JP3793593B2 - 抗ウィルス剤の製造方法 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アスパラサス・リネアリスから得た抗酸化作用を有する植物由来酸性多糖類を有効成分とする抗ウィルス剤の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、抗ウィルス剤はいくつか知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、これらのものの多くは、高価であったり、効力も弱く、さらに副作用があり、人体に危険なものが多いものであった。
【０００４】
また、ウィルス性疾患にはインフルエンザ、肝炎、麻疹、日本脳炎、成人Ｔ細胞白血病、あるいはエイズなど多くの疾患があるが、このようなウィルスに対して有効な薬剤はなく、特に成人Ｔ細胞白血病あるいはエイズウィルスのようなレトロウイルスに効果のあるものは余り知られていない。
【０００５】
さらに、人体に害がなく日常飲食も可能で予防効果を発揮する抗ウィルス剤は開発されていない。
【０００６】
近年、アスパラサス・リネアリスの抗ウィルス性が注目されているが、その原理は不明であり、また、アスパラサス・リネアリスそのものより強い効力を有するものが望まれていた。
【０００７】
本発明は、アスパラサス・リネアリスに含まれる抗酸化作用を発揮する物質について研究を重ね、特に、レトロウイルスに効果があり、また、副作用がなく、予防効果を有する抗ウィルス剤の製造方法を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
アスパラサス・リネアリスの抗酸化作用を有する酸性多糖類が、抗ウィルス作用が強く、かつ、人体、家畜などに対して副作用がなく安全な抗ウィルス剤であるとの知見を得て本発明を完成した。
【０００９】
アスパラサス・リネアリスをアルカリ抽出することによって得られた酸性多糖類は、ウロン酸、中性糖、還元糖を含有するものであり、さらに、得られた酸性多糖類を酸で加水分解することによって、活性化された２糖類と３糖類を含む抗ウィルス剤を得ることができる。
【００１０】
【発明の実施の形態】
植物由来酸性多糖類について研究を重ねたところ、ウロン酸、中性糖、還元糖を含有するものが特に優れた抗ウィルス効果を有することが知見され、これらはアスパラサス・リネアリスをアルカリ抽出し、エタノールをを加えることによって得られる。
【００１１】
有効成分の抽出は、アスパラサス・リネアリスを熱湯水で抽出し、抽出後のアスパラサス・リネアリスの残渣物を乾燥し、これにアルカリ溶液を加えてアルカリ抽出し、エタノールを加えて沈澱させることによって得られる。また、アスパラサス・リネアリスに直接アルカリ溶液を加え、アルカリ抽出して有効成分を得ることもできる。
【００１２】
熱湯水で抽出する場合には、アスパラサス・リネアリスの葉、茎、根のいずれか、またはこれらの混合物に１０〜１００倍の水を加え、７０〜１００℃で、３０分〜４時間程度抽出する。天日、または、屋内で１〜３日間乾燥し、乾燥葉の５〜５０倍のアルカリ溶液を加え、２０〜８０度で３０分〜５時間程度攪拌または振とうさせて抽出液を得る。
抽出物の乾燥粉末は、平均値で２１％のウロン酸、４９％の中性糖、還元糖を２６％含有する。
【００１３】
アルカリ溶液の具体例としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、アンモニアトリスヒドロキシエチルエミノメタン（通称トリス）、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等が挙げられ、抽出にあたっては温時抽出等慣用手段を用いることができる。また、抽出液の分離は、通常のろ過、綿を用いたろ過、デカンテーションや遠心分離等の慣用手段を用いる。
【００１４】
抽出溶媒は水以外にエタノール、アセトンなどを用いることができ、抽出溶媒の留去は凍結乾燥、スプレードライ等の慣用手段を用いることができる。
【００１５】
また、この抽出液に２５％〜７５％（Ｖ／Ｖ）になるようにエタノールを添加して３０分〜１夜４℃に静置した後、遠心分離して得られた沈殿物を集め乾燥して抗酸化作用を有する酸性多糖類を得る。さらに、得られた酸性多糖類を酸で７５℃〜１５０℃で３時間〜２４時間加水分解すると、２糖類および３糖類のオリゴ糖混合物を得ることができる。オリゴ糖混合物を得るには酸加水分解のほか、酵素を用いて多糖類を分解してもよい。酸の濃度は通常１Ｎ〜３Ｎを用いるのが好ましい。加水分解に用いる酸の具体例としては、塩酸、硫酸、硝酸、トリフルオロ酢酸などが挙げられ、加水分解に当たっては慣用手段を用いることができる。
【００１６】
得られた有効成分を生理学的に許容されうる担体、賦形剤、結合剤、希釈剤と混合し、たとえば顆粒剤、粉剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、塗布剤、シロップ、坐剤、注射剤として経口または非経口的に、または、混合してそのまま溶液、粉末顆粒、錠剤、乳剤、ゼリー状など任意の形態で単独投与、濃縮液を利用、または他の飲食物に混合して飲食することもできる。
【００１７】
投与量は、対象となる疾患の種類、程度により異なるが、飲料として常用する場合には、１〜１０００ｍｇ／ｌ溶液を２ｍｌ〜５００ｍｌ／日飲食するのが好ましい。抽出液粉末を用いる場合には、０．２ｍｇ〜５ｇ／日飲食するのが好ましい。
【００１８】
抗酸化作用を有する酸性多糖類は、ラットに対する急性毒性試験で死亡例は皆無であり、生化学血液検査及び病理組織学的検査においても異常が認められなかった。
【００１９】
【発明の効果】
本発明は、ウィルスの増殖を抑え、レトロウイルスに効果があり、また、副作用がなく、予防効果を有する抗ウィルス剤を得ることができる。
【００２０】
【実施例】
製造例
採取したアスパラサス・リネアリスの葉（茎つき）を、５ｍｍ長に切断後、ローリング、酵素発酵、天日乾燥の工程を経て乾燥葉とする。乾燥葉３ｇを８５度の熱湯水１００ミリリットルで３時間抽出した後、葉（茎つき）を室内で乾燥した。乾燥葉を１％水酸化ナトリウム５０ミリリットルで４５度で３時間激しく振とうさせ、綿をロートに敷いてろ過して抽出液を得た。この抽出液に２５％〜７５％（Ｖ／Ｖ）になるようにエタノールを添加して３０分以上４℃で静置した後、遠心分離して得られた沈殿物を集め乾燥して抗酸化作用を有する酸性多糖類を得た。抗酸化作用を有する酸性多糖類の乾燥粉末は、２２．５％のウロン酸、５０．５％の中性糖、還元糖を２６．５％含有していた。
【００２１】
実施例１
製造例で得た酸性多糖類を用いて、培養細胞、ＭＤＣＫに対するインフルエンザウイルスおよびＭＡ１０４細胞など各種細胞に対するヘルペスウイルスのプラーク形成に及ぼす影響を調べた。インフルエンザウイルスに対しては０．１ｍｇ／ｍｌの濃度で１００％近く抑え、ヘルペスウイルスに対しては１μｇ／ｍｌの濃度で９０％以上抑えた。
【００２２】
実施例２
製造例で得た酸性多糖類を用いて、減菌後エイズウィルスを感染させたＭＴ−４細胞（２．５×１０4／ｗｅｌｌ）を感染直後に加えた。３７度で５日間培養した後、生存細胞の数を測定した。抗ウィルス活性は細胞障害を５０％保護する濃度で表わしたところ抗酸化作用を有する酸性多糖類（２５〜７５％エタノール沈殿物）の抗ＨＩＶ作用としての細胞障害５０％保護濃度（ＥＣ50）は１５μｇ／ｍｌであった。
【００２３】
実施例３
製造例で得た酸性多糖類を１Ｎ塩酸で７５℃で４時間処理した上清と沈殿区分、および３Ｎ塩酸で１００℃１３時間処理した上清と沈殿画分を用いて、減菌後エイズウィルスを感染させたＭＴ−４細胞（２．５×１０4／ｗｅｌｌ）を感染直後に加え、３７度で５日間培養した後、生存細胞の数を測定した。抗ウィルス活性は細胞障害を５０％保護する濃度（ＥＣ50）で表わしたところ、抗酸化作用を有する酸性多糖類の１Ｎ塩酸で７５℃で４時間、および３Ｎ塩酸で１００℃で１３時間処理した上清と沈殿画分の抗ＨＩＶ作用としての細胞障害５０％保護濃度（ＥＣ50）は表１の通りであった。このとき、酸で加水分解した上清の大部分が２糖類と３等類の混合物であった。
【００２４】
【表１】
【００２５】
実施例４
製造例で得た酸性多糖類を２−アミノピリジル化後高速液体クロマトグラフィーで単糖類組成を分析した。アミノ酸はごくわずかで、中性糖が大部分であり、その中でもグルコースが殆どで、マンノースが２割程度含まれていた。この検出方法ではウロン酸は検出されなかったが、１ｇ乾燥粉末当たり１２．４％のウロン酸、２４．４％の中性糖、還元糖を１３．１％含有していた。分析結果は、単糖類組成として、グルコース０．７７５、マンノース０．２００、ガラクトース０．１２５、キシロース０．１３３、フコースｎｄ、グルコサミン０．０５８、ガラクトサミン０．０５０（単位はいずれもｕｍｏｌ／ｍｇ）を有していた。
【００２６】
実施例５
製造例で得たアルカリ抽出液に濃度が２５％になるように１００％エタノールを加えて３０分４℃で静置後３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離操作をおこない、沈殿物を得る（２５Ｐ）。上清画分に再度１００％エタノールを５０％になるように加え遠心分離して沈殿物を得た（５０Ｐ）。得られた上清にさらに１００％エタノールを７５％になるように３０分以上４℃に静置した後遠心分離して得られた沈殿物（７５Ｐ）を集め、乾燥して抗酸化作用を有する酸性多糖類の精製品を得た。アルコールで分画沈殿した画分の抗ＨＩＶ作用を表２に示す。
【００２７】
【表２】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アスパラサス・リネアリスから得た抗酸化作用を有する植物由来酸性多糖類を有効成分とする抗ウィルス剤の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、抗ウィルス剤はいくつか知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、これらのものの多くは、高価であったり、効力も弱く、さらに副作用があり、人体に危険なものが多いものであった。
【０００４】
また、ウィルス性疾患にはインフルエンザ、肝炎、麻疹、日本脳炎、成人Ｔ細胞白血病、あるいはエイズなど多くの疾患があるが、このようなウィルスに対して有効な薬剤はなく、特に成人Ｔ細胞白血病あるいはエイズウィルスのようなレトロウイルスに効果のあるものは余り知られていない。
【０００５】
さらに、人体に害がなく日常飲食も可能で予防効果を発揮する抗ウィルス剤は開発されていない。
【０００６】
近年、アスパラサス・リネアリスの抗ウィルス性が注目されているが、その原理は不明であり、また、アスパラサス・リネアリスそのものより強い効力を有するものが望まれていた。
【０００７】
本発明は、アスパラサス・リネアリスに含まれる抗酸化作用を発揮する物質について研究を重ね、特に、レトロウイルスに効果があり、また、副作用がなく、予防効果を有する抗ウィルス剤の製造方法を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
アスパラサス・リネアリスの抗酸化作用を有する酸性多糖類が、抗ウィルス作用が強く、かつ、人体、家畜などに対して副作用がなく安全な抗ウィルス剤であるとの知見を得て本発明を完成した。
【０００９】
アスパラサス・リネアリスをアルカリ抽出することによって得られた酸性多糖類は、ウロン酸、中性糖、還元糖を含有するものであり、さらに、得られた酸性多糖類を酸で加水分解することによって、活性化された２糖類と３糖類を含む抗ウィルス剤を得ることができる。
【００１０】
【発明の実施の形態】
植物由来酸性多糖類について研究を重ねたところ、ウロン酸、中性糖、還元糖を含有するものが特に優れた抗ウィルス効果を有することが知見され、これらはアスパラサス・リネアリスをアルカリ抽出し、エタノールをを加えることによって得られる。
【００１１】
有効成分の抽出は、アスパラサス・リネアリスを熱湯水で抽出し、抽出後のアスパラサス・リネアリスの残渣物を乾燥し、これにアルカリ溶液を加えてアルカリ抽出し、エタノールを加えて沈澱させることによって得られる。また、アスパラサス・リネアリスに直接アルカリ溶液を加え、アルカリ抽出して有効成分を得ることもできる。
【００１２】
熱湯水で抽出する場合には、アスパラサス・リネアリスの葉、茎、根のいずれか、またはこれらの混合物に１０〜１００倍の水を加え、７０〜１００℃で、３０分〜４時間程度抽出する。天日、または、屋内で１〜３日間乾燥し、乾燥葉の５〜５０倍のアルカリ溶液を加え、２０〜８０度で３０分〜５時間程度攪拌または振とうさせて抽出液を得る。
抽出物の乾燥粉末は、平均値で２１％のウロン酸、４９％の中性糖、還元糖を２６％含有する。
【００１３】
アルカリ溶液の具体例としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、アンモニアトリスヒドロキシエチルエミノメタン（通称トリス）、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等が挙げられ、抽出にあたっては温時抽出等慣用手段を用いることができる。また、抽出液の分離は、通常のろ過、綿を用いたろ過、デカンテーションや遠心分離等の慣用手段を用いる。
【００１４】
抽出溶媒は水以外にエタノール、アセトンなどを用いることができ、抽出溶媒の留去は凍結乾燥、スプレードライ等の慣用手段を用いることができる。
【００１５】
また、この抽出液に２５％〜７５％（Ｖ／Ｖ）になるようにエタノールを添加して３０分〜１夜４℃に静置した後、遠心分離して得られた沈殿物を集め乾燥して抗酸化作用を有する酸性多糖類を得る。さらに、得られた酸性多糖類を酸で７５℃〜１５０℃で３時間〜２４時間加水分解すると、２糖類および３糖類のオリゴ糖混合物を得ることができる。オリゴ糖混合物を得るには酸加水分解のほか、酵素を用いて多糖類を分解してもよい。酸の濃度は通常１Ｎ〜３Ｎを用いるのが好ましい。加水分解に用いる酸の具体例としては、塩酸、硫酸、硝酸、トリフルオロ酢酸などが挙げられ、加水分解に当たっては慣用手段を用いることができる。
【００１６】
得られた有効成分を生理学的に許容されうる担体、賦形剤、結合剤、希釈剤と混合し、たとえば顆粒剤、粉剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、塗布剤、シロップ、坐剤、注射剤として経口または非経口的に、または、混合してそのまま溶液、粉末顆粒、錠剤、乳剤、ゼリー状など任意の形態で単独投与、濃縮液を利用、または他の飲食物に混合して飲食することもできる。
【００１７】
投与量は、対象となる疾患の種類、程度により異なるが、飲料として常用する場合には、１〜１０００ｍｇ／ｌ溶液を２ｍｌ〜５００ｍｌ／日飲食するのが好ましい。抽出液粉末を用いる場合には、０．２ｍｇ〜５ｇ／日飲食するのが好ましい。
【００１８】
抗酸化作用を有する酸性多糖類は、ラットに対する急性毒性試験で死亡例は皆無であり、生化学血液検査及び病理組織学的検査においても異常が認められなかった。
【００１９】
【発明の効果】
本発明は、ウィルスの増殖を抑え、レトロウイルスに効果があり、また、副作用がなく、予防効果を有する抗ウィルス剤を得ることができる。
【００２０】
【実施例】
製造例
採取したアスパラサス・リネアリスの葉（茎つき）を、５ｍｍ長に切断後、ローリング、酵素発酵、天日乾燥の工程を経て乾燥葉とする。乾燥葉３ｇを８５度の熱湯水１００ミリリットルで３時間抽出した後、葉（茎つき）を室内で乾燥した。乾燥葉を１％水酸化ナトリウム５０ミリリットルで４５度で３時間激しく振とうさせ、綿をロートに敷いてろ過して抽出液を得た。この抽出液に２５％〜７５％（Ｖ／Ｖ）になるようにエタノールを添加して３０分以上４℃で静置した後、遠心分離して得られた沈殿物を集め乾燥して抗酸化作用を有する酸性多糖類を得た。抗酸化作用を有する酸性多糖類の乾燥粉末は、２２．５％のウロン酸、５０．５％の中性糖、還元糖を２６．５％含有していた。
【００２１】
実施例１
製造例で得た酸性多糖類を用いて、培養細胞、ＭＤＣＫに対するインフルエンザウイルスおよびＭＡ１０４細胞など各種細胞に対するヘルペスウイルスのプラーク形成に及ぼす影響を調べた。インフルエンザウイルスに対しては０．１ｍｇ／ｍｌの濃度で１００％近く抑え、ヘルペスウイルスに対しては１μｇ／ｍｌの濃度で９０％以上抑えた。
【００２２】
実施例２
製造例で得た酸性多糖類を用いて、減菌後エイズウィルスを感染させたＭＴ−４細胞（２．５×１０4／ｗｅｌｌ）を感染直後に加えた。３７度で５日間培養した後、生存細胞の数を測定した。抗ウィルス活性は細胞障害を５０％保護する濃度で表わしたところ抗酸化作用を有する酸性多糖類（２５〜７５％エタノール沈殿物）の抗ＨＩＶ作用としての細胞障害５０％保護濃度（ＥＣ50）は１５μｇ／ｍｌであった。
【００２３】
実施例３
製造例で得た酸性多糖類を１Ｎ塩酸で７５℃で４時間処理した上清と沈殿区分、および３Ｎ塩酸で１００℃１３時間処理した上清と沈殿画分を用いて、減菌後エイズウィルスを感染させたＭＴ−４細胞（２．５×１０4／ｗｅｌｌ）を感染直後に加え、３７度で５日間培養した後、生存細胞の数を測定した。抗ウィルス活性は細胞障害を５０％保護する濃度（ＥＣ50）で表わしたところ、抗酸化作用を有する酸性多糖類の１Ｎ塩酸で７５℃で４時間、および３Ｎ塩酸で１００℃で１３時間処理した上清と沈殿画分の抗ＨＩＶ作用としての細胞障害５０％保護濃度（ＥＣ50）は表１の通りであった。このとき、酸で加水分解した上清の大部分が２糖類と３等類の混合物であった。
【００２４】
【表１】
実施例４
製造例で得た酸性多糖類を２−アミノピリジル化後高速液体クロマトグラフィーで単糖類組成を分析した。アミノ酸はごくわずかで、中性糖が大部分であり、その中でもグルコースが殆どで、マンノースが２割程度含まれていた。この検出方法ではウロン酸は検出されなかったが、１ｇ乾燥粉末当たり１２．４％のウロン酸、２４．４％の中性糖、還元糖を１３．１％含有していた。分析結果は、単糖類組成として、グルコース０．７７５、マンノース０．２００、ガラクトース０．１２５、キシロース０．１３３、フコースｎｄ、グルコサミン０．０５８、ガラクトサミン０．０５０（単位はいずれもｕｍｏｌ／ｍｇ）を有していた。
【００２６】
実施例５
製造例で得たアルカリ抽出液に濃度が２５％になるように１００％エタノールを加えて３０分４℃で静置後３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離操作をおこない、沈殿物を得る（２５Ｐ）。上清画分に再度１００％エタノールを５０％になるように加え遠心分離して沈殿物を得た（５０Ｐ）。得られた上清にさらに１００％エタノールを７５％になるように３０分以上４℃に静置した後遠心分離して得られた沈殿物（７５Ｐ）を集め、乾燥して抗酸化作用を有する酸性多糖類の精製品を得た。アルコールで分画沈殿した画分の抗ＨＩＶ作用を表２に示す。
【００２７】
【表２】
Claims (2)
- アスパラサス・リネアリスを７０〜１００℃で熱湯抽出し、熱湯抽出後の残渣物を乾燥した後、アルカリ溶液を加えて撹拌または振とうして濾過し、更に、抽出液にエタノールを添加し、静置して沈澱させて抽出物を得、この抽出物を遠心分離する抗ウィルス剤の製造方法。
- アスパラサス・リネアリスを７０〜１００℃で熱湯抽出し、熱湯抽出後の残渣物を乾燥した後、アルカリ溶液を加えて撹拌または振とうして濾過し、更に、抽出液にエタノールを添加し、静置して沈澱させて抽出物を得、この抽出物を酸で加水分解する抗ウィルス剤の製造方法。
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