JP4636552B2 - 自動薄切装置 - Google Patents
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Description
一般的には、水と湯を利用して伸展させる。始めに、本削りによって得られた薄切片を水の中に浸漬させる。これにより、生体試料を包埋しているパラフィン同士のくっつきを防止しながら、薄切片の大きな皺や丸みをとる。その後、薄切片を湯の中に浸漬させる。これにより、薄切片が伸び易くなるので、水による浸漬では取りきれなかった残りの皺や丸みをとることができる。
最後に、薄切片を乗せた基板を、乾燥器内に入れて乾燥させる。この乾燥により、伸展で付着した水分が蒸発すると共に、薄切片が基板上に固定される。その結果、薄切片標本を作製することができる。
この装置は、セットされた包埋ブロックを切断して薄切片を作製する工程と、作製した薄切片をキャリアテープによって搬送してスライドガラス上に転写させる工程と、スライドガラスごと薄切片を伸展装置まで搬送して伸展を行う工程とを、自動的に行っている。
この装置によれば、作業者の負担を軽減することができると共に、作業者による人為的なミスもなくすことができ、良好な薄切片標本を作製することができる。
すなわち、前述した装置は、自動的に、予めセットされた包埋ブロックから薄切片を作製すると共に、伸展を終わらせた状態で該薄切片をスライドガラス上に固定させることができる装置であるが、装置稼動の際に、生体試料に対する前処理の状況、生体試料の種類、切削方向の違いなど予測不可能な条件変化があって、一定の条件下で、切削およびその後の伸展処理等を行うことはきわめて困難であった。このため、薄切片標本作製に失敗する確率が高く、自動化された装置であるにも拘わらず、連続して稼動させることができなかった。
すなわち、本発明にかかる自動薄切装置は、交換指令信号に基づき、切削台に取り付けてある試料ブロックを取り外し代わりに新たな試料ブロックを切削台に取り付ける試料ブロック着脱手段と、前記切削台に取り付けた試料ブロックに対してナイフを相対移動させて所定厚さの薄切片を切削する切削手段と、切削された前記薄切片を観察する観察手段と、前記観察手段によって得られた観察データにより前記薄切片の良否を判断し、薄切片を良と判断したときに前記試料ブロック着脱手段に、試料ブロックを交換させる旨の交換指令信号を発信する評価手段と、を備えたことを特徴とする。
本発明によれば、落射照明による光が薄切片にあたる場合には、散乱されるためその反射光は弱くなる。一方、光が薄切片の周囲の媒体に当たったときは、正反射されるため、反射光は強くなる。この結果、輝度の差によって薄切片の外形や内部の孔の存在を把握することができる。
本発明によれば、透過照明による光が薄切片を通過する場合には、薄切片によって光が吸収されたり散乱されたりするため、透過光は弱くなる。一方、光が薄切片の周囲の透明媒体を通過するときは、光がほとんどそのまま通過するため、透過光は強くなる。この結果、輝度の差によって薄切片の外形や内部の孔の存在を把握することができる。
本発明によれば、薄切片の画像データを2値化処理することによって、薄切片部分は暗く、薄切片の外側は明るく表示することができる。これにより、薄切片の外形等を、より明確に把握することができる。
本発明によれば、観察手段によって得られた観察データと予め入力された試料ブロック切断面データとを比較することにより、薄切片の良否を判断するため、良否の基準となる試料ブロック切断面データがある分、良否の判断が容易に行える。
本発明によれば、薄切片の画像データを2値化処理することによって、薄切片部分は暗く、薄切片の外側は明るく表示することができること、並びに、良否の基準となるものがあることから、薄切片の良否の判断を容易に行うことができる。
この発明によれば、仮想薄切片画像と試料ブロック切断面画像とを、面積要素、重心の位置要素、パターンマッチング要素のうちの少なくとも一つの要素で比較するから、試料ブロック切断面画像と仮想薄切片画像との違いを定量的に表すことができ、薄切片の良否判断を、より一層、容易に行うことができる。
図1は自動薄切装置の構成を示す図、図2は観察手段を示す図、図3は自動薄切装置の制御系の機能ブロック図である。自動薄切装置1は、交換指令信号に基づき、切削台2に取り付けてある試料ブロック3を取り外し代わりに新たな試料ブロック3を切削台2に取り付ける、ブロックハンドリングロボットからなる試料ブロック着脱手段4と、切削台2に取り付けた試料ブロック3に対してナイフ5を相対移動させて所定厚さの薄切片6を切削する切削手段7と、切削手段7によって切削された薄切片6を搬送する搬送手段8と、搬送手段8を介して水槽9まで搬送された薄膜片6を観察する観察手段10とを備える。なお、ブロック保管庫11には予め複数の試料ブロック3が所定位置に収納されているが、これら試料ブロック3は、包埋カセット3a上に包埋ブロック3bが固定されて作られる。
なお、光源としては、面発光源11aのほか、点光源からの光をピンホールおよびコリメータレンズを通過させて平行光にかえるものであってもよい。また、ハーフミラー11bによって薄切片6側に屈曲された平行光が媒体Cの表面に対して垂直に向かうように、面発光源11aおよびハーフミラー11bの位置が設定されている。
まず、試料ブロック着脱手段4によって試料ブロック3を切削台2上にセットする(ステップS1)。セットが完了すると、その旨の情報が、試料ブロック着脱手段4の制御部から、信号の形で切削手段7の切削制御部15へ出力され、切削手段7による粗削りが開始されて、包埋ブロック3bの表面を平滑面とし、かつ、実験や観察の対象物である包埋された生体試料を表面に露出させる(ステップS2)。そして、本削りに移行し、高さ調整されたナイフ5によって、包埋ブロック3aの切削表面を所定の厚みで極薄にスライスする(ステップS3)。
なお、この画像において、符号Zaは水面部分、Zbは薄切片部分、Zbaは薄切片内の生体試料部分、Zbbは薄切片内の破れた部分、Zbcは薄切片の欠けた部分をそれぞれ示す。
これにより、薄切片6の欠陥、例えば、薄切片6の皴や欠けによる外形異常、薄切片の破れ、パラフフィン部分からの生体試料の抜けがあるかどうかを判断することができる。
また、重心の位置要素で比較するときは、図7の黒で表示している部分の重心位置が、試料ブロックの切断された部分の重心位置からどの程度ずれているかどうか判断し、そのずれ量がある値以内であれば「良」、ずれ量がある値を越していれば「否」と判断する。 またパターンマッチング要素で比較するときには、画像をあるサイズに区分けし、それぞれ区分けした部分で、像が合致するかどうか判断する。そして、像が合致していない部分が全体に対してどの程度あるか判断し、その割合がある値以内であれば「良」、割合がある値を越していれば「否」と判断する。
なお、このように切削された薄切片6が良か否かの判断は、画像データのうちの輝度情報を中心に行うので、落射照明系11の光源としては、散乱現象が顕著にわれる、波長に短い青色系統の光を発するものの方が好ましい。
なお、その後、必要に応じて、水槽9上に浮かんだ、薄切片6をステンドグラスにより掬い取り、その後の、湯伸展工程および乾燥工程を経て、薄切片標本を作製する。
また、ブロック保管庫11に予め収納された複数の試料ブロック3から、連続して薄切片6を切削することができる。
例えば、前記実施形態では、得られた薄切片6について評価手段16により「良」か「否」かの判断を行うのに、水槽9に浮かべた薄切片6、つまり、水伸展後のものを対象に行っているが、これに限られることなく、切断した直後、あるいは、湯伸展後やホットプレートを用いた伸展後の薄切片6を対象に判断してもよい。
また、前記実施形態では、評価手段16において、観察手段によって得られた観察データと比較するのに、予め、人手によって入力された試料ブロック切断面データを基準としているが、これに限られることなく、図1中2点差線で示すように、切削された試料ブロックをCCD等の撮像手段23で撮像し、そこから取り組んだ試料ブロック3の外形の画像データを基準として利用してもよい。
勿論、観察手段10によって得られた観察データのみによって薄切片6の良否を判断するときも、観察データを2値化処理して得られた明暗データを基に判断しても良い。
Claims (8)
- 交換指令信号に基づき、切削台に取り付けてある試料ブロックを取り外し代わりに新たな試料ブロックを切削台に取り付ける試料ブロック着脱手段と、
前記切削台に取り付けた試料ブロックに対してナイフを相対移動させて所定厚さの薄切片を切削する切削手段と、
切削された前記薄切片を観察する観察手段と、
前記観察手段によって得られた観察データにより前記薄切片の良否を判断し、薄切片を良と判断したときに前記試料ブロック着脱手段に、試料ブロックを交換させる旨の交換指令信号を発信する評価手段と、
を備えたことを特徴とする自動薄切装置。 - 前記観察データは、落射照明により、鏡面反射する媒体の表面に配置された前記薄切片を、周囲の前記媒体ごと撮像して得られた画像データであることを特徴とする請求項1記載の自動薄切装置。
- 前記観察データは、透過照明により、透明媒体中に配置された前記薄切片を、周囲の前記透明媒体ごと撮像して得られた画像データであることを特徴とする請求項1記載の自動薄切装置。
- 前記評価手段は、輝度情報を基に前記画像データを2値化処理して得られた明暗データにより、前記薄切片の良否を判断することを特徴とする請求項2または3記載の自動薄切片装置。
- 前記評価手段は、前記観察手段によって得られた観察データと予め入力された試料ブロック切断面データとを比較することにより前記薄切片の良否を判断し、薄切片を良と判断したときに前記試料ブロック着脱手段に、試料ブロックを交換させる旨の交換指令信号を発信することを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載の自動薄切片装置。
- 前記評価手段は、輝度情報を基に前記画像データを2値化処理して得られた明暗データと前記試料ブロック切断面データとを比較することにより前記薄切片の良否を判断することを特徴とする請求項5記載の自動薄切片装置。
- 前記評価手段において、前記明暗データと前記試料ブロック切断面データとを比較する際に、明暗データから得られる仮想薄切片画像と試料ブロック切断面データから得られる試料ブロック切断面画像とを、面積要素、重心の位置要素、パターンマッチング要素のうちの少なくとも一つの要素で比較することを特徴とする請求項6記載の自動薄切装置。
- 切削台に取り付けてある試料ブロックを取り外し代わりに新たな試料ブロックを切削台に取り付ける試料ブロック着脱工程と、
前記切削台に取り付けた試料ブロックに対してナイフを相対移動させて所定厚さの薄切片を切削する切削工程と、
切削された前記薄切片を観察する観察工程と、
前記観察工程で得られた観察データと予め入力された試料ブロック切断面データとを比較することにより薄切片の良否を判断する評価工程とを備え、
前記評価工程で良と判断した場合に、前記試料ブロック着脱工程へ移行した後、前記切削工程、前記観察工程、前記評価工程へ順に移行し、
前記評価工程で否と判断した場合に、前記試料ブロック着脱工程へ移行することなく、再び、前記切削工程、前記観察工程、前記評価工程へ順に移行することを特徴とする自動薄切方法。
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