JP2021531780A - 3d印刷のためのバイオインク - Google Patents
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Abstract
Description
この出願は、2018年7月24日に出願された「3D印刷用のバイオインク」と題されたオーストラリア仮特許出願第2018902674号からの優先権を主張し、その全内容は相互参照により本明細書に組み込まれる。
マレイミド含有ポリマーを含むポリマーバイオインクを提供する工程;
少なくとも二つのチオール官能基を有するビスチオール含有架橋剤を含む活性化剤を提供する工程;および
ポリマーバイオインクおよび活性化剤を印刷して3Dプリントヒドロゲルを形成する工程。
マレイミド含有ポリマーを含むポリマーバイオインク;および
少なくとも二つのチオール官能基を有するビスチオール含有架橋剤を含む活性化剤。
以下は、本明細書を理解するのに役立ちうる、当技術分野で使用される用語のいくつかの定義である。これらは一般的な定義として意図されており、本発明の範囲をそれらの用語のみに限定するものではなく、以下の説明をよりよく理解するために提示されている。
本技術のポリマーバイオインクは、マレイミド含有ポリマー、または組み合わせ、または二つ以上のマレイミド含有ポリマーを含む。マレイミド含有ポリマーは、ヒドロゲルの形成のためのマレイミド反応基を含む任意のポリマーであってもよい。遊離マレイミド基を含むポリマーもヒドロゲル中に存在してもよい。
本技術の活性化剤は、ビスチオール含有架橋剤を含む。ビスチオール含有架橋剤は、本明細書でビスチオールと呼ばれる、少なくとも2つのチオール基を含む任意の化合物であってもよい。好ましくは、チオール基は、末端チオール基である。
本技術の3Dプリントヒドロゲルは、ビスチオール含有架橋剤を使用して架橋されたマレイミド含有ポリマーを含む。一つの実施形態では、3Dプリントヒドロゲルは細胞を含む。
マレイミド含有ポリマーを含むポリマーバイオインクを提供する工程;
ビスチオール含有架橋剤を含む活性化剤を提供する工程;および
ポリマーバイオインクおよび活性化剤を3D印刷して、3Dプリントヒドロゲルを形成する工程。
本技術の3Dプリントヒドロゲルは、特定の生物学的特性を導入するために、1つまたは複数の生理活性分子によって修飾されていてもよい。たとえば、3Dプリントヒドロゲルの生物学的特性は、タンパク質、ペプチド(たとえば、MMP応答性ペプチド)、化学誘引物質、成長因子、有機色素、蛍光色素、薬剤、治療薬、抗体、小分子阻害剤、キナーゼ阻害剤、ホスファターゼ阻害剤、抗原、病原体、血小板、サイトカイン、栄養素(たとえば、単糖および多糖)、馴化培地、抗生物質、抗ウイルス、RNAおよび関連するバリアント(たとえば、siRNA、mRNA)等を組み込むことによって改変されうる。マレイミド含有ポリマー、ビスチオール含有架橋剤、またはそれらの任意の組み合わせに共有結合することにより、1つまたは複数の生理活性分子を3Dプリントヒドロゲルに組み込むことができる。ナノ粒子も、3Dプリントヒドロゲルに組み込むことができる。
細胞は、本技術の3D印刷されたヒドロゲルに組み込まれうる。細胞培養培地もヒドロゲルに組み込んで、細胞の生存率を維持したり、増殖および細胞分裂を促進したりすることもできる。細胞および/または細胞培養培地は、それらをポリマーバイオインクまたは活性化剤、あるいはその両方に組み込むことによって、ヒドロゲルに組み込むことができる。
本技術のポリマーバイオインクおよび活性化剤は、ドロップオンデマンド(DOD)バイオプリンティングに好適であり、それにより、バイオプリンティングは、ポリマーバイオインクおよび活性化剤の個別の液滴の生成に基づいており、とりわけ、サーマルインクジェット、ピエゾインクジェット、マイクロバルブベースのバイオプリンティングを含みうる。他のドロップオンデマンド印刷技術と同様に、ポリマーバイオインクおよび活性剤はバイオプリンターカートリッジ内で液体でなければならない。さらに、ポリマーバイオインクおよび活性化剤は、バイオプリンティングカートリッジに保存したときに高い細胞生存率を維持するために、生体適合性材料で製造する必要がある。
本技術の3Dプリントヒドロゲルは、様々なin vitro用途を有しうる。一例では、本技術の3Dプリントヒドロゲルを使用して、細胞運動性、細胞遊走、細胞浸潤、経内皮遊走、上皮−間葉移行、間葉−上皮移行、スフェロイドの形成および増殖、細胞分化(たとえば、幹細胞分化、細胞分化マーカーのモニタリング)、細胞死(たとえば、細胞アポトーシス、細胞ネクローシス)、細胞オートファジー、細胞増殖、細胞代謝、タンパク質代謝回転、タンパク質分布および場所、細胞シグナル伝達および下流イベント、薬剤有効性、薬力学、薬物作用メカニズム、薬物受容体媒介輸送、薬物内在化メカニズム、バイオマーカー評価、細胞間接合、細胞間シグナル伝達および下流イベント、細胞形態、細胞接着、遺伝子発現、タンパク質発現、細胞ホーミング、細胞サイクルの調節および制御、サイトカイン放出、インスリン産生、タンパク質分泌および細胞内輸送(trafficking)および輸送(transport)、受容体−リガンド結合、抗体結合、抗体特異性、タンパク質リン酸化、プロテオソーム機能、酵素機能(たとえば、酵素阻害)、免疫調節、クローン形成能、酸化ストレス、タンパク質フォールディング、細胞骨格、オルガネラの形態および機能(たとえば、ミトコンドリア、葉緑体、ペルオキシソーム、分泌小胞、液胞、リボソーム、核、リソソーム、繊毛、小胞体、ゴルジ)、膜輸送、低酸素症、血管新生、創傷治癒、神経突起(成長または形成)、キナーゼ機能、ホスファターゼ機能、葉状仮足(lamellipodial)形成およびダイナミクス、焦点接触/接着形成、ダイナミクスおよびシグナル伝達、細胞センシング、および機械的シグナル伝達を含むがこれらに限定されない生物学的表現型の試験のためのアッセイを調製することができる。
4アームPEGマレイミド(PEG−Mal、分子量 5、10、および20kDa、JenKem)、PEGビスチオール(分子量 1kDa、Sigma Aldrich)、ゼラチン(ウシ、魚、またはブタ由来、Sigma Aldrich)、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC、Sigma Aldrich)、N−ヒドロキシスルホスクシンイミド(Sulfo−NHS、Sigma Aldrich)、水酸化ナトリウム(NaOH)、CRGDS、CIKVAV、CYIGSR、GCRDGPQGIWGQDRCG、GCRDPLGLDRCG、およびGCIPVSLRSGCG(>90%、Genscript)、塩化カルシウムを含まないリン酸緩衝液(PBS、Gibco)、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM、Gibco)、カルシウムを含まないDMEM(Gibco)、ピルビン酸ナトリウム(Gibco)、L−グルタミン(Gibco)、トリプシン(Sigma Aldrich)、0.22μmシリンジフィルター(ポリエーテルスルホン膜、Merck Millipore)T75およびT150フラスコ(Corning)、15mL遠心管(Corning)、エタノール(Sigma Aldrich)を受け取ったまま使用した。
実施例1a −PBSにおけるポリマーバイオインクの調製
3種類のPEG−MalポリマーバイオインクをPBS緩衝液中で調製した。
PEG−Malポリマーバイオインクは、PEG−Mal(7.5重量%)をPBS緩衝液に室温で混合することにより調製した。 完全に溶解した後、溶液を0.22μmシリンジフィルターで無菌的に濾過した。
RGD含有PEG−Mal(PEG−RGD)ポリマーバイオインクは、CRGDSを、PBS緩衝液中のPEG−Mal(10重量%で)と室温で30分間混合することによって調製し、合計5mMのRGD濃度を得た。反応の完了は、遊離チオールが記録されていないときにエルマンアッセイによって確認した。反応生成物は、10重量%および5mMのRGD濃度のPEG−RGDを含み、PBSに溶解した。完全に溶解した後、RGD濃度と等モル濃度のNaOHを溶液に加えて、溶液のpHを7.4に上げた。この溶液を、0.22μmシリンジフィルターで無菌的に濾過して滅菌した。
RGD、IKVAVおよびYIGSR(PEG−トリペプチド)ポリマーバイオインクを含むPEG−Malは、CRGDS、CIKVAVおよびCYIGSR(所望のモル濃度で)をPBS緩衝液中のPEG−Mal(15重量%で)と混合することによって調製した。室温で30分間溶液を溶解し、15重量%のPEG−トリペプチドおよび0.67mMのRGD、YIGSR、およびIKVAVを得た。完全に溶解した後、1M NaOHを滴下して溶液のpHを7.4に上げた。 次に、得られた溶液を、0.22μmシリンジフィルターで無菌的に濾過することにより滅菌した。
細胞培養培地中のRGD含有PEG−Malポリマーバイオインクは、PBS溶液の代わりに、印刷される細胞に適切な細胞培養溶液を使用して、実施例1aの手順に従って調製した。得られたポリマーバイオインクを、濾過(0.22μmフィルター)により無菌的に滅菌した。
実施例2a −PBS中での活性化剤の調製
活性化剤は、ジチオスレイトール(DTT)、PEGビスチオール、GCIPVSLRSGCG、およびGCRDPLGLDRCG、またはそれらの様々な組み合わせを、相補的ポリマーバイオインクのマレイミド濃度に等モルの総チオール濃度でPBS中で混合することによって調製した。得られた溶液を、0.22μmシリンジフィルターで無菌的に濾過して滅菌した。
活性化剤は、印刷される細胞に適切な細胞培養溶液中で、相補的バイオインクのマレイミド濃度に等モルの総チオール濃度で、ジチオスレイトール(DTT)、PEGビスチオール、GCIPVSLRSGCG、およびGCRDPLGLDRCGを混合することによって調製した。得られた溶液を無菌的に濾過(0.22μmフィルター)により滅菌した。
SK−N−BE(2)(ヒト神経芽細胞腫)、KrasG12Dおよびp53R172H(膵管腺がん)、MCF7(ヒト乳がん)、およびU87vIII(ヒト神経膠芽腫)細胞を、10%ウシ胎仔血清(FCS)/DMEMで37℃/5% CO2で個別に維持した。ヒト非小細胞肺がんH460細胞は、ロズウェルパーク記念研究所(RPMI)1640培地および10%FCSで37℃/5% CO2で培養された。細胞株は定期的にスクリーニングされ、マイコプラズマ汚染はなかった。
実施例3に従って培養したSK−N−BE(2)、KrasG12Dおよびp53R172H、H460、およびU87vIII細胞を、トリプシン/PBSを使用してT75フラスコから収集し、遠心分離を使用してペレット化した。細胞を、PEG−Mal及びPEG−RGDを10重量%および5mM RGD濃度で含むポリマーバイオインクに再懸濁して、細胞濃度を2×106細胞/mLにした。サンプルを、印刷された対照および印刷されていない対照の2つの群に分けた。印刷されたサンプルは3Dバイオプリンターを通過し、室温で30分間無菌状態に保たれた。0.4%トリパンブルー染色(Invitrogen)を使用して死細胞を同定した。細胞数は、各サンプルの生細胞と死細胞の数を数えることによって得られた。細胞生存率は、生細胞の総数を細胞の総数(生+死)で割ることによって決定された。
特定の培養密度での目的の培養細胞を、実施例4の手順に従って収集した。細胞ポリマーバイオインクを構成するために、収集した細胞を、適切な細胞濃度で実施例1(a)または1(b)に従って調製した滅菌ポリマーバイオインクに再懸濁し、2×106細胞/mLの1mLの滅菌ポリマーバイオインクを得た。
特定の培養密度での目的の培養細胞を、実施例4の手順に従って収集した。細胞活性化剤を構成するために、収集した細胞を、適切な細胞濃度で実施例2(a)または2(b)に従って調製した滅菌活性化剤に再懸濁した。
生/死染色を使用して、ヒドロゲルカプセル化細胞の生存率をモニターした。DMEM中のカルセインAM(1μLmL-1)およびエチジウムホモダイマー−I(4μLmL-1)を使用して、それぞれ生細胞と死細胞とを染色した。実施例5に従って調製された細胞ポリマーバイオインクを使用して、カプセル化された細胞を有するヒドロゲルを3Dバイオプリンティングした。必要なインキュベーション期間後、共焦点蛍光顕微鏡分析の前に、バイオプリントヒドロゲルを生/死染色とともに37℃/5% CO2で少なくとも2時間インキュベートした。
5mM RGD(10重量%)を有する4アームPEG−Malヒドロゲルから調製され(実施例1(a)に従って調製された)、PEGビスチオールおよびMMP2感受性ビスシステインペプチドGCIPVSLRSGCG(50:50チオールモル濃度で混合)(実施例2(a)に従って調製された)で架橋されたヒドロゲルについて機械的特性を研究した。
本実施例で使用される3Dバイオプリンターの構成要素は、3軸運動制御ステージ、ドロップオンデマンド液滴分配システム、および流体リザーバー内の圧力を制御するための圧力調整器を含む。液滴分配システムおよび3軸ステージは、層流キャビネット等の無菌チャンバー内に収容することができる。印刷プラットフォームは、マイクロウェルプレートやペトリ皿等、さまざまな種類の基板に印刷するためのアダプターを含む。印刷プラットフォームは、細胞増殖を補助するために37℃に加熱することができる。
3Dバイオプリンターは、生物学的アッセイを印刷するために開発されたカスタムソフトウェアを介して制御された。このソフトウェアは、グラフィカルユーザーインターフェイス(GUI)を含んでおり、Pythonプログラミング言語で記述されている。GUIを介して、エンドユーザーはさまざまなアッセイ印刷ルーチンを選択し、液滴間隔や液滴体積などのアッセイパラメーターを変更できる。ユーザーは、液滴ディスペンシングシステムの空間位置を手動で制御し、液滴のカスタムパターンを作成することもできる。ソフトウェアの追加機能は、液滴ディスペンシングシステムをプライミングおよびパージするためのルーチンを含む。
滅菌ポリマーバイオインクおよび活性化剤を、印刷前に室温に加熱した。目的の細胞を、ポリマーバイオインクおよび/または活性化剤と所望の細胞濃度で混合した。次に、すべての溶液をバイオプリンターのサンプルトレイにロードした。バイオプリンティングは、Rastrum(商標)モジュラー3Dバイオプリンター(Inventia Life Science(ILS))を使用して行った。構造は、Rastrum(商標)ソフトウェア(ILS)を使用して設計した。2つの異なるバイオプリントサンプルを印刷した;直径約6.35cm、厚さ400μmの円筒形構造と直径100μmの半球構造で、直径6.35cm、厚さ100μmの不活性ゲル層の上にある。ポリマーバイオインクと活性化剤の両方の溶液は、20〜100kPaの印刷圧力で印刷された。バイオプリンティングプロセスの前に、Rastrum(商標)バイオプリンターは自動滅菌およびプライミングステップを実施した。
チオール−マレイミド架橋PEGヒドロゲル内の三次元的にカプセル化されたがん細胞の複数のサンプルを、ILS 3Dバイオプリンターを使用してバイオプリントした。具体的には、がん細胞、ポリマーバイオインク、および活性化剤の同時送達が、バイオプリンターを使用して行われ、バイオプリンティングされたヒドロゲル内のin situ細胞カプセル化の迅速な作成を達成した。
T150フラスコ中の80%培養密度の膵管腺がん細胞KrasG12Dおよびp53R172Hを3mLのPBSで洗浄した。過剰なPBSを吸引した後、3mLのトリプシンを添加し、フラスコを37℃でインキュベートして、フラスコ表面から細胞を5分間解離させた。続いて、DMEMとFCSを10v/v%で混合して調製した7mLの組織培養培地を添加し、解離した細胞を15mLチューブに移動した。細胞分散液を400gで3分間遠心分離した。上清を廃棄し、細胞ペレットを5mLの培地に再懸濁した。次に、等量の細胞懸濁液とトリパンブルー染色を混合して細胞濃度を決定することにより、細胞計数を行った。
組み込まれたCorningによって供給された96ウェルプレートは、受け取ったままで使用された。内容物の無菌性を維持するために、無菌包装を無菌環境で開封した。
ポリマーバイオインクを調製するために、PEG−Mal(0.150g)を1.5mLのPBSに溶解して、10重量%のポリマーバイオインクを得た。PEG−RGDを組み込む場合は、CRGDS(1.34mg)を溶液に加え、30分間撹拌して、5mM RGDを含む10重量%PEG−Mal/PEG−RGDポリマーバイオインクを得た。この溶液に、2.5μLの1M NaOHを添加し、溶液のpHを7.4に上げた。次に、溶液を無菌環境下で0.22μmシリンジフィルターで濾過した。
非MMPおよびMMP感受性ヒドロゲルの両方を生成するために、2つの異なる活性化剤を調製した。2つの活性化剤は、PEGビスチオール(0.01975g)のみ、またはPEGビスチオール(0.0096g)とGCIPVSLRSGCG(0.0111g)の組み合わせのいずれかから調製し、それぞれ1mL PBSに溶解して、ポリマーバイオインクのマレイミド濃度に等モルの総チオール濃度の活性化剤を得た。次に、各溶液を無菌環境下で0.22μmシリンジフィルターで濾過した。
細胞ポリマーバイオインクおよび活性化剤を、バイオプリンターに接続された関連するカートリッジにロードした。細胞ポリマーバイオインクと活性化剤の両方を0.007”ノズルに接続し、10Psiで動作させた。
2×106細胞/mLの濃度の細胞ポリマーバイオインクをこの実験で使用した。
95%以上の細胞生存率が得られた。
細胞培養
T75フラスコ中の80%培養密度のMCF7細胞を3mLのPBSで洗浄した。過剰なPBSを吸引した後、1mLのトリプシンを添加し、フラスコを37℃でインキュベートして、フラスコ表面から細胞を3分間解離させた。続いて、DMEMとFCSを10v/v%で混合して調製した7mLの組織培養培地を添加し、解離した細胞を15mLチューブに移動した。細胞分散液を400gで3分間遠心分離した。上清を廃棄し、細胞ペレットを5mLの培地に再懸濁した。次に、等量の細胞懸濁液とトリパンブルー染色を混合して細胞濃度を決定することにより、細胞計数を行った。
組み込まれたCorningによって供給された96ウェルプレートは、受け取ったままで使用された。内容物の無菌性を維持するために、無菌包装を無菌環境で開封した。
ポリマーバイオインクを調製するために、PEG−Mal(0.1125g)を1.5mLのPBSに溶解して、7.5重量%のポリマーバイオインクを得た。PEGトリペプチドは、CRGDS(0.54mg)、CIKVAV(0.64mg)、CYIGSR(0.70mg)、およびPEG−Mal(0.225g)を1.5mLのPBSで30分間混合して、15重量%のPEG−トリペプチドおよび0.67mMのRGD、YIGSR、およびIKVAVを得た。1M NaOHを滴下して溶液のpHを7.4に上げた。両方の溶液を、0.22μmシリンジフィルターで無菌的に濾過した。
非MMPおよびMMP感受性ヒドロゲルの両方を生成するために、2つの異なる活性化剤を調製した。2つの活性化剤は、PEGビスチオール(0.0015g)、またはGCRDPLGLDRCG(0.019g)のいずれかから調製し、それぞれ1mL PBSに溶解して、それぞれブランクバイオインクおよびPEGトリペプチドのマレイミド濃度に等モルの総チオール濃度の活性化剤を得た。次に、MMP感受性活性化剤溶液を1M NaOHを滴下してpHを7.4に上げた。次に、各溶液を無菌環境下で0.22μmシリンジフィルターで濾過した。
ポリマーバイオインク、PEGビスチオール活性化剤、およびMMP感受性細胞活性化剤を、バイオプリンターに接続された関連するカートリッジにロードした。ポリマーバイオインク、PEGビスチオール活性化剤、およびMMP感受性細胞活性化剤をそれぞれ0.007”ノズルに接続し、25〜30kPaで動作させた。
1×107細胞/mLの濃度の細胞活性化剤をこの実験で使用した。
95%以上の細胞生存率が得られた。
膵がんの細胞配列に対するヒドロゲル微小環境の効果を、本技術のポリマーバイオインクおよび活性化剤を使用して試験した。膵がん細胞は、その生物学的特性が細胞培養環境に大きく依存しているために選択された。直径6mm、高さ0.4mmのヒドロゲルサンプルを96ウェルプレートにバイオプリンティングすることにより、2つの異なる細胞配列を試験した。最初に、細胞をヒドロゲルの上に3Dバイオプリントし、次に、細胞をヒドロゲルの内側に印刷しました(すなわち、カプセル化した)。試験した両方の細胞配置において、生細胞が観察された。さらに、ヒドロゲルへの突起を形成する細胞の能力によって表されるように、細胞−ゲル相互作用が目に見えた。全体として、生体適合性および生体関連の3Dアッセイは、PEGベースのポリマーバイオインクで正常にバイオプリントされました。
細胞ポリマーバイオインクは、採取した膵管腺がん細胞(KrasG12Dおよびp53R172H)および3Dバイオプリンティング用の5mM RGDポリマーバイオインクを備えた4アームPEG−Mal(10kDa)から調製した。膵がん細胞は、推定5,000細胞/ウェルを播種するのに適切な濃度で細胞ポリマーバイオインクに分散された。
膵管腺がん細胞(KrasG12Dおよびp53R172H)を、PEG−RGDを含まないポリマーバイオインクに2×106細胞/mLで分散させて、細胞ポリマーバイオインクおよび細胞ポリマーバイオインクを、MMP2感受性ペプチドを含まない活性化剤と一緒に印刷した。in situカプセル化は、96ウェルプレート上のPEGビスチオール活性化剤を用いて細胞バイオインクを直接3Dバイオプリンティングすることによって達成された。
膵管腺がん細胞(KrasG12Dおよびp53R172H)を2×106細胞/mLで細胞ポリマーバイオインクに分散させ、MMP2感受性ペプチド活性化剤(50:50チオール濃度比で)と一緒に印刷した。in situカプセル化は、96ウェルプレート上にPEGビスチオールおよびMMP2活性化剤(MMP−2 activator)を使用して細胞ポリマーバイオインクを直接3Dバイオプリンティングすることによって達成した。MMP2活性化剤(MMP−2 activator)を使用して、細胞浸潤を可能にした。
細胞活性は、3日間のインキュベーション後、明視野顕微鏡下での細胞形態の観察を介して確認された。インキュベーション期間後、単一のMCF7細胞の凝集が見られ、あらかじめ決められたゲル領域に複数のスフェロイドが形成された。これは、個々のMCF7細胞がヒドロゲル内で互いに移動できることを示している。
魚皮由来のゼラチン(1g)を、40℃で20mLの2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)緩衝液に溶解した。別の容器に、6−マレイミドヘキサン酸(MHA; 0.211g)、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC、1:20 EDC:MHAモル比で)、およびN−ヒドロキシスクシンイミド(NHS、1:2 NHS:EDCモル比で)を1mLのMESバッファーに溶解し、20分間撹拌して、カルボン酸(COOH)基を活性化した。次に、活性化されたCOOH基の溶液をゼラチン溶液に移動し、反応を24時間進行させた。得られた溶液を、10mM塩酸(HCl)および1重量%塩化ナトリウム(NaCl)に対する2日間の透析、続いて10mM HClに対する1日間の透析によって精製した。次に、精製ゼラチン溶液を凍結乾燥して、マレイミド修飾魚ゼラチンを得た。
ブタの皮膚由来のゼラチン(ゲル強度300、タイプA、1g)を、40℃で20mLのMES緩衝液に溶解した。別の容器で、MHA(0.139g)、EDC(1:20 EDC:MHAモル比で)およびN−ヒドロキシスクシンイミド(NHS、1:2 NHS:EDCモル比で)を1mL MESバッファーに溶解し、20分間撹拌して、COOH基を活性化した。次に、活性化されたCOOH基の溶液をゼラチン溶液に移動し、反応を24時間進行させた。得られた溶液を、10mM HClおよび1重量% NaClに対する2日間の透析、続いて10mM HClに対する1日間の透析によって精製した。次に、精製ゼラチン溶液を凍結乾燥して、マレイミド修飾ブタゼラチンを得た。
実施例15および16で合成された、ブタおよび冷水魚の皮膚の両方由来のマレイミド修飾ゼラチンを、それぞれ20重量%のPBSに溶解して、ポリマーバイオインクを得た。各溶液のpHを1M NaOHでpH7.4に中和した。活性化剤を調製するために、マレイミドモル濃度と等しいSHモル濃度のPEGビスチオールをPBSに溶解した。ゲル化は、等量の各ポリマーバイオインクと活性化剤とを混合することによって達成された。
基板
Thermofisherによって供給された細胞培養皿を、96ウェルプレートの寸法を模倣する標的グリッドでエッチングした。
ポリマーバイオインクを調製するために、PEG−Mal(0.15g)を1.5mLのPBSに溶解して、10重量%のポリマーバイオインクを得た。溶液を0.22μmシリンジフィルターで無菌的に濾過した。
コラーゲン含有活性化剤は、GCRDPLGLDRCG(0.01g)を0.5mLのPBSに混合することによって調製された。続いて、0.5mLのI型ウシコラーゲン(3.1mg)を活性化剤溶液に混合して、コラーゲン含有MMP活性化剤を得た。続いて、1M NaOHを滴下することにより、溶液のpHをpH7.4に調整した。次に、溶液を0.22μmシリンジフィルターで無菌的に濾過した。
ポリマーバイオインクおよびコラーゲン含有MMP活性化剤を、バイオプリンターに接続された適切なカートリッジにロードした。ポリマーバイオインクと活性化剤の両方が0.007”ノズルに接続され、25〜30kPaで動作した。
得られたヒドロゲル構造を、USBデジタル顕微鏡を使用して画像化した。
コラーゲン含有ポリマーバイオインクは、1:1のv/v比で、PBS中の10重量%のPEG−MalとI型ウシコラーゲンとを混合することによって調製した。1M NaOH溶液を滴下することにより、溶液のpHを7.4に上げた。マレイミド濃度に対して等モルのチオールを含むPEGビスチオール活性化剤をPBSで調製した。収集したヒト肺線維芽細胞(MRC−5)細胞をペレット化し、コラーゲン含有ポリマーバイオインクに再懸濁した。PEGヒドロゲルは、最初にポリマーバイオインクをウェルプレートに移動し、続いて等量の細胞含有活性化剤を同じウェルに移動ことによって調製した。次に、100μLのDMEM+10v/v% FBSを各ウェルに添加し、サンプルを6日間インキュベートし、0、3、および6日目に明視野画像を撮影して細胞活性をモニターした。
1. Caliari, S. R.; Burdick, J. A., A practical guide to hydrogels for cell culture. Nature Methods 13, 405 (2016).
2. Murphy, S. V.; Atala, A., 3D bioprinting of tissues and organs. Nature Biotechnology 32, 773 (2014).
3. Donderwinkel, I.; van Hest, J. C. M.; Cameron, N. R., Bio-inks for 3D bioprinting: recent advances and future prospects. Polymer Chemistry 8, 4451-4471 (2017).
4. Jungst, T.; Smolan, W.; Schacht, K.; Scheibel, T.; Groll, J., Strategies and Molecular Design Criteria for 3D Printable Hydrogels. Chemical Reviews 116, 1496-1539 (2016).
5. Lowe, S. B.; Tan, V. T. G.; Soeriyadi, A. H.; Davis, T. P.; Gooding, J. J., Synthesis and High-Throughput Processing of Polymeric Hydrogels for 3D Cell Culture. Bioconjugate Chemistry 25, 1581-1601 (2014).
6. Gao, G.; Hubbell, K.; Schilling, A. F.; Dai, G.; Cui, X., Bioprinting Cartilage Tissue from Mesenchymal Stem Cells and PEG Hydrogel. In 3D Cell Culture: Methods and Protocols, Koledova, Z., Ed. Springer New York: New York, NY, 2017; pp 391-398.
7. Gao, G.; Yonezawa, T.; Hubbell, K.; Dai, G.; Cui, X., Inkjet-bioprinted acrylated peptides and PEG hydrogel with human mesenchymal stem cells promote robust bone and cartilage formation with minimal printhead clogging. Biotechnology Journal 10, 1568-1577 (2015).
Claims (34)
- 少なくとも二つのチオール官能基を有するビスチオール含有架橋剤を使用して架橋されたマレイミド含有ポリマーから形成された3Dプリントヒドロゲル。
- マレイミド含有ポリマーは、フルクトース、スクロース、またはグルコースモノマーを含有するポリマーを含む、マレイミド含有多糖類;ポリ(エチレングリコール)(PEG)マレイミド、ポリ(メタクリル酸ヒドロキシエチル)(PHEMA)マレイミド、ポリ(ε−カプロラクトン)(PCL)マレイミド、ポリ(ビニルアルコール)(PVA)マレイミド、ポリ(ビニルピロリドン)(PVP)マレイミド、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)(NIPAAM)マレイミド、ポリ(フマル酸プロピレン)(PPF)マレイミド、ポリ(エチレンイミン)(PEI)マレイミド、ポリ(3−メタクリルアミドプロピル)トリメチルアンモニウム(PMAETMA)マレイミド、ポリ(L−リジン)(PLL)マレイミド、ポリ(アクリル酸)(PAA)マレイミド、ポリ(スチレンスルホナート)(PSS)マレイミド、ポリ(アクリル酸−stat−ジメチルアミノエチルメタクリルアミド)(P(AA−stat−DMAEMA))マレイミド、およびポリ(メタクリル酸アルギニン)マレイミド、またはその誘導体を含む、合成ポリマー;ゼラチンマレイミド(gelatin maleimide)、セルロースマレイミド(cellulose maleimide)、ヒアルロン酸マレイミド、およびアルギン酸マレイミドを含む、マレイミド含有バイオポリマー;アデニン、チアミン、グアニン、および/またはシトシン反復単位を含むマレイミド含有核酸塩基ポリマー;およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項1に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- マレイミド含有ポリマーはPEGマレイミドを含む、請求項2に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- マレイミド含有ポリマーはゼラチンマレイミド(gelatin maleimide)を含む、請求項2に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記ビスチオール含有架橋剤は、合成ポリマー、バイオポリマー、小分子、生理活性分子、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記合成ポリマーは、PEGビスチオール(PEG−bis−thiol)、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)ビスチオール(NIPAAMビスチオール)、ポリ(アクリル酸)ビスチオール、ポリ(メタクリル酸)ビスチオール、ポリ(スチレンスルホナート)ビスチオール、ポリ(アミド)ビスチオール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項5に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記ビスチオール含有架橋剤はPEGビスチオールである、請求項6に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記バイオポリマーはチオール−ゼラチン、チオール−セルロース、チオール−キトサン、チオール−ヒアルロン酸、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項5に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記小分子はジチオスレイトール(DTT)である、請求項5に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記生理活性分子は、少なくとも二つのシステインアミノ酸基を有する短鎖ペプチド、不活性短鎖ペプチド、酵素感受性短鎖ペプチド、マトリックスメタロプロテイナーゼ(MMP)感受性ペプチド、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項5に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記生理活性分子は、MMP感受性ビスシステインペプチドである、請求項10に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記MMP感受性ペプチドは、GCIPVSLRSGCG、GCRDGPQGIWGQDRCG、GCRDPLGLDRCG、GCRDEAPLKQDRCG、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項11に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記マレイミド含有ポリマーはPEGマレイミドであり、ビスチオール含有架橋剤はPEGビスチオール、MMP感受性ペプチド、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項1に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記マレイミド含有ポリマーは、RGD、YIGSR、およびIKVAVから選択される少なくとも一つの生理活性分子で置換されたPEGマレイミドであり、前記ビスチオール含有架橋剤は、PEGビスチオール、MMP感受性ペプチド、およびそれらの組み合わせから選択される、請求項1に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- MMP感受性ペプチドは、GCIPVSLRSGCG、GCRDPLGLDRCG、またはそれらの組み合わせである、請求項13または14に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記マレイミド含有ポリマーはゼラチンマレイミドであり、ビスチオール含有架橋剤はPEGビスチオールである、請求項1に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- マレイミド含有ポリマーとビスチオール含有架橋剤のモル比が10:1から1:10の範囲である、請求項1〜16のいずれか一項に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 細胞を含む、請求項1〜17のいずれか一項に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記細胞はヒドロゲルの一部内に懸濁されている、または前記細胞は実質的にヒドロゲル全体に均一に懸濁されている、請求項18に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 印刷された細胞の濃度は1×105〜5×108細胞/mLの範囲にある、請求項18または19に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記細胞は、肝細胞、胃腸細胞、膵細胞、腎細胞、肺細胞、気管細胞、血管細胞、骨格筋細胞、心臓細胞、皮膚細胞、平滑筋細胞、結合組織細胞、角膜細胞、泌尿生殖器細胞、乳房細胞、生殖細胞、内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、神経細胞、シュワン細胞、脂肪細胞、骨細胞、骨髄細胞、軟骨細胞、周皮細胞、中皮細胞、内分泌組織由来細胞、間質細胞、幹細胞、前駆細胞、リンパ細胞、血液細胞、内胚葉由来細胞、外肺葉由来細胞、および中胚葉由来細胞、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項18〜20のいずれか一項に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 生理活性分子をさらに含む、請求項1〜21のいずれか一項に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記生理活性分子は、遊離生理活性分子である、またはマレイミド含有ポリマー、ビスチオール含有架橋剤、またはマレイミド含有ポリマーおよびビスチオール含有架橋剤の両方に結合している、請求項22に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記生理活性分子は、ペプチド、MMP感受性ペプチド、タンパク質、多糖類、薬剤(drug)、治療薬(therapeutic agent)、抗体、小分子阻害剤、キナーゼ阻害剤、ホスファターゼ阻害剤、抗原、病原体、血小板、成長因子、サイトカイン、アミノ酸、栄養素、馴化培地、抗生物質、抗ウイルス薬、RNA、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項22または23に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 前記生理活性分子はコラーゲンである、請求項24に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- 細胞培養培地をさらに含む、請求項1〜24のいずれか一項に記載の3Dプリントヒドロゲル。
- マレイミド含有ポリマーを含むポリマーバイオインクを提供する工程;
少なくとも二つのチオール官能基を有するビスチオール含有架橋剤を含む活性化剤を提供する工程;および
ポリマーバイオインクおよび活性化剤を印刷して3Dプリントヒドロゲルを形成する工程
を含む、3Dプリントヒドロゲルを調製する方法。 - 細胞を提供して、細胞含有3Dプリントヒドロゲル(3D printed hydrogel containing cells)を形成する工程をさらに含む、請求項27に記載の方法。
- 前記細胞は、ポリマーバイオインク中、活性化剤中、ポリマーバイオインクおよび活性化剤の両方の中、または3D印刷の前の別個の培地(separate medium prior to 3D printing)の中に存在する、請求項28に記載の方法。
- 前記3Dプリントヒドロゲルは、ポリマーバイオインクと活性化剤の印刷から30分以内、または10分以内、または1分以内、または30秒以内、または10秒以内、または1秒以内で形成される、請求項27〜29のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ポリマーバイオインク、活性化剤、またはその両方を印刷前に約pH7.4に調整する、請求項27〜30のいずれか一項に記載の方法。
- 前記pHはNaOHを使用して調整される、請求項31に記載の方法。
- 請求項18〜21のいずれか一項に記載の細胞を含む3Dプリントヒドロゲルを含む細胞アッセイ。
- 細胞アッセイのための、請求項18〜21のいずれか一項に記載の細胞を含む3Dプリントヒドロゲルの使用。
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KR20230106369A (ko) * | 2022-01-06 | 2023-07-13 | 포항공과대학교 산학협력단 | 생체재료 기반 약물전달 패치, 이의 제조방법 및 이의 용도 |
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KR102477438B1 (ko) * | 2022-05-12 | 2022-12-14 | 주식회사 루먼바이오 | 메타크릴화 카복시메틸 키토산 기반 바이오잉크의 제조방법 및 보관 안전성 판단방법 |
CN116036370B (zh) * | 2023-03-24 | 2023-06-13 | 昆明理工大学 | 一种pH荧光响应多肽自组装3D打印墨水制备方法 |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH10197535A (ja) * | 1996-12-27 | 1998-07-31 | Fujirebio Inc | 免疫測定方法 |
JP2010520860A (ja) * | 2007-02-21 | 2010-06-17 | フジフィルム・マニュファクチュアリング・ヨーロッパ・ベスローテン・フエンノートシャップ | 制御放出組成物 |
US20120225101A1 (en) * | 2011-03-02 | 2012-09-06 | Kao Weiyuan J | Multifunctional in situ polymerized network via thiol-ene and thiol-maleimide chemistry |
JP2014533153A (ja) * | 2011-10-28 | 2014-12-11 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニヴァーシティー オブ イリノイ | 角膜のための縫合可能なハイブリッド超多孔質ヒドロゲル人工角膜 |
US20150071997A1 (en) * | 2013-09-09 | 2015-03-12 | Georgia Tech Research Corporation | Microgels for Encapsulation of Cells and Other Biologic Agents |
US20150084232A1 (en) * | 2013-09-26 | 2015-03-26 | Northwestern University | Poly(ethylene glycol) cross-linking of soft materials to tailor viscoelastic properties for bioprinting |
WO2015172073A1 (en) * | 2014-05-08 | 2015-11-12 | Cornell University | Bio-adhesive gels and methods of use |
WO2016179242A1 (en) * | 2015-05-05 | 2016-11-10 | President And Fellows Of Harvard College | Tubular tissue construct and a method of printing |
JP2017501136A (ja) * | 2013-11-30 | 2017-01-12 | エージェンシー フォー サイエンス,テクノロジー アンド リサーチ | バイオファブリケーション及びプリンティングのための構成要素としての自己組織化ペプチド、ペプチド模倣体及びペプチド結合体 |
WO2017011854A1 (en) * | 2015-07-22 | 2017-01-26 | Inventia Life Science Pty Ltd | Process for printing 3d tissue culture models |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3244929A1 (en) * | 2015-01-15 | 2017-11-22 | Massachusetts Institute of Technology | Hydrogel comprising a scaffold macromer crosslinked with a peptide and a recognition motif |
US11629329B2 (en) * | 2017-10-11 | 2023-04-18 | Wake Forest University Health Sciences | Bioink compositions and methods of preparing and using the same |
-
2019
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Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH10197535A (ja) * | 1996-12-27 | 1998-07-31 | Fujirebio Inc | 免疫測定方法 |
JP2010520860A (ja) * | 2007-02-21 | 2010-06-17 | フジフィルム・マニュファクチュアリング・ヨーロッパ・ベスローテン・フエンノートシャップ | 制御放出組成物 |
US20120225101A1 (en) * | 2011-03-02 | 2012-09-06 | Kao Weiyuan J | Multifunctional in situ polymerized network via thiol-ene and thiol-maleimide chemistry |
JP2014533153A (ja) * | 2011-10-28 | 2014-12-11 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニヴァーシティー オブ イリノイ | 角膜のための縫合可能なハイブリッド超多孔質ヒドロゲル人工角膜 |
US20150071997A1 (en) * | 2013-09-09 | 2015-03-12 | Georgia Tech Research Corporation | Microgels for Encapsulation of Cells and Other Biologic Agents |
US20150084232A1 (en) * | 2013-09-26 | 2015-03-26 | Northwestern University | Poly(ethylene glycol) cross-linking of soft materials to tailor viscoelastic properties for bioprinting |
JP2017501136A (ja) * | 2013-11-30 | 2017-01-12 | エージェンシー フォー サイエンス,テクノロジー アンド リサーチ | バイオファブリケーション及びプリンティングのための構成要素としての自己組織化ペプチド、ペプチド模倣体及びペプチド結合体 |
WO2015172073A1 (en) * | 2014-05-08 | 2015-11-12 | Cornell University | Bio-adhesive gels and methods of use |
WO2016179242A1 (en) * | 2015-05-05 | 2016-11-10 | President And Fellows Of Harvard College | Tubular tissue construct and a method of printing |
WO2017011854A1 (en) * | 2015-07-22 | 2017-01-26 | Inventia Life Science Pty Ltd | Process for printing 3d tissue culture models |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
ACTA BIOMATERIALIA, 2018, VOL.70, PP.120-128, JPN6023021612, ISSN: 0005071211 * |
ADV. MATER., 2016, VOL.28, PP.8861-8891, JPN6023021611, ISSN: 0005071213 * |
BIOMATERIALS, 2016, VOL.101, PP.199-206, JPN6023021613, ISSN: 0005071212 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2019310647A1 (en) | 2021-02-04 |
KR20210069036A (ko) | 2021-06-10 |
SG11202100335QA (en) | 2021-02-25 |
EP3827045A4 (en) | 2022-04-20 |
WO2020019022A1 (en) | 2020-01-30 |
EP3827045A1 (en) | 2021-06-02 |
CA3106459A1 (en) | 2020-01-30 |
US20210299330A1 (en) | 2021-09-30 |
CN112752788A (zh) | 2021-05-04 |
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