JP2594440B2 - 抗エイズウイルス剤 - Google Patents
抗エイズウイルス剤Info
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- JP2594440B2 JP2594440B2 JP62159423A JP15942387A JP2594440B2 JP 2594440 B2 JP2594440 B2 JP 2594440B2 JP 62159423 A JP62159423 A JP 62159423A JP 15942387 A JP15942387 A JP 15942387A JP 2594440 B2 JP2594440 B2 JP 2594440B2
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- aids virus
- virus
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、植物性物質より得られる抗エイズウイルス
の作用のある多糖に関する。
の作用のある多糖に関する。
（従来の技術） HIV（Human Immunodefficiency Virus）は、ヒトのRe
tro Virusでヒトの白血球細胞に感染し免疫阻害を起こ
すことが知られている。この感染によって、後天性免疫
阻害（Acute Immunodefficiency Syndrome）に陥りその
結果、色々な外部からの感染に対する抵抗力がなくなる
ことで致死を招く。
tro Virusでヒトの白血球細胞に感染し免疫阻害を起こ
すことが知られている。この感染によって、後天性免疫
阻害（Acute Immunodefficiency Syndrome）に陥りその
結果、色々な外部からの感染に対する抵抗力がなくなる
ことで致死を招く。
現在、抗エイズウイルス剤として種々の化合物が提案
され、医薬品として開発されているが、効果、副作用等
の点から決定的なものは得られていない。ところで、こ
れらの抗エイズウイルス剤の中には、クレスチン及びレ
ンチナンのように植物成分から開発されたものがある。
され、医薬品として開発されているが、効果、副作用等
の点から決定的なものは得られていない。ところで、こ
れらの抗エイズウイルス剤の中には、クレスチン及びレ
ンチナンのように植物成分から開発されたものがある。
本発明者らは、種々の植物成分の抗エイズウイルス作
用について鋭意検討を重ねた結果、松かさからアルカリ
水で抽出される抗腫瘍性多糖の一種が有効にエイズウイ
ルスの増殖を阻害することを見出した。
用について鋭意検討を重ねた結果、松かさからアルカリ
水で抽出される抗腫瘍性多糖の一種が有効にエイズウイ
ルスの増殖を阻害することを見出した。
（発明の構成） 本発明の抗エイズウイルス剤は、五葉松（Pinus parv
iflora Sieb.et Zucc.）等の松かさのアルカリ水抽出
物、特にこの抽出物中に含まれる抗エイズウイルス性多
糖を有効成分として含有することを特徴とする。
iflora Sieb.et Zucc.）等の松かさのアルカリ水抽出
物、特にこの抽出物中に含まれる抗エイズウイルス性多
糖を有効成分として含有することを特徴とする。
本発明において松かさは、黒松、赤松、五葉松等の種
々の松の松かさが使用できるが、特に五葉松のものが好
ましい。松かさは、７〜８月頃のものは油分が多く、抽
出した際、油分が層状になって分離することから９〜10
月頃のもの、特に成分が豊富に含まれていると考えられ
る10月頃の落実していないものが好ましい。
々の松の松かさが使用できるが、特に五葉松のものが好
ましい。松かさは、７〜８月頃のものは油分が多く、抽
出した際、油分が層状になって分離することから９〜10
月頃のもの、特に成分が豊富に含まれていると考えられ
る10月頃の落実していないものが好ましい。
松かさからの抽出物としては、単なる熱水によっても
或る程度の効力のあるものが得られるが、特にアルカリ
水による抽出物によって好ましい結果が得られる。
或る程度の効力のあるものが得られるが、特にアルカリ
水による抽出物によって好ましい結果が得られる。
本発明においてアルカリ水抽出物は、抽出液のまま使
用してもよいが、更に分別して抽出液中に含まれる特に
効果のある成分のみを用いてもよい。本発明者らは、こ
の抽出物中に含まれる有効成分として使用し得るものは
多糖であると推定した。また本発明者らは、特に効果の
ある成分をKS−７と名づけた。
用してもよいが、更に分別して抽出液中に含まれる特に
効果のある成分のみを用いてもよい。本発明者らは、こ
の抽出物中に含まれる有効成分として使用し得るものは
多糖であると推定した。また本発明者らは、特に効果の
ある成分をKS−７と名づけた。
本発明で使用するアルカリ水抽出物は、直接松かさを
アルカリ水中に浸漬して抽出してもよいが、通常はアル
コール等で油分を除き、熱水抽出したのちのものからア
ルカリ水抽出するとよい。以下、具体例によって説明す
る。
アルカリ水中に浸漬して抽出してもよいが、通常はアル
コール等で油分を除き、熱水抽出したのちのものからア
ルカリ水抽出するとよい。以下、具体例によって説明す
る。
KS−７の精製法 500gの松かさを約５のメタノール、85％エタノール
で４時間、２回づつ還流させながら洗浄する。次に、５
の沸騰蒸留水で６時間、３回の抽出を行う。残査を５
の１％水酸化ナトリウムで室温下６時間、２回抽出を
行う。ガーゼで濾した抽出液のpHを酢酸で５に合わせ
る。10000×ｇ、20分、４℃の遠心により得られた上清
に、等量のエタノールを加える。生じた沈澱を充分量の
水に対して透析し、凍結乾燥したものがKS−７である。
松かさ乾燥重量当りの収率は約１％である。
で４時間、２回づつ還流させながら洗浄する。次に、５
の沸騰蒸留水で６時間、３回の抽出を行う。残査を５
の１％水酸化ナトリウムで室温下６時間、２回抽出を
行う。ガーゼで濾した抽出液のpHを酢酸で５に合わせ
る。10000×ｇ、20分、４℃の遠心により得られた上清
に、等量のエタノールを加える。生じた沈澱を充分量の
水に対して透析し、凍結乾燥したものがKS−７である。
松かさ乾燥重量当りの収率は約１％である。
分析法 中性糖の組成は、メタノール塩酸中で16時間65℃、メ
タノリシスにより得られたメチルグリコシドのトリメチ
ルシリル化誘導体のガス−リキドクロマトグラフィーに
より分析する。中性糖の定量は又、フェノール硫酸法に
より行う。
タノリシスにより得られたメチルグリコシドのトリメチ
ルシリル化誘導体のガス−リキドクロマトグラフィーに
より分析する。中性糖の定量は又、フェノール硫酸法に
より行う。
ウロン酸は、アルドノラクトンに換えてからトリメチ
ルシリル化誘導体をガス−リキドクロマトグラフィーに
より解析する。ウロン酸の定量は、カルバゾール法によ
り行う。
ルシリル化誘導体をガス−リキドクロマトグラフィーに
より解析する。ウロン酸の定量は、カルバゾール法によ
り行う。
炭素、水素、窒素、イオウの定量は、元素分析機によ
り行う。
り行う。
エンドトキシン試験 エンドトキシンの定量は、大腸菌0111:B4エンドトキ
シンを標準にして、エンドスペシー（エンドトキシン特
異的新比色定量、生化学工業（株））により行う。
シンを標準にして、エンドスペシー（エンドトキシン特
異的新比色定量、生化学工業（株））により行う。
Ｔ細胞への感染方法 細胞CEM Cell Lineは、ヒト白血病患者より由来した
Ｔ細胞株であり、HTLV1と２を含んでいない。使用され
たVirus株は、HIVのN.Y.株である。
Ｔ細胞株であり、HTLV1と２を含んでいない。使用され
たVirus株は、HIVのN.Y.株である。
CEM株にHIVを含む細胞培養液を加え、CEMを感染す
る。Virusの感染価は、逆転写酵素の活性（RT）と感染
細胞の間接蛍光抗体法によって測定した。
る。Virusの感染価は、逆転写酵素の活性（RT）と感染
細胞の間接蛍光抗体法によって測定した。
（作 用） KS−７は、波長260〜280nmの光に吸収をもつ茶褐色の
粉末として得られ、水に対する溶解性は優れているが、
生理食塩水中では沈澱を生じやすい。炭素33.55％、水
素4.23％を含み、窒素、イオウは検出されなかった。
粉末として得られ、水に対する溶解性は優れているが、
生理食塩水中では沈澱を生じやすい。炭素33.55％、水
素4.23％を含み、窒素、イオウは検出されなかった。
中性糖は39.5％を占め、その構成の内訳は、アラビノ
ース16.5％、マンノース16.2％、ガラクトース39.3％、
グルコース26.0％であった。
ース16.5％、マンノース16.2％、ガラクトース39.3％、
グルコース26.0％であった。
KS−７は、ウロン酸58.2％を含んでいた。エンドトキ
シンの混入は0.0025％前後であった。アルカリ性での条
件下でのゲル濾過での分子量は、１〜20万であった。
シンの混入は0.0025％前後であった。アルカリ性での条
件下でのゲル濾過での分子量は、１〜20万であった。
KS−７の抗エイズウイルス活性 1.CEMにHIVを低いウイルス感染比で加え長く培養するこ
とによって、CEMをウイルス生産細胞株に変えることが
できる。このようにして作られた生産細胞株に、松かさ
のアルカリ抽出物KS−７を７μｇ、50μｇ、100μｇ、3
00μg/ml加えて１週間培養した。その培養液のHIVの活
性をRT法によって測定した。
とによって、CEMをウイルス生産細胞株に変えることが
できる。このようにして作られた生産細胞株に、松かさ
のアルカリ抽出物KS−７を７μｇ、50μｇ、100μｇ、3
00μg/ml加えて１週間培養した。その培養液のHIVの活
性をRT法によって測定した。
その結果、RTの活性は７μg/ml以上のKS−７を加える
ことによって抑制されることが発見された。50μg/ml以
上では、RT活性によって測定された阻止率は、85％以上
である。これに対して、対照はスラミン200μg/mlで処
理したもの（スラミンは、アジドチミジンと同じ位の効
果を示す）で阻害率は77％であった。間接蛍光抗体法の
結果は、300μg/mlでは７日後に陽性の細胞が20％にま
で減少し、50ないし70μg/mlの処理では、陽性細胞の割
合はあまり変わりはないが、蛍光度は著しく弱くなって
いた。
ことによって抑制されることが発見された。50μg/ml以
上では、RT活性によって測定された阻止率は、85％以上
である。これに対して、対照はスラミン200μg/mlで処
理したもの（スラミンは、アジドチミジンと同じ位の効
果を示す）で阻害率は77％であった。間接蛍光抗体法の
結果は、300μg/mlでは７日後に陽性の細胞が20％にま
で減少し、50ないし70μg/mlの処理では、陽性細胞の割
合はあまり変わりはないが、蛍光度は著しく弱くなって
いた。
2.KS−７によるCEM細胞の前処理 KS−7 50μg/mlと100μg/mlの濃度で、CEM細胞を５日
間、前処理した後、Virusの感染比を高くして感染を試
みた。この結果、Virusの感染比を高くして感染したCEM
細胞は、KS−７のない場合には、３日後に細胞が完全に
死滅した。それに対して、KS−７で処理した細胞は、３
日目で細胞の生存率が90％以上で、殆どその影響がなか
った。７日目になって、細胞の生存率は約50％認められ
た。RTによるVirusの生産は、この時多少認められた。
間、前処理した後、Virusの感染比を高くして感染を試
みた。この結果、Virusの感染比を高くして感染したCEM
細胞は、KS−７のない場合には、３日後に細胞が完全に
死滅した。それに対して、KS−７で処理した細胞は、３
日目で細胞の生存率が90％以上で、殆どその影響がなか
った。７日目になって、細胞の生存率は約50％認められ
た。RTによるVirusの生産は、この時多少認められた。
3.KS−７をVirus感染時に処理した時 CEM細胞を50μg/ml、100μg/mlにて、細胞を処理しそ
の時、同時にVirusの感染を試みるとVirus生産に対して
の抑制は、対照とまったく変わりなかった。
の時、同時にVirusの感染を試みるとVirus生産に対して
の抑制は、対照とまったく変わりなかった。
以上のようなことから、KS−７のHIVに対する増殖の
抑制は、細胞をVirusの感染の前にKS−７で処理する必
要がある。またKS−７は、ウイルス生産細胞のVirus増
殖を阻止する能力を持っている。
抑制は、細胞をVirusの感染の前にKS−７で処理する必
要がある。またKS−７は、ウイルス生産細胞のVirus増
殖を阻止する能力を持っている。
（発明の効果） エイズウイルスは、血液のＴ細胞に感染し、免疫阻害
を誘起し、死に到らしめる。KS−７は、抗エイズウイル
ス作用を持つばかりでなく、ヒト末梢血由来の単球や、
多形核白血球を著しく活性化させることも判っている。
この様にKS−７は、他の植物性多糖に見られない多糖の
免疫賦活活性を持っている。従って単独でまたは他の治
療法もしくは他の治療薬（アジドチミジン、ジデオキシ
シチジン、スラミン等）と組み合わせて使用することに
より、より効果的なエイズの治療を行うことができる。
を誘起し、死に到らしめる。KS−７は、抗エイズウイル
ス作用を持つばかりでなく、ヒト末梢血由来の単球や、
多形核白血球を著しく活性化させることも判っている。
この様にKS−７は、他の植物性多糖に見られない多糖の
免疫賦活活性を持っている。従って単独でまたは他の治
療法もしくは他の治療薬（アジドチミジン、ジデオキシ
シチジン、スラミン等）と組み合わせて使用することに
より、より効果的なエイズの治療を行うことができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 坂上 宏 東京都品川区旗の台１−５−８ 昭和大 学医学部内 (72)発明者 紺野 邦夫 東京都品川区旗の台１−５−８ 昭和大 学医学部内 (72)発明者 野々山 明範 東京都品川区旗の台１−５−８ 昭和大 学医学部内 (56)参考文献 特開 平１−238532（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−238533（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−4601（ＪＰ，Ａ)
Claims (3)
- 【請求項１】松かさのアルカリ水抽出物を有効成分とし
て含有することを特徴とする抗エイズウイルス剤。 - 【請求項２】松かさが、五葉松（Pinus parviflora Sie
b.et Zucc.）の松かさであることを特徴とする特許請求
の範囲第１項記載の抗エイズウイルス剤。 - 【請求項３】有効成分が、松かさのアルカリ水抽出物に
含まれる抗エイズウイル作用のある多糖であることを特
徴とする特許請求の範囲第１項または第２項記載の抗エ
イズウイルス剤。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62159423A JP2594440B2 (ja) | 1987-06-26 | 1987-06-26 | 抗エイズウイルス剤 |
| US07/209,926 US4985249A (en) | 1987-06-26 | 1988-06-22 | Anti-HIV agents |
| EP19880110142 EP0296626B1 (en) | 1987-06-26 | 1988-06-24 | Anti-hiv agents and method of producing the same |
| DE8888110142T DE3861709D1 (de) | 1987-06-26 | 1988-06-24 | Anti-hiv-mittel und methode zu deren erzeugung. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62159423A JP2594440B2 (ja) | 1987-06-26 | 1987-06-26 | 抗エイズウイルス剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS646218A JPS646218A (en) | 1989-01-10 |
| JP2594440B2 true JP2594440B2 (ja) | 1997-03-26 |
Family
ID=15693420
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62159423A Expired - Fee Related JP2594440B2 (ja) | 1987-06-26 | 1987-06-26 | 抗エイズウイルス剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2594440B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3793593B2 (ja) * | 1995-07-31 | 2006-07-05 | 中野 昌俊 | 抗ウィルス剤の製造方法 |
| KR100743862B1 (ko) * | 2005-10-19 | 2007-07-30 | 문치웅 | 솔잎 추출물을 함유하는 바이러스로 인한 동물 질환의치료 및 예방용 조성물 |
| KR100743861B1 (ko) * | 2005-10-19 | 2007-07-30 | 문치웅 | 솔잎 추출물을 함유하는 바이러스로 인한 인간 질환의 치료및 예방용 조성물 |
-
1987
- 1987-06-26 JP JP62159423A patent/JP2594440B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS646218A (en) | 1989-01-10 |
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Legal Events
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