaja-aineena käytetään polyetyleeniglykoleja, 30 polyetyleenioksideja, polyvinyylipyrrolidonia, polyvinyy-lialkoholeja, osittain saippuoituneita polyvinyylieste-reitä, vinyylipyrrolidonin ja vinyyliestereiden sekapoly-meereja tai selluloosajohdannaisia, kuten hydroksialkyy-liselluloosaa.
Edellä mainittujen menetelmien haittana on, että kasvualustan geeliytyvä ainesosa tarvitsee tukikerroksia pysy- 35 111011 5 äkseen koossa, mikä tekee jo alustojen valmistuksesta hankalaa. Niillä menetelmillä, missä myös geeliytyvä aine imeytetään absorboivan kerroksen sisään, on lisäksi se heikkous, että pinta, jossa mikrobit kasvavat, on epä-5 tasainen, jolloin mikrobit näyttävät katsojasta täysin toisenlaisilta kuin klassisessa osoitusmenetelmässä aga-rin pinnalla.
Tunnetaan myös elatusaineita, joissa geeliytyvät aineet 10 ovat kylmään veteen liukenevia jauheita. Ne kiinnitetään hydrofobiselle alustalle tartuntakerroksen avulla kuten patenteissa US 5,089,413 ja US 4,565,783 sekä WO-patent-tijulkaisussa 93/12218. Lisäksi kasvualusta sisältää usein vielä ilmaa läpäisevän membraanin. Geelillä voidaan 15 päällystää myös hydrofobinen alusta suoraan, jolloin geeli on silloitettu ionisidoksilla lisäämällä geeliin suoloja. Tällaisia kasvualustoja on käytetty patenttien US 5,089,413 ja US 4,565,783 mukaisissa menetelmissä vain sivelyviljelyalustoina. Haittana on, että silloitettaessa 20 suolojen avulla mikrobien kasvu usein estyy.
Patenttien US 5,089,413 ja US 4,565,783 mukaisissa menetelmissä liima-aineina käytetään iso-oktyyliakrylaatin ja akryyliamidin tai akryylihapon kopolymeereja tai 2-25 metyylibutyyliakrylaatin ja akryylihapon kopolymeereja tai silikonikumia. Geeliytyvänä jauheena käytetään al-giniinia, karboksimetyyliselluloosaa, hydroksietyylisel-luloosaa, guarkumia, Johanneksen leipäpuun palkokumia, ksantaanikuraia tai näiden seoksia. WO-patenttijulkaisun 30 93/12218 mukaisessa menetelmässä käytetään tartuntaker- roksena iso-oktyyliakrylaatin ja akryyliamidin tai N-vi- * , nyylipyrrolidonin kopolymeeria. Tartuntakerrokseen kiin nitetään kylmään veteen liukeneva jauhe, joka on superab-4 sorboivan ja geeliytyvän aineen seos. Geeliytyvä aine voi 35 olla alginiini, guarkumi, hydroksimetyyliselluloosa, Johanneksen leipäpuun palkokumi, karboksimetyyliselluloosa, ksantaanikumi tai näiden seos. Superabsorboiva aine on 111011 6 glykolimodifioitu polysakkaridi, tärkkelysnatriumakry-laattiakryyliamidi-graftpolymeeri tai näiden seos. Näissä menetelmissä mikrobit kasvavat geelin sisällä lukuunottamatta sivelyviljelyalustaa. Haittana onkin, että pesäk-5 keiden morfologia ei ole samankaltainen kuin agar-agar-pinnoilla.
Keksinnön tarkoituksena on poistaa edellä mainitut ongelmat ja saada aikaan uusi elatusainealusta mikro-organis-10 mien viljelemiseksi ja tunnistamiseksi.
Keksinnön kohteena oleva hydrogeelielatusaine on erityisen sovelias käytettäväksi mikro-organismien määrittämiseen ihmis- ja eläinperäisistä näytteistä lääketieteel-15 listen diagnoosien vahvistamiseksi ja hoitomuodon valitsemiseksi .
Keksinnön tarkoituksena on myös saada aikaan ratkaisu mikro-organismien ja niiden muodostamien biofilmien mää-20 rittämiseksi mm. elintarviketeollisuuden ja puunjalostusteollisuuden prosessilaitteista ja ilmanvaihtojärjestelmien teräspinnoilta.
Keksinnön kohteena oleva elatusainealusta on erityisen 25 sovelias sellaisissa tilanteissa, joissa ei ole mahdollista valmistaa itse elatusaineita ja joissa tarvitaan hygienian jatkuvaa seurantaa, kuten elintarviketeollisuuden omavalvonta ja sairaaloissa tauteja aiheuttavien bakteerien tuhoamisen varmistaminen esim. eri pinnoilta, 30 liuoksista ja ilmanvaihtojärjestelmistä.
Tarkoituksena on ollut kehittää elatusainealusta, jolla voidaan saavuttaa parempi herkkyys eri mikrobeille, mutta jota voidaan kuitenkin elatusaineen ainesosia ja niiden 35 suhteita muuntelemalla hyödyntää eri herkkyysalueilla.
Pitkän säilyvyysajan takaamiseksi kasvualustan on oltava kuivamuodossa. Kasvualustan on oltava helppokäyttöinen.
111011 7
Tarkoituksena on ollut myös, että ravinteet ja muut rea-genssit lisätään geeliin ja että geeli voidaan kiinnittää suoraan vettä läpäisemättömälle alustalle ilman imukykyisiä kantajakerroksia tai tartuntakerroksia.
5 ’ Vaatimuksena on myös, että geeli toimii suodattimen ta voin, jolloin mikrobit tarttuvat geelin pintaan näytteen sisältämän nesteen imeytyessä geeliin. Imeytyneen nesteen ansiosta ravinteet liukenevat ja diffundoituvat mikrobien 10 käytettäväksi, jolloin mikrobit kasvavat morfologialtaan samanlaisina kuin klassisilla agar-agar-alustoilla.
Tarkoituksena on ollut kehittää imukykyinen, 1 000 -1 000 000 mPas:n (2 % vesiliuos, 20 °C, 100 kPa) vis-15 kositeetin omaava geeli, joka ravinteiden ja muiden tarvittavien komponenttien lisäyksen jälkeen voidaan levittää sopivalle vettä läpäisemättömälle alustalle, kuivata normaali-ilmanpaineessa 0,01 - 20 paino-%:n kosteuteen sekä steriloida tarvittaessa esimerkiksi säteilyttämällä 20 tai kaasuttamalla.
Nyt on havaittu, että edellä olevat vaatimukset voidaan täyttää, jos geeliytyvänä aineena käytetään verkkoutet-tuja selluloosaeetteripohjaisia hydrogeelejä. Ne ovat ko-25 valenttisilla sidoksilla silloitettuja hydrofiilisiä polymeerejä, jotka paisuvat vedessä, mutta pitävät muotonsa pysyvän kolmiulotteisen rakenteensa ansiosta eivätkä siten tarvitse erillisiä tukirakenne- tai kiinnityskerrok-sia kuten tunnetun tekniikan mukaiset ratkaisut. Siten 30 keksinnön mukainen hydrogeelielatusaine voidaan kuivata vettä hylkivälle alustalle ilman liima-aineita.
« rt
Selluloosaeetterigeelissä olevien kemiallisten silloitusten määrällä voidaan säädellä geelin suodatinominai-35 suuksia. Mitä enemmän silloituksia geelissä on, sitä pienempi on sen huokoskoko. Mikrobit tarttuvat geelin pintaan näytteen sisältämän nesteen imeytyessä geeliin, joi- δ 111011 loin näyte konsentroituu. Geelin imukykyä ja samalla ela-tusaineen herkkyyttä voidaan säädellä valitsemalla lähtöaineiksi sopivia hydrofiilisten ja hydrofobisten sellu-loosaeettereiden seoksia (hydrofiilisiä ovat esim. nat-5 riumasetaattiryhmän tai hydroksialkyyliryhmän sisältävät selluloosaeetterit ja hydrofobisia esim. alkyyli- tai bentsyyliryhmän sisältävät selluloosaeetterit). Sellu-loosaeetterien silloitusten sekä hydrofiilisyys/hydrofo-bisuus -ominaisuuksien ansiosta geeliin voidaan imeyttää 10 nestetilavuudeltaan ja bakteerimäärältään suurempi näyte.
Keksinnön mukaisen peruskoostumuksen omaavaa elatusainet-ta voidaan käyttää eri herkkyysalueilla. Niinpä sillä voidaan määrittää esimerkiksi 1 - 103 CFU/ml tai 103 - yli 15 107 CFU/ml. Keksinnön mukainen elatusainealusta soveltuu siten hyvin käytettäväksi sekä teollisuuden hygieniaval-vonnassa että toisaalta lääketieteellisessä diagnostiikassa.
20 Keksinnön mukainen kuiva elatusainealusta imee näytteeseen kastettaessa itseensä muutaman minuutin kuluessa vakioisen neste-määrän (10 - 1000 μΐ riippuen tarvittavasta herkkyydestä), jossa on ekvivalentti määrä mikrobeja tutkittavaan näytemäärään verrattuna. Näytteellä kos-25 tunut kasvualusta on yhtä sileä ja tasainen kuin normaaleissa agar-agaralustoissa ja mikrobit muodostavat normaalin inkubointiajan jälkeen pesäkkeitä geelin pinnalle.
Muodostuvan geelipinnan kovuutta ja geelin viskoottisia 30 ominaisuuksia voidaan myös säädellä käyttämällä eri mole-kyylipainon ja viskositeetin omaavia selluloosaeettereitä lähtöaineina.
Selluloosaeettereiden etuina on myös, että niistä valmis-35 tetut geelit ovat kirkkaita ja läpinäkyviä, raaka-aineet ovat halpoja bulkkituotteita ja luonnonpolymeereinä eivät tuota ympäristölle haittaa hajotessaan.
111011 9
Selluloosaeettereinä voidaan käyttää selluloosajohdannai-sia, joissa selluloosan OH-ryhmien vetyjä on korvattu alkyyli-, kuten esimerkiksi metyyli-, etyyli- tai propyy-liryhmillä, hydroksialkyyli-, kuten esimerkiksi hydrok-5 sietyyli- tai hydroksipropyyliryhmillä, bentsyyli- tai ' hydroksibentsyyliryhmillä tai karboksimetyylin alkalime- tallisuoloilla, kuten natriumasetaatilla, tai näiden seoksilla. Kussakin selluloosan glukoosiyksikössä voi olla 0-3 edellä mainituilla ryhmillä substituoitua OHIO ryhmää. Selluloosaeettereiden viskositeetti voi olla 100 - 100 000 mPas, mieluiten 1 000 - 10 000 mPas (2% vesiliuos, 20 °C lämpötila, 100 kPa paine) ja molekyylipaino 500 - 1 000 000, edullisesti 1 000 - 500 000. Lopputuotteen viskositeetti saadaan edellä mainitun viskositeetin 15 omaavia selluloosaeettereitä lähtöaineina käytettäessä halutulle viskositeettialueelle 1 000 - 1 000 000 mPas.
Selluloosaeetterit ovat lineaarisia polymeerejä, joista voidaan muodostaa hydrogeelejä verkottamalla niitä eri 20 tavoin. Selluloosaeettereitä voidaan silloittaa selluloosalle tunnetuilla tavoilla. Niinpä kolmiulotteinen verk-kopolymeeri voidaan saada aikaan esimerkiksi a) antamalla selluloosaeetterien OH-ryhmien reagoida for-25 maldehydin, glyoksaalin, urean tai melamiinin monomety-loli- ja dimetylolijohdannaisten, ureaformaldehydi- ja melamiiniformaldehydiesipolymeerien, dimetylolietyleeni-urean, epikloorihydriinin, diepoksidien, di-isosyanaat-tien (George Odian Principles of Polymerization 1981, 30 671, John Wiley & Sons, Inc) tai divinyylisulfonin (David . C. Harsh ja Stevin H. Gehrke; Journal of Controlled Re- „ lease, 17 (1991) 175-186 ja U. Anbergen ja w. Oppermann;
Polymer, Voi 31, 1990, 1854-1858) kanssa, 35 b) säteilyttämällä (mm. elektronit, neutronit, gamma- ja UV-säteily) (George Odian Principles of Polymerization 1981, 671-672, John Wiley & Sons, Inc) tai 111011 10 c) graftpolymeroimalla selluloosaeetterit vinyylimonomee-rien kanssa vapaaradikaalimekanismilla. Vapaat radikaalit tuotetaan joko säteilyttämällä (esim. gamma- tai UV-sä-teily) tai kemiallisella aktivaatiolla (redox-systeemi, 5 peroksidit tai diatsoniumsuolat) (A. Hebeish, J.T. Guthrie, The Chemistry and Technology of Cellulosic Copolymers, 1981 32-241, Springer-Verlag). Vinyylimonomeereina voidaan käyttää esimerkiksi akroleiinia, akryyliamidia, 2-akryyliamido-2-metyylipropaanisulfonihappoa, 2-akryy-10 liamido-2-metyylipropaanisulfonihapon suoloja, akryyli-happoa, akryylihapon suoloja, akrylonitriiliä, metakryy-liamidia, metakryyliamidopropyylitrimetyyliammoniumklori-dia, metakryylihappoa, metakryylihapon suoloja, 2-meta-kroyylioksietaanisulfonihappoa, 2-metakroyylioksietaani-15 sulfonihapon suoloja, 2-metakryylioksietyylitrimetyyliam-moniumkloridia, 3-metakryylioksi-2-hydroksipropyylitri-metyyliammoniumkloridia, metakroloyylikloridia, N,N'-metyleenibisakrylamidia tai näiden seoksia.
20 Selluloosaeettereitä voidaan siten verkkouttaa esimerkiksi divinyylisulfonilla alkalisessa liuoksessa. Divinyy-lisulfoni muodostaa silloituksia additioreaktiolla joko polymeerirungossa tai substituoiduissa ryhmissä sijaitsevien OH-ryhmien kanssa. Käytettävä divinyylisulfonin mää-25 rä on valittavissa halutun silloitustiheyden ja silloitettavien polymeerien reaktiivisuuden ja konsentraation mukaan ja on esimerkiksi metyyliselluloosalle, hydroksi-propyyliselluloosalle ja karboksimetyyliselluloosalle noin 0,005 - 1,5 g divinyylisulfonia per gramma kuivaa 30 polymeeriä, edullisesti noin 0,05 - 0,5 g divinyylisulfonia per gramma kuivaa polymeeriä 2 prosenttisessa sellu-loosaeetteriliuoksessa. Teoreettinen silloitustiheys divinyylisulfonilla tai jollakin muulla edellä esitetyssä vaihtoehdossa a) mainitulla yhdisteellä silloitettaessa 35 on noin 8,5 x 10'5 - 2,5 x 10‘2 moolia per gramma kuivaa selluloosaeetteriä, edullisesti noin 8,5 x 10"4 - 8,5 x 10"3 moolia per gramma kuivaa selluloosaeetteriä.
111011 11
Keksinnön mukaisessa elatusainealustassa silloitettuihin selluloosaeettereihin perustuvan hydrogeelin huokoskoko on noin 0,1 - 1000 nm, edullisesti noin 1,0 - 500 nm.
5 Hydrogeelien absorptio-ominaisuuksia voidaan parantaa ' detergenttien lisäyksellä. Detergentteinä voidaan käyttää anionisia (esimerkiksi Na-lauryylisulfaatti) tai nonioni-sia (esim. Tween 20, Triton X-100) detergenttejä. Hydrogeelien absorptio-ominaisuuksia voidaan myös säädellä 10 muilla geeliytyvillä, vesiliuoksia absorboivilla yhdisteillä kuten edellä mainitut selluloosaeetterit, edellä mainittujen graftpolymeroinnissa käytettyjen polymeerien kopolymeerit, agar-agar, albumiinit, alginaatit, gelatiini, guarkumi, karrageenit, ksantaanikumi, polypeptidit ja 15 muut modifioidut polysakkaridit.
Mahdollisten detergenttien ja geeliytyvien aineiden lisäksi geeliin lisätään ravinteita (mm. peptonit, ravinto-hydrolysaatit ja sokerit) sekä tarvittaessa pH:n säätä-20 jiä, substraatteja, muita biokemiallisiin osoitusreakti-oihin liittyviä reagensseja, selektiivisiä estoaineita, antibiootteja ja väriaineita ennen geeliseoksen kuivausta.
25 Näin saatu selluloosaeetteripohjäinen hydrogeelielatusai-ne voidaan levittää sopivalle vettä läpäisemättömälle alustalle ja kuivata 0,01 - 20 paino-%:n kosteuteen. Sopivia vettä läpäisemättömiä alustoja ovat esimerkiksi polypropeeni-, polystyreeni- tai polyesterialustat, 30 joista voidaan valmistaa kastolevytyyppisiä testiliuskoja. Haluttaessa elatusaine voidaan kuivata myös lasikui-tuverkolle, mikäli verkko on sopivan tiheä ja hydrogeelin silloitus riittävä. Kuivaus voidaan suorittaa normaali-ilmanpaineessa tai haluttaessa ali- tai ylipaineessa.
35 Sopiva loppukosteus on 0,01 - 20 paino-%, edullisesti 0,05 - 10 paino-%.
111011 12
Kuivattu elatusainealusta säilyy käyttökelpoisena pitkiä aikoja ja sen käyttömahdollisuudet ovat monipuoliset. Niinpä kuiva elatusainealusta voidaan upottaa suoraan tutkittavaan näyteliuokseen tai painaa tutkittavaa koste-5 aa näytepintaa vasten, jolloin geeli imee itseensä vakiomäärän näytettä. Mikäli tutkittavana kohteena on kuiva pinta, geeli voidaan ensin kostuttaa esimerkiksi vedellä ja painaa sitten tutkittavaa pintaa vasten tai pinta voidaan kostuttaa ja painaa kuiva geeli sitten kostutettua 10 pintaa vasten. Kiinteä kuiva näyte puolestaan voidaan suspendoida nesteeseen, johon elatusainealusta kastetaan. Kuiva elatusainealusta voidaan myös kostuttaa ja tiputtaa sitten tutkittava näyte alustalle.
15 Keksintö koskee myös kuivatun hydrogeelielatusainealustan sisältävää mikrobiologista testipakkausta, jossa ela-tusaineen geeliytyvä ainesosa muodostuu keksinnön mukaisesta kovalenttisesti silloitettuihin selluloosaeetterei-hin perustuvasta hydrogeelistä, jolloin hydrogeelielatus-20 aine voidaan kiinnittää suoraan vettä läpäisemättömälle alustalle ilman kantaja- tai tartuntakerroksia. Testipakkaus voi lisäksi sisältää esimerkiksi kostutusliuoksen ja näytteenottoliuoksen. Testiliuskan säilytyspakkaus voi toimia myös sen inkubointikammiona.
25
Edellä esitetyn perusteella keksinnön mukainen elatus-ainekoostumus voi sisältää divinyylisulfonilla ristisi-dottaessa esimerkiksi (prosenttiosuudet w/v laskettu nesteen tilavuudesta) 30 a) 0,1-10 paino-% natriumkarboksimetyyliselluloosaa J b) 0,1 - 10 paino-% hydroksipropyylimetyyliselluloosaa tai hydroksipropyyliselluloosaa c) 0,05-0,5 paino-% natriumhydroksidia 35 d) 0,005 - 1,5 g divinyylisulfonia/g selluloosaeetteriä e) 0,01 - 1,0 paino-% Tween 20 f) 0,1-10 paino-% hiivaekstraktia 111011 13 g) 0,1-10 paino-% Lablemcoa ja h) 0,001 - 0,005 paino-% Bromthymol blueta, joka seos levitetään vettä läpäisemättömälle alustalle ja kuivataan 20 - 60 °C:ssa 0,01 - 20 paino-% kosteuteen.
5 ' Mikäli selluloosaeetterit verkkoutetaan graftpolymeroi- malla, keksinnön mukainen elatusainekoostumus voi sisältää esimerkiksi (prosenttiosuudet w/v laskettu nesteen tilavuudesta) 10 a) 0,1-10 paino-% natriumkarboksimetyyliselluloosaa b) 0,1-10 paino-% akryyliamidia c) 0,01 - 10 paino-% Ν,Ν'-bismetyleeniakryyliamidia d) 0,001 - 0,1 paino-% kaliumhydroksidia 15 e) 0,001 - 0,01 paino-% natriumpyrosulfiittia f) 0,005 - 0,1 paino-% kaliumpersulfaattia ja g) 0,1-10 paino-% BHI-ravinnetta, joka levitetään vettä läpäisemättömälle alustalle ja kuivataan 20 - 60 °C:ssa 0,01 - 20 paino-% kosteuteen. Ka-20 liumpersulfaatti ja natriumpyrosulfiitti toimivat edellä esitetyssä koostumuksessa graftpolymeroinnin redox-initi-aattorina aikalisissä olosuhteissa, jolloin akryyliamidi ja Ν,Ν'-bismetyleeniakryyliamidi polymeroituvat sellu-loosaeettereiden kanssa.
25
Keksintöä ryhdytään seuraavassa lähemmin tarkastelemaan sovellusesimerkkien avulla. Sovellukset ovat esimerkkejä eikä niiden tarkoituksena ole missään tapauksessa rajoittaa keksintöä.
30
Mikrobit on kasvatettu ennestään tunnetulla tekniikalla • · J BHI-liuoksessa ja kasvustoista on laimennettu käyttösus- pensiosarjat (CFU/ml). Suspensiossa olevat mikrobit on määritetty uudella kiinteällä alustalla ja verrattu en-35 nestään tunnettuun viljelytekniikkaan, kuten ravintoagar-maljaviljely ja kastolevy (Uricult ™, Hygicult ™).
111011 14
Esimerkki 1.
450 mg natriumhydroksidia liuotetaan 400 ml:aan ionivaih-dettua vettä. Tähän liuotetaan 2 g hydroksipropyylimetyy-5 liselluloosaa (viskositeetti 4000 mPas, 2 % liuos) tai hydroksipropyyliselluloosaa (molekyylipaino 370 000) ja 4 g natriumkarboksimetyyliselluloosaa (viskositeetti 6000 mPas, 1 % liuos). Sekoitetaan 3 tuntia 60 °C:ssa, jäähdytetään huoneenlämpöön ja lisätään 0,4 ml divinyylisulfo-10 nia, sekoitetaan ja seisotetaan 16 tuntia. Sekoitetaan 2 tuntia 60 °C:ssa, laimennetaan geeli l%:ksi ja säädetään pH natriumhydroksidilla pH 7:ksi. 100 ml:aan edellämainittua geeliä lisätään 0,05 g Tween 20, 0,6 g hiiva-ekstraktia, 0,3 g Lablemcoa ja 3 mg Bromthymol blueta.
15 Saatu seos kuivataan polypropeenipohjalle (200 μΐ/cm2) huoneenlämpötilassa ja näin saatu kuiva elatusainealusta leikataan 12 cm2 testiliuskoiksi.
Esimerkki 2.
20 12 g natriumkarboksimetyyliselluloosaa (viskositeetti 6000 mPas 1 % liuos) liuotetaan 600 ml:aan vettä ja kaasutetaan inertillä kaasulla ja lämmitetään 70°C:een. Seokseen lisätään 0,6 g Ν,Ν'-bismetyleeniakryyliamidia ja 25 0,6 g akryyliamidia, jotka on liuotettu 20 ml:aan vettä.
Lisätään 1 ml 1 M kaliumhydroksidiliuosta, 35 mg natrium-pyrosulfiittia ja polymeroidaan lisäämällä 100 mg kalium-persulfaattia. Sekoitetaan inertissä kaasuatmosfäärissä 4 tuntia. Seokseen lisätään 15 g BHI-ravinnetta, säädetään 30 pH 7:ksi ja seos kuivatetaan polypropeenipohjalle (200 μΐ/cm2) huoneenlämpötilassa ja näin saatu kuivaela-tusainealusta leikataan 12 cm2:n testiliuskoiksi.
» *
Esimerkki 3.
35
Testiliuskojen imukykyä testattiin kastamalla esimerkkien 1 ja 2 testiliuskat 0,9 % NaCl-liuokseen 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 ja 2,5 minuutiksi ja punnitsemalla liuskat. Tulokset 111011 15 on esitetty taulukossa 1.
Taulukko l. Testiliuskojen nesteen imemiskyky
Imeytysaika min/imeytynyt nestemäärä ml ^ 5 Geeli 0,5 min 1,0 min 1,5 min 2,0 min 2,5 min 1 0,26 ml 0,39 ml 0,41 ml 0,46 ml 0,49 ml 2 0,23 ml 0,34 ml 0,40 ml 0,45 ml 0,49 ml 3 0,38 ml 0,54 ml 0,62 ml 0,69 ml 0,75 ml 10 Geeli 1 = Natriumkarboksimetyyliselluloosa-hydroksipro-pyylimetyyliselluloosa-hydrogeeli (esim. 1)
Geeli 2 = Natriumkarboksimetyyliselluloosa-hydroksipro-pyyliselluloosahydrogeeli (esim. 1)
Geeli 3 = Graftnatriumhydroksipropyylimetyyliselluloosa-15 akryyliamidi-N,N'-bis-metyleeniakryyliamidipolymeeri (esim. 2)
Johtopäätöksenä tuloksista voidaan todeta, että hydrofii-lisemmista selluloosa-eettereistä syntetisoidut geelit 20 imevät enemmän nestettä samassa ajassa.
Esimerkki 4.
• Esimerkin 1 natriumkarboksimetyyliselluloosa-hydroksipro- 25 pyylimetyyliselluloosa-testiliuskat kastettiin puoleksi minuutiksi Escherichia coli (ATCC 25922) laimennossarjaan 101 - 108 CFU/ml. Näytettä imeytyi 0,25 ml. Testiliuskoja inkuboitiin 37 °C:ssa 20 tuntia. Vertailuna oli ravinto-agarmalja, jolle pipetoitiin näytettä 0,1 ml. Kasvutihey-30 det luettiin vastaavasti kuin ravintoagarmaljoilta. Tulokset kerättiin taulukkoon 2.
35 111011 16
Taulukko 2. Escherichia colin kasvutiheydet ravintoagar-maljoilla ja testiliuskoilla_.
bakteerilaimennos Kasvutiheys Kasvutiheys CFU/ml CFU/ml ravintoagarmal- testiliuskalla _ jalla__ 101___3___8_ 5 JLO]__18__38_ 103___10]__10]_ 104 __Vtf__lOj_ 105 ___10]__10]_ 106___10]__>10''_ 10 _1θ]___>10]__>107_ 10e__>107__>107_
Taulukon 2 kasvutiheyksistä voidaan todeta, että kasvutiheys on verrannollinen näytemäärään.
15
Esimerkki 5.
Esimerkin 1 natriumkarboksimetyyliselluloosa-hydroksipro-pyylimetyyliselluloosa-testiliuskojen toimivuutta tutkit-20 tiin eri bakteereilla ja hiivalla. Testiliuskat kastettiin puoleksi minuutiksi Escherichia coli- (ATCC 25922), Klebsiella pneumoniae- (ATCC 33495), Proteus mirabilis-(ATCC 12453), Pseudomonas aeruginosa- (ATCC 27853), Enterococcus faecalis- (ATCC 29212), Staphylococcus aureus-25 (ATCC 25922) ja Candida albicans- (ATCC 14053) laimen-nossarjoihin 101 - 108 CFU/ml. Näytettä imeytyi 0,25 ml. Testiliuskoja inkuboitiin 37 °C:ssa 20 tuntia. Vertailuna oli Uricult™ kastolevyn Cled-elatusaine, jonka näytemäärä on 0,025 ml. Kasvutiheydet luettiin vertaamalla Uricultin 30 mallitauluun. Tulokset kerättiin taulukkoon 3.
111011 17
Taulukko 3. Eri mikrobien kasvutiheydet testiliuskoilla ja UricultTH:in Cled elatusaineella_
Mikrobilaimennos CFU/ml 4
Mikrobi/ 5 Testiliuska/ 101 102 1 03 104 1 05 1 06 1 07 1 08 «. Uricult™-Cled E. co//
Testiliuska 8 38 104 105 107 >107 >107 >107
Uricult™-Cled 0 1 6 1 04 1 04'5 106 107 >107 10 K. pneumoniae
Testiliuska 4 10“ 104 10“ >107 >107 >107 >107
Uricult™-Cled 1 2 1 03 1 04 1 0s 106 107 >107 P. mirabilis
Testiliuska 14 39 104 105 >107 >107 >107 >107 15 Uricult™-Cled 5 5 7 10“ 1 04 1 05 1 06 1 07 P. aeruginosa
Testiliuska 6 17 104 10“ >107 >107 >107 >107
Uricult™-Cled 0 2 10 104 >107 >107 >107 >107 S. aureus 20 Testiliuska 1 2 1 8 1 04 1 05 1 0“ >107 >107
Uricult™-Cled 0 0 10 10“ 104'5 10“ 106 107 E. faecalis
Testiliuska 1 10“ 104 104'5 >107 >107 >107 >107
Uricult™-Cled 0 1 3 10“ 104 10“ 106 >107 25 C. albicans
Testiliuska 0 0 0 20 10“ >107 >107 >107
Uricult™-Cled 0 0 1 103 104 105 10“ 106 30 Mikrobikasvusto oli jopa sata kertaa tiheämpää testiliuskoilla, koska niihin imeytyi runsaammin näytettä kuin Cled-elatusaineeseen, 35 Esimerkki 6.
Esimerkin 1 natriumkarboksimetyyliselluloosa-hydroksipro-<. pyylimetyyliselluloosa-testiliuskojen toimivuutta tutkit- 40 tiin hiivalla ja homeella. Testiliuskat kastettiin kahdeksi minuutiksi Candida albicans- (ATCC 14053) ja As- 111011 18 pergillus niger- laimennossarjoihin 101 - 10e CFU/ml. Näytettä imeytyi 0,45 ml. Testiliuskoja inkuboitiin 37 °C:ssa 20 tuntia (C. albicans) tai 22 °C:ssa 72 tuntia (A. niger). Vertailuna oli Hygicult™ Y & F, jonka näyte-5 määrä on 0,050 ml. Kasvutiheydet luettiin vertaamalla Hygicultin mallitauluun.
Taulukko 4. Hiivan ja homeen kasvutiheydet testiliuskoilla ja Hygicult ™ Y & F:llä.
10 __Hiiva/Homelaimennos CFU/ml_
Mikrobi
Testiliuska 101 102 103 104 105 106
Hygicult™ Y & F________ 15 c. albicans
Testiliuska 0 2 50 300 104'5 >107
Hygicult™ Y & F _0__3__1 32 104 106 A. niger
Testiliuska 01026 18 20 Hygicult™ Y & F | 0 |q |l | 6 36 104'5
Verkkoutettuihin selluloosaeettereihin perustuva hydro-geelielatusaine ylläpitää homeiden ja hiivan kasvua, vaikka tässä esimerkissä elatusaineen ravinteet eivät ole 25 optimeja hiivalle eikä homeelle kuten Hygicult™ Y & F:ssä.
Esimerkki 7.
30
Erilaisten selluloosaeetteripohjäisten hydrogeeliela-tusainealustojen toimivuus tutkittiin kastamalla testattavat elatusaineliuskat puoleksi minuutiksi Escherichia . coli- (ATCC 25922), Enterococcus faecalis- (ATCC 29212) 35 ja Candida albicans- (ATCC 14053) laimennossarjaan 101 -104 CFU/ml ja inkuboimalla 37 °C:ssa 20 tuntia. Kasvutiheydet luettiin vertaamalla Uricult™:in mallitauluun. Tulokset kerättiin taulukkoon 5.
40 111011 19
Taulukko 5. Escherichia colin, Enterococcus faecaliksen ja Candida albicansin kasvutiheydet, CFU/ml eri hydrogee-lielatusainealustoilla
Mikrobilaimennos CFU/ml s E. coli IF. faecalis |C. albicans
Geeli 101 10" 10J 10* 10l 10z 10J ΙΟ4 101 10' 10J 104 ϊ 1 "38 To^TcT5-!! Tö3-Tör""Iö5-"ö o “ö ~2Ö~~ 2 16 ~49 104 105 1 ~2Ϊ ϊΰ5 1Ö5 5 ~2 ~2Ö 10*“ 3 Ϊ "54 Τσ5 Γ0^"7 "35 "lö^Tö^lj "4 Tö W~
Geeli 1 = Natriumkarboksimetyyliselluloosa-hydroksipro-pyylimetyyliselluloosa-hydrogeeli (esim. 1)
Geeli 2 = Natriumkarboksimetyyliselluloosa-hydroksipro-pyyliselluloosahydrogeeli (esim. 1) 5 Geeli 3 = Graftnatriumhydroksipropyylimetyyliselluloosa-akryyliamidi-N,lT-bis-metyleeniakryyliamidipolymeeri (esim. 2)
Taulukon 5 esimerkeistä nähdään, että erilaisista sellu-10 loosaeettereistä valmistetut hydrogeelit ylläpitävät mikrobien kasvua.
Yhteenvetona edellä esitetyistä esimerkeistä voidaan todeta, että 15 - kaikki mikrobit kasvavat keksinnön mukaisella elatusai nealustalla, vaikka esimerkkien elatusaineiden koostumusta ei mitenkään optimoitu eri mikrobeille, - keksinnön mukainen elatusainealusta on yleisesti ottaen « * * herkempi kuin ravintoagar tai kaupalliset valmiit kasto- 20 levyt, 4 - kasvu keksinnön mukaisella elatusainealustalla on verrannollinen näytemäärään.
Claims (18)
111011
1. Kuivattu mikrobien hydrogeelielatusaine, tunnettu siitä, että se käsittää kovalenttisesti silloitettuihin sel-luloosaeettereihin perustuvan hydrogeelin, jolloin hydro- 5 geelielatusaine voidaan kiinnittää suoraan vettä läpäisemättömälle alustalle ilman kantaja- tai tartuntakerrok-sia.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen hydrogeelielatusaine, tunnettu siitä, että geeliytyvä ainesosa sisältää sekä 10 hydrofiilisiä että hydrofobisia selluloosaeettereitä.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen hydrogeelielatusaine, tunnettu siitä, että selluloosaeettereissä selluloosan OH-ryhmien vetyjä on korvattu alkyyli-, kuten esimerkiksi metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmillä, hydrok- 15 sialkyyli-, kuten esimerkiksi hydroksietyyli- tai hydrok-sipropyyliryhmillä, bentsyyli- tai hydroksibentsyyliryh-millä tai karboksimetyylin alkalimetallisuoloilla, jolloin kussakin selluloosan glukoosiyksikössä voi olla 0 -3 edellä mainituilla ryhmillä substituoitua OH-ryhmää.
4. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen hydro geelielatusaine, tunnettu siitä, että selluloosaeetterin molekyylipaino on 500 - 1 000 000, edullisesti 1 000 -500 000.
5. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen hydro-25 geelielatusaine, tunnettu siitä, että selluloosaeetterin viskositeetti on 100 - 100 000 mPas, mieluiten 1 000 -10000 mPas (2 % liuos, 20 °C).
6. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen hydrogeelielatusaine, tunnettu siitä, että silloitettuihin 30 selluloosaeettereihin perustuvan hydrogeelin huokoskoko on 0,1 - 1 000 nm, edullisesti 1,0 - 500 nm.
7. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen hydro- t * 111011 geelielatusaine, tunnettu siitä, että se käsittää silloitetun selluloosaeetteripohjäisen hydrogeelin lisäksi ravinteita, sekä mahdollisesti muita tarvittavia kom-* ponentteja, kuten muita geeliytyviä yhdisteitä, pH:n sää- 5 täjiä, detergenttejä, substraatteja, muita biokemialli-siin osoitusreaktioihin liittyviä reagensseja, selektiivisiä estoaineita, antibiootteja ja väriaineita.
8. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen hydro-geelielatusaine, tunnettu siitä, että se on kuivattu vet- 10 tä läpäisemättömälle alustalle 0,01 - 20 paino-%:n kosteuteen .
9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen hydrogeelielatusaine, tunnettu siitä, että geeliin voidaan lisätä selluloosa-eettereitä, vinyylimonomeereistä, kuten akroleiinista, 15 akryyliamidista, 2-akryyliamido-2-metyylipropaanisulfo-nihaposta, 2-akryyliamido-2-metyylipropaanisulfonihapon suoloista, akryylihaposta, akryylihapon suoloista, akry-lonitriilistä, metakryyliamidista, metakryyliamidopropyy-litrimetyyliammoniumkloridista, metakryylihaposta, meta-20 kryylihapon suoloista, 2-metakroyylioksietaanisulfoniha-posta, 2-metakroyylioksietaanisulfonihapon suoloista, 2-metakryylioksietyylitrimetyyliammoniumkloridista, 3-me-takryylioksi-2-hydroksipropyylitrimetyyliammoniumklori-dista, metakroyylikloridista, Ν,Ν'-metyleenibisakryyli- 25 amidista tai näiden seoksista polymeroituja kopolymee-reja, agar-agaria, albumiineja, alginaatteja, gelatiinia, guarkumia, karrageeneja, ksantaanikumia, polypeptideja ja muita modifioituja polysakkarideja.
10. Menetelmä kuivatun mikrobien hydrogeelielatusaine- * < ... 30 alustan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että hydrogeelin muodostamiseksi selluloosaeettereitä verkkoutetaan toisiinsa a) antamalla selluloosaeetterien OH-ryhmien reagoida esimerkiksi divinyylisulfonin, formaldehydin, glyoksaalin, « · 111011 urean tai melamiinin monometyloli- ja dimetylolijohdannaisten, ureaformaldehydi- ja melamiiniformaldehydiesipo-lymeerien, dimetylolietyleeniurean, epikloorihydriinin, diepoksidien tai di-isosyanaattien kanssa, tai 5 b) säteilyttämällä tai c) graftpolymeroimalla selluloosaeetterit vapaaradikaali-mekanismilla vinyylimonomeerien, kuten akryyliamidin ja N, N'-bismetyleeniakryyliamidin, kanssa, saatuun silloitettuun hydrogeeliin lisätään ravinteita 10 sekä mahdollisesti muita tarvittavia komponentteja, ja saatu hydrogeelielatusaine levitetään vettä läpäisemättömälle alustalle ja kuivataan, jolloin elatusaine kiinnittyy alustalle suoraan ilman kantaja- tai tartuntakerrok-sia. 15 li. Patenttivaatimuksen 10 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että geeliin lisätään ravinteiden lisäksi muita komponentteja, kuten geeliytyviä, vesiliuoksia absorboivia yhdisteitä, pH:n säätäjiä, detergenttejä, substraatteja, muita biokemiallisiin osoitusreaktioihin liittyviä 20 reagensseja, selektiivisiä estoaineita, antibiootteja tai väriaineita, ja saatu hydrogeelielatusaine levitetään vettä läpäisemättömälle alustalle, kuivataan 20 - 60 °C:ssa 0,01 - 20 paino-%:n kosteuteen ja leikataan testi-liuskoiksi.
12. Patenttivaatimuksen 10 tai 11 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että verkkoutettaessa selluloosaeette-reitä patenttivaatimuksen 11 vaihtoehdon a) mukaisesti selluloosaeettereiden teoreettinen silloitustiheys on 8,5 x 10"5 - 2,5 x 10"2 moolia per gramma kuivaa sellu-30 loosaeetteriä.
13. Jonkin patenttivaatimuksista 10 - 12 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että verkkoutettaessa selluloosa-eettereitä divinyylisulfonilla divinyylisulfonin määrä on O, 005 - 1,5 g / 1 g selluloosaeetteriä. 111011
14. Patenttivaatimuksen 10 tai 11 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että graftpolymeroitaessa selluloosaeet-terit akryyliamidin ja Ν,Ν'-bismetyleeniakryyliamidin ’ kanssa akryyliamidin määrä on 0,1 - 10 paino-% (w/v) ja 5 Ν,Ν'-bismetyleeniakryyliamidin määrä 0,01 - 10 paino-% (w/v).
15. Patenttivaatimuksen 10 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hydrogeelejä voidaan muodostaa selluloosaeet-tereistä graftpolymeroimalla vapaaradikaalimekanismilla 10 akroleiinin, akryyliamidin, 2-akryyliamido-2-metyyli-pro-paanisulfonihapon, 2-akryyliamido-2-metyylipropaanisul-fonihapon suolojen, akryylihapon, akryylihapon suolojen, akrylonitriilin, metakryyliamidin, metakryyliamidopropyy-litrimetyyliammoniumkloridin, metakryylihapon, metakryy-15 lihapon suolojen, 2-metakroyylioksietaanisulfonihapon, 2-metakroyylioksietaanisulfonihapon suolojen, 2-metakryy-lioksietyylitrimetyyliammoniumkloridin, 3-metakryylioksi- 2-hydroksipropyylitrimetyyliammoniumkloridin, metakroyy-likloridin, N^'-metyleenibisakryyliamidin tai näiden 2 0 seosten kanssa.
16. Mikrobiologinen testipakkaus, joka käsittää kuivatun mikrobien hydrogeelielatusainealustan, tunnettu siitä, että hydrogeelielatusaineen geeliytyvä ainesosa käsittää kovalenttisesti silloitettuihin selluloosaeettereihin 25 perustuvan hydrogeelin, jolloin hydrogeelielatusaine voidaan kiinnittää suoraan vettä läpäisemättömälle alustalle ilman kantaja- tai tartuntakerroksia.
17. Patenttivaatimuksen 16 mukainen mikrobiologinen testipakkaus, tunnettu siitä, että se käsittää lisäksi pin- • · 30 nankostutusliuoksen, näytteenottoliuoksen ja säilytys- a pakkauksen, joka voi toimia inkubointikammiona.
18. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen hydrogeelielatusaineen käyttö määritettäessä mikrobien lajia ja määrää eri herkkyysalueilla. 111011
Priority Applications (10)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI970163A FI111011B (fi) | 1997-01-15 | 1997-01-15 | Mikro-organismien kiinteä kasvualusta, sen valmistus ja käyttö |
HU0000868A HUP0000868A3 (en) | 1997-01-15 | 1998-01-14 | Solid culture medium for microorganisms, process for its preparation, and use |
CZ19992470A CZ290141B6 (cs) | 1997-01-15 | 1998-01-14 | Suąené hydrogelové kultivační médium pro mikroby, způsob jeho přípravy, testovací mikrobiologická souprava a pouľití |
PCT/FI1998/000020 WO1998031785A1 (en) | 1997-01-15 | 1998-01-14 | Solid culture medium for microorganisms, process for its preparation, and use |
PL98334519A PL334519A1 (en) | 1997-01-15 | 1998-01-14 | Solid micro-organism culture medium, method of obtaining same and application thereof |
AU56639/98A AU722087B2 (en) | 1997-01-15 | 1998-01-14 | Solid culture medium for microorganisms, process for its preparation, and use |
JP53380398A JP2001507941A (ja) | 1997-01-15 | 1998-01-14 | 微生物用固体培地とその製法および使用 |
EP98900852A EP0970188A1 (en) | 1997-01-15 | 1998-01-14 | Solid culture medium for microorganisms, process for its preparation, and use |
US09/093,623 US6258586B1 (en) | 1997-01-15 | 1998-06-01 | Solid culture medium for microorganisms, process for its preparation, and use |
NO993297A NO993297L (no) | 1997-01-15 | 1999-07-02 | Fast dyrkningsmedium for mikroorganismer, fremgangsmÕte for fremstilling herav og anvendelse herav |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI970163A FI111011B (fi) | 1997-01-15 | 1997-01-15 | Mikro-organismien kiinteä kasvualusta, sen valmistus ja käyttö |
FI970163 | 1997-01-15 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI970163A0 FI970163A0 (fi) | 1997-01-15 |
FI970163A FI970163A (fi) | 1998-07-16 |
FI111011B true FI111011B (fi) | 2003-05-15 |
Family
ID=8547609
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI970163A FI111011B (fi) | 1997-01-15 | 1997-01-15 | Mikro-organismien kiinteä kasvualusta, sen valmistus ja käyttö |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6258586B1 (fi) |
EP (1) | EP0970188A1 (fi) |
JP (1) | JP2001507941A (fi) |
AU (1) | AU722087B2 (fi) |
CZ (1) | CZ290141B6 (fi) |
FI (1) | FI111011B (fi) |
HU (1) | HUP0000868A3 (fi) |
NO (1) | NO993297L (fi) |
PL (1) | PL334519A1 (fi) |
WO (1) | WO1998031785A1 (fi) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IL118376A0 (en) * | 1996-05-22 | 1996-09-12 | Univ Ben Gurion | Polysaccharide sponges for cell culture and transplantation |
JP4143219B2 (ja) | 1999-05-19 | 2008-09-03 | 日水製薬株式会社 | 簡易培地及びその製造方法 |
JP4819984B2 (ja) * | 1999-06-23 | 2011-11-24 | 独立行政法人日本原子力研究開発機構 | 自己架橋型アルキルセルロース誘導体、及びそれらの製造方法 |
AU2001255829A1 (en) | 2000-04-04 | 2001-10-15 | Home Health Science Inc. | Method and kit for detecting microorganisms |
EP1357179B1 (en) * | 2001-01-29 | 2008-04-23 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Solid culture medium and method for preparing the same |
WO2005083056A1 (ja) * | 2004-03-02 | 2005-09-09 | Independent Administrative Institution, Japan Agency For Marine-Earth Science And Technology | セルロース固体培地とその製造方法 |
JP2008532551A (ja) * | 2005-03-17 | 2008-08-21 | ファイジェニックス, エルエルシー | 生存可能なレジオネラ属の迅速な検出および定量 |
WO2007027849A2 (en) * | 2005-08-31 | 2007-03-08 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Multiribbon nanocellulose as a matrix for wound healing |
US8932858B2 (en) * | 2008-03-07 | 2015-01-13 | Corning Incorporated | Modified polysaccharide for cell culture and release |
JP2010150558A (ja) * | 2010-03-11 | 2010-07-08 | Japan Atomic Energy Agency | 自己架橋型アルキルセルロース誘導体、及びそれらの製造方法 |
WO2012057751A1 (en) * | 2010-10-27 | 2012-05-03 | Empire Technology Development Llc | Crosslinked cellulosic polymers |
FI123694B (fi) | 2011-12-22 | 2013-09-30 | Upm Kymmene Corp | Matriisi ja koostumus grampositiivisten bakteerien mikrobiviljelyyn |
FI125965B (fi) | 2012-09-25 | 2016-04-29 | Upm Kymmene Corp | Kolmiulotteinen soluviljely |
JP6363326B2 (ja) * | 2013-03-11 | 2018-07-25 | 株式会社コーセー | 酵母・細菌共通培養方法およびこれに用いる酵母・細菌共通培養培地 |
JP6380003B2 (ja) * | 2014-10-29 | 2018-08-29 | Jnc株式会社 | 微生物培養器材及び微生物検出法 |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3046201A (en) | 1961-07-17 | 1962-07-24 | American Cyanamid Co | Synthetic culture media |
US3360440A (en) * | 1966-04-13 | 1967-12-26 | Haab Walter | Cold water reconstitutable microbiological medium, process for preparation and use, ad product |
CA924224A (en) | 1969-03-10 | 1973-04-10 | A. King Paul | Microbiological testing device and process for preparation |
US3881993A (en) | 1971-03-16 | 1975-05-06 | Miles Lab | Testing device for microorganisms |
US3814670A (en) | 1972-04-26 | 1974-06-04 | Miles Lab | Test article for use in microbiology |
WO1982002563A1 (en) | 1981-01-27 | 1982-08-05 | Minnesota Mining & Mfg | Dry culture media |
DE3783073T2 (de) | 1986-04-22 | 1993-04-29 | Ajinomoto Kk | Modifiziertes, durch mikroorganismen hergestelltes zellulose-gel und sein komplex mit tierischen zellen. |
JPH02175532A (ja) | 1988-12-23 | 1990-07-06 | Shinko Seisakusho Co Ltd | 電子写真式プリンタの用紙送り装置 |
US5089413A (en) | 1989-05-19 | 1992-02-18 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Method and apparatus for culturing with microbiological dry culture medium |
US5336614A (en) | 1991-08-14 | 1994-08-09 | Quality Biological, Inc. | Soft agar assay and kit |
US5232838A (en) | 1991-12-09 | 1993-08-03 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Culture media device and method of use |
JP3146078B2 (ja) * | 1992-10-21 | 2001-03-12 | 島久薬品株式会社 | 微生物を培養する装置 |
DE4206850C2 (de) | 1992-03-05 | 1996-08-29 | Stockhausen Chem Fab Gmbh | Polymerzusammensetzungen, Herstellgung von Polymerzusammensetzungen, insbesondere Absorptionsmaterialien und deren Verwendung |
WO1996029428A1 (en) * | 1995-03-20 | 1996-09-26 | Echa Microbiology Limited | Microbial monitoring |
-
1997
- 1997-01-15 FI FI970163A patent/FI111011B/fi not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-01-14 JP JP53380398A patent/JP2001507941A/ja active Pending
- 1998-01-14 CZ CZ19992470A patent/CZ290141B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-01-14 WO PCT/FI1998/000020 patent/WO1998031785A1/en not_active Application Discontinuation
- 1998-01-14 EP EP98900852A patent/EP0970188A1/en not_active Withdrawn
- 1998-01-14 PL PL98334519A patent/PL334519A1/xx unknown
- 1998-01-14 AU AU56639/98A patent/AU722087B2/en not_active Ceased
- 1998-01-14 HU HU0000868A patent/HUP0000868A3/hu unknown
- 1998-06-01 US US09/093,623 patent/US6258586B1/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-07-02 NO NO993297A patent/NO993297L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2001507941A (ja) | 2001-06-19 |
NO993297D0 (no) | 1999-07-02 |
WO1998031785A1 (en) | 1998-07-23 |
CZ290141B6 (cs) | 2002-06-12 |
FI970163A (fi) | 1998-07-16 |
PL334519A1 (en) | 2000-02-28 |
CZ247099A3 (cs) | 1999-10-13 |
HUP0000868A3 (en) | 2002-09-30 |
AU722087B2 (en) | 2000-07-20 |
US6258586B1 (en) | 2001-07-10 |
FI970163A0 (fi) | 1997-01-15 |
EP0970188A1 (en) | 2000-01-12 |
NO993297L (no) | 1999-08-24 |
HUP0000868A2 (en) | 2000-07-28 |
AU5663998A (en) | 1998-08-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI111011B (fi) | Mikro-organismien kiinteä kasvualusta, sen valmistus ja käyttö | |
Sabaa et al. | Synthesis, characterization and application of biodegradable crosslinked carboxymethyl chitosan/poly (vinyl alcohol) clay nanocomposites | |
CN102245755B (zh) | 生物检测制品 | |
EP1179586B1 (en) | Simple culture medium and method for preparation thereof | |
JP4763956B2 (ja) | バルク液から微生物を表面培養するための装置および方法 | |
KR100499436B1 (ko) | 미생물 배양 기재 및 배지 | |
ZA200302857B (en) | Detection of the presence of microbe or related substance at a location. | |
US20120082977A1 (en) | Articles with matrix comprising a cell extractant and biodetection methods thereof | |
CN109294003A (zh) | 一种含ZnO的壳聚糖/海藻酸钠抗菌保鲜膜及其制备方法 | |
JPH11506910A (ja) | 表面コロニー計数装置および使用方法 | |
SE515085C2 (sv) | Porös struktur innefattande svampcellväggar | |
Sisti et al. | Antibacterial coatings on poly (fluoroethylenepropylene) films via grafting of 3-hexadecyl-1-vinylimidazolium bromide | |
FI71164C (fi) | Anordningar foer paovisning av aemnen som haemmar tillvaexten av mikroorganismer | |
US20210017481A1 (en) | System for Environmental Microbial Testing | |
CN107602901A (zh) | 高密度接枝酸基催化细菌裂解的抗生物被膜材料及其制备方法和应用 | |
Foroutan et al. | Investigation of synthesis of PVP hydrogel by irradiation | |
Plieva et al. | Macroporous gel particles as robust macroporous matrices for cell immobilization | |
Dixit et al. | Synthesis of AgNPs embedded double network nanocomposite hydrogels having high swelling and anti-bacterial characteristics | |
TWI570241B (zh) | 微生物檢測裝置之製造方法、微生物檢測方法、微生物檢測套組及裝置 | |
WO2007063097A1 (en) | Process for production of active matrices with antimicrobial activity | |
Shahbuddin et al. | HETEROPOLYSACCHARIDE OF KGM-XANTHAN HYDROGELS FOR THE REMOVAL OF BACTERIA IN A WOUND MODEL | |
Çankaya et al. | Synthesis and Antimicrobial Properties of Some Compounds | |
JP2002095497A (ja) | 抗菌性試験用標準試験片及びそれを用いた抗菌性試験方法 | |
CN118667196A (zh) | 一种智能化抗菌聚乙烯醇薄膜及其制备方法 | |
Wong et al. | Immobilization of glucose oxidase on poly (vinyl alcohol): The effect of immobilization temperature on apparent enzyme activity |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HC | Name/ company changed in application |
Owner name: ORION-YHTYMAE OYJ |
|
MA | Patent expired |