JP4632400B2 - 細胞培養用基板、その製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法 - Google Patents
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Description
また、特開2003-33177号公報は、多種の薬物・毒物などの化学物質を簡便にアッセイするために複数の領域に分割された細胞アレイを作成し、得られた各領域に生物活性物質を付与して同時に多検体のスクリーニングを行うものであるが、該発明では、培養中の細胞に対して、いちいちディスペンス手段を用いて生物活性物質を付与するために、その工程でのコンタミネーションの危険性や、専用の生物活性物質の付与装置を構築する必要があり、簡便に用いることはできなかった。
(1)基板に細胞を培養する培養領域の1以上を設けた細胞培養用基板において、
該培養領域が培養液を保持可能に構成されており、細胞に対して生物活性を有する第一の生物活性物質を配置する第一の領域および該生物活性物質と同じまたは異なる第二の生物活性物質を配置する第二の領域の両方を有する培養領域の1以上を有しており、
該第一の領域および第二の領域は、各々の前記生物活性物質を前記培養液中に遊離可能に保持しているか、あるいは各々の前記生物活性物質を固定化してなり、且つ前記培養領域の下端からの距離が互いに異なる位置に設けられている
ことを特徴とする細胞培養用基板。
(2)各培養領域内の前記第一の領域及び前記第二の領域の少なくとも一方に、複数の生物活性物質が保持又は固定化されている上記(1)項に記載の細胞培養用基板。
(3)前記第一の領域にある生理活性物質が、培養液と接した際に培養液中に遊離可能に該保持領域に保持されている上記(1)または(2)項に記載の細胞培養用基板。
(4)各培養領域内の前記第一の領域及び前記第二の領域の少なくとも一方が複数設けられている上記(1)〜(3)項のいずれかに記載の細胞培養用基板。
(5)前記第一の領域及び前記第二の領域に、生物活性物質の種類または複数の生理活性物質の組み合わせが異なる領域の組み合わせが1以上含まれている上記(1)〜(4)項のいずれかに記載の細胞培養用基板。
(6)前記第一の領域及び前記第二の領域に、生物活性物質の密度が異なる領域の組み合わせが1以上含まれている上記(1)〜(5)項のいずれかに記載の細胞培養用基板。
(7)前記培養領域が前記基板の表面に形成された凹部内に形成されている上記(1)〜(6)のいずれかに記載の細胞培養用基板。
(8)前記培養領域が壁状構造物により囲まれている上記(1)〜(6)項のいずれかに記載の細胞培養用基板。
(9)前記第一の領域及び前記第二の領域の少なくとも一方に、前記基板表面に設けられた担持層を介して生物活性物質が保持または固定化されている領域が含まれている上記(1)〜(8)項のいずれかに記載の細胞培養用基板。
(10)前記第一の領域は、前記培養領域の下端から所定の高さに設けられている上記(1)〜(9)項のいずれかに記載の細胞培養用基板。
(11) 基板に細胞を培養する培養領域の1以上を設けた細胞培養用基板において、
前記培養領域が培養液を保持可能に構成されており、
細胞に対して生物活性を有する第一の生物活性物質を配置してなる第一の領域および該生物活性物質と同じまたは異なる第二の生物活性物質を配置してなる第二の領域の両方を有する培養領域の1以上を有し、
前記第一の領域および前記第二の領域は、各々の前記生物活性物質を前記培養液中に遊離可能に保持しているか、あるいは各々の前記生物活性物質を固定化してなり、
前記第一の領域は、前記培養領域の下端から所定の高さに設けられており、同一培養領域内に、その下端からの距離が異なる位置に設けられた2以上の前記第一の領域を有する
ことを特徴とする細胞培養用基板。
(12)前記第一の領域から、前記生物活性物質の徐放が可能、もしくは徐放性を付与した生物活性物質を遊離できることを特徴とする上記(1)〜(11)項のいずれかに記載の細胞培養基板。
(13)前記培養領域が凹部中に設けられ、その壁面の少なくともひとつの面は、底部から上部に向かって傾斜しており、かつ該凹部の底面積より開口部の面積の方が広くなっている上記(1)〜(12)項のいずれかに記載の細胞培養用基板。
(14)上記(1)〜(13)項のいずれかに記載の細胞培養用基板の製造方法であって、前記第一の領域及び前記第二の領域の少なくとも1つへの生物活性物質の付与に液体吐出手段を用いることを特徴とする細胞培養用基板の製造方法。
(15)前記液体吐出手段が、サーマルインクジェット方式による吐出手段である上記(14)項に記載の細胞培養用基板の製造方法。
(16)前記液体吐出手段が、ピエゾインクジェット方式による吐出手段である上記(14)項に記載の細胞培養用基板の製造方法。
(17)前記生物活性物質の固定を外部から固定用のエネルギーを加えて行う工程をさらに含む上記(14)〜(16)項のいずれかに記載の細胞培養用基板の製造方法。
(18)基板に細胞を培養する培養領域の1以上を設けた細胞培養用基板において、
前記培養領域が培養液を保持可能に構成されており、細胞に対して生物活性を有する第一の生物活性物質を配置する第一の領域および該生物活性物質と同じまたは異なる第二の生物活性物質を配置する第二の領域の両方を有する培養領域の1以上を有しており、該第一の領域および第二の領域は、各々の前記生物活性物質を前記培養液中に遊離可能に保持しているか、あるいは各々の前記生物活性物質を固定化してなり、且つ前記培養領域の下端からの距離が互いに異なる位置に設けられている細胞培養用基板を用いた細胞スクリーニング法であって、
前記培養領域に培養液を充填し、該培養領域中の固定化領域に固定された生物活性物質に培養液を接触させた状態で細胞を培養する工程と、
培養液を前記保持領域と接触させて該保持領域にある生物活性物質を培養液中に遊離させる工程と、
を有することを特徴とする細胞スクリーニング法。
(19)培養液中に細胞のスクリーニングに必要な物質を補充する工程を有する上記(18)項に記載の細胞スクリーニング法。
(20)細胞の形態変化を観察する工程を更に含む上記(18)または(19)項に記載の細胞スクリーニング法。
(21)評価の際に細胞を染色する請求項20に記載の細胞スクリーニング法。
(22)細胞内で合成された物質の定量を行う工程を含む上記(18)〜(21)項のいずれかに記載の細胞スクリーニング法。
(23)細胞内に取り込まれた物質の定量を行う工程を含む上記(18)〜(21)項のいずれかに記載の細胞スクリーニング法。
(24)放射線量測定、蛍光量測定、発光量測定および吸光度測定の少なくとも1種により前記物質の定量を行う工程を含む上記(22)または(23)項に記載の細胞スクリーニング法。
本発明に用いる基板のベース11及び/または壁面14及び/またはステージ15を形成する材料は、生物活性物質を安定して仮固定できるものであれば材質や形状はいずれでもよい。具体的には、ガラス基板、プラスチックプレート、プラスチックシート、ポリマーフィルム、紙などを好適に用いることができる。さらに基板1は透明であっても、遮光性のものであっても、さらには着色されていてもよい。また、ベース11または壁面14及び/またはステージ15上に生物活性物質を仮固定するため、あるいは、ベース11及び/または壁面14及び/またはステージ15上での生物活性物質の安定性を高めるため、ベース11及び/または壁面14及び/またはステージ15上の一部、あるいは全面を化学物質により処理したり、放射線を照射したりする処理を行っても良い。ステージ15がない場合には、壁面14は仮固定領域を設けるために傾斜していると好ましい。傾斜角度は、垂直に近いと細胞培養基板を作製する場合に仮固定領域の高さを調整しにくく、角度が浅いとウェルの密度が上がらないために、25〜65度程度がよい。細胞培養基板の凹部、凸状の壁状構造物、壁面の傾斜の部分を形成するための方法としては、インジェクション成形、注型成形、チップを熱融着あるいは接着剤によって貼り合わせて成形する方法、金型等でプレス成形する方法などを用いることが出来る。
ポリスチレン製細胞培養用基板1の全面に固定用の架橋材として、ポリLリジン(Poly-L-lysine)とトレシルクロライド(Tresylchloride)によってトシル化された活性化デキストラン溶液を塗布した。
次に、3種類の成長因子を用いて、ベース11上に異なる濃度を組み合わせて基板を作製した。bFGF、IGF-I及びBMP-2を実施例1と同様の方法でベース11上に固定及び仮固定した。ステージ15部分まで浸るように培養液を加え、成長因子をすべて再溶解させた。
作用させる生物活性物質の期間と濃度によって細胞への影響がどのように変化するかを調べるため、以下の方法を用いた。
(1)追加なし
(2)36時間後
(3)36時間後と72時間後
培養後の細胞を10%ホルマリンで10分間処理し、IGF-Iによる筋分化の指標としてクレアチンキナーゼ(CK)の酵素活性染色を行った。
次に、作用させる生物活性物質の期間と濃度によって細胞への影響がどのように変化するかを調べるため、以下の方法を用いた。
(1)培養開始直後
(2)培養開始12時間後
(3)培養開始24時間後
(4)培養開始48時間後
(5)培養開始72時間後
培養後の細胞を10%ホルマリンで10分間処理し、IGF-Iによる筋分化の指標としてクレアチンキナーゼ(CK)の酵素活性染色を行った。
本実施例は、変異原性物質を他の物質と組み合わせた基板上でサルモネラ菌TA98株を培養し、その復帰突然変異性を定量化することで変異原性の変化を評価するものである。
本実施例では、グルコースを含む寒天で覆われた基板上に、図5に示すように特定の領域内に各変異原性物質、アジ化ナトリウム、アフラトキシンB1、アセトヘキサミドを濃度を変えて仮固定した。変異原性物質が仮固定されていない領域を○、アジ化ナトリウムを仮固定した領域を●、アフラトキシンB1を仮固定した領域を「縦縞を有する丸」、アセトヘキサミドを仮固定した領域を「点々を付した丸」で表しており、それぞれ濃度の高い方を濃く表してある(縞模様及び点々が高密度の丸)。各変異原性物質が単独で仮固定された領域と、組み合わせて仮固定された領域を設けた。
アジ化ナトリウム、アフラトキシンB1、アセトヘキサミドは予めナトリウム−リン酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)に溶解しておき、70% エタノールで洗浄したインクカートリッジにそれぞれ溶液を充填した。インクジェットプリンターを用いて上記の基板上に各変異原性物質をプリント後、仮固定した。
衛生試験法に基づき、液体培地中に増殖させたサルモネラ菌TA98株の菌懸濁液0.1mlと、L-ヒスチジンとD-ビオチンを含む寒天溶液2mlをよく混合して上記の基板上に添加した。添加した寒天を室温で基板上に固化させたのち、細菌を37℃で48時間培養し、復帰突然変異によって増殖したコロニー数を定量した。
この結果、各物質を単独で仮固定した領域は濃度依存的にコロニー数が増加し変異原性が確認された。しかしアジ化ナトリウムとアフラトキシンB1を加えた場合は細菌が死滅してしまい、変異原性よりも細胞毒性が強まることがわかった。アジ化ナトリウムとアセトヘキサミドを加えた場合は、各々単独で加えた場合の和よりも著しくコロニーが増殖し、変異原性の相乗作用が確認された。アフラトキシンB1とアセトヘキサミドを加えた場合は特に相乗作用は見られなかった。3種類すべてを組み合わせた場合も細菌が死滅し、細胞毒性が強まった。
このように本基板を用いることで、複数の物質の組み合わせによる変異原性や細胞毒性の変化を評価することが可能である。
本実施例は、基板上で変異原性物質と他の物質を時間差で組み合わせ、サルモネラ菌TA98株に対する復帰突然変異性を定量化することで変異原性の変化を評価するものである。本実施例では、グルコースを含む寒天で覆われた基板上に、図6に示すように特定の領域内に各変異原性物質、アジ化ナトリウム、アフラトキシンB1を濃度を変えて固定化した。変異原性物質が固定化されていない領域を○、アジ化ナトリウムを固定化した領域を●、アフラトキシンB1を固定化した領域を「縦縞の丸」で表しており、それぞれ濃度の高い方を濃く表してある(縞模様が高密度の丸)。各変異原性物質が単独で固定化された領域と、組み合わせて固定化された領域を設けた。
2 成長因子A
3 成長因子B
4 成長因子C
5 成長因子D
6 成長因子E
11 ベース
12 生物活性物質を含む液体
13 吐出手段
14 壁面
15 ステージ
16 傾斜した壁面
17、17’アジ化ナトリウムを仮固定した領域
18、18’アフラトキシンB1を仮固定した領域
19、19’アセトヘキサミドを仮固定した領域
20アセトヘキサミド溶液と前培養した菌懸濁液
21,21’ アジ化ナトリウムを固定化した領域
22,22’ アフラトキシンB1を固定化した領域
Claims (24)
- 基板に細胞を培養する培養領域の1以上を設けた細胞培養用基板において、
該培養領域が培養液を保持可能に構成されており、細胞に対して生物活性を有する第一の生物活性物質を配置する第一の領域および該生物活性物質と同じまたは異なる第二の生物活性物質を配置する第二の領域の両方を有する培養領域の1以上を有しており、
該第一の領域および該第二の領域は、各々の前記生物活性物質を前記培養液中に遊離可能に保持しているか、あるいは各々の前記生物活性物質を固定化してなり、且つ該第一の領域および該第二の領域は、前記培養領域の下端からの距離が互いに異なる位置に設けられている
ことを特徴とする細胞培養用基板。 - 各培養領域内の前記第一の領域及び前記第二の領域の少なくとも一方に、複数の生物活性物質が保持又は固定化されている請求項1に記載の細胞培養用基板。
- 前記第一の領域にある生理活性物質が、培養液と接した際に培養液中に遊離可能に該保持領域に保持されている請求項1または2に記載の細胞培養用基板。
- 各培養領域内の前記第一の領域及び前記第二の領域の少なくとも一方が複数設けられている請求項1〜3のいずれかに記載の細胞培養用基板。
- 前記第一の領域及び前記第二の領域に、生物活性物質の種類または複数の生理活性物質の組み合わせが異なる領域の組み合わせが1以上含まれている請求項1〜4のいずれかに記載の細胞培養用基板。
- 前記第一の領域及び前記第二の領域に、生物活性物質の密度が異なる領域の組み合わせが1以上含まれている請求項1〜5のいずれかに記載の細胞培養用基板。
- 前記培養領域が前記基板の表面に形成された凹部内に形成されている請求項1〜6のいずれかに記載の細胞培養用基板。
- 前記培養領域が壁状構造物により囲まれている請求項1〜6のいずれかに記載の細胞培養用基板。
- 前記第一の領域及び前記第二の領域の少なくとも一方に、前記基板表面に設けられた担持層を介して生物活性物質が保持または固定化されている領域が含まれている請求項1〜8のいずれかに記載の細胞培養用基板。
- 前記第一の領域は、前記培養領域の下端から所定の高さに設けられている請求項1〜9のいずれかに記載の細胞培養用基板。
- 基板に細胞を培養する培養領域の1以上を設けた細胞培養用基板において、
前記培養領域が培養液を保持可能に構成されており、
細胞に対して生物活性を有する第一の生物活性物質を配置してなる第一の領域および該生物活性物質と同じまたは異なる第二の生物活性物質を配置してなる第二の領域の両方を有する培養領域の1以上を有し、
前記第一の領域および前記第二の領域は、各々の前記生物活性物質を前記培養液中に遊離可能に保持しているか、あるいは各々の前記生物活性物質を固定化してなり、
前記第一の領域は、前記培養領域の下端から所定の高さに設けられており、同一培養領域内に、その下端からの距離が異なる位置に設けられた2以上の前記第一の領域を有する
ことを特徴とする細胞培養用基板。 - 前記第一の領域から、前記生物活性物質の徐放が可能、もしくは徐放性を付与した生物活性物質を遊離できることを特徴とする請求項1〜11のいずれかに記載の細胞培養基板。
- 前記培養領域が凹部中に設けられ、その壁面の少なくともひとつの面は、底部から上部に向かって傾斜しており、かつ該凹部の底面積より開口部の面積の方が広くなっている請求項1〜12のいずれかに記載の細胞培養用基板。
- 請求項1〜13のいずれかに記載の細胞培養用基板の製造方法であって、
前記第一の領域及び前記第二の領域の少なくとも1つへの生物活性物質の付与に液体吐出手段を用いることを特徴とする細胞培養用基板の製造方法。 - 前記液体吐出手段が、サーマルインクジェット方式による吐出手段である請求項14に記載の細胞培養用基板の製造方法。
- 前記液体吐出手段が、ピエゾインクジェット方式による吐出手段である請求項14に記載の細胞培養用基板の製造方法。
- 前記生物活性物質の固定を外部から固定用のエネルギーを加えて行う工程をさらに含む請求項14〜16のいずれかに記載の細胞培養用基板の製造方法。
- 基板に細胞を培養する培養領域の1以上を設けた細胞培養用基板において、
前記培養領域が培養液を保持可能に構成されており、細胞に対して生物活性を有する第一の生物活性物質を配置する第一の領域および該生物活性物質と同じまたは異なる第二の生物活性物質を配置する第二の領域の両方を有する培養領域の1以上を有しており、該第一の領域および第二の領域は、各々の前記生物活性物質を前記培養液中に遊離可能に保持しているか、あるいは各々の前記生物活性物質を固定化してなり、且つ該第一の領域および該第二の領域は、前記培養領域の下端からの距離が互いに異なる位置に設けられている細胞培養用基板を用いた細胞スクリーニング法であって、
前記培養領域に培養液を充填し、該培養領域中の固定化領域に固定された生物活性物質に培養液を接触させた状態で細胞を培養する工程と、
培養液を前記保持領域と接触させて該保持領域にある生物活性物質を培養液中に遊離させる工程と、
を有することを特徴とする細胞スクリーニング法。 - 培養液中に細胞のスクリーニングに必要な物質を補充する工程を有する請求項18に記載の細胞スクリーニング法。
- 細胞の形態変化を観察する工程を更に含む請求項18または19に記載の細胞スクリーニング法。
- 評価の際に細胞を染色する請求項20に記載の細胞スクリーニング法。
- 細胞内で合成された物質の定量を行う工程を含む請求項18〜21のいずれかに記載の細胞スクリーニング法。
- 細胞内に取り込まれた物質の定量を行う工程を含む請求項18〜21のいずれかに記載の細胞スクリーニング法。
- 放射線量測定、蛍光量測定、発光量測定および吸光度測定の少なくとも1種により前記物質の定量を行う工程を含む請求項22または23に記載の細胞スクリーニング法。
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Cited By (2)
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---|---|---|---|---|
WO2019039875A3 (ko) * | 2017-08-22 | 2019-07-11 | 한국생산기술연구원 | 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법 |
JP2020531019A (ja) * | 2017-08-22 | 2020-11-05 | コリア インスティチュート オブ インダストリアル テクノロジー | 3次元細胞培養のための培養容器およびこれを利用した3次元細胞共培養方法 |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4147235B2 (ja) * | 2004-09-27 | 2008-09-10 | キヤノン株式会社 | 吐出用液体、吐出方法、液滴化方法、液体吐出カートリッジ及び吐出装置 |
JP4689340B2 (ja) * | 2005-05-02 | 2011-05-25 | キヤノン株式会社 | 吐出用液体医薬組成物 |
JP5006626B2 (ja) * | 2005-12-01 | 2012-08-22 | キヤノン株式会社 | プローブ担体を用いた標的物質の検出方法および装置 |
EP2014762A1 (en) * | 2006-04-11 | 2009-01-14 | Ngk Insulators, Ltd. | Biological indicator and method for producing the same |
US8247215B2 (en) | 2007-01-26 | 2012-08-21 | Canon Kabushiki Kaisha | Apparatus for introducing substance into cells |
US20090097016A1 (en) * | 2007-10-10 | 2009-04-16 | Olympus Corporation | Culture vessel and cellular thickness measurement method |
JP5231909B2 (ja) * | 2008-09-17 | 2013-07-10 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 任意の分布形状と分布密度を有する分子または粒子の集団を同時に多種大量生成する方法とその方法に使用するマスク材 |
EP2370111B1 (en) | 2008-12-25 | 2014-11-05 | Canon Kabushiki Kaisha | Probe for a biological specimen and labelling method and screening method using the probe |
JP2013507931A (ja) | 2009-10-16 | 2013-03-07 | ユニバーシティ オブ メディスン アンド デンティストリー オブ ニュー ジャージー | 再生医療用途のための接着性骨髄幹細胞の閉鎖系統分離システム |
EP3224341B1 (en) | 2014-11-25 | 2021-05-19 | Corning Incorporated | Cell culture media extending materials and methods |
JP6559239B2 (ja) * | 2015-08-13 | 2019-08-14 | 富士フイルム株式会社 | 多能性幹細胞の培養方法、培養容器の製造方法、培養容器、及び細胞培養用の足場材料 |
CN109072152A (zh) * | 2016-03-31 | 2018-12-21 | 古河电气工业株式会社 | 细胞收纳芯片 |
CN110628700B (zh) * | 2019-10-14 | 2023-10-17 | 广东省中医院(广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院) | 一种用于筛选细胞培养条件的标准方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001096019A1 (fr) * | 2000-06-15 | 2001-12-20 | Moussa Hoummady | Systeme de distribution parallele et selective de micro-gouttelettes a haut rendement |
JP2002355026A (ja) * | 2001-03-29 | 2002-12-10 | Canon Inc | 細胞培養用の基体、その製造方法、それを用いた細胞培養法及び細胞培養装置 |
JP2003322633A (ja) * | 2002-05-01 | 2003-11-14 | Seiko Epson Corp | センサセル、バイオセンサ及びこれらの製造方法 |
JP2003322630A (ja) * | 2002-05-01 | 2003-11-14 | Seiko Epson Corp | バイオセンサ、バイオセンシングシステム、及びバイオセンシング方法 |
Family Cites Families (44)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4378428A (en) * | 1981-03-30 | 1983-03-29 | Baker Instruments Corporation | Method for carrying out non-isotopic immunoassays, labeled analytes and kits for use in such assays |
US5108926A (en) | 1987-09-08 | 1992-04-28 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Apparatus for the precise positioning of cells |
US4990075A (en) * | 1988-04-11 | 1991-02-05 | Miles Inc. | Reaction vessel for performing sequential analytical assays |
CA2023803C (en) | 1989-08-23 | 1999-05-18 | Takeshi Miyazaki | Method for measuring an immunologically active material and apparatus suitable for practicing said method |
EP0414224B1 (en) | 1989-08-23 | 1996-06-12 | Canon Kabushiki Kaisha | Method for measuring an immunologically active material and apparatus suitable for practising said method |
EP0416157A1 (de) * | 1989-09-07 | 1991-03-13 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Polarisator |
AU642444B2 (en) * | 1989-11-30 | 1993-10-21 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Reaction vessel |
US5380490A (en) | 1991-01-18 | 1995-01-10 | Canon Kabushiki Kaisha | Apparatus for measuring a test specimen |
JP3285609B2 (ja) | 1991-06-21 | 2002-05-27 | キヤノン株式会社 | 標識複合体、及びそれを用いる分析法 |
JP2683172B2 (ja) | 1991-10-01 | 1997-11-26 | キヤノン株式会社 | 検体測定方法及び検体測定装置 |
US5370842A (en) | 1991-11-29 | 1994-12-06 | Canon Kabushiki Kaisha | Sample measuring device and sample measuring system |
DE69333650T2 (de) * | 1992-02-19 | 2006-01-12 | The Public Health Research Institute Of The City Of New York, Inc. | Neue anordnungn von oligonukleotiden und ihr nutzen zum sortieren, isolieren, sequenzieren und manipulieren von nukleinsäuren |
US5587128A (en) * | 1992-05-01 | 1996-12-24 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Mesoscale polynucleotide amplification devices |
JP3247001B2 (ja) | 1992-12-21 | 2002-01-15 | キヤノン株式会社 | ピリリウム化合物を用いた2本鎖核酸の検出方法、ピリリウム化合物を含有するプローブ及びそれを用いた標的核酸の検出方法、新規ピリリウム化合物 |
CA2126391C (en) | 1993-09-13 | 2002-01-08 | Nobuko Yamamoto | Determination of nucleic acid by pcr, measurement of number of microbial cells, genes, or gene-copies by pcr, and measuring-kit employed for the same |
JP3368011B2 (ja) | 1993-10-04 | 2003-01-20 | キヤノン株式会社 | 核酸検出法 |
US5723331A (en) * | 1994-05-05 | 1998-03-03 | Genzyme Corporation | Methods and compositions for the repair of articular cartilage defects in mammals |
US5750346A (en) * | 1995-08-07 | 1998-05-12 | The Perkin-Elmer Corporation | Host organism capture |
DE69738996D1 (de) | 1996-05-30 | 2008-10-30 | Cellomics Inc | Miniaturisierte zellenanordnung und verfahren und vorrichtung zum screening mittels zellen |
SE9700384D0 (sv) * | 1997-02-04 | 1997-02-04 | Biacore Ab | Analytical method and apparatus |
US6171856B1 (en) * | 1997-07-30 | 2001-01-09 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions relating to no-mediated cytotoxicity |
US6200814B1 (en) * | 1998-01-20 | 2001-03-13 | Biacore Ab | Method and device for laminar flow on a sensing surface |
US7410798B2 (en) * | 2001-01-10 | 2008-08-12 | Geron Corporation | Culture system for rapid expansion of human embryonic stem cells |
US6288840B1 (en) * | 1999-06-22 | 2001-09-11 | Moxtek | Imbedded wire grid polarizer for the visible spectrum |
US6294392B1 (en) * | 1999-07-21 | 2001-09-25 | The Regents Of The University Of California | Spatially-encoded analyte detection |
WO2001087487A2 (en) * | 2000-05-15 | 2001-11-22 | Tecan Trading Ag | Bidirectional flow centrifugal microfluidic devices |
US20020019010A1 (en) | 2000-07-07 | 2002-02-14 | Stockwell Brent R. | Methods for identifying combinations of entities as therapeutics |
AU2001286759A1 (en) * | 2000-08-25 | 2002-03-04 | Genospectra, Inc. | Three-dimensional probe carriers |
DE10113550A1 (de) * | 2001-03-20 | 2002-10-02 | Infineon Technologies Ag | Verfahren zum Erfassen von makromolekularen Biopolymeren mittels einer Elektrodenanordnung |
EP1248108B1 (en) | 2001-03-29 | 2011-08-31 | Canon Kabushiki Kaisha | method of cellular screening and substrates suitable for it |
DE60233542D1 (de) | 2001-03-29 | 2009-10-15 | Canon Kk | Träger für Zellkulturen, seine Herstellung, Methode zur Kultivierung von Zellen |
JP4378069B2 (ja) | 2001-03-29 | 2009-12-02 | キヤノン株式会社 | 細胞スクリーニング基板とその製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法および細胞スクリーニング装置 |
US20040209340A1 (en) * | 2001-04-14 | 2004-10-21 | Schindler Johannes Georg | Enzymatic degradation chains |
ATE398775T1 (de) * | 2001-05-09 | 2008-07-15 | Axis Shield Asa | Testvorrichtung |
JP4755368B2 (ja) | 2001-07-24 | 2011-08-24 | 株式会社セルシード | 高密度細胞アレイ用基板、製造法、及びその利用方法 |
AU2003302263A1 (en) * | 2002-12-26 | 2004-07-29 | Meso Scale Technologies, Llc. | Assay cartridges and methods of using the same |
JP4464664B2 (ja) * | 2003-06-13 | 2010-05-19 | 独立行政法人理化学研究所 | 生体分子マイクロアレイ用基板、生体分子マイクロアレイ、相互作用促進用装置および方法、ならびに、相互作用の検出方法 |
JP2005172844A (ja) * | 2003-12-05 | 2005-06-30 | Enplas Corp | ワイヤグリッド偏光子 |
EP1694812A4 (en) | 2003-12-16 | 2008-11-12 | Canon Kk | BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCE TRANSFER SHEET, CELL CULTURE FORM FOR A CELL CULTURE PLATE AND BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCE TRANSFER SHEET, RELATIVE PRODUCTION METHOD, AND CELL CULTURE CONDITION SCREENING METHOD USING SAME |
JP4147235B2 (ja) | 2004-09-27 | 2008-09-10 | キヤノン株式会社 | 吐出用液体、吐出方法、液滴化方法、液体吐出カートリッジ及び吐出装置 |
JP2006126338A (ja) * | 2004-10-27 | 2006-05-18 | Nippon Sheet Glass Co Ltd | 偏光子およびその製造方法 |
US20070217008A1 (en) * | 2006-03-17 | 2007-09-20 | Wang Jian J | Polarizer films and methods of making the same |
US20070242352A1 (en) * | 2006-04-13 | 2007-10-18 | Macmaster Steven William | Wire-grid polarizers, methods of fabrication thereof and their use in transmissive displays |
US7981664B1 (en) * | 2008-05-22 | 2011-07-19 | Maven Technologies, Llc | Apparatus and method for performing ligand binding assays on microarrays in multiwell plates |
-
2003
- 2003-12-16 JP JP2003418560A patent/JP4632400B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-12-13 WO PCT/JP2004/018962 patent/WO2005059092A1/en active Application Filing
- 2004-12-13 US US10/582,099 patent/US8323973B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-02-23 US US12/711,212 patent/US8148153B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001096019A1 (fr) * | 2000-06-15 | 2001-12-20 | Moussa Hoummady | Systeme de distribution parallele et selective de micro-gouttelettes a haut rendement |
JP2002355026A (ja) * | 2001-03-29 | 2002-12-10 | Canon Inc | 細胞培養用の基体、その製造方法、それを用いた細胞培養法及び細胞培養装置 |
JP2003322633A (ja) * | 2002-05-01 | 2003-11-14 | Seiko Epson Corp | センサセル、バイオセンサ及びこれらの製造方法 |
JP2003322630A (ja) * | 2002-05-01 | 2003-11-14 | Seiko Epson Corp | バイオセンサ、バイオセンシングシステム、及びバイオセンシング方法 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2019039875A3 (ko) * | 2017-08-22 | 2019-07-11 | 한국생산기술연구원 | 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법 |
JP2020531019A (ja) * | 2017-08-22 | 2020-11-05 | コリア インスティチュート オブ インダストリアル テクノロジー | 3次元細胞培養のための培養容器およびこれを利用した3次元細胞共培養方法 |
JP7046160B2 (ja) | 2017-08-22 | 2022-04-01 | コリア インスティチュート オブ インダストリアル テクノロジー | 3次元細胞培養のための培養容器およびこれを利用した3次元細胞共培養方法 |
US11802263B2 (en) | 2017-08-22 | 2023-10-31 | Korea Institute Of Industrial Technology | Culture vessel for three-dimensional cell cultivation and three-dimensional cell co-cultivation method using same |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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US8323973B2 (en) | 2012-12-04 |
US8148153B2 (en) | 2012-04-03 |
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