JP3498339B2 - リン脂質誘導体 - Google Patents
リン脂質誘導体Info
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規かつ有用なリン脂
質誘導体に関する。さらに詳しくは医薬の運搬体、検査
薬、診断薬、センサー、固定化触媒、バイオリアクタ
ー、バイオエレクトロニクス素子、マイクロカプセル代
替品など、種々の機能性リポソームまたは脂肪乳剤等の
小胞体の製造などに用いられるリン脂質誘導体に関す
る。 【０００２】 【従来の技術】リポソームはリン脂質の二分子膜からな
る小胞体であり、多分野での応用が試みられている。特
に、医薬運搬体、診断・検出用のセンサーなどへの応用
が注目されているが、リポソーム表面上または膜中に機
能性物質を固定して各種機能をもたせること、およびリ
ポソームの血中濃度を維持することなどが大きな課題と
なっている。 【０００３】従来、リポソーム表面上または膜中への機
能性物質の固定化に関しては、プルラン誘導体で被覆し
たリポソームの表面上の多糖上に置換したアミノエチル
カルバミルメチル基にγ−マレイミドブチルオキシサク
シニミジルを介して抗体フラグメントを結合させる方法
（Biochem. Biophys. Acta., 898, 323(1987)）、ある
いはあらかじめリポソーム膜形成成分中に糖脂質を加え
ておき、リポソーム形成後過よう素酸酸化を行い、生じ
たアルデヒド基と抗体とを反応させて固定化する方法
（J. Biol. Chem., 255, 10509(1980)）などがある。 【０００４】しかし、これらの従来法では、リポソーム
調製後にリポソーム膜表面上での多段階の化学反応を行
う必要があり、このため目的とする機能性物質の導入量
が低く制限され、また反応による副生成物や不純物が混
入し、リポソーム膜へのダメージが大きいなどの問題点
がある。 【０００５】一方、リポソームを生体内へ投与したと
き、その多くは肝臓、脾臓などの網内系器官で捕捉され
るため、十分な効果が得られないことが指摘されている
（Cancer Res., 43, 5328(1983)）。そこで、この網内
系器官で捕捉されてしまう問題点や、あるいはリポソー
ム自身の崩壊性・凝集性など安定性の低さに関する問題
点を改善する方法として、リポソームの表面にポリエチ
レングリコール鎖を導入することが試みられている（例
えば、特開平１−２４９７１７号公報、FEBS letters,
268, 235(1990)）。また、ポリエチレングリコールで修
飾されたリポソームは、長期間にわたり血液中濃度を維
持できることが明らかになっている（Biochem. Biophy
s. Acta., 1066, 29-36(1991)）。しかし、このような
方法により得られるポリエチレングリコール鎖の導入さ
れたリポソームは機能性物質と反応しないので、リポソ
ーム表面上に機能性物質を固定化することはできない。 【０００６】さらに、特開平４−３４６９１８号公報に
は、マレイミド基を有するリポソームにまずチオール基
を付与したタンパク質（チオール化タンパク質）を反応
させ、次いで残存マレイミド基にチオール基を付与した
ポリアルキレングリコール（チオール化ポリアルキレン
グリコール）部分を含む化合物を反応させることによ
り、網内系器官での取込の改善された薬剤含有抗体結合
リポソームが得られることが記載されている。しかし、
このリポソームでは、抗体がポリアルキレングリコール
層の下部に隠蔽され、標的部位の抗原との反応が妨げら
れるため、期待される効果が十分には得られないという
問題点がある。 【０００７】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ポリ
アルキレンオキシド鎖の先端に、簡単にかつ効率よく種
々の機能性物質を共有結合により固定化することができ
る新規かつ有用なリン脂質誘導体を提供することであ
る。 【０００８】 【課題を解決するための手段】本発明は、下記一般式
〔１〕で表わされるリン脂質誘導体である。 【化２】 〔式中、Ｒ1Ｃ（＝０）およびＲ2Ｃ（＝０）は炭素数３
〜３０の脂肪酸のアシル残基を表わし、同一でも異なっ
ていてもよい。Ｒ3は水素原子またはメチル基、ＡＯは
炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキ
レン基の平均付加モル数で、１〜１０００の正数を表わ
す。ｎが２以上の場合、オキシアルキレン基は同一でも
異なっていてもよく、またランダム状に付加していて
も、ブロック状に付加していてもよい。Ｍは水素原子ま
たはアルカリ金属原子を表わす。〕 【０００９】一般式〔１〕においてＲ1Ｃ（＝０）、Ｒ2
Ｃ（＝０）で表わされる脂肪酸のアシル残基は、炭素数
（カルボニル基の炭素も含む）３〜３０、好ましくは８
〜２０のアシル残基である。このようなアシル残基の具
体的なものとしては、プロピオン酸、酪酸、カプロン
酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデカ
ン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステ
アリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、ソ
ロチン酸、モンタン酸、メリシン酸、２−エチルヘキサ
ン酸等の飽和脂肪酸のアシル残基；オレイン酸、リノー
ル酸、リノレン酸、エルカ酸、２，４−オクタデカジエ
ン酸等の不飽和脂肪酸のアシル残基；イソステアリン酸
等の分岐脂肪酸のアシル残基；リシノール酸、１２−ヒ
ドロキシステアリン酸等のアルキル基中に水酸基を有す
る脂肪酸のアシル残基などがあげられる。 【００１０】本発明のリン脂質誘導体をリポソームまた
は脂肪乳剤などの製造に用いる場合は、Ｒ1Ｃ（＝
０）、Ｒ2Ｃ（＝０）で表わされる脂肪酸のアシル残基
は、安定なリポソームまたは脂肪乳剤が形成できるとい
う理由から、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン
酸、オレイン酸、２，４−オクタデカジエン酸のアシル
残基が好ましく、特にパルミチン酸、ステアリン酸、オ
レイン酸のアシル残基が好ましい。Ｒ1Ｃ（＝０）とＲ2
Ｃ（＝０）とは同一であってもよいし、異なっていても
よい。 【００１１】一般式〔１〕のＡＯで表わされるオキシア
ルキレン基は、炭素数２〜４のオキシアルキレン基であ
り、オキシエチレン基、オキシプロピレン基、オキシト
リメチレン基、オキシ−１−エチルエチレン基、オキシ
−１，２−ジメチルエチレン基、オキシテトラメチレン
基などがあげられる。これらのオキシアルキレン基は、
エチレンオキシド、プロピレンオキシド、オキセタン、
１−ブテンオキシド、２−ブテンオキシド、テトラヒド
ロフランなどのアルキレンオキシドを付加重合させた基
である。一般式〔１〕のｎは１〜１０００、好ましくは
１０〜３００、さらに好ましくは２０〜１２０の正数で
ある。 【００１２】ｎが２以上の場合、オキシアルキレン基の
種類は同一のものでも、異なるものでもよい。後者の場
合、ランダム状に付加していても、ブロック状に付加し
ていてもよい。親水性を付与する場合、ＡＯとしてはエ
チレンオキシドが単独で付加したものが好ましく、この
場合、ｎが１０以上のものが好ましい。また種類の異な
るアルキレンオキシドが付加している場合、エチレンオ
キシドが２０モル％以上、好ましくは５０モル％以上付
加しているのが望ましい。ポリアルキレンオキシド鎖に
親油性を付与する場合はエチレンオキシド以外の付加モ
ル数を多くする。 【００１３】一般式〔１〕のＲ3は水素原子またはメチ
ル基である。一般式〔１〕のＭは水素原子またはナトリ
ウムもしくはカリウム等のアルカリ金属原子である。 【００１４】一般式〔１〕で表わされるリン脂質誘導体
は、例えば次のような２段階の反応により、容易に製造
することができる。第１段階目の反応では、ホスホリパ
ーゼＤ酵素（ＰＬase−Ｄ）の存在下に、リン脂質とポ
リアルキレングリコールとを反応させ、ホスファチジル
＝ポリアルキレングリコールを合成する。このとき使用
するホスホリパーゼＤとしては、市販品または「J.Bio
l.Chem.,242,477-484(1967)」に記載されている方法な
どにより抽出・精製したものであってもよい。またリン
脂質としては、ホスファチジルエタノールアミン、ホス
ファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチ
ジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホス
ファチジン酸などが使用できる。ホスホリパーゼＤの使
用量は、特に限定されないが、リン脂質１ｇに対して１
００〜５００単位とするのが好ましい。また、リン脂質
とポリアルキレングリコールとの仕込モル比は、リン脂
質１モルに対してポリアルキレングリコール５〜１００
モルとするのが好ましい。 【００１５】反応は酢酸緩衝液、炭酸緩衝液等の水系溶
媒、またはこれらの水系溶媒とクロロホルム、ベンゼ
ン、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等
の有機溶媒との混合溶媒中で行うのが好ましい。反応温
度は０〜８０℃、好ましくは３０〜４０℃、反応時間は
１０分間〜１７０時間、好ましくは３０分間〜２４時間
とするのが望ましい。このようにして得られたホスファ
チジル＝ポリアルキレングリコールは、そのまま、また
は再沈殿、カラム処理、吸着剤処理、イオン交換、ゲル
濾過、限外濾過、透析などの方法により単離・精製し
て、次の第２段階目の反応に供する。 【００１６】第２段階目の反応では、第１段階目の反応
で得られたホスファチジル＝ポリアルキレングリコール
にＮ，Ｎ′−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）また
はその誘導体を反応させ、目的とするリン脂質誘導体を
合成する。両者の仕込モル比は特に限定されないが、ホ
スファチジル＝ポリアルキレングリコール１モルに対し
てＮ，Ｎ′−カルボニルジイミダゾールまたはその誘導
体０．１〜１００モル、好ましくは１〜１０モルとする
のが望ましい。 【００１７】反応はクロロホルム、ベンゼン、トルエ
ン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の有機溶媒
中で行うのが好ましい。反応温度は−１００〜１００
℃、好ましくは０〜４０℃、反応時間は１分間〜４８時
間、好ましくは１０分間〜６時間とするのが望ましい。
反応終了後は、蒸留、再結晶、再沈澱、吸着剤処理、カ
ラム処理、イオン交換、ゲル濾過、限外濾過、透析など
の方法により単離・精製することができる。 【００１８】ポリアルキレングリコールとしてポリエチ
レングリコールを用いた場合の反応式を次に示す。な
お、式中Ｒ1（Ｃ＝Ｏ）、Ｒ2（Ｃ＝Ｏ）、Ｍおよびｎは
前記と同じもの、ＰＬ−ＰＥＧはホスファチジル＝ポリ
エチレングリコールを示す。 【化３】【００１９】このようにして得られたリン脂質誘導体
は、小胞体形成成分などとして使用することができる。
ここで小胞体とは、小胞体形成成分の親水基が界面の水
相に向って配向した構造を有する粒子を意味する。具体
的なものとしては、二分子膜からなる閉鎖小胞であるリ
ポソーム、植物油およびリン脂質などの混合物が乳化さ
れた脂肪乳剤、またはミセルなどがあげられる。 【００２０】本発明のリン脂質誘導体は、アミノ基、水
酸基またはチオール基などの官能基、特に第１級アミノ
基に対して高い反応性のあるオキシカルボニルイミダゾ
ール基を有しているので、このような官能基を有する機
能性物質と容易に反応し、共有結合が形成される。この
ため、本発明のリン脂質誘導体を小胞体形成成分として
用いることにより、小胞体にポリアルキレンオキシド鎖
を導入できるとともに、前記官能基を有する機能性物質
に対する反応性を付与することができ、反応性小胞体を
製造することができる。 【００２１】本発明のリン脂質誘導体を用いて小胞体を
製造する場合、リン脂質誘導体は一種単独で、または二
種以上組合せて、あるいは小胞体を形成しうる他の小胞
体形成成分、例えば大豆レシチン、卵黄レシチン、その
他のリン脂質類、コレステロールやイントラリピッド
（大塚製薬（株）、商標）、大豆油、サフラワー油など
と混合して使用することができ、反応性リポソームをは
じめ反応性脂肪乳剤、反応性ミセルなどの反応性小胞体
を形成することができる。この場合、小胞体は公知の方
法により製造することができる。本発明のリン脂質誘導
体を用いて得られた反応性小胞体は、一般式〔１〕で表
わされる化合物中のオキシカルボニルイミダゾール基を
官能基として利用して、種々の機能性物質を共有結合に
より導入することができる。 【００２２】次に本発明のリン脂質誘導体を用いて製造
したそれぞれの反応性小胞体について詳しく説明する。
代表的な反応性小胞体である反応性リポソームは、リン
脂質誘導体を膜形成成分（小胞体形成成分）として含有
するものである。リン脂質誘導体の含有量は、リン脂質
誘導体および他の膜形成成分の合計量に対して０．００
１〜１００モル％、好ましくは０．５〜３０モル％であ
るのが望ましい。０．００１モル％未満では期待される
効果が小さくなるため、一般的には使用されない。リン
脂質誘導体は、一種単独で使用することもできるし、二
種以上のものを組合せて使用することもできる。 【００２３】リン脂質誘導体と混合して用いられる他の
膜形成成分としては、従来からリポソームの膜形成成分
として用いられているものが制限なく使用できる。具体
的には、ジホスファチジルグリセロール、カルジオリピ
ン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリ
ン、ホスファチジルエタノールアミン、大豆レシチン、
卵黄レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジル
グリセロール等のリン脂質および脂肪酸部に不飽和基を
有する重合性リン脂質；スルホキシリボシルジグリセリ
ド、ジガラクトシルジグリセリド、ラクトシルジグリセ
リド等の糖脂質類；コレステロール等の非極性脂質；そ
の他には、非イオン性界面活性剤、ホスファチジルポリ
エチレングリコール、「Biochem. Biophys. Acta., 106
6, 29-36(1991)」に記載されているホスファチジルエタ
ノールアミンとポリエチレングリコールとの反応物、お
よびこれらの混合物などがあげられる。 【００２４】反応性リポソームは、リン脂質誘導体およ
びレシチン、その他のリン脂質、コレステロール等の他
の膜形成成分を、有機溶媒等の適当な溶媒に溶解し、エ
クスツルージョン法、ボルテックスミキサー法、超音波
法、界面活性剤除去法、逆層蒸発法、エタノール注入
法、プレベシクル法、フレンチプレス法、Ｗ／Ｏ／Ｗエ
マルジョン法、アニーリング法、凍結融解法など、種々
の公知の方法によりリポソーム化することにより製造す
ることができる。また、これらの製造法を選択すること
により、多重層リポソーム、小さな一枚膜リポソーム、
大きな一枚膜リポソームなど、種々の大きさや形態を有
する反応性リポソームを製造することができる。 【００２５】このようにして得られた反応性リポソーム
は、リポソーム膜の内外表面にポリアルキレンオキシド
からなるスペーサーを介してオキシカルボニルイミダゾ
ール基が結合しているので、アミノ基、水酸基、チオー
ル基などの官能基、特に第１級アミノ基を有する機能性
物質を効率よくかつ簡単にリポソームの二分子膜上にポ
リアルキレンオキシドからなるスペーサーを介して、ウ
レタン結合、カーボネート結合またはチオカーボネート
結合により化学的に固定化することができる。 【００２６】反応性リポソームに固定化できる機能性物
質としては、例えば色素、染料、放射線ラベル化合物、
蛍光化合物、化学発光化合物、電極感応性化合物等の標
識物質；光応答性化合物、ｐＨ応答性化合物、熱応答性
化合物等の外部刺激応答性化合物；酵素、抗体、その他
のタンパク質、糖、脂質、糖タンパク質、糖脂質、ホル
モン等の生理活性物質；医薬などがあげられる。 【００２７】反応性リポソーム上への機能性物質の固定
化反応は、種々の緩衝液等の水系溶媒、またはこれらの
水系溶媒とアセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフ
ラン、１，４−ジオキサン、ジメチルホルムアミド、ジ
メチルアセタミド、ジメチルスルホキシド、ピロリドン
等の有機溶媒との混合溶媒中で、反応性リポソームと機
能性物質とを−１０〜１２０℃、アミノ基との反応の場
合は好ましくは０〜６０℃、さらに好ましくは０〜４０
℃、水酸基またはチオール基との反応の場合は好ましく
は４０〜１２０℃で、５分間〜１０００時間、好ましく
は３０分間〜７２時間攪拌下に反応させる方法などによ
り、一段階で容易に行うことができる。これらの条件外
では、リポソームの安定性が悪くなるため好ましくな
い。 【００２８】リポソーム表面上でのアミノ基を有する機
能性物質の固定化反応を模式的に示すと次のようにな
る。式中、Ｒ3、ＡＯ、ｎは前記と同じものを示す。 【化４】 【００２９】また、反応性リポソームの内部には、一般
のリポソームと同様に種々の物質を公知の方法により封
入することが可能である。被封入物質としては、例えば
色素、染料、放射線ラベル化合物、蛍光化合物、化学発
光化合物等の標識物質；光応答性化合物、ｐＨ応答性化
合物、熱応答性化合物、電極感応性化合物等の外部刺激
応答性化合物；酵素、抗体、その他のタンパク質、糖、
脂質、糖タンパク質、糖脂質、ホルモン等の生理活性物
質；医薬；ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコー
ル、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸等の水溶性
高分子類などがあげられる。固定化反応または封入操作
の終了後は、必要によりゲル濾過、限外濾過、透析、遠
心分離、静置沈降分離等の方法により精製を行うことが
できる。 【００３０】機能性物質を固定化したリポソームは、ポ
リアルキレンオキシド鎖の先端に機能性物質が固定化さ
れているので、ポリアルキレンオキシド鎖に邪魔される
ことなく機能性物質の作用が十分に発揮される。また、
ポリアルキレンオキシド鎖が導入されているので、従来
からのポリアルキレンオキシド鎖導入の効果、例えば長
期間にわたる血液中濃度の維持、非免疫原性、リポソー
ム内部に封入した物質の漏れ防止などの効果も期待でき
る。このため反応性リポソームは、医薬の運搬体、検査
薬、診断薬、センサー、固定化触媒、バイオリアクタ
ー、バイオエレクトロニクス素子、マイクロカプセル代
替品など、種々の機能性リポソームとして利用できる。 【００３１】なお、反応性リポソームを製造する際、他
の膜形成成分として重合性リン脂質を配合することによ
り、重合性の反応性リポソームとすることができる。重
合性のリン脂質としては、公知の重合性リン脂質を使用
することができるが、例えば１，２−ジ（２，４−オク
タデカジエノイル）−３−ホスファチジルコリンの他、
野島庄七、砂本順三、井上圭三編集、１９８８年南江堂
発行の「リポソーム」ｐ３１３〜３１５に記載のものな
どがあげられる。これらの中では、１，２−ジ（２，４
−オクタデカジエノイル）−３−ホスファチジルコリン
が好ましい。 【００３２】重合性リポソームは、リポソーム調製後
に、光重合開始剤の存在下または非存在下でＵＶ、γ
線、電子線などの光照射を行うことにより、あるいはレ
ドックス開始剤系により、あるいはアゾ系開始剤または
有機過酸化物などの存在下で加熱を行うことにより、容
易に重合を行うことができる。このようにして得られた
重合後のリポソームは、優れた安定性を有しているの
で、水溶液に分散させたままで、あるいは凍結乾燥等に
より粉末状に調製し、安定して使用することができる。 【００３３】他の反応性小胞体としての反応性脂肪乳剤
は、本発明のリン脂質誘導体と、大豆油、サフラワー油
等の植物油と、大豆レシチン、卵黄レシチン等のリン脂
質と、必要により添加される他の添加剤、例えばイント
ラリピッド（大塚製薬（株）製、商標）、乳化補助剤、
安定化剤、等張化剤、脂溶性医薬、脂溶性生理活性物質
などを含む油脂混合物が乳化されたものである。油脂混
合物中に占めるリン脂質誘導体の含有量は、０．００１
〜５０モル％、好ましくは０．５〜３０モル％であるの
が望ましい。 【００３４】反応性脂肪乳剤は、公知の方法により製造
することができる。例えば、本発明のリン脂質誘導体、
植物油、他のリン脂質および必要により配合する添加剤
を混合、加熱し、水を加えてホモミキサー等で粗乳化
し、次にマントン−ガウリン型の加圧噴射式ホモジナイ
ザー等で均質化する方法などにより製造することができ
る。 【００３５】このようにして得られた反応性脂肪乳剤に
は、反応性リポソームの場合と同様にして、同様の機能
性物質を容易に固定化することができる。このため反応
性脂肪乳剤は、医薬の運般体、検査薬、診断薬、センサ
ー、固定化触媒などとして利用できる。 【００３６】上記以外の反応性小胞体である反応性ミセ
ルは、本発明のリン脂質誘導体だけからなるものであっ
ても、レシチン、その他のリン脂質、コレステロール等
の他の成分が含有されているものであってもよい。反応
性ミセルも反応性脂肪乳剤と同様にして機能性物質を固
定化することができ、同様の用途に利用できる。 【００３７】 【発明の効果】本発明のリン脂質誘導体は新規かつ有用
である。本発明のリン脂質誘導体を小胞体形成成分とし
て用いることにより、小胞体にポリアルキレンオキシド
鎖を導入できるとともに、このポリアルキレンオキシド
鎖の先端に、簡単にかつ効率よく種々の機能性物質を共
有結合により固定化することができ、しかも機能性物質
の導入量を多くすることができる。 【００３８】 【実施例】以下、実施例により、さらに詳細な説明を行
うが、本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ ジパルミトイルホスファチジルコリン０．５ｇ（０．６
５ｍｍｏｌ）およびポリエチレングリコール（Ｍｗ≒２
０００、ｎ≒４５）５ｇ（１．７ｍｍｏｌ）を溶解させ
たクロロホルム溶液４０ｍｌに、ホスホリパーゼＤ（東
洋醸造（株）製）４０単位を溶解させた１Ｍ酢酸緩衝液
（ｐＨ５．６）２０ｍｌを加え、４０℃で１２時間攪拌
して反応させた。次に、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶
液で中和した後、有機層を減圧下で濃縮した。得られた
反応混合物をシリカゲルカラム（２０％メタノール／ク
ロロホルム）を用いて分画し、濃縮した後、少量のクロ
ロホルムに溶解させ、これをジエチルエーテルに再沈殿
することにより、ジパルミトイルホスファチジル＝ポリ
エチレングリコールを得た（収率３０％）。 【００３９】次に、乾燥させたクロロホルム１０ｍｌ中
に、上記ジパルミトイルホスファチジル＝ポリエチレン
グリコール１００ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）およびＮ，
Ｎ′−ジカルボニルイミダゾール８７ｍｇ（０．５４ｍ
ｍｏｌ）を加え、室温で６時間攪拌した。得られた反応
混合物をジエチルエール１００ｍｌ中に再沈殿させ、目
的の下記反応性リン脂質誘導体を得た（収率９２％）。
反応の進行は、１Ｒスペクトル（ＫＢｒ法）において、
ポリエチレングリコール末端の水酸基（ＯＨ伸縮、３４
２８ｃｍ-1）の消失およびオキシカルボニルイミダゾー
ル基（カルボニル結合）の生成（Ｃ＝Ｏ伸縮、１７６０
ｃｍ-1）により確認した。 【化５】 【００４０】精製物は、1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲスペク
トルにより確認した。結果は次の通りである。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、δ；ｐｐｍ、２７０ＭＨｚ） ８．１４（ａ；ｓ、１Ｈ） ７．４３（ｂ；ｓ、１Ｈ） ７．０８（ｃ；ｓ、１Ｈ） ５．２３（６；ｍ、１Ｈ） ４．６７（ｄ；ｔ、２Ｈ、Ｊ＝２．５） ４．００（５、７；ｍ、４Ｈ） ３．６５（ｅ；ｍ、約１８０Ｈ） ２．３１（４、４′；ｍ、４Ｈ） １．６０（３、３′；ｍ、４Ｈ） １．２９（２、２′；ｍ、４８Ｈ） ０．９０（１、１′；ｍ、６Ｈ） ＩＲ；（ＫＢｒ、ｃｍ-1） １７６０（オキシカルボニルイミダゾール基、Ｃ＝Ｏ伸
縮振動） １７２８（エステル、Ｃ＝Ｏ伸縮振動） 【００４１】実施例２ 実施例１と同様にして、ただしポリエチレングリコール
の代わりに分子量約５０００（ｎ≒１１５）のポリエチ
レングリコールを用いて、目的の下記反応性リン脂質誘
導体を得た。 【化６】 【００４２】精製物は、1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲスペク
トルにより確認した。結果は次の通りである。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、δ；ｐｐｍ、２７０ＭＨｚ） ８．１４（ａ；ｓ、１Ｈ） ７．４３（ｂ；ｓ、１Ｈ） ７．０８（ｃ；ｓ、１Ｈ） ５．２３（６；ｍ、１Ｈ） ４．６７（ｄ；ｔ、２Ｈ、Ｊ＝２．５） ４．００（５、７；ｍ、４Ｈ） ３．６５（ｅ；ｍ、約４５５Ｈ） ２．３１（４、４′；ｍ、４Ｈ） １．６０（３、３′；ｍ、４Ｈ） １．２９（２、２′；ｍ、４８Ｈ） ０．９０（１、１′；ｍ、６Ｈ） ＩＲ；（ＫＢｒ、ｃｍ-1） １７６０（オキシカルボニルイミダゾール基、Ｃ＝Ｏ伸
縮振動） １７２８（エステル、Ｃ＝Ｏ伸縮振動） 【００４３】実施例３ 実施例１と同様にして、ただしポリエチレングリコール
の代わりに、（オキシエチレン基）ｐ／（オキシプロピ
レン基）ｑ／（オキシエチレン基）ｒがブロック状に付
加したポリアルキレングリコール（ｐ≒２０、ｑ≒５、
ｒ≒２０）を用いて、目的の下記反応性リン脂質誘導体
を得た。 【化７】 【００４４】精製物は、1Ｈ−ＮＭＲにより確認した。
結果は次の通りである。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、δ；ｐｐｍ、２７０ＭＨｚ） ８．１４（ａ；ｓ、１Ｈ） ７．４３（ｂ；ｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．３） ７．０８（ｃ；ｔ、１Ｈ、Ｊ＝０．８） ５．２３（６；ｍ、１Ｈ） ４．６７（ｄ；ｔ、２Ｈ、Ｊ＝２．５） ４．００（５、７；ｍ、４Ｈ） ３．６０（ｅ、ｆ、ｇ、ｊ；ｍ、約１９０Ｈ） ２．３１（４、４′；ｍ、４Ｈ） １．６０（３、３′；ｍ、４Ｈ） １．２６（２、２′；ｍ、４８Ｈ） １．１２（ｈ；ｍ、１５Ｈ） ０．８８（１、１′；ｔ、６Ｈ、Ｊ＝６．４）
質誘導体に関する。さらに詳しくは医薬の運搬体、検査
薬、診断薬、センサー、固定化触媒、バイオリアクタ
ー、バイオエレクトロニクス素子、マイクロカプセル代
替品など、種々の機能性リポソームまたは脂肪乳剤等の
小胞体の製造などに用いられるリン脂質誘導体に関す
る。 【０００２】 【従来の技術】リポソームはリン脂質の二分子膜からな
る小胞体であり、多分野での応用が試みられている。特
に、医薬運搬体、診断・検出用のセンサーなどへの応用
が注目されているが、リポソーム表面上または膜中に機
能性物質を固定して各種機能をもたせること、およびリ
ポソームの血中濃度を維持することなどが大きな課題と
なっている。 【０００３】従来、リポソーム表面上または膜中への機
能性物質の固定化に関しては、プルラン誘導体で被覆し
たリポソームの表面上の多糖上に置換したアミノエチル
カルバミルメチル基にγ−マレイミドブチルオキシサク
シニミジルを介して抗体フラグメントを結合させる方法
（Biochem. Biophys. Acta., 898, 323(1987)）、ある
いはあらかじめリポソーム膜形成成分中に糖脂質を加え
ておき、リポソーム形成後過よう素酸酸化を行い、生じ
たアルデヒド基と抗体とを反応させて固定化する方法
（J. Biol. Chem., 255, 10509(1980)）などがある。 【０００４】しかし、これらの従来法では、リポソーム
調製後にリポソーム膜表面上での多段階の化学反応を行
う必要があり、このため目的とする機能性物質の導入量
が低く制限され、また反応による副生成物や不純物が混
入し、リポソーム膜へのダメージが大きいなどの問題点
がある。 【０００５】一方、リポソームを生体内へ投与したと
き、その多くは肝臓、脾臓などの網内系器官で捕捉され
るため、十分な効果が得られないことが指摘されている
（Cancer Res., 43, 5328(1983)）。そこで、この網内
系器官で捕捉されてしまう問題点や、あるいはリポソー
ム自身の崩壊性・凝集性など安定性の低さに関する問題
点を改善する方法として、リポソームの表面にポリエチ
レングリコール鎖を導入することが試みられている（例
えば、特開平１−２４９７１７号公報、FEBS letters,
268, 235(1990)）。また、ポリエチレングリコールで修
飾されたリポソームは、長期間にわたり血液中濃度を維
持できることが明らかになっている（Biochem. Biophy
s. Acta., 1066, 29-36(1991)）。しかし、このような
方法により得られるポリエチレングリコール鎖の導入さ
れたリポソームは機能性物質と反応しないので、リポソ
ーム表面上に機能性物質を固定化することはできない。 【０００６】さらに、特開平４−３４６９１８号公報に
は、マレイミド基を有するリポソームにまずチオール基
を付与したタンパク質（チオール化タンパク質）を反応
させ、次いで残存マレイミド基にチオール基を付与した
ポリアルキレングリコール（チオール化ポリアルキレン
グリコール）部分を含む化合物を反応させることによ
り、網内系器官での取込の改善された薬剤含有抗体結合
リポソームが得られることが記載されている。しかし、
このリポソームでは、抗体がポリアルキレングリコール
層の下部に隠蔽され、標的部位の抗原との反応が妨げら
れるため、期待される効果が十分には得られないという
問題点がある。 【０００７】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ポリ
アルキレンオキシド鎖の先端に、簡単にかつ効率よく種
々の機能性物質を共有結合により固定化することができ
る新規かつ有用なリン脂質誘導体を提供することであ
る。 【０００８】 【課題を解決するための手段】本発明は、下記一般式
〔１〕で表わされるリン脂質誘導体である。 【化２】 〔式中、Ｒ1Ｃ（＝０）およびＲ2Ｃ（＝０）は炭素数３
〜３０の脂肪酸のアシル残基を表わし、同一でも異なっ
ていてもよい。Ｒ3は水素原子またはメチル基、ＡＯは
炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキ
レン基の平均付加モル数で、１〜１０００の正数を表わ
す。ｎが２以上の場合、オキシアルキレン基は同一でも
異なっていてもよく、またランダム状に付加していて
も、ブロック状に付加していてもよい。Ｍは水素原子ま
たはアルカリ金属原子を表わす。〕 【０００９】一般式〔１〕においてＲ1Ｃ（＝０）、Ｒ2
Ｃ（＝０）で表わされる脂肪酸のアシル残基は、炭素数
（カルボニル基の炭素も含む）３〜３０、好ましくは８
〜２０のアシル残基である。このようなアシル残基の具
体的なものとしては、プロピオン酸、酪酸、カプロン
酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデカ
ン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステ
アリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、ソ
ロチン酸、モンタン酸、メリシン酸、２−エチルヘキサ
ン酸等の飽和脂肪酸のアシル残基；オレイン酸、リノー
ル酸、リノレン酸、エルカ酸、２，４−オクタデカジエ
ン酸等の不飽和脂肪酸のアシル残基；イソステアリン酸
等の分岐脂肪酸のアシル残基；リシノール酸、１２−ヒ
ドロキシステアリン酸等のアルキル基中に水酸基を有す
る脂肪酸のアシル残基などがあげられる。 【００１０】本発明のリン脂質誘導体をリポソームまた
は脂肪乳剤などの製造に用いる場合は、Ｒ1Ｃ（＝
０）、Ｒ2Ｃ（＝０）で表わされる脂肪酸のアシル残基
は、安定なリポソームまたは脂肪乳剤が形成できるとい
う理由から、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン
酸、オレイン酸、２，４−オクタデカジエン酸のアシル
残基が好ましく、特にパルミチン酸、ステアリン酸、オ
レイン酸のアシル残基が好ましい。Ｒ1Ｃ（＝０）とＲ2
Ｃ（＝０）とは同一であってもよいし、異なっていても
よい。 【００１１】一般式〔１〕のＡＯで表わされるオキシア
ルキレン基は、炭素数２〜４のオキシアルキレン基であ
り、オキシエチレン基、オキシプロピレン基、オキシト
リメチレン基、オキシ−１−エチルエチレン基、オキシ
−１，２−ジメチルエチレン基、オキシテトラメチレン
基などがあげられる。これらのオキシアルキレン基は、
エチレンオキシド、プロピレンオキシド、オキセタン、
１−ブテンオキシド、２−ブテンオキシド、テトラヒド
ロフランなどのアルキレンオキシドを付加重合させた基
である。一般式〔１〕のｎは１〜１０００、好ましくは
１０〜３００、さらに好ましくは２０〜１２０の正数で
ある。 【００１２】ｎが２以上の場合、オキシアルキレン基の
種類は同一のものでも、異なるものでもよい。後者の場
合、ランダム状に付加していても、ブロック状に付加し
ていてもよい。親水性を付与する場合、ＡＯとしてはエ
チレンオキシドが単独で付加したものが好ましく、この
場合、ｎが１０以上のものが好ましい。また種類の異な
るアルキレンオキシドが付加している場合、エチレンオ
キシドが２０モル％以上、好ましくは５０モル％以上付
加しているのが望ましい。ポリアルキレンオキシド鎖に
親油性を付与する場合はエチレンオキシド以外の付加モ
ル数を多くする。 【００１３】一般式〔１〕のＲ3は水素原子またはメチ
ル基である。一般式〔１〕のＭは水素原子またはナトリ
ウムもしくはカリウム等のアルカリ金属原子である。 【００１４】一般式〔１〕で表わされるリン脂質誘導体
は、例えば次のような２段階の反応により、容易に製造
することができる。第１段階目の反応では、ホスホリパ
ーゼＤ酵素（ＰＬase−Ｄ）の存在下に、リン脂質とポ
リアルキレングリコールとを反応させ、ホスファチジル
＝ポリアルキレングリコールを合成する。このとき使用
するホスホリパーゼＤとしては、市販品または「J.Bio
l.Chem.,242,477-484(1967)」に記載されている方法な
どにより抽出・精製したものであってもよい。またリン
脂質としては、ホスファチジルエタノールアミン、ホス
ファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチ
ジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホス
ファチジン酸などが使用できる。ホスホリパーゼＤの使
用量は、特に限定されないが、リン脂質１ｇに対して１
００〜５００単位とするのが好ましい。また、リン脂質
とポリアルキレングリコールとの仕込モル比は、リン脂
質１モルに対してポリアルキレングリコール５〜１００
モルとするのが好ましい。 【００１５】反応は酢酸緩衝液、炭酸緩衝液等の水系溶
媒、またはこれらの水系溶媒とクロロホルム、ベンゼ
ン、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等
の有機溶媒との混合溶媒中で行うのが好ましい。反応温
度は０〜８０℃、好ましくは３０〜４０℃、反応時間は
１０分間〜１７０時間、好ましくは３０分間〜２４時間
とするのが望ましい。このようにして得られたホスファ
チジル＝ポリアルキレングリコールは、そのまま、また
は再沈殿、カラム処理、吸着剤処理、イオン交換、ゲル
濾過、限外濾過、透析などの方法により単離・精製し
て、次の第２段階目の反応に供する。 【００１６】第２段階目の反応では、第１段階目の反応
で得られたホスファチジル＝ポリアルキレングリコール
にＮ，Ｎ′−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）また
はその誘導体を反応させ、目的とするリン脂質誘導体を
合成する。両者の仕込モル比は特に限定されないが、ホ
スファチジル＝ポリアルキレングリコール１モルに対し
てＮ，Ｎ′−カルボニルジイミダゾールまたはその誘導
体０．１〜１００モル、好ましくは１〜１０モルとする
のが望ましい。 【００１７】反応はクロロホルム、ベンゼン、トルエ
ン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の有機溶媒
中で行うのが好ましい。反応温度は−１００〜１００
℃、好ましくは０〜４０℃、反応時間は１分間〜４８時
間、好ましくは１０分間〜６時間とするのが望ましい。
反応終了後は、蒸留、再結晶、再沈澱、吸着剤処理、カ
ラム処理、イオン交換、ゲル濾過、限外濾過、透析など
の方法により単離・精製することができる。 【００１８】ポリアルキレングリコールとしてポリエチ
レングリコールを用いた場合の反応式を次に示す。な
お、式中Ｒ1（Ｃ＝Ｏ）、Ｒ2（Ｃ＝Ｏ）、Ｍおよびｎは
前記と同じもの、ＰＬ−ＰＥＧはホスファチジル＝ポリ
エチレングリコールを示す。 【化３】【００１９】このようにして得られたリン脂質誘導体
は、小胞体形成成分などとして使用することができる。
ここで小胞体とは、小胞体形成成分の親水基が界面の水
相に向って配向した構造を有する粒子を意味する。具体
的なものとしては、二分子膜からなる閉鎖小胞であるリ
ポソーム、植物油およびリン脂質などの混合物が乳化さ
れた脂肪乳剤、またはミセルなどがあげられる。 【００２０】本発明のリン脂質誘導体は、アミノ基、水
酸基またはチオール基などの官能基、特に第１級アミノ
基に対して高い反応性のあるオキシカルボニルイミダゾ
ール基を有しているので、このような官能基を有する機
能性物質と容易に反応し、共有結合が形成される。この
ため、本発明のリン脂質誘導体を小胞体形成成分として
用いることにより、小胞体にポリアルキレンオキシド鎖
を導入できるとともに、前記官能基を有する機能性物質
に対する反応性を付与することができ、反応性小胞体を
製造することができる。 【００２１】本発明のリン脂質誘導体を用いて小胞体を
製造する場合、リン脂質誘導体は一種単独で、または二
種以上組合せて、あるいは小胞体を形成しうる他の小胞
体形成成分、例えば大豆レシチン、卵黄レシチン、その
他のリン脂質類、コレステロールやイントラリピッド
（大塚製薬（株）、商標）、大豆油、サフラワー油など
と混合して使用することができ、反応性リポソームをは
じめ反応性脂肪乳剤、反応性ミセルなどの反応性小胞体
を形成することができる。この場合、小胞体は公知の方
法により製造することができる。本発明のリン脂質誘導
体を用いて得られた反応性小胞体は、一般式〔１〕で表
わされる化合物中のオキシカルボニルイミダゾール基を
官能基として利用して、種々の機能性物質を共有結合に
より導入することができる。 【００２２】次に本発明のリン脂質誘導体を用いて製造
したそれぞれの反応性小胞体について詳しく説明する。
代表的な反応性小胞体である反応性リポソームは、リン
脂質誘導体を膜形成成分（小胞体形成成分）として含有
するものである。リン脂質誘導体の含有量は、リン脂質
誘導体および他の膜形成成分の合計量に対して０．００
１〜１００モル％、好ましくは０．５〜３０モル％であ
るのが望ましい。０．００１モル％未満では期待される
効果が小さくなるため、一般的には使用されない。リン
脂質誘導体は、一種単独で使用することもできるし、二
種以上のものを組合せて使用することもできる。 【００２３】リン脂質誘導体と混合して用いられる他の
膜形成成分としては、従来からリポソームの膜形成成分
として用いられているものが制限なく使用できる。具体
的には、ジホスファチジルグリセロール、カルジオリピ
ン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリ
ン、ホスファチジルエタノールアミン、大豆レシチン、
卵黄レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジル
グリセロール等のリン脂質および脂肪酸部に不飽和基を
有する重合性リン脂質；スルホキシリボシルジグリセリ
ド、ジガラクトシルジグリセリド、ラクトシルジグリセ
リド等の糖脂質類；コレステロール等の非極性脂質；そ
の他には、非イオン性界面活性剤、ホスファチジルポリ
エチレングリコール、「Biochem. Biophys. Acta., 106
6, 29-36(1991)」に記載されているホスファチジルエタ
ノールアミンとポリエチレングリコールとの反応物、お
よびこれらの混合物などがあげられる。 【００２４】反応性リポソームは、リン脂質誘導体およ
びレシチン、その他のリン脂質、コレステロール等の他
の膜形成成分を、有機溶媒等の適当な溶媒に溶解し、エ
クスツルージョン法、ボルテックスミキサー法、超音波
法、界面活性剤除去法、逆層蒸発法、エタノール注入
法、プレベシクル法、フレンチプレス法、Ｗ／Ｏ／Ｗエ
マルジョン法、アニーリング法、凍結融解法など、種々
の公知の方法によりリポソーム化することにより製造す
ることができる。また、これらの製造法を選択すること
により、多重層リポソーム、小さな一枚膜リポソーム、
大きな一枚膜リポソームなど、種々の大きさや形態を有
する反応性リポソームを製造することができる。 【００２５】このようにして得られた反応性リポソーム
は、リポソーム膜の内外表面にポリアルキレンオキシド
からなるスペーサーを介してオキシカルボニルイミダゾ
ール基が結合しているので、アミノ基、水酸基、チオー
ル基などの官能基、特に第１級アミノ基を有する機能性
物質を効率よくかつ簡単にリポソームの二分子膜上にポ
リアルキレンオキシドからなるスペーサーを介して、ウ
レタン結合、カーボネート結合またはチオカーボネート
結合により化学的に固定化することができる。 【００２６】反応性リポソームに固定化できる機能性物
質としては、例えば色素、染料、放射線ラベル化合物、
蛍光化合物、化学発光化合物、電極感応性化合物等の標
識物質；光応答性化合物、ｐＨ応答性化合物、熱応答性
化合物等の外部刺激応答性化合物；酵素、抗体、その他
のタンパク質、糖、脂質、糖タンパク質、糖脂質、ホル
モン等の生理活性物質；医薬などがあげられる。 【００２７】反応性リポソーム上への機能性物質の固定
化反応は、種々の緩衝液等の水系溶媒、またはこれらの
水系溶媒とアセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフ
ラン、１，４−ジオキサン、ジメチルホルムアミド、ジ
メチルアセタミド、ジメチルスルホキシド、ピロリドン
等の有機溶媒との混合溶媒中で、反応性リポソームと機
能性物質とを−１０〜１２０℃、アミノ基との反応の場
合は好ましくは０〜６０℃、さらに好ましくは０〜４０
℃、水酸基またはチオール基との反応の場合は好ましく
は４０〜１２０℃で、５分間〜１０００時間、好ましく
は３０分間〜７２時間攪拌下に反応させる方法などによ
り、一段階で容易に行うことができる。これらの条件外
では、リポソームの安定性が悪くなるため好ましくな
い。 【００２８】リポソーム表面上でのアミノ基を有する機
能性物質の固定化反応を模式的に示すと次のようにな
る。式中、Ｒ3、ＡＯ、ｎは前記と同じものを示す。 【化４】 【００２９】また、反応性リポソームの内部には、一般
のリポソームと同様に種々の物質を公知の方法により封
入することが可能である。被封入物質としては、例えば
色素、染料、放射線ラベル化合物、蛍光化合物、化学発
光化合物等の標識物質；光応答性化合物、ｐＨ応答性化
合物、熱応答性化合物、電極感応性化合物等の外部刺激
応答性化合物；酵素、抗体、その他のタンパク質、糖、
脂質、糖タンパク質、糖脂質、ホルモン等の生理活性物
質；医薬；ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコー
ル、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸等の水溶性
高分子類などがあげられる。固定化反応または封入操作
の終了後は、必要によりゲル濾過、限外濾過、透析、遠
心分離、静置沈降分離等の方法により精製を行うことが
できる。 【００３０】機能性物質を固定化したリポソームは、ポ
リアルキレンオキシド鎖の先端に機能性物質が固定化さ
れているので、ポリアルキレンオキシド鎖に邪魔される
ことなく機能性物質の作用が十分に発揮される。また、
ポリアルキレンオキシド鎖が導入されているので、従来
からのポリアルキレンオキシド鎖導入の効果、例えば長
期間にわたる血液中濃度の維持、非免疫原性、リポソー
ム内部に封入した物質の漏れ防止などの効果も期待でき
る。このため反応性リポソームは、医薬の運搬体、検査
薬、診断薬、センサー、固定化触媒、バイオリアクタ
ー、バイオエレクトロニクス素子、マイクロカプセル代
替品など、種々の機能性リポソームとして利用できる。 【００３１】なお、反応性リポソームを製造する際、他
の膜形成成分として重合性リン脂質を配合することによ
り、重合性の反応性リポソームとすることができる。重
合性のリン脂質としては、公知の重合性リン脂質を使用
することができるが、例えば１，２−ジ（２，４−オク
タデカジエノイル）−３−ホスファチジルコリンの他、
野島庄七、砂本順三、井上圭三編集、１９８８年南江堂
発行の「リポソーム」ｐ３１３〜３１５に記載のものな
どがあげられる。これらの中では、１，２−ジ（２，４
−オクタデカジエノイル）−３−ホスファチジルコリン
が好ましい。 【００３２】重合性リポソームは、リポソーム調製後
に、光重合開始剤の存在下または非存在下でＵＶ、γ
線、電子線などの光照射を行うことにより、あるいはレ
ドックス開始剤系により、あるいはアゾ系開始剤または
有機過酸化物などの存在下で加熱を行うことにより、容
易に重合を行うことができる。このようにして得られた
重合後のリポソームは、優れた安定性を有しているの
で、水溶液に分散させたままで、あるいは凍結乾燥等に
より粉末状に調製し、安定して使用することができる。 【００３３】他の反応性小胞体としての反応性脂肪乳剤
は、本発明のリン脂質誘導体と、大豆油、サフラワー油
等の植物油と、大豆レシチン、卵黄レシチン等のリン脂
質と、必要により添加される他の添加剤、例えばイント
ラリピッド（大塚製薬（株）製、商標）、乳化補助剤、
安定化剤、等張化剤、脂溶性医薬、脂溶性生理活性物質
などを含む油脂混合物が乳化されたものである。油脂混
合物中に占めるリン脂質誘導体の含有量は、０．００１
〜５０モル％、好ましくは０．５〜３０モル％であるの
が望ましい。 【００３４】反応性脂肪乳剤は、公知の方法により製造
することができる。例えば、本発明のリン脂質誘導体、
植物油、他のリン脂質および必要により配合する添加剤
を混合、加熱し、水を加えてホモミキサー等で粗乳化
し、次にマントン−ガウリン型の加圧噴射式ホモジナイ
ザー等で均質化する方法などにより製造することができ
る。 【００３５】このようにして得られた反応性脂肪乳剤に
は、反応性リポソームの場合と同様にして、同様の機能
性物質を容易に固定化することができる。このため反応
性脂肪乳剤は、医薬の運般体、検査薬、診断薬、センサ
ー、固定化触媒などとして利用できる。 【００３６】上記以外の反応性小胞体である反応性ミセ
ルは、本発明のリン脂質誘導体だけからなるものであっ
ても、レシチン、その他のリン脂質、コレステロール等
の他の成分が含有されているものであってもよい。反応
性ミセルも反応性脂肪乳剤と同様にして機能性物質を固
定化することができ、同様の用途に利用できる。 【００３７】 【発明の効果】本発明のリン脂質誘導体は新規かつ有用
である。本発明のリン脂質誘導体を小胞体形成成分とし
て用いることにより、小胞体にポリアルキレンオキシド
鎖を導入できるとともに、このポリアルキレンオキシド
鎖の先端に、簡単にかつ効率よく種々の機能性物質を共
有結合により固定化することができ、しかも機能性物質
の導入量を多くすることができる。 【００３８】 【実施例】以下、実施例により、さらに詳細な説明を行
うが、本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ ジパルミトイルホスファチジルコリン０．５ｇ（０．６
５ｍｍｏｌ）およびポリエチレングリコール（Ｍｗ≒２
０００、ｎ≒４５）５ｇ（１．７ｍｍｏｌ）を溶解させ
たクロロホルム溶液４０ｍｌに、ホスホリパーゼＤ（東
洋醸造（株）製）４０単位を溶解させた１Ｍ酢酸緩衝液
（ｐＨ５．６）２０ｍｌを加え、４０℃で１２時間攪拌
して反応させた。次に、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶
液で中和した後、有機層を減圧下で濃縮した。得られた
反応混合物をシリカゲルカラム（２０％メタノール／ク
ロロホルム）を用いて分画し、濃縮した後、少量のクロ
ロホルムに溶解させ、これをジエチルエーテルに再沈殿
することにより、ジパルミトイルホスファチジル＝ポリ
エチレングリコールを得た（収率３０％）。 【００３９】次に、乾燥させたクロロホルム１０ｍｌ中
に、上記ジパルミトイルホスファチジル＝ポリエチレン
グリコール１００ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）およびＮ，
Ｎ′−ジカルボニルイミダゾール８７ｍｇ（０．５４ｍ
ｍｏｌ）を加え、室温で６時間攪拌した。得られた反応
混合物をジエチルエール１００ｍｌ中に再沈殿させ、目
的の下記反応性リン脂質誘導体を得た（収率９２％）。
反応の進行は、１Ｒスペクトル（ＫＢｒ法）において、
ポリエチレングリコール末端の水酸基（ＯＨ伸縮、３４
２８ｃｍ-1）の消失およびオキシカルボニルイミダゾー
ル基（カルボニル結合）の生成（Ｃ＝Ｏ伸縮、１７６０
ｃｍ-1）により確認した。 【化５】 【００４０】精製物は、1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲスペク
トルにより確認した。結果は次の通りである。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、δ；ｐｐｍ、２７０ＭＨｚ） ８．１４（ａ；ｓ、１Ｈ） ７．４３（ｂ；ｓ、１Ｈ） ７．０８（ｃ；ｓ、１Ｈ） ５．２３（６；ｍ、１Ｈ） ４．６７（ｄ；ｔ、２Ｈ、Ｊ＝２．５） ４．００（５、７；ｍ、４Ｈ） ３．６５（ｅ；ｍ、約１８０Ｈ） ２．３１（４、４′；ｍ、４Ｈ） １．６０（３、３′；ｍ、４Ｈ） １．２９（２、２′；ｍ、４８Ｈ） ０．９０（１、１′；ｍ、６Ｈ） ＩＲ；（ＫＢｒ、ｃｍ-1） １７６０（オキシカルボニルイミダゾール基、Ｃ＝Ｏ伸
縮振動） １７２８（エステル、Ｃ＝Ｏ伸縮振動） 【００４１】実施例２ 実施例１と同様にして、ただしポリエチレングリコール
の代わりに分子量約５０００（ｎ≒１１５）のポリエチ
レングリコールを用いて、目的の下記反応性リン脂質誘
導体を得た。 【化６】 【００４２】精製物は、1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲスペク
トルにより確認した。結果は次の通りである。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、δ；ｐｐｍ、２７０ＭＨｚ） ８．１４（ａ；ｓ、１Ｈ） ７．４３（ｂ；ｓ、１Ｈ） ７．０８（ｃ；ｓ、１Ｈ） ５．２３（６；ｍ、１Ｈ） ４．６７（ｄ；ｔ、２Ｈ、Ｊ＝２．５） ４．００（５、７；ｍ、４Ｈ） ３．６５（ｅ；ｍ、約４５５Ｈ） ２．３１（４、４′；ｍ、４Ｈ） １．６０（３、３′；ｍ、４Ｈ） １．２９（２、２′；ｍ、４８Ｈ） ０．９０（１、１′；ｍ、６Ｈ） ＩＲ；（ＫＢｒ、ｃｍ-1） １７６０（オキシカルボニルイミダゾール基、Ｃ＝Ｏ伸
縮振動） １７２８（エステル、Ｃ＝Ｏ伸縮振動） 【００４３】実施例３ 実施例１と同様にして、ただしポリエチレングリコール
の代わりに、（オキシエチレン基）ｐ／（オキシプロピ
レン基）ｑ／（オキシエチレン基）ｒがブロック状に付
加したポリアルキレングリコール（ｐ≒２０、ｑ≒５、
ｒ≒２０）を用いて、目的の下記反応性リン脂質誘導体
を得た。 【化７】 【００４４】精製物は、1Ｈ−ＮＭＲにより確認した。
結果は次の通りである。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、δ；ｐｐｍ、２７０ＭＨｚ） ８．１４（ａ；ｓ、１Ｈ） ７．４３（ｂ；ｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．３） ７．０８（ｃ；ｔ、１Ｈ、Ｊ＝０．８） ５．２３（６；ｍ、１Ｈ） ４．６７（ｄ；ｔ、２Ｈ、Ｊ＝２．５） ４．００（５、７；ｍ、４Ｈ） ３．６０（ｅ、ｆ、ｇ、ｊ；ｍ、約１９０Ｈ） ２．３１（４、４′；ｍ、４Ｈ） １．６０（３、３′；ｍ、４Ｈ） １．２６（２、２′；ｍ、４８Ｈ） １．１２（ｈ；ｍ、１５Ｈ） ０．８８（１、１′；ｔ、６Ｈ、Ｊ＝６．４）
─────────────────────────────────────────────────────
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(56)参考文献 特表 平３−502836（ＪＰ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
ＣＡ（ＳＴＮ)
ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 【請求項１】 下記一般式〔１〕で表わされるリン脂質
誘導体。 【化１】 〔式中、Ｒ1Ｃ（＝０）およびＲ2Ｃ（＝０）は炭素数３
〜３０の脂肪酸のアシル残基を表わし、同一でも異なっ
ていてもよい。Ｒ3は水素原子またはメチル基、 ＡＯは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、 ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数で、１〜１０
００の正数を表わす。ｎが２以上の場合、オキシアルキ
レン基は同一でも異なっていてもよく、またランダム状
に付加していても、ブロック状に付加していてもよい。
Ｍは水素原子またはアルカリ金属原子を表わす。〕
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- 1993-12-16 JP JP31702693A patent/JP3498339B2/ja not_active Expired - Fee Related
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