JP3521110B2 - 環状ペプチド化合物及びその製造方法 - Google Patents
環状ペプチド化合物及びその製造方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規な環状ペプチ
ド化合物、特に真菌に属するテノマイセス・セルラタス
（Ｃｔｅｎｏｍｙｃｅｓ ｓｅｒｒａｔｕｓ ＡＴＣＣ
１５５０２；これはＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１として寄
託されている）の発酵によって製造する新規な環状ペプ
チド化合物に関する。また、本発明は、前記の環状ペプ
チド化合物の製造方法、及び前記の環状ペプチド化合物
を含み、対象哺乳類、特にヒトにおける重度の痛み、麻
薬依存症、急性麻薬中毒などの治療に有用な医薬組成物
にも関する。 【０００２】 【従来の技術】オピオイドレセプター結合活性を有する
薬剤は、痛み及び解毒に関して治療的に有用であり、そ
してモルヒネやナロキソンは、それぞれ鎮痛剤や解毒剤
として広範に使用されている。しかし、モルヒネには望
ましくない副作用、例えば、薬剤依存性又は呼吸低下が
あり、従って、その使用は厳密に制限されている。副作
用が少なく、より有効な薬剤に対する医学的要求が明確
に存在する。かなりの数の薬理学的及び生化学的研究が
示唆するところによれば、オピオイドレセプターは少な
くとも３種に大きく分類され、それらはμ、δ及びκと
称される。モルヒネはμレセプターに対する結合活性を
有しているが、δ又はκレセプターに対して結合活性を
有する薬剤は、より有効であり、しかも副作用が一層少
なくなるものと思われる。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、優れ
たオピオイドレセプター結合活性を有する新規な環状ペ
プチド化合物及び前記化合物を含む医薬組成物を提供す
ることにある。本発明の他の目的は、前記の新規な環状
ペプチド化合物の製造方法を提供することにある。 【０００４】 【課題を解決するための手段】従って、本発明は、環状
ペプチド化合物であるＣＪ−１５２０８、ＣＪ−１５２
０８−１、ＣＪ−１５２０８−２、及びＣＪ−１５２０
８−３を提供するものであり、（１）前記環状ペプチド
化合物ＣＪ−１５２０８は、以下の化学式（Ｉ）： 【化２】 で表され； （２）前記環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８−１
は、テノマイセス・セルラタス（ＦＥＲＭ ＢＰ−５７
３１）から得られ、白色非結晶粉末であり、特性ＦＡＢ
マススペクトルがｍ／ｚ６１７（Ｍ＋Ｈ）＋であり、Ｕ
ＶスペクトルのＵＶｍａｘが２１０ｎｍ及び２８０ｎｍ
であり、１Ｈ ＮＭＲスペクトルが図２に示すとおりで
あり、そしてＨＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳカラム
（６．０×１５０ｍｍ）を用いて、４２℃で、メタノー
ル−水（６０：４０）で、流速０．８ｍｌ／分で溶出］
における保持時間が１２．１分間であり； （３）前記環状ペプチド化合物ＣＪ１５２０８−２は、
テノマイセス・セルラタス（ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３
１）から得られ、白色非結晶粉末であり、特性ＦＡＢマ
ススペクトルがｍ／ｚ６７８（Ｍ＋Ｈ）＋であり、ＵＶ
スペクトルのＵＶｍａｘが２１０ｎｍ及び２８０ｎｍで
あり、１Ｈ ＮＭＲスペクトルが図３に示すとおりであ
り、そしてＨＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳカラム（６．
０×１５０ｍｍ）を用いて、４２℃で、メタノール−水
（６０：４０）で、流速０．８ｍｌ／分で溶出］におけ
る保持時間が１４．８分間であり；そして （４）前記環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８−３
は、テノマイセス・セルラタス（ＦＥＲＭ ＢＰ−５７
３１）から得られ、白色非結晶粉末であり、特性ＦＡＢ
マススペクトルがｍ／ｚ５３９（Ｍ＋Ｈ）＋であり、Ｕ
ＶスペクトルのＵＶｍａｘが２１０ｎｍであり、１Ｈ
ＮＭＲスペクトルが図４に示すとおりであり、そしてＨ
ＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳカラム（６．０×１５０ｍ
ｍ）を用いて、４２℃で、メタノール−水（６０：４
０）で、流速０．８ｍｌ／分で溶出］における保持時間
が１７．８分間である。 【０００５】更に、本明細書には、微生物、すなわちテ
ノマイセス・セルラタス（Ｃｔｅｎｏｍｙｃｅｓ ｓｅ
ｒｒａｔｕｓ；ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１）又はその変
異体若しくは組換体を培養し、そしてその発酵ブロスか
ら前記環状ペプチド化合物を単離することを含む、前記
の環状ペプチド化合物の製造方法を記載する。 【０００６】また、本明細書には、前記の環状ペプチド
化合物及び薬剤学的に許容することのできる担体を含
み、重度の痛みの治療用、又は麻薬依存症若しくは急性
麻薬中毒の解毒用の医薬組成物も記載する。 【０００７】また、本発明は、重度の痛みの治療、又は
麻薬依存症若しくは急性麻薬中毒の解毒が必要な患者
に、抗侵害受容量又は解毒量で前記の環状ペプチド化合
物を投与することを含む、前記患者の治療方法に用いる
ことができる。 【０００８】 【発明の実施の形態】本発明で使用する微生物は、テノ
マイセス・セルラタス（Ｃｔｅｎｏｍｙｃｅｓ ｓｅｒ
ｒａｔｕｓ ＡＴＣＣ１５５０２）株であり、これは、
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅ
ｃｔｉｏｎ：ＡＴＣＣ）から入手した。この微生物は、
ブダペスト条約に従って、通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所（あて名：郵便番号３０５；日本国茨
城県つくば市東１丁目１番３号）に１９９６年１０月２
９日に、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１として寄託
された。この株の系統的特性は、Ｏｒｒ，Ｇ．Ｆ．らに
よって報告されており（Ｍｙｃｏｐａｔｈｏｌ．Ｍｙｃ
ｏｌ．Ａｐｐｌ．２１：３２１−３３３，１９６３）、
この株は子のう菌綱のテノマイセス・セルラタス（Ｃｔ
ｅｎｏｍｙｃｅｓ ｓｅｒｒａｔｕｓ）であることが記
載されている。 【０００９】前記の環状ペプチド化合物を製造する能力
を有するＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１からの変異体又は組
換体も、本発明において使用することができる。前記の
変異体又は組換体は、偶発突然変異、あるいは紫外線照
射若しくは変異誘発物質（例えば、Ｎ−メチル−Ｎ’−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン又はメタンスルホン酸
メチル）での処理による人為的突然変異、又は細胞技術
的方法（例えば、細胞融合、遺伝子操作など）により、
周知の方法に従って得ることができる。 【００１０】本発明によれば、前記の環状ペプチド化合
物は、ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１、又はその変異体若し
くは組換体を、発酵により生物活性化合物を製造する目
的に一般的に使用される条件と同様の条件下で、好気発
酵させることによって製造することができる。 【００１１】ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１、又はその変異
体若しくは組換体は、通常、不溶性材料及び水性栄養培
地とを有する固体培地上で発酵させる。前記の不溶性材
料は、１０〜５０％（ｗ／ｖ）の範囲の量にすることが
できる。発酵用に有用な適当な不溶性材料としては、
砂、砕石、木片、及び完全破砕穀物（例えば、小麦ぬ
か、ひき割りオート麦、破砕コーン、キビなど）を挙げ
ることができる。本発明において、新規環状ペプチド化
合物を生産するためのＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１の培養
は、好ましくは、前記の不溶性材料及び水性栄養培地を
用いて、２０〜３５℃の温度で、３〜２０日間で実施す
る。前記培地のｐＨは、４．０〜９．０、好ましくは
５．０〜７．５の範囲に調節することができる。 【００１２】発酵用に有用な栄養培地は、同化可能炭素
源（例えば、糖、デンプン及びグリセロール）、有機窒
素源［例えば、カゼイン、カゼインの酵素消化物、大豆
ミール（ひき割り粉）、綿実ミール、ピーナッツミー
ル、小麦グルテン、大豆粉（フラワー）、肉抽出物、及
びフィッシュミール］、成長物質源（例えば、無機塩、
塩化ナトリウム、及び炭酸カルシウム）、並びに微量元
素（例えば、鉄、マグネシウム、銅、亜鉛、コバルト及
びマンガン）を含む。 【００１３】本発明の環状ペプチド化合物は、標準的技
法、例えば、抽出及び多様なクロマトグラフィー技法に
よって単離することができる。本発明の環状ペプチド化
合物は、発酵混合物から実質的に純粋な形で単離され、
そして多様な分光技術、例えば、ＵＶ分光光度法、ＮＭ
Ｒ及び質量分光分析法によって同定された。前記の分析
によると、ＣＪ−１５２０８は、以下の化学式： 【化３】 で表されると考えられる。 【００１４】本発明の環状ペプチド化合物のオピオイド
レセプター結合阻害活性は、以下に記載の標準的イン・
ビトロ−プロトコルによって計測した。モルモット脳膜分画の調製 新鮮なモルモット又は地方の供給者から得た脳を、氷冷
ＰＢＳ中で濯ぎ、そして緩衝液Ａ［ＨＥＰＥＳ（５０ｍ
Ｍ）／トリス−ＨＣｌ（５０ｍＭ）（ｐＨ７．５）、ス
クロース（０．２４Ｍ）、ＭｇＣｌ2（５ｍＭ）、ＥＧ
ＴＡ（２ｍＭ）、ＰＭＳＦ（１００μＭ）、及びロイペ
プチン（５０μＭ）を含む］中で簡単にホモジェナイズ
した。そのホモジェネートを、４℃で９００×ｇで１０
分間遠心した。その上清を４℃で８００００×ｇで３０
分間再遠心した。遠心後に上清を除去し、そのペレット
（膜分画）を、緩衝液Ａ中に懸濁した。前記の膜分画は
使用するまで−８０℃で貯蔵しておいた。この条件の下
では、リガンド結合活性は少なくとも５カ月は安定であ
る。 【００１５】オピオイドレセプター結合分析 分析は、ウェル毎に反応混合物２００μｌを含む９６ウ
ェルマイクロタイタプレート中で実施した。前記反応混
合物は、ＨＥＰＥＳ（４０ｍＭ）／トリス−ＨＣｌ（４
０ｍＭ）（ｐＨ７．５）、スクロース（０．１９２
Ｍ）、ＭｇＣｌ2（４ｍＭ）、ＥＧＴＡ（１．６ｍ
Ｍ）、ＰＭＳＦ（８０μＭ）、ロイペプチン（４０μ
Ｍ）、モルモット脳膜分画、及び［3Ｈ］ＣＩ−９７７
（１ｎＭ）、［Ｄ−ａｌａ2，Ｎ−メチル−ｐｈｅ4，グ
リコール5］［チロシル−３，５−3Ｈ］エンケファリン
（ＤＡＭＧＯ）（１ｎＭ）、又は［Ｄ−ペニシルアミン
2，Ｄ−ペニシルアミン5］［チロシル−２，６−3Ｈ
（Ｎ）］エンケファリン（ＤＰＤＰＥ）（１ｎＭ）から
なる。振盪しながら室温で３０分間インキュベートした
後に、ポリエチレンイミンで浸漬処理したガラスフィル
ター上へ反応混合物を収穫させることによって反応を終
結させた。結合阻害活性は、以下の式： 【式１】によって計算した。本発明の環状ペプチド化合物は、５
０ｎｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌの範囲の阻害率を示した。 【００１６】本発明の環状ペプチド化合物は、鎮痛剤、
又は解毒剤などとして有用である。鎮痛活性及び解毒活
性は、以下の方法によって示すことができる。鎮痛活性分析 本発明の環状ペプチド化合物の鎮痛活性は、Ｗｈｅｅｌ
ｅｒ−Ａｃｅｔｏ，Ｈ．らによって「Ｐｓｙｃｈｏｐｈ
ａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１０４：３５−４４，１９９
１」中に記載されているホルマリン試験によって、示す
ことができる。この試験では、雄性ＳＤラット（８０〜
１００ｇ）に、０．１％メチルセルロース食塩水又はビ
ヒクル中に溶解した供試化合物を皮下注射する。３０分
後に、後足中に２％ホルマリン５０μｌを注射する。ホ
ルマリン注射後の１５〜３０分間の観察時間当たりに、
注射した足をなめる回数を計数し、それぞれのビヒクル
グループと比較して％阻害として表示する。 【００１７】解毒活性分析 本発明の化合物の解毒活性は、Ｆｕ−Ｈｓｉｕｎｇ Ｓ
ｈｅｎ、ＨｏｒａｃｅＨ．Ｌｏｈ及びＥ．Ｌｅｏｎｇ
Ｗａｙによって「Ｔｈｅ ＪｏｕｒｎａｌＯｆ Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１７５：４２７−４３
４，１９７０」中に記載された手順に従って示すことが
できる。この試験では、投与量を増やしながら３週間麻
薬を繰り返して注射することによって、体重２０〜２５
ｇのスイス系アルビノ雄性マウスを麻薬依存性にする。
開始時の投与量は５ｍｇ／ｋｇでの皮下投与を１日に３
回であり、投与量を３日毎に２５ｍｇ／ｋｇの増加量で
増加させ、最終投与量は１８０ｍｇ／ｋｇに達した。第
２群のマウスには、同じ投与量で麻薬を摂取させるが、
麻薬投与の１５分前に更に本発明の環状ペプチド化合物
の注射をする。本発明の環状ペプチド化合物の投与量を
調節して、本発明の環状ペプチド化合物と麻薬との投与
量の割合を１：１２．５とする。第３群の動物には、塩
水又は本発明の環状ペプチド化合物を１日当たり３回摂
取させる。投与後１５分以内に円形の台から飛び降りる
動物の割合を決定する。 【００１８】急性麻薬中毒に対する本発明の化合物の解
毒活性は、Ｊ．Ｅ．Ｅｃｋｅｎｈｏｆｆらによって、
「Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．，２２８（５），５４
６，１９５４」中に記載された手順に従って示すことが
できる。 【００１９】投与 環状ペプチド化合物であるＣＪ−１５２０８、ＣＪ−１
５２０８−１、ＣＪ−１５２０８−２、及びＣＪ−１５
２０８−３は、重度の痛みの治療、麻薬依存症又は急性
麻薬中毒の解毒などに有用である。これらの環状ペプチ
ド化合物は、単独で、又は薬剤学的に許容することので
きる担体と組み合わせて、単回又は複数回で投与するこ
とができる。適当な薬剤学的担体としては、不活性固体
希釈剤又は充填剤、滅菌水溶液及び多様な有機溶媒を挙
げることができる。従って、前記の環状ペプチド化合物
と薬剤学的に許容することのできる担体とを一緒にする
ことによって形成する医薬組成物は、多様な投与形態、
例えば、錠剤、粉末、ロゼンジ、シロップ、及び注射溶
液などの形態で、容易に投与することができる。これら
の医薬組成物は、所望により、追加成分、例えば、香
料、バインダー、及び賦形剤などを含むことができる。
従って、経口投与用に、多様な賦形剤、例えば、クエン
酸ナトリウム、炭酸カルシウム及びリン酸カルシウムを
含んでいる錠剤を、種々の崩壊剤、例えば、デンプン、
アルギン酸、及び或る種のコンプレックスシリケート
（ｃｏｍｐｌｅｘ ｓｉｌｉｃａｔｅ）、並びに結合
剤、例えば、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラ
チン、及びアラビアゴムと一緒に用いることができる。
更に、潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラ
ウリル硫酸ナトリウム、及びタルクが、錠剤化の目的
に、しばしば有用である。また、同様のタイプの固体組
成物は、軟質充填及び硬質充填ゼラチンカプセル中の充
填剤として用いることもできる。これに関連する好まし
い材料には、ラクトース（又は乳糖）及び高分子ポリエ
チレングリコールを挙げることができる。経口投与用に
水性懸濁液又はエリキシルが望ましい場合には、必須の
活性成分と、多様な甘味剤又は香味剤、着色剤又は染
料、並びに所望により、乳化剤又は懸濁剤とを、希釈
剤、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、
グリセロール、及びそれらを組み合わせたものと一緒に
組み合わせることができる。 【００２０】非経口投与用に、ゴマ油若しくはピーナッ
ツ油、水性プロピレングリコール又は滅菌水溶液中の、
本発明の環状ペプチド化合物の溶液を用いることができ
る。前記の水溶液は、必要に応じて適当に緩衝化した方
がよく、そして液体希釈剤は、多量の塩水又はグルコー
スによって最初に等張にする。これら特定の水溶液は、
静脈投与、筋肉内投与、皮下投与及び腹腔内投与の目的
に特に適している。これに関連して、使用する滅菌水性
培地は、当業者に公知の標準的技術によって全て容易に
入手することができる。更に、皮膚の状態の治療の場合
には、本発明の環状ペプチド化合物を局所的に投与する
ことができ、これは標準的薬剤慣行に従ってクリーム、
ゼリー、ジェル、ペースト、及び軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎ
ｔ）によって行うことができる。 【００２１】一般的に、活性化合物に関する１日当たり
の治療有効投与量は、体重当たり０．０１〜１００ｍｇ
／ｋｇの範囲であり、概して、重度の痛みの治療を行う
べき患者には、体重当たり約１〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲
であり、また、麻薬依存症若しくは急性麻薬中毒の解毒
の治療を行うべき場合には、体重当たり０．２〜１００
ｍｇ／ｋｇである。一般的に知られているように、活性
化合物に関する有効投与量は、医師に一般的に知られて
いるように、意図する投与経路、及び他の要因、例え
ば、患者の年齢及び体重に依存する。また、投与量は、
治療する疾病にも依存する。 【００２２】 【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するもの
ではない。スペクトル及び物理化学的データは、以下の
装置によって得た。ＩＲ＝Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＩＲ−４
７０；ＵＶ＝ＪＡＳＣＯＵｂｅｓｔ−３０；旋光度＝Ｊ
ＡＳＣＯ ＤＩＰ−３７０（５ｃｍセル）；ＮＭＲ＝Ｊ
ＥＯＬ ＪＮＭ−ＧＸ２７０（ＬＳＩ−１１／７３ホス
トコンピューター、ＴＨ−５調整可能プローブ、及びバ
ージョン１．６ソフトウェアを装備）；並びにＦＡＢ−
ＭＳ＝ＪＥＯＬ ＪＭＳ−７００。特に断らない限り、
全てのＮＭＲスペクトルは、少量のＤＭＳＯ−ｄ6を含
むアセトン−ｄ6中で測定し、ピークの位置は、1Ｈ−Ｎ
ＭＲに関して２．０ｐｐｍ（ｐａｒｔｓ ｐｅｒ ｍｉ
ｌｌｉｏｎ）、そして13Ｃ−ＮＭＲに関して３０．３ｐ
ｐｍにおけるアセトンのピークを参照にし、それに基づ
いてｐｐｍで表す。ピークの形状は、以下のように示
す。ｓ＝一重線；ｄ＝二重線；ｔ＝三重線；ｑ＝四重
線；ｍ＝多重線；及びｂｒ＝幅広（ｂｒｏａｄ）。全て
のＦＡＢ−ＭＳスペクトルは、グリセロール−マトリク
スを用いて測定した。 【００２３】 【実施例１】テノマイセス・セルラタス（Ｃｔｅｎｏｍｙｃｅｓ ｓ
ｅｒｒａｔｕｓ；ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１）の発酵 ５００ｍｌフラスコ中の培地１（ポテトデキストロース
ブロス２．４％，イースト抽出物０．５％、及び寒天
０．１％）１００ｍｌに、ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１斜
面培養物からの植物細胞懸濁液を植菌した。前記のフラ
スコを、ロータリーシェーカー（２１０ｒｐｍで７ｃｍ
行程）上で、２６℃で４日間振盪し、第１の種菌培養物
を得た。培地１（１００ｍｌ）を含む５００ｍｌフラス
コ５個に、それぞれ第１種菌培養物５ｍｌずつを植菌し
た。これらのフラスコを、前記の第１種菌培養物と同じ
条件で振盪した。第２の種菌培養物を用いて、培地２
（グルコース１％，グリセロール３％，ペプトン０．５
％，ＮａＣｌ０．２％，及び寒天０．１％，ｐＨ７．
０）及び小麦ぬか２０ｇを含む５００ｍｌフラスコ１０
０個に植菌した。インキュベーションを、２６℃で１０
日間実施した。 【００２４】抽出及び単離 こうして得られた発酵ブロスを７０％水性エタノール１
０リットルで抽出した。そのろ液を、２リットルの水溶
液となるまで濃縮し、そして酢酸エチル２リットルで２
回抽出した。その抽出物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥
し、そして蒸発して油状残さを得た。この残さ（７．２
ｇ）を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラム（２５×
５００ｍｍ，Ｐｈａｒｍａｃｉａの商品名）に装入し、
そしてメタノールで溶出した。活性フランクション
（１．３ｇ）を、ＹＭＣ−パックＯＤＳ−ＡＭ−３４３
カラム（２０×２５０ｍｍ，Ｙａｍａｍｕｒａの商品
名）に装入し、そして流速６ｍｌ／分で、メタノール−
水（６０：４０）で溶出した。検出を２２０ｎｍでのＵ
Ｖ吸光度で実施した。活性を示す溶出ピークを収集し、
環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８（５．８ｍｇ）、
環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８−１（１１．６ｍ
ｇ）、環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８−２（４．
７ｍｇ）、及び環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８−
３（４．９ｍｇ）を得た。 【００２５】ＨＰＬＣ分析 環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８、ＣＪ−１５２０
８−１、ＣＪ−１５２０８−２、及びＣＪ−１５２０８
−３を含むサンプルについての分析的ＨＰＬＣは、ＹＭ
Ｃ−パックＯＤＳ−ＡＭ−３１２カラム（６．０×１５
０ｍｍ，Ｙａｍａｍｕｒａの商品名）を用いて、流速
０．８ｍｌ／分で、メタノール／水（６０：４０）で溶
出することによって実施した。環状ペプチド化合物ＣＪ
−１５２０８、ＣＪ−１５２０８−１、ＣＪ−１５２０
８−２、及びＣＪ−１５２０８−３の保持時間は、それ
ぞれ１２．６分間、１２．１分間、１４．８分間、及び
１７．８分間であった。 【００２６】特性 得られた環状ペプチド化合物の物理化学的特性は以下の
通りであった。 ＣＪ−１５２０８：白色非結晶粉末；分子式Ｃ34Ｈ35Ｎ
5Ｏ4；ＬＲＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）＝５７６（Ｍ−Ｈ）
-；ＨＲＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）＝５７６．２６５８
（Ｃ34Ｈ34Ｎ5Ｏ4に関する理論値＝５７６．２６１
３）；［α］D 24＝−６４．０°（ｃ０．０５，ＤＭＳ
Ｏ）；ＵＶλmax（ＭｅＯＨ）ｎｍ＝２１０，２８０；
ＩＲνmax（ＫＢｒ）ｃｍ-1＝３５２０，３２９０，１
６９４，１６０１，１５１６，１４５１，１２３０，１
１０５，７４１，６９６；1Ｈ ＮＭＲは、図１に示
す；13 Ｃ ＮＭＲδ＝１７５．１５（ｓ），１７４．０２
（ｓ），１７４．２（ｓ），１７０．５９（ｓ），１３
９．３５（ｓ），１３８．１９（ｓ），１３７．６５
（ｓ），１３０．８３（ｄ），１３０．８３（ｄ），１
３０．２５（ｄ），１３０．２５（ｄ），１２９．２３
（ｄ），１２９．２３（ｄ），１２９．１０（ｄ），１
２９．１０（ｄ），１２８．８０（ｓ），１２７．４５
（ｄ），１２７．４５（ｄ），１２４．３２（ｄ），１
２１．９３（ｄ），１１９．７０（ｄ），１１９．４４
（ｄ），１１２．３６（ｄ），１１２．１８（ｓ），６
０．９７（ｄ），５９．８２（ｄ），５９．４６
（ｄ），５８．２０（ｄ），４８．８６（ｔ），３８．
６２（ｔ），３６．９２（ｔ），３３．６３（ｔ），２
８．２４（ｔ），２１．５２（ｔ）。 【００２７】ＣＪ−１５２０８−１：白色非結晶粉末；
１Ｈ ＮＭＲは、図２に示す；ＬＲＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／
ｚ）＝６１７（Ｍ＋Ｈ）＋；ＵＶλｍａｘ（ＭｅＯＨ）
ｎｍ＝２１０，２８０。 【００２８】ＣＪ−１５２０８−２：白色非結晶粉末；
1Ｈ ＮＭＲは、図３に示す；ＬＲＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／
ｚ）＝５７８（Ｍ＋Ｈ）+；ＵＶλmax（ＭｅＯＨ）ｎｍ
＝２１０，２８０。 【００２９】ＣＪ−１５２０８−３：白色非結晶粉末；
1Ｈ ＮＭＲは、図４に示す；ＬＲＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／
ｚ）＝５３９（Ｍ＋Ｈ）+；ＵＶλmax（ＭｅＯＨ）ｎｍ
＝２１０。
ド化合物、特に真菌に属するテノマイセス・セルラタス
（Ｃｔｅｎｏｍｙｃｅｓ ｓｅｒｒａｔｕｓ ＡＴＣＣ
１５５０２；これはＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１として寄
託されている）の発酵によって製造する新規な環状ペプ
チド化合物に関する。また、本発明は、前記の環状ペプ
チド化合物の製造方法、及び前記の環状ペプチド化合物
を含み、対象哺乳類、特にヒトにおける重度の痛み、麻
薬依存症、急性麻薬中毒などの治療に有用な医薬組成物
にも関する。 【０００２】 【従来の技術】オピオイドレセプター結合活性を有する
薬剤は、痛み及び解毒に関して治療的に有用であり、そ
してモルヒネやナロキソンは、それぞれ鎮痛剤や解毒剤
として広範に使用されている。しかし、モルヒネには望
ましくない副作用、例えば、薬剤依存性又は呼吸低下が
あり、従って、その使用は厳密に制限されている。副作
用が少なく、より有効な薬剤に対する医学的要求が明確
に存在する。かなりの数の薬理学的及び生化学的研究が
示唆するところによれば、オピオイドレセプターは少な
くとも３種に大きく分類され、それらはμ、δ及びκと
称される。モルヒネはμレセプターに対する結合活性を
有しているが、δ又はκレセプターに対して結合活性を
有する薬剤は、より有効であり、しかも副作用が一層少
なくなるものと思われる。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、優れ
たオピオイドレセプター結合活性を有する新規な環状ペ
プチド化合物及び前記化合物を含む医薬組成物を提供す
ることにある。本発明の他の目的は、前記の新規な環状
ペプチド化合物の製造方法を提供することにある。 【０００４】 【課題を解決するための手段】従って、本発明は、環状
ペプチド化合物であるＣＪ−１５２０８、ＣＪ−１５２
０８−１、ＣＪ−１５２０８−２、及びＣＪ−１５２０
８−３を提供するものであり、（１）前記環状ペプチド
化合物ＣＪ−１５２０８は、以下の化学式（Ｉ）： 【化２】 で表され； （２）前記環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８−１
は、テノマイセス・セルラタス（ＦＥＲＭ ＢＰ−５７
３１）から得られ、白色非結晶粉末であり、特性ＦＡＢ
マススペクトルがｍ／ｚ６１７（Ｍ＋Ｈ）＋であり、Ｕ
ＶスペクトルのＵＶｍａｘが２１０ｎｍ及び２８０ｎｍ
であり、１Ｈ ＮＭＲスペクトルが図２に示すとおりで
あり、そしてＨＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳカラム
（６．０×１５０ｍｍ）を用いて、４２℃で、メタノー
ル−水（６０：４０）で、流速０．８ｍｌ／分で溶出］
における保持時間が１２．１分間であり； （３）前記環状ペプチド化合物ＣＪ１５２０８−２は、
テノマイセス・セルラタス（ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３
１）から得られ、白色非結晶粉末であり、特性ＦＡＢマ
ススペクトルがｍ／ｚ６７８（Ｍ＋Ｈ）＋であり、ＵＶ
スペクトルのＵＶｍａｘが２１０ｎｍ及び２８０ｎｍで
あり、１Ｈ ＮＭＲスペクトルが図３に示すとおりであ
り、そしてＨＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳカラム（６．
０×１５０ｍｍ）を用いて、４２℃で、メタノール−水
（６０：４０）で、流速０．８ｍｌ／分で溶出］におけ
る保持時間が１４．８分間であり；そして （４）前記環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８−３
は、テノマイセス・セルラタス（ＦＥＲＭ ＢＰ−５７
３１）から得られ、白色非結晶粉末であり、特性ＦＡＢ
マススペクトルがｍ／ｚ５３９（Ｍ＋Ｈ）＋であり、Ｕ
ＶスペクトルのＵＶｍａｘが２１０ｎｍであり、１Ｈ
ＮＭＲスペクトルが図４に示すとおりであり、そしてＨ
ＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳカラム（６．０×１５０ｍ
ｍ）を用いて、４２℃で、メタノール−水（６０：４
０）で、流速０．８ｍｌ／分で溶出］における保持時間
が１７．８分間である。 【０００５】更に、本明細書には、微生物、すなわちテ
ノマイセス・セルラタス（Ｃｔｅｎｏｍｙｃｅｓ ｓｅ
ｒｒａｔｕｓ；ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１）又はその変
異体若しくは組換体を培養し、そしてその発酵ブロスか
ら前記環状ペプチド化合物を単離することを含む、前記
の環状ペプチド化合物の製造方法を記載する。 【０００６】また、本明細書には、前記の環状ペプチド
化合物及び薬剤学的に許容することのできる担体を含
み、重度の痛みの治療用、又は麻薬依存症若しくは急性
麻薬中毒の解毒用の医薬組成物も記載する。 【０００７】また、本発明は、重度の痛みの治療、又は
麻薬依存症若しくは急性麻薬中毒の解毒が必要な患者
に、抗侵害受容量又は解毒量で前記の環状ペプチド化合
物を投与することを含む、前記患者の治療方法に用いる
ことができる。 【０００８】 【発明の実施の形態】本発明で使用する微生物は、テノ
マイセス・セルラタス（Ｃｔｅｎｏｍｙｃｅｓ ｓｅｒ
ｒａｔｕｓ ＡＴＣＣ１５５０２）株であり、これは、
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅ
ｃｔｉｏｎ：ＡＴＣＣ）から入手した。この微生物は、
ブダペスト条約に従って、通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所（あて名：郵便番号３０５；日本国茨
城県つくば市東１丁目１番３号）に１９９６年１０月２
９日に、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１として寄託
された。この株の系統的特性は、Ｏｒｒ，Ｇ．Ｆ．らに
よって報告されており（Ｍｙｃｏｐａｔｈｏｌ．Ｍｙｃ
ｏｌ．Ａｐｐｌ．２１：３２１−３３３，１９６３）、
この株は子のう菌綱のテノマイセス・セルラタス（Ｃｔ
ｅｎｏｍｙｃｅｓ ｓｅｒｒａｔｕｓ）であることが記
載されている。 【０００９】前記の環状ペプチド化合物を製造する能力
を有するＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１からの変異体又は組
換体も、本発明において使用することができる。前記の
変異体又は組換体は、偶発突然変異、あるいは紫外線照
射若しくは変異誘発物質（例えば、Ｎ−メチル−Ｎ’−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン又はメタンスルホン酸
メチル）での処理による人為的突然変異、又は細胞技術
的方法（例えば、細胞融合、遺伝子操作など）により、
周知の方法に従って得ることができる。 【００１０】本発明によれば、前記の環状ペプチド化合
物は、ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１、又はその変異体若し
くは組換体を、発酵により生物活性化合物を製造する目
的に一般的に使用される条件と同様の条件下で、好気発
酵させることによって製造することができる。 【００１１】ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１、又はその変異
体若しくは組換体は、通常、不溶性材料及び水性栄養培
地とを有する固体培地上で発酵させる。前記の不溶性材
料は、１０〜５０％（ｗ／ｖ）の範囲の量にすることが
できる。発酵用に有用な適当な不溶性材料としては、
砂、砕石、木片、及び完全破砕穀物（例えば、小麦ぬ
か、ひき割りオート麦、破砕コーン、キビなど）を挙げ
ることができる。本発明において、新規環状ペプチド化
合物を生産するためのＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１の培養
は、好ましくは、前記の不溶性材料及び水性栄養培地を
用いて、２０〜３５℃の温度で、３〜２０日間で実施す
る。前記培地のｐＨは、４．０〜９．０、好ましくは
５．０〜７．５の範囲に調節することができる。 【００１２】発酵用に有用な栄養培地は、同化可能炭素
源（例えば、糖、デンプン及びグリセロール）、有機窒
素源［例えば、カゼイン、カゼインの酵素消化物、大豆
ミール（ひき割り粉）、綿実ミール、ピーナッツミー
ル、小麦グルテン、大豆粉（フラワー）、肉抽出物、及
びフィッシュミール］、成長物質源（例えば、無機塩、
塩化ナトリウム、及び炭酸カルシウム）、並びに微量元
素（例えば、鉄、マグネシウム、銅、亜鉛、コバルト及
びマンガン）を含む。 【００１３】本発明の環状ペプチド化合物は、標準的技
法、例えば、抽出及び多様なクロマトグラフィー技法に
よって単離することができる。本発明の環状ペプチド化
合物は、発酵混合物から実質的に純粋な形で単離され、
そして多様な分光技術、例えば、ＵＶ分光光度法、ＮＭ
Ｒ及び質量分光分析法によって同定された。前記の分析
によると、ＣＪ−１５２０８は、以下の化学式： 【化３】 で表されると考えられる。 【００１４】本発明の環状ペプチド化合物のオピオイド
レセプター結合阻害活性は、以下に記載の標準的イン・
ビトロ−プロトコルによって計測した。モルモット脳膜分画の調製 新鮮なモルモット又は地方の供給者から得た脳を、氷冷
ＰＢＳ中で濯ぎ、そして緩衝液Ａ［ＨＥＰＥＳ（５０ｍ
Ｍ）／トリス−ＨＣｌ（５０ｍＭ）（ｐＨ７．５）、ス
クロース（０．２４Ｍ）、ＭｇＣｌ2（５ｍＭ）、ＥＧ
ＴＡ（２ｍＭ）、ＰＭＳＦ（１００μＭ）、及びロイペ
プチン（５０μＭ）を含む］中で簡単にホモジェナイズ
した。そのホモジェネートを、４℃で９００×ｇで１０
分間遠心した。その上清を４℃で８００００×ｇで３０
分間再遠心した。遠心後に上清を除去し、そのペレット
（膜分画）を、緩衝液Ａ中に懸濁した。前記の膜分画は
使用するまで−８０℃で貯蔵しておいた。この条件の下
では、リガンド結合活性は少なくとも５カ月は安定であ
る。 【００１５】オピオイドレセプター結合分析 分析は、ウェル毎に反応混合物２００μｌを含む９６ウ
ェルマイクロタイタプレート中で実施した。前記反応混
合物は、ＨＥＰＥＳ（４０ｍＭ）／トリス−ＨＣｌ（４
０ｍＭ）（ｐＨ７．５）、スクロース（０．１９２
Ｍ）、ＭｇＣｌ2（４ｍＭ）、ＥＧＴＡ（１．６ｍ
Ｍ）、ＰＭＳＦ（８０μＭ）、ロイペプチン（４０μ
Ｍ）、モルモット脳膜分画、及び［3Ｈ］ＣＩ−９７７
（１ｎＭ）、［Ｄ−ａｌａ2，Ｎ−メチル−ｐｈｅ4，グ
リコール5］［チロシル−３，５−3Ｈ］エンケファリン
（ＤＡＭＧＯ）（１ｎＭ）、又は［Ｄ−ペニシルアミン
2，Ｄ−ペニシルアミン5］［チロシル−２，６−3Ｈ
（Ｎ）］エンケファリン（ＤＰＤＰＥ）（１ｎＭ）から
なる。振盪しながら室温で３０分間インキュベートした
後に、ポリエチレンイミンで浸漬処理したガラスフィル
ター上へ反応混合物を収穫させることによって反応を終
結させた。結合阻害活性は、以下の式： 【式１】によって計算した。本発明の環状ペプチド化合物は、５
０ｎｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌの範囲の阻害率を示した。 【００１６】本発明の環状ペプチド化合物は、鎮痛剤、
又は解毒剤などとして有用である。鎮痛活性及び解毒活
性は、以下の方法によって示すことができる。鎮痛活性分析 本発明の環状ペプチド化合物の鎮痛活性は、Ｗｈｅｅｌ
ｅｒ−Ａｃｅｔｏ，Ｈ．らによって「Ｐｓｙｃｈｏｐｈ
ａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１０４：３５−４４，１９９
１」中に記載されているホルマリン試験によって、示す
ことができる。この試験では、雄性ＳＤラット（８０〜
１００ｇ）に、０．１％メチルセルロース食塩水又はビ
ヒクル中に溶解した供試化合物を皮下注射する。３０分
後に、後足中に２％ホルマリン５０μｌを注射する。ホ
ルマリン注射後の１５〜３０分間の観察時間当たりに、
注射した足をなめる回数を計数し、それぞれのビヒクル
グループと比較して％阻害として表示する。 【００１７】解毒活性分析 本発明の化合物の解毒活性は、Ｆｕ−Ｈｓｉｕｎｇ Ｓ
ｈｅｎ、ＨｏｒａｃｅＨ．Ｌｏｈ及びＥ．Ｌｅｏｎｇ
Ｗａｙによって「Ｔｈｅ ＪｏｕｒｎａｌＯｆ Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１７５：４２７−４３
４，１９７０」中に記載された手順に従って示すことが
できる。この試験では、投与量を増やしながら３週間麻
薬を繰り返して注射することによって、体重２０〜２５
ｇのスイス系アルビノ雄性マウスを麻薬依存性にする。
開始時の投与量は５ｍｇ／ｋｇでの皮下投与を１日に３
回であり、投与量を３日毎に２５ｍｇ／ｋｇの増加量で
増加させ、最終投与量は１８０ｍｇ／ｋｇに達した。第
２群のマウスには、同じ投与量で麻薬を摂取させるが、
麻薬投与の１５分前に更に本発明の環状ペプチド化合物
の注射をする。本発明の環状ペプチド化合物の投与量を
調節して、本発明の環状ペプチド化合物と麻薬との投与
量の割合を１：１２．５とする。第３群の動物には、塩
水又は本発明の環状ペプチド化合物を１日当たり３回摂
取させる。投与後１５分以内に円形の台から飛び降りる
動物の割合を決定する。 【００１８】急性麻薬中毒に対する本発明の化合物の解
毒活性は、Ｊ．Ｅ．Ｅｃｋｅｎｈｏｆｆらによって、
「Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．，２２８（５），５４
６，１９５４」中に記載された手順に従って示すことが
できる。 【００１９】投与 環状ペプチド化合物であるＣＪ−１５２０８、ＣＪ−１
５２０８−１、ＣＪ−１５２０８−２、及びＣＪ−１５
２０８−３は、重度の痛みの治療、麻薬依存症又は急性
麻薬中毒の解毒などに有用である。これらの環状ペプチ
ド化合物は、単独で、又は薬剤学的に許容することので
きる担体と組み合わせて、単回又は複数回で投与するこ
とができる。適当な薬剤学的担体としては、不活性固体
希釈剤又は充填剤、滅菌水溶液及び多様な有機溶媒を挙
げることができる。従って、前記の環状ペプチド化合物
と薬剤学的に許容することのできる担体とを一緒にする
ことによって形成する医薬組成物は、多様な投与形態、
例えば、錠剤、粉末、ロゼンジ、シロップ、及び注射溶
液などの形態で、容易に投与することができる。これら
の医薬組成物は、所望により、追加成分、例えば、香
料、バインダー、及び賦形剤などを含むことができる。
従って、経口投与用に、多様な賦形剤、例えば、クエン
酸ナトリウム、炭酸カルシウム及びリン酸カルシウムを
含んでいる錠剤を、種々の崩壊剤、例えば、デンプン、
アルギン酸、及び或る種のコンプレックスシリケート
（ｃｏｍｐｌｅｘ ｓｉｌｉｃａｔｅ）、並びに結合
剤、例えば、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラ
チン、及びアラビアゴムと一緒に用いることができる。
更に、潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラ
ウリル硫酸ナトリウム、及びタルクが、錠剤化の目的
に、しばしば有用である。また、同様のタイプの固体組
成物は、軟質充填及び硬質充填ゼラチンカプセル中の充
填剤として用いることもできる。これに関連する好まし
い材料には、ラクトース（又は乳糖）及び高分子ポリエ
チレングリコールを挙げることができる。経口投与用に
水性懸濁液又はエリキシルが望ましい場合には、必須の
活性成分と、多様な甘味剤又は香味剤、着色剤又は染
料、並びに所望により、乳化剤又は懸濁剤とを、希釈
剤、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、
グリセロール、及びそれらを組み合わせたものと一緒に
組み合わせることができる。 【００２０】非経口投与用に、ゴマ油若しくはピーナッ
ツ油、水性プロピレングリコール又は滅菌水溶液中の、
本発明の環状ペプチド化合物の溶液を用いることができ
る。前記の水溶液は、必要に応じて適当に緩衝化した方
がよく、そして液体希釈剤は、多量の塩水又はグルコー
スによって最初に等張にする。これら特定の水溶液は、
静脈投与、筋肉内投与、皮下投与及び腹腔内投与の目的
に特に適している。これに関連して、使用する滅菌水性
培地は、当業者に公知の標準的技術によって全て容易に
入手することができる。更に、皮膚の状態の治療の場合
には、本発明の環状ペプチド化合物を局所的に投与する
ことができ、これは標準的薬剤慣行に従ってクリーム、
ゼリー、ジェル、ペースト、及び軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎ
ｔ）によって行うことができる。 【００２１】一般的に、活性化合物に関する１日当たり
の治療有効投与量は、体重当たり０．０１〜１００ｍｇ
／ｋｇの範囲であり、概して、重度の痛みの治療を行う
べき患者には、体重当たり約１〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲
であり、また、麻薬依存症若しくは急性麻薬中毒の解毒
の治療を行うべき場合には、体重当たり０．２〜１００
ｍｇ／ｋｇである。一般的に知られているように、活性
化合物に関する有効投与量は、医師に一般的に知られて
いるように、意図する投与経路、及び他の要因、例え
ば、患者の年齢及び体重に依存する。また、投与量は、
治療する疾病にも依存する。 【００２２】 【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するもの
ではない。スペクトル及び物理化学的データは、以下の
装置によって得た。ＩＲ＝Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＩＲ−４
７０；ＵＶ＝ＪＡＳＣＯＵｂｅｓｔ−３０；旋光度＝Ｊ
ＡＳＣＯ ＤＩＰ−３７０（５ｃｍセル）；ＮＭＲ＝Ｊ
ＥＯＬ ＪＮＭ−ＧＸ２７０（ＬＳＩ−１１／７３ホス
トコンピューター、ＴＨ−５調整可能プローブ、及びバ
ージョン１．６ソフトウェアを装備）；並びにＦＡＢ−
ＭＳ＝ＪＥＯＬ ＪＭＳ−７００。特に断らない限り、
全てのＮＭＲスペクトルは、少量のＤＭＳＯ−ｄ6を含
むアセトン−ｄ6中で測定し、ピークの位置は、1Ｈ−Ｎ
ＭＲに関して２．０ｐｐｍ（ｐａｒｔｓ ｐｅｒ ｍｉ
ｌｌｉｏｎ）、そして13Ｃ−ＮＭＲに関して３０．３ｐ
ｐｍにおけるアセトンのピークを参照にし、それに基づ
いてｐｐｍで表す。ピークの形状は、以下のように示
す。ｓ＝一重線；ｄ＝二重線；ｔ＝三重線；ｑ＝四重
線；ｍ＝多重線；及びｂｒ＝幅広（ｂｒｏａｄ）。全て
のＦＡＢ−ＭＳスペクトルは、グリセロール−マトリク
スを用いて測定した。 【００２３】 【実施例１】テノマイセス・セルラタス（Ｃｔｅｎｏｍｙｃｅｓ ｓ
ｅｒｒａｔｕｓ；ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１）の発酵 ５００ｍｌフラスコ中の培地１（ポテトデキストロース
ブロス２．４％，イースト抽出物０．５％、及び寒天
０．１％）１００ｍｌに、ＦＥＲＭ ＢＰ−５７３１斜
面培養物からの植物細胞懸濁液を植菌した。前記のフラ
スコを、ロータリーシェーカー（２１０ｒｐｍで７ｃｍ
行程）上で、２６℃で４日間振盪し、第１の種菌培養物
を得た。培地１（１００ｍｌ）を含む５００ｍｌフラス
コ５個に、それぞれ第１種菌培養物５ｍｌずつを植菌し
た。これらのフラスコを、前記の第１種菌培養物と同じ
条件で振盪した。第２の種菌培養物を用いて、培地２
（グルコース１％，グリセロール３％，ペプトン０．５
％，ＮａＣｌ０．２％，及び寒天０．１％，ｐＨ７．
０）及び小麦ぬか２０ｇを含む５００ｍｌフラスコ１０
０個に植菌した。インキュベーションを、２６℃で１０
日間実施した。 【００２４】抽出及び単離 こうして得られた発酵ブロスを７０％水性エタノール１
０リットルで抽出した。そのろ液を、２リットルの水溶
液となるまで濃縮し、そして酢酸エチル２リットルで２
回抽出した。その抽出物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥
し、そして蒸発して油状残さを得た。この残さ（７．２
ｇ）を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラム（２５×
５００ｍｍ，Ｐｈａｒｍａｃｉａの商品名）に装入し、
そしてメタノールで溶出した。活性フランクション
（１．３ｇ）を、ＹＭＣ−パックＯＤＳ−ＡＭ−３４３
カラム（２０×２５０ｍｍ，Ｙａｍａｍｕｒａの商品
名）に装入し、そして流速６ｍｌ／分で、メタノール−
水（６０：４０）で溶出した。検出を２２０ｎｍでのＵ
Ｖ吸光度で実施した。活性を示す溶出ピークを収集し、
環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８（５．８ｍｇ）、
環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８−１（１１．６ｍ
ｇ）、環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８−２（４．
７ｍｇ）、及び環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８−
３（４．９ｍｇ）を得た。 【００２５】ＨＰＬＣ分析 環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８、ＣＪ−１５２０
８−１、ＣＪ−１５２０８−２、及びＣＪ−１５２０８
−３を含むサンプルについての分析的ＨＰＬＣは、ＹＭ
Ｃ−パックＯＤＳ−ＡＭ−３１２カラム（６．０×１５
０ｍｍ，Ｙａｍａｍｕｒａの商品名）を用いて、流速
０．８ｍｌ／分で、メタノール／水（６０：４０）で溶
出することによって実施した。環状ペプチド化合物ＣＪ
−１５２０８、ＣＪ−１５２０８−１、ＣＪ−１５２０
８−２、及びＣＪ−１５２０８−３の保持時間は、それ
ぞれ１２．６分間、１２．１分間、１４．８分間、及び
１７．８分間であった。 【００２６】特性 得られた環状ペプチド化合物の物理化学的特性は以下の
通りであった。 ＣＪ−１５２０８：白色非結晶粉末；分子式Ｃ34Ｈ35Ｎ
5Ｏ4；ＬＲＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）＝５７６（Ｍ−Ｈ）
-；ＨＲＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）＝５７６．２６５８
（Ｃ34Ｈ34Ｎ5Ｏ4に関する理論値＝５７６．２６１
３）；［α］D 24＝−６４．０°（ｃ０．０５，ＤＭＳ
Ｏ）；ＵＶλmax（ＭｅＯＨ）ｎｍ＝２１０，２８０；
ＩＲνmax（ＫＢｒ）ｃｍ-1＝３５２０，３２９０，１
６９４，１６０１，１５１６，１４５１，１２３０，１
１０５，７４１，６９６；1Ｈ ＮＭＲは、図１に示
す；13 Ｃ ＮＭＲδ＝１７５．１５（ｓ），１７４．０２
（ｓ），１７４．２（ｓ），１７０．５９（ｓ），１３
９．３５（ｓ），１３８．１９（ｓ），１３７．６５
（ｓ），１３０．８３（ｄ），１３０．８３（ｄ），１
３０．２５（ｄ），１３０．２５（ｄ），１２９．２３
（ｄ），１２９．２３（ｄ），１２９．１０（ｄ），１
２９．１０（ｄ），１２８．８０（ｓ），１２７．４５
（ｄ），１２７．４５（ｄ），１２４．３２（ｄ），１
２１．９３（ｄ），１１９．７０（ｄ），１１９．４４
（ｄ），１１２．３６（ｄ），１１２．１８（ｓ），６
０．９７（ｄ），５９．８２（ｄ），５９．４６
（ｄ），５８．２０（ｄ），４８．８６（ｔ），３８．
６２（ｔ），３６．９２（ｔ），３３．６３（ｔ），２
８．２４（ｔ），２１．５２（ｔ）。 【００２７】ＣＪ−１５２０８−１：白色非結晶粉末；
１Ｈ ＮＭＲは、図２に示す；ＬＲＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／
ｚ）＝６１７（Ｍ＋Ｈ）＋；ＵＶλｍａｘ（ＭｅＯＨ）
ｎｍ＝２１０，２８０。 【００２８】ＣＪ−１５２０８−２：白色非結晶粉末；
1Ｈ ＮＭＲは、図３に示す；ＬＲＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／
ｚ）＝５７８（Ｍ＋Ｈ）+；ＵＶλmax（ＭｅＯＨ）ｎｍ
＝２１０，２８０。 【００２９】ＣＪ−１５２０８−３：白色非結晶粉末；
1Ｈ ＮＭＲは、図４に示す；ＬＲＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／
ｚ）＝５３９（Ｍ＋Ｈ）+；ＵＶλmax（ＭｅＯＨ）ｎｍ
＝２１０。
【図面の簡単な説明】
【図１】化合物ＣＪ−１５２０８の1Ｈ ＮＭＲスペク
トルを示す図面である。 【図２】化合物ＣＪ−１５２０８−１の1Ｈ ＮＭＲス
ペクトルを示す図面である。 【図３】化合物ＣＪ−１５２０８−２の1Ｈ ＮＭＲス
ペクトルを示す図面である。 【図４】化合物ＣＪ−１５２０８−３の1Ｈ ＮＭＲス
ペクトルを示す図面である。
トルを示す図面である。 【図２】化合物ＣＪ−１５２０８−１の1Ｈ ＮＭＲス
ペクトルを示す図面である。 【図３】化合物ＣＪ−１５２０８−２の1Ｈ ＮＭＲス
ペクトルを示す図面である。 【図４】化合物ＣＪ−１５２０８−３の1Ｈ ＮＭＲス
ペクトルを示す図面である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ｃ１２Ｐ 21/04 Ｃ１２Ｒ 1:645
(Ｃ１２Ｐ 21/04 Ａ６１Ｋ 37/02
Ｃ１２Ｒ 1:645）
(72)発明者 吉川 展司
愛知県安城市日の出町４−15
(56)参考文献 特開 昭63−22524（ＪＰ，Ａ)
特表 平９−511490（ＪＰ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C12P 1/00 - 41/00
ＣＡ（ＳＴＮ)
ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 【請求項１】 （１）以下の化学式（Ｉ）： 【化１】で表される環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２０８； （２）テノマイセス・セルラタス（ＦＥＲＭ ＢＰ−５
７３１）から得られ、白色非結晶粉末であり、特性ＦＡ
Ｂマススペクトルがｍ／ｚ６１７（Ｍ＋Ｈ）＋であり、
ＵＶスペクトルのＵＶｍａｘが２１０ｎｍ及び２８０ｎ
ｍであり、１Ｈ ＮＭＲスペクトルが図２に示すとおり
であり、そしてＨＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳカラム
（６．０×１５０ｍｍ）を用いて、４２℃で、メタノー
ル−水（６０：４０）で、流速０．８ｍｌ／分で溶出］
における保持時間が１２．１分間である環状ペプチド化
合物ＣＪ−１５２０８−１； （３）テノマイセス・セルラタス（ＦＥＲＭ ＢＰ−５
７３１）から得られ、白色非結晶粉末であり、特性ＦＡ
Ｂマススペクトルがｍ／ｚ６７８（Ｍ＋Ｈ）＋であり、
ＵＶスペクトルのＵＶｍａｘが２１０ｎｍ及び２８０ｎ
ｍであり、１Ｈ ＮＭＲスペクトルが図３に示すとおり
であり、そしてＨＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳカラム
（６．０×１５０ｍｍ）を用いて、４２℃で、メタノー
ル−水（６０：４０）で、流速０．８ｍｌ／分で溶出］
における保持時間が１４．８分間である環状ペプチド化
合物ＣＪ−１５２０８−２；及び （４）テノマイセス・セルラタス（ＦＥＲＭ ＢＰ−５
７３１）から得られ、白色非結晶粉末であり、特性ＦＡ
Ｂマススペクトルがｍ／ｚ５３９（Ｍ＋Ｈ）＋であり、
ＵＶスペクトルのＵＶｍａｘが２１０ｎｍであり、１Ｈ
ＮＭＲスペクトルが図４に示すとおりであり、そして
ＨＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳカラム（６．０×１５０
ｍｍ）を用いて、４２℃で、メタノール−水（６０：４
０）で、流速０．８ｍｌ／分で溶出］における保持時間
が１７．８分間である環状ペプチド化合物ＣＪ−１５２
０８−３；からなる群から選択した環状ペプチド化合
物。
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