JP3647504B2 - 容量測定細管血球計算のための装置及び方法 - Google Patents

容量測定細管血球計算のための装置及び方法 Download PDF

Info

Publication number
JP3647504B2
JP3647504B2 JP10718295A JP10718295A JP3647504B2 JP 3647504 B2 JP3647504 B2 JP 3647504B2 JP 10718295 A JP10718295 A JP 10718295A JP 10718295 A JP10718295 A JP 10718295A JP 3647504 B2 JP3647504 B2 JP 3647504B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
capillary
sample
light
scanning
fluorescence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP10718295A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH07301628A (ja
Inventor
エム ベア トーマス
ジェイ ディーツ ルイス
エス デュブロウ ロバート
ジー ヘイター ポール
ホッジス マイケル
エス マニアン ベイラ
ジェイ シャートル ロバート
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BD Biosciences Systems and Reagents Inc
Original Assignee
BD Biosciences Systems and Reagents Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BD Biosciences Systems and Reagents Inc filed Critical BD Biosciences Systems and Reagents Inc
Publication of JPH07301628A publication Critical patent/JPH07301628A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP3647504B2 publication Critical patent/JP3647504B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10Investigating individual particles
    • G01N15/14Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
    • G01N15/1468Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry with spatial resolution of the texture or inner structure of the particle
    • GPHYSICS
    • G06COMPUTING; CALCULATING OR COUNTING
    • G06VIMAGE OR VIDEO RECOGNITION OR UNDERSTANDING
    • G06V20/00Scenes; Scene-specific elements
    • G06V20/60Type of objects
    • G06V20/69Microscopic objects, e.g. biological cells or cellular parts

Landscapes

  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Multimedia (AREA)
  • Theoretical Computer Science (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Optical Measuring Cells (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Description

【0001】
【技術分野】
本発明は、自動化した血球計算装置及び手法に関し、生物学的流体の細胞成分の確認及び計数に関するものである。
【0002】
【背景技術】
生物学的流体の種々の成分の迅速な確認及び計数が重要な研究及び診断の目的である。試料の最小限の処置及び取り扱いが、斯かる技術の広範な用途に貢献するであろう。
人間の血液の白血球サブクラスの計数の場合には、改良された技術の要求が特に強い。例えば、HIV 陽性状態からエイズへの進行の注視におけるCD4 +リンパ球レベルを監視することの有用性は、患者の血液試料を分析するための速やかで、低廉で、信頼性のある方法の必要性を強めてきた。
AIDS 4、479 〜497 頁(1990 年) のLanday等の「流動血球計算のHIV 感染の研究への応用(Application of flow cytometry to the study of HIV infection) 」は、HIV 感染の生物学の理解における技術の実用を記載している。種々のモノクローナル抗体を用いて血液試料の表現分析を行なうことによって、複数色流動血球計算分析を、HIV 疾患の研究に応用することができる。この技術は、器官移植又は白血病の患者の状態評価におけるように、他の免疫系の測定にも有用である。
【0003】
流動血球計算は、細胞を、蛍光放射に基づいて特徴付けて分離することのできる周知の技術である。標識した単分散(mono-dispersed)細胞懸濁液が、細い流体の流れになって管を通って進行し、励起ビームに露呈される。各細胞の放射された蛍光は、適当な検知器によって測定され、細胞は、小滴に分けられ、電気的及び機械的手段によって所定のパラメータにしたがって種別される。
流動血球計算は、血液細胞の特定のサブクラスを確認し、計数するのに用いることができる。例えば、Hansen等の米国特許第4,284,412 号では、蛍光標識したノモクローナル抗体と反応させたリンパ球が赤血球から分離され、一つ一つ流動血球計算システムの固定した検知器にかけられる。各細胞は、前方光散乱、直角散乱(right angle scatter) 、及び蛍光の分析によって特徴付けされる。この方法は、複雑な試料調製及び計測を必要とする。流動血球計算は、この用途におけるアッセイの信頼性及び再現性を向上させたが、一般には、リンパ球サブセットの絶対細胞数を直接もたらすことができない。独立白血球数(independent white blood counts)及び差分白血球数(differential white counts) が、単位容積あたりの絶対細胞数を計算するのに必要である。通常の流動血球計算の実践においては、リンパ球を、単球及び顆粒球と識別するためには、前方及び側方光散乱パターンに基づくリンパ球ゲートを、各試料毎に得なければならない。
【0004】
Recktenwald の米国特許第4,727,020 号は、反対の例を提供しているが、流動血球計算は、赤血球の存在下でのリンパ球サブクラスの確認及び計数には、通常は用いられない。赤血球の除去は、密度勾配分離又は溶解によると、アッセイあたりの時間、費用及び血液処理工程がふえる。追加の血液処理工程は、血液媒介の感染に晒す可能性を増すものである。先に述べたように、流動血球計算法によって得られたデータは、或る目的には不十分である。単位容積あたりの絶対細胞数を計算するためには、流動血球計算データを、他の方法から得られた追加のデータと組み合わせなければならないのが一般的である。更に、流動血球計算は、小さなノズルを通過する流体の流れを従来利用するため、研究所の職員に生物学的有害物質の追加の源をもたらすエーロゾルを発生させることがある。
他には、試料の位置を励起ビームに対して固定することがある。例えば、Tomei 等の米国特許第4,758,727 号及びその分割の米国特許第4,877,966 号には、低レベルレーザー誘発蛍光の測定方法及び装置が記載されている。この発明では、コヒーレントレーザービームが三次元スキャナーを通過し、静止した標的に合焦される。標的は、単層培養細胞又は組織片等の対象物である。1 ミクロンといった小さなサイズを有するビームスポットが、経路及び運動速度がコンピュータ制御されたスキャナーによって標的を越えて行き来する。蛍光が、バイアスカットした光ファイバーベースプレートによって集められ、ビームからは標的の反対側に位置する検知器に中継される。
【0005】
やはりTomei 等に許与された米国特許第5,037,207 号が、支援コンピュータシステムのデータ検索及び記憶限界によっては、いろいろなサイズの標的のデジタル結像を可能にする高められた空間解像度及び集光効率を有するレーザー結像システムを開示している。このシステムは、各レーザースポットから全ての光を集めて標的の表面に関する画像の定量的デジタル再生をなすため、新規な光ファイバー検知器アセンブリ及び迅速な走査を利用している。
Kamentsky の米国特許第5,072,382 号及びKamentsky 等の米国特許第5,107,422 号が、ビームを用いて細胞個体数を走査し、各細胞の特定の位置に基づいて複数パラメータ光学データを作成するための装置及び方法を開示している。この走査は、細胞を付着させた面についてなされる。バックグラウンドレベルが、デジタルデータに基づいて各細胞を取り囲む近隣域に関して推定され、バックグラウンドレベルに関して補正がなされる。
Cytometry 9 、101 〜110 ページ(1988 年) のBurger及びGershmanの「音響光学的レーザー走査血球計算器(Acousto-Optic Laser-Scanning Cytometer)」及びGershman等の米国特許第4,665,553 号には、レーザー走査血球計算器が開示されている。光学的走査が、ブラッグ細胞制御スキャナー(Bragg cell-controlled scanner) によって、キュベット内の溶解及び洗浄を行なった試料に対して行なわれる。キュベットは、スキャナーに対して一方向に段階的態様で移送される。スキャナーは、キュベット移送の方向と垂直の方向に作用し、走査は、キュベットの側部に沿って行なわれる。細胞が配置されると、ビーム最適化アルゴリズムが働いてビームを細胞に固定し、前方光散乱、垂直光散乱、及び蛍光の測定が行なわれる。次いで、この過程が繰り返される。
【0006】
Buican等の米国特許第5,117,466 号には、流動血球計算器からのデータが、試料の細胞成分を実質上種分けするため共焦レーザー顕微鏡によって用いられる確認基準を確立する蛍光分析システムが記載されている。複屈折光学及びフーリエ変換技術が、所望のスペクトル特性を有する細胞又は亜細胞(subcellular) 構造体を視覚的に選択及び表示するのに用いられている。
Analytical Biochemistry 102 、90〜96頁(1980 年) の「ピコリットル試料の蛍光分析(Fluorescence Analysis of Picoliter Samples)」で、Mroz及びLechene は、蛍光データを集めるためのピコリットル容積の試料の処理方法を教示している。試料が、シリンジによって、単一のシリコン処理した細管内に試料の間に油がある状態に採取される。ピンホールダイヤフラム、顕微鏡の対物レンズ、及び細管の直径によって画定される光学的蛍光チャンバーに対して測定がなされる。
Mathies 等に許与された米国特許も本発明の分野に関連するものである。米国特許第4,979,824 号には、高感度検知装置が記載されている。この装置は、流動血球計算システムに基づいており、空間フィルターを利用して個々の蛍光性の粒子及び分子の検知を可能にする小さなプローブ容積を規定している。最も良い信号対ノイズ比が得られるよう、レーザー出力及び試料の曝露時間が選択される。蛍光粒子からの光子バースト(photon bursts) のリアルタイムの検知が、粒子の数、位置又は濃度をバックグラウンドエネルギーから識別するのに用いられている。
【0007】
Mathies 等の米国特許第5,091,652 号には、共焦顕微鏡を用いて分離した試料を走査するためのレーザー励起蛍光スキャナーが開示されている。この試料は、電気泳動したどろどろの(slab)ゲルによって分離され、斯かるゲルから検知されるのが好ましいが、膜、ろ紙、ペトリ皿又はガラス基板に載っていてもよい。共焦顕微鏡は、ゲルに照明容積を形成し、ビームは、バックグラウンド散乱が散乱光の偏光特性によって最小限になるように方向付けされる。
やはりMathies 等に許与され、上記特許の一部継続である米国特許第5,274,240 号が、レーザー励起細管列スキャナーを教示している。この発明は、細管電気泳動によって分離した試料を収容する細管の列からの蛍光の検知を主として意図するものである。この蛍光検知アセンブリは、各細管の内部容積からの蛍光を検知するのに共焦システムを用いている。
現在の血球計算技術は、時間がかかり、潜在的に有害な試料の処理及び成分の分離工程を要するのが一般的である。斯かる技術は、混合個体群中に存在する細胞懸濁液の下位(sub) 個体群の迅速な容量測定による確認及び計数をすることができない。この先行技術のテクニックは、訓練した職員を必要とすることがしばしばである。
【0008】
したがって、本発明の目的は、生物学的流体における特定の細胞サブセットの数を、容量測定の態様で直接得るための、少ない容量の試料及び試薬しか要しない迅速で、使用が簡単で、費用がより少なく、より安全で、自動化された装置及び方法を提供することである。
【0009】
【発明の概要】
上記の目的は、生物学的流体の細胞成分を、蛍光性複合体の形成と、静止した最小限の処理をした状態の試料を容れた細管の光学的走査とに基づいて、容量測定の態様で確認し、計数するための装置及び方法を用いて達成された。非流動細胞懸濁液全体から蛍光が検知され、絶対細胞数を得る目的で、正確な容積において計数を行なうことができる。本明細書で定義される「絶対」とは、走査した容積によって表わされる容積あたりの細胞の絶対数を意味する。本明細書で定義する「細胞」とは、細胞全体又は細胞の一部を意味する。複合体は、蛍光標識した結合剤と流体の細胞成分に存在する対応する結合部位との反応の結果である。励起レーザービームが、光学スキャナーによって細管のカラム状領域に送られる。カラム状領域は、通常、細管の内側深さ寸法とレーザーのビームスポットとによって画定される。カラム状領域全体から放射された蛍光を選択的に検知するため、十分なピンホール孔部が選択され、細管と検知手段との間に配置されている。試料における結合した蛍光標識した結合剤と未結合の蛍光標識した結合剤との分離が必要でないため、どちらも蛍光として検知手段によって観察される。しかしながら、標識した結合剤が集合する、即ち試料の細胞成分に存在する結合部位に集合する、蛍光強度が高くなった領域が現れる。したがって、検知手段は、単一の細胞に対応するバックグラウンド蛍光の所定の閾値を越える高くなった蛍光強度の信号を記録する。
【0010】
好ましい実施態様では、レーザーは、600 〜1000nmの波長の励起ビームを発生させ、励起ビームは、長方形断面の細管の真上の位置から細管に合焦される。レーザービームが細管と交差する箇所におけるレーザービームのスポットサイズは、予期される細胞の大きさによるが、直径が5 〜15ミクロンであり、細管の照される深さ寸法は、25〜225 ミクロンである。以下に説明するように、スポットサイズと細管の深さ寸法との間には関係がある。本発明では、励起ビームを、二方向に走査させ、固定位置にある透明な細管の外壁に当てる。第一の走査方向は、細管の長手方向軸に対して横断方向の経路、即ち、細管の長方形断面の巾部分を辿り、細管の側方の境界を越える点に始まって終る。第二の走査方向は、細管の長手方向軸に沿う経路を辿る。細管の断面積が既知なので、第二の走査方向における始点及び終点を測定することによって、又は規定した位置で走査を開始し、終了することによって、達成される既知容積の走査を、単位容積あたりの細胞成分の特定の下位個体群の存在を計算するのに用いることができる。本発明の装置は、血球のサブクラスの検知の特に好適である。典型的なアッセイでは、凝固していない全血を取得し、血球サブクラスに存在する種々の細胞表面マーカーに向けられる過剰量の蛍光標識した抗体を用いて反応させる。発蛍光団は、それらが、励起ビームの波長の範囲で活性であるように選択される。この波長範囲も、意図しない血液成分からの自発蛍光(autofluorescence)に起因する干渉を最小限にするよう選択される。複合及び遊離の両形態の蛍光標識した抗体を含む試料は、通常、希釈した後、細管内に仕込む。次いで、細管を、発蛍光団を励起するのに必要な波長で光学的に走査する。特定の抗体を標識するのに用いた特定の発蛍光団からの蛍光放射に基づき、血液又は他の生物学的流体試料に存在する細胞種の比を速やかに決定することができるように、或る種類の細胞の単位容積あたりの数を、速やかに決定することができる。
【0011】
本発明の機器及び技術は、正確な容積の生物学的流体の細胞成分を速やかに検知し、試料の最小限の処理しか必要でない。本発明は、アッセイ時間及び費用を削減し、試料の処理、特に重要なのは血液試料の検査中の予防措置、が最小限でよい。試料を処理するのに特別の機器が必要ではなく、必要な試薬の数が最小限に保たれるので、臨床の状況に用いるのに非常に適している。
【0012】
【実施例】
図1を参照すると、レーザー10が、パワーモニター11と光学的に連絡しているガラスプレート12を先ず通過し、次いで、レーザーラインフィルター13及び選択したレーザービーム波長に対して鏡として作用するスペクトル分散手段14を通過する励起ビーム80を発生させる。スペクトル分散装置は、例えば、二色ビームスプリッター、プリズム、又は格子でよい。励起ビームは、次いで、鏡15に送られ、直角プリズム16を通り、走査アセンブリ34に送られる。図1では、走査アセンブリ34は、ガルボミラー18、レンズ26及び27、並びにレンズ19が取り付けられた検流計17を備えている。その他、走査アセンブリは、多面を有する多面体鏡でもよい。本発明の励起ビーム80は、ガルボミラー18に当り、ガルボミラー18は、検流計17と連絡しているため、絶えず位置を変化させ、それにより、励起ビームの位置の変化を生じさせる。走査アセンブリ34内で、励起ビームは、ガルボミラー18から、レンズ27を通り、次いでレンズ26を通って進行する。レンズ26から、励起ビームは、ビームの焦点が、透明な細管20の外壁に当ることができるよう、レンズ19を通して送られる。
【0013】
外壁に当る励起ビームは、外壁を横切って試料のカラム状領域を照らし、試料から蛍光放射を生じさせる。集光が、エピイルミネーション(epi-illumination)の態様で生じる。放射された蛍光は、レンズ19によって集められ、光線83として、走査アセンブリ34を通って送り戻される。レンズ19は、図2で分るように、入射ビーム80を通過させ、細管20を通る入射ビーム80の一様な焦点深度を得るするための中央部を有している。蛍光放射は、光線32a及び32bによって表わすような非常に広い角度にわたっているため、蛍光の集光が、対物レンズ19のより広い部分にわたって行なわれる。図1に戻ると、光線83は、走査アセンブリ34から直角プリズム16へと進行し、鏡15及びスペクトル分散装置14へと進行する。光線83は、その蛍光放射の波長のため、スペクトル分散装置14を通り、帯域通過フィルター21を通って鏡22へと伝播され、鏡22で、光線83は、視準レンズ23へと送られてこれを通過する。光線83は、次いで、空間フィルター24を選択的に通過し、検知手段35に進入する。空間フィルター24は、細管内の照らされたセグメントによって規定される領域からの蛍光放射のみを通過させる直径の所定のピンホール孔部を有している。
【0014】
検知手段35は、光線83の蛍光信号を読み取る検知要素30のような検知チャンネルを備えており、蛍光信号をアナログからデジタル形式に変換するデータリーダー50と連絡している。検知要素は、光電子増倍管又は光ダイオード等の光測定装置である。信号は、データリーダー50によって、蛍光強度の単位として記録される。検知手段35は、如何なる数の検知チャンネルを含んでいてもよい。例えば、図1において、スペクトル分散装置25が、空間フィルター24と検知要素30及び31との間に配置され、試料の蛍光放射の波長を分け、一方の波長の光を一方の検知要素へ、第二の波長の光を第二の検知要素へと選択的に送る。このようにして、複数の発蛍光団からのいろいろな波長において蛍光を検知するため、複数のスペクトル分散装置及び複数の検知要素を検知手段に組み込むことができる。同様にして、いろいろな波長で試料を励起するため、複数のレーザーを利用することができる。本発明の重要な特徴が、図2に示されている。大きな開口数にわたっって集光するが、検知の深さを細管の内部の深さ寸法に限定するピンホール孔部を有する空間フィルター24が選択される。励起レーザービーム80の細管20の外壁へのスポットサイズは、ほぼ一定の直径のものであり、細管の深さ寸法に沿って一様な照明を提供するよう選択されている。そのため、本発明は、励起ビームのスポットサイズ、細管の深さ寸法、及び空間フィルターのピンホール孔部の従属関係に依存するものである。
【0015】
細管20は、既知寸法の透明な試料ホルダーである。細管は、25〜225 μm の内部深さを規定する短い方の寸法と1mm の巾を規定する長い方の寸法とを有する長方形の断面を有しているのが好ましい。細管の長さは、決定的なものではなく、細管の長さに沿う方向における走査の始点及び終点が、走査するセグメントの正確な体積を規定する。本発明では、40mmの細管長さを一般的に用いている。細管は、細管の走査がトップダウン方式(top-down manner) で行なわれるよう、励起ビームの真下に固定して配置される。励起ビームと細管との交差部は、図2及び図3に示すように、カラム状領域51によって全体が画定される。カラム状領域の上部寸法は、5 〜15μm の円状ビームスポット33である。ビームスポットのサイズは、細管の深さ寸法全体が照らされるように選択される。
細管のカラム状領域が照らされ、その内容物から放射された蛍光が検知及び記録された後、光学走査手段は、新しいカラム状領域を照すため、新しい位置へと移動される。移動は、ビームスポットのサイズの一部分にすぎない量のものであるため、各々の照明されるカラム状領域51は、図3におけるような他の領域44と部分的に重複する。光学走査手段は、蛍光放射が検知及び記録される領域をこの態様で照明及び蛍光性励起を継続し、次いで若干移動されて新しい領域を照明し、この過程を繰り返す。好ましい実施態様では、光学走査手段は、細管の長手方向軸を横断する方向である矢印52によって示される、即ち、細管の巾に沿う一方の方向、及び矢印53によって示される細管の長さに沿うもう一方の方向に走査経路を辿り、ビームスポットの二次元の配列を形成する。図1において、点線部134が、走査アセンブリ34の位置の変化を示しており、したがって、点線の検流計117及び点線のガルボミラー118が、変更位置にある検流計17及びガルボミラー18を表わしている。同様にして、点線126、127及び119が、変更位置にあるレンズ26、27及び19を表わしている。図3及び図4に示すように、横断方向の走査は、細管の側方の境界を越えて箇所54に始まって箇所54に終る。この余分目の走査(overscan)は、細管の縁の特異性を特定するのに効果的である。
【0016】
図5は、本発明の好ましい実施態様による走査経路48の細管20上方からの模式図を示している。励起ビームのスポットは、横断方向の走査経路に沿って移動され、次いで、迅速に戻り、やはり横断方向の近接して間隔をおいて位置する平行な経路を辿る。この過程は、走査が、細管の長手方向軸に沿うセグメントも網羅するような頻繁さで反復される。このようにして、蛍光放射が生じ、任意の選択した長さの細管から検知される。本発明において開示された方法は、生物学的流体の試料の分析を、最小限度の準備で可能にするものである。本発明によれば、生物学的流体を、既知の光学特性の発蛍光団を含む過剰量の結合剤と反応させる。蛍光標識された結合剤は、試料に存在する結合部位と反応するように選択される。例えば、生物学的流体の何等かの細胞成分に存在する抗原に向けられた蛍光標識された抗体を、試料に加えることができる。標識された結合剤と結合部位とは、本発明の装置に用いると信号を発する蛍光性複合体を形成する。試料を標識した結合剤と反応させた後、必要であれば希釈し、次いで、細管20内に直接仕込む。生物学的流体の成分の溶解も、結合した結合剤と未結合の結合体の分離も、本発明方法の実施の如何なる時点においても必要がない。光学的走査が、容量測定の態様で試料になされ、照された各カラム状領域から、蛍光放射が順に記録される。
【0017】
所望の用途によっては、細管の長手方向の走査の始点及び終点をノッチでしるし、走査した距離を測定することにより、又は、細管に付した特定の識別マークの間を走査することにより、絶対容積の計数を行なってもよい。この決定した正確な容積における全ての蛍光性の標的の定量は、詳細な個体群(population)データを迅速に得る有力な方法である。この容積は、一定の断面積の細管を用いることにより、又は特定の識別マーク間の細管の容積を独立に測定することにより、決定される。その他、正確な容積の算出は行なわないが、試料の異なる成分の相対数を比較することにより、比率を得ることができる。
図1のデータリーダー50が、図6に示すように、事象、即ち、或る閾値を越える蛍光のバックグラウンドレベルより上への増加を記録する。この事象は、試料中に特定の種類の細胞が存在することに対応する。蛍光の放射は、結合剤−結合部位複合体45からも遊離の結合剤40からも生じるが、バックグラウンドレベル80に対するより強い信号85が、結合剤がクラスターになった領域、即ち、結合剤が向けられる結合部位を露呈している細胞から生じる。したがって、強くなった蛍光85の信号が、図6に点線でつながりを示す細胞に対応し、そのように記録される。
【0018】
本発明の方法は、未反応の蛍光標識した結合剤の除去を必要としない。光学的走査に先立つ試料の希釈が、信号対ノイズ比を向上させる役割をするので、本発明による蛍光の結像が、最小限の処理工程で迅速な態様で行なわれる。希釈は、試料中で細胞の重複が生じることを最小限度にする役割もする。本発明の実施においては、試料の細胞が10ミクロン程度の大きさで、細胞の密度がマイクロリッターあたり5000未満である時に、最適の結果が得られる。本方法の有用性の例が、血液試料中に存在する白血球のサブクラスの決定のためのアッセイによって例示される。典型的なアッセイでは、凝固していない全血の試料を、特定の細胞表面マーカーに向けられる蛍光標識された抗体と反応させる。例えば、異なる光学特性を有する発蛍光団で標識された抗CD4 及び抗CD8 を、全血と反応させることができる。試料内で、CD4 又はCD8 の何れか、或いは両方の細胞表面マーカーを帯びた白血球は、標識した抗体と反応して蛍光性複合体を形成する。十分な反応時間の後、全血試料を希釈し、細管に入れる。次いで、本発明に従って細管を光学的に走査する。使用する発蛍光団を活性化し、意図しない血液成分からの自発蛍光(autofluorescence)に起因する干渉を最小限にするよう、光学的走査の波長範囲を選択する。抗CD4 及び抗CD8 を標識するのに用いた発蛍光団に対応する蛍光放射が検知され、記録される。次いで、これらの抗体を向ける細胞表面マーカーの何れか又は両方を帯びた白血球の存在を計数する。走査の長さ及び細管の断面積によって決定される所定の容積内に存在する或るサブクラスの細胞の数を計算することによって、結果を、単位容積当りの絶対細胞数として表わすことができる。結果を、比、例えばCD4/CD8 白血球比として表わすことも、これらの細胞表面マーカー各々を帯びた細胞の数を計算して両方を比較することにより、可能である。この最も後の例示の有用性は、この比がエイズの進行の測定において重要なため、非常に明らかである。
【0019】
凝固していない全血における白血球サブクラスの測定を行なうため、本発明の技術を用いてアッセイを行なう場合、反応した試料の細管内への仕込みと光学的走査との間の二、三分間の待機が、試料中に存在する多数の赤血球の自然密度ための余裕を与え、赤血球の細管の底への沈殿と後続する白血球の変位を生じさせる。この自然の浮力効果が、細管の上部付近の白血球の帰結位置を生じさせ、本発明のトップダウン走査形態のため、蛍光検知に役立つ。
上記の例におけるように、異なる光学特性を有する発蛍光団を、異なる結合部位に向けられる結合剤と結合させることができるため、試料中の複数の反応成分の存在を検知することができる。走査した細管の正確に分っている容積から、迅速な読み取りが、試料中に存在する単位容積あたりの特定のサブクラスの細胞の数を確認する。光学系は、単に、各発蛍光団を、その重要な波長で励起するように設定され、各発蛍光団の放射波長に対応するよう検知チャンネルが形成される。
本発明の装置及び方法は、既知容量内の絶対数を必要とする用途を含む多くの用途に適している。例えば、細胞運動学の研究、介在染料(intercalating dye) を用いる細胞毒性の研究、及び原位置ハイブリッド形成を、本発明に従う分析に適合させることができる。加えて、本発明の容量測定法は、細胞懸濁液中でなく表面に位置する細胞における免疫的及び生化学的応答を研究する場合に存在することのある人為要素の回避を可能にするものである。細胞は、細管内から検知されるが、本発明は、比較的静止した局在細胞に対する流動細胞光度測定的な分析を可能にする態様で試料を呈示するものである。したがって、細胞を、位置特異的な態様で検知すること又は後続の目視試験のために確認することができる。
【図面の簡単な説明】
【図1】本発明に係る装置の平面図である。
【図2】本発明の試料を充填した細管の側面図であり、カラム状領域、並びに励起ビーム及び放射ビームの両方を示す図である。
【図3】本発明による重複するビームスポット及び照されたカラム状領域を示す試料を充填した細管の斜視図である。
【図4】本発明による重複するビームスポットを示す試料を充填した細管の平面図である。
【図5】本発明の好ましい実施態様による光学的走査経路の模式図である。
【図6】標識した細胞懸濁液及び対応する検知器の信号の模式図である。
【符号の説明】
19…レンズ
20…細管
24…空間フィルター
35…検知要素
80…励起ビーム
83…レトロビーム

Claims (47)

  1. 蛍光による生物学的流体の細胞成分の確認及び計数方法であって、
    細胞成分を有する生物学的流体の試料を取得するステップと、
    蛍光性複合体を生成するため、試料を、細胞成分に存在する結合部位に向けられる過剰量の蛍光標識した結合剤と反応させるステップと、
    試料を、特定した寸法および長手方向軸を有する細管内に仕込むステップと、
    蛍光性複合体を励起するよう選択された波長を有する光の入射ビームであって、複数のカラム状領域を照すため、特定した直径の複数のビームスポットとして細管と逐次交差する入射ビームを用いて、試料を光学的に走査するステップと、
    各カラム状領域の内部深さ寸法に限られた放射された蛍光を逐次検知するステップと、
    高くなった蛍光強度の各カラム状領域から、放射された蛍光を記録するステップと、
    放射された蛍光から試料の細胞成分の計数をするステップとを含んでいることを特徴とする方法。
  2. 前記試料を蛍光標識した結合剤と反応させるステップの後に、かつ前記試料を細管に仕込むステップの前に、試料を希釈するステップを更に含んでいることを特徴とする請求項1記載の方法。
  3. 試料を光学的に走査するステップは、細管の真上に位置する入射ビームを、水平に配置された細管に交差させるステップを含んでいることを特徴とする請求項1記載の方法。
  4. 試料を光学的に走査するステップは、600〜1000nmの波長の入射ビームで走査するステップを含んでいることを特徴とする請求項1記載の方法。
  5. 試料を蛍光標識した結合剤と反応させるステップは、600〜1000nmの範囲の励起波長で活性化される発蛍光団で標識した結合剤を用いるステップを含んでいることを特徴とする請求項1記載の方法。
  6. 試料を光学的に走査するステップは、入射ビームと細管との交差点での直径が5〜15ミクロンの入射ビームで走査するステップを含んでいることを特徴とする請求項1記載の方法。
  7. 試料を細管に仕込むステップは、細管の深さを画定する断面の短い方の寸法と、細管の巾を画定する断面の長い方の寸法とを有する長方形断面の細管に、試料を仕込むステップを含んでいることを特徴とする請求項1記載の方法。
  8. 試料を細管に仕込むステップは、25〜225ミクロンの深さ寸法を有する細管に、試料を仕込むステップを含んでいることを特徴とする請求項1記載の方法。
  9. 試料を光学的に走査するステップは、細管の長手方向軸に対して横断方向の第一の方向及び細管の長手方向軸に沿う第二の方向に経路を縦走するステップを含んでいることを特徴とする請求項1記載の方法。
  10. 試料を、細管の長手方向軸に対して横断方向の第一の方向に光学的に走査するステップは、細管のそれぞれの外側の境界を越える点に始まり終る走査経路を縦走するステップを含んでいることを特徴とする請求項9記載の方法。
  11. 試料を光学的に走査するステップは、固定位置にある細管を走査するステップを含んでいることを特徴とする請求項1記載の方法。
  12. 細管の長手方向軸に沿う方向における走査の始点及び終点と細管の断面積とによって決定される細管の特定した容積当りの計数した成分の量を計算することによって、試料の細胞成分の濃度を決定するステップを更に含んでいることを特徴とする請求項1記載の方法。
  13. 試料の異なる細胞成分の比を、計数した各成分の量を計算して計数した各成分の相対量を比較することによって決定するステップを更に含んでいることを特徴とする請求項1記載の方法。
  14. 蛍光による全血における白血球サブクラスを確認及び計数するためのアッセイであって、
    凝固していない全血の試料を取得するステップと、
    蛍光性複合体を生成するため、試料を、試料中の白血球サブクラスの特定細胞表面マーカーに向けられる過剰量の蛍光標識した抗体と反応させるステップと、
    試料を、特定した寸法を有する細管内に直接仕込むステップと、
    蛍光性複合体を励起し、試料中に存在する赤血球からの干渉を最小限にするよう選択された波長を有する光の入射ビームであって、複数のカラム状領域を照すため、特定した直径の複数のビームスポットとして細管と逐次交差する入射ビームを用いて、試料を光学的に走査するステップと、
    各カラム状領域の内部深さ寸法に限られた放射された蛍光を逐次検知するステップと、
    高くなった発光強度の各カラム状領域から、放射された蛍光を記録するステップと、
    白血球のサブクラスを、放射された蛍光から試料中のサブクラスの存在を決定することによって、計数するステップとを含んでいることを特徴とする方法。
  15. 前記試料を蛍光標識した抗体と反応させるステップの後に、かつ前記試料を細管に仕込むステップの前に、試料を希釈するステップを更に含んでいることを特徴とする請求項14記載のアッセイ。
  16. 前記試料を蛍光標識した抗体と反応させるステップは、複数の蛍光標識した抗体を用いて反応させるステップを含んでおり、各抗体は、白血球サブクラスの異なった特定の細胞表面マーカーに向けられ、異なる光学特性を有する異なる発蛍光団で標識されていることを特徴とする請求項14記載のアッセイ。
  17. 細管内の非流動流体用の走査結像血球計算器であって、
    細胞と蛍光標識した結合剤との複合体を有する遊離の蛍光標識した結合剤を含む懸濁状態の非流動流体を収容し、外壁及び内壁を有する透明な細管と、
    前記細管の長手方向軸に対して横断方向に、流体のカラム状領域を照す第一の直径を有するビームスポットとなって、前記細管の外壁に当る光のビームであって、前記光のビームは、複合体及び遊離の結合剤からの蛍光放射を刺激する励起波長を有しているビームと、
    前記細管から間隔をおいて位置し、蛍光放射に反応する光検知要素と、
    照されたカラム状領域からの蛍光放射を集め、蛍光放射を光線として前記光検知要素に向けて送るように構成され、前記細管に近接して位置決めされる広角集光要素と、
    ピンホール孔部を有し、前記集光要素と前記検知要素との間に位置決めされる空間フィルターであって、ピンホール孔部は、光線を遮るように配置され、光線の一部だけを前記検知要素へと通す第二の直径を有し、前記細管の内部深さ寸法に検知の深さを限るために、ピンホール孔部の第二の直径は、ビームスポットの第一の直径よりもかなり大きい空間フィルターと、
    前記光のビームを前記細管に複数のビームスポットとして逐次当て、合計容積を測定することのできる複数のカラム状領域を細管内に照すための前記細管と前記光のビームとの相対運動を与える手段とを備えていることを特徴とする走査結像血球計算器。
  18. 蛍光標識した結合剤は、600〜1000nmの範囲の励起波長で活性化される発蛍光団を含んでいることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  19. 結合剤は、抗体であることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  20. 結合剤は、細胞表面マーカーに対して特異性であることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  21. 結合剤は、介在染料であることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  22. 結合剤は、核酸プローブであることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  23. 結合剤は、特定の受容体に反応することを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  24. 細管の外壁に当る光のビームは、広角集光要素の中央部を通過した後、細管の外壁に当り、細管の内部深さに合焦されていることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  25. 遊離の結合剤に関連するバックグラウンド蛍光と複合体に関連する蛍光とを識別するため、検知要素と連携する粒子計数手段を更に備えていることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  26. 運動を与えるための手段は、複数のスポットを互いに部分的に重複させることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  27. 運動を与えるための手段は、前記光のビームを細管の側方の縁を越えて走査させることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  28. 運動を与えるための手段は、前記光のビームをスポットの二次元配列に細管に逐次当て、合計容積を測定することのできるカラム状領域の二次元配列を照すことを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  29. 前記光検知要素は、前記空間フィルターと第1および第2の光電性部材との間に位置決めされたスペクトル分散装置を含み、スペクトル分散装置は、複数の蛍光放射の波長を分離し、分離された波長を第1および第2の光電性部材に向けるために構成されることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  30. 探査容積は、細管の既知の断面積と、細管に沿って走査した距離とによって決定されることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  31. 容積は、細管の既知の断面積と、距離を規定するため、特定の識別マークを細管に付すこととによって決定されることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  32. ビームは、細管内の或る位置に合焦されることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  33. 光のビームは、600〜1000nmの範囲の波長を有していることを特徴とする請求項17記載の走査結像血球計算器。
  34. 細管内の非流動流体用の走査結像血球計算器であって、
    細胞と蛍光標識した結合剤との複合体を有する非流動流体を収容し、外壁及び内壁を有する透明な細管と、
    前記細管の長手方向軸に対して横断方向に、流体のカラム状領域を照す第一の直径を有
    するビームスポットとなって、前記細管の外壁に当る光のビームであって、前記光のビームは、複合体からの蛍光放射を刺激する励起波長を有しているビームと、
    前記細管から間隔をおいて位置し、蛍光放射に反応する光検知要素と、
    照されたカラム状領域からの蛍光放射を集め、蛍光放射を光線として前記検知要素に向けて送るように構成され、前記細管に近接して位置決めされる広角集光要素と、
    ピンホール孔部を有し、前記集光要素と前記検知要素との間に位置決めされる空間フィルターであって、ピンホール孔部は、光線を遮るように配置され、光線の殆どを前記検知要素へと通す第二の直径を有し、前記細管の内部深さ寸法に検知の深さを限るために、ピンホール孔部の第二の直径は、ビームスポットの第一の直径よりもかなり大きい空間フィルターと、
    前記光のビームを前記細管に複数のビームスポットとして逐次当て、合計容積を測定することのできる複数のカラム状領域を細管内に照すための前記細管と前記光のビームとの相対運動を与える手段とを備えていることを特徴とする走査結像血球計算器。
  35. 細胞懸濁液の容量蛍光測定を行なうための装置であって、
    長方形断面の細管であって、前記細管の深さを画定する断面の短い方の寸法と、前記細管の巾を画定する断面の長い方の寸法とを有し、その中に細胞懸濁液を収容する細管と、
    細管の細胞懸濁液を励起するよう選択された波長の入射ビームを生成するための光学的走査手段であって、入射ビームは、複数のカラム状領域を照すため、特定した直径の複数のビームスポットとして細管と逐次交差する光学的走査手段と、
    蛍光放射を検知するための光電性部材を有する検知手段と、
    カラム状領域からの蛍光放射を集め、蛍光放射を前記検知手段へと向けるための集光手段と、
    カラム状領域全体から放射された蛍光の検知を可能にするための特定したピンホール孔部を有し、前記細管の内部深さ寸法に検知の深さを限るために、前記集光手段と前記検知手段との間に配置された空間フィルターと、
    蛍光放射信号の記録のため、前記検知手段と連絡しているデータリーダーとを備えていることを特徴とする装置。
  36. 細管は、水平に配置されており、光学的走査手段の入射ビームは、細管の真上の位置から細管と交差することを特徴とする請求項35記載の装置。
  37. 入射ビームの波長は、600〜1000nmであることを特徴とする請求項35記載の装置。
  38. ビームスポットの直径は、5〜15ミクロンの範囲であることを特徴とする請求項35記載の装置。
  39. 細管は、25〜225ミクロンの範囲の深さを有していることを特徴とする請求項35記載の装置。
  40. 光学的走査手段の入射ビームは、細管の巾に沿う第一の方向及び細管の長手方向軸に沿う第二の方向に経路を縦走することを特徴とする請求項35記載の装置。
  41. 光学的走査手段は、細管の巾に沿う方向の経路を進行し、経路は、細管の外側の境界を越える点に始まって終ることを特徴とする請求項35記載の装置。
  42. 検知手段は、少なくとも一つのスペクトル分散装置によって隔てられた複数の光電性部材を含み、それにより、複数の蛍光放射の波長を分離することを特徴とする請求項35記載の装置。
  43. 更にレンズを備えており、レンズの中央部は、入射ビームが細管と交差する前にビームを通過させるため光学的走査手段によって用いられ、レンズ全体は、細管からの蛍光放射を集めるため集光手段によって用いられることを特徴とする請求項35記載の装置。
  44. 血球のサブクラスの検知のための装置であって、
    既知の長方形断面積および既知の深さを有して既知の容量を規定し、深さは実質的に10ミクロンを超える透明な細管と、
    少なくとも600nmの励起波長を有し、前記細管の上表面に当って少なくとも5ミクロンの直径を有するビームスポットを与えるよう構成された光のビームを生成するための手段と、
    光のビームを前記細管に複数のビームスポットとして当て、既知の容量の複数のカラム状領域を細管内に照すための前記細管と光のビームとの相対運動を与える手段と、
    前記細管に近接して位置決めされ、前記光のビームを生成するための手段によって生じる蛍光放射を集めるように構成され、蛍光放射を光線として送るようにさらに構成される集光要素と、
    蛍光放射に反応し、前記細管から離れて位置決めされ、前記集光要素からの光線によって当てられるように位置決めされる光検知要素と、
    前記集光要素と前記検知要素との間に位置決めされる空間フィルターであって、光線を遮るように配置され、光線の一部のみを前記検知要素へと通し、検知された光を、単一のビームスポットによって照され各カラム状領域の内部深さ寸法に限られる単一のカラム状領域に制限するように構成された空間フィルターとを備えていることを特徴とする装置。
  45. 前記細管の深さは、25〜225ミクロンの範囲であることを特徴とする請求項44記載の装置。
  46. 前記生成するための手段からの光のビームの励起波長は、600〜1000nmであることを特徴とする請求項45記載の装置。
  47. ビームスポットの直径は、5〜15ミクロンの範囲であることを特徴とする請求項46記載の装置。
JP10718295A 1994-05-02 1995-05-01 容量測定細管血球計算のための装置及び方法 Expired - Lifetime JP3647504B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/236342 1994-05-02
US08/236,342 US5547849A (en) 1993-02-17 1994-05-02 Apparatus and method for volumetric capillary cytometry

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH07301628A JPH07301628A (ja) 1995-11-14
JP3647504B2 true JP3647504B2 (ja) 2005-05-11

Family

ID=22889109

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP10718295A Expired - Lifetime JP3647504B2 (ja) 1994-05-02 1995-05-01 容量測定細管血球計算のための装置及び方法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US5547849A (ja)
EP (1) EP0681178B1 (ja)
JP (1) JP3647504B2 (ja)
AT (1) ATE202847T1 (ja)
CA (1) CA2148205A1 (ja)
DE (1) DE69521558T2 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101055544B1 (ko) * 2006-03-28 2011-08-08 헤모큐에이비 형광 표지된 생물학적 성분을 탐지하는 방법 및 장치

Families Citing this family (192)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5585246A (en) * 1993-02-17 1996-12-17 Biometric Imaging, Inc. Method for preparing a sample in a scan capillary for immunofluorescent interrogation
AU702267B2 (en) * 1994-09-02 1999-02-18 Biometric Imaging, Inc. Calibration method and apparatus for optical scanner
US5784152A (en) * 1995-03-16 1998-07-21 Bio-Rad Laboratories Tunable excitation and/or tunable detection microplate reader
US6143247A (en) * 1996-12-20 2000-11-07 Gamera Bioscience Inc. Affinity binding-based system for detecting particulates in a fluid
AU6542196A (en) * 1995-06-30 1997-02-05 Biometric Imaging, Inc. Volumetric cell quantification method and system
CN1146354C (zh) * 1995-10-23 2004-04-21 斯托迈奇克公司 利用反射光谱成象分析血液的装置和方法
US6165739A (en) * 1996-03-13 2000-12-26 Compucyte Corporation Multiple simultaneous testing media
US5942443A (en) 1996-06-28 1999-08-24 Caliper Technologies Corporation High throughput screening assay systems in microscale fluidic devices
US20060000722A1 (en) * 1996-06-28 2006-01-05 Caliper Life Sciences, Inc. High throughput screening assay systems in microscale fluidic devices
CN1173776C (zh) 1996-06-28 2004-11-03 卡钳技术有限公司 在微规模流体性设备里的高通过量的筛选分析系统
JPH1058743A (ja) * 1996-08-22 1998-03-03 Fuji Xerox Co Ltd アレイ状光源を備えたスキャナー装置および画像記録装置
WO1998034094A1 (en) 1997-01-31 1998-08-06 The Horticulture & Food Research Institute Of New Zealand Ltd. Optical apparatus
US5985214A (en) 1997-05-16 1999-11-16 Aurora Biosciences Corporation Systems and methods for rapidly identifying useful chemicals in liquid samples
US5876946A (en) * 1997-06-03 1999-03-02 Pharmacopeia, Inc. High-throughput assay
US6149867A (en) 1997-12-31 2000-11-21 Xy, Inc. Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm
US6022734A (en) * 1998-03-07 2000-02-08 Wardlaw Partners, L.P. Disposable apparatus for determining antibiotic sensitivity of bacteria
US6127184A (en) 1998-03-07 2000-10-03 Robert A. Levine Calibration of a whole blood sample analyzer
US6350613B1 (en) 1998-03-07 2002-02-26 Belton Dickinson & Co. Determination of white blood cell differential and reticulocyte counts
US6929953B1 (en) 1998-03-07 2005-08-16 Robert A. Levine Apparatus for analyzing biologic fluids
US6235536B1 (en) * 1998-03-07 2001-05-22 Robert A. Levine Analysis of quiescent anticoagulated whole blood samples
US6723290B1 (en) 1998-03-07 2004-04-20 Levine Robert A Container for holding biologic fluid for analysis
US6140069A (en) * 1998-03-07 2000-10-31 Wardlaw Partners, Ll.P. Method for determining antibiotic sensitivity of bacteria
US6284526B1 (en) 1998-03-07 2001-09-04 Wardlaw Partners Lp Method and apparatus for determining the sensitivity of a microorganism to a growth altering agent
US5948686A (en) * 1998-03-07 1999-09-07 Robert A. Leuine Method for performing blood cell counts
US6004821A (en) * 1998-03-07 1999-12-21 Levine; Robert A. Method and apparatus for performing chemical, qualitative, quantitative, and semi-quantitative analyses of a urine sample
US6388788B1 (en) 1998-03-16 2002-05-14 Praelux, Inc. Method and apparatus for screening chemical compounds
US20030036855A1 (en) * 1998-03-16 2003-02-20 Praelux Incorporated, A Corporation Of New Jersey Method and apparatus for screening chemical compounds
US7498164B2 (en) 1998-05-16 2009-03-03 Applied Biosystems, Llc Instrument for monitoring nucleic acid sequence amplification reaction
EP3093649B1 (en) * 1998-05-16 2019-05-08 Life Technologies Corporation A combination of a reaction apparatus and an optical instrument monitoring dna polymerase chain reactions
US6818437B1 (en) * 1998-05-16 2004-11-16 Applera Corporation Instrument for monitoring polymerase chain reaction of DNA
NZ510096A (en) 1998-08-21 2003-02-28 Surromed Inc Confocal scanning system having spot excitation scanner and light detectors
US6200766B1 (en) 1998-12-03 2001-03-13 Becton Dickinson And Company Methods and reagents for quantitation of HLA-DR expression on peripheral blood cells
US6423505B1 (en) 1998-12-03 2002-07-23 Becton Dickinson And Company Methods and reagents for quantitation of HLA-DR and CD11b expression on peripheral blood cells
US6130745A (en) 1999-01-07 2000-10-10 Biometric Imaging, Inc. Optical autofocus for use with microtiter plates
US6473171B1 (en) 1999-01-15 2002-10-29 Coors Brewing Company Biocompatible apparatus for ultrasensitive and rapid detection of contaminants in liquids
US8885913B2 (en) 1999-01-25 2014-11-11 Amnis Corporation Detection of circulating tumor cells using imaging flow cytometry
US8406498B2 (en) 1999-01-25 2013-03-26 Amnis Corporation Blood and cell analysis using an imaging flow cytometer
US8131053B2 (en) 1999-01-25 2012-03-06 Amnis Corporation Detection of circulating tumor cells using imaging flow cytometry
US20060257884A1 (en) * 2004-05-20 2006-11-16 Amnis Corporation Methods for preparing and analyzing cells having chromosomal abnormalities
US6937330B2 (en) 1999-04-23 2005-08-30 Ppd Biomarker Discovery Sciences, Llc Disposable optical cuvette cartridge with low fluorescence material
US6682940B2 (en) * 1999-05-04 2004-01-27 Dan A. Pankowsky Products and methods for single parameter and multiparameter phenotyping of cells
US7423750B2 (en) * 2001-11-29 2008-09-09 Applera Corporation Configurations, systems, and methods for optical scanning with at least one first relative angular motion and at least one second angular motion or at least one linear motion
US7387891B2 (en) * 1999-05-17 2008-06-17 Applera Corporation Optical instrument including excitation source
US7410793B2 (en) * 1999-05-17 2008-08-12 Applera Corporation Optical instrument including excitation source
US20050279949A1 (en) * 1999-05-17 2005-12-22 Applera Corporation Temperature control for light-emitting diode stabilization
WO2000071991A1 (en) * 1999-05-25 2000-11-30 Biometric Imaging, Inc. Apparatus and method for optical detection in a limited depth of field
AU6068300A (en) * 1999-07-06 2001-01-22 Caliper Technologies Corporation Microfluidic systems and methods for determining modulator kinetics
US6687395B1 (en) 1999-07-21 2004-02-03 Surromed, Inc. System for microvolume laser scanning cytometry
GB9917240D0 (en) * 1999-07-23 1999-09-22 Eauxsys Uk Limited Method and means for particle measurement
US6181413B1 (en) * 1999-09-03 2001-01-30 Biometric Imaging, Inc. Displacing volume in field of view
US7045049B1 (en) * 1999-10-01 2006-05-16 Nanoplex Technologies, Inc. Method of manufacture of colloidal rod particles as nanobar codes
US20040178076A1 (en) * 1999-10-01 2004-09-16 Stonas Walter J. Method of manufacture of colloidal rod particles as nanobarcodes
US20040209376A1 (en) * 1999-10-01 2004-10-21 Surromed, Inc. Assemblies of differentiable segmented particles
US7208265B1 (en) 1999-11-24 2007-04-24 Xy, Inc. Method of cryopreserving selected sperm cells
US20020028434A1 (en) * 2000-09-06 2002-03-07 Guava Technologies, Inc. Particle or cell analyzer and method
US6674058B1 (en) 2000-09-20 2004-01-06 Compucyte Corporation Apparatus and method for focusing a laser scanning cytometer
AU2001292894A1 (en) 2000-09-20 2002-04-02 Surromed, Inc. Method for monitoring resting and activated platelets in unfixed blood samples
AU2002213157A1 (en) 2000-10-12 2002-04-22 Amnis Corporation System and method for high numeric aperture imaging systems
US6787761B2 (en) * 2000-11-27 2004-09-07 Surromed, Inc. Median filter for liquid chromatography-mass spectrometry data
US20020095260A1 (en) * 2000-11-28 2002-07-18 Surromed, Inc. Methods for efficiently mining broad data sets for biological markers
AU2002237689B2 (en) 2000-11-29 2008-01-10 Xy, Llc. System to separate frozen-thawed spermatozoa into X-chromosome bearing and Y-chromosome bearing populations
US7713687B2 (en) 2000-11-29 2010-05-11 Xy, Inc. System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations
WO2002080647A2 (en) * 2001-04-03 2002-10-17 Surromed, Inc. Methods and reagents for multiplexed analyte capture, surface array self-assembly, and analysis of complex biological samples
US6544793B2 (en) * 2001-04-27 2003-04-08 Becton, Dickinson And Company Method for calibrating a sample analyzer
US6979530B2 (en) * 2001-05-21 2005-12-27 Applera Corporation Peptide conjugates and fluorescence detection methods for intracellular caspase assay
US6468803B1 (en) * 2001-05-25 2002-10-22 Becton, Dickinson And Company Method for calibrating a sample analyzer
US20030110840A1 (en) * 2001-07-24 2003-06-19 Arriaga Edgar A. Systems and methods for detecting a particle
US7016087B2 (en) * 2001-08-08 2006-03-21 Becton Dickinson And Company Photon efficient scanner
US6873915B2 (en) * 2001-08-24 2005-03-29 Surromed, Inc. Peak selection in multidimensional data
US6750457B2 (en) * 2001-08-29 2004-06-15 Becton Dickinson And Company System for high throughput analysis
US20030078739A1 (en) * 2001-10-05 2003-04-24 Surromed, Inc. Feature list extraction from data sets such as spectra
US7635588B2 (en) * 2001-11-29 2009-12-22 Applied Biosystems, Llc Apparatus and method for differentiating multiple fluorescence signals by excitation wavelength
US7738945B2 (en) * 2002-04-19 2010-06-15 University Of Washington Method and apparatus for pseudo-projection formation for optical tomography
US6989100B2 (en) * 2002-05-09 2006-01-24 Ppd Biomarker Discovery Sciences, Llc Methods for time-alignment of liquid chromatography-mass spectrometry data
AU2003245302A1 (en) 2002-05-17 2003-12-02 Applera Corporation Apparatus and method for differentiating multiple fluorescence signals by excitation wavelength
EP2275533B9 (en) 2002-08-01 2016-10-19 Xy, Llc Method of assessing sperm cells
US8486618B2 (en) 2002-08-01 2013-07-16 Xy, Llc Heterogeneous inseminate system
WO2004017041A2 (en) 2002-08-15 2004-02-26 Xy, Inc. High resolution flow cytometer
US7923260B2 (en) 2002-08-20 2011-04-12 Illumina, Inc. Method of reading encoded particles
US7901630B2 (en) 2002-08-20 2011-03-08 Illumina, Inc. Diffraction grating-based encoded microparticle assay stick
US7508608B2 (en) 2004-11-17 2009-03-24 Illumina, Inc. Lithographically fabricated holographic optical identification element
US7900836B2 (en) 2002-08-20 2011-03-08 Illumina, Inc. Optical reader system for substrates having an optically readable code
US7619819B2 (en) 2002-08-20 2009-11-17 Illumina, Inc. Method and apparatus for drug product tracking using encoded optical identification elements
US7872804B2 (en) 2002-08-20 2011-01-18 Illumina, Inc. Encoded particle having a grating with variations in the refractive index
JP2005536769A (ja) 2002-08-20 2005-12-02 シヴェラ コーポレイション 回折格子をベースとする光学同定要素
US7164533B2 (en) 2003-01-22 2007-01-16 Cyvera Corporation Hybrid random bead/chip based microarray
JP4485949B2 (ja) * 2002-08-20 2010-06-23 シヴェラ コーポレイション マルチプレックス実験用の回折格子ベースのコード化マイクロパーティクル
AU2003270726A1 (en) 2002-09-12 2004-04-30 Cidra Corporation Diffraction grating-based encoded micro-particles for multiplexed experiments
AU2003274979A1 (en) 2002-09-12 2004-04-30 Cyvera Corporation Chemical synthesis using diffraction grating-based encoded optical elements
AU2003278827A1 (en) 2002-09-12 2004-04-30 Cyvera Corp. Method and apparatus for labelling using diffraction grating-based encoded optical identification elements
US7092160B2 (en) 2002-09-12 2006-08-15 Illumina, Inc. Method of manufacturing of diffraction grating-based optical identification element
US20100255603A9 (en) 2002-09-12 2010-10-07 Putnam Martin A Method and apparatus for aligning microbeads in order to interrogate the same
US7169548B2 (en) 2002-09-13 2007-01-30 Xy, Inc. Sperm cell processing and preservation systems
DK1558934T3 (da) * 2002-10-31 2013-10-07 Chemometec As Fremgangsmåde til vurdering af partikler
ES2561816T3 (es) 2003-03-28 2016-03-01 Inguran, Llc Aparatos, métodos y procesos para clasificar partículas y para proporcionar esperma animal clasificado por sexo
CA2566749C (en) 2003-05-15 2017-02-21 Xy, Inc. Efficient haploid cell sorting for flow cytometer systems
WO2004113869A2 (en) * 2003-06-17 2004-12-29 Surromed, Inc. Labeling and authentication of metal objects
DE10327839A1 (de) * 2003-06-20 2005-01-05 Arvinmeritor Gmbh Fahrzeugdachmodul
JP2007531496A (ja) * 2003-07-11 2007-11-08 サロメッド,インコーポレイテッド 病原体を検出するためのマルチプレックス分子ビーコンアッセイ
US6853454B1 (en) 2004-01-15 2005-02-08 Alpha Innotech Corporation Optical analysis systems
US6995901B2 (en) * 2004-01-15 2006-02-07 Alpha Innotech Corporation Optical analysis systems
US20050157299A1 (en) * 2004-01-15 2005-07-21 Heffelfinger David M. Optical analysis systems
US7433123B2 (en) 2004-02-19 2008-10-07 Illumina, Inc. Optical identification element having non-waveguide photosensitive substrate with diffraction grating therein
CA2596101A1 (en) * 2004-03-16 2005-09-29 Amnis Corporation Method for imaging and differential analysis of cells
US8953866B2 (en) 2004-03-16 2015-02-10 Amnis Corporation Method for imaging and differential analysis of cells
EP1800124B1 (en) * 2004-03-16 2011-12-21 Amnis Corporation Image based quantitation of molecular translocation
MXPA06011344A (es) 2004-03-29 2006-12-15 Monsanto Technology Llc Suspensiones de espermatozoides para separar en poblaciones enriquecidas con cromosomas x o y.
US7248360B2 (en) 2004-04-02 2007-07-24 Ppd Biomarker Discovery Sciences, Llc Polychronic laser scanning system and method of use
EP2977757B1 (en) * 2004-04-07 2017-09-13 Abbott Laboratories Disposable chamber for analyzing biologic fluids
US7369230B1 (en) * 2004-04-30 2008-05-06 Donald Scott Rogers Apparatus and method for measuring particulate flow rate
BRPI0513685A (pt) 2004-07-22 2008-05-13 Monsanto Technology Llc processo para enriquecimento de uma população de células de esperma
US7340957B2 (en) 2004-07-29 2008-03-11 Los Alamos National Security, Llc Ultrasonic analyte concentration and application in flow cytometry
US7572640B2 (en) * 2004-09-28 2009-08-11 Singulex, Inc. Method for highly sensitive detection of single protein molecules labeled with fluorescent moieties
WO2006036182A2 (en) * 2004-09-28 2006-04-06 Singulex, Inc. System and method for spectroscopic analysis of single particles
US9040305B2 (en) * 2004-09-28 2015-05-26 Singulex, Inc. Method of analysis for determining a specific protein in blood samples using fluorescence spectrometry
US8685711B2 (en) 2004-09-28 2014-04-01 Singulex, Inc. Methods and compositions for highly sensitive detection of molecules
WO2006055736A1 (en) 2004-11-16 2006-05-26 Illumina, Inc. And methods and apparatus for reading coded microbeads
GB0500687D0 (en) * 2005-01-14 2005-02-23 Unidata Europ Ltd Particulate detector
US7731901B2 (en) * 2005-10-19 2010-06-08 Abbott Laboratories Apparatus and method for performing counts within a biologic fluid sample
JP4730068B2 (ja) * 2005-11-28 2011-07-20 株式会社日立製作所 小型遺伝子解析装置
WO2007067999A2 (en) * 2005-12-09 2007-06-14 Amnis Corporation Extended depth of field imaging for high speed object analysis
JP2007206107A (ja) * 2006-01-31 2007-08-16 Olympus Corp 顕微鏡撮像装置、顕微鏡撮像方法、および情報記憶媒体
US7838250B1 (en) * 2006-04-04 2010-11-23 Singulex, Inc. Highly sensitive system and methods for analysis of troponin
EP3168618B1 (en) 2006-04-04 2018-11-21 Singulex, Inc. Highly sensitive methods for analysis of troponin
US7830575B2 (en) 2006-04-10 2010-11-09 Illumina, Inc. Optical scanner with improved scan time
US7835000B2 (en) 2006-11-03 2010-11-16 Los Alamos National Security, Llc System and method for measuring particles in a sample stream of a flow cytometer or the like
US7804594B2 (en) 2006-12-29 2010-09-28 Abbott Laboratories, Inc. Method and apparatus for rapidly counting and identifying biological particles in a flow stream
US7738094B2 (en) 2007-01-26 2010-06-15 Becton, Dickinson And Company Method, system, and compositions for cell counting and analysis
EP2664916B1 (en) * 2007-04-02 2017-02-08 Acoustic Cytometry Systems, Inc. Method for manipulating a fluid medium within a flow cell using acoustic focusing
US8083068B2 (en) 2007-04-09 2011-12-27 Los Alamos National Security, Llc Apparatus for separating particles utilizing engineered acoustic contrast capture particles
US7837040B2 (en) 2007-04-09 2010-11-23 Los Alamos National Security, Llc Acoustic concentration of particles in fluid flow
GB2451442B (en) * 2007-07-30 2013-03-06 Lein Applied Diagnostics Ltd Optical measurement apparatus and method therefor
JP4556975B2 (ja) * 2007-09-04 2010-10-06 ソニー株式会社 光照射方法、光照射装置及び微粒子解析装置
US8528406B2 (en) 2007-10-24 2013-09-10 Los Alamos National Security, LLP Method for non-contact particle manipulation and control of particle spacing along an axis
US8263407B2 (en) 2007-10-24 2012-09-11 Los Alamos National Security, Llc Method for non-contact particle manipulation and control of particle spacing along an axis
US8159670B2 (en) 2007-11-05 2012-04-17 Abbott Laboratories Method and apparatus for rapidly counting and identifying biological particles in a flow stream
US8266950B2 (en) 2007-12-19 2012-09-18 Los Alamos National Security, LLP Particle analysis in an acoustic cytometer
US7914734B2 (en) 2007-12-19 2011-03-29 Singulex, Inc. Scanning analyzer for single molecule detection and methods of use
US8714014B2 (en) * 2008-01-16 2014-05-06 Life Technologies Corporation System and method for acoustic focusing hardware and implementations
WO2009126380A2 (en) * 2008-03-05 2009-10-15 Singulex, Inc. Methods and compositions for highly sensitive detection of molecules
GB2464183A (en) * 2008-09-19 2010-04-14 Singulex Inc Sandwich assay
EP2404157B1 (en) * 2009-03-04 2021-02-24 Malvern Panalytical Limited Method for measuring particle size by dynamic or static light scattering measurement
CA2762612A1 (en) * 2009-06-08 2010-12-16 Singulex, Inc. Highly sensitive biomarker panels
US8451524B2 (en) * 2009-09-29 2013-05-28 Amnis Corporation Modifying the output of a laser to achieve a flat top in the laser's Gaussian beam intensity profile
JP5709894B2 (ja) 2009-12-18 2015-04-30 アボット ポイント オブ ケア インコーポレイテッド 生物学的液体分析カートリッジ
US9199233B2 (en) 2010-03-31 2015-12-01 Abbott Point Of Care, Inc. Biologic fluid analysis cartridge with deflecting top panel
US8817115B1 (en) 2010-05-05 2014-08-26 Amnis Corporation Spatial alignment of image data from a multichannel detector using a reference image
WO2011140484A1 (en) 2010-05-06 2011-11-10 Singulex, Inc Methods for diagnosing, staging, predicting risk for developing and identifying treatment responders for rheumatoid arthritis
US10114020B2 (en) 2010-10-11 2018-10-30 Mbio Diagnostics, Inc. System and device for analyzing a fluidic sample
WO2012059784A1 (en) 2010-11-03 2012-05-10 Reametrix Inc Method and device for fluorescent measurement of samples
WO2012059786A1 (en) 2010-11-03 2012-05-10 Reametrix Inc. Measurement system for fluorescent detection, and method therefor
US9873118B2 (en) 2010-12-30 2018-01-23 Abbott Point Of Care, Inc. Biologic fluid analysis cartridge with sample handling portion and analysis chamber portion
WO2012151112A1 (en) * 2011-05-05 2012-11-08 Emd Millipore Corporation Apparatus and method for increasing collection efficiency in capillary based flowcytometry
US10466160B2 (en) 2011-08-01 2019-11-05 Celsee Diagnostics, Inc. System and method for retrieving and analyzing particles
ES2797448T3 (es) 2011-08-01 2020-12-02 Bio Rad Laboratories Sistema de captura de células
US9404864B2 (en) 2013-03-13 2016-08-02 Denovo Sciences, Inc. System for imaging captured cells
JP6013335B2 (ja) 2011-08-11 2016-10-25 オリンパス株式会社 標的粒子の計数方法
TW201310018A (zh) * 2011-08-19 2013-03-01 Ind Tech Res Inst 光聲影像裝置
CN105817276B (zh) 2011-08-24 2018-02-06 艾博特健康公司 生物流体样品分析盒
JP6013339B2 (ja) * 2011-08-30 2016-10-25 オリンパス株式会社 膵液を含む生体試料中の標的粒子の検出方法
CN103765194B (zh) * 2011-08-30 2016-02-17 奥林巴斯株式会社 目标粒子的检测方法
BR112014010718B1 (pt) 2011-11-16 2020-12-22 Becton, Dickinson And Company métodos, sistemas, dispositivos e kits para detecção de analito em amostra
JP5940644B2 (ja) 2012-02-22 2016-06-29 オリンパス株式会社 標的粒子の検出方法
EP2829614A4 (en) 2012-03-21 2016-03-16 Olympus Corp METHOD FOR DETECTING A TARGET NUCLEIC ACID MOLECULE
US9709500B2 (en) 2012-05-02 2017-07-18 Charles River Laboratories, Inc. Optical method for detecting viable microorganisms in a cell sample
JP6285915B2 (ja) 2012-05-02 2018-02-28 チャールズ リバー ラボラトリーズ, インコーポレイテッド 生死判別染色法
EP2769204B1 (en) 2012-05-02 2016-02-17 Charles River Laboratories, Inc. Cell capture system and use thereof
EP2911791A4 (en) 2012-10-29 2016-11-02 Mbio Diagnostics Inc SYSTEM FOR IDENTIFYING BIOLOGICAL PARTICLES, CARTRIDGE AND ASSOCIATED METHODS
US9678065B2 (en) 2013-01-11 2017-06-13 Becton, Dickinson And Company Low-cost point-of-care assay device
US10391490B2 (en) 2013-05-31 2019-08-27 Celsee Diagnostics, Inc. System and method for isolating and analyzing cells
US9856535B2 (en) 2013-05-31 2018-01-02 Denovo Sciences, Inc. System for isolating cells
US9797899B2 (en) 2013-11-06 2017-10-24 Becton, Dickinson And Company Microfluidic devices, and methods of making and using the same
CN105899936B (zh) 2013-11-13 2019-12-24 贝克顿·迪金森公司 光学成像系统及使用其的方法
US20150160246A1 (en) 2013-12-11 2015-06-11 Analiza, Inc. Devices and methods for determining and/or isolating cells such as circulating cancer or fetal cells
US9709556B2 (en) 2013-12-11 2017-07-18 Analiza, Inc. Devices and methods for determining and/or isolating circulating cancer cells
AU2015334044B2 (en) 2014-10-14 2018-02-15 Becton, Dickinson And Company Blood sample management using open cell foam
BR122020024355B1 (pt) 2014-10-14 2023-03-14 Becton, Dickinson And Company Dispositivo de mistura e transferência de espécime adaptado para receber uma amostra
WO2016133760A1 (en) * 2015-02-18 2016-08-25 Becton, Dickinson And Company Optical detection systems and methods of using the same
AU2016229837B2 (en) 2015-03-10 2018-05-24 Becton, Dickinson And Company Biological fluid micro-sample management device
EP3782730B1 (en) 2015-09-01 2024-01-10 Becton, Dickinson and Company Depth filtration device for separating specimen phases
CN105420091B (zh) * 2015-09-28 2018-06-26 广州睿辰生物科技有限公司 激光活体肿瘤细胞或其它病理细胞检测装置及检测方法
US11069054B2 (en) 2015-12-30 2021-07-20 Visiongate, Inc. System and method for automated detection and monitoring of dysplasia and administration of immunotherapy and chemotherapy
WO2017223147A1 (en) 2016-06-23 2017-12-28 Life Technologies Corporation Methods and compositions for detecting or measuring caspases or apoptosis
EP3553501B1 (en) * 2016-12-09 2022-07-20 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Measurement abnormality detecting method
WO2019023146A1 (en) * 2017-07-24 2019-01-31 Quantum-Si Incorporated PHOTONIC STRUCTURES WITH OPTICAL RELEASE
WO2019046307A1 (en) 2017-08-29 2019-03-07 Celsee Diagnostics, Inc. SYSTEM AND METHOD FOR ISOLATING AND ANALYZING CELLS
CN109496565B (zh) * 2018-12-27 2020-11-06 浙江蓝天知识产权运营管理有限公司 多齿锯片式截顶剪草机
US10633693B1 (en) 2019-04-16 2020-04-28 Celsee Diagnostics, Inc. System and method for leakage control in a particle capture system
SG11202112151UA (en) 2019-05-07 2021-12-30 Bio Rad Laboratories System and method for automated single cell processing
US11273439B2 (en) 2019-05-07 2022-03-15 Bio-Rad Laboratories, Inc. System and method for target material retrieval from microwells
CN114302643B (zh) 2019-06-14 2024-02-27 伯乐实验室有限公司 用于自动化单细胞处理和分析的系统和方法
CN116337728B (zh) * 2023-05-30 2023-08-18 天津大学 一种单片集成微流式细胞仪荧光检测装置

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2850239A (en) * 1952-08-16 1958-09-02 American Optical Corp Counting device
US3777283A (en) * 1972-04-21 1973-12-04 C Elkins Transparent slide for the examination of liquid specimens
US3918812A (en) * 1973-05-07 1975-11-11 Us Energy Diagnoses of disease states by fluorescent measurements utilizing scanning laser beams
JPS53135660A (en) * 1977-04-30 1978-11-27 Olympus Optical Co Ltd Fluorescent photometric microscope using laser light
US4284412A (en) * 1979-07-13 1981-08-18 Ortho Diagnostics, Inc. Method and apparatus for automated identification and enumeration of specified blood cell subclasses
US4318886A (en) * 1979-11-19 1982-03-09 Nippon Kogaku K.K. Automatic HLA typing apparatus
US4665553A (en) * 1984-05-01 1987-05-12 Ortho Diagnostics Systems Inc. Methods and apparatus for analysis of particles and cells
US4727020A (en) * 1985-02-25 1988-02-23 Becton, Dickinson And Company Method for analysis of subpopulations of blood cells
US4683579A (en) * 1985-12-27 1987-07-28 Wardlaw Stephen C Method and apparatus for measuring blood constituent counts
US4758727A (en) * 1986-02-12 1988-07-19 Ohio State University Research Foundation Method and apparatus for the measurement of low-level laser-induced fluorescence
US4877966A (en) * 1986-02-12 1989-10-31 Ohio State University Research Foundation Method and apparatus for the measurement of low-level laser-induced fluorescence
US5037207A (en) * 1986-02-12 1991-08-06 Ohio State University Research Foundation Laser imaging system
EP0266881A3 (en) * 1986-09-30 1990-04-04 Astromed Limited Method and apparatus for multiple optical assaying
US4979824A (en) * 1989-05-26 1990-12-25 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University High sensitivity fluorescent single particle and single molecule detection apparatus and method
US5107422A (en) * 1989-10-02 1992-04-21 Kamentsky Louis A Method and apparatus for measuring multiple optical properties of biological specimens
US5072382A (en) * 1989-10-02 1991-12-10 Kamentsky Louis A Methods and apparatus for measuring multiple optical properties of biological specimens
US5091652A (en) * 1990-01-12 1992-02-25 The Regents Of The University Of California Laser excited confocal microscope fluorescence scanner and method
US5274240A (en) * 1990-01-12 1993-12-28 The Regents Of The University Of California Capillary array confocal fluorescence scanner and method
US5127730A (en) * 1990-08-10 1992-07-07 Regents Of The University Of Minnesota Multi-color laser scanning confocal imaging system
US5117466A (en) * 1991-04-30 1992-05-26 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy Integrated fluorescence analysis system

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101055544B1 (ko) * 2006-03-28 2011-08-08 헤모큐에이비 형광 표지된 생물학적 성분을 탐지하는 방법 및 장치

Also Published As

Publication number Publication date
EP0681178B1 (en) 2001-07-04
ATE202847T1 (de) 2001-07-15
US5547849A (en) 1996-08-20
DE69521558D1 (de) 2001-08-09
CA2148205A1 (en) 1995-11-03
DE69521558T2 (de) 2002-06-06
EP0681178A1 (en) 1995-11-08
JPH07301628A (ja) 1995-11-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3647504B2 (ja) 容量測定細管血球計算のための装置及び方法
EP1334346B1 (en) Particle or cell analyzer and method
US10234392B2 (en) Optical engine for flow cytometer, flow cytometer system and methods of use
WO2000071991A1 (en) Apparatus and method for optical detection in a limited depth of field
Dietz et al. Volumetric capillary cytometry: a new method for absolute cell enumeration
US5274240A (en) Capillary array confocal fluorescence scanner and method
CN102549445B (zh) 用于单个颗粒检测的生物传感器系统
US20140339446A1 (en) Scanning image flow cytometer
US20090325192A1 (en) Rapid particle detection assay
US5202230A (en) Methods of detecting cut cells in a tissue section
JP2005524833A (ja) 分析細胞イメージング用のデバイスおよび方法
US20060094109A1 (en) Device and method for analytical cell imaging
JP2002544476A (ja) 微量流体デバイスにおける多重方式蛍光検出
US20090185734A1 (en) Apparatus and method for analysis of particles in a liquid sample
CN105051538A (zh) 用于检测生物状况的系统和方法
WO1997002482A1 (en) Volumetric cell quantification method and system
US20220299421A1 (en) Systems, devices and methods for three-dimensional imaging of moving particles
CN116438438A (zh) 用于基于流动的单颗粒和/或单分子分析的方法和设备
US20200379227A1 (en) Method For Analyzing Fluorescent Particles in an Immunoassay
JP2003520343A (ja) 改善された光散乱トリガーを用いた、多細胞生物のための軸パターン分析及び分類装置
CN101868713A (zh) 光束定形器、光学系统及其使用方法
JPH11505928A (ja) 広角散乱光検出器
KR20030080934A (ko) 바이오 형광 측정용 마이크로 측정시스템
JP3261493B2 (ja) キャピラリー式光検出センサ及びこれを用いた光計測装置及び懸濁液中の微粒子測定方法
JPH03154850A (ja) 検体検査装置

Legal Events

Date Code Title Description
A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20040917

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20040928

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20041217

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20050118

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20050209

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090218

Year of fee payment: 4

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100218

Year of fee payment: 5

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100218

Year of fee payment: 5

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110218

Year of fee payment: 6

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120218

Year of fee payment: 7

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130218

Year of fee payment: 8

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130218

Year of fee payment: 8

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140218

Year of fee payment: 9

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term