JP4557973B2

JP4557973B2 - 金属微粒子を用いた質量分析方法

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Publication number: JP4557973B2
Application number: JP2006511686A
Authority: JP
Inventors: 紀子長堀; 謙一新倉; 紳一郎西村
Original assignee: Shionogi and Co Ltd
Current assignee: Shionogi and Co Ltd
Priority date: 2004-03-31
Filing date: 2005-03-29
Publication date: 2010-10-06
Anticipated expiration: 2025-03-29
Also published as: US20090206245A1; WO2005095941A1; EP1731905A1; EP1731905A4; JP5021055B2; JP2010185886A; JPWO2005095941A1

Description

本発明は、金属が硫黄原子を介して有機残基と結合した金属−有機残基複合体を用いて、硫黄原子を含む有機残基誘導体を質量分析する方法に関する。本発明は、そのような質量分析方法に用いる金属−有機残基複合体およびその製造方法に関する。本発明はまた、本発明の金属−有機残基複合体を用いた糖鎖または糖鎖含有物質の捕捉方法、および金属−有機残基複合体の有機残基と相互作用しうる物質の分子量を測定する方法に関する。本発明はさらに、糖鎖捕捉用組成物または糖鎖もしくは糖鎖含有物質の質量分析用キットに関する。

糖鎖は通常タンパク質や脂質等との複合体として存在し、糖鎖構造は構成単糖、分岐、結合位置、アノメリシティ等の多様性により極めて複雑な上、糖鎖生合成は多数の糖鎖合成関連酵素により行われるため、遺伝子やタンパク質の発現解析でその発現パターンを明らかにすることができない。加えて、同一のタンパク質、脂質に結合する糖鎖構造には不均一性があり、しばしば１つのタンパク質に複数の糖鎖が結合するため、タンパク質よりも高感度の解析技術が必然的に必要となる。

糖鎖構造を解析するための新しい系として、糖鎖を有するかまたは糖鎖捕捉可能な自己組織化膜が大いに期待される。一般に、金属（例えば、Ａｕ、Ａｇ、Ｃｕなど）基板をチオール誘導体溶液に浸漬すると、金属表面上にチオール誘導体が吸着し、分子間の相互作用（例えば、ファンデルワールス力）によって、分子がナノメーターレベルで二次元方向に規則的に整列することが知られている。分子が自発的に集合し、整列した組織を形成することから、この形成された膜は「自己集合単分子膜」または「自己組織化膜」と呼ばれる。金属の表面を有機膜で被覆できることを利用して、機能性分子または生体分子（糖鎖またはタンパク質など）を金属表面に固定したり、または金属表面を改変する研究が多くの研究者によって行われている。

これまでに、金基板上にオリゴ糖鎖を固定化しそれを表面プラズモン共鳴でモニタリングする手法が報告されている（例えば、特許文献１参照）。しかしながら、この手法は、金−液界面近傍の溶液の屈折率の変化で糖鎖の固定化を間接的にモニタリングしているに過ぎず、糖鎖の正確な情報が得られているわけではない。

近年、表面の構造を解析するための手法として、質量分析法が重要視され、生化学および分子生物学の分野において特に有用となってきている。この手法は、測定前に蛍光色素または放射性標識を被検体に直接的に結合させて解析するという煩雑さを省き、高速で正確な情報を提供できるという利点を有する。これまでに、金基板に結合したチオール化合物がＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓのレーザーで切断されて検出されるという報告がＭｒｋｓｉｃｈらによってなされている（例えば、非特許文献１参照）。しかし、金基板表面上にたった一分子のチオール化合物が二次元方向に並んだ単分子膜をレーザーで切断するため、検出されるチオール化合物の絶対量が極めて微量であり、検出の際に夾雑物（例えば、バッファーまたは塩など）の影響を受けやすく、その結果感度が低下するおそれがある。

高感度かつ正確に糖鎖解析を可能にする技術はいまだに存在せず、そのような技術は翻訳後修飾解析を含めた次世代プロテオームを含めたグライコームにおいて極めて重要であり、その開発は渇望されている。
特開２００３−８３９６９特開２００３−２５４９５９ＷＯ０３／０１９１７８ＷＯ０３／０９１７２４Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４１，４７１５−４７１８，２００２Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．２００２，４，１２０−１２４

従来の上記欠点を克服し、金属に結合した自己組織化膜表面上での化学反応を高感度かつ正確に解析でき、将来の糖鎖構造解析に応用できる新しい質量分析法を提供することにある。

本発明者らは鋭意検討した結果、レーザーの乱反射（すなわち、反射したレーザーが何度も金属表面に照射すること）が可能な金属表面を提供することにより高感度化が達成されることを見出した。また、そのような金属表面に導入したチオール化合物がＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法のみならず、低分子マトリックスを必要としないＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法によるレーザー照射によっても、金属との結合部分が切断・イオン化され、高感度に観測されることを確認できたことにより、上記課題を解決した。

従って、本発明は、以下を提供する。

（項目１）金属が硫黄原子を介して有機残基と結合した金属−有機残基複合体から該硫黄原子を含む有機残基誘導体をイオン化することを特徴とする、該硫黄原子を含む有機残基誘導体を質量分析する方法。

（項目２）一般式（Ｉ）：
（Ｒ−Ｓ）_ｎ−Ｍ^１（Ｉ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子であり、Ｍ^１は金属であり、ｎはＭ^１に対する（Ｒ−Ｓ）基の化学量論比を表し、１以上の整数である）
で表される金属−有機残基複合体から硫黄原子を含む有機残基誘導体をイオン化することを特徴とする、
一般式（ＩＩ）：
Ｒ−ＳＨ（ＩＩ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩、および／または
一般式（ＩＩＩ）：
Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｒ（ＩＩＩ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩、
を質量分析する方法。

（項目３）一般式（ＩＶ）：
Ｍ^１−Ｓ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−Ｓ−Ｍ^１（ＩＶ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子であり、両端のＭ^１は同一実体の金属であり、Ｘは低級アルキレンまたは低級アルケニレンである）
で表される金属−有機残基複合体から硫黄原子を含む有機残基誘導体をイオン化することを特徴とする、
一般式（Ｖ）：
ＨＳ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−ＳＨ（Ｖ）
（式中、Ｒ、ＳおよびＸは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩、および／または
一般式（ＶＩ）：

（式中、Ｒ、ＳおよびＸは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩、
を質量分析する方法。

（項目４）以下の工程：
１）金属が以下の式：
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、または

で表される基と結合した金属−有機残基複合体と、糖鎖または糖鎖含有物質とが反応しうる条件下で接触させる工程、
２）該糖鎖または該糖鎖含有物質が結合した金属−有機残基複合体を得る工程、および
３）得られた金属−有機残基複合体から硫黄原子を有する有機残基誘導体をイオン化する工程、
を包含する、糖鎖または糖鎖含有物質を質量分析する方法。

（項目５）前記金属がレーザーの乱反射可能な表面を有する、項目１〜４のいずれかに記載の方法。

（項目６）前記金属が金属微粒子である、項目５に記載の方法。

（項目７）前記金属が金、銀、カドミウムまたはセレンの単体である、項目１〜６のいずれかに記載の方法。

（項目８）前記質量分析をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法により行う、項目１〜６のいずれかに記載の方法。

（項目９）前記質量分析をマトリックス試薬の存在下で行う、項目８に記載の方法。

（項目１０）前記マトリックス試薬が２，５−ジヒドロキシ安息香酸である、項目９に記載の方法。

（項目１１）前記有機残基が糖鎖または糖鎖含有物質を含む基である、項目１〜６のいずれかに記載の方法。

（項目１２）金属が硫黄原子を介して被検体と結合した金属−被検体複合体から該硫黄原子を含む被検体をイオン化することを特徴とする、該硫黄原子を含む被検体を質量分析する方法。

（項目１３）以下の工程：
１）還元剤の存在下、テトラクロロ金酸および硫黄原子を有する被検体を反応させる工程、
２）金微粒子に該硫黄原子を介して被検体が結合した金−被検体複合粒子を得る工程、および
３）得られた金−被検体複合粒子から硫黄原子を有する被検体をイオン化する工程、
を包含する、硫黄原子を有する被検体を質量分析する方法。

（項目１４）還元剤が水素化ホウ素ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムである、項目１３に記載の方法。

（項目１５）上記工程１）を水、アルコール系溶媒、酢酸エチル、エーテル系溶媒またはそれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒中で行う、項目１３に記載の方法。

（項目１６）上記工程１）を−２０℃から２００℃で行う、項目１３に記載の方法。

（項目１７）上記工程１）を０．１時間〜２４時間で行う、項目１３に記載の方法。

（項目１８）硫黄原子を介して被検体が結合した金属−被検体複合粒子を遠心濾過により精製する、項目１３に記載の方法。

（項目１９）上記質量分析をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法により行う、項目１３に記載の方法。

（項目２０）上記工程３）をマトリックス試薬の存在下で行う、項目１３に記載の方法。

（項目２１）項目１３に記載の工程２）で得られた金属−被検体複合粒子を化学反応または酵素反応に付し、反応系中の金属−被検体複合粒子から硫黄原子を有する被検体をイオン化することを特徴とする、該化学反応または酵素反応の進行を確認する方法。

（項目２２）上記酵素反応が糖鎖伸長反応である、項目２１に記載の方法。

（項目２３）糖鎖伸長反応の進行を利用して糖転移酵素の活性を確認する、項目２１に記載の方法。

（項目２４）金属が以下の式：
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、または

（式中、Ｙ、Ｗ^１およびＷ^２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニレンであり；
Ｗ^４は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレンであり；
Ｚ^１は、置換されていてもよいアリレンまたは置換されていてもよいヘテロアリレンであり；
Ｚ^２は、含窒素複素環であり；
Ｚ^３およびＺ^５は、それぞれ独立してＣ１−Ｃ１２アルキレンであり；
Ｚ^４は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｚ^６は、Ｃ１−Ｃ２アルキレンであり；
ｎは１〜１０の整数である）
で表される基と結合した金属−有機残基複合体。

（項目２５）前記金属がレーザーの乱反射可能な表面を有する、項目２４に記載の複合体。

（項目２６）前記金属が金属微粒子である、項目２５に記載の複合体。

（項目２７）還元剤の存在下、テトラクロロ金酸および以下の式：

または

（式中、Ｙ、Ｗ^１およびＷ^２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニレンであり；
Ｗ^４は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレンであり；
Ｚ^１は、置換されていてもよいアリレンまたは置換されていてもよいヘテロアリレンであ
り；
Ｚ^２は、含窒素複素環であり；
Ｚ^３およびＺ^５は、それぞれ独立してＣ１−Ｃ１２アルキレンであり；
Ｚ^４は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｚ^６は、Ｃ１−Ｃ２アルキレンであり；
ｎは１〜１０の整数である）
で表される化合物もしくはその塩を反応させることによる、金−有機残基複合粒子の製造方法。

（項目２８）還元剤が水素化ホウ素ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムである、項目２７に記載の製造方法。

（項目２９）水、アルコール系溶媒、酢酸エチル、エーテル系溶媒、またはそれらの混合溶媒中で行う、項目２８に記載の製造方法。

（項目３０）−２０℃から２００℃で行う、項目２８に記載の製造方法。

（項目３１）０．１時間〜２４時間で行う、項目２８に記載の製造方法。

（項目３２）金−有機残基複合粒子を遠心濾過により精製する、項目２８に記載の製造方法。

（項目３３）金属が以下の式：
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、または

（式中、Ｙ、Ｗ^１およびＷ^２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニレンであり；
Ｗ^４は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレンであり；
Ｚ^１は、置換されていてもよいアリレンまたは置換されていてもよいヘテロアリレンであり；
Ｚ^２は、含窒素複素環であり；
Ｚ^３およびＺ^５は、それぞれ独立してＣ１−Ｃ１２アルキレンであり；
Ｚ^４は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｚ^６は、Ｃ１−Ｃ２アルキレンであり；
ｎは１〜１０の整数である）
で表される基と結合した金属−有機残基複合体と、糖鎖または糖鎖含有物質とが反応しうる条件下で接触させることを特徴とする、糖鎖または糖鎖含有物質の捕捉方法。

（項目３４）以下の工程：
１）金属が硫黄原子を介して有機残基と結合した金属−有機残基複合体と、該有機残基と相互反応しうる物質とを、接触させる工程、
２）該相互作用しうる物質が結合した金属−有機残基複合体を得る工程、および
３）得られた金属−有機残基複合体から硫黄原子を有する有機残基誘導体をイオン化する工程、
を包含する、金属−有機残基複合体の有機残基と相互作用しうる物質の分子量を測定する方法。

（項目３５）前記金属がレーザーの乱反射可能な表面を有する、項目３４に記載の方法。

（項目３６）前記金属が金属微粒子である、項目３５に記載の方法。

（項目３７）以下の工程：
１）式：

で表される化合物と金属とを接触させる工程、
２）１）で得られた金属−有機残基複合体を、糖鎖または糖鎖含有物質とが反応しうる条件下で接触させる工程、および
３）２）で得られた金属−有機残基複合体から硫黄原子を有する有機残基誘導体をイオン化する工程、
を包含する、糖鎖または糖鎖含有物質を質量分析する方法。

（項目３８）以下の工程：
１）式：

で表される化合物と糖鎖または糖鎖含有物質とを、該化合物と該糖鎖または糖鎖含有物質とが反応しうる条件下で接触させる工程、
２）１）で得られた化合物と金属とを接触させる工程、および
３）２）で得られた金属−有機残基複合体から硫黄原子を有する有機残基誘導体をイオン化する工程、
を包含する、糖鎖または糖鎖含有物質を質量分析する方法。

（項目３９）前記金属がレーザーの乱反射可能な表面を有する、項目３７または３８に記載の方法。

（項目４０）前記金属が金属微粒子である、項目３９に記載の方法。

（項目４１）
一般式（ＩＩ）：
Ｒ−ＳＨ（ＩＩ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子である）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（ＩＩＩ）：
Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｒ（ＩＩＩ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（Ｖ）：
ＨＳ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−ＳＨ（Ｖ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義であり、Ｘは低級アルキレンまたは低級アルケニレンである）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（ＶＩ）：

（式中、Ｒ、ＳおよびＸは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩；またはそれらの混合物を含有する、糖鎖捕捉用組成物。

（項目４２）以下の式：

または

（式中、Ｙ、Ｗ^１およびＷ^２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニレンであり；
Ｗ^４は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレンであり；
Ｚ^１は、置換されていてもよいアリレンまたは置換されていてもよいヘテロアリレンであ
り；
Ｚ^２は、含窒素複素環であり；
Ｚ^３およびＺ^５は、それぞれ独立してＣ１−Ｃ１２アルキレンであり；
Ｚ^４は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｚ^６は、Ｃ１−Ｃ２アルキレンであり；
ｎは１〜１０の整数である）
で表される化合物を含有する、糖鎖捕捉用組成物。

（項目４３）以下の式：
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、または
一般式（ＶＩＩ）：

（式中、Ｍ^２は金属であり；
ｍは、Ｍ^２に対する硫黄原子を含む有機残基の化学量論比を表し、１以上の整数であり；Ｙ、Ｗ^１およびＷ^２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニレンであり；
Ｗ^４は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレンであり；
Ｚ^１は、置換されていてもよいアリレンまたは置換されていてもよいヘテロアリレンであり；
Ｚ^２は、含窒素複素環であり；
Ｚ^３およびＺ^５は、それぞれ独立してＣ１−Ｃ１２アルキレンであり；
Ｚ^４は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｚ^６は、Ｃ１−Ｃ２アルキレンであり；
ｎは１〜１０の整数である）で表される金属−有機残基複合体。

（項目４４）前記金属がレーザーの乱反射可能な表面を有する、項目４３に記載の複合体。

（項目４５）前記金属が金属微粒子である、項目４４に記載の複合体。

（項目４６）一般式（Ｉ）：
（Ｒ−Ｓ）_ｎ−Ｍ^１（Ｉ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子であり、Ｍ^１は金属であり、ｎはＭ^１に対する（Ｒ−Ｓ）基の化学量論比を表し、１以上の整数である）で表される金属−有機残基複合体；または
一般式（ＩＶ）：
Ｍ^１−Ｓ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−Ｓ−Ｍ^１（ＩＶ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義であり、両端のＭ^１は同一実体の金属であり、Ｘは低級アルキレンまたは低級アルケニレンである）で表される金属−有機残基複合体、
を含有する、糖鎖捕捉用組成物。

（項目４７）以下の式：
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、または
一般式（ＶＩＩ）：

（式中、Ｍ^２は金属であり；
ｍは、Ｍ^２に対する硫黄原子を含む有機残基の化学量論比を表し、１以上の整数であり；Ｙ、Ｗ^１およびＷ^２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニレンであり；
Ｗ^４は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレンであり；
Ｚ^１は、置換されていてもよいアリレンまたは置換されていてもよいヘテロアリレンであり；
Ｚ^２は、含窒素複素環であり；
Ｚ^３およびＺ^５は、それぞれ独立してＣ１−Ｃ１２アルキレンであり；
Ｚ^４は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｚ^６は、Ｃ１−Ｃ２アルキレンであり；
ｎは１〜１０の整数である）で表される金属−有機残基複合体を含有する、糖鎖捕捉用組成物。

（項目４８）前記金属がレーザーの乱反射可能な表面を有する、項目４６または４７に記載の組成物。

（項目４９）前記金属が金属微粒子である、項目４８に記載の組成物。

（項目５０）以下のＡ）およびＢ）：
Ａ）一般式（ＩＩ）：
Ｒ−ＳＨ（ＩＩ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子である）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（ＩＩＩ）：
Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｒ（ＩＩＩ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（Ｖ）：
ＨＳ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−ＳＨ（Ｖ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義であり、Ｘは低級アルキレンまたは低級アルケニレンである）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（ＶＩ）：

（式中、Ｒ、ＳおよびＸは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩；またはそれらの混合物；および
Ｂ）金属、
を含む、糖鎖または糖鎖含有物質の質量分析用キット。

（項目５１）以下のＡ）およびＢ）：
Ａ）以下の式：

または

（式中、Ｙ、Ｗ^１およびＷ^２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニレンであり；
Ｗ^４は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレンであり；
Ｚ^１は、置換されていてもよいアリレンまたは置換されていてもよいヘテロアリレンであ
り；
Ｚ^２は、含窒素複素環であり；
Ｚ^３およびＺ^５は、それぞれ独立してＣ１−Ｃ１２アルキレンであり；
Ｚ^４は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｚ^６は、Ｃ１−Ｃ２アルキレンであり；
ｎは１〜１０の整数である）
で表される、硫黄原子を含む有機残基誘導体；および
Ｂ）金属、
を含む、糖鎖または糖鎖含有物質の質量分析用キット。

（項目５２）前記金属がレーザーの乱反射可能な表面を有する、項目５０または５１に記載のキット。

（項目５３）前記金属が金属微粒子である、項目５２に記載のキット。

（項目５４）前記金属がテトラクロロ金酸であり、
Ｃ）還元剤、
をさらに含む、項目５０または５１に記載のキット。

（項目５５）前記還元剤が水素化ホウ素ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムである、項目４２に記載のキット。

（項目５６）一般式（Ｉ）：
（Ｒ−Ｓ）_ｎ−Ｍ^１（Ｉ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子であり、Ｍ^１は金属であり、ｎはＭ^１に対する（Ｒ−Ｓ）基の化学量論比を表し、１以上の整数である）で表される金属−有機残基複合体；または
一般式（ＩＶ）：
Ｍ^１−Ｓ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−Ｓ−Ｍ^１（ＩＶ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義であり、両端のＭ^１は同一実体の金属であり、Ｘは低級アルキレンまたは低級アルケニレンである）で表される金属−有機残基複合体、
を含有する、糖鎖または糖鎖含有物質の質量分析用キット。

（項目５７）以下の式：
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、または
一般式（ＶＩＩ）：

（式中、Ｍ^２は金属であり；
ｍは、Ｍ^２に対する硫黄原子を含む有機残基の化学量論比を表し、１以上の整数であり；Ｙ、Ｗ^１およびＷ^２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニレンであり；
Ｗ^４は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレンであり；
Ｚ^１は、置換されていてもよいアリレンまたは置換されていてもよいヘテロアリレンであり；
Ｚ^２は、含窒素複素環であり；
Ｚ^３およびＺ^５は、それぞれ独立してＣ１−Ｃ１２アルキレンであり；
Ｚ^４は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｚ^６は、Ｃ１−Ｃ２アルキレンであり；
ｎは１〜１０の整数である）で表される金属−有機残基複合体を含む、糖鎖または糖鎖含有物質の質量分析用キット。

（項目５８）上記金属がレーザーの乱反射可能な表面を有する、項目５６または５７に記載のキット。

（項目５９）上記金属が金属微粒子である、項目５８に記載のキット。

（項目６０）上記金属が金微粒子である、項目５６または５７に記載のキット。

（項目６１）金属が、鉄、ニッケル、コバルトまたは酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）の表面に被覆した金、銀、カドミウムまたはセレンの層を含む複合金属である項目１〜２３のいずれかに記載の方法。

（項目６２）金属が、鉄、ニッケル、コバルトまたは酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）の表面に被覆した金、銀、カドミウムまたはセレンの層を含む複合金属である項目２４〜２６および４３〜４５のいずれかに記載の金属−有機残基複合体。

（項目６３）金属が、鉄、ニッケル、コバルトまたは酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）の表面に被覆した金、銀、カドミウムまたはセレンの層を含む複合金属である項目２７〜３２のいずれかに記載の製造方法。

（項目６４）金属が、鉄、ニッケル、コバルトまたは酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）の表面に被覆した金、銀、カドミウムまたはセレンの層を含む複合金属である項目３３〜４０のいずれかに記載の製造方法。

（項目６５）金属が、鉄、ニッケル、コバルトまたは酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）の表面に被覆した金、銀、カドミウムまたはセレンの層を含む複合金属である項目４１、４２および４６〜４９のいずれかに記載の糖鎖捕捉用組成物。

（項目６６）金属が、鉄、ニッケル、コバルトまたは酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）の表面に被覆した金、銀、カドミウムまたはセレンの層を含む複合金属である項目５０〜６０のいずれかに記載のキット。

（項目６７）上記金属微粒子が、鉄、ニッケル、コバルトまたは酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）の粒子および該粒子の表面に被覆した金、銀、カドミウムまたはセレンの層を含む複合微
粒子である、項目６、２６、３６、４０、４５、４９、５３、５９のいずれかに記載の方法。

（項目６８）上記質量分析をＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法により行う、項目１〜６のいずれかに記載の方法。

（項目６９）上記質量分析をＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法により行う、項目１３に記載の方法。

本発明によれば、硫黄原子を含む有機残基誘導体について極めて感度の高い質量分析法を提供することができる。

本発明によれば、糖鎖関連酵素反応のリアルタイムでの正確なモニタリングが可能となる。レーザーの乱反射可能な金属表面上に酵素反応の基質となる糖鎖を提示することにより、質量分析法によって酵素反応を追跡することができる。本発明によれば、質量分析の際、通常の質量分析法では好ましくないバッファーまたは塩などがたとえ高濃度で存在したとしても、それらの影響を受けず、高感度に測定することができ、反応溶液の一部をそのまま分析に用いることができ、簡便である。また生成物を直接観測できるので、酵素反応の速度論的解析も容易に行えるという利点を有する。

従来のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法において、「薬剤候補化合物として多いであろう低分子領域」について、マトリックス自身の強いピークにより、目的物のピークがうまく観察できないことが欠点とされてきたが、本発明によれば、目的の低分子化合物を金属基板（特に、金属微粒子）に担持することにより、マトリックスフリーなＬＤＩ−ＴＯＦＭＳを、高感度かつ正確に行うことができるという利点を有する。

本発明の金属−有機残基複合粒子を提供することにより、チオール基と金属との結合を利用して、金属微粒子表面に糖鎖や種々の官能基を提示することができ、またその金属微粒子の溶解性を、金属微粒子表面に導入するリガンドの性質によって自在に制御することができる。従って、チオール化合物で被覆した金属微粒子は、水系での反応のみならず有機溶媒系での固相合成を行う際に有用な固相担体として利用することができる。微粒子は反応溶媒に溶解しているが、精製の際には固体として遠心濾過によって溶液成分と分離可能であるため、分離精製も非常に容易に行えるという利点がある。さらに反応の経過を質量分析法によって直接追跡することができ、効率的に反応を行える。

本発明によれば、金属微粒子として、例えば鉄、ニッケル、コバルトまたは酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）などの磁性粒子およびこの粒子の表面に被覆した金、銀、カドミウムまたはセレンなどの層を含む複合微粒子を使用することにより、これに硫黄原子を含む有機残基誘導体を担持したのち、磁石等を用いて微粒子を簡易に回収し、精製無しで質量分析することができるという利点を有する。

また、本発明によれば、硫黄原子を介して細胞毒性の無い有機残基と結合した金属微粒子を提供することにより、金属−有機残基複合粒子を生細胞に直接取り込ませることができ、細胞内で生じる様々な化学反応（例えば、酵素反応）を、その反応生成物を質量分析することで正確に解析することができる。

図１は、金微粒子表面に担持したチオール化合物のＭＡＬＤＩＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。ａ）は遠心濾過操作で得られた金微粒子のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示し、ｂ）はろ液のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図２は、金微粒子を固相担体として用いた化学反応後のＭＡＬＤＩＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図３は、糖鎖−金微粒子のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図４は、糖鎖密度を制御した糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）−金微粒子のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図５は、糖鎖密度を制御した糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）−金微粒子の電子顕微鏡写真を示す。図６は、糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）−金微粒子上でのガラクトース転移酵素による糖鎖伸長反応を追跡したＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルの経時変化を示す。図７は、図６のスペクトルから得た糖鎖伸長反応における時間−反応度プロットを示す。縦軸の反応は値は、［生成物のピーク強度／（出発物質のピーク強度＋生成物のピーク強度）］の式から導かれる値を示す。図８は、ＵＤＰによるＧａｌＴ反応の阻害活性測定結果を示す。図９は、糖鎖捕捉能をもつ金ナノパーティクルのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図１０は、金微粒子上でのＢｏｃ基の脱保護反応後のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図１１は、糖鎖捕捉金微粒子を用いた水溶液中での糖鎖（マンノース）捕捉反応後のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図１２は、糖鎖捕捉金微粒子を用いた水溶液中での糖鎖（グルコース）捕捉反応後のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図１３は、糖鎖捕捉金微粒子を用いた水溶液中での糖鎖（Ｎ−アセチルグルコサミン）捕捉反応後のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図１４は、糖鎖捕捉金微粒子を用いた水溶液中での糖鎖（マンノペンタオース）捕捉反応後のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図１５は、金基板を用いたＡＨＴＭのタンパク質の捕捉実験（方法（Ｉ）および（ＩＩ））を示す。図１６は、金基板を用いたＡＨＴＭのタンパク質の捕捉実験（方法（ＩＩＩ）および（ＩＶ））を示す。図１７は、金基板を用いたＡＨＴＭのタンパク質の捕捉実験（方法（Ｉ）〜（ＩＶ））の概念図およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図１８は、大腸菌で発現した糖転移酵素（ガラクトース転位酵素）による、糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）金微粒子上での糖鎖伸長反応の模式図および反応後のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図１９は、ａ）のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルおよび、ｂ）ヨウ素処理によって微粒子表面からチオール化合物を遊離した、糖鎖チオール（ＧｌｃＮＡｃ）と金微粒子の混合溶液のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図２０は、糖鎖（Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ）−金微粒子上でのフコース転移酵素（ＦｕｃＴ）による糖鎖伸長反応を追跡したＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルの経時変化を示す。図２１は、図２０のスペクトルから得た糖鎖伸長反応における時間−反応度プロットを示す。縦軸の値（反応度）［生成物のピーク強度／（出発物質のピーク強度＋生成物のピーク強度）］の式から導かれる値を示す。図２２は、糖鎖（Ｌｅｘ）−金微粒子のＬＤＩ−ＴＯＦ／ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図２３は、ａ）チオール（化合物１）−金基板のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトル、およびｂ）チオール（化合物１）−金微粒子のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓｓスペクトルを示す。図２４は、チオール（化合物９）−磁性金微粒子のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図２５は、糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）−磁性金微粒子のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトル（上段）、およびＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトル（下段）を示す。図２６は、糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）−磁性金微粒子上でのガラクトース転位酵素による糖鎖伸長反応の反応前（上段）および反応後（下段）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図２７は、チオール（化合物９）−ＣｄＳ微粒子のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図２８は、金微粒子上でのグリコシル化反応後のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ（上段）およびＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ（下段）スペクトルを示す。図２９は、糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）−磁性金微粒子によってタンパク質混合物中から釣り上げられたタンパク質のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。上段は、糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）−磁性金微粒子によって釣り上げられたタンパク質のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトル、中段は標準物質ＰＮＡのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトル、下段は標準物質ＷＧＡのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図３０は、金微粒子に結合したタンパク質（α−アミラーゼ）と阻害剤アカルボースとの混合溶液の、限外ろ過処理前の溶液のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図３１は、金微粒子に結合したタンパク質（α−アミラーゼ）と阻害剤アカルボースとの混合溶液の、限外ろ過処理後の溶液のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。図３２は、オキシアミン金微粒子によって捕捉された糖脂質オゾン酸化物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓスペクトルを示す。

以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において
使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。

（用語）
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。

本明細書において「金属」とは、その少なくとも一部に、硫黄原子含有物質（例えば、チオールまたはジスルフィドなど）が結合可能な金属を含む、金属単体または金属複合体を意味し、硫黄原子含有物質が結合可能である代表的な金属の種類として、金、銀、カドミウムおよびセレンなどが挙げられる。

本明細書において「金属がレーザーの乱反射可能な表面を有する」とは、上で定義した金属が、その表面に照射されて反射したレーザーが何度も金属表面に照射されるような凹凸面または湾曲面を有することを意味する。レーザーの乱反射が多いほど、質量分析の感度が高くなる。レーザーの乱反射可能な表面を有する金属の理想的な例として、金属微粒子が挙げられる。

本明細書において「金属微粒子」とは、平均粒径１０ｎｍ〜５μｍを有する上で定義した金属の粒子を意味し、単分散型であってもよいし、多分散型であってもよい。本発明の金属微粒子が金属複合体である場合には、その複合体のコアとなる粒子の表面が、上記硫黄原子含有物質が結合可能な金属の層で覆われた構造をとる。本発明で使用する代表的な金属微粒子として、金または銀の金属単体の微粒子、あるいは鉄、ニッケル、コバルトまたは酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）などの磁性粒子の表面が金または銀で覆われた金属複合体の微粒子が挙げられる。本発明の「金属微粒子」は、溶液中でコロイドを形成する。上で挙げた金属微粒子の例のほかにも、商品名ＱｕａｎｔｕｍＤｏｔｓ（ＱｕａｎｔｕｍＤｏｔＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ，ＵＳＡ、以下「ＱＤｓ」と示す）も使用可能である。ＱＤｓに用いられる金属の種類としては、例えばＺｎＳｅ、ＣｄＳ、ＣｄＳｅ、ＣｄＴｅなどが挙げられる。典型的な例として、コアにＣｄＳｅ、その周りにＺｎＳを持つナノパーティクルがある。表面にでているＺｎと−ＳＨの結合（この結合はＡｕ−Ｓと同じ種類）を介して−ＳＨ化合物をＱＤｓ表面に提示することができる。本明細書において「微粒子」との用語は、「ナノパーティクル」または「ナノ粒子」と互換可能に使用され得る。金微粒子の作製およびその応用については、ＪＡＣＳ１２５，７７９０−７７９１（２００３）；ＡｎｇｅｗＣｈｅｍＩｎｔＥｄ４０（１２），２２５７−２２６１（２００１）；ＣｈｅｍＥｕｒＪ９，１９０９−１９２１（２００３）に記載されている。

本明細書において「有機残基」とは、下記で定義した「生体分子」および人工的に合成された有機化合物をさす。

本明細書において「被検体」とは、質量分析でイオン化される分析物を意味し、上で定義した「有機残基」が含まれる。

本明細書において「金属−有機残基複合体」とは、上で定義した金属微粒子の表面上に硫黄原子を介して有機残基が結合して得られた複合体を意味する。

本明細書において「金属−有機残基複合粒子」とは、上で定義した金属微粒子の表面上に硫黄原子を介して有機残基が結合して得られた微粒子を意味する。本明細書において、特に金微粒子の表面上に硫黄原子を介して糖鎖または糖鎖含有物質が結合して得られた微粒子は、「糖鎖−金微粒子」との用語が使用される。

本明細書において「金属−被検体複合体」とは、上で定義した金属の表面上に硫黄原子を介して被検体が結合して得られた複合体を意味する。

本明細書において「金属−被検体複合粒子」とは、上で定義した金属微粒子の表面上に硫黄原子を介して被検体が結合して得られた微粒子を意味する。

本明細書において「質量分析」とは、原子、分子、クラスター等の粒子を気体状のイオンとし（つまり、イオン化し）、真空中で運動させ電磁気力を用いてそれらイオンを質量電荷比（ｍ／ｚ）に応じて分離・検出することを意味する。ｍ／ｚに応じて分離・検出されたイオンをもとに、横軸にｍ／ｚ、縦軸にイオンの相対強度をとったスペクトルが、マススペクトルである。分子量情報を与えるイオンは、一般に分子量関連イオン（中性分子Ｍから電子１個が失われたＭ^＋．、電子１個が付加したＭ^−．、プロトンが付加した［Ｍ＋Ｈ］^＋、プロトンが失われた［Ｍ−Ｈ］⁻、ハイドライドが失われた［Ｍ−Ｈ］^＋、アルカリ金属（Ｎａなど）が付加した［Ｍ＋Ｎａ］^＋などがある）と呼ばれる。試料やイオン化法（特にＥＩ法では）によっては全く分子量関連イオンが出現しない場合があるが、その場合はソフトなイオン化法を用いることで分子量関連イオンを確認できる。分子イオンより低質量側に出現するイオンをフラグメントイオンと呼び、このフラグメントイオンは分子イオンが分解したもので、試料分子の構造情報を与える。スペクトル中最もイオン強度の高いイオンをベースピークと呼び、相対強度を１００％としスペクトルを規格化するために用いる。

本発明における「イオン化」は、以下の７通りの方法の中から適宜選択して行われる。

１）電子イオン化法（ＥＩ：ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ法）
電子イオン化法は、気化した試料に熱電子をあててイオン化する方法で、最も普及しているイオン化法である。イオン化は試料をガス化して行なうため、液体あるいは個体試料は予め気化させる必要がある。気化させるのに熱を加えるため熱不安定物質、難揮発性物質の測定は不可能である。ただし、メチル化、シリル化、アシル化等の誘導体化により揮発性、熱安定性が得られる物質の場合は測定が可能となる。通常７０ｅＶのエネルギーでイオン化を行なうため、分子イオンの生成とともに過剰エネルギーによりフラグメントイオンが生成する（一般的な有機化合物のイオン化エネルギーは、１０数ｅＶである）。このフラグメントイオンの情報より化合物の構造解析が可能となる。しかし、分子イオンが出にくいため分子量情報が得られない場合が多い。この場合はイオン化エネルギーを２０ｅＶ程度に落すか、よりソフトなイオン化法（ＣＩ、ＤＥＩ、ＤＣＩ、ＦＡＢ、ＥＳＩ）を選択する必要がある。

２）化学イオン化法（ＣＩ：ｃｈｅｍｉｃａｌｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ法）
あらかじめイオン化された反応ガス（試薬ガス）の中に気化した試料を送り込みイオン化する方法である。イオン分子反応を用いてイオン化するため、イオン化エネルギーが有機化合物のイオン化エネルギーに近いためフラグメントイオンが非常に少なく、分子量情報を持ったイオン（（Ｍ＋Ｈ）^＋、（Ｍ＋ＮＨ_４）^＋、（Ｍ−Ｈ）⁻など）がベースイオンとして現れる。反応ガスとしては一般的にメタン、イソブタン、アンモニアが用いられている。

３）脱離電子イオン化法（ＤＥＩ：ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ法）
電子線の近傍で瞬間加熱を行ない試料が熱分解を起こす前に、気化させイオン化させる方法で、熱不安定物質や難揮発性物質の測定が可能となる。さらに、通常の直接導入法におけるＥＩ法より分子イオンが強く出るため分子量情報が得やすくなる。測定法は、試料溶液をポイント・フィラメント（直径１００μｍの白金線）の先端に付着させ、イオン源内に挿入後フィラメントを急速加熱し試料を気化させる。

４）脱離化学イオン化法（ＤＣＩ：ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｃｈｅｍｉｃａｌｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ法）
イオン源をＣＩの状態でＤＥＩの操作を行なった場合が、ＤＣＩである。

５）高速原子衝撃）法（ＦＡＢ：ｆａｓｔａｔｏｍｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ法）
試料とマトリックス分子を良く混合し、ターゲット上に塗布しＸｅ等の高速中性原子を衝突させイオン化させる方法である。ＥＩ、ＣＩと違い、試料を気化させる必要がないため、熱不安定物質や難揮発性物質の測定に適している。しかし、低質量域にはマトリックス由来のバックグラウンドピークが強く現れるため低分子量の試料は測定が難しい場合がある。その場合はＦＲＩＴ−ＦＡＢによる測定が有効である。

６）フリット高速原子衝撃法（ＦＲＩＴ−ＦＡＢ：ＦＲＩＴ−ｆａｓｔａｔｏｍｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ法）
Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ−ｆｌｏｗＦＡＢとも呼ばれ、マトリックス溶液に溶解した試料を連続的に流し溶出液出口を高速中性原子で衝突させイオン化させる方法である。

７）エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ：ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ法）
大気圧イオン化法の一種で、キャピラリに高電圧を印加すると試料溶液が自ら噴霧、イオン化を行なう現象を利用したイオン化法である。ＦＡＢ同様、試料を気化させる必要がないため、熱不安定物質や難揮発性物質の測定に適している。このことは、質量範囲の小さい四重極型のタイプでも分子量の大きなペプチドやタンパクなどが測定できるようになる。通常のＥＳＩ測定では構造情報を持つフラグメントイオンが得られないため、通常より高めに電圧をＣａｐｉｌｌａｙ／Ｓｋｉｍｍｅｒ−１に印加することによりＩｎ−ｓｏｕｒｃｅＣＩＤが起き構造情報を持つフラグメントイオンを測定することが可能となる。

本明細書において「ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ」とは、ＭａｔｒｉｘＡｓｓｉｓｔｅｄＬａｓｅｒＤｅｓｏｒｐｔｉｏｎＩｏｎｉｚａｔｉｏｎ −Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ（ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）の略語である。ＭＡＬＤＩとは、田中らによって見いだされ、Ｈｉｌｌｅｎｋａｍｐらによって開発された技法である（ＫａｒａｓＭ．，Ｈｉｌｌｅｎｋａｍｐ，Ｆ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．１９８８，６０，２２９９−２３０１）。この方法では、試料とマトリックス溶液をモル比で（１０^−２〜５×１０^−４）：１に混合した後、混合溶液を標的上で乾固し、結晶状態にする。パルスレーザー照射により、大きなエネルギーがマトリックス上に与えられ、（Ｍ＋Ｈ）^＋、（Ｍ＋Ｎａ）^＋などの試料由来イオンとマトリックス由来イオンとが脱離する。微量のリン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、グアニジンなどで汚染されていても分析可能である。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（ＭＳ）は、ＭＡＬＤＩを利用して飛行時間を元に質量を測定するものである。イオンが一定の加速電圧Ｖで加速される場合、イオンの質量をｍ、イオンの速度をｖ、イオンの電荷数をｚ、電気素量をｅ、イオンの飛行時間をｔとしたとき、イオンのｍ／ｚは、
ｍ／ｚ＝２ｅＶｔ^２／Ｌ^２
で表すことができる。このようなＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ測定には、島津／ＫｒａｔｏｓのＫＯＭＰＡＣＴＭＡＬＤＩＩＩ／ＩＩＩなどを使用することができる。その測定の際には、製造業者が作成したパンフレットを参照することができる。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦの測定時に使用されるレーザー照射の照射エネルギーを本明細書において「解離エネルギー」という。

本明細書において「ＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ」とは、上で定義した「ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
ＭＳ」とは対照的に、低分子マトリックス試薬を使用せずに、レーザー照射により目的の分子を脱離・イオン化する方法を意味する。

本明細書において「同一実体」とは、本明細書において便宜上複数で表現されている実体が同じ個体そのものであることを意味する。

本明細書において「糖鎖」とは、単位糖（単糖および／またはその誘導体）が１つ以上連なってできた化合物をいう。単位糖が２つ以上連なる場合は、各々の単位糖同士の間は、グリコシド結合による脱水縮合によって結合する。このような糖鎖としては、例えば、生体中に含有される多糖類（グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸ならびにそれらの複合体および誘導体）の他、分解された多糖、糖タンパク質、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、糖脂質などの複合生体分子から分解または誘導された糖鎖など広範囲なものが挙げられるがそれらに限定されない。したがって、本明細書では、糖鎖は、「多糖（ポリサッカリド）」、「糖質」、「炭水化物」と互換可能に使用され得る。また、特に言及しない場合、本明細書において「糖鎖」は、糖鎖および糖鎖含有物質の両方を包含することがある。

本明細書において「糖鎖含有物質」とは、糖鎖および糖鎖以外の物質を含む物質をいう。このような糖鎖含有物質は、生体内に多く見出され、例えば、生体中に含有される多糖類の他、分解された多糖、糖タンパク質、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、糖脂質などの複合生体分子から分解または誘導された糖鎖など広範囲なものが挙げられるがそれらに限定されない。

本明細書において「単糖」とは、これより簡単な分子に加水分解されず、少なくとも１つの水酸基および少なくとも１つのアルデヒド基またはケトン基を含む、ポリヒドロキシアルデヒドまたはポリヒドロキシケトンならびにその誘導体をいう。通常単糖は、一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎＯ_ｎで表されるがそれらに限定されず、フコース（デオキシヘキソース）、Ｎ−アセチルグルコサミンなども含まれる。ここで、上の式において、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９および１０であるものを、それぞれジオース、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース、オクトース、ノノースおよびデコースという。一般に鎖式多価アルコールのアルデヒドまたはケトンに相当するもので、前者をアルドース、後者をケトースという。

本明細書において特に言及するときは、「単糖の誘導体」は、置換されていない単糖上の一つ以上の水酸基が別の置換基に置換され、結果生じる物質をいう。そのような単糖の誘導体としては、カルボキシル基を有する糖（例えば、Ｃ−１位が酸化されてカルボン酸となったアルドン酸（例えば、Ｄ−グルコースが酸化されたＤ−グルコン酸）、末端のＣ原子がカルボン酸となったウロン酸（Ｄ−グルコースが酸化されたＤ−グルクロン酸）、アミノ基またはアミノ基の誘導体（例えば、アセチル化されたアミノ基）を有する糖（例えば、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンなど）、アミノ基およびカルボキシル基を両方とも有する糖（例えば、Ｎ−アセチルノイラミン酸（シアル酸）、Ｎ−アセチルムラミン酸など）、デオキシ化された糖（例えば、２−デオキシ−Ｄ−リボース）、硫酸基を含む硫酸化糖、リン酸基を含むリン酸化糖などがあるがそれらに限定されない。本明細書では、単糖という場合は、上記誘導体も包含する。あるいは、ヘミアセタール構造を形成した糖において、アルコールと反応してアセタール構造のグリコシドもまた、単糖の範囲内にある。

本明細書において「相互作用」とは、２つの物体について言及するとき、その２つの物体が相互に力を及ぼしあうことをいう。そのような相互作用としては、例えば、共有結合、水素結合、ファンデルワ−ルス力、イオン性相互作用、非イオン性相互作用、疎水性相互作用、静電的相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。好ましくは、相互作用は、水素結合、疎水性相互作用などである。本明細書において「共有結合」とは、当該分野における通常の意味で用いられ、電子対が２つの原子に共有されて形成する化学結合をいう。本明細書において「水素結合」とは、当該分野における通常の意味で用いられ、電気的陰性度の高い原子に一つしかない水素原子の核外電子が引き寄せられて水素原子核が露出し、これが別の電気的陰性度の高い原子を引き寄せて生じる結合をいい、例えば、水素原子と電気的陰性度の高い（フッ素、酸素、窒素などの）原子との間にできる。

本明細書において「糖鎖または糖鎖含有物質の捕捉」とは、本発明の「金属−有機残基複合体」または「金属−被検体複合体」と「糖鎖または糖鎖含有物質」との相互作用によって、上記複合体の糖鎖捕捉部位に糖鎖または糖鎖含有物質が結合されることを意味する。本発明における複合体の糖鎖捕捉部位は、保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基およびシステイン残基ならびにそれらの誘導体を含むことが好ましい。

本明細書において「転移酵素」とは、基転移反応を触媒する酵素の総称をいう。本明細書において、「転移酵素」は「トランスフェラーゼ」と互換可能に使用され得る。基転移反応は、以下の式（１）：
Ｘ−Ｙ＋Ｚ−Ｈ ⇔ Ｘ−Ｈ＋Ｚ−Ｙ（１）
に示すように、一つの化合物（供与体）から基Ｙが他の化合物（受容体）に転移する形で行われる。

本明細書において「糖転移酵素」とは、糖（上記式（１）の基Ｙに相当；単位糖または糖鎖）をある場所（上記式（１）の化合物Ｘ−Ｙに相当）から別の場所（上記式（１）の化合物Ｚ−Ｈに相当）へと転移させるよう触媒する作用を有する酵素をいう。糖転移酵素としては、例えば、ガラクトース転移酵素、グルコ−ス転移酵素、シアル酸転移酵素、マンノ−ス転移酵素、フコ−ス転移酵素、キシロ−ス転移酵素、Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、およびＮ−アセチルガラクトサミン転移酵素などが挙げられるがそれらに限定されない。そのような糖転移酵素としては、例えば、糖転移酵素の例としては、β１，４−ガラクトース転移酵素、α−１，３−ガラクトース転移酵素、β１，４−ガラクトース転移酵素、β１，３−ガラクトース転移酵素、β１，６−ガラクトース転移酵素、α２，６−シアル酸転移酵素、α１，４−ガラクトース転移酵素、セラミドガラクトース転移酵素、α１，２−フコース転移酵素、α１，３−フコース転移酵素、α１，４−フコース転移酵素、α１，６−フコース転移酵素、α１，３−Ｎ−アセチルガラクトサミン転移酵素、α１，６−Ｎ−アセチルガラクトサミン転移酵素、β１，４−Ｎ−アセチルガラクトサミン転移酵素、ポリペプチドＮ−アセチルガラクトサミン転移酵素、β１，４−Ｎアセチルグルコサミン転移酵素、β１，２−Ｎアセチルグルコサミン転移酵素、β１，３−Ｎアセチルグルコサミン転移酵素、β１，６−Ｎアセチルグルコサミン転移酵素、α１，４−Ｎアセチルグルコサミン転移酵素、β１，４−マンノース転移酵素、α１，２−マンノース転移酵素、α１，３−マンノース転移酵素、α１，４−マンノース転移酵素、α１，６−マンノース転移酵素、α１，２−グルコース転移酵素、α１，３−グルコース転移酵素、α２，３−シアル酸転移酵素、α２，８−シアル酸転移酵素、α１，６−グルコサミン転移酵素、α１，６−キシロース転移酵素、βキシロース転移酵素（プロテオグリカンコア構造合成酵素）、β１，３−グルクロン酸転移酵素、ヒアルロン酸合成酵素、他の糖ヌクレオチドを糖ドナーとして用いる糖転移酵素およびドルコールリン酸型糖ドナーを用いる糖転移酵素などが挙げられるがそれらに限定されない。

本発明において「糖鎖伸長反応」とは、上で定義した糖転移酵素の存在下で糖鎖の鎖長が伸長する反応をいう。

本明細書において使用される用語「生体分子」とは、生体に関連する分子をいう。そのような生体分子を含む試料を、本明細書において特に生体試料ということがある。本明細書において「生体」とは、生物学的な有機体をいい、動物、植物、菌類、ウイルスなどを含むがそれらに限定されない。従って、生体分子は、生体から抽出される分子を包含するが、それに限定されず、生体に影響を与え得る分子であれば生体分子の定義に入る。そのような生体分子には、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、核酸（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡのようなＤＮＡ、ｍＲＮＡのようなＲＮＡを含む）、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、脂質、低分子（例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子など）、これらの複合分子などが包含されるがそれらに限定されない。本明細書では、生体分子は、好ましくは、糖鎖または糖鎖を含む複合分子（例えば、糖タンパク質、糖脂質など）であり得る。

そのような生体分子の供給源としては、生物由来の糖鎖が結合または付属する材料であれば特にその由来に限定はなく、動物、植物、細菌、ウイルスを問わない。より好ましくは動物由来生体試料が挙げられる。好ましくは、例えば、全血、血漿、血清、汗、唾液、尿、膵液、羊水、髄液等が挙げられ、より好ましくは血漿、血清、尿が挙げられる。生体試料には個体から予め分離されていない生体試料も含まれる。例えば外部から試液が接触可能な粘膜組織、あるいは腺組織、好ましくは乳腺、前立腺、膵臓に付属する管組織の上皮が含まれる。

本明細書において使用される用語「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変（例えば、標識成分との結合体化）。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の１または２以上のアナログを含むポリペプチド（例えば、非天然のアミノ酸などを含む）、ペプチド様化合物（例えば、ペプトイド）および当該分野において公知の他の改変が包含される。本発明の遺伝子産物は、通常ポリペプチド形態をとる。このようなポリペプチド形態の本発明の遺伝子産物は、本発明の診断、予防、治療または予後のための組成物として有用である。

本明細書において使用される用語「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいう。この用語はまた、「誘導体オリゴヌクレオチド」または「誘導体ポリヌクレオチド」を含む。「誘導体オリゴヌクレオチド」または「誘導体ポリヌクレオチド」とは、ヌクレオチドの誘導体を含むか、またはヌクレオチド間の結合が通常とは異なるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドをいい、互換的に使用される。そのようなオリゴヌクレオチドとして具体的には、例えば、２’−Ｏ−メチル−リボヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に変換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がＮ３’−Ｐ５’ホスホロアミデート結合に変換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリボースとリン酸ジエステル結合とがペプチド核酸結合に変換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のウラシルがＣ−５プロピニルウラシルで置換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のウラシルがＣ−５チアゾールウラシルで置換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のシトシンがＣ−５プロピニルシトシンで置換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のシトシンがフェノキサジン修飾シトシン（ｐｈｅｎｏｘａｚｉｎｅ−ｍｏｄｉｆｉｅｄｃｙｔｏｓｉｎｅ）で置換された誘導体オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ中のリボースが２’−Ｏ−プロピルリボースで置換された誘導体オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド中のリボースが２’−メトキシエトキシリボースで置換された誘導体オリゴヌクレオチドなどが例示される。他にそうではないと示されなければ、特定の核酸配列はまた、明示的に示された配列と同様に、その保存的に改変された改変体（例えば、縮重コドン置換体）および相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、１またはそれ以上の選択された（または、すべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る（Ｂａｔｚｅｒら、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＲｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ８：９１−９８（１９９４））。本発明の遺伝子は、通常、このポリヌクレオチド形態をとる。このようなポリヌクレオチド形態の本発明の遺伝子または遺伝子産物は、本発明の診断、予防、治療または予後のための組成物として有用である。

本明細書において、物質（例えば、糖鎖、核酸またはタンパク質などの生物学的因子）の「単離」とは、その生物学的因子が天然に存在する生物体の細胞内の他の物質（例えば、糖鎖または糖鎖含有物質である場合、糖鎖または糖鎖含有物質以外の因子、あるいは、目的とする糖鎖または糖鎖含有物質以外の糖鎖または糖鎖含有物質；核酸である場合、核酸以外の因子および目的とする核酸以外の核酸配列を含む核酸；タンパク質である場合、タンパク質以外の因子および目的とするタンパク質以外のアミノ酸配列を含むタンパク質など）から実質的に分離または精製されたものをいう。「単離された」、糖鎖または糖鎖含有物質には、本発明の精製方法によって精製された糖鎖または糖鎖含有物質が含まれる。したがって、単離された糖鎖または糖鎖含有物質は、化学的に合成した糖鎖または糖鎖含有物質を包含する。

本明細書において、物質（例えば、糖鎖、核酸またはタンパク質などの生物学的因子）の「精製」とは、その物質に天然に随伴する因子の少なくとも一部を除去することをいう。したがって、精製および分離は、その形態が一部重複する。したがって、通常、精製された物質（例えば、糖鎖または糖鎖含有物質のような生物学的因子）におけるその物質の純度は、その物質が通常存在する状態よりも高い（すなわち濃縮されている）が、天然に随伴する因子が低減されている限り、濃縮されていない状態も「精製」の概念に包含される。

本明細書において物質（例えば、糖鎖または糖鎖含有物質のような生物学的因子）の「濃縮」とは、その物質が濃縮前に試料に含まれている含有量よりも高い濃度に上昇させる行為をいう。従って、濃縮もまた、精製および分離と、その概念が一部重複する。したがって、通常、濃縮された物質（例えば、糖鎖または糖鎖含有物質のような生物学的因子）は、その物質が通常存在する状態における不純物の含有量は低減されているが、目的とする物質の含有量が増加している限り、ある特定の不純物が増加していてもよく、「精製」されていない状態も「濃縮」の概念に包含される。

本明細書において「金属−有機残基複合体と糖鎖または糖鎖含有物質とが反応しうる条件」とは、金属−有機残基複合体と、糖鎖または糖鎖含有物質とが相互作用し得る（好ましくは、共有結合を形成する）のに十分な条件（例えば、緩衝剤、溶媒の極性、温度、ｐＨ、塩濃度、圧力など）をいう。このような条件を設定するのに必要なパラメータの設定は、当業者の技術範囲内であり、相互作用の種類、糖鎖または糖鎖含有物質の種類、糖鎖捕捉担体の種類（例えば、アルデヒド基と流体中で反応し得る官能基として、保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基およびシステイン残基ならびにそれらの誘導体）など相互作用に関連する諸パラメータを考慮することにより、当業者は、そのような条件を当該分野において周知の技術を用いて設定し、相互作用反応を行わせることができる。好ましい実施形態では、そのような条件は、糖鎖が水溶液などの流体中で形成する環状のヘミアセタール型と非環状のアルデヒド型との平衡において、アルデヒド基と反応して特異的かつ安定な結合を形成させるような条件が挙げられるがそれに限定されない。あるいは、反応に供する流体にケト基が実質的に含まれていないこともまた１つの好ましい条件であり得る。そのような条件としては、例えば、ｐＨ５．６の酢酸緩衝液を常温常圧（例えば、２０℃および１気圧）にて用いることなどが挙げられる。

（有機化学）
有機化学については、例えば、ＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒ．Ｔ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｒ．Ｎ．Ｂｏｙｄ５ｔｈｅｄ．（１９８７年）などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。

本明細書においては、特に言及がない限り、「置換」は、ある有機化合物または置換基中の１または２以上の水素原子を他の原子または原子団で置き換えることをいう。水素原子を１つ除去して１価の置換基に置換することも可能であり、そして水素原子を２つ除去して２価の置換基に置換することも可能である。

本発明の「金属−有機残基複合体」の有機残基または「金属−被検体複合体」の被検体が、置換Ｒによって置換されている場合、そのようなＲは、単数または複数存在し、複数存在する場合は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、炭素環基、置換された炭素環基、ヘテロ環基、置換されたヘテロ環基、ハロゲン、ヒドロキシ、置換されたヒドロキシ、チオール、置換されたチオール、シアノ、ニトロ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシ、置換されたカルボキシ、アシル、置換されたアシル、チオカルボキシ、置換されたチオカルボキシ、アミド、置換されたアミド、置換されたカルボニル、置換されたチオカルボニル、置換されたスルホニルおよび置換されたスルフィニルからなる群より選択される。

本発明の「金属−有機残基複合体」または「金属−被検体複合体」を水系の溶媒に対する溶解度を上げるための置換基Ｒとしては、カルボキシル基またはアミノ基などの極性基そのもの、または、分子内にカルボキシル基またはアミノ基などの極性基を置換基として有する飽和または不飽和炭素鎖であることが好ましい。逆に、本発明の「金属−有機残基複合体」を有機系の溶媒に可溶化させるための置換基Ｒとしては、疎水性のものが好ましく、例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルキルなどが挙げられる。

本明細書において「ヘテロ環（基）」とは、炭素およびヘテロ原子をも含む環状構造を有する基をいう。ここで、ヘテロ原子は、Ｏ、ＳおよびＮからなる群より選択され、同一であっても異なっていてもよく、１つ含まれていても２以上含まれていてもよい。ヘテロ環基は、芳香族系または非芳香族系であり得、そして単環式または多環式であり得る。ヘテロ環基は置換されていてもよい。

本明細書において「アルコール」とは、脂肪族炭化水素の１または２以上の水素原子をヒドロキシル基で置換した有機化合物をいう。本明細書においては、ＲＯＨとも表記される。ここで、Ｒは、アルキル基である。好ましくは、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり得る。アルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノールなどが挙げられるがそれらに限定されない。

本明細書において「アルキル」とは、メタン、エタン、プロパンのような脂肪族炭化水素（アルカン）から水素原子が一つ失われて生ずる１価の基をいい、一般にＣ_ｎＨ_２ｎ＋１−で表される（ここで、ｎは正の整数である）。アルキルは、直鎖または分枝鎖であり得る。本明細書において「置換されたアルキル」とは、以下に規定する置換基によってアルキルのＨが置換されたアルキルをいう。これらの具体例は、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ９アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１１アルキルまたはＣ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ３置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ４置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ５置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ６置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ７置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ８置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ９置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ１０置換されたアルキル、Ｃ１〜Ｃ１１置換されたアルキルまたはＣ１〜Ｃ１２置換されたアルキルであり得る。ここで、例えばＣ１〜Ｃ１０アルキルとは、炭素原子を１〜１０個有する直鎖または分枝状のアルキルを意味し、メチル（ＣＨ_３−）、エチル（Ｃ_２Ｈ_５−）、ｎ−プロピル（ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２−）、イソプロピル（（ＣＨ_３）_２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）、ｎ−ヘキシル（ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）、ｎ−ヘプチル（ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）、ｎ−オクチル（ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）、ｎ−ノニル（ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）、ｎ−デシル（ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）、−Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、−ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２などが例示される。また、例えば、Ｃ１〜Ｃ１０置換されたアルキルとは、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルであって、そのうち１または複数の水素原子が置換基により置換されているものをいう。

本明細書において、「低級アルキル」は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、好ましくは、Ｃ１またはＣ２アルキルである。

本明細書において「シクロアルキル」とは、環式構造を有するアルキルをいう。「置換されたシクロアルキル」とは、以下に規定する置換基によってシクロアルキルのＨが置換されたシクロアルキルをいう。具体例としては、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ５シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１１シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ４置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ５置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ６置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ７置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１０置換されたシクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１１置換されたシクロアルキルまたはＣ３〜Ｃ１２置換されたシクロアルキルであり得る。例えば、シクロアルキルとしては、シクロプロピル、シクロヘキシルなどが例示される。

本明細書中、「アルキレン」とは、「アルキル」から導かれる２価の基であって、例えば、メチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、ヘプタメチレン、オクタメチレン、ノナンメチレン、デカンメチレン、ウンデカメチレン、ドデカメチレン等が挙げられる。

本明細書において「アルケニル」とは、エチレン、プロピレンのような、分子内に二重
結合を一つ有する脂肪族炭化水素から水素原子が一つ失われて生ずる１価の基をいい、一般にＣ_ｎＨ_２ｎ−１−で表される（ここで、ｎは２以上の正の整数である）。「置換されたアルケニル」とは、以下に規定する置換基によってアルケニルのＨが置換されたアルケニルをいう。具体例としては、Ｃ２〜Ｃ３アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ５アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ７アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ９アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１１アルケニルまたはＣ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ３置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ４置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ５置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ６置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ７置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ９置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ１０置換されたアルケニル、Ｃ２〜Ｃ１１置換されたアルケニルまたはＣ２〜Ｃ１２置換されたアルケニルであり得る。ここで、例えばＣ２〜Ｃ１０アルキルとは、炭素原子を２〜１０個含む直鎖または分枝状のアルケニルを意味し、ビニル（ＣＨ_２＝ＣＨ−）、アリル（ＣＨ_２＝ＣＨＣＨ_２−）、ＣＨ_３ＣＨ＝ＣＨ−などが例示される。また、例えば、Ｃ２〜Ｃ１０置換されたアルケニルとは、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニルであって、そのうち１または複数の水素原子が置換基により置換されているものをいう。

本明細書において「シクロアルケニル」とは、環式構造を有するアルケニルをいう。「置換されたシクロアルケニル」とは、以下に規定する置換基によってシクロアルケニルのＨが置換されたシクロアルケニルをいう。具体例としては、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ５シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ１１シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ４置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ５置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ６置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ７置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ８置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ９置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ１０置換されたシクロアルケニル、Ｃ３〜Ｃ１１置換されたシクロアルケニルまたはＣ３〜Ｃ１２置換されたシクロアルケニルであり得る。例えば、好ましいシクロアルケニルとしては、１−シクロペンテニル、２−シクロヘキセニルなどが例示される。

本明細書中、「アルケニレン」とは、「アルケニル」から導かれる２価の基であって、例えば、ビニレン、プロペニレン、ブテニレン等が挙げられる。

本明細書において「アルキニル」とは、アセチレンのような、分子内に三重結合を一つ有する脂肪族炭化水素から水素原子が一つ失われて生ずる１価の基をいい、一般にＣ_ｎＨ_２ｎ−３−で表される（ここで、ｎは２以上の正の整数である）。「置換されたアルキニル」とは、以下に規定する置換基によってアルキニルのＨが置換されたアルキニルをいう。具体例としては、Ｃ２〜Ｃ３アルキニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、Ｃ２〜Ｃ５アルキニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ２〜Ｃ７アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ９アルキニル、Ｃ２〜Ｃ１０アルキニル、Ｃ２〜Ｃ１１アルキニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ２〜Ｃ３置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ４置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ５置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ６置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ７置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ８置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ９置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ１０置換されたアルキニル、Ｃ２〜Ｃ１１置換されたアルキニルまたはＣ２〜Ｃ１２置換されたアルキニルであり得る。ここで、例えば、Ｃ２〜Ｃ１０アルキニルとは、例えば炭素原子を２〜１０個含む直鎖または分枝状のアルキニルを意味し、エチニル（ＣＨ≡Ｃ−）、１−プロピニル（ＣＨ_３Ｃ≡Ｃ−）などが例示される。また、例えば、Ｃ２〜Ｃ１０置換されたアルキニルとは、Ｃ２〜Ｃ１０アルキニルであって、そのうち１または複数の水素原子が置換基により置換されているものをいう。

本明細書中、「アルキニレン」とは、「アルキニル」から導かれる２価の基であって、
例えば、プロピニレン、ブチニレン等が挙げられる。

本明細書において「アルコキシ」とは、アルコール類のヒドロキシ基の水素原子が失われて生ずる１価の基をいい、一般にＣ_ｎＨ_２ｎ＋１Ｏ−で表される（ここで、ｎは１以上の整数である）。「置換されたアルコキシ」とは、以下に規定する置換基によってアルコキシのＨが置換されたアルコキシをいう。具体例としては、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ７アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ９アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１０アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１１アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ２置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ５置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ７置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ９置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１０置換されたアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１１置換されたアルコキシまたはＣ１〜Ｃ１２置換されたアルコキシであり得る。ここで、例えば、Ｃ１〜Ｃ１０アルコキシとは、炭素原子を１〜１０個含む直鎖または分枝状のアルコキシを意味し、メトキシ（ＣＨ_３Ｏ−）、エトキシ（Ｃ_２Ｈ_５Ｏ−）、ｎ−プロポキシ（ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−）などが例示される。

本明細書において「炭素環基」とは、炭素のみを含む環状構造を含む基であって、前記の「シクロアルキル」、「置換されたシクロアルキル」、「シクロアルケニル」、「置換されたシクロアルケニル」以外の基をいう。炭素環基は芳香族系または非芳香族系であり得、そして単環式または多環式であり得る。「置換された炭素環基」とは、以下に規定する置換基によって炭素環基のＨが置換された炭素環基をいう。具体例としては、Ｃ３〜Ｃ４炭素環基、Ｃ３〜Ｃ５炭素環基、Ｃ３〜Ｃ６炭素環基、Ｃ３〜Ｃ７炭素環基、Ｃ３〜Ｃ８炭素環基、Ｃ３〜Ｃ９炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１０炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１１炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１２炭素環基、Ｃ３〜Ｃ４置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ５置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ６置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ７置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ８置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ９置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１０置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１１置換された炭素環基またはＣ３〜Ｃ１２置換された炭素環基であり得る。炭素環基はまた、Ｃ４〜Ｃ７炭素環基またはＣ４〜Ｃ７置換された炭素環基であり得る。炭素環基としては、フェニル基から水素原子が１個欠失したものが例示される。ここで、水素の欠失位置は、化学的に可能な任意の位置であり得、芳香環上であってもよく、非芳香環上であってもよい。

本明細書において「ヘテロ環基」とは、炭素およびヘテロ原子をも含む環状構造を有する基をいう。ここで、ヘテロ原子は、Ｏ、ＳおよびＮからなる群より選択され、同一であっても異なっていてもよく、１つ含まれていても２以上含まれていてもよい。ヘテロ環基は、芳香族系または非芳香族系であり得、そして単環式または多環式であり得る。「置換されたヘテロ環基」とは、以下に規定する置換基によってヘテロ環基のＨが置換されたヘテロ環基をいう。具体例としては、Ｃ３〜Ｃ４炭素環基、Ｃ３〜Ｃ５炭素環基、Ｃ３〜Ｃ６炭素環基、Ｃ３〜Ｃ７炭素環基、Ｃ３〜Ｃ８炭素環基、Ｃ３〜Ｃ９炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１０炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１１炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１２炭素環基、Ｃ３〜Ｃ４置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ５置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ６置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ７置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ８置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ９置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１０置換された炭素環基、Ｃ３〜Ｃ１１置換された炭素環基またはＣ３〜Ｃ１２置換された炭素環基の１つ以上の炭素原子をヘテロ原子で置換したものであり得る。ヘテロ環基はまた、Ｃ４〜Ｃ７炭素環基またはＣ４〜Ｃ７置換された炭素環基の炭素原子を１つ以上へテロ原子で置換したものであり得る。ヘテロ環基としては、チエニル基、ピロリル基、フリル基、イミダゾリル基、ピリジル基などが例示される。水素の欠失位置は、化学的に可能な任意の位置であり得、芳香環上であってもよく、非芳香環上であってもよい。

本明細書において「フェニル基」とは、Ｃ６芳香族系炭素環基であり、ベンゼンからＨを１個欠失した官能基である。「置換されたフェニル基」とは、フェニル基のＨが以下で定義される置換基で置換されたものをいう。

本明細書において、炭素環基またはヘテロ環基は、下記に定義されるように１価の置換基で置換され得ることに加えて、２価の置換基で置換され得る。そのような二価の置換は、オキソ置換（＝Ｏ）またはチオキソ置換（＝Ｓ）であり得る。

本明細書において「ハロゲン」とは、周期表７Ｂ族に属するフッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）、ヨウ素（Ｉ）などの元素の１価の基をいう。

本明細書において「ヒドロキシ」とは、−ＯＨで表される基をいう。「置換されたヒドロキシ」とは、ヒドロキシのＨが下記で定義される置換基で置換されているものをいう。

本明細書において「チオール」とは、ヒドロキシ基の酸素原子を硫黄原子で置換した基（メルカプト基）であり、−ＳＨで表される。「置換されたチオール」とは、メルカプトのＨが下記で定義される置換基で置換されている基をいう。

本明細書において「シアノ」とは、−ＣＮで表される基をいう。「ニトロ」とは、−ＮＯ_２で表される基をいう。「アミノ」とは、−ＮＨ_２で表される基をいう。「置換されたアミノ」とは、アミノのＨが以下で定義される置換基で置換されたものをいう。

本明細書において「カルボキシ」とは、−ＣＯＯＨで表される基をいう。「置換されたカルボキシ」とは、カルボキシのＨが以下に定義される置換基で置換されたものをいう。

本明細書において「チオカルボキシ」とは、カルボキシ基の酸素原子を硫黄原子で置換した基をいい、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＨまたは−ＣＳＳＨで表され得る。「置換されたチオカルボキシ」とは、チオカルボキシのＨが以下に定義される置換基で置換されたものをいう。

本明細書中、「アシル」とは、カルボニルに前記「アルキル」が結合したアルキルカルボニル、アルキル部分が前記「シクロアルキル」が結合したシクロアルキルカルボニル、カルボニルに前記「アリール」が結合したアリールカルボニルを意味する。例えば、アセチル、ｎ−プロパノイル、ｉ−プロパノイル、ｎ−ブチロイル、ｔ−ブチロイル、シクロプロパノイル、シクロブタノイル、シクロペンタノイル、シクロヘキサノイル、ベンゾイル、α−ナフトイル、β−ナフトイルを意味する。「置換されたアシル」とは、アシルの水素を以下に定義される置換基で置換したものをいう。

本明細書において「アミド」とは、アンモニアの水素を酸基（アシル基）で置換した基であり、好ましくは、−ＣＯＮＨ_２で表される。「置換されたアミド」とは、アミドが置換されたものをいう。

本明細書において「カルボニル」とは、アルデヒドおよびケトンの特性基である−（Ｃ＝Ｏ）−を含むものを総称したものをいう。「置換されたカルボニル」は、下記において選択される置換基で置換されているカルボニル基を意味する。

本明細書において「チオカルボニル」とは、カルボニルにおける酸素原子を硫黄原子に置換した基であり、特性基−（Ｃ＝Ｓ）−を含む。チオカルボニルには、チオケトンおよびチオアルデヒドが含まれる。「置換されたチオカルボニル」とは、下記において選択される置換基で置換されたチオカルボニルを意味する。

本明細書において「スルホニル」とは、特性基である−ＳＯ_２−を含むものを総称したものをいう。「置換されたスルホニル」とは、下記において選択される置換基で置換されたスルホニルを意味する。

本明細書において「スルフィニル」とは、特性基である−ＳＯ−を含むものを総称したものをいう。「置換されたスルフィニル」とは、下記において選択される置換基で置換されているスルフィニルを意味する。

本明細書において「アリール」とは、芳香族炭化水素の環に結合する水素原子が１個離脱して生ずる基をいい、本明細書において、「炭素環基」に包含される。例えば、フェニル、α−ナフチル、β−ナフチル、アンスニル、インデニル、フェナンスリル等が挙げられる。「置換されたアリール」とは、下記において選択される置換基で置換されているアリールを意味する。

本明細書において「ヘテロアリール」とは、ヘテロ原子を含有する芳香族炭化水素の環に結合する水素原子が１個離脱して生ずる基をいい、本明細書において、「ヘテロ環基」に包含される。例えば、フラニル、チオフェニル、ピリジル等が挙げられる。「置換されたヘテロアリール」とは、下記において選択される置換基で置換されているヘテロアリールを意味する。

本明細書中、「アリレン」とは、例えば、フェニレン、ナフチレン等が挙げられる。さらに詳しくは、１，２−フェニレン、１，３−フェニレン、１，４−フェニレン等が挙げられる。

本明細書中、「ヘテロアリレン」とは、例えば、チオフェンジイル、フランジイル、ピリジンジイル等が挙げられる。さらに詳しくは、２，５−チオフェンジイル、２，５−フランジイル等が挙げられる。

本明細書において「ヒドロキシルアミノ」とは、ヒドロキシルアミンＮＨ_２ＯＨから水素原子を除いてできる１価の基をいう。「置換されたヒドロキシルアミノ」とは、下記において選択される置換基で置換されているヒドロキシルアミノを意味する。

本明細書において「Ｎ−アルキルヒドロキシルアミノ」とは、ヒドロキシルアミンの窒素原子に結合する水素原子をアルキル基で置換したヒドロキシルアミノを意味する。

本明細書において「ヒドラジド」とは、−ＣＯＮＨＮＨ_２で表される基をいう。「置換されたヒドラジド」とは、下記において選択される置換基で置換されているヒドラジドを意味する。

本明細書において「チオセミカルバジド」とは、Ｈ_２ＮＣＳＮＨＮＨ_２で表される基をいう。「置換されたチオセミカルバジド」とは、下記において選択される置換基で置換されているチオセミカルバジドを意味する。

本明細書において「エステル」とは、特性基である−ＣＯＯ−を含むものを総称したものをいう。「置換されたエステル」とは、下記において選択される置換基で置換されているエステルを意味する。

本明細書において「４級アンモニウム塩」とは、−Ｎ^＋（Ｒ^４）（Ｒ^５）（Ｒ^６）で表
される基であり、Ｒ^４、Ｒ^５およびＲ^６は低級アルキル基を意味する。ここでいう「低級アルキル」とは上記で定義したとおりである。通常、「４級アンモニウム塩」は、−Ｎ^＋（Ｒ^４）（Ｒ^５）（Ｒ^６）とハロゲン化物イオンとが対をなして塩を形成する。

本明細書において「水酸基」とは、−ＯＨで表される基をいう。「水酸基」は、「ヒドロキシル基」と互換可能である。

本発明において、「アルデヒド」とは、特性基である−ＣＨＯを含むものを総称したものをいう。「置換されたアルデヒド」とは、下記において選択される置換基で置換されているアルデヒドを意味し、「アルデヒド誘導体」と互換可能に使用され得る。

本発明において、「カルボン酸」とは、特性基である−ＣＯＯＨを含むものを総称したものをいう。「置換されたカルボン酸」とは、下記において選択される置換基で置換されているカルボン酸を意味し、「アルデヒド誘導体」と互換可能に使用され得る。

本明細書において、Ｃ１、Ｃ２、、、Ｃｎは、炭素数を表す。従って、Ｃ１は炭素数１個の置換基を表すために使用される。

本明細書において、「光学異性体」とは、結晶または分子の構造が鏡像関係にあって、重ねあわせることのできない一対の化合物の一方またはその組をいう。立体異性体の一形態であり、他の性質は同じであるにもかかわらず、旋光性のみが異なる。

本明細書においては、特に言及がない限り、置換は、ある有機化合物または置換基中の１または２以上の水素原子を他の原子または原子団で置き換えることをいう。水素原子を１つ除去して１価の置換基に置換することも可能であり、そして水素原子を２つ除去して２価の置換基に置換することも可能である。

置換基としては、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アルコキシ、炭素環基、ヘテロ環基、ハロゲン、ヒドロキシ、、チオール、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、アシル、アシルアミノ、チオカルボキシ、アミド、置換されたカルボニル、置換されたチオカルボニル、置換されたスルホニルまたは置換されたスルフィニルが挙げられるがそれらに限定されない。置換基が置換された場合は、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルコキシアルキル、ハロゲノアルキル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アシル、アシルオキシ、ヒドロキシ、メルカプト、カルボキシ、チオカルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、カルバモイル、置換されていてもよいアミノで置換され得る。

本明細書において「保護反応」とは、Ｂｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル基）のような保護基を、保護が所望される官能基に付加する反応をいう。保護基により官能基を保護することによって、より反応性の高い官能基の反応を抑制し、より反応性の低い官能基のみを反応させることができる。

本明細書において「脱保護反応」とは、Ｂｏｃのような保護基を脱離させる反応をいう。脱保護反応としては、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）による反応およびＰｄ／Ｃを用いる還元反応のような反応が挙げられる。

本明細書において「保護基」としては、例えば、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、アセチル基、ベンジル基、ベンゾイル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブチルジメチル基、シリル基、トリメチルシリルエチル基、Ｎ−フタルイミジル基、トリ
メチルシリルエチルオキシカルボニル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、カルバメート基などが代表的な保護基として挙げられる。保護基は、例えば、アミノ基、カルボキシル基などの反応性の官能基を保護するために用いることができる。反応の条件や目的に応じ、種々の保護基を使い分けることができる。ヒドロキシ基の保護基にはアセチル基、ベンジル基、シリル基またはそれらの誘導体などが、アミノ基の保護基にはアセチル基のほかベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基またはそれらの誘導体などを使用することができる。アミノオキシ基およびＮ−アルキルアミノオキシ基の保護基として、トリメチルシリルエチルオキシカルボニル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基またはそれらの誘導体が好ましい。

本発明の各方法において、目的とする生成物は、反応液から夾雑物（未反応減量、副生成物、溶媒など）を、当該分野で慣用される方法（例えば、抽出、蒸留、洗浄、濃縮、沈澱、濾過、乾燥など）によって除去した後に、当該分野で慣用される後処理方法（例えば、吸着、溶離、蒸留、沈澱、析出、クロマトグラフィーなど）を組み合わせて処理して単離し得る。

（本明細書において用いられる一般技術）
本明細書において使用される技術は、そうではないと具体的に指示しない限り、当該分野の技術範囲内にある、有機化学、生化学、遺伝子工学、分子生物学、微生物学、遺伝学および関連する分野における周知慣用技術を使用する。そのような技術は、例えば、以下に列挙した文献および本明細書において他の場所おいて引用した文献においても十分に説明されている。

本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．ｅｔａｌ．（１９８９）．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒおよびその３ｒｄＥｄ．（２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔａｌ．ｅｄｓ，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＩｎｃ．，ＮＹ，１０１５８（２０００）；Ｉｎｎｉｓ，Ｍ．Ａ．（１９９０）．ＰＣＲＰｒｏｔｏｃｏｌｓ：ＡＧｕｉｄｅｔｏＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ；Ｉｎｎｉｓ，Ｍ．Ａ．ｅｔａｌ．（１９９５）．ＰＣＲＳｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ；Ｓｎｉｎｓｋｙ，Ｊ．Ｊ．ｅｔａｌ．（１９９９）．ＰＣＲＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：ＰｒｏｔｏｃｏｌｓｆｏｒＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＧｅｎｏｍｉｃｓ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９８５）．ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９９０）．ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｆ．（１９９１）．ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＡｎａｌｏｇｕｅｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ；Ａｄａｍｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔａｌ．（１９９２）．ＴｈｅＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆｔｈｅＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ，Ｃｈａｐｍａｎ＆Ｈａｌｌ；Ｓｈａｂａｒｏｖａ，Ｚ．ｅｔａｌ．（１９９４）．ＡｄｖａｎｃｅｄＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ；Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔａｌ．（１９９６）．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓｉｎＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｌｏｇｙ，ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（１９９６）．ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ；ＭｅｔｈｏｄｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ２３０、２４２、２４７、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、１９９４；別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、１９９７；畑中、西村ら、糖質の科学と工学、講談社サイエンティフィク、１９９７；糖鎖分子の設計と生理機能日本化学会編、学会出版センター、２００１などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。

（好ましい実施形態の説明）
以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。

１つの局面において、本発明は、金属が硫黄原子を介して有機残基と結合した金属−有機残基複合体から硫黄原子を含む有機残基誘導体をイオン化させて、硫黄原子を含む有機残基誘導体を質量分析する方法を提供する。この方法によって、金属に結合した自己組織化膜表面上での化学反応を高感度かつ正確に解析することが可能となる。

本発明で用いる金属として、金、銀、カドミウムまたはセレンなどの単体であってもよいし、例えば鉄、ニッケル、コバルトまたは酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）などの磁性粒子およびこの粒子の表面に被覆した金、銀、カドミウムまたはセレンなどの層を含む複合微粒子であってもよく、これらに限定されない。上記のような磁性を有する複合微粒子を使用する場合には、これに硫黄原子を含む有機残基誘導体を担持したのち、磁石等を用いて微粒子を簡易に回収し、精製無しで質量分析することができる。本発明で用いる金属の形態は特に制限されず、質量分析用の金属基板であってもよいし、コロイドを形成し得る金属微粒子であってもよいが、レーザーの乱反射が可能である表面形態を有する金属が好ましい。これによって、質量分析の感度が高くなり、夾雑物（バッファーまたは塩など）が存在したとしても、質量分析測定に影響を及ぼす可能性が少なくなる。金表面に結合したチオール化合物のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによるイオン化効率の観点において、本発明で用いる金属の最も好ましい形態としては、金属微粒子が挙げられる。チオール基と金属との結合を利用して、金属微粒子表面に糖鎖や種々の官能基を提示することができ、またその金属微粒子の溶解性を、金属微粒子表面に導入するリガンドの性質によって自在に制御することができる。従って、チオール化合物で被覆した金属微粒子は、水系での反応のみならず有機溶媒系での固相合成を行う際に有用な固相担体として利用することができる。微粒子は反応溶媒に溶解しているが、精製の際には固体として遠心濾過によって溶液成分と分離可能であるため、分離精製も非常に容易に行えるという利点がある。さらに反応の経過を質量分析法によって直接追跡することができ、効率的に反応を行える。また、本発明によれば、硫黄原子を介して細胞毒性の無い有機残基と結合した金属微粒子を提供することにより、金属−有機残基複合粒子を生細胞に直接取り込ませることができ、細胞内で生じる様々な化学反応（例えば、酵素反応）を、その反応生成物を質量分析することで正確に解析することができる。金属微粒子の代表例である金微粒子および銀微粒子は、それぞれテトラクロロ金酸およびＡｇＮＯ_３を還元剤存在下で還元させることによって作製することができる。好ましい還元剤として、水素化ホウ素ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。これら金属を使用することによって、金属微粒子の表面上に硫黄原子を含む有機残基誘導体の規則正しい自己組織化膜を形成することができる。

好ましい実施形態において、本発明の質量分析は、ＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法によって行われる。本発明では、従来のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法において使用されてきたマトリックス試薬を特に必要としない。従来のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法において、「薬剤候補化合物として多いであろう低分子領域」について、マトリックス自身の強いピークにより、目的物のピークがうまく観察できないことが欠点とされてきたが、本発明のように目的の低分子化合物を金属基板（特に、金属微粒子）に担持することにより、マトリックスフリーなＬＤＩ−ＴＯＦＭＳを、高感度かつ正確に行うことができる。なお、本発明において、マトリックス試薬を使用する場合には、その好ましい試薬として、２，５−ジヒドロキシベンゾイックアシッド、α−シアノ−４−ヒドロキシ−ケイ皮酸、シナピン酸、ｔｒａｎｓ−３−インドール−アクリル酸、１，５−ジアミノ−ナフタレン、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸、９−ニトロ−アントラセン、２−ピコリン酸、３−ヒドロキシ−ピコリン酸、ニコチン酸、アントラニル酸、５−クロロ−サリチル酸、２’−（４−ヒドロキシフェニルアゾ）安息香酸、ジスラノール、および３−アミノ−キノリンが挙げられるが、これらに限定されない。最も好ましいマトリックス試薬は、２，５−ジヒドロキシベンゾイックアシッドである。

好ましい実施形態において、上記有機残基は、糖鎖または糖鎖含有物質を含む。

別の局面において、本発明は、
一般式（Ｉ）：
（Ｒ−Ｓ）_ｎ−Ｍ^１（Ｉ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子であり、Ｍ^１は金属であり、ｎはＭ^１に対する（Ｒ−Ｓ）基の化学量論比を表し、１以上の整数である）
で表される金属−有機残基複合体から硫黄原子を含む有機残基誘導体をイオン化することを特徴とする、
一般式（ＩＩ）：
Ｒ−ＳＨ（ＩＩ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩、および／または
一般式（ＩＩＩ）：
Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｒ（ＩＩＩ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩、
を質量分析する方法、を提供する。

さらに別の局面において、本発明は、
一般式（ＩＶ）：
Ｍ^１−Ｓ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−Ｓ−Ｍ^１（ＩＶ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子であり、両端のＭ^１は同一実体の金属であり、Ｘは低級アルキレンまたは低級アルケニレンである）
で表される金属−有機残基複合体から硫黄原子を含む有機残基誘導体をイオン化することを特徴とする、
一般式（Ｖ）：
ＨＳ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−ＳＨ（Ｖ）
（式中、Ｒ、ＳおよびＸは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩、および／または
一般式（ＶＩ）：

（式中、Ｒ、ＳおよびＸは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩、
を質量分析する方法、を提供する。

なおさらに別の局面において、本発明は、
以下の工程：
１）金属が以下の式（本明細書において、以下の式の群を［Ｘ群］とする）：
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３）、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ、
−Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ、または

（式中、Ｙ、Ｗ^１およびＷ^２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニレンであり；
Ｗ^４は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレンであり；
Ｚ^１は、置換されていてもよいアリレンまたは置換されていてもよいヘテロアリレンであり；
Ｚ^２は、含窒素複素環であり；
Ｚ^３およびＺ^５は、それぞれ独立してＣ１−Ｃ１２アルキレンであり；
Ｚ^４は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｚ^６は、Ｃ１−Ｃ２アルキレンであり；
ｎは１〜１０の整数である）
で表される基と結合した金属−有機残基複合体と、糖鎖または糖鎖含有物質とが反応しうる条件下で接触させる工程、
２）該糖鎖または該糖鎖含有物質が結合した金属−有機残基複合体を得る工程、および
３）得られた金属−有機残基複合体から硫黄原子を有する有機残基誘導体をイオン化する工程、
を包含する、糖鎖または糖鎖含有物質を質量分析する方法、を提供する。

本発明の上記工程１）において、金属−有機残基複合体と「糖鎖または糖鎖含有物質」とを接触させる前に、上記「糖鎖または糖鎖含有物質」中のアルデヒド基を遊離させる工程を包含することが好ましくあり得る。これは、例えば、糖鎖のアルデヒド基が保護されている場合などにおいて、本発明の糖鎖と特異的に相互作用し得る物質が有利に相互作用することができるようになるからである。そのようなアルデヒド基を遊離させる工程は、好ましくは、酵素処理および／または化学法による供プロトン反応を包含する。酵素処理としては、例えば、グリコシダーゼによる処理（例えば、ガラクトースの場合は、ガラクトオキシダーゼで処理してアルデヒド基を得る）が挙げられ、化学法による処理としては、ヒドラジン分解を挙げることができる。本発明の方法では、酵素処理および化学法をそれぞれ単独で用いてもよく、両方組み合わせて用いてもよい。酵素は、単数の種類であってもよく、複数種類のものであってもよい。また、糖タンパク質糖鎖に含まれるシアル酸からアルデヒドを遊離させる場合（例えば、シアル酸の８位と９位の間を開列させる場合）は、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_４）などの酸化剤が用いられる。

１実施形態において、上記有機残基は、糖鎖または糖鎖含有物質を含む基である。

１つの局面において、本発明は、金属が硫黄原子を介して被検体と結合した金属−被検体複合体から該硫黄原子を含む被検体をイオン化することを特徴とする、硫黄原子を含む被検体を質量分析する方法を提供する。

別の局面において、本発明は、以下の工程：
１）還元剤の存在下、テトラクロロ金酸および硫黄原子を有する被検体を反応させる工程、
２）金微粒子に該硫黄原子を介して被検体が結合した金−被検体複合粒子を得る工程、および
３）得られた金−被検体複合粒子から硫黄原子を有する被検体をイオン化する工程、
を包含する、硫黄原子を有する被検体を質量分析する方法、を提供する。

本発明の上記工程１）で用いる還元剤として、水素化ホウ素ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムを使用することが好ましいが、これらに限定されない。

好ましい実施形態において、上記工程１）は、水、アルコール系溶媒、酢酸エチル、エーテル系溶媒またはそれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒中で行われる。好ましいアルコール系溶媒としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールが挙げられる。好ましいエーテル系溶媒賭しては、ジメチルエーテル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランが挙げられる。上記工程１）が行われる温度は−２０℃から２００℃、好ましくは０℃〜１５０℃、さらに好ましくは２０℃〜１００℃である。また、化合物が安定なものであれば、室温〜溶媒の還流温度であることが好ましい。上記工程１）は、０．１時間〜２４時間、好ましくは１時間〜１２時間で行われる。

別の好ましい実施形態において、上記工程２）で得られた硫黄原子を介して被検体が結合した金属−被検体複合粒子は、遠心濾過により精製される。しかし、遠心濾過をせずにそのまま金属−被検体複合粒子を質量分析に供したとしても、感度が低下しないという複合粒子特有の利点を有する。

上記工程１）において、鉄（例えばＦｅＣｌ_３）の存在下で反応を行うと、金−被検体複合粒子が磁性を帯びるため、工程２）は磁石を用いて行うことができる。また、酵素反応の基質となる化合物を「検体」部分に有する磁性を帯びた金属−被検体複合粒子を、生細胞と接触させ、反応後に細胞をつぶして磁石で回収し、質量分析することで、細胞内で起こっている様々な酵素反応を解析することができる。

金属が銀である場合は、上記工程１）でテトラクロロ金酸の代わりに硝酸銀（ＡｇＮＯ_３）を用いることにより行うことができる。

１つの局面において、本発明は、上記工程２）で得られた金属−被検体複合粒子を化学反応または酵素反応に付し、反応系中の金属−被検体複合粒子から硫黄原子を有する被検体をイオン化し、質量分析により化学反応または酵素反応の進行を確認する方法を提供する。

本発明における上記酵素反応の好ましい例として、糖鎖伸長反応が挙げられるが、これに限定されない。

好ましい実施形態において、質量分析を用いて糖鎖伸長反応の進行を確認することによって、糖転移酵素の活性を確認することができる。

１つの局面において、本発明は、ａ）保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基およびシステイン残基ならびにそれらの誘導体からなる群から選択される基、およびｂ）硫黄原子、を含む基と結合した金属−有機残基複合体を提供する。

別の局面において、本発明は、還元剤の存在下、テトラクロロ金酸、ならびに
ａ）保護されていてもよいアミノオキシ基、保護されていてもよいＮ−アルキルアミノオキシ基、ヒドラジド基、アジド基、チオセミカルバジド基およびシステイン残基ならびにそれらの誘導体からなる群から選択される基、および
ｂ）チオール基またはジスルフィド基、
を含む化合物もしくはその塩を反応させることによる、金−有機残基複合粒子の製造方法を提供する。

これらによって、金属微粒子の表面上に糖鎖または糖鎖含有物質と相互作用する官能基を提示することができる。

１つの局面において、本発明は、
金属が、上記［Ｘ群］の式で表される基と結合した金属−有機残基複合体、を提供する。この金属−有機残基複合体は、以下の式（本明細書において、以下の式の群を［Ｙ群］とする）：
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｙ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｗ^１−Ｏ−Ｗ^２−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｗ^１−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｗ^４−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^２−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｏ−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ_２）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−Ｚ^５−Ｏ−ＮＨ（ＣＨ_３））_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｏ−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、
Ｍ^２−（Ｓ−Ｚ^１−Ｚ^３−Ｚ^４−ＣＨ（ＮＨ_２）−Ｚ^６−ＳＨ）_ｍ、または
一般式（ＶＩＩ）：

（式中、Ｍ^２は金属であり；
ｍは、Ｍ^２に対する硫黄原子を含む有機残基の化学量論比を表し、１以上の整数であり；Ｙ、Ｗ^１およびＷ^２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニレンであり；
Ｗ^４は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレンであり；
Ｚ^１は、置換されていてもよいアリレンまたは置換されていてもよいヘテロアリレンであり；
Ｚ^２は、含窒素複素環であり；
Ｚ^３およびＺ^５は、それぞれ独立してＣ１−Ｃ１２アルキレンであり；
Ｚ^４は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｚ^６は、Ｃ１−Ｃ２アルキレンであり；
ｎは１〜１０の整数である）とも表すことができる。

本発明の好ましい金属−有機残基複合体として、一般式（ＶＩＩ）：

（式中、Ｍ^２は金属である）で表される複合体が挙げられる。この複合体は、以下の式：

で表され、４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−メルカプト１，２，４−トリアゾール（略称：ＡＨＭＴ）のＳＨ基が金属と反応し結合してできた複合体である。このＡＨＭＴは、ホルムアルデヒドまたはアルデヒドと特異的に反応する呈色試薬として知られている（例えば、特許文献２、３、４および非特許文献２参照）。

別の局面において、還元剤の存在下、テトラクロロ金酸および以下の式（本明細書において、以下の式の群を［Ｚ群］とする）：

または

（式中、Ｙ、Ｗ^１およびＷ^２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニレンであり；
Ｗ^４は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレンであり；
Ｚ^１は、置換されていてもよいアリレンまたは置換されていてもよいヘテロアリレンであ
り；
Ｚ^２は、含窒素複素環であり；
Ｚ^３およびＺ^５は、それぞれ独立してＣ１−Ｃ１２アルキレンであり；
Ｚ^４は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｚ^６は、Ｃ１−Ｃ２アルキレンであり；
ｎは１〜１０の整数である）
で表される化合物もしくはその塩を反応させることによる、金−有機残基複合粒子の製造方法、が提供される。

別の局面によれば、前述の金属−有機残基複合体と、糖鎖または糖鎖含有物質とが反応しうる条件下で接触させることを特徴とする、糖鎖または糖鎖含有物質の捕捉方法、が提供される。

さらに別の局面によれば、以下の工程：
１）金属が硫黄原子を介して有機残基と結合した金属−有機残基複合体と、該有機残基と相互反応しうる物質とを、接触させる工程、
２）該相互作用しうる物質が結合した金属−有機残基複合体を得る工程、および
３）得られた金属−有機残基複合体から硫黄原子を有する有機残基誘導体をイオン化する工程、
を包含する、金属−有機残基複合体の有機残基と相互作用しうる物質の分子量を測定する方法、が提供される。

１つの局面において、本発明の糖鎖または糖鎖含有物質を質量分析する方法は、以下の工程：
１）式：

で表される化合物と金属とを接触させる工程、
２）１）で得られた金属−有機残基複合体を、糖鎖または糖鎖含有物質とが反応しうる条件下で接触させる工程、および
３）２）で得られた金属−有機残基複合体から硫黄原子を有する有機残基誘導体をイオン化する工程、
を包含する方法であってもよいし、以下の工程：
１）式：

で表される化合物と糖鎖または糖鎖含有物質とを、該化合物と該糖鎖または糖鎖含有物質とが反応しうる条件下で接触させる工程、
２）１）で得られた化合物と金属とを接触させる工程、および
３）２）で得られた金属−有機残基複合体から硫黄原子を有する有機残基誘導体をイオン化する工程、
を包含する方法であってもよい。

１つの局面において、本発明は、
一般式（ＩＩ）：
Ｒ−ＳＨ（ＩＩ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子である）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（ＩＩＩ）：
Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｒ（ＩＩＩ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（Ｖ）：
ＨＳ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−ＳＨ（Ｖ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義であり、Ｘは低級アルキレンまたは低級アルケニレンである）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（ＶＩ）：

（式中、Ｒ、ＳおよびＸは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩；またはそれらの混合物を含有する糖鎖捕捉用組成物を提供する。

好ましい実施形態において、本発明の糖鎖捕捉用組成物は、上記［Ｚ群］の式で表される化合物を含有する。

１つの局面において、本発明は、
一般式（Ｉ）：
（Ｒ−Ｓ）_ｎ−Ｍ^１（Ｉ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子であり、Ｍ^１は金属であり、ｎはＭ^１に対する（Ｒ−Ｓ）基の化学量論比を表し、１以上の整数である）で表される金属−有機残基複合体；または
一般式（ＩＶ）：
Ｍ^１−Ｓ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−Ｓ−Ｍ^１（ＩＶ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義であり、両端のＭ^１は同一実体の金属であり、Ｘは低級アルキレンまたは低級アルケニレンである）で表される金属−有機残基複合体、
を含有する、糖鎖捕捉用組成物を提供する。

好ましい実施形態において、本発明の糖鎖捕捉用組成物は、上記［Ｙ群］の式で表される金属−有機残基複合体を含有する。

１つの局面において、本発明は、
以下のＡ）およびＢ）：
Ａ）一般式（ＩＩ）：
Ｒ−ＳＨ（ＩＩ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子である）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（ＩＩＩ）：
Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｒ（ＩＩＩ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（Ｖ）：
ＨＳ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−ＳＨ（Ｖ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義であり、Ｘは低級アルキレンまたは低級アルケニレンである）で表される化合物もしくはその塩；
一般式（ＶＩ）：

（式中、Ｒ、ＳおよびＸは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩；またはそれらの混合物；および
Ｂ）金属、
を含む、糖鎖または糖鎖含有物質の質量分析用キット、を提供する。

好ましい実施形態において、本発明の糖鎖または糖鎖含有物質の質量分析用キットは、
以下のＡ）およびＢ）：
Ａ）上記［Ｚ群］の式で表される、硫黄原子を含む有機残基誘導体；および
Ｂ）金属、
を含む。

さらに好ましい実施形態において、上記金属はテトラクロロ金酸であり、本発明の質量分析用キットは、Ｃ）還元剤、をさらに含む。

別の局面において、本発明は、
一般式（Ｉ）：
（Ｒ−Ｓ）_ｎ−Ｍ^１（Ｉ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子であり、Ｍ^１は金属であり、ｎはＭ^１に対する（Ｒ−Ｓ）基の化学量論比を表し、１以上の整数である）で表される金属−有機残基複合体；または
一般式（ＩＶ）：
Ｍ^１−Ｓ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−Ｓ−Ｍ^１（ＩＶ）
（式中、ＲおよびＳは前記と同意義であり、両端のＭ^１は同一実体の金属であり、Ｘは低級アルキレンまたは低級アルケニレンである）で表される金属−有機残基複合体、を含有する、糖鎖または糖鎖含有物質の質量分析用キット、を提供する。

好ましい実施形態において、本発明の糖鎖または糖鎖含有物質の質量分析用キットは、上記［Ｙ群］の式で表される金属−有機残基複合体を含む。

さらに好ましい実施形態において、上記金属は金属微粒子である。

なおさらに好ましい実施形態において、上記金属は金微粒子である。

好ましい実施形態において、「有機残基」と「有機残基と相互反応しうる物質」との好ましい組み合わせとして、糖鎖捕捉官能基／糖鎖、糖鎖／タンパク質、抗原／抗体などが挙げられる。

本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。

以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、この実施形態に限定して解釈されるべきものではない。本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から、本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施することができることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。

（実施例１：水溶性金微粒子作製および微粒子表面に担持したチオール化合物のＭＡＬＤＩＴＯＦＭａｓｓによる直接検出）

（１）
テトラクロロ金酸２５ｍｇをフラスコ中で１ｍＬの超純水に溶解した。リガンド（１）５５ｍｇを２０ｍＬのメタノールに溶解し、テトラクロロ金酸水溶液に加えた。溶液を激しく撹拌しながら、水素化ホウ素ナトリウム５６ｍｇを超純水５ｍＬに溶かした溶液を少量ずつ加えた。室温で２時間撹拌を続けた後に、反応溶液をＣｏｎｔｒｉｐｌｕｓＹＭ５０（ミリポア社）を用いて遠心濾過し（２０℃、３，５００ｒｐｍ）、リガンド１を表面に導入した金微粒子を得た。微粒子は水、アセトン、メタノールに可溶であった。遠心濾過操作で得られた微粒子（図１のａ））およびろ液（図１のｂ））のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓを測定した。マトリックスとして２，５−ジヒドロキシベンゾイック酸（ＤＨＢ）を用いた。図１より、金微粒子から切断、イオン化したリガンド（１）に基づくピークを確認した。

（実施例２：金微粒子を固相担体として用いた化学反応の質量分析法による追跡）

（２）
ジスルフィドを有する化合物（２）のメタノール溶液をテトラクロロ金酸水溶液に加えて、水素化ホウ素ナトリウム水溶液を少量ずつ滴下した。室温で３時間撹拌した後にＣｅｎｔｒｉｐｌｕｓＹＭ−５０を用いて遠心濾過をし、化合物２を導入した金微粒子を得た。微粒子をメタノールに溶解し、トリフルオロ酢酸を２５％の濃度に成るように加え、室温で２時間撹拌した後、反応系の一部をマイクロコンを用いて遠心濾過し、マトリックスとしてＤＨＢを用いてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによる質量分析測定によって反応の進行を確認した（図２）。図２より、保護基が脱離して得られた生成物に基づくピーク
を確認した。

（実施例３：糖鎖−金微粒子の作製およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによるリガンド分子量直接測定）

（３）
アグリコン末端にチオール基を有するマルトトリオース誘導体（３）（１２．５ｍｇ，２１．６μｍｏｌ）をメタノール２０ｍＬに溶解し、テトラクロロ金酸１５μＬを加えた。この溶液に水素化ホウ素ナトリウム水溶液（３０ｍｇ／２ｍＬ，０．７９ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、室温で３時間撹拌した。ＣｅｎｔｒｉｐｌｕｓＹＭ−５０を用いた遠心濾過により微粒子を精製した。微粒子を超純粋に溶解し、マトリックスとして２，５−ジヒドロキシベンゾイック酸（ＤＨＢ）を用いてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによる質量分析を行った（図３）。図３より、ジスルフィド体３に基づくピークの出現から、糖鎖リガンドで修飾した金微粒子の場合にもＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによって容易にリガンドの質量が検出できることが示された。

（実施例４：糖鎖密度を制御した糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）−金微粒子の作製）

（４）
Ｎ−アセチルグルコサミンを末端に有する化合物４（１０ｍｇ，７．６μｍｏｌ）および化合物（１）（５２ｍｇ，６９μｍｏｌ）をメタノール（３５ｍＬ）−純水（５ｍＬ）混合溶媒に溶解し、テトラクロロ金酸（２５．５ｍｇ，７５μｍｏｌ）を加えた。この溶液に水素化ホウ素ナトリウム水溶液（７０ｍｇ／５ｍＬ）を少量ずつ加え、室温で１２時間撹拌した。ＣｅｎｔｒｉｐｌｕｓＹＭ−５０を用いた遠心濾過により微粒子を精製した。微粒子を純水に溶解し、マトリックスとして２，５−ジヒドロキシベンゾイック酸（ＤＨＢ）を用いてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによる質量分析を行った（図４）。図４より、化合物（１）、化合物（４）のホモジスルフィド体および化合物（１）と（４）のヘテロジスルフィド体に対応する分子量ピークが観察された。ここで、遠心分離により精製した微粒子の電子顕微鏡（ＴＥＭ）写真を図５に示す。

（実施例５：糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）−金微粒子上でのガラクトース転移酵素（ＧａｌＴ
）による糖鎖伸長反応）

（５）
実施例４に従って作製した糖鎖−金微粒子（ＧｌｃＮＡｃ−Ａｕ：５０μＭ）、ＵＤＰ−Ｇａｌ（４００μＭ）のＭＨＥＰＥＳバッファー溶液（１０ｍＭＭｎＣｌ_２、０．１５ＭＮａＣｌ）１００μＬ］を調製した。β１−４ガラクトース転移酵素（ＧａｌＴ）を４ｍＵ加え、２５℃でＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓを用いて糖鎖伸長反応を追跡した。反応溶液の遠心濾過を行なわず、マトリックスとして２，５−ジヒドロキシベンゾイック酸（ＤＨＢ）を用いてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによる質量分析を行った（図６）。図６より、化合物（４）（出発物質）に対応するピークは消失し、新たに酵素反応によってガラクトースが付加した化合物５（生成物）と化合物（１）のヘテロジスルフィド体に対応する分子量ピーク（［Ｍ＋Ｎａ］＋１２２０．６６２）が観察され、糖鎖−金微粒子上での酵素反応を追跡できることが示された。図６のスペクトルから得た糖鎖伸長反応における時間−反応度プロットを図７に示す。このプロットより、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓを用いた質量分析により、ＧｌｃＮＡｃ−Ａｕ上でのＧａｌＴ反応がうまく捕らえられることが明らかとなった。

（実施例６：糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）−金微粒子上でのＧａｌＴ反応のＵＤＰによる阻害活性測定）
実施例４に従って作製した糖鎖−金微粒子（ＧｌｃＮＡｃ−Ａｕ：５０μＭ）、ＵＤＰ−Ｇａｌ（４００μＭ）のＭＨＥＰＥＳバッファー溶液（１０ｍＭＭｎＣｌ_２、０．１５ＭＮａＣｌ）１００μＬ］を調製した。これにβ１−４ガラクトース転移酵素（ＧａｌＴ）４ｍＵおよびＵＤＰ（０〜５００μＭの９通りの濃度）を加え、反応温度２５℃で６０分間反応させた。ＵＤＰ濃度（μＭ）と阻害活性（％）との関係を図８に示す。このプロットから、ＵＤＰのＩＣ５０は、３００μＭであることが明らかとなった。

（実施例７：糖鎖捕捉能をもつ金微粒子の作製）

（６）
糖鎖捕捉官能基としてＢｏｃ保護されたオキシアミノ基を末端に持つチオール化合物（６）（２２ｍｇ，１７μｍｏｌ）と化合物１（５４ｍｇ，７１μｍｏｌ）をメタノール２０ｍＬに溶解し、テトラクロロ金酸（３４ｍｇ，１００μｍｏｌ）を加えた。この溶液に水素化ホウ素ナトリウム水溶液（３１ｍｇ／３ｍＬ）を少量ずつ加え、室温で１２時間撹拌した。反応溶液をＣｅｎｔｒｉｐｌｕｓＹＭ−５０を用いて遠心濾過し、微粒子を精製した（１０００００＞分子量＞５００００）。微粒子を純水に溶解し、マトリックスとして２，５−ジヒドロキシベンゾイック酸（ＤＨＢ）を用いてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによる質量分析を行った（図９）。図６より、化合物（６）のジスルフィド体、Ｂｏｃ基が脱保護された化合物（７）と化合物（６）のヘテロジスルフィド体、化合物（６）と化合物（１）のヘテロジスルフィド体、化合物（７）と化合物（１）のジスルフィド体
に対応するピークが観察された。

（実施例８：金微粒子上でのＢｏｃ基の脱保護反応）

（７）
実施例７で作製した微粒子（１０ｍｇ）をメタノール２ｍＬに溶解し、トリフルオロ酢酸１ｍＬを加え、室温で１８時間撹拌した。反応溶液をＣｅｎｔｒｉｐｌｕｓＹＭ−５０を用いて遠心濾過し、微粒子を精製した。微粒子を純水に溶解し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
Ｍａｓｓによる質量分析を行った（図１０）。図１０より、化合物（６）由来のピークは消失し、Ｂｏｃ基が脱保護された化合物（７）と化合物（１）とのジスルフィド体が観察された。金微粒子上でのアミノ基の脱保護反応が確認された。

（実施例９：糖鎖捕捉金微粒子を用いた水溶液中での糖鎖捕捉反応）
実施例８に従って作製した糖鎖捕捉金微粒子をエッペンドルフチューブに１７０μｇずつ分け入れ１００μＬの純水に溶解した。マンノース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノペンタオースをそれぞれ１ｍｇずつ量りとり、パーティクル溶液に加えて溶かした。３７℃で６日間インキュベートした。反応後の溶液をＣｅｎｔｒｉｐｌｕｓＹＭ−５０を用いて遠心濾過し、微粒子を精製した。微粒子を純水に溶解し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによる質量分析を行った（マンノース（図１１）、グルコース（図１２）、Ｎ−アセチルグルコサミン（図１３）、マンノペンタオース（図１４））。図１１〜図１４において、各糖鎖がオキシアミンと共有結合を形成したものに対応するピークが化合物１とのジスルフィド体としてそれぞれ観察された。金微粒子に提示したオキシアミノ基による糖鎖捕捉反応が示された。

（実施例１０：Ｄ−グルコースを用いたＡＨＴＭの吸光度測定）
Ｄ−グルコース１０ｍｇ（０．０５６ｍｏｌ）を水１０ｍＬに溶かし、９６穴プレートに１μＬから１０μＬまで１μＬ刻みでＤ−グルコース溶液を入れ、次いで、１０個のウェルにそれぞれ１０ｍＭＮａＩＯ_４を５０μＬずつ加えた。１０分間室温で静置した後、それぞれのウェルに４１ｍＭＡＨＭＴ（４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−メルカプト−１，２，４−トリアゾール）（０．５ＭＨＣｌ）５０μＬを加えてから、２ＭＫＯＨ１００μＬを加えた。室温で２時間静置すると呈色を起こしたので、Ａ_４９２を測定し、各Ｄ−グルコース濃度に対してＯＤ（光学密度）４９２ｎｍをプロットした。その結果、このプロットがほぼ直線関係を示したことから、ＡＨＭＴとＤ−グルコースのアルデヒド基との反応が一次反応で進行することが明らかとなった。

（実施例１１：Ｆｅｔｕｉｎを用いたＡＨＴＭの着色試験結果を示す。）
ＡＨＴＭの着色試験用サンプルとして、ウシ血清中に含まれるシアロ糖タンパク質を用いた。次の４種類のサンプルを調製し、ＡＨＴＭの着色を観察した。

１．１０ｍｇ／ｍｌＦｅｔｕｉｎ２００μｌと１０ｍＭＮａＩＯ_４５０μｌとを合わせ、１０分間、氷上で静置した。次いで、５０ｍＭＡＨＭＴ２００ μｌを加え、室温で３０分間静置した。

２．１０ｍｇ／ｍｌＦｅｔｕｉｎ２００μｌを１０分間、氷上で静置した。次いで、５０ｍＭＡＨＭＴ２００μｌを加え、室温で３０分間静置した。

３．１０ｍｇ／ｍｌＦｅｔｕｉｎ２００μｌと１０ｍＭＮａＩＯ_４５０μｌとを合わせ、１０分間、氷上で静置した。次いで、室温で３０分間静置した。

４．１０ｍｇ／ｍｌＦｅｔｕｉｎ２００μｌを１０分間、氷上で静置した。次いで、室温で３０分間静置した。

以上の結果、１．のサンプルが最も濃く着色したことから、ＮａＩＯ_４がＦｅｔｕｉｎの糖と反応し、その結果ＡＨＭＴとも良好に反応したことが明らかとなった。

（実施例１２：金基板を用いたＡＨＴＭのタンパク質の捕捉実験）
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ用の円形プレート４枚を１５００秒間金蒸着した。これらのプレートを以下の４通りの方法で処理した。

（Ｉ）５０ｍＭＡＨＭＴ（０．２ＭＮａＯＨ）でプレート表面を満遍なく満たした。１時間室温で静置後、水でプレート表面の余分なＡＨＭＴを除去した。トリプシン消化済みの１０ｍｇ／ｍｌＦｅｔｕｉｎ２００μｌと１０ｍＭＮａＩＯ_４５０μｌを混合し、プレート上に乗せた。１０分間静置後、０．２ＭＮａＯＨ５０μｌを同様にプレート上に乗せ、氷上で１時間静置した（図１７）。

（ＩＩ）５０ｍＭＡＨＭＴ（０．２ＭＮａＯＨ）でプレート表面を満遍なく満たした。１時間室温で静置後、水でプレート表面の余分なＡＨＭＴを除去した。酵素消化未処理の１０ｍｇ／ｍｌＦｅｔｕｉｎ２００μｌと１０ｍＭＮａＩＯ_４５０μｌを混合し、プレート上に乗せた。１０分間静置後、０．２ＭＮａＯＨ５０μｌを同様にプレート上に乗せ、氷上で１時間静置した（図１７）。

（ＩＩＩ）エッペンチューブにトリプシン消化済みの１０ｍｇ／ｍｌＦｅｔｕｉｎ２００μｌと１０ｍＭＮａＩＯ_４５０μｌを混合し、氷上で１０分間静置した。５０ｍＭＡＨＭＴ（０．２ＭＮａＯＨ）２００μｌを加え、ピンク色に呈色を起こしてからプレートにスポットし、氷上で１時間静置した（図１８）。

（ＩＶ）エッペンチューブに酵素未処理の１０ｍｇ／ｍｌＦｅｔｕｉｎ２００μｌと１０ｍＭＮａＩＯ_４５０μｌを混合し、氷上で１０分間静置した。５０ｍＭＡＨＭＴ（０．２ＭＮａＯＨ）２００μｌを加え、ピンク色に呈色を起こしてからプレートにスポットし、氷上で１時間静置した（図１８）。

これら４通りの方法で処理されたプレートを用いてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳを行った。その結果を図１９に示す。図１９は、トリプシンで消化したＦｅｔｕｉｎは、手順１と手順２のいずれの工程を経ても、金基板表面上のＡＨＴＭにより、遊離アルデヒドを有する糖ペプチドが捕捉され、酵素未処理の場合は、手順１および手順２のいずれの場合もうまく捕捉できなかったことを示す。

（実施例１３：ガラクトース転位酵素（ＧａｌＴ）を発現した大腸菌の破砕液による糖鎖−金微粒子（ＧｌｃＮＡｃ−Ａｕ）上での糖鎖伸長反応およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによる酵素反応追跡）
ＮｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｔｉｄｓＭＣ５０株のＬｇｔＢ遺伝子産物であるβ１−４ガラクトース転位酵素（ＧａｌＴ）を大腸菌で発現し、菌体を破砕して０．２％ＴｒｉｏｎＸ−１００を含むバッファーに懸濁した。菌体破砕液中の全タンパク質濃度は８．５ｍｇ／ｍＬであった。実施例４に従って作製した糖鎖−金微粒子（ＧｌｃＮＡｃ−Ａｕ）のＨＥＰＥＳバッファー（１０ｍＭＨＥＰＥＳ，１０ｍＭＭｎＣｌ_２，１５０ｍＭＮａＣｌ）溶液（ＧｌｃＮＡｃ濃度；５００μＭ）を１２０μＬ，ＵＤＰ−Ｇａｌ（５００μＭ）２０μＬ，および上記菌体破砕液４０μＬを混合し、２５度で３２時間インキュベートした。反応溶液のうち１０μＬをＣｅｎｔｒｉｃｏｎＹＭ５０を用いて遠心ろ過し、微粒子を超純水で洗浄した。糖鎖微粒子のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行ったところ、酵素反応の生成物（化合物５）に対応する分子量のピークが検出された（図１８）。これにより本方法が発現した酵素の活性測定法として非常に簡便、高速であり、優れた手法であることが示された。

（実施例１４：金微粒子表面に導入したチオール化合物のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによる直接検出）
実施例４に従って作製した糖鎖−金微粒子（ＧｌｃＮＡｃ−Ａｕ）をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ用ターゲットにアプライし、マトリックスを用いずに、直接ＬＤＩ−ＴＯＦ
Ｍａｓｓ測定を行ったところ、化合物（１）、化合物（４）のホモジスルフィド体、および化合物（１）と（４）のヘテロジスルフィド体に対応する分子量のピークが観察された（図１９ａ）。一方、同量の糖鎖−微粒子（ＧｌｃＮＡｃ−Ａｕ）をヨウ素と混合し、チオールリガンドを金微粒子表面から遊離させ、反応溶液のＴＯＦ−Ｍａｓｓ測定を行った場合には、反応溶液中にチオール化合物（１）および（４）を含むにもかかわらず、チオール化合物のイオン化は観察されなかった（図１９ｂ）。このとき、２，５ジヒドロキシベンゾイック酸（ＤＨＢ）に代表されるような低分子マトリックスは使用していない。したがってこれにより、金微粒子表面に導入したチオール化合物は、低分子マトリックス化合物を使用せずに直接レーザー照射によってイオン化し、ＴＯＦＭａｓｓによって検出できることが示された（ＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ）。

（実施例１５：糖鎖（Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ）−金微粒子上でのフコース転移酵素（ＦｕｃＴ）による糖鎖伸長反応）
実施例５に従って得られた糖鎖（Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ）−金微粒子を１０ｍＭＨＥＰＥＳバッファー（１０ｍＭＭｎＣｌ_２，１５０ｍＭＮａＣｌ）に溶解し、α１，３−ＦｕｃＴＶＩを５ｍＵ，ＧＤＰフコースを５００μＭになるように加え、反応温度２５度でインキュベートした。反応開始後５，１０，２０，３０，４０，５０，６０分後に反応系から１μＬずつ取り出し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行った（図２０、２１）。またＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定によっても、生成物に対応するピークを観察した。

（実施例１６：糖鎖−金微粒子のＬＤＩ−ＴＯＦ／ＴＯＦ測定による糖鎖構造解析）

（８）
実施例１５に従って作製した糖鎖（Ｇａｌβ１，４（Ｆｕｃα１，３）ＧｌｃＮＡｃ；Ｌｅｘ）金微粒子のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行った。さらに得られたピーク（［Ｍ（化合物８）＋Ｎａ］^＋１３６８．７５）を親イオンとしてＬＤＩ−ＴＯＦ／ＴＯＦ解析を行ったところ、フラグメントイオンのパターンから、Ｌｅｘの糖鎖構造が同定された（図２２）。これにより、硫黄原子を介して金属に結合した有機残基は、ＬＤＩ−ＴＯＦ、ＬＤＩ−ＴＯＦ／ＴＯＦＭａｓｓによって質量分析および構造解析が可能であることが示された。

（実施例１７：金微粒子および金基板表面に担持したチオール化合物のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓのイオン化効率の比較）
実施例１に従って作製した金微粒子を、チオール化合物濃度が１００μＭになるようにバッファーに溶解した。この溶液０．２μＬを、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ用プレートに直径２ｍｍの円形状にアプライした。一方、化合物１を、チオール濃度５００μＭになるようにメタノールに溶解し、０．１μＬをＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ用金プレートに直径２ｍｍの円形状にアプライして、金基板上での自己組織化膜を形成した。金プレートは使用直前に金蒸着を行った。上記２サンプルについて、ＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行った。レーザー強度を一定にして、ターゲットプレート上の同一箇所に１ショットずつレーザーを照射した。繰り返して計１０回同様の操作を行い、それぞれ得られたピーク強度を記録した（図２３）。その結果、金基板ではレーザー照射回数が増えると共にイオン化強度が徐々に低下し、照射４回程度でピークが完全に観察されなくなった。一方、金微粒子表面からのイオン化は、レーザー照射１０回目でも十分量観察された。さらに３０回、５０回とレーザー照射を繰り返しても、化合物１に基づくピークが観察され続けた。このように、金表面に結合したチオール化合物のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによるイオン化効率は金担体の形状に依存し、金微粒子表面からのイオン化は板状の金基板と比較して優位であることが示された。

（実施例１８：チオール化合物を担持した磁性金微粒子の作製および（ＭＡ）ＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによる直接観察）

（９）
市販の酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）粒子（直径０．２μｍ程度）１０ｍｇを４０ｍＬのメタノールに懸濁した。テトラクロロ金酸１７％塩酸溶液５０μＬ、リガンド（９）１０ｍｇを加えた。この溶液に水素化ホウ素ナトリウム２０ｍｇを超純水２ｍＬに溶かした水溶液を少量ずつ加えた。室温で一時間振盪した後、磁石を用いて微粒子を回収し、リガンド９を表面に導入した磁性金微粒子を得た。メタノールで洗浄した後、マトリックスとして２，５ジヒドロキシベンゾイック酸（ＤＨＢ）を用いてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行ったところ、イオン化したリガンド９に基づくピークを確認した。さらに、マトリックスを使用せずに、微粒子を直接ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ用ターゲットプレートにアプライしてレーザー照射をしたところ、イオン化したリガンド９に基づくピークを確認した（図２４）。これにより磁性金微粒子表面に結合したチオール化合物に直接レーザー照射することで、ＤＨＢ等のマトリックスを使用せずにＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによって微粒子上のチオール化合物のイオン化が可能であることを示した。

（実施例１９：糖鎖密度を制御した糖鎖‐磁性金微粒子の作製）

（１０）

（１１）
実施例１８と同様の方法にて、Ｎ−アセチルグルコサミンを末端に有する化合物１０の水溶液（１０ｎｍｏｌ／μＬ）１ｍＬ、化合物１１（５８ｍｇ、７９μｍｏｌ）をメタノール４０ｍＬに溶解し、酸化鉄微粒子６ｍｇを加えて懸濁させた。この溶液にテトラクロロ金酸１７％塩酸溶液１００μＬを加え、水素化ホウ素ナトリウム３０ｍｇを超純水４ｍＬに溶かした水溶液を少量ずつ滴下した。室温で一時間振盪した後、磁石を用いて微粒子を回収し、リガンド１０，１１を表面に導入した磁性金微粒子を得た。微粒子メタノールで洗浄し、ＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定行ったところ（図２５）、化合物（１０）、化合物（１１）のホモジスルフィド体、および化合物（１０）と（１１）のヘテロジスルフィド体に対応する分子量ピークが検出された。一方、ＤＨＢをマトリックスとして用いてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行った場合にも、ＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓで得られたピークと同一の分子量ピークが得られた。

（実施例２０：磁性金微粒子表面に提示した糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）上でのガラクトース転位酵素（ＧａｌＴ）による糖鎖伸長反応）

（１２）
実施例１９に従って作製した糖鎖−磁性金微粒子を４００μＬの超純水に懸濁した溶液５μＬ、１０ｍＭＨＥＰＥＳバッファー（１０ｍＭＭｎＣｌ_２、１５０ｍＭＮａＣｌを含む）に溶解したＵＤＰ−Ｇａｌ（濃度１ｍＭ）２０μＬを、１．５ｍＬサイズのエッペンドルフチューブ内で混合した。β１−４ガラクトース転位酵素（ＧａｌＴ）４ｍＵを加え、３７度で酵素反応を行った。反応開始から５時間後、反応溶液の一部（５μ）を取り出し、超純水で洗浄した。磁石によって回収した微粒子のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行ったところ（図２６）出発物質に対応するピーク（化合物１０と１１のジスルフィド対）は消失し、新たに酵素反応によってガラクトースが付加した化合物（１２）と（１１）のヘテロジスルフィド体に対応する分子量（［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１１２７．２５１）が検出された。これによって糖鎖を表面に提示した磁性金微粒子表面での酵素反応が簡便に追跡できることが示された。

（実施例２１：ＣｄＳ微粒子表面へのチオール化合物の導入および（ＭＡ）ＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによる直接検出）
ＣｄＣｌ_２・２．５Ｈ_２Ｏ（９．６ｍｇ、４２μｍｏｌ）を超純水１０ｍＬに溶解し、化合物９（１０ｍｇ）のメタノール溶液（液量２ｍＬ）を加えて撹拌した。この溶液にＮａ_２Ｓ・９Ｈ_２Ｏ（１０ｍｇ、４２μｍｏｌ）を２ｍＬ超純粋に溶解したものを少量ずつ加え、室温で２時間撹拌を続けた。黄色の沈殿が生じたので遠心分離（３５０ｒｐｍ、５
分）によって沈殿を除去し、上清をＣｅｎｔｒｉｐｌｕｓＹＭ−５０を用いて遠心ろ過し、フィルター上に得られた微粒子をメタノールおよび超純粋で洗浄した。微粒子のＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行ったところ、化合物９のホモジスルフィド体に対応する分子量（［Ｍ＋Ｎａ］^＋９５８．３０６、［Ｍ＋Ｋ］^＋９７４．２９３）のピークが観察された（図２７）。一方、ＤＨＢをマトリックスとして用いてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行った場合にも、ＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓで得られたピークと同一の分子量ピークが得られた。これにより、ＣｄＳ微粒子表面に導入したチオール化合物が（ＭＡ）ＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによって検出できることが示された。

（実施例２２：水酸基を有するチオール化合物を担持した金微粒子表面でのグリコシル化反応）

（１３）

（１４）
実施例１と同様の方法にて、化合物１３を表面に導入した金微粒子を作製した。この金微粒子１．５ｍｇを乾燥ジクロロメタン１ｍＬに溶解し、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトーストリクロロアセトイミデート（１４）５ｍｇを加えた。反応系を０℃に冷やし、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸１０μＬを加えて６時間撹拌した。ＣｅｎｔｒｉｃｏｎＹＭ−５０を用いて反応系を遠心ろ過した後に、微粒子をメタノールに溶解し、ナトリウムメトキシドを４ｍｇ加えて室温で２０時間撹拌した。微粒子はメタノールに不溶化していたため、遠心（３０００ｒｐｍ、１分）によって沈殿させて上清を除去した。微粒子を超純水に溶解し、（ＭＡ）ＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行ったところ、ガラクトース残基が導入されたグリコシル化反応生成物の分子量に対応するピークが観察された（図２８）。このことから、チオール化合物で被覆した金微粒子は有機溶媒中での固相合成担体として使用可能であり、かつ固相合成の反応過程が（ＭＡ）ＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓによって非常に簡便に追跡できることが示された。

（実施例２３：糖鎖−磁性金微粒子を用いた糖鎖特異的タンパク質の釣り上げ）
ＧｌｃＮＡｃ結合タンパク質であるコムギ胚芽レクチン（ＷＧＡ）を２７μＭ，ガラクトース結合タンパク質であるピーナッツレクチンを２０μＭになるようにリン酸バッファー（ｐＨ，７．４）１００μＬに溶解し、実施例１９に従って作製した糖鎖（ＧｌｃＮＡｃ）−磁性金微粒子を超純水に懸濁したものを２μＬ加えた。室温で３０分インキュベート後、磁石によって微粒子を回収し、１００μＬの超純水で計３回洗浄した。洗浄後、磁性微粒子を磁石で回収したものを１００μＬの超純水に懸濁し、０．５μＬをＤＨＢ（１０ｍｇ／ｍＬ）０．５μＬと混合し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行ったところ（図２９）ＷＧＡに対応するピークのみが観察された。糖鎖−磁性金微粒子を用いることで、タンパク質の混合物の中から磁性金微粒子に担持した糖鎖と特異的に相互作用するタンパク質を釣り上げ、釣り上げたタンパク質を質量分析によって同定できることが示され
た。

（実施例２４：金微粒子に結合したタンパク質（α−アミラーゼ）を用いた質量分析計による阻害剤の検出）
リン酸バッファー（１００ｍＭ，ｐＨ７．４）４００μＬに、α−アミラーゼ（ＳＩＧＭＡＡ６２５５）５．８×１０^−８モル、２−Ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｎｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ５．８×１０^−８モル（１等量）を加え、エッペンドルフチューブに入れて攪拌し、３７℃で３０分インキュベートした。３０分後、金微粒子（ＳＩＧＭＡＧ１６５２）を２００μＬ加えて攪拌後、室温で１２時間静置した。続いて反応液を限外ろ過（ＭｉｃｒｏｃｏｎＹＭ−５０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）し、限外ろ過膜上に得られたα−アミラーゼ−金微粒子複合体を超純水１００μＬで洗浄−遠心濃縮した。この操作を３回繰り返した。α−アミラーゼ−金微粒子複合体を超純水１００μＬに溶解し、アカルボース（５．８×１０^−７モル，１０等量）を加え、４℃で１２時間静置した。その後得られた反応液を“限外ろ過処理前反応液(1)”とした。また反応液の一部は限外ろ過を行い、α−アミラーゼと結合力の弱い低分子化合物を取り除いたものを“限外ろ過処理後反応液(2)”として、(1)、(2)について反応液０．５μＬとマトリックス溶液（ＤＨＢ，１０ｍｇ／ｍＬ）０．５μＬを混合し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行った（図３０、３１）。限外ろ過処理後(2)では、処理前(1)では微量のため検出できなかったアカルボースのトランスグリコシル化により生成する、α−アミラーゼに対してより結合力の強い６糖、７糖、８糖の生成物を選択的に検出できることが分かった。

（実施例２５：磁性金微粒子の作成）
市販の鉄粒子（粒径２〜３μｍ）１．５ｍｇを１００μｌの水に懸濁した。水１００μｌ、リガンド（１）１ｍｇおよび１０ｍｇ／ｍｌのテトラクロロ金カリウム溶液１００μｌを加えた。この溶液を撹拌しながら３５ｗｔ％Ｈｙｄｒａｚｉｎｅ２０μｌを少量ずつ加えた。３時間室温で静置した後、磁石を用いて微粒子を回収し、メタノールおよび水で洗浄した。これにメタノール１００μｌ、リガンド（１）１ｍｇおよびテトラクロロ金カリウム溶液１００μｌを加え、撹拌しながら３５ｗｔ％Ｈｙｄｒａｚｉｎｅ２０μｌを少量ずつ加えた。室温で一晩震盪させた後、磁石を用いて微粒子を回収し、メタノールと水で洗浄した後、マトリックスとして２，５ジヒドロキシベンゾイック酸（ＤＨＢ）を用いてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ用ターゲットプレートにアプライしてレーザー照射したところ、イオン化したリガンド（１）のホモジスルフィド体に対応するピークを確認した。

（実施例２６：オキシルアミン金微粒子による糖脂質の捕捉）
クロロホルムとメタノールとの混合溶媒（クロロホルム：メタノール＝１：１）１ｍＬにガラクトシルセラミド２ｍｇを溶かした。その溶液にオゾンをバブリングさせ、ガラクトシルセラミドの長鎖塩基部分のオレフィンをオゾン分解してアルデヒドにした。反応の様子はＴＬＣによって確認した。３０分後ジメチルスルフィド２００μｌを添加し反応を終了させた。この反応溶液１０μｌに、実施例８に従って作製したオキシルアミン金微粒子溶液１０μｌを加え６０℃で１２ｈインキュベートした。その後、ＣｅｎｔｒｉｐｌｕｓＹＭ−５０を用いて遠心ろ過し、フィルター上に残った金ナノ微粒子をメタノールで洗浄した。マトリックスとして２，５ジヒドロキシベンゾイック酸（ＤＨＢ）を用いてこの金微粒子のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭａｓｓ測定を行ったところ、化合物７にガラクトシルセラミドが捕捉されたものに対応するピークが観察された（図３２）。これにより、オキシルアミン金微粒子によって糖脂質が捕捉できることが示された。

本発明によれば、金属微粒子として、例えば鉄、ニッケル、コバルトまたは酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）などの磁性粒子およびこの粒子の表面に被覆した金、銀、カドミウムまたはセ
レンなどの層を含む複合微粒子を使用することにより、これに硫黄原子を含む有機残基誘導体を担持したのち、磁石等を用いて微粒子を簡易に回収し、精製無しで質量分析することができる。

Claims

一般式（ＩＶ）：
Ｍ^１−Ｓ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−Ｓ−Ｍ^１（ＩＶ）
（式中、Ｒは有機残基であり、Ｓは硫黄原子であり、両端のＭ^１は同一実体の金属であり、Ｘは低級アルキレンまたは低級アルケニレンである）
で表される金属−有機残基複合体から硫黄原子を含む有機残基誘導体をイオン化することを特徴とする、
一般式（Ｖ）：
ＨＳ−Ｘ−ＣＨ（Ｒ）−ＳＨ（Ｖ）
（式中、Ｒ、ＳおよびＸは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩、および／または
一般式（ＶＩ）：

（式中、Ｒ、ＳおよびＸは前記と同意義である）で表される化合物もしくはその塩、
を質量分析する方法。
前記金属がレーザーの乱反射可能な表面を有する、請求項１に記載の方法。
前記金属が金属微粒子である、請求項１または２に記載の方法。
前記金属が金、銀、カドミウムまたはセレンである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
前記質量分析をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法により行う、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
前記質量分析をＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ法により行う、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
前記有機残基が糖鎖または糖鎖含有物質を含む基である、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。