JP4385097B2 - 蛋白質溶液からのプラスミノゲン(プラスミン)の除去 - Google Patents
蛋白質溶液からのプラスミノゲン(プラスミン)の除去 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4385097B2 JP4385097B2 JP2002592482A JP2002592482A JP4385097B2 JP 4385097 B2 JP4385097 B2 JP 4385097B2 JP 2002592482 A JP2002592482 A JP 2002592482A JP 2002592482 A JP2002592482 A JP 2002592482A JP 4385097 B2 JP4385097 B2 JP 4385097B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plasmin
- carrier
- plasminogen
- group
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 title claims abstract description 148
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 title claims description 118
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 title claims description 118
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 title description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 87
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 40
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims abstract description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 35
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims abstract description 32
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 14
- 229960000401 tranexamic acid Drugs 0.000 claims description 65
- GYDJEQRTZSCIOI-LJGSYFOKSA-N tranexamic acid Chemical compound NC[C@H]1CC[C@H](C(O)=O)CC1 GYDJEQRTZSCIOI-LJGSYFOKSA-N 0.000 claims description 65
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 43
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 40
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 34
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 34
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 30
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 21
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 18
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 16
- KHURTEAYLZEQHD-UHFFFAOYSA-N 3-n-propylpropane-1,1,3-triamine Chemical compound CCCNCCC(N)N KHURTEAYLZEQHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 11
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 claims description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 10
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 7
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 claims description 7
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 6
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 6
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 claims description 5
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 claims description 5
- UYBWIEGTWASWSR-UHFFFAOYSA-N 1,3-diaminopropan-2-ol Chemical compound NCC(O)CN UYBWIEGTWASWSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 4
- 101100008681 Glycine max DHPS1 gene Proteins 0.000 claims description 4
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical group ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UATJOMSPNYCXIX-UHFFFAOYSA-N Trinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=CC([N+]([O-])=O)=C1 UATJOMSPNYCXIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000003914 blood derivative Substances 0.000 claims description 4
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 claims description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 3
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 claims description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 claims description 2
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 claims description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 claims description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 2
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 claims description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 claims description 2
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 claims description 2
- 241000255925 Diptera Species 0.000 claims 2
- 101710081722 Antitrypsin Proteins 0.000 claims 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000001475 anti-trypsic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 244000309466 calf Species 0.000 claims 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229940099990 ogen Drugs 0.000 abstract description 8
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 description 136
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 68
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 48
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 48
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 40
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 35
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 34
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 32
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 26
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 26
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 25
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 16
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 15
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 13
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 13
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- WPANETAWYGDRLL-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzenecarboximidamide Chemical compound NC(=N)C1=CC=C(N)C=C1 WPANETAWYGDRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 9
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 9
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 8
- 101000598025 Homo sapiens Talin-1 Proteins 0.000 description 7
- 102100036977 Talin-1 Human genes 0.000 description 7
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 7
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 239000004023 fresh frozen plasma Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 230000001567 anti-fibrinolytic effect Effects 0.000 description 5
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 5
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 4
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 3
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 3
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000002806 plasmin inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Natural products CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 2
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- 229940122791 Plasmin inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 2
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 2
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 2
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 125000002723 alicyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 2
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 2
- 239000011546 protein dye Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- URLOWBXNQIYFHV-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid;1-hydroxypyrrolidine-2,5-dione Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O.NCCCCCC(O)=O URLOWBXNQIYFHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N Benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 101001067249 Bos taurus Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 101150096839 Fcmr gene Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000605403 Homo sapiens Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N N-phenyl amine Chemical group NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000012801 analytical assay Methods 0.000 description 1
- 125000002490 anilino group Chemical group [H]N(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 238000007819 clotting time assay Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N hydridophosphorus(.) (triplet) Chemical compound [PH] BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 108010087750 lysyl-plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6435—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21007—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Description
発明の分野
本発明は、蛋白質溶液から、プラスミノゲン(プラスミン)(plasmin(ogen))およびその誘導体を特異的に除去するための樹脂および方法に関するものであり、そこで得られる蛋白質溶液は、それだけで活性成分として、または他の薬学的に許容され得る薬剤とともに、静脈内投与および局所適用、即ち、徐放および傷の治療のためのマトリックス担体のために使用され得る。プラスミノゲン(プラスミン)の除去は、長期のインキュベーション期間中、蛋白質溶液の完全性(integrity)および機能を維持し得る。本発明は、治療的使用のための、高度に精製されたプラスミノゲン(プラスミン)の製造にも関する。
プラスミノゲンまたはその活性分子プラスミン(以下、プラスミノゲン(プラスミン)(plasmin(ogen)))は、蛋白質溶液、特に、動物の体液または動物の器官から抽出されたものを、非常に頻繁に汚染する。蛋白質溶液中のプラスミノゲン(プラスミン)の存在は、様々な蛋白質およびペプチドにおけるアルギニルおよびリシルペプチド結合での分子の既知の蛋白質分解活性により、安定な薬学的生成物としてのその適応性に多くの脅威をもたらす(ワインスタイン(Weinstein) M.J., ドーリトル(Doolittle) RF. 合成および天然基質および阻害剤に関するトロンビン、プラスミン、およびトリプシンの異なる特異性(Differential specificities of the thrombin, plasmin and trypsin with regard to synthetic and natural substrates and inhibitors) RF Biochim Biopliys Acta. 1972 258:577-90 およびリン(Ling) CM, スマリア(Summaria) L, ロビンズ(Robbins) KC. ヒトプラスミンからのウシプラスミノゲン(プラスミン)活性化剤の形成のメカニズム(Mechanism of formation of bovine plasmin(ogen) activator from human plasmin.) J Biol chem. 1965. 240:4212-B); ならびに、塩基性アミノ酸、様々な組織、特に中枢神経組織に対するその刺激活性、および結合におけるその役割(basic amino acids, its stimulatory activity on various tissues, especially the central nerve tissue and its role in binding)(チェン(Chen) ZL, ストリクランド(Strickland) S 海馬におけるニューロンの死は、リミニン(liminin)のプラスミン触媒分解によって促進される(Neuronal death in the hippocampus is promoted by plasmincatalyzed degradation of liminin.) セル(Cell.) 1997. 91:917-25) かつ、おそらく、哺乳動物の血液中のプリオン輸送(and probably carrying prions in the blood of mammals) フィッシャー(Fischer)(MB, ロケル(Roeckl) C, パリゼク(Parizek) P, シュワルツ(Schwarz) HP. アグッジ(Aguzzi) A 疾病関連プリオン蛋白質のプラスミノゲン(プラスミン)への結合(Binding of disease associated prion protein to plasmin(ogen).) ネイチャー(Nature.) 2000. 408:479-83)。
図1は、2つの方法(材料および方法に記載)によって、3つの異なる樹脂−TEA−セファロース、Lys−セラミックハイパーDFおよびLys−セファロース4B、を用いて溶出された7μgの蛋白質の勾配ゲルSDS−PAGE(5〜12%のポリアクリルアミド)を示す。レーン1−Gluプラスミノゲン;2−フィブリノゲン;3−アルブミン;4−免疫グロブリン G;5−分子量マーカー;溶出ピーク:6−方法を用いたTEA;7−方法2を用いたTAE;8−方法1によるリジンセラミックハイパーD;9−方法1によるリジンセファロース;10−方法1によるリジンセラミックハイパーD;11−方法1によるリジンセファロース。
本発明は、驚くべきことに、リジッドアミノ酸(rigid amino acid)が、プラスミノゲン(プラスミン)と特異的に結合し得ることが見出されたという結果に基づいている。本発明の記載の範囲内で、“特異的に結合する(specifically binding)”とは、プラスミノゲン(プラスミン)およびフィブリノゲンのような蛋白質を含む混合物から、本質的にプラスミノゲン(プラスミン)が除去されるのに対し、フィブリノゲンは、混合物中でほとんど影響を受けないままであることを意味する。好ましくは、少なくとも85〜99%のプラスミノゲン(プラスミン)が除去され、少なくとも85%のフィブリノゲンが混合物中に残る。より好ましくは、プラスミノゲン(プラスミン)が、少なくとも98.0%〜99.9%除去されるか、または、フィブリノゲンが95%〜99%残る。
本発明は、プラスミノゲン(プラスミン)を含む混合物から、該混合物をリジッドアミノ酸と接触させることにより、フィブリノゲンの存在下で、プラスミノゲン(プラスミン)を特異的に除去または単離するための方法であって、前記アミノ酸のアミノ基と前記アミノ酸のカルボキシル基とは、約6〜8オングストローム、好ましくは約7オングストローム離れており、かつ、前記リジッドアミノ酸は、アミノ酸のアミノ基を介して担体と共有結合している、前記方法、に関する。
本発明の主題は、プラスミノゲン(プラスミン)およびプラスミンを本質的に含まない天然供給源から得られる混合物である。
様々なスペーサーと組み合わせた一連のε−アミノカルボン酸リガンドを含む数種の樹脂を、製造し、または、(市販されている場合には)購入し、血漿由来溶液からのプラスミノゲン(プラスミン)除去率を評価した。以下の表に、研究されたすべての組み合わせをまとめる(樹脂の下の数字は、以下の各組み合わせのための合成が記載されている欄を示す):
2)p−アミノベンズアミジン−アガロース4%の製造
アガロース4%(ピアス(Pierce))上にジアミノジプロピルアミン(DADPA)を固定化するために、以下の工程を使用し、反応を、その後無水物によって修飾されるアミン末端スペーサー(amine-terminating spacer)ゲル上で行った。
3)アルギニン−アガロース4%
上記工程、p−アミノベンズアミジン−アガロース4%(2参照)、によるアルギニン−アガロース4%合成が好ましかった。
上記工程、p−アミノベンズアミジン−アガロース4%(2参照)、によるトラネキサム酸(TEA)−アガロース4%合成が好ましかった。
以下の工程を用いて、スペーサーゲルとしてのCNBr−セファロース4B(ファルマシア(Pharmacia))上にアルギニンまたはトラネキサム酸を固定した。本欄および次の欄(5−6)に記載したように、2つの異なる濃度(10mmolまたは0.01mmol/ml 乾燥ゲル)での2つのリガンドの合成は類似していた。
上記のアルギニン−セファロース4Bの工程(5欄参照)に従って、この合成を行った。
以下のように、2つの異なる濃度(2mmolまたは0.2mmol/ml 乾燥ゲル)において、アルギニンを、市販の固定化エポキシセファロース6B(ファルマシア(Pharmacia))に結合させた:
上記のアルギニン−セファロース6B工程(7欄参照)による、この合成が好ましかった。
1IU/mlのプラスミノゲン(プラスミン)および50mg/mlのフィブリノゲンを含有する、ヒト血漿保有(pooled)寒冷沈降物を、以下の研究のために使用した。
寒冷沈降物を水酸化アルミニウムによって処理し、ビタミンK依存性凝固因子を吸着させ、次いで、30℃で4時間、溶媒と洗浄剤との混合物(SD−1% トリ(n−ブチル)ホスフェート、1% トリトン(Triton) X−100)とインキュベートし、脂質包含(lipid enveloped)ウイルスを不活性化した。SD剤(SD reagents)を、ヒマシ油抽出および疎水性相互作用クロマトグラフィーによって除去し、次いで、調製物を、安定化剤としてのスクロースおよびグリシンの存在下で低温殺菌した(60℃で10時間)。
凍結させ、ウイルス不活性化した寒冷沈降物のアリコートを37℃で解凍し、バッファーBN1(0.12M NaCl、0,01M クエン酸三ナトリウム、1mM CaCl2、pH 7.0)、またはその代わりに25mMのリン酸塩バッファーに対して透析した。後者の溶液を、5μm深さのフィルターによって濾過して不溶物を除去した。
クロマトグラフィー段階:
1IU/mlのプラスミノゲン(プラスミン)を含む、凍結除去した新鮮な凍結血漿(FFP)からのプラスミノゲン(プラスミン)の除去における、セファロース4FF上に固定化したTEAの効率を決定するために研究を行った。凍結除去した新鮮な凍結血漿のアリコートを37℃で解凍し、3μm深さのフィルターによって濾過し、不溶性蛋白質を除去した。
Glu−プラスミノゲン(プラスミン)検出アッセイ:これらの実験で使用したイムンクローン(Imunclone)(登録商標)Glu−プラスミノゲン(プラスミン)ELISAキット(アメリカンダイアグノスティカ(American Diagnostica)、グリーンウィッチ(Greenwich)、CT、USA)は、固有のヒトglu−プラスミノゲン(プラスミン)レベルの決定に特異的な、酵素関連サンドイッチ免疫アッセイ(enzyme-linked sandwich immunoassay)である。血漿または血漿誘導体における、そのアッセイの定量限界(最も低い較正曲線標準による)は、0.063μg/mlである。
2つの市販のリジン樹脂を用いて、固定化リジンリガンドを含む樹脂を用いたアフィニティー精製を研究した。文献に記載のクロマトグラフィー法を使用し(下記方法2については、ロビンズ(Robbins) KC、スマリア(Summaria) L. プラスミノゲン(プラスミン)およびプラスミン(Plasmin(ogen) and Plasmin.)、Methods Enzymol. 45:257-73、1976.参照)、発明者の研究所において開発した方法も使用した(下記方法1)。
方法1
4容量の以下の各溶液によって、カラムを洗浄した:1)精製水、2)TLN−0.1.3)TLN−および4)精製水。4容量のBN1によって、平衡化を行った。濾過した血漿(40ml)を、流速1ml/minでカラムに導入した。通過させた材料の試料をプラスチックボトルに回収し、BN1バッファーによって樹脂を洗浄した。TN−1バッファーによってプラスミノゲン(プラスミン)の溶出を行い、次いで、3M NaCl溶液、2容量の精製水、および2容量の20%エタノール+1M NaClによって洗浄した。
凍結除去した新鮮な凍結血漿のアリコート(40ml)を3μm深さのフィルターによって濾過した。4mlの0.5M Tris、0.2Mのリジン、1MのNaClバッファー、pH9、を、40mlの濾過した血漿に添加した。
Claims (28)
- プラスミノゲンまたはプラスミンを含む混合物から、該混合物をリジッドアミノ酸と接触させることにより、フィブリノゲンの存在下で、プラスミノゲンまたはプラスミンを特異的に除去または単離するための方法であって、前記リジッドアミノ酸は、アミノ基とカルボキシル基との間の実質的に一定の距離が6〜8オングストロームであるアミノ酸であり、かつ、前記リジッドアミノ酸は、前記アミノ酸のアミノ基を介して担体と共有結合している、前記方法。
- 前記混合物は、血液、血液画分、及び寒冷沈降物からなる群から選ばれる体液;細胞培養液;ウシ肺抽出物、ウシ腸抽出物、動物骨抽出ゼラチン、及びウシ血清アルブミンからなる群から選ばれる動物組織抽出物、ならびに、ラノリン及びPC−ホスファチジルコリンからなる群から選ばれる動物由来の水非混和性脂質からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記担体は、クロマトグラフィー材料である、請求項1に記載の方法。
- 前記クロマトグラフィー材料は、アガロース、セルロース、制御された細孔ガラス、シリカゲル、及びデキストランからなる群から選ばれる親水性材料、または、ポリアクリルアミド系及びポリスチレン系のポリマーを含む有機人工ポリマーである、請求項3に記載の方法。
- 前記クロマトグラフィー材料は、アガロースまたはセファロースである、請求項3に記載の方法。
- 前記クロマトグラフィー材料は、粒子状材料またはモノリシックブロック材料である、請求項3に記載の方法。
- 前記リジッドアミノ酸は、リンカーを介して担体と結合している、請求項1に記載の方法。
- 前記リンカーは、二官能性リンカーである、請求項7に記載の方法。
- 前記二官能性リンカーは、N−ヒドロキシスクシニミド、DAPA、CNBr、エポキシ、ジアミノジプロピルアミン(DADPA)、1,6ジアミノヘキサン、琥珀酸、1,3ジアミノ−2−プロパノール、エチレンジアミン(EDA)、TNB、ピリジルジスルフィド、ヨードアセトアミド、マレイミド活性化担体、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項8に記載の方法。
- 前記担体は、第1級または第2級アミノ基と反応する部分によって修飾されている、請求項1に記載の方法。
- 前記リジッドアミノ酸はトラネキサム酸である、請求項1に記載の方法。
- 結合したトラネキサム酸を有する担体と混合物との接触後、プラスミノゲンまたはプラスミンを結合するために十分な期間、混合物を担体とインキュベートし、そして、ナトリウム塩、カルシウム塩、及びバッファー塩を含む中性水溶液によって溶出させる、請求項11に記載の方法。
- 混合物の接触後に続いて、プラスミンまたはプラスミノゲンを、リジッドアミノ酸と結合した担体のプラスミノゲン結合部位と競争する、十分な量のリガンドを含む水溶液で溶出する、請求項1に記載の方法。
- 前記リガンドは、リジンである、請求項13に記載の方法。
- 請求項1〜14のいずれか1項に記載の方法によって得られるプラスミノゲンを本質的に含まない天然供給源から得られる混合物。
- 前記混合物は、血液誘導体、血液または血液画分、及び寒冷沈降物である、請求項15に記載の混合物。
- 前記血液誘導体は、血漿由来血液凝固因子、または血液凝固因子の混合物、アルブミン、免疫グロブリン、フィブリノゲン、フィブロネクチン、α1−アンチトリプシン、アンチトロンビンIII又はフォンウィルブランド因子である、請求項16に記載の方法。
- 請求項1〜14のいずれか1項に記載の方法によって得られ得るプラスミノゲンおよびプラスミン含有画分。
- リジッドアミノ酸と共有結合した担体であって、前記リジッドアミノ酸は、アミノ基とカルボキシル基との間の実質的に一定の距離が6〜8オングストロームであるアミノ酸である、前記担体。
- 前記アミノ酸は、トラネキサム酸および4−アミノメチルビシクロ−[2.2.2.]−オクタン−1−カルボン酸からなる群から選択される、請求項19に記載の担体。
- 前記担体は、クロマトグラフィー材料である、請求項19または20に記載の担体。
- 前記クロマトグラフィー材料は、アガロース、セルロース、制御された細孔ガラス、シリカゲル、及びデキストランからなる群から選ばれる親水性材料、または、ポリアクリルアミド系及びポリスチレン系のポリマーを含む有機人工ポリマーである、請求項21に記載の担体。
- 前記クロマトグラフィー材料は、アガロースまたはセファロースである、請求項21に記載の担体。
- 前記クロマトグラフィー材料は、粒子状材料またはモノリシックブロック材料である、請求項21に記載の担体。
- 前記トラネキサム酸は、担体とトラネキサム酸との間にリンカーを介して担体と結合している、請求項20に記載の担体。
- 前記リンカーは、二官能性リンカーである、請求項25に記載の担体。
- 前記二官能性リンカーは、N−ヒドロキシスクシニミド、DAPA、CNBr、エポキシ、ジアミノジプロピルアミン(DADPA)、1,6ジアミノヘキサン、琥珀酸、1,3ジアミノ−2−プロパノール、エチレンジアミン(EDA)、TNB、ピリジルジスルフィド、ヨードアセトアミド、マレイミド活性化担体、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項26に記載の担体。
- 前記担体は、第1級または第2級アミノ基と反応する部分によって修飾されている、請求項19に記載の担体。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US29196801P | 2001-05-21 | 2001-05-21 | |
EP01115157 | 2001-06-21 | ||
PCT/EP2002/005462 WO2002095019A1 (en) | 2001-05-21 | 2002-05-17 | Removal of plasmin(ogen) from protein solutions |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2004528853A JP2004528853A (ja) | 2004-09-24 |
JP4385097B2 true JP4385097B2 (ja) | 2009-12-16 |
Family
ID=26076623
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002592482A Expired - Lifetime JP4385097B2 (ja) | 2001-05-21 | 2002-05-17 | 蛋白質溶液からのプラスミノゲン(プラスミン)の除去 |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US20040197891A1 (ja) |
EP (1) | EP1390485B1 (ja) |
JP (1) | JP4385097B2 (ja) |
KR (1) | KR100871454B1 (ja) |
AT (1) | ATE342353T1 (ja) |
AU (1) | AU2002314081B2 (ja) |
CA (1) | CA2447789C (ja) |
CZ (1) | CZ20033097A3 (ja) |
DE (1) | DE60215338T2 (ja) |
EE (1) | EE05485B1 (ja) |
ES (1) | ES2274044T3 (ja) |
HK (1) | HK1060902A1 (ja) |
HU (1) | HU228899B1 (ja) |
IL (2) | IL158754A0 (ja) |
MX (1) | MXPA03010616A (ja) |
PL (1) | PL205685B1 (ja) |
RU (2) | RU2458067C2 (ja) |
SK (1) | SK288005B6 (ja) |
WO (1) | WO2002095019A1 (ja) |
ZA (1) | ZA200309030B (ja) |
Families Citing this family (67)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100871454B1 (ko) | 2001-05-21 | 2008-12-03 | 옴릭스 바이오파머슈티컬즈 에스. 에이. | 단백질 용액으로부터 플라스민(오겐)의 제거 |
SE526038C2 (sv) * | 2002-07-08 | 2005-06-21 | Gambro Lundia Ab | Polymeraffinitetsmatris, förfarande för framställning därav och anvädning därav |
WO2004067704A2 (en) | 2003-01-30 | 2004-08-12 | Prochon Biotech Ltd. | Freeze-dried fibrin matrices and methods for preparation thereof |
US7067123B2 (en) | 2003-04-29 | 2006-06-27 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Glue for cartilage repair |
US7901457B2 (en) | 2003-05-16 | 2011-03-08 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Cartilage allograft plug |
DE102004009400A1 (de) | 2004-02-24 | 2005-09-08 | Zlb Behring Gmbh | Fibrinogen Reinigung |
US7335508B2 (en) | 2004-07-22 | 2008-02-26 | Prochon Biotech Ltd. | Porous plasma protein matrices and methods for preparation thereof |
US20090319045A1 (en) | 2004-10-12 | 2009-12-24 | Truncale Katherine G | Cancellous constructs, cartilage particles and combinations of cancellous constructs and cartilage particles |
US7837740B2 (en) | 2007-01-24 | 2010-11-23 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Two piece cancellous construct for cartilage repair |
US9358318B2 (en) | 2004-10-20 | 2016-06-07 | Ethicon, Inc. | Method of making a reinforced absorbable multilayered hemostatic wound dressing |
WO2006044882A2 (en) | 2004-10-20 | 2006-04-27 | Ethicon, Inc. | A reinforced absorbable multilayered hemostatic wound dressing and method of making |
US7815926B2 (en) | 2005-07-11 | 2010-10-19 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Implant for articular cartilage repair |
JP2007068497A (ja) * | 2005-09-09 | 2007-03-22 | Nihon Pharmaceutical Co Ltd | プラスミンの精製法 |
JP2009508596A (ja) | 2005-09-19 | 2009-03-05 | ヒストジェニックス コーポレイション | 細胞支持基材及びその調製方法 |
US20070134231A1 (en) * | 2005-12-13 | 2007-06-14 | Jani Dharmendra M | Method for prolonging activity of autodegradable enzymes and compositions thereof |
KR101411933B1 (ko) | 2006-11-02 | 2014-06-27 | 옴릭스 바이오파머슈티컬스 리미티드 | 마이크로화 방법 |
US8435551B2 (en) | 2007-03-06 | 2013-05-07 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Cancellous construct with support ring for repair of osteochondral defects |
US7704453B2 (en) | 2007-06-07 | 2010-04-27 | Ethicon, Inc. | Method for establishing a sterilizing dose for radiation sensitive products |
US8409499B2 (en) | 2007-06-07 | 2013-04-02 | Ethicon, Inc. | Method for establishing a sterilizing dose for radiation sensitive products |
EP2011524A1 (en) | 2007-07-02 | 2009-01-07 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Fibrin glue with a visualization agent |
EP2034010A1 (en) | 2007-08-30 | 2009-03-11 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Compositions suitable for repair and/or treatment of injured spinal tissue |
ES2438491T3 (es) | 2008-09-22 | 2014-01-17 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Dispositivo implantable que comprende un sustrato pre-recubierto con fibrina estabilizada |
JP5805542B2 (ja) * | 2009-02-20 | 2015-11-04 | オムリックス・バイオファーマシューティカルズ・リミテッドOmrix Biopharmaceuticals Ltd. | 少なくとも2成分の薬物を投与する装置 |
CA2787883C (en) | 2010-01-28 | 2019-02-19 | Erez Ilan | Method for improved fibrin sealing |
SG185601A1 (en) * | 2010-05-18 | 2012-12-28 | Abbvie Inc | Apparatus and process of purification of proteins |
IL207586A0 (en) | 2010-08-12 | 2010-12-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | A fibrin based therapeutic preparation and use thereof |
WO2012036140A1 (ja) * | 2010-09-14 | 2012-03-22 | 株式会社カネカ | クリングル配列を有する蛋白質またはペプチドを精製または除去するアフィニティ担体、及びそれを用いた精製方法、除去方法 |
JP5836577B2 (ja) * | 2010-09-14 | 2015-12-24 | 株式会社カネカ | クリングル配列を有する蛋白質またはペプチドを精製または除去するアフィニティ担体の製造方法、その精製方法、除去方法 |
JP2013537215A (ja) * | 2010-09-20 | 2013-09-30 | オクタファルマ・アーゲー | フィブリノーゲンの生産方法 |
IL210162A0 (en) | 2010-12-21 | 2011-03-31 | Omrix Biopharmaceuticals | Viral inactivated platelet extract, use and preparation thereof |
IL213375A0 (en) | 2011-06-05 | 2011-07-31 | Omrix Biopharmaceuticals | Device for spraying fluids in proximity to a surface |
CN103702674B (zh) | 2011-06-27 | 2018-05-29 | 爱默蕾大学 | 血小板裂解物的组合物、用途和制备 |
IL213864A0 (en) | 2011-06-30 | 2011-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Method for removing a lytic enzyme from a heterogeneous mixture |
MX351980B (es) | 2011-12-29 | 2017-11-03 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Método y dispositivo para la disolucion rápida de composición sólida de proteinas solidas. |
US10130346B2 (en) | 2012-07-24 | 2018-11-20 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Device and method for the application of a curable fluid composition to a bodily organ |
US20140154233A1 (en) * | 2012-12-05 | 2014-06-05 | Csl Limited | Method of purifying therapeutic proteins |
AU2013365623B2 (en) | 2012-12-20 | 2017-08-24 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Viral inactivated biological mixture |
CA2896760A1 (en) | 2012-12-30 | 2014-07-03 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Device and method for the application of a curable fluid composition to a portion of a bodily organ |
USD754325S1 (en) | 2013-06-06 | 2016-04-19 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Device of a curable fluid composition to a bodily organ |
IL230151A0 (en) | 2013-12-24 | 2014-09-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | One-component fibrin glue containing a polymerization inhibitor |
IL230150A0 (en) | 2013-12-24 | 2014-09-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | One-component fibrin glue containing zymogens |
IL231230A0 (en) | 2014-02-27 | 2014-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Fibrinogen preparation |
IL231792A0 (en) | 2014-03-27 | 2014-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Device and method for the preparation and administration of one-component fibrin glue |
IL234246A0 (en) | 2014-08-21 | 2014-11-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Stabilized thrombin |
IL235751A0 (en) | 2014-11-18 | 2015-02-26 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | An addition to the spray dryer |
WO2016079727A1 (en) | 2014-11-18 | 2016-05-26 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Spray-drying apparatus and method of use |
US10077420B2 (en) | 2014-12-02 | 2018-09-18 | Histogenics Corporation | Cell and tissue culture container |
CN107427535A (zh) | 2015-02-16 | 2017-12-01 | 纳雅康医疗有限公司 | 经修饰的血凝块 |
CN107406840B (zh) | 2015-02-25 | 2021-05-28 | 奥姆里克斯生物药品有限公司 | 用于纯化和定量凝血酶及其降解多肽的方法 |
IL242984A0 (en) | 2015-12-08 | 2016-02-29 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Thrombin microcapsules, their preparation and how to use them |
US10159720B2 (en) | 2015-12-08 | 2018-12-25 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Thrombin microcapsules, preparation and uses thereof |
BR112018009459A8 (pt) | 2015-11-11 | 2019-02-26 | Ethicon Inc | formulação de selante e usos da mesma |
IL242924A0 (en) | 2015-12-03 | 2016-04-21 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Syringe system for storing and mixing two ingredients |
CA3035650A1 (en) * | 2016-09-01 | 2018-03-08 | Plas-Free Ltd | Human blood-derived products having decreased fibrinolytic activity and uses thereof in hemostatic disorders |
IT201600091964A1 (it) * | 2016-09-13 | 2018-03-13 | Kedrion Spa | Processo per la purificazione del plasminogeno a partire da plasma umano. |
IL247821A0 (en) | 2016-09-14 | 2017-01-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Adhesive preparations and their use |
CN110612350A (zh) | 2017-03-09 | 2019-12-24 | 先觉药业咨询公司 | 源自血液的谷氨酸-纤溶酶原的制备和使用 |
IL256405A (en) | 2017-12-19 | 2018-01-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Wound bandage and method for its production |
EP3746151B1 (en) * | 2018-02-28 | 2024-04-24 | Plas-Free Ltd. | Extracorporeal device and matrix for removing fibrinolytic proteins from biological fluids, methods and uses thereof |
WO2020121289A1 (en) | 2018-12-12 | 2020-06-18 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Low concentrated protein compositions for preventing tissue adhesion |
IL263679A (en) | 2018-12-12 | 2019-03-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Kits, methods, and ingredients for preventing tissue adhesion |
CN111760556B (zh) * | 2020-07-09 | 2023-06-30 | 江苏尤里卡生物科技有限公司 | 一种尿激酶吸附剂及其制备方法和应用 |
WO2022099223A2 (en) | 2020-11-09 | 2022-05-12 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Purification of fviii from plasma using silicon oxide adsorption |
EP4341393A1 (en) | 2021-06-08 | 2024-03-27 | PreviPharma Consulting GmbH | Process for isolating plasminogen from a blood plasma fraction |
CN113533594A (zh) * | 2021-06-30 | 2021-10-22 | 长沙都正生物科技股份有限公司 | 用于测定氨甲环酸含量的方法及试剂盒 |
CN117940173A (zh) | 2021-09-16 | 2024-04-26 | 爱惜康股份有限公司 | 用于组织道密封的组合物的试剂盒 |
WO2023119277A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-29 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Highly soluble fibrinogen compositions |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3943245A (en) * | 1974-02-14 | 1976-03-09 | Armour Pharmaceutical Company | Purification of plasminogen |
SU979508A1 (ru) * | 1980-07-23 | 1982-12-07 | Ордена Трудового Красного Знамени Институт Биохимии Им.А.В.Палладина | Способ получени иммобилизованного плазминогена |
US4639513A (en) * | 1984-02-02 | 1987-01-27 | Cuno Inc. | Intravenously injectable immunoglobulin G (IGG) and method for producing same |
US4639543A (en) | 1985-02-04 | 1987-01-27 | Richard J. Birch | Semiconductor devices having a metallic glass substrate |
JPS6391080A (ja) | 1986-10-03 | 1988-04-21 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | ヒト組織プラスミノゲン活性化因子の精製法 |
GB8902771D0 (en) * | 1989-02-08 | 1989-03-30 | Bioprocessing Ltd | Improvements in or relating to affinity chromatography |
DK0467932T3 (da) | 1989-04-07 | 2001-02-12 | Cancerforskningsfonden Af 1989 | Plasminogen-aktivator-receptor af urokinasetypen |
SU1727839A1 (ru) | 1990-05-30 | 1992-04-23 | МГУ им.М.В.Ломоносова | Способ получени фибриногена |
US5792835A (en) * | 1991-09-05 | 1998-08-11 | Baxter International Inc. | Method of preparing a topical fibrinogen complex |
DK82592D0 (da) * | 1992-06-23 | 1992-06-23 | Novo Nordisk As | Fremstilling af proteiner |
US5362859A (en) | 1992-07-27 | 1994-11-08 | Sepracor, Inc. | High-capacity affinity supports and methods for the preparation and use of same |
JPH08225461A (ja) | 1995-02-21 | 1996-09-03 | Green Cross Corp:The | プラスミノーゲンの精製方法およびプラスミノーゲン製剤 |
JP3763598B2 (ja) | 1995-09-11 | 2006-04-05 | 旭電化工業株式会社 | トラネキサム酸の製造方法 |
US6451978B2 (en) * | 2000-01-21 | 2002-09-17 | Biovitrum Ab | Purification of antithrombin-III-α and β |
KR100871454B1 (ko) * | 2001-05-21 | 2008-12-03 | 옴릭스 바이오파머슈티컬즈 에스. 에이. | 단백질 용액으로부터 플라스민(오겐)의 제거 |
-
2002
- 2002-05-17 KR KR1020037015108A patent/KR100871454B1/ko active IP Right Grant
- 2002-05-17 DE DE60215338T patent/DE60215338T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-17 SK SK1420-2003A patent/SK288005B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2002-05-17 CZ CZ20033097A patent/CZ20033097A3/cs unknown
- 2002-05-17 RU RU2008130356/10A patent/RU2458067C2/ru active
- 2002-05-17 JP JP2002592482A patent/JP4385097B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-17 IL IL15875402A patent/IL158754A0/xx unknown
- 2002-05-17 RU RU2003136746/13A patent/RU2344143C2/ru active
- 2002-05-17 HU HU0600110A patent/HU228899B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2002-05-17 WO PCT/EP2002/005462 patent/WO2002095019A1/en active IP Right Grant
- 2002-05-17 AU AU2002314081A patent/AU2002314081B2/en not_active Expired
- 2002-05-17 EP EP02740615A patent/EP1390485B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-17 EE EEP200300578A patent/EE05485B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2002-05-17 US US10/477,519 patent/US20040197891A1/en not_active Abandoned
- 2002-05-17 PL PL365808A patent/PL205685B1/pl unknown
- 2002-05-17 ES ES02740615T patent/ES2274044T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-17 MX MXPA03010616A patent/MXPA03010616A/es active IP Right Grant
- 2002-05-17 AT AT02740615T patent/ATE342353T1/de active
- 2002-05-17 CA CA2447789A patent/CA2447789C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-20 US US10/150,490 patent/US7125569B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-11-05 IL IL158754A patent/IL158754A/en unknown
- 2003-11-20 ZA ZA2003/09030A patent/ZA200309030B/en unknown
-
2004
- 2004-05-28 HK HK04103846A patent/HK1060902A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-10-17 US US11/581,753 patent/US7641918B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-10-29 US US12/289,499 patent/US8563288B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4385097B2 (ja) | 蛋白質溶液からのプラスミノゲン(プラスミン)の除去 | |
AU2002314081A1 (en) | Removal pf plasmin(Ogen) from protein solutions | |
Thaler et al. | A simple two‐step isolation procedure for human and bovine antithrombin II/III (heparin cofactor): a comparison of two methods | |
US4245051A (en) | Human serum plasminogen activator | |
AU610104B2 (en) | Pharmaceutically active conjugates having improved body tissue binding specificity | |
Chibber et al. | [48] Plasminogen | |
Loscalzo et al. | Platelets and plasminogen activation | |
JPH0223158B2 (ja) | ||
JPH07508009A (ja) | クリングル含有タンパク質及び特にt−PAの精製 | |
JPH0556951B2 (ja) | ||
JP2714817B2 (ja) | ウロキナーゼ前駆体の製造方法 | |
Friedberg et al. | Large scale purification of factor X by hydrophobic chromatography | |
JPH0759191B2 (ja) | ヒトプラスミン−α2−プラスミンインヒビタ−複合体の製造方法およびその分離方法 | |
JPS6061533A (ja) | 修飾ウロキナ−ゼ | |
JPS58183093A (ja) | 酵素の精製法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050404 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080624 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20080924 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20081001 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081021 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081021 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090825 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090828 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4385097 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121009 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131009 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |