JP2519461B2 - 抗腫瘍性多糖 - Google Patents
抗腫瘍性多糖Info
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、植物性物質より得られる抗腫瘍性多糖に関
する。
する。
（従来の技術） 現在、制癌剤として種々の化合物が提案され、医薬品
として開発されているが、効果、副作用等の点から決定
的なものは得られていない。ところで、これらの制癌剤
の中にはクレスチン、ビンブラスチン及びビンクリスチ
ンのように植物成分から開発されたものがある。本発明
者は既に、松かさの熱水抽出物が有効な制癌作用を有す
ることを見い出している（特願昭61-47004号）。
として開発されているが、効果、副作用等の点から決定
的なものは得られていない。ところで、これらの制癌剤
の中にはクレスチン、ビンブラスチン及びビンクリスチ
ンのように植物成分から開発されたものがある。本発明
者は既に、松かさの熱水抽出物が有効な制癌作用を有す
ることを見い出している（特願昭61-47004号）。
本発明者は、この有効成分について更に鋭意検討を重
ねた結果、松かさ熱水抽出物に含まれている種々の酸
性多糖体が、腹腔に癌を移植されたマウスの生存日数を
有意に延ばし、この延命活性は多糖の酸性度に応じて増
加すること、水酸化ナトリウム等のアルカリ水溶液抽
出で得られた４種類の多糖画分のうちの１つが、最も強
力な抗腫瘍活性を示し、この画分は皮下に移植された固
形腫瘍の発育をも有意に抑制させ、一部腫瘍の退縮・壊
死を誘起させること、を見い出した。
ねた結果、松かさ熱水抽出物に含まれている種々の酸
性多糖体が、腹腔に癌を移植されたマウスの生存日数を
有意に延ばし、この延命活性は多糖の酸性度に応じて増
加すること、水酸化ナトリウム等のアルカリ水溶液抽
出で得られた４種類の多糖画分のうちの１つが、最も強
力な抗腫瘍活性を示し、この画分は皮下に移植された固
形腫瘍の発育をも有意に抑制させ、一部腫瘍の退縮・壊
死を誘起させること、を見い出した。
（発明の構成） 本発明は、五葉松（Pinus parviflora Sieb.et Zuc
c.）等の松かさの熱水及びアルカリ水抽出物に含まれる
抗腫瘍性多糖に関する。
c.）等の松かさの熱水及びアルカリ水抽出物に含まれる
抗腫瘍性多糖に関する。
本発明において松かさは、黒松、赤松、五葉松等の種
々の松の松かさが使用できるが、特に五葉松のものが好
ましい。松かさは、７〜８月頃のものは油分が多く、抽
出した際、油分が層状になって分離することから９〜10
月頃のもの、特に成分が豊富に含まれていると考えられ
る10月頃の落実していないものが好ましい。
々の松の松かさが使用できるが、特に五葉松のものが好
ましい。松かさは、７〜８月頃のものは油分が多く、抽
出した際、油分が層状になって分離することから９〜10
月頃のもの、特に成分が豊富に含まれていると考えられ
る10月頃の落実していないものが好ましい。
本発明の多糖成分の抽出分画は、第１図に示した様に
行う。一具体例をもって説明すると次ぎのとおりであ
る。
行う。一具体例をもって説明すると次ぎのとおりであ
る。
多糖成分の抽出分画 500gの松かさ（10月上旬に長崎市で採集した五葉松の
もの）を約5lのメタノール、85％エタノールで４時間、
２回づつの洗浄により脱脂及び低分子物質を除去した
後、沸騰水抽出を６時間、３回づつ行う。粗抽出液を濾
紙でこして不溶物を除き、得られた抽出液（以下PCEと
呼ぶ）を、減圧下で濃縮後、６倍量のエタノールを加え
る。生じた沈澱を蒸留水に溶かし、蒸留水に対して透析
後、蒸留水で平衡化されたDEAE−セルロースカラム（2.
5×40cm、Cl-型）（ブラウン社製）に載せる。第２図に
示した様に、水（Fr.I,分画番号15-95）、0.5M塩化ナト
リウム（Fr.II,分画番号 144-200）、2M塩化ナトリウ
ム（Fr.III,分画番号 220-260）、そして0.15M水酸化
ナトリウム（Fr.IV（分画番号 297-303）＋Fr.V（分画
番号 304-325））の各溶液で段階的に溶出を行う。各
画分を10mlずつ分取し、そのうち50μｌをフェノール硫
酸法による糖の定量に用いる。0.15M水酸化ナトリウム
溶出画分は２つの異なるピークより成るので、これらの
ピークは別々に、画分Fr.IVとFr.Vとして集める。後者
のより大きいピークは、セファロースCL-4Bを用いた0.1
5M水酸化ナトリウムでのゲル濾過により、更にFr.V−１
（分子量１〜７万）とFr.V−２（分子量７〜20万）に分
画する。このようにして６種類の熱水抽出多糖画分を得
る。
もの）を約5lのメタノール、85％エタノールで４時間、
２回づつの洗浄により脱脂及び低分子物質を除去した
後、沸騰水抽出を６時間、３回づつ行う。粗抽出液を濾
紙でこして不溶物を除き、得られた抽出液（以下PCEと
呼ぶ）を、減圧下で濃縮後、６倍量のエタノールを加え
る。生じた沈澱を蒸留水に溶かし、蒸留水に対して透析
後、蒸留水で平衡化されたDEAE−セルロースカラム（2.
5×40cm、Cl-型）（ブラウン社製）に載せる。第２図に
示した様に、水（Fr.I,分画番号15-95）、0.5M塩化ナト
リウム（Fr.II,分画番号 144-200）、2M塩化ナトリウ
ム（Fr.III,分画番号 220-260）、そして0.15M水酸化
ナトリウム（Fr.IV（分画番号 297-303）＋Fr.V（分画
番号 304-325））の各溶液で段階的に溶出を行う。各
画分を10mlずつ分取し、そのうち50μｌをフェノール硫
酸法による糖の定量に用いる。0.15M水酸化ナトリウム
溶出画分は２つの異なるピークより成るので、これらの
ピークは別々に、画分Fr.IVとFr.Vとして集める。後者
のより大きいピークは、セファロースCL-4Bを用いた0.1
5M水酸化ナトリウムでのゲル濾過により、更にFr.V−１
（分子量１〜７万）とFr.V−２（分子量７〜20万）に分
画する。このようにして６種類の熱水抽出多糖画分を得
る。
一方、アルカリ水抽出多糖は、アルコール洗浄したの
ちの松かさから直接アルカリ水抽出してもよいが、通常
第１図に示す様に、熱水抽出残査から、室温で６時間、
２回、１％水酸化ナトリウムで抽出する。抽出液は1000
0×g,20分遠心後、上清のpHを酢酸で５に合わせる。遠
心で集めた沈澱を画分Fr.VIとし、上清は、１、２及び
５倍量のエタノールを加えて連続的に沈澱を生じさせ、
それぞれの沈澱物を画分Fr.VII、Fr.VIII、そしてFr.IX
とする。これらの全ての画分は、蒸留水に対して透析し
て凍結乾燥する。
ちの松かさから直接アルカリ水抽出してもよいが、通常
第１図に示す様に、熱水抽出残査から、室温で６時間、
２回、１％水酸化ナトリウムで抽出する。抽出液は1000
0×g,20分遠心後、上清のpHを酢酸で５に合わせる。遠
心で集めた沈澱を画分Fr.VIとし、上清は、１、２及び
５倍量のエタノールを加えて連続的に沈澱を生じさせ、
それぞれの沈澱物を画分Fr.VII、Fr.VIII、そしてFr.IX
とする。これらの全ての画分は、蒸留水に対して透析し
て凍結乾燥する。
なお、第１図において、括弧内の数字は、松かさ感想
重量に対する多糖の収率を示す。
重量に対する多糖の収率を示す。
上記において、熱水抽出液及びアルカリ水抽出での上
清等に加えるアルコールは、単に沈澱を生じさせるため
だけであるためエタノールに限定されることなく、他の
適当なアルコールを使用してよい。また、アルカリ水抽
出でのアルカリとしては、上記のものに限定されること
なく他のものを使用してもよく、更にアルカリ水溶液の
濃度、pHも適宜選択できるが抽出液をpH5に調整するこ
とから考えてあまり強くないほうがよい。アルカリは有
機、無機のいずれも使用できるが、好ましいものはNaOH
又はKOHである。
清等に加えるアルコールは、単に沈澱を生じさせるため
だけであるためエタノールに限定されることなく、他の
適当なアルコールを使用してよい。また、アルカリ水抽
出でのアルカリとしては、上記のものに限定されること
なく他のものを使用してもよく、更にアルカリ水溶液の
濃度、pHも適宜選択できるが抽出液をpH5に調整するこ
とから考えてあまり強くないほうがよい。アルカリは有
機、無機のいずれも使用できるが、好ましいものはNaOH
又はKOHである。
多糖の抗腫瘍活性の測定法 （１）腹水癌に対する効果 １×106個のsarcoma-180をICRマウス（雌、６週令、
体重約25g）の腹腔内に移植し、24時間経過した後か
ら、各群を10匹とし、種々の濃度の多糖画分を滅菌生理
食塩水に溶かした試料を、毎日0.2mlずつ連続５日間、
腹腔内に注射針にて投与して60日間生存マウス数を記録
する。延命率は次式で求める。
体重約25g）の腹腔内に移植し、24時間経過した後か
ら、各群を10匹とし、種々の濃度の多糖画分を滅菌生理
食塩水に溶かした試料を、毎日0.2mlずつ連続５日間、
腹腔内に注射針にて投与して60日間生存マウス数を記録
する。延命率は次式で求める。
T/C％＝（B/A）×100 ここで、Ａは対照マウス（生理食塩水投与）の平均生
存日数、Ｂは多糖画分を処理したマウスの平均生存日数
を表わす。
存日数、Ｂは多糖画分を処理したマウスの平均生存日数
を表わす。
（２）固形癌に対する効果 １×106個のsarcoma-180をICRマウス（雌、６週令）
の左脇腹皮下に移植し、24時間あるいは１週間経過した
後から、各群を10匹とし、種々の濃度の多糖画分を生理
食塩水に溶かした試料を、毎日0.2mlづつ連続３〜５日
間、腹腔内に注射針にて投与する。22日後に屠殺し、腫
瘍組織を摘出して、その重量を測定する。癌細胞の増殖
の抑制は、次式により求める。
の左脇腹皮下に移植し、24時間あるいは１週間経過した
後から、各群を10匹とし、種々の濃度の多糖画分を生理
食塩水に溶かした試料を、毎日0.2mlづつ連続３〜５日
間、腹腔内に注射針にて投与する。22日後に屠殺し、腫
瘍組織を摘出して、その重量を測定する。癌細胞の増殖
の抑制は、次式により求める。
阻止率（％）＝（（Ａ−Ｂ）/A）×100 ここで、Ａは対照マウス（生理食塩水投与）の平均腫瘍
重量、Ｂは多糖画分を処理したマウスの平均腫瘍重量を
表わす。
重量、Ｂは多糖画分を処理したマウスの平均腫瘍重量を
表わす。
試験管内での直接細胞傷害試験 １×105個/mlのsarcoma-180細胞を、10％仔牛胎児血
清及び種々の濃度の多糖画分Fr.VIIを含むRPMI1640培養
液中で培養する。24、48、72時間後に、生細胞数をトリ
パン青色素排除法により測定する。
清及び種々の濃度の多糖画分Fr.VIIを含むRPMI1640培養
液中で培養する。24、48、72時間後に、生細胞数をトリ
パン青色素排除法により測定する。
マウスマクロファージ様株化細胞J774.1の活性化の判定 J774.1細胞2.5×105個/mlを24時間、０、10、100μg/
mlの多糖画分で処理し、形態的に成熟した細胞の割合
（％）を測定する。多糖処理による細胞培養液中への分
化誘導因子の産出の促進は次の様にして求める。即ち、
ヒト骨髄性白血病ML-1細胞（３×105個/ml）を３日間、
20％（V/V）上記多糖処理したJ774.1細胞培養液で処理
し、NBT還元能を有する細胞の割合（％）を算出する。
mlの多糖画分で処理し、形態的に成熟した細胞の割合
（％）を測定する。多糖処理による細胞培養液中への分
化誘導因子の産出の促進は次の様にして求める。即ち、
ヒト骨髄性白血病ML-1細胞（３×105個/ml）を３日間、
20％（V/V）上記多糖処理したJ774.1細胞培養液で処理
し、NBT還元能を有する細胞の割合（％）を算出する。
分析法 中性糖の組成は、メタノール塩酸中で16時間65℃、メ
タノリシスにより得られたメチルグリコシドのトリメチ
ルシリル化誘導体のガス−リキドクロマトグラフィーに
より分析する。中性糖の定量は又、フェノール硫酸法に
より行う。
タノリシスにより得られたメチルグリコシドのトリメチ
ルシリル化誘導体のガス−リキドクロマトグラフィーに
より分析する。中性糖の定量は又、フェノール硫酸法に
より行う。
ウロン酸は、アルドノラクトンに換えてからトリメチ
ルシリル化誘導体をガス−リキドクロマトグラフィーに
より解析する。ウロン酸の定量は、カルバゾール法によ
り行う。
ルシリル化誘導体をガス−リキドクロマトグラフィーに
より解析する。ウロン酸の定量は、カルバゾール法によ
り行う。
炭素、水素、窒素、イオウの定量は、元素分析機によ
り行う。
り行う。
エンドトキシン試験 エンドトキシンの定量は、大腸菌0111:B4エンドトキ
シンを標準にして、エンドスペシー（エンドトキシン特
異的新比色定量、生化学工業（株））により行う。
シンを標準にして、エンドスペシー（エンドトキシン特
異的新比色定量、生化学工業（株））により行う。
（作用） 上記の方法により得た種々の松かさ由来の多糖の制癌
作用を、マウスに移植した腹水癌、固形癌に対する効果
の試験を行うことにより調べた。
作用を、マウスに移植した腹水癌、固形癌に対する効果
の試験を行うことにより調べた。
（１）腹水癌に対する効果 表１に示される様に、腹腔にsarcoma-180を移植した
マウスを延命させる活性は、熱水抽出多糖画分の酸性度
（つまり、DEAE−セルロースカラムへの吸着の強さ）に
応じて増加した。
マウスを延命させる活性は、熱水抽出多糖画分の酸性度
（つまり、DEAE−セルロースカラムへの吸着の強さ）に
応じて増加した。
DEAE−セルロースに吸着しない画分（Fr.I）は全く延
命活性がなかった（T/C＝96-98％）。しかし、0.5M塩化
ナトリウム及び2M塩化ナトリウムにより溶出する各多糖
画分（Fr.IIとIII）の延命活性は増加した（それぞれT/
C＝118％、175％）。0.15M水酸化ナトリウムで溶出され
る画分（Fr.IVとＶ）の活性が最大であった。Fr.IVは、
投与量は少いが、熱水抽出多糖の中では、最大の活性を
示した（T/C＝228％）。画分Fr.Vは、ゲル濾過により更
に２つに分画した。そのうちの低分子画分（分子量１〜
７万）（Fr.V−２）により強い活性（T/C＝172％）が認
められたのに対して、高分子画分（分子量７〜20万）
（Fr.V−１）には、僅かしか活性が存在しなかった。こ
れらの結果により、熱水抽出多糖画分の抗腫瘍活性は、
酸性度に依存していることが示唆された。
命活性がなかった（T/C＝96-98％）。しかし、0.5M塩化
ナトリウム及び2M塩化ナトリウムにより溶出する各多糖
画分（Fr.IIとIII）の延命活性は増加した（それぞれT/
C＝118％、175％）。0.15M水酸化ナトリウムで溶出され
る画分（Fr.IVとＶ）の活性が最大であった。Fr.IVは、
投与量は少いが、熱水抽出多糖の中では、最大の活性を
示した（T/C＝228％）。画分Fr.Vは、ゲル濾過により更
に２つに分画した。そのうちの低分子画分（分子量１〜
７万）（Fr.V−２）により強い活性（T/C＝172％）が認
められたのに対して、高分子画分（分子量７〜20万）
（Fr.V−１）には、僅かしか活性が存在しなかった。こ
れらの結果により、熱水抽出多糖画分の抗腫瘍活性は、
酸性度に依存していることが示唆された。
そこで、上述（第１図）の様にして、熱水抽出残査か
ら、残存する酸性多糖を、１％水酸化ナトリウムで抽出
後、エタノール分別沈澱を行うことにより得た４種類の
アルカリ水抽出多糖画分（Fr.VI〜IX）についての効果
を調べた。その結果表１に示した様に、これらどの画分
にも強い抗腫瘍活性が検出されたが、なかでもFr.VIIの
活性が最大であった（T/C＝271-282％）。この画分を10
-20mg/kg（マウスあたり、0.25〜0.5mg）連続５回、担
癌マウスに投与すると、平均生存日数が、対照のそれ
（17.5±0.5日）の2.7〜2.8倍にまで延長し、それぞれ4
7.5±6.8日及び49.4±4.6日であった。癌移植後60日経
過しても、４ないし３匹のマウスが生存していた。画分
Fr.VIIをゲル濾過により更に分画すると、活性は、高分
子領域（分子量7-20万）（Fr.VII-1）のものから回収さ
れたが、低分子領域（分子量１−７万）の画分（Fr.VII
-2）には僅かばかりの活性しか存在していなかった。F
r.VII及び他の抗腫瘍性多糖には、それぞれ至適濃度が
存在するようである（表１）。
ら、残存する酸性多糖を、１％水酸化ナトリウムで抽出
後、エタノール分別沈澱を行うことにより得た４種類の
アルカリ水抽出多糖画分（Fr.VI〜IX）についての効果
を調べた。その結果表１に示した様に、これらどの画分
にも強い抗腫瘍活性が検出されたが、なかでもFr.VIIの
活性が最大であった（T/C＝271-282％）。この画分を10
-20mg/kg（マウスあたり、0.25〜0.5mg）連続５回、担
癌マウスに投与すると、平均生存日数が、対照のそれ
（17.5±0.5日）の2.7〜2.8倍にまで延長し、それぞれ4
7.5±6.8日及び49.4±4.6日であった。癌移植後60日経
過しても、４ないし３匹のマウスが生存していた。画分
Fr.VIIをゲル濾過により更に分画すると、活性は、高分
子領域（分子量7-20万）（Fr.VII-1）のものから回収さ
れたが、低分子領域（分子量１−７万）の画分（Fr.VII
-2）には僅かばかりの活性しか存在していなかった。F
r.VII及び他の抗腫瘍性多糖には、それぞれ至適濃度が
存在するようである（表１）。
試験管内で培養されているsarcoma-180に最大500μg/
mlのFr.VIIを添加しても、増殖抑制を受けることはなか
った。このことは、Fr.VIIには直接癌細胞を傷害させる
活性がなく、恐らく宿主介在性のメカニズムにより抗腫
瘍性を発現させているものと思われる。
mlのFr.VIIを添加しても、増殖抑制を受けることはなか
った。このことは、Fr.VIIには直接癌細胞を傷害させる
活性がなく、恐らく宿主介在性のメカニズムにより抗腫
瘍性を発現させているものと思われる。
（２）固形癌に対する効果 表２に示されている様にFr.VII（10-40mg/kg）は、マ
ウスの皮下に移植されたsarcoma-180固形癌の増殖を著
しく抑え、約50％の確率で腫瘍の退縮・壊死が観察され
た。Fr.VIIの抗腫瘍効果は、癌移植後１日目より投与す
る場合よりも、１週間目から（つまり腫瘍の大きさが、
ある一定のサイズに達してから）投与する場合の方がよ
り顕著に観察された。
ウスの皮下に移植されたsarcoma-180固形癌の増殖を著
しく抑え、約50％の確率で腫瘍の退縮・壊死が観察され
た。Fr.VIIの抗腫瘍効果は、癌移植後１日目より投与す
る場合よりも、１週間目から（つまり腫瘍の大きさが、
ある一定のサイズに達してから）投与する場合の方がよ
り顕著に観察された。
（３）酸性多糖によるマウスマクロファージ様株化細胞
J774.1の活性化 J774.1細胞は種々の物質で処理することにより活性化
され形態的に成熟マクロファージ状に広がり、腫瘍壊死
因子（TNF）様物質を放出する様になることが知られて
いる。表３に示した様に、松かさから熱水で抽出された
種々の酸性多糖（Fr.II〜Ｖ−２）10〜100μg/mlの濃度
でJ774.1細胞を処理することにより、類似の形態変化が
誘導された。J774.1細胞は、自発的にヒト骨髄性白血病
ML-1細胞を分化誘導する分化誘導因子を産生している。
分化誘導したML-1細胞は、Fcレセプター、貧食能、非特
異的エステラーゼ活性、そしてNBT還元能を示す。
J774.1の活性化 J774.1細胞は種々の物質で処理することにより活性化
され形態的に成熟マクロファージ状に広がり、腫瘍壊死
因子（TNF）様物質を放出する様になることが知られて
いる。表３に示した様に、松かさから熱水で抽出された
種々の酸性多糖（Fr.II〜Ｖ−２）10〜100μg/mlの濃度
でJ774.1細胞を処理することにより、類似の形態変化が
誘導された。J774.1細胞は、自発的にヒト骨髄性白血病
ML-1細胞を分化誘導する分化誘導因子を産生している。
分化誘導したML-1細胞は、Fcレセプター、貧食能、非特
異的エステラーゼ活性、そしてNBT還元能を示す。
これらの酸性多糖処理により、J774.1細胞による分化
誘導因子産生は、ほゞ多糖の酸性度の強度に比例して増
加した（表３）。水酸化ナトリウムで抽出される４種の
多糖画分（Fr.VI〜IX）も同様にしてJ774.1細胞の形態
的成熟とDIF産生を促進した。これらの多糖画分単独で
は１〜1000μg/mlの濃度範囲でML-1細胞を分化誘導させ
なかった。
誘導因子産生は、ほゞ多糖の酸性度の強度に比例して増
加した（表３）。水酸化ナトリウムで抽出される４種の
多糖画分（Fr.VI〜IX）も同様にしてJ774.1細胞の形態
的成熟とDIF産生を促進した。これらの多糖画分単独で
は１〜1000μg/mlの濃度範囲でML-1細胞を分化誘導させ
なかった。
多糖画分の化学分析 表４に示した様に、元素分析の結果、Fr.I、II、VII
には窒素が検出されなかった（乾燥重量当り 0.03％以
下）。
には窒素が検出されなかった（乾燥重量当り 0.03％以
下）。
これに対し、Fr.V−２、VI、VIII、IXには1.3〜2.6％
の窒素が含まれていた。イオウは全ての画分には存在し
なかった。ほとんどの多糖画分は中性糖として、アラビ
ノース（Fr.VIは、代りにフコース）、マンノース、ガ
ラクトース、グルコースを含有していた。Fr.IIとVIIは
多量のウロン酸を含んでいた（乾燥重量の58〜68％）。
の窒素が含まれていた。イオウは全ての画分には存在し
なかった。ほとんどの多糖画分は中性糖として、アラビ
ノース（Fr.VIは、代りにフコース）、マンノース、ガ
ラクトース、グルコースを含有していた。Fr.IIとVIIは
多量のウロン酸を含んでいた（乾燥重量の58〜68％）。
今まで知られていた多くの抗腫瘍性多糖は、皮下に移
植した固形腫瘍に対して顕著な制癌作用を示すものの、
腹腔に移植した腹水癌に対しては効果がない場合が多か
った。これに対して、本試験で明らかになった様に、
松かさ抽出液の中には腹水癌に対して制癌作用を示す多
くの酸性多糖が存在しており、その中で最も強力な活
性を持つ、アルカリ水抽出多糖の一画分は、固形癌に対
しても抗腫瘍活性を示した。この画分Fr.VIIは有機溶媒
可溶成分、熱水抽出成分を取り除いた残査より、アルカ
リ水で抽出された。松かさ乾燥重量当りの収率は約１％
で、他のどの多糖画分よりも多かった。この画分を今後
KS-7と略記する。
植した固形腫瘍に対して顕著な制癌作用を示すものの、
腹腔に移植した腹水癌に対しては効果がない場合が多か
った。これに対して、本試験で明らかになった様に、
松かさ抽出液の中には腹水癌に対して制癌作用を示す多
くの酸性多糖が存在しており、その中で最も強力な活
性を持つ、アルカリ水抽出多糖の一画分は、固形癌に対
しても抗腫瘍活性を示した。この画分Fr.VIIは有機溶媒
可溶成分、熱水抽出成分を取り除いた残査より、アルカ
リ水で抽出された。松かさ乾燥重量当りの収率は約１％
で、他のどの多糖画分よりも多かった。この画分を今後
KS-7と略記する。
（KS-7の製造法） 500gの松かさを約5lのメタノール、85％エタノールで
４時間、２回づつ還流させながら洗浄する。次に、5lの
沸騰蒸留水で６時間、３回の抽出を行う。残査を5lの１
％水酸化ナトリウムで室温下６時間、２回抽出を行う。
ガーゼで濾した抽出液のpHを酢酸で５に合わせる。1000
0×ｇ、20分、４℃の遠心により得られた上清に、等量
のエタノールを加える。生じた沈澱を充分量の水に対し
て透析し、凍結乾燥したものがKS-7である。
４時間、２回づつ還流させながら洗浄する。次に、5lの
沸騰蒸留水で６時間、３回の抽出を行う。残査を5lの１
％水酸化ナトリウムで室温下６時間、２回抽出を行う。
ガーゼで濾した抽出液のpHを酢酸で５に合わせる。1000
0×ｇ、20分、４℃の遠心により得られた上清に、等量
のエタノールを加える。生じた沈澱を充分量の水に対し
て透析し、凍結乾燥したものがKS-7である。
KS-7は、波長260〜280nmの光に吸収をもつ茶褐色の粉
末として得られ、水に対する溶解性は優れているが、生
理食塩水中では沈澱を生じやすい。炭素33.55％、水素
4.23％を含み、窒素、イオウは検出されなかった。
末として得られ、水に対する溶解性は優れているが、生
理食塩水中では沈澱を生じやすい。炭素33.55％、水素
4.23％を含み、窒素、イオウは検出されなかった。
中性糖は39.5％を占め、その構成の内訳は、アラビノ
ース16.5％、マンノース16.2％、ガラクトース39.3％、
グルコース26.0％であった。
ース16.5％、マンノース16.2％、ガラクトース39.3％、
グルコース26.0％であった。
KS-7は、ウロン酸58.2％を含んでいた。エンドトキシ
ンの混入は0.0025％前後であった。アルカリ性での条件
下でのゲル濾過での分子量は、１〜20万であった。
ンの混入は0.0025％前後であった。アルカリ性での条件
下でのゲル濾過での分子量は、１〜20万であった。
（発明の効果） 本発明の抗腫瘍性多糖は、松かさから熱水及びアルカ
リ水で抽出したものを所定の操作で分画することにより
得られる。これら得られた画分のうち特に、アルカリ水
で抽出したものが好ましい。本発明の抗腫瘍性多糖のう
ち特に効果の優れている制癌剤KS-7は、上記した如く松
かさを単に熱水で煎じるだけでは抽出されず、１％NaOH
の存在下にて初めて抽出されるものである。また、その
制癌効果は熱水だけで得られた６種類の酸性多糖体のい
ずれよりも強く、今まで民間療法として他の治療目的で
用いられてきた熱水抽出液以上の制癌効果が認められ
た。
リ水で抽出したものを所定の操作で分画することにより
得られる。これら得られた画分のうち特に、アルカリ水
で抽出したものが好ましい。本発明の抗腫瘍性多糖のう
ち特に効果の優れている制癌剤KS-7は、上記した如く松
かさを単に熱水で煎じるだけでは抽出されず、１％NaOH
の存在下にて初めて抽出されるものである。また、その
制癌効果は熱水だけで得られた６種類の酸性多糖体のい
ずれよりも強く、今まで民間療法として他の治療目的で
用いられてきた熱水抽出液以上の制癌効果が認められ
た。
KS-7は収率も高いため工業的に多量に得ることが可能
である。投与方法としては、単球やマクロファージ系細
胞，そして多形核白血球を活性化する働きがあるため、
これらの細胞の多い肝臓、肺に発生した癌には経口投
与、白血病細胞に対しては、生理食塩水に対する溶解性
の問題点を克服すれば静脈内投与が考えられる。
である。投与方法としては、単球やマクロファージ系細
胞，そして多形核白血球を活性化する働きがあるため、
これらの細胞の多い肝臓、肺に発生した癌には経口投
与、白血病細胞に対しては、生理食塩水に対する溶解性
の問題点を克服すれば静脈内投与が考えられる。
第１図は松かさからの多糖画分の調整法を示すフローチ
ャート、 第２図は松かさ熱水抽出多糖のDEAE−セルロースカラム
クロマトグラフィーによる分画を示すグラフである。
ャート、 第２図は松かさ熱水抽出多糖のDEAE−セルロースカラム
クロマトグラフィーによる分画を示すグラフである。
Claims (1)
- 【請求項１】五葉松（Pinus parviflora Sieb.et Zuc
c.）等の松かさの熱水抽出物及びアルカリ水抽出物に含
まれる抗腫瘍性多糖。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62159424A JP2519461B2 (ja) | 1987-06-26 | 1987-06-26 | 抗腫瘍性多糖 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62159424A JP2519461B2 (ja) | 1987-06-26 | 1987-06-26 | 抗腫瘍性多糖 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS644601A JPS644601A (en) | 1989-01-09 |
| JP2519461B2 true JP2519461B2 (ja) | 1996-07-31 |
Family
ID=15693441
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62159424A Expired - Fee Related JP2519461B2 (ja) | 1987-06-26 | 1987-06-26 | 抗腫瘍性多糖 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2519461B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10316633A1 (de) * | 2003-04-11 | 2004-10-28 | Hilti Ag | Säbelsäge mit Führungsvorrichtung |
| US7838046B2 (en) | 2001-09-26 | 2010-11-23 | Tampa Bay Research Institute | Plant extracts and uses thereof |
| US6866875B2 (en) | 2001-09-26 | 2005-03-15 | Tampa Bay Research Institute | Pine cone extracts and uses thereof |
| CN104448025A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-03-25 | 哈尔滨工业大学 | 红松松塔单一多糖组分pkp-e-2-2及其制备方法 |
| JP6895218B2 (ja) * | 2015-05-01 | 2021-06-30 | アピオン・ジャパン有限会社 | 血管内皮細胞増殖因子（ｖｅｇｆ）阻害剤 |
-
1987
- 1987-06-26 JP JP62159424A patent/JP2519461B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS644601A (en) | 1989-01-09 |
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