JP4647940B2 - アロマターゼ活性化剤 - Google Patents

Description

本発明は、アンドロゲンからエストロゲンを生合成する酵素であるアロマターゼの活性を増強するアロマターゼ活性化剤に関する。

女性ホルモンとして知られているエストロゲンは、ヒトにおいては、主として卵巣によって生成され、１７β−エストラジオール、エストロン、エストリオール等が知られている。

エストロゲンは、子宮内膜の増殖、性機能の調節、骨代謝の調節、脂質代謝の調節等様々な生理機能に関与することから、加齢や卵巣機能の低下に伴って、体内のエストロゲンが欠乏すると、更年期障害、性機能低下、自律神経失調症、脂質代謝異常、血管運動障害、骨粗鬆症等の症状が現れる。

一方、エストロゲン又はエストロゲン様物質は環境ホルモン作用を有することから、斯かる諸症状の予防や改善に対して、これらを直接投与することは妥当ではない。

本発明は、安全性が高く、体内のエストロゲン生成を促進させることにより、上記エストロゲン欠乏に起因する各種症状の予防、改善又は治療に有用な医薬又は化粧料を提供することを目的とする。

本発明者らは、エストロゲンがアンドロゲンからアロマターゼによって生合成されることに着目し、当該アロマターゼの活性を増強する天然物質について検討したところ、特定の植物又は藻類にアロマターゼを活性化する作用があることを見出した。

すなわち本発明は、イリス根、オドリコソウ、オノニス、ガマ、カンゾウ、クジン、グレープフルーツ、ケイヒ、ゲンチアナ、コウキ、コンズランゴ、サイシン、サルビア、サンザシ、サンヤク、ショウキョウ、ショウブ、シラカバ、スイカズラ、セイヨウサンザシ、セイヨウノギリソウ、ソウハクヒ、タイム、チョウジ、チンピ、トウヒ、トラガント、ハマメリス、ビャクシ、ブッチャーブルーム、ボウイ、ボウコン、ボウフウ、ホップ、マオウ、ラベンダー、リンゴ、レイシ、レタス、レモン、ローマカミツレ及びワレモコウより選ばれる植物若しくはそれらの抽出物、酵母エキス、絹タンパク抽出物、乳タンパク質、トレハロース、納豆エキス並びにローヤルゼリーから選ばれる１種以上からなるアロマターゼ活性化剤を提供するものである。

本発明のアロマターゼ活性化剤は、体内のエストロゲン生成を促進させ、且つ人体に対する安全性が高いことから、エストロゲン欠乏に起因する各種病変の予防、改善又は治療を目的とした医薬又は化粧料として有用である。

本発明のアロマターゼ活性化剤において、イリス根とはアヤメ科のIris florentinaを、オドリコソウとはシソ科のLamium albumを、オノニスとはマメ科のOnonis spinosaを、ガマとはガマ科のTypha angustifolia その他同属植物を、カンゾウとはマメ科のGlycyrrhiza glabaraを、クジンとはマメ科のSophora angustifoliaを、グレープフルーツとはミカン科のCitrus paradisiを、ケイヒとはクスノキ科のCinnamomum cassiaを、ゲンチアナとはリンドウ科のGentiana luteaを、コウキとはクルミ科のEugelhardtia chrysolepisを、コンズランゴとはガガイモ科のMarsdenia cundurangoを、サイシンとはウマノスズクサ科のAsarum sieboldiiを、サルビアとはシソ科のSalvia officinalisを、サンザシとはバラ科のCrataegus cuneataを、サンヤクとはヤマノイモ科のDioscorea japonicaを、ショウキョウとはショウガ科のZingiber officinaleを、ショウブとはショウブ科のAcorus calamusを、シラカバとはカバノキ科のBetula platyphylla Suk. var. japonica (Sieb.) Haraを、スイカズラ（ニンドウ）とはスイカズラ科のLonicera japonicaを、セイヨウサンザシとはバラ科のCrataegus oxyacanthaを、セイヨウノギリソウとはキク科のAchillea millefolumを、ソウハクヒとはクワ科のMorus albaを、タイムとはシソ科のThymus serpｙllumを、チョウジとはフトモモ科のSyzygium aromaticumを、チンピとはミカン科のCitrus unshiuを、トウヒとはミカン科のCitrus aurantiumを、トラガントとはマメ科のAstragalus gummiferを、ハマメリスとはマンサク科のHamamelis virginianaを、ビャクシとはセリ科のAngelica dahuricaを、ブッチャーブルームとはユリ科のRuscus aculeatusを、ボウイとはツヅラフジ科のSinomenium acutumを、ボウコンとはイネ科のImperata cylindricaを、ボウフウとはセリ科のSaposhnikovia dibaricata又はLedebouriella seseloidesを、ホップとはクワ科のHumulus lupulusを、マオウとはマオウ科のEphedra sinicaを、ラベンダーとはシソ科のLavandura angustifoliaを、リンゴとはバラ科のPyrus malusを、レイシとはマンネンタケ科のGanoderma lucidumを、レタスとはキク科のLactuca sativaを、レモンとはミカン科のCitrus limonを、ローマカミツレとはキク科のAnthemis nobilisを、ワレモコウとはバラ科のSanguisorba officinalisを、それぞれ意味する。

酵母エキスはSaccharomycesに属する酵母を自己消化又は酸加水分解によって得られた液から得られたエキスであり、例えば商品名「イーストリキッド Ｂ」（一丸ファルコス社）等が使用できる。絹タンパク抽出物は、絹繊維たん白質を加水分解して得られるエキスであり、例えば「シルクゲンＧソルブルＫＥ」（一丸ファルコス社）等が使用できる。乳タンパク質としては、乳糖タンパク、ラクトフェリン等が挙げられ、例えば「ビオデルマ ＳＸ−１４」（一丸ファルコス社）、「ラクトフェリン Ｓ ＦＲＥＥ」（一丸ファルコス社）等が使用できる。納豆エキスは、ダイズGlycine maxの種子をナットウ菌で発酵して作った納豆を抽出して得られるエキスであり、例えば「ダイズポリマーＦ Ｂ−２０」（一丸ファルコス社）等が使用できる。ローヤルゼリーは、ヨーロッパミツバチApis melifica又はトウヨウミツバチApis indecaの分泌する物質から得られるエキスであり、例えば「ローヤルゼリーエキス」（一丸ファルコス社）等が使用できる。

上記植物は、その植物の全草、葉、樹皮、枝、果実又は根等をそのまま又は粉砕して用いることができるが、イリス根については根、オドリコソウについては花、オノニスについては根、ガマについては花穂、カンゾウについては根、クジンについては根、グレープフルーツについては果実、ケイヒについては樹皮、ゲンチアナについては根、コウキについては葉、コンズランゴについては樹皮、サイシンについては根、サルビアについては葉、サンザシについては実、サンヤクについては周皮を除いた根茎、ショウキョウについては根茎、ショウブについては根、シラカバについては樹皮、スイカズラ（ニンドウ）については花、セイヨウサンザシについては実、セイヨウノギリソウについては頭花、ソウハクヒについては根皮、タイムについては地上部、チョウジについては蕾、チンピについては果皮、トウヒについては果皮、トラガントについては幹の分泌物、ハマメリスについては葉、ビャクシについては根、ブッチャーブルームについては根、ボウイについては茎および根茎、ボウイについては茎および根茎、ボウコンについては細根及びりん片葉を除いた根茎、ボウフウについては根、ホップについては花穂、マオウについては地上茎、ラベンダーについては花、リンゴについては果実、レイシについては子実体、レタスについては葉、レモンについては果実、ローマカミツレについては花、ワレモコウについては根、を使用するのが好ましい。

本発明における抽出物とは、上記植物を常温又は加温下にて抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末を意味するものである。

本発明の植物を得るために用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；及び二酸化炭素等が挙げられ、これらは混合物として用いることができる。

上記の植物抽出物は、そのまま用いることもできるが、当該抽出物を希釈、濃縮若しくは凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して用いることもできる。
また、上記の植物又はクロレラ抽出物は、クロマトグラフィー液々分配等の分離技術により、上記抽出物から不活性な夾雑物を除去して用いることもできる。

尚、本発明の植物若しくはそれらの抽出物、酵母エキス、絹タンパク抽出物、乳タンパク質、トレハロース、納豆エキス、ローヤルゼリー（以下、植物等という）は、２種以上を混合して用いてもよい。

これらの植物等は、後記実施例に示すようにアロマターゼ遺伝子の発現を増加させることから、アロマターゼを活性化する作用を有するといえる。従って、当該植物等からなるアロマターゼ活性化剤を医薬品や化粧品等に配合してヒトに投与することにより、生体内のエストロゲン生成が促進され、エストロゲンに起因する以下のような作用効果が期待できる（からだの科学 No219 2001 日本評論社）。

１）骨代謝に関する作用：副甲状腺ホルモンの働きを抑えて、骨吸収を抑制し、また腎臓でのビタミンＤの活性化を促進し、骨粗鬆化を抑制する。

２）高脂血症に関する作用：エストロゲンの濃度低下によりＬＰＬ（リポタンパクリパーゼ）活性が亢進されてＬＤＬ受容体数が減少し、血中にＬＤＬが蓄積して粥状硬化に進展することを防ぐ；血管内皮に存在するｍＲＮＡの発現を増加させ、ＮＯ産生を亢進する；抗酸化作用、血管拡張作用を促進し、動脈硬化に対して抑制的に作用する。

３）脳機能に関する作用：記憶、認知機能、脳血流の変化等の脳機能を改善し、感情や情緒にも影響を与え、うつ病との関連も報告されている。特に、アルツハイマー病に関し、（１）(i)神経細胞に作用し、Ａｃｈ（アセチルコリン）合成酵素（コリンアセチルトランスフェラーゼ）の活性を増加する、(ii)コリン作動性ニューロンでの神経成長因子（ＮＧＦ）や脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の受容体などの発現を刺激する、(iii)海馬においてシナプスを増加する、(iv)アミロイド前駆タンパク（ＡＰＰ）に作用して、β−アミロイドの蓄積を減少させて神経細胞の損傷を軽減する、(ｖ)脳内の糖輸送と糖利用を高める。

４）更年期障害に関する作用：エストロゲンの減少により視床下部−下垂体−卵巣系でのネガティブフィードバックが作動せず、視床下部、下垂体が機能亢進状態になること、すなわちＬＨ（黄体化ホルモン）、ＦＳＨ（卵胞刺激ホルモン）が増加することにより引き起こされる自律神経失調症状を改善する。

５）眼に関する作用：更年期以降の女性に多発する黄斑変性や白内障の発症を抑制する。また、涙腺機能を改善し、ドライアイを抑制する。

本発明のアロマターゼ活性化剤を医薬として配合する場合には、錠剤、カプセル剤等の内服剤、軟膏、水剤、エキス剤、ローション剤、乳剤等の外用剤、注射剤とすることができる。

また、化粧料として配合する場合は、種々の形態、例えば、油中水型又は水中油型の乳化化粧料、クリーム、ローション、ジェル、フォーム、エッセンス、ファンデーション、パック、スティック、パウダー等とすることができ、本発明の植物又はその抽出物の他に、化粧料成分として一般に使用されている油分、界面活性剤、紫外線吸収剤、アルコール類、キレート剤、pH調整剤、防腐剤、増粘剤、色素類、香料、各種皮膚栄養剤等を任意に組合せて配合することができる。

斯かる医薬又は化粧料における植物等の配合量は、乾燥物として通常全組成の０．００００１〜１重量％、特に０．０００１〜０．１重量％が好ましい。

以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
製造例１ 植物抽出物の製造
常法に従い、下記表１に示す植物抽出物を調製した。

参考例１ レポータージーンアッセイ系の構築
ヒト正常ケラチノサイトより抽出したゲノムＤＮＡより、ヒトアロマターゼ遺伝子エクソン１ｂの転写調節領域とエクソン１ｂの一部を含む部分を、以下のプライマーを用いてＰＣＲを行って増幅した。
upper primer 5'- GACTAGTAAGGTGCAGTGACAGGCTC -3'（配列番号１）
lower primer 5'- GGAATTCCTGTCAGGCTCCAGTTGGTC -3'（配列番号２）
得られたＰＣＲ産物を制限酵素ＳｐｅＩとＥｃｏＲＩで処理し、シーパンジーｎｕｌｌコントロールベクター（東洋インキ製造株式会社）のＳｐｅＩサイトとＥｃｏＲＩサイトに組み込み、これをＥｘ１ｂ−ｌｕｃプラスミドとして、後述のルシフェラーゼアッセイに用いた。

実施例１ アロマターゼ遺伝子エクソン１ｂ発現増加作用
（１）材料・方法
(i)使用細胞：
ヒト肝臓癌由来不死化細胞（ＨｅｐＧ２細胞）
(ii)使用プラスミド：
アロマターゼ遺伝子エクソン１ｂの転写調節領域、約１ｋｂをルシフェラーゼ遺伝子の上流に組み込んだＥｘｌｂ−ｌｕｃ。
(iii)細胞へのトランスフェクション：
ＨｅｐＧ２細胞を９６ｗｅｌｌ培養プレート中に３万個ずつまき、Ｅｘｌb−ｌｕｃをリポフェクトアミン試薬（Invitrogen）を用いて導入した。プロトコールは試薬に添付された説明書の記載に従った。ＤＮＡの量は１well当たり0.1μg用いた。コントロールとして2つのwellに対しては、ＤＮＡを加えずに同様の操作を行った。
(iv)ルシフェラーゼアッセイ：
トランスフェクションを行った細胞を１晩培養した後、製造例１で調製した植物抽出物、酵母エキス（「イーストリキッド Ｂ」、一丸ファルコス社）、絹タンパク抽出物（「シルクゲンＧソルブルＫＥ」、一丸ファルコス社）、乳タンパク質（「ビオデルマ ＳＸ−１４」一丸ファルコス社、「ラクトフェリン Ｓ ＦＲＥＥ」、一丸ファルコス社）、納豆エキス（「ダイズポリマーＦ Ｂ−２０」、一丸ファルコス社）、ローヤルゼリー（「ローヤルゼリーエキス」、一丸ファルコス社）を加え（１％、０．１％）、２０時間培養した。アラマー・ブルー（BIOSOURCE）２０μL加え、２時間培養した後、蛍光強度（励起光５４４ｎｍ、蛍光５９０ｎｍ）を測定した。また、ピッカジーンデュアル・シーパンジールミネッセンスキット（ニッポンジーン）を用いてルシフェラーゼ活性を測定した。細胞の溶解は５×細胞溶解液を１×濃度に調整し、各ウェルに２５μL加えて細胞を溶解した。

（２）結果
結果を下記表２に示す。

これより、各抽出液はアロマターゼ発現を活性化する能力があることがわかった。

Claims (1)

1. イリス根及びその抽出物から選ばれる１種以上からなるアロマターゼ活性化剤。