JP4568713B2 - カナマイシン耐性を有してl−リジン生産能の向上したコリネ型微生物、およびそれを利用してl−リジンを生産する方法 - Google Patents
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Description
本発明(2)は、微生物は、S-(2-アミノエチル)システイン-耐性、α-アミノ-β-ヒドロキシル吉草酸-耐性、メチルリジン-耐性、アジ化ナトリウム-耐性、ホモセリン流出性、およびロイシン要求性を有するコリネバクテリウム・グルタミクムKFCC10881の変異株であり、カナマイシンに対する耐性を有する変異株であることを特徴とする、本発明(1)の微生物である。
本発明(3)は、コリネバクテリウム・グルタミクムKFCC10881-CJP5103(受託番号KCCM-10707P)であることを特徴とする、本発明(2)の微生物である。
本発明(4)は、本発明(1)〜(3)のいずれか一発明の微生物を培養する段階、および培養物中のL-リジンを回収する段階を含む、L-リジンの生産方法である。
本実施例では、コリネバクテリウム・グルタミクムKFCC10881を母菌株として、化学的変異誘発剤であるN-メチル-N'-ニトロ-N-ニトロソグアニジンを使用し、カナマイシン耐性を有し、L-リジン生産能の向上したコリネバクテリウム・グルタミクムKFCC10881の変異株を選抜した。
下記のシード培地25mlを含有する250mlのコーナーバッフルフラスコにコリネバクテリウム・グルタミクムKFCC10881およびKFCC10881-CJP5103を接種し、30℃で20時間220rmpで撹拌しつつ培養した。次に、得られた培養液1mlを下記の生産培地25mlを含有する250mlコーナーバッフルフラスコに接種し、32℃で96時間220rpmで撹拌しつつ培養した。
原糖20g、ペプトン10g、酵母抽出物5g、尿素1.5g、KH2PO4 4g、K2HPO4 8g、MgSO47H2O 0.5g、ビオチン100μg、チアミンHCl 1000μg、カルシウム-パントテン酸2,000μg、ニコチンアミド2,000μg(工程水1リットル基準)
原糖100g、(NH4)2SO4 40g、大豆蛋白質2.5g、とうもろこし浸漬固体(Corn Steep Solids)5g、尿素3g、KH2PO4 1g、MgSO47H2O 0.5g、ビオチン100μg、チアミン塩酸塩1,000μg、カルシウム-パントテン酸2,000μg、ニコチンアミド3,000μg、CaCO3 30g、(工程水1リットル基準)
糖蜜および原糖の含有培地に菌株KFCC10881-CJP5103を利用して得たリジン発酵液1Lに、塩酸を使用してpHを2.0に調節し、Ca2+イオンをCaSO4、CaCl2形態とした。次に、前記培養物をアンモニウムイオン形態に再生された陽イオン交換樹脂(Diaion SK-L10)に上流側から流して吸着させた。次に、脱塩水で洗浄して樹脂層内に残存する菌体などを除去した後、2N水酸化アンモニウムで溶離を行い、リジン高濃度部分を回収した。回収された液を濃縮した後、塩酸でpH5.0に調節しつつ、20℃で冷却結晶化した。結晶化の完了したスラリを遠心分離し、一次ウェット製品を得て、母液は再度回分式で濃縮しつつ結晶化した後、二次ウェット製品を得た。一次および二次のウェット製品をいずれも加えて乾燥した結果、含有量98.5%のリジンドライ製品44gを得ることができた。
前処理糖蜜および原糖の含有培地に菌株KFCC10881-CJP5103を利用して得たリジン発酵液1Lに、硫酸を使用してpHを2.0に調整した後、アンモニウム形態に再生された陽イオン交換樹脂(Diaion SK-L10)に上流方向から吸着させた。次に、脱塩水で洗浄して樹脂層内に残存する菌体などを除去した後、2N水酸化アンモニウムで溶離を行い、リジン高濃度部分を回収した。回収された液は濃縮し、塩酸でpH5.0に調節しつつ20℃で冷却結晶化した。結晶化の完了したスラリを遠心分離して一次ウェット製品を得て、母液は再度回分式で濃縮しつつ結晶化した後、二次ウェット製品を得た。一次および二次のウェット製品をいずれも加えて乾燥した結果、含有量99%のリジンドライ製品45gを得ることができた。
Claims (2)
- L-リジン生産能を有しており、カナマイシンに対する耐性を有するコリネバクテリウム属微生物であって、該微生物が、コリネバクテリウム・グルタミクムKFCC10881-CJP5103(受託番号KCCM-10707P)である、前記微生物。
- 請求項1記載の微生物を培養する段階、および培養物中のL-リジンを回収する段階を含む、L-リジンの生産方法。
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