JP3492381B2 - 器官保護活性を有する新規のｂｐｃペプチド塩、その製造プロセス、および治療におけるその使用 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 説明 本発明は、900〜1,600ダルトンの分子量を有する８〜
15個のアミノ酸残基を含んでなる、器官保護活性を有す
る新しい適用形態の合成BPC（Body Protection Compoun
d）ペプチド、その製造プロセス、ならびに診断および
治療におけるその使用に関する。

ヒトおよび動物における種々の疾患の治療に有用なタ
ンパク質およびペプチドは周知である。これらの薬剤の
多くはin vivoで産生されるため、動物またはヒトから
薬剤を抽出することにより医薬組成物を製造することが
可能である。製薬上有用なタンパク質またはペプチドと
しては、例えば、インスリン、エリスロポエチン、BM
P、インターフェロンなどが挙げられる。もう１つの例
としては、粘膜保護活性を有する胃液タンパク質が挙げ
られる。このタンパク質は、最近、単離されたものであ
り、BPCと命名された。

WO 92/04368は、生体保護活性を呈する分子量約40,00
0ダルトンのBPC、その製造、およびその使用に関するも
のである。WO 93/24521およびWO 94/11394には、親タン
パク質BPCで周知のものと同じタイプの器官保護活性を
有するBPCペプチドが開示されている。Sikiric et al.,
Digestive Diseases and Sciences,41（1996）7,1518−
1526には、水および生理食塩水に溶解した場合にラット
の急性膵炎および随伴性胃十二指腸炎に対して保全的お
よび予防的作用を呈するペンタデカペプチドBPCが記載
されている。

従って、BPCペプチドは、多種多様な製薬用途で周知
となっている。しかしながら、これらのペプチドの物理
化学的安定性は、例えば、標準生理食塩水中において、
満足すべきものではない。更に、BPCペプチドを適用す
ると、特に、水溶液または標準生理食塩水として注射し
た場合、疼痛および／または壊死を引き起こす。

タンパク質およびペプチドの塩は、当技術分野で周知
である。例えば、Bertrand,M.et al.,Journal of Pepti
de Research,49（1997）3,269−272から、特定の塩の作
用が、ペプチドの安定性および構造に対して非常に選択
的であることが分かる。例えば、NH₄ ⁺のような一価カチ
オンを最終濃度0.1Mのペプチド（ポリ（Glu−Leu））溶
液に添加すると、水溶性のβ構造への転移が起こる。こ
れとは対照的に、Li⁺、Na⁺、またはCs⁺イオンを使用し
た場合には、転移は観測されなかった。

タンパク質の安定性に対する、表面に接近可能なイオ
ン対の役割について、denovoデザインされた２本鎖α螺
旋コイルドコイルの安定性に及ぼす中性および酸性pHに
おける添加塩（KCl、MgCl₂、およびLaCl₃）の影響を測
定することによって調べられた。その結果から、添加塩
は、タンパク質の安定性に対して、安定化および不安定
化の寄与を含む複雑な作用を呈する可能性があるため、
正味の作用は、タンパク質中に存在する荷電残基やイオ
ン相互作用の性質に依存することが分かる（Kohn et a
l.,Journal of Molecular Biology,267（1997）4,1039
−1052）。

また、モデルペプチドの以前の研究から、ペプチド鎖
に沿ってｉとｉ＋４との間の塩架橋は、ｉとｉ＋３との
間の塩架橋よりも安定性が高く、更に、Ｎ末端からＣ末
端の方向に酸−塩基の順序で存在する方が塩基−酸の順
序で存在するよりも安定であることが実証された。しか
しながら、現在のところ、表面塩架橋がタンパク質の天
然の構造に対して強力な安定化作用を有するか否かは分
かっていない（Berger et al.in:Journal of Biomolecu
lar Structure and Dynamics,14（1996）3,285−29
1）。

従って、安定性、構造、および機能に関するペプチド
塩の性質は、特定の塩の形成に関与する特定のイオンお
よび他の内因性または外因性因子にかなり大きく依存す
る。現在のところ、特定のペプチドの特定の塩がどのよ
うな特有の性質を有するかを予測することはできない。

本発明の対象とする技術的課題は、より安定な形態で
BPCペプチドを提供すること、ならびに改良された安定
性および少なくともBPCペプチドそのものと同じ医薬活
性を呈する、BPCペプチドを含んでなる診断用および／
または医薬用組成物を提供することである。本発明の対
象とするこのほかの技術的課題は、上述の欠点を克服
し、特に、BPCペプチドの無痛注射を可能にする医薬組
成物を提供することである。

本発明は、BPCペプチド塩と、医薬上または診断上有
効な量のBPCペプチド塩を含んでなる医薬用または診断
用組成物とを提供することによって、これらの問題を解
決する。この場合の塩のアニオンは、８〜15個のアミノ
酸を含有する負に帯電したペプチドであり、分子量900
〜1,600ダルトンを有し、一般式（Ｉ） [Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala]
^{（−）または（２−）} (Ｉ) 〔式中、 Xaaは、中性脂肪族アミノ酸残基、特に、Ala、bAla、
Leu、Ile、Gly、Val、Nle、またはNvaであり、 Yaaは、塩基性アミノ酸残基、特に、Lys、Arg、Orn、
またはHisであり、 Zaaは、酸性アミノ酸残基、特に、Glu、Asp、Aad、ま
たはApmである〕 で表され、また、塩のカチオンは、無機または有機の無
毒で製薬上許容される塩基のカチオンである。特に、塩
のカチオンは、Na⁺、K⁺、Li⁺、Cs⁺、Ca²⁺などのアルカ
リ金属もしくはアルカリ土類金属、またはZn²⁺のような
他の金属、あるいはNH₄ ⁺、トリエタノールアミン^＋、シ
クロヘキシルアミン^＋、２−AMP⁺（２−アミノ−１−プ
ロパノール）、もしくはTRIS⁺（トリス−（ヒドロキシ
メチル）−アミノメタン）のような第１級、第２級、も
しくは第３級アミンまたは有機化合物である。ただし、
これらのカチオンは生理学的に許容されるものでなけれ
ばならない。

驚くべきことに、本発明のBPCペプチド塩は、少なく
ともBPCペプチドと同じ医薬活性を呈するとともに、更
に、遊離のBPCペプチドまたはBPCペプチドの酢酸塩と比
較して著しく向上した物理化学的安定性を呈する。本発
明で使用されるカチオンは、BPCペプチドの活性に影響
を及ぼすことなく、その安定性を増大させる。本発明の
BPCペプチド塩は、例えば、標準生理食塩水中または水
中において、BPCペプチドまたはBPCペプチド酢酸塩より
も安定である。更に、本発明の塩は、経口投与に好適で
あり、特に、注射による適用中または適用後において疼
痛または壊死のような望ましからぬ副作用はまったく起
こさない。従って、本発明のBPCペプチド塩を用いるこ
とにより、腸管内および腸管外適用の改良が可能とな
る。更に、本発明の塩は、50mg/kg b.w.（body weigh
t）の用量まで毒性がまったく現れないため、非常に好
ましい。

本発明の塩は、次のようにして得ることができる。す
なわち、遊離のBPCペプチドを適切な塩基と共に水性も
しくは水性／アルコール性溶媒中または他の好適な溶媒
中に溶解し、次に、溶媒をエバポレートするか、フリー
ジングもしくは凍結乾燥するか、またはBPCペプチド塩
の水性および／またはアルコール性溶液にジエチルエー
テルなどの他の溶媒を添加して不溶性の粗製塩を分離さ
せることにより、得られた本発明の塩を単離する。塩生
成のために、通常、１モルまたは最大２モルの塩基すな
わちカチオンと、１モルの遊離BPCペプチドとを使用す
る。アルカリBPCペプチド塩を形成するために、好まし
くはアルカリ金属の炭酸塩または炭酸水素塩を使用す
る。製造されたペプチド塩は、水に自由に溶解する。従
って、本発明はまた、BPCペプチド塩を製造するための
プロセスに関する。

本発明に関しては、溶液中、特に、水性および水性／
アルコール性の溶液中においてカチオンを生成すること
のできる物質を塩基とみなす。

本発明に関しては、予防および治療活性が医薬活性に
含まれる。従って、医薬組成物とは、予防および／また
は治療活性を呈する組成物を意味する。

このほか、本発明は、本発明のBPCペプチド塩を含有
し、場合により１種以上の製薬上許容される担体が併用
された医薬用または診断用組成物、並びにこうした組成
物を製造するためのプロセスに関する。これらの組成物
は、例えば、注射可能な液剤、錠剤、クリーム剤、カプ
セル剤、軟膏剤、ローション剤、舌下錠などの形態で、
局所および全身適用するのに好適である。用量は、10^-5
〜10^-2mg/kg体重の範囲であり、0.1％〜0.5％の間のよ
り高い濃度で全身的または局所的に適用することが好ま
しい。特定の治療のための最適用量は、当業者により決
定可能である。

本発明はまた、１種以上の本発明のBPCペプチド塩の
ほかに、特に経口投与のためのトレハロース、ならびに
／あるいは製薬上もしくは診断上許容される担体、希釈
剤、および／または添加剤を含有する、上述した医薬用
もしくは診断用組成物に関する。

本発明の組成物、好ましくは水溶性組成物には、BPC
ペプチド塩のほかに、本発明の１回分の投薬剤中で使用
される濃度において実質的な薬理活性をまったく示すこ
となく体液中に注射可能な水溶性タンパク質（これ以降
では「水溶性タンパク質」と記す）が更に含まれていて
もよい。このような水溶性タンパク質としては、血清ア
ルブミン、グロブリン、コラーゲン、および／またはゼ
ラチンが好ましい。このタンパク質は、注射可能な医薬
組成物中で一般に使用される量で添加することができ
る。従って、例えば、水溶性タンパク質とBPCペプチド
塩との重量比は、約0.0001:1〜100:1、好ましくは約0.0
01:1〜約10:1、より好ましくは約0.01〜約1:1である。

更に、本発明はまた、特に、乾燥したおよび／または
純粋な形態あるいは水溶性または水溶性／アルコール性
溶液の形態の、上記のBPCペプチド塩そのものおよびそ
れを含有する組成物に関する。本発明の水溶性組成物ま
たはペプチド塩から製造される溶液のpHは、薬理学的に
活性なペプチドの活性になんら悪影響を及ぼさず、しか
も通常の注射剤として許容される範囲内にあるpHでなけ
ればならない。更に、溶液の粘度の大きな変化、沈殿の
生成などを引き起こさないpHでなければならない。従っ
て、好ましくは、溶液のpHは、約６〜９、好ましくは6.
5〜7.5でなければならない。

本発明の水溶性組成物を水溶液にして投与する場合、
該溶液中の薬理活性ペプチド塩の濃度は、好ましくは約
0.0000001〜10％（w/v）、より好ましくは約0.000001〜
５％（w/v）、最も好ましくは約0.00001〜１％（w/v）
でなければならない。

本発明の組成物は、好ましくは、本発明の薬理活性BP
Cペプチド塩と、必要な場合には、上記の水溶性タンパ
ク質のような更なる添加剤とを含有する単位投薬剤形を
もつものでなければならない。従って、例えば、上述し
た２種または３種の成分は、滅菌水または滅菌生理食塩
水に溶解または懸濁させることにより、アンプル中また
はバイアル中に封入される。この場合の製造方法には、
薬理活性BPCペプチド塩の溶液および必要な場合には更
に添加剤の溶液を混合するステップ、または薬理活性BP
Cペプチド塩の溶液に粉末形態の添加剤を添加するステ
ップ、あるいは適切な手順の任意の他の組合せが含まれ
ていてもよい。また、投薬剤は、薬理活性BPCペプチド
塩および必要な場合には添加剤が共存する凍結乾燥粉末
または真空乾燥粉末に滅菌水または滅菌生理食塩水を添
加することにより、製造してもよい。この単位投薬剤に
は、pH調節剤（例えば、グリシン、塩酸、水酸化ナトリ
ウム）、局所麻酔薬（例えば、キシロカイン塩酸塩、ク
ロロブタノール）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウ
ム、マンニトール、ソルビトール）、乳化剤、吸着抑制
剤（例えば、Tween（登録商標）60または80）、タル
ク、澱粉、ラトースおよびトラガカント、ステアリン酸
マグネシウム、グリセロール、プロピレングリコール、
保存剤、ベンジルアルコール、メチルヒドロキシベンゾ
エート、および／または落花生油（oleum arachid hydr
ogen）のような１種以上の慣用の添加剤が含まれていて
もよい。この単位投薬剤には、ポリエチレングリコール
400またはデキストランのような製薬上許容される賦形
剤が更に含まれていてもよい。

本発明の水溶性組成物は、好ましくは非経口製剤の形
態をとる。該非経口製剤としては、注射可能な溶液、経
粘膜投与のための溶液、経鼻用溶液、経耳用溶液が好ま
しい。

該注射可能な溶液としては、静脈内投与、皮下投与、
動脈内投与、筋肉内投与、および眼内投与のための溶液
が挙げられる。これらの長時間作用形製剤は、アンプル
またはバイアルからシリンジに容易に取り出すことがで
きる。取り出しの際に泡を生じた場合には、短時間放置
するだけで容易にその泡を除去することができる。

本発明の組成物は、水に溶解された形態またはマンニ
トールのような結晶生溶質と共に凍結乾燥させた形態で
あってもよい。凍結乾燥物に滅菌水または滅菌生理食塩
水を添加すれば水溶液が得られる。

本発明の水溶性組成物の水溶液の張度は、投与時、許
容できる範囲内になければならず、例えば、塩化ナトリ
ウムおよびマンニトールのような等張化剤によって調節
される。張度は、好ましくは生理食塩水の張度の半分〜
２倍、より好ましくは生理食塩水の張度の3/4倍〜3/2倍
である。

本発明の水溶性組成物の水溶液の粘度は、注射するの
に十分な程度に低くなければならない。粘度は、好まし
くは500cP未満、より好ましくは400cP未満である。粘度
の値は、25℃においてＥ型粘度計（TOKIMEC、日本）でC
one LDを利用して測定した値に相当する。

組成物が凍結乾燥物の形態である場合、該組成物から
作製される水溶液の粘度、張度、および成分濃度は、上
述したそれぞれの範囲内にあることが好ましい。

本発明の組成物は、従来の方法に従ってこれらの成分
を混合することにより作製される。本発明の組成物の成
分を混合した結果、最終的に、薬理活性BPC塩の活性が
保持され、プロセス時の泡の生成が最小限に抑えられな
ければならない。各成分は、同時にまたは任意の順序で
容器（例えば、瓶またはドラム）に導入される。容器中
の雰囲気は、例えば、滅菌清浄空気または滅菌清浄窒素
ガスであってよい。得られた溶液は、小さなバイアルま
たはアンプルに移すことができるとともに、更に、凍結
乾燥にかけることができる。

液体形態または凍結乾燥粉末形態の本発明の組成物
を、ポリ（乳酸−グリコール酸）コポリマー、ポリ（ヒ
ドロキシ酪酸）、ポリ（ヒドロキシ酪酸−グリコール
酸）コポリマー、またはそれらの混合物のような生分解
性ポリマーの溶液中に溶解または懸濁させてもよく、ま
た、次に、例えば、フィルム、マイクロカプセル（マイ
クロスフェア）、またはナノカプセル（ナノスフェア）
の形態、特に、軟質もしくは硬質カプセルの形態の製剤
にしてもよい。

このほか、リン脂質、コレステロール、またはこれら
の誘導体を含有するリポソーム中に本発明の組成物を被
包して、これを更に、生理食塩水中に、または生理食塩
水に溶解されたヒアルロン酸の溶液中に分散させること
ができる。

軟質カプセルに、液体形態の本発明の組成物を充填し
てもよい。硬質カプセルに、本発明の組成物の凍結乾燥
粉末を充填してもよく、あるいは本発明の組成物の凍結
乾燥粉末を圧縮して、それぞれ経直腸投与または経口投
与のための錠剤にしてもよい。

もちろん、自己投与のために、本発明の組成物を既充
填シリンジ中に入れておくことができる。

本発明の組成物は、常温、例えば、＋10℃〜＋30℃
で、または通常の冷蔵温度、好ましくは約＋２℃〜＋８
℃で保持してもよい。

本発明はまた、酸化窒素（NO）の生成またはNO系機能
の欠陥に伴う障害、特に、高血圧症、アンギナ、インポ
テンス、循環性および敗血症性ショック、卒中、炎症、
呼吸窮迫症候群、血小板および白血球の粘着および凝
集、内皮機能不全、胃腸障害、蠕動異常、糖尿病、膵
炎、低血圧症、ならびにパーキンソン病；体性感覚神経
の機能不全または機能亢進、特に、感覚神経障害、ヘル
ペス後神経痛、アトピー性皮膚炎、損傷組織の治癒障
害、後天性の寒冷および温熱蕁麻疹、乾癬、水疱性類天
疱瘡、湿疹、光線過敏症、慢性関節炎、胃腸障害、なら
びに上気道および下気道の特異的および非特異的反応亢
進（喘息、鼻炎）；内皮障害；創傷、潰瘍；急性および
／または慢性炎症に関連した症状、特に、慢性関節炎、
および遅延型過敏症に関連した疾患、ならびに胃腸障
害；肝臓疾患、特に放射線照射により発生する遊離基に
よって誘発される器官障害；カテコールアミン作動系障
害に伴う疾患、特に、神経分裂症、アンフェタミン攻撃
作用、薬物乱用；ストレス関連症状；随伴性胃十二指腸
炎の一層の悪化を伴う急性膵炎；心臓障害、特に、抗不
整脈、抗狭心症、および心臓保護の治療障害；抑鬱症；
パーキンソン病およびパーキンソン病様症状；体温障
害；骨機能障害；高血圧により誘発される種々の器官損
傷；凝固障害；疼痛障害；痙攣障害；脊髄損傷；アルコ
ール乱用またはアルコール摂取量の増大により誘発され
るアルコール性障害；脳虚血性疾患；末梢神経障害；カ
タレプシー疾患および神経弛緩障害；異常および突然変
異リンパ球に関連した疾患；胎児障害；卵巣摘出状態か
ら生じる膣萎縮および骨粗鬆症の進行；腫瘍；ウイルス
性疾患、特に、AIDSまたはARC;胃腸障害；認知障害；退
薬症状；腎臓障害および細胞性免疫応答の障害、の治療
に関連した、上記の塩および／または組成物の新規な使
用およびそれを用いた治療方法に関する。

本発明は更に、先に記載のペプチドが、一般式（I
I）： で表されるBPCペプチド塩または医薬用もしくは診断用
組成物に関する。

本発明は、特に、先に記載の一般式（Ｉ）で表される
ペプチドが、 からなる群より選ばれるBPCペプチド塩またはペプチド
塩を含有する医薬用もしくは診断用組成物に関する。

これらのペプチドは、WO 94/11394およびWO 93/24521
から周知であり、これらの特許の内容は、BPCペプチド
の製造および使用に関して、本特許の開示内容に組み入
れる。

更に、ペプチドは、他の官能性部分および／または構
造部分、例えば、炭水化物、脂肪、タンパク質またはペ
プチド、抗体、受容体、ホルモン、細胞傷害性物質、マ
ーカー物質、染料、放射性標識、免疫調節剤、薬物、担
体、ターゲッティング物質またはシグナル伝達物質など
に連結されていてもよい。

このほか、本発明は、ペプチドが線状または環状の形
態、特に、最初と最後のアミノ酸残基間のアミド結合に
より環化された形態である、先に記載のBPCペプチド塩
および組成物に関する。

次に、実施例および添付の図面により本発明を更に詳
細に説明する。添付の図面は以下の通りである。

図１は、NaBPC157のIRスペクトルを表している。

図２は、Na₂BPC157のIRスペクトルを表している。

図３は、BPC157のジセシウム塩（Cs₂BPC157）のIRス
ペクトルを表している。

図４は、BPC157のTRIS塩（TRIS−BPC157）のIRスペク
トルを表している。

図５は、BPC157のジ−TRIS塩（（TRIS）₂BPC157）のI
Rスペクトルを表している。

図６は、BPC157の２−アミノプロパノール塩（２−AM
P−BPC157）のIRスペクトルを表している。

図７は、BPC157のトリエタノールアミン塩（TEAM−BP
C157）のIRスペクトルを表している。

実施例1:BPC157のモノナトリウム塩（NaBPC157）の製造 炭酸水素ナトリウム29.6mg（0.35mmol）を含有する水
10mlに、配列Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala As
p Asp Ala Gly Leu Val（BPC157）を有するペンタデカ
ペプチド0.5g（0.35mmol）を溶解し、0.2μフィルター
に通して無菌濾過し、更に、凍結乾燥により乾燥させ
て、灰白色（off−white）固体0.48gを得た。

得られた塩の純度:99.4％（HPLC） 質量スペクトル（FAB）:1419,より大きい質量のイオ
ンが1441（M⁺Na⁺）に存在した。

得られたペプチド塩を、110℃の封管中で72時間にわ
たり6N−HClを用いて加水分解した後、アミノ酸分析に
かけたところ、組成:3Gly,4Pro,2Ala,2Asp,Glu,Leu,Va
l,Lysに相当する値が得られた。

IRスペクトル（KBr）：図１ UVスペクトル（H₂O）：λmax＝190nm、これ以外の吸
収極大は存在しない。

融点:288〜290℃（分解） 実施例2:BPC157のジナトリウム塩（Na₂BPC157）の製造 エタノール10ml中にBPC157 0.5g（0.35mmol）を溶解
した。適度に攪拌を行いながら、0.5mol/Lのメタノール
性水酸化ナトリウム1.4mlを添加した。この溶液を0.2μ
フィルターに通して無菌濾過し、更に、攪拌しながらジ
エチルエーテル（50ml）に徐々に添加した。分離した白
色固体を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄して、ジナト
リウム塩0.52gを得た。

得られた塩の純度:99.4％（HPLC） 質量スペクトル（FAB）:1419,より大きい質量のイオ
ンが1441（M⁺Na⁺）,1464（M⁺Na₂ ⁺）に存在した。

得られたペプチド塩のアミノ酸分析の結果は、組成:3
Gly,4Pro,2Ala,2Asp,Glu,Leu,Val,Lysに相当する。

IRスペクトル（KBr）：図２ UVスペクトル（H₂O）：λmax＝190nm、これ以外の吸
収極大は存在しない。

融点:275〜277℃ 実施例3:BPC157のジセシウム塩（Cs₂BPC157）の製造 炭酸セシウム114mg（0.70mmol）を含有する水8mlにBP
C157 0.5g（0.35mmol）を溶解し、0.2μフィルターに通
して無菌濾過し、更に、凍結乾燥を行って、灰白色固体
0.55gを得た。

得られた塩の純度:99.3％（HPLC） 質量スペクトル（FAB）:1419,より大きい質量のイオ
ンが1551（M⁺Cs⁺）,1684（M⁺Cs₂ ⁺）に存在した。

得られたペプチド塩のアミノ酸分析の結果は、組成:3
Gly,4Pro,2Ala,2Asp,Glu,Leu,Val,Lysに相当する。

IRスペクトル（KBr）：図３ UVスペクトル（H₂O）：λmax＝190nm 融点:268℃ 実施例4:BPC157のTRIS塩（TRIS−BPC157）の製造 トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（TRI
S）42.6mg（0.35mmol）を含有するメタノール10mlにBPC
157 0.5g（0.35mmol）を溶解し、0.2μフィルターに通
して無菌濾過し、更に、40℃、減圧下でメタノールを蒸
発させて乾燥させ、白色固体0.56gを得た。

得られた塩の純度:99.5％（HPLC） 質量スペクトル（FAB）:1419（MH⁺） 得られたペプチド塩のアミノ酸分析の結果は、組成:3
Gly,4Pro,2Ala,2Asp,Glu,Leu,Val,Lysに相当する。

IRスペクトル（KBr）：図４ UVスペクトル（H₂O）：λmax＝190nm 融点:250℃（分解） 実施例5:BPC157のジ−TRIS塩（（TRIS）₂BPC157）の製
造 TRIS 85.2mg（0.70mmol）を使用した以外は、実施例
１に記載の手順に従ってこの化合物を製造した。

得られた塩の純度:99.5％（HPLC） 質量スペクトル（FAB）:1419（MH⁺） 得られたペプチド塩のアミノ酸分析の結果は、組成:3
Gly,4Pro,2Ala,2Asp,Glu,Leu,Val,Lysに相当する。

IRスペクトル（KBr）：図５ UVスペクトル（H₂O）：λmax＝190nm 融点:188〜193℃ 実施例6:BPC157の２−アミノプロパノール塩（２−AMP
−BPC157）の製造 この化合物は、実施例１に記載の手順に従って製造し
た。塩基として２−アミノプロパノール（２−AMP）を
使用した。

得られた塩の純度:96.6％（HPLC） 質量スペクトル（FAB）:1419（MH⁺） 得られたペプチド塩のアミノ酸分析の結果は、組成:3
Gly,4Pro,2Ala,2Asp,Glu,Leu,Val,Lysに相当する。

IRスペクトル（KBr）：図６ UVスペクトル（H₂O）：λmax＝190nm 融点:158℃（分解） 実施例7:BPC157のトリエタノールアミン塩（TEAM−BPC1
57）の製造 この化合物は、実施例１に記載の手順に従って製造し
た。塩基としてトリエタノールアミン（TEAM）を使用し
た。

得られた塩の純度:99.2％（HPLC） 質量スペクトル（FAB）:1419（MH⁺） 得られたペプチド塩のアミノ酸分析の結果は、組成:3
Gly,4Pro,2Ala,2Asp,Glu,Leu,Val,Lysに相当する。

IRスペクトル（KBr）：図７ UVスペクトル（H₂O）：λmax＝190nm 融点:202〜205℃ 実施例8:TRIS−BPC157を含有する錠剤の製造 組成 mg/錠剤 TRIS−BPC157 0.5 トレハロース 20.0 ラクトース 17.0 澱粉 6.5 タルク 3.0 トラガント 2.5 ステアリン酸マグネシウム 0.5 50.0mg 水1mlにTRIS−BPC157（0.5mg）およびトレハロース
（20mg）を溶解し、蒸発させて乾燥させた。乾燥後、粗
製の残渣を他の成分と混合することにより錠剤を製造し
た。

実施例9:NaBPC157を含有するカプセル剤の製造 組成 mg/カプセル剤 NaBPC157 0.5 トレハロース 60.0 ラクトース 39.0 ステアリン酸マグネシウム 0.5 100.0mg 水1mlにNaBPC157（0.5mg）およびトレハロース（60m
g）を溶解し、溶剤を蒸発させて乾燥させた。粗製の残
渣を他の成分と混合することによりカプセル剤を製造し
た。

実施例10:NaBPC157を含有する溶液の製造 組成 g/25ml NaBPC157 0.05 グリセロール 15.00 ベンジルアルコール 0.01 pH7.0の緩衝液を加えた最終体積 25ml 実施例11:TRIS−BPC157を含有するクリーム剤の製造 組成 g/25g TRIS−BPC157 0.05 乳化剤 2.80 落花生油（oleum arachid hydrogen） 7.08 Tween（登録商標）60 12.08 プロピレングリコール 3.00 メチルヒドロキシベンゾエート 0.07 25.00g 実施例12:安定性試験 40℃において76日間および120日間にわたり塩をイン
キュベートすることにより、BPCペプチド塩の安定性を
試験した。水溶液中のBPCペプチド塩の濃度は、0.2％
（w/v）であった。安定性の測定は、HPLC法を用いて、
カラム:Kromasil 100,5μ,150×4.6mm、移動相：トリフ
ルオロ酢酸0.1％を含有する水／アセトニトリル（０〜5
0vol.％）、25分間でグラジエント溶出、流速1ml/min、
検出:214nmのUVの条件で行った。

比較のために、遊離のBPCペプチドおよびそのモノア
セテートを使用した。

この表に記載のデータは、本発明のBPCペプチド塩の
安定性が、遊離のBPCペプチドまたはそのモノアセテー
トと比べて大きいことをはっきりと示している。更に、
恐らくBPCペプチド塩溶液のpHが高いために、これらの
溶液を注射した場合、疼痛や壊死がまったく起こらな
い。

もう１つの別の実験において、トレハロースの添加
後、粗製物および溶液の状態での本発明のBPCペプチド
塩の安定性の更なる改良がみられた。従って、特に、錠
剤またはカプセル剤の形態の医薬組成物を製造するため
に、製薬上許容される添加剤としてトレハロースを添加
することは、本発明のもう１つの重要な態様である。

以下の実施例では、本発明のBPCペプチド塩の医薬活
性を実証する実験について説明する。これらの実験は、
異なる通常のモデルを用いて「in vitro」および「in v
ivo」で行った。実験では、特に記載のない限り、BPCペ
プチド157のモノナトリウム塩（略号:NaBPC157）を使用
した。特に記載のない限り、いずれの実験においても、
体重250〜280gの雄ウィスターラットを使用した。

実施例13:NO−系 序： 酸化窒素（NO）は、内皮細胞および神経細胞中におけ
るシグナル伝達分子としての機能ならびに免疫細胞によ
り活性化されるキラー分子としての機能の両方を有す
る。最近の研究から、酸化窒素は吸入により医薬として
使用できることが実証されている。一般的には、NOの過
剰または機能欠陥のいずれかにより、様々な障害、特
に、高血圧症、アンギナ、インポテンス、循環性ショッ
キュ、敗血症性ショック、卒中、炎症、呼吸窮迫症候
群、肺高血圧症、血小板および白血球の粘着および凝
集、糖尿病、低血圧症、ならびにパーキンソン病を誘発
したりまたはこれらの原因となっていると考えられる。

材料および方法： NaBPC157（10μｇまたは10ng/kg）の作用のいくつ
か、具体的には、胃炎に対する保全的活性および血圧保
持に対するNaBPC157活性について、ラットで調べた。エ
タノール処理（96％、i.g.（胃内））を１時間行うこと
により、病変を起こした。NaBPC157を同時に適用した
（i.p.（腹腔内））。血圧保持実験では、NaBPC157を静
脈内（i.v.）投与した。

N^G−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル（Ｌ−NA
ME）（5mg/kg i.v.）、内皮酸化窒素（NO）−発生の競
合抑制剤、およびNO−前駆体Ｌ−アルギニン（200mg/kg
i.v.）（Ｄ−アルギニンは有効でない）の併用につい
ても調べた。胃炎アッセイでは、エタノールによる病変
誘発およびNaBPC157による治療を行う５分前にNO−剤を
与えた。

結果： エタノールモデルでは、NaBPC157を単独で与えた場
合、Ｌ−アルギニンの場合と同様に抗潰瘍作用を呈す
る。NaBPC157は、エタノール処理された対照ラットで観
測された他の重度の胃炎を防止した。Ｌ−NAMEは効果が
なかった。Ｌ−NAMEにより、Ｌ−アルギニンの活性は完
全に消失したが、NaBPC157の活性は低減したにすぎなか
った。Ｌ−NAME＋Ｌ−アルギニンの併用後、NaBPC157の
活性は更に阻害された。

血圧試験では、Ｌ−アルギニンと比較して、NaBPC157
（基準となる正常値に影響を及ぼさない）は、ミミック
（mimicking）効果（予防的に適用した場合、Ｌ−NAME
による血圧増加を抑制し、Ｌ−NAMEによる最大血圧増加
時（すなわち、Ｌ−NAME投与の10分後）に与えた場合、
既に増大したＬ−NAME血圧値を減少させた）と、防止活
性（Ｌ−アルギニンによる中程度の血圧低下は、NaBPC1
57の前処理によって防止された）と、の両方を呈する。
Ｌ−NAME＋Ｌ−アルギニンの組合せを適用（このときに
も血圧が増大した）した10分後にNaBPC157を与えた場
合、その明瞭な効果（Ｌ−NAME処理ラットで見られた効
果）は消失した。in vitroでは、ラット胃組織ホモジネ
ートから得られた胃粘膜中において、Ｌ−アルギニンと
同じ用量（100μＭ）のNaBPC157を与えた場合、同等のN
O生成が誘発された。しかし、Ｌ−アルギニンの作用を
抑制するのに必要な用量の10倍量（100μＭに対して100
0μＭ）を用いた場合でさえも、NaBPC157の作用はＬ−N
AMEにより抑制されなかった。一方、NaBPC157とＬ−ア
ルギニンとを併用した場合、NO−合成は低減した。以上
をまとめると、NaBPC157は、胃粘膜の保全および血圧の
保持の両方において、NO−作用に関与することができ
た。特に、Ｌ−アルギニンと併用した場合、NOに対して
より卓越したおよび／または特有な作用を呈した。

NaBPC157は、Ｌ−アルギニンよりもNOに対してより卓
越した作用を有するため、過剰なNOの生成に伴う副作用
（Ｌ−アルギニンによる障害（例えば、低血圧症））を
防止することができた。in vivoでは、これらの副作用
は抑えられて正常値に向かい、in vitroでは、過剰のNO
生成が防止された。このほか、NO−系の抑制に伴うネガ
ティブな結果は除かれた（例えば、Ｌ−NAMEにより誘発
される血圧増加は防止され、既にＬ−NAMEにより生じた
高血圧は低減された）。

他の組織（例えば、肺臓、肝臓、血管など）における
NO−アッセイの類似性および適用モデルの多様性（胃炎
および血圧保持）に基づいて、過剰のNO生成およびNO−
系の機能の欠陥に対してNaBPC157が特筆すべき有益な作
用を呈することは自明である。特に、本発明のBPCペプ
チド塩は、高血圧症、アンギナ、インポテンス、循環性
ショック、敗血症性ショック、卒中、炎症、呼吸窮迫症
候群、肺高血圧症、膵炎、血小板および白血球の粘着お
よび凝集、内皮機能不全、ならびにパーキンソン病の治
療に有用である。

実施例14:体性感覚神経 序： 体性感覚神経は、一般に、ホメオスタシスの制御、特
に、ホメオスタシスのチャレンジに対する反応に関与す
る。これらの神経は、生命を脅かす可能性のある状態を
検知することができる。該神経は、それ自体で、危険を
軽減するための適切な対策を直ちにとることができる。
この場合、血管作用性輸入ニューロンは、外傷に対する
第１系統の防御系を構成する。一般的には、それらの保
護活性は、皮膚および胃腸粘膜の実験的損傷によって実
証された。種々の疾患、特に、先天性感覚神経疾患、糖
尿病によって引き起こされる感覚神経疾患、帯状疱疹、
ヘルペス後神経痛、アトピー性皮膚炎、損傷組織の治癒
障害（例えば、持続性皮膚損傷、酸による皮膚炎の悪
化、および角膜における角膜炎様病変の発生）、後天性
の寒冷および温熱蕁麻疹、乾癬、水疱性類天疱瘡、湿
疹、光線過敏症、上気道および下気道の疾患、特異的お
よび非特異的反応亢進、血管運動神経性鼻炎、喘息、慢
性関節炎、ならびに胃腸障害において、機能不全または
機能亢進のいずれかが現れる。

材料および方法： 胃炎（96％エタノール処理、拘束ストレス、およびイ
ンドメタシン処理によりラットで発生させた）に対する
NaBPC157の胃保護作用について調べた。カプサイシンを
用いて、NaBPC157（10μg/kg,10ng/kg i.p.）の保全的
作用における感覚ニューロンの関与の可能性について調
べた。カプサイシンは、感覚ニューロンに対してかなり
独特な作用を有し、具体的には、成体動物への高用量投
与（125mg/kg s.c.（皮下）、月齢３ヶ月）または新生
子動物（日齢７日）への投与（50mg/kg s.c.）を行う
と、感覚繊維が破壊され、一方、低用量（500μg/kg i.
p.）では、粘膜上で神経伝達物質放出および保護作用が
活性化される。

結果： （ｉ）カプサイシンの不在下において、NaBPC157は、エ
タノール、拘束ストレス、およびインドメタシンの適用
に対して、胃粘膜を保護した。

（ii）神経障害を起こす用量のカプサイシンの存在下に
おいて、拘束ストレス、エタノール、またはインドメタ
シンによる病変に対するカプサイシンのネガティブな影
響により、NaBPC157の保全的活性が一貫して劣化した。
NaBPC157の保護作用は、これらのアッセイのいずれにお
いても、カプサイシン処理モデル（成体、新生子のいず
れも）で依然として明確に現れた。新生子をカプサイシ
ン処理した後、１回ng投与方式でNaBPC157を適用した場
合には、NaBPC157によって得られる胃保護作用は、完全
に消失した。同じ用量を毎日使用した場合には、粘膜保
護作用は完全に回復した。

（iii）興奮を引き起こす用量のカプサイシンを併用し
た場合、NaBPC157の有益な活性は更に増大する。

以上をまとめると、これらのデータから、NaBPC157の
有益な活性とペプチド作用性感覚輸入ニューロン活性と
の複雑な相乗的相互作用が実証される。動物とヒトにお
けるカプサイシン作用の類似性が大きいことおよび上述
の実験を考慮すると、NaBPC157は、上記の障害の治療に
使用することができる。

実施例15:内皮保護 序： 血管内皮損傷は、器官全体の損傷が起こる前に先行し
て起こり、器官全体の損傷に対する不可欠な前提条件で
あることが知られている。内皮保護を行うと、損傷によ
る虚血が低減し、粘膜の保全を行うことが可能である。
有用なモデルとして、大きな病変を起こすことが周知の
壊死化剤（例えば、胃内適用されるエタノール）を適用
する少し前ラットにモナストラルブルー（Monastral Bl
ue）を適用することが広く行われている。

材料および方法： エタノール処理の３分前に、Monastral Blue（MB）
（Sigma Company,USA）（1.0ml/kg b.w.）をすべてのラ
ットに静脈内投与した。エタノール処理の１分後にラッ
トを屠殺した。エタノール処理の１時間前に、NaBPC157
（10.0μg/kg i.p.）または生理食塩水（5.0ml/kg i.
p.）を与えた。屠殺直後、胃を取り出し、先入観のない
観測者による病変評価を行った。胃および十二指腸の代
表的セクションを、更なる組織学的分析を行うために処
理した。

血管損傷は、Monastral Blue（MB）法を用いて、初期
（エタノール処理の１分後）に評価した。染色した粘膜
の面積密度をTEMにより調べた。

結果： NaBPC157で処理したグループでは、MB−染色の大きな
減少が一貫して観測された。使用したモデルの症状とヒ
トの症状との類似性が大きいことから、ヒト治療におい
て、内皮障害に関連した症状の治療にNaBPC157を使用で
きることが実証された。

実施例16:血管形成 序： 血管形成は、肉芽組織の発生ならびに創傷および／ま
たは潰瘍の治癒にきわめて重要である。周知の方法を用
いて、血管形成性を調べた。

材料および方法： 同量のNaBPC157（溶液50μｇ、10μｇ、10ng/ml）ま
たは参照薬剤、ジメチジン（10mg、100mg、500mg/m
l）、ラニチジン（2.5mg、25mg、250mg/ml）、ファモチ
ジン（10mg、50mg、100mg/ml）、およびスクラルフェー
ト（1mg、5mg、10mg/ml）を含有する２つの滅菌スポン
ジ（1cm×1cm×0.25cm（Ｖ＝0.25ml））を、各ラットの
腰の領域の皮下に移植した。３日後および７日後にスポ
ンジを取り出した。次に、スポンジをホルマリン中で固
定し、組織学的および組織化学的評価および形態計測を
行うための処理を施した。使用した顕微鏡は、Leitz,DI
APLANであった。形態計測分析のために、VAMS,Zagreb,C
roatia製のプログラム「SFORM」を使用した。

結果： 移植スポンジの周辺に新たに形成された肉腫組織を、
異物に対する宿主反応の価値ある定量手段として定期的
に使用する。移植３日後に屠殺したラットを用いた実験
により次のような結果が得られた。NaBPC157で処理した
動物のグループでは、対照のラットの場合と比較して、
より多くの肉腫組織が形成された。使用したすべての用
量において、同様の結果がスクラルフェートで処理した
ラットでも観測された。これとは対照的に、３つの全て
のH2−ブロッカーで処理したグループにおいて、対照の
値と分析薬剤の値との差異は観測されなかった。移植７
日後に屠殺した動物では、３種の用量のスクラルフェー
トで処理したすべての場合および最大用量（50μｇ）の
NaBPC157で処理した場合は、対照のグループと比較して
著しく異なっていた。対照の値は、２つの屠殺時期の間
で顕著な差異はなかった。

新たに形成された肉腫組織中の内皮スペース数をカウ
ントした。対照の値と比較して（移植３日後、対照グル
ープで新たに形成された内皮スペースの数は、7.94±1.
23であり、移植７日後では14.8±3.12であった）、使用
した物質はいずれも、両方の時期（３日目および７日
目）において、著しく増大した値を呈した。

種々の抗腫瘍薬が共通の性質として血管形成性を有す
るということが実証されたが、そのほかに、NaBPC157は
また、スクラルフェートの場合と同じように肉腫形成を
刺激する。従って、治癒プロセス、特に、創傷および／
または潰瘍の治癒プロセスの開始および支持を行うため
に、NaBPC157を使用することができる。

実施例17:炎症 序： 現在使用されている抗炎症剤は、通常、ヒトにおける
急性および／または慢性の炎症障害とよく類似した多く
の好適なモデルで評価される。しかしながら、これらの
薬剤の主要な副作用として、重度の胃腸炎が現れる。

NaBPC157の場合、解熱作用（酵母により生じる熱の減
少（4000mg/kg s.c.））と共に、急性抗炎症活性および
鎮痛活性が観測された（例えば、ツルペンチン、カラゲ
ニン、酢酸、またはMgSO₄苦悶（writhing）（プロスタ
グランジン依存性、プロスタグランジン非依存性）テー
ルピンチ試験）。従って、胃腸炎に対するNaBPC157の既
知の保全的作用、アジュバント関節炎のような慢性炎症
に対するその作用、およびNSAIAにより生じる胃腸炎に
おける非ステロイド抗炎症剤としてのその作用を、ラッ
トで同時に調べた。

材料および方法： 胃腸炎（インドメタシン（30mg/kg s.c.）、アスピリ
ン（400mg/kg i.g.）、およびジクロフェナク（125mg/k
g i.p.））の試験では、薬物適用（インドメタシン）と
同時におよび／またはその１時間前に、規則的にNaBPC1
57（10μg/kg i.p.）を与えた。アジュバント関節炎
（フロイントアジュバント0.2mlを尾に適用した）の場
合には、NaBPC157（10μｇ又は10ng/kg i.p.）を１回の
適用（フロイントアジュバントの適用１時間前もしくは
１時間後）でまたは１日１回の方式（０〜14日目、14〜
30日目、および14日目〜１年目）で与えた。

結果： 試験したNSAIAを一緒に与えた場合、NaBPC157は、対
照のラットの胃の他の顕著な病変を一貫して低減させ、
更に、インドメタシングループでは小腸の病変を低減さ
せた。アジュバント関節炎試験では、病変の悪化は、１
回のNaBPC157の適用の後、かなり減少し、NaBPC157で毎
日処理したラットでは更に減衰した。既に起こっている
アジュバント関節炎の治療では、投薬のわずか２週間後
に、NaBPC157の保全的作用が一貫して現れ、適用１年後
には確定的になった。これらのデータは、粘膜の保全に
対するNaBPC157の抗炎症作用および保護作用を実証する
ものである。

２つの異なる機構、すなわち、炎症および遅延型過敏
症が、アジュバント関節炎に関与していることが知られ
ている。NaBPC157は、これらの両方にポジティブに作用
する。参照標準（すなわち、アスピリン、インドメタシ
ン）と比べて、NaBPC157は、かなり低用量（mg/kgに対
してμｇおよびng/kg）で効果を発揮した。アジュバン
ト関節炎防止に関するこの初期の効力は、毎日の適用に
より更に増強される。より高用量（10μg/kg）では、１
回または毎日の方式で行った後のいずれにおいても効力
を発揮し、一方、より低用量（10ng/kg）では、１回の
適用では効力が得られなかったものが、毎日の適用を行
うことにより効果が現れるようになる。この知見は、完
全に起こってしまった関節炎に対するNaBPC157の治療効
果と併せて、アジュバント関節炎の全過程での適用が有
用であることを実証するものである。アジュバント関節
炎におけるNaBPC157の特筆すべき効力（未だに起こって
いない／既に起こってしまったアジュバント関節炎にお
ける予防的／治療的効力）は、現在使用されている治療
薬では観測することができなかった。グルココルチコイ
ドは、毎日適用する場合にはアジュバント関節炎の防止
に有効であるが、短期間の適用では効力がない。免疫抑
制剤（高用量）および非ステロイド鎮痛剤は、それぞれ
前処理または後処理の場合にのみ有効である。

従って、使用したモデルの障害と対応するヒトの障害
との類似性が高いことから、粘膜保護特性を有するNaBP
C157を、急性炎症および慢性関節炎に関連した症状の治
療に使用することができるのは明らかである。このほ
か、遅延型の過敏症障害および胃腸管の種々の部分で発
生する胃腸炎に関連した疾患、特に、NSAIAのような薬
剤により誘発される疾患を治療するために、NaBPC157を
使用することができる。

実施例18:フリーラジカルスカベンジャー効果 材料及び方法： NaBPC157の肝保護効果を、ラットにおける肝損傷の様
々な実験モデルにおいて、ブロモクリプチン、アマンタ
ジン及びソマトスタチンのような参照標準と比較するこ
とで評価した:24時間胆管及び肝動脈結紮、48時間拘束
ストレス並びにCCl₄（フリーラジカル誘発剤）投与。Na
BPC157は胃内又は腹腔内のいずれかに投与した。

結果： NaBPC157は、24時間胆管及び肝動脈結紮、48時間拘束
ストレス、及びCCl₄処置（1ml/kg i.p.、その48時間後
に屠殺）に処したラットにおいて肝壊死又は脂肪変化の
発生を有意に妨げた。他の参照薬物は、これらのモデル
における保護効果は僅かである、あるいは全くなかっ
た。ピリルビンに関する臨床試験では、SGOT及びSGPTが
これらの巨視的／微視的所見と十分に相関することが示
された。したがって、NaBPC157は肝疾患の治療に用いる
ことができる。加えて、照射によって生じる骨髄抑制は
造血性要素が回復する変動過程を研究するための再現可
能なモデルである。NaBPC157は致死量以下の照射によっ
て誘発される骨髄損傷に対して有益な効果を示す。した
がって、NaBPC157は照射によって誘発される骨髄損傷の
治療に用いることができる。フリーラジカル形成をとも
なうCCl₄及び傷害発生との間の一般に認識されている関
係を考慮すると、NaBPC157のこの有益な効果は他のフリ
ーラジカル誘発臓器傷害、特には照射、にも適合するよ
うに思われる。

実施例19:カテコールアミン作動系 序： アンフェタミンのような間接的に作用する交感神経模
倣薬は、カテコールアミン放出の増加及び中枢神経系
（CNS）の神経末端でのカテコールアミン再取り込み
（主としてドーパミン）の阻害の両者を引き起こすよう
な共通の特性を有する。線条体におけるドーパミン作動
系の活性化の結果としてステレオタイプ化された行動
（stereotyped behavior）が現れる。一般に、アンフェ
タミンのクライミング行動の増加は、ドーパミンアンタ
ゴニストであるハロペリドールの適用に続く線条体ドー
パミン受容体の上方調節の結果であると信じられてい
る。これは、続いて、アンフェタミン過敏を発生させ
る。NaBPC157の適用は全体的な行動に影響を与えず、又
はステレオタイプを誘発しない。

材料及び方法： ドーパミンアゴニストであるアンフェタミン（10mg/k
g i.p.）のステレオタイプ及び興奮性に対するNaBPC157
の効果を研究した。NaBPC157は予防的な同時処置又は治
療上有用な療法として適用した（10μｇ又は10ng/kg i.
p.）。ラットにおいてステレオタイプ化された行動及び
興奮を誘発した。

結果： ステレオタイプ化された行動及び興奮の増加（すなわ
ち、強力かつ激烈な単収縮、パニックジャンピング（pa
nic jumping）及び逃避）の両者の著しい減弱及び逆転
が通常に認められた。

マウスにおけるクライミング行動の増加に対するNaBPC1
57の効果にさらに焦点を当てた。マウスをドーパミンア
ンタゴニストであるハロペリドールで予備処置し（5.0m
g/kg i.p.）、続いてアンフェタミンで処置した（ハロ
ペリドール予備処置の１、２、４及び10日後に20mg/kg
i.p.で攻撃誘発）。これは、アンフェタミン刺激効果に
対する挙動上の過敏性の研究に通常用いられるものであ
る。これにより、試験したNaBPC157のドーパミンアンタ
ゴニスト活性（直接又は間接的）の結果として、アンフ
ェタミンのステレオタイプの拮抗が現れる場合、ハロペ
リドールが増強され、アンフェタミンのクライミング行
動に対する効果が増加することが期待される。これとは
異なり、NaBPC157をハロペリドールと同時に投与した場
合にはほぼ完全な反作用が認められた。これらを合わせ
て考えると、これらのデータはNaBPC157とドーパミン系
との相互作用の証拠を提示している。さらに、NaBPC157
と中枢ドーパミン系との相互作用は他の実験モデルにお
いても示された（すなわち、ストレス性潰瘍に対する防
御）。ドーパミン系との相互作用は多くの既知ペプチド
で既に認められている（ニューロテンシン、CCK等）。
加えて、NaBPC157の適用はLSD（例えば、0.3mg/kg i.
p.）によって誘発される行動上の障害をも逆転させる。
NaBPC157はドーパミン系に対する調節効果を有する。ア
ンフェタミンによってドーパミンの放出及び合成の増加
が誘発されている状態において、NaBPC157はその結果生
じる障害（すなわち、ステレオタイプ化された行動）を
妨げ、かつ逆転させることが可能であった。同様に、Na
BPC157は、ハロペリドールによるドーパミン受容体遮断
の結果を大幅に減弱させることが可能であった。これ
は、NaBPC157の調節効果が、他の点で目立って不十分な
ドーパミン系の代替にも関与することを示唆する。これ
により、引き続くドーパミン受容体過敏及びアンフェタ
ミン障害の発生が回避される。

したがって、NaBPC157は精神分裂病、アンフェタミン
攻撃誘発効果（分裂病型精神病）及び薬物乱用の治療に
有用な薬剤である。

実施例20:ストレス 序： ストレスは様々な臓器の傷害につながる非特異的な現
象と定義される。ストレス応答は様々な傷害性の現象に
対する応答と定義される。最も頻繁に用いられる動物ス
トレスモデルの１つは、ラットにおける重度のストレス
性胃傷害につながる拘束ストレスモデルである。他の臓
器が冒されることもある。

材料、方法及び結果 ストレス誘発の１時間前に10μｇ又は10ng/kg b.w.、
i.p.又はi.g.の用量で適用することで、NaBPC157は他の
方法では逃れることができない重度の胃の傷害の発生を
強力に妨げた。ストレス低減剤の適用とストレス誘発と
の間の時間（以下、“期間”と呼ぶ）が長期化された場
合には標準的な抗潰瘍剤は事実上無効となるが、これは
試験したNaBPC157の明瞭な効力とは対照的である。NaBP
C157は、その有益な活性を48時間という極度に長期化さ
れた後であっても維持した。NaBPC157が付与する防御に
は、これとは別に他の臓器（例えば、肝臓、副腎、腎
臓、精巣、心臓、膵臓、脾臓）に通常現れる病変の減弱
が含まれる。したがって、他の一般に知られるストレス
パラメータに対する妨害が明らかに少ないため（すなわ
ち、胸腺リンパ腺の萎縮（thymolymphatic involutio
n）及び副腎の皮質肥大）、NaBPC157を様々なストレス
状態に適用可能であることが立証される。NaBPC157は、
通常非特異的なストレス病理に関連する、種々の臓器に
おける様々な病変に肯定的で有用な衝撃を与える。用い
たモデルと同じ現象の連鎖をヒトにおいて考慮すると、
NaBPC157はストレス病理が既に進行しているとき（例え
ば、ストレス誘発の24時間後）に適用された場合でさえ
有用な効果を有するため、これはさらに強調される。

実施例21:細胞保護効果の実証 序： 細胞保護は、元来、種々の侵害性薬剤に対して細胞を
防御する特性、胃粘膜において胃酸に無関係の効果とし
て指摘される効果と定義されてた。後に、この定義は、
種々の臓器の病変を含む胃腸管外の本質的に同様の保護
効果を含むように拡張された（細胞保護−臓器保護）。
NaBPC157の適用で起こり得る細胞保護効果を、エタノー
ル誘発胃病変の細胞保護剤をスクリーニングするための
初期ロバートモデル（Robert's model）に対するそれら
の効果に基づいて研究した。

材料、方法及び結果： NaBPC157（10μｇ又は10ng/kg i.p.）は、予防効果
（96％エタノール（1ml/ラット、i.g.）の１時間前、又
はそれと同時に適用）及び有益な効果（エタノールの１
時間後に病変発生の最大部位に適用）を有する。

細胞保護研究のための酸のない環境を創出するため、
潰瘍誘発手順の24時間前に全胃切除を行った。胃及び胃
酸がない状態で、これまで酸関連十二指腸潰瘍原と考え
られているシステアミンの損傷効果（400mg/kg s.c.、
その24時間後に屠殺）及びNaBPC157（10μｇ又は10ng/k
g i.p.）の細胞保護効果を、同様に細胞保護性であるこ
とが知られる参照薬剤（シメチジン（50）、ラニチジン
（10）、オメプラゾール（10）、ブロモクリプチン（1
0）及びアトロピン（10）（mg/kg i.p.での値、システ
アミンの１時間前）との比較でさらに厳密に調べた。無
処置の胃を有する本来のラットにおいては、適用した物
質は全て強力で有益な効果を有していた。胃を切除した
動物においては、研究した薬剤（すなわち、システアミ
ン前のNaBPC157又は参照薬剤）を適用することで、対照
胃切除システアミンラットにおいて認められた別の重度
の十二指腸病変の発生が有意に妨げられた。システアミ
ンで処置しなかった群においては、システアミン処置腹
壁切開動物において観察される病変（僅か24時間又は48
時間の術後期間の腹壁切開及び胃切除）も潜在的病変も
認められなかった。これらの所見（無傷の胃を有する、
及び胃をもたない胃切除ラットにおけるシステアミンの
相当損傷効果、NaBPC157及び参照薬剤の相当保護、これ
らの損傷又は保護効果は胃酸分泌には関係しない）は細
胞保護効果を示すものである。胃の傷害（例えば、エタ
ノール）とシステアミンの十二指腸傷害との類似性（胃
酸に関係しない病変）が明瞭に示唆される。明らかに酸
とは無関係であり、試験した薬剤全てに共通ではあるが
NaBPC157について明確に顕著である高い“細胞保護能
力”が明らかである。

NaBPC157は他の薬剤よりも非常に少ない用量で有効で
あるため（すなわち、μｇ又はng/kg対mg/kg）、その有
効性（及び治療上の適用）は種々の臓器の病変にまで及
び得る。これは、他の臓器における他の薬剤の有効性も
それらの“細胞保護”効果（例えば、ソマトスタチン：
副腎、膵臓、肝臓、肺及び胃腸管の病変）によって示唆
されるという事実によるものである。

実施例22:臓器保護効果の実証 序： “細胞保護”効果を“臓器保護”効果に有益に拡張す
るのに関し、内皮保護の研究が一般に受け入れられる。
明瞭な指標として、エタノール損傷した胃のラット粘膜
におけるモナストラル・ブルー（Monastral Blue）研究
が、モナストラル・ブルーは損傷した内皮に結合する能
力があるため、広く知られている。

材料及び方法： エタノールの３分前に全てのラットにモナストラル・
ブルー（MB）（Sigma Company、USA）（1.0ml/kg b.
w.、i.v.）を投与し、それらの動物をエタノール処置の
１分後に屠殺した。NaBPC157（10.0μg/kg i.p.）又は
生理食塩水（5.0mg/kg i.p.）をエタノールの１時間前
に投与した。屠殺した直後に胃を取り出し、前述のよう
な公平な観察により病変を評価した。胃及び十二指腸の
代表的な切片をさらなる組織学的分析のために処理し
た。早期（エタノール処置の１分後）での血管傷害をモ
ナストラル・ブルー技法を用いて評価した。染色された
粘膜の領域密度をTEMによって調べた。

結果： MB染色の大きな減少がNaBPC157で処置した群において
一貫して認められた。さらに、NaBPC157の適用に関して
否定的な効果は認められなかった。高投与量（例えば、
g/kg b.w.i.p.）にもかかわらず、種々の基本パラメー
タに対する影響はなく、毒性は観察されなかった。

体内での内皮脈管構造組織の広範な存在及び臓器保護
効果に対する内皮保護の重大な役割を考慮すると、NaBP
C157は種々の臓器病変における臓器保護剤として用いる
ことができる。

実施例23:急性膵炎 材料及び方法： NaBPC157を、ラットにおいて、急性膵炎（胆管結紮に
より誘発）の防御もしくは治療剤として試験した。同時
に、付随して発生する胃及び十二指腸の病変に対するNa
BPC157の影響を調べた。

NaBPC157（10μｇ又は10ng/kg b.w.、i.p.、i.g.）を
結紮の１時間前に予防的に投与し、これに対して治療は
結紮の１日後に毎日適用することにより行った（最終適
用は屠殺する24時間前）。結紮後第５日の最後まで１日
間隔で効果を調べた。

結果： 予備処置適用において、強い膵臓保護が得られた。既
に確立された重度の急性膵炎の状態で適用した場合、明
らかで有益な効果が一貫して認められた。壊死、浮腫、
好中球及び単核球の出現を評価したところ、NaBPC157処
置ラットにおいて見出される壊死、浮腫及び好中球は一
貫して少なかったが、単核球は多かった。血清アミラー
ゼ値の対照データとの比較研究において、増加が顕著に
少ない（NaBPC157予備処置適用）ことに加えて既に増加
している値の低下（NaBPC157治療適用）が認められた。
膵炎に対するその有益な効果と共に、胆管結紮ラットに
おける胃及び十二指腸病変経過に対するNaBPC157の肯定
的な影響が予備処置及び後処置適用の両者において認め
られた。これらを考え合わせると、併発する胃十二指腸
の病理に対する付加的な肯定的効果を伴うNaBPC157は急
性膵炎の治療に用いることができる。

実施例24:心毒性に対する効果 材料及び方法： これらの実験は、アルビノ・ウィスター（Albino Wis
tar）ラット及びハートレー（Hartley）モルモットに対
して行った。心毒性は、塩化バリウム溶液（10mg/kg b.
w.）、デシプラミン（10mg/kg）、ジギタリス（総服用
量6.5mg/kg）及びイソプレナリン（15mg/kg）を頸静脈
カニューレを通して投与することにより誘発した。加え
て、ドキソルビシンを複数回投与（3mg/kg s.c.、13週
にわたって週１回）及び一回投与（7mg/kg、i.v.）で適
用して心筋症を誘発した。また、心毒性は、非薬理学的
心筋損傷として固定ストレス（immobilization stres
s）によっても誘発した。NaBPC157は以下に示されるよ
うに投与した： 1. 塩化バリウム ａ）予備処置（１時間前）:NaBPC157 50μg/kg、10μ
g/kg及び10ng/kg、腹腔内； ｂ）後処置（60秒後）:NaBPC157 10μg/kg及び10ng/k
g、静脈内； 2. デシプラミン:NaBPC157 50μg/kg及び50ng/kg、１
時間前に腹腔内； 3. ジギタリス:NaBPC157 50μg/kg及び50ng/kg、15分
間隔で静脈内； 4. イソプレナリン:NaBPC157 50μg/kg及び50ng/kg、1
5分前に静脈内； 5. 固定ストレス:NaBPC157 10μg/kg及び10ng/kg、１
時間前及び縛った直後、並びに固定して24及び48時間に
腹腔内； 6. （ａ）慢性ドキソルビシン毒性:NaBPC157 10μg/kg
及び10ng/kg、ドキソルビシンと同時に腹腔内； （ｂ）急性ドキソルビシン毒性:NaBPC157 10μg/kg
及び10ng/kg、ドキソルビシンの１時間前に腹腔内。

不整脈モデルにおいて、麻酔した動物の心電図を連続
的に記録した。15秒毎に、又は拍動の乱れが生じた場合
には、50mm/s又は100mm/sで記録の拡張を行った。他の
モデルにおいては、簡単に麻酔した動物を用いて、50mm
/sの紙送り速度で記録を拡張して、心電図を１回又は繰
り返して記録した。ドキソルビシンの毒性は、生化学的
分析による心臓及び他の臓器の巨視的及び微視的検査に
よって評価した。同様の手順を固定ストレス試験におい
て適用した。

結果： 塩化バリウム誘発不整脈のモデルにおいてNaBPC157の
抗不整脈効果が認められた。予備処置研究において、Na
BPC157は不整脈の出現を遅延及び予防し、虚血を減少及
び／又は予防した。後処置研究においては、NaBPC157は
洞律動への迅速な変換を生じ、不整脈の再発を予防し
た。

NaBPC157はデシプラミンによって誘発される心拍の突
然の低下及び伝導の乱れを完全に予防した（PQの長期化
及びQRSの拡大）。また、NaBPC157は、デシプラミンの
副調律（proarrhythmic）効果に関連する心室頻拍及び
重度の房室ブロックも予防した。この効果は用量依存性
であった。

さらに、NaBPC157はジギタリス誘発心毒性に対する選
択効果を有する。NaBPC157は、心拍の突然の低下及び拍
動の乱れ（心室期外収縮、心室頻拍及び房室ブロック）
を妨げ、又は減弱させることにより、それらに対する肯
定的な効果を示す。毒性用量のジギタリスによって誘発
される伝導の緩徐化に対する、ngの用量でのNaBPC157の
効果は大きくなかった。この効果は、マイクログラムの
用量でのNaBPC157でより顕著であった。

NaBPC157は虚血及び心筋梗塞を明らかに予防した。こ
の効果はマイクログラムの投与量でより顕著であった。
予備処置の形態でNaBPC157を一回腹腔内投与すること
で、固定ストレス試験中の心電図で示される虚血及び組
織学的心筋損傷の予防がなされた。既に心電図上で明確
に変化している状態においてNaBPC157を後処置投与する
ことでも虚血が軽減された。マイクログラムの投与量で
のNaBPC157では、特に予備処置適用において、QRS群の
電圧が増加した。

NaBPC157の適用は、一回の、より大きな程度には複数
回のドキソルビシン投与後の、アントラサイクリン心筋
症（筋細胞及び血管壁の重度の損傷、並びに空胞化）の
病態生理学的発見の大幅な低下につながる。絶対値が大
幅に上昇するにも関わらず、LDH活性が大きく低下す
る。

まとめると、NaBPC157は抗不整脈剤、抗狭心症剤及び
心臓保護剤として有用であることが分かる。

実施例25:抗鬱活性 材料及び方法： 様々な抗鬱剤は抗潰瘍活性を有しており、潰瘍及び鬱
病の研究に現在用いられているモデルはかなりの程度の
類似性を共有する。したがって、抑鬱障害がNaBPC157の
ような細胞／臓器保護活性を有する主要抗潰瘍剤によっ
て効果的に影響を受けることがあるという可能性を、２
つのラット抑鬱検定において調べた：強制水泳試験（ポ
ルソルト法（Porsolt's procedure））及び常習性予測
不可ストレス法（chronic unpredictable stress metho
d）（５日の予測不可ストレスプロトコルの後、このス
トレス手順の間の１日１回の薬物適用並びに投薬の第４
日及び第６日の開放領域−不動試験評価）。

結果： 強制水泳試験において、NaBPC157（10μｇ、10ng、10
pg/kg、i.p.）処置ラットの不動時間の減少は、従来の
抗鬱剤、イミプラミン又はニアラミドのそれぞれ15mg又
は40mg（i.p.）で処置した動物の活動性に相当した。常
習性予測不可ストレス法において実験条件をさらに悪化
させると、イミプラミンの活性（30mg）は生じないが、
NaBPC157（10μｇ、10ng）は常習的にストレスに晒され
たラットの運動を用量依存的に改善する。

実施例26:パーキンソン病モデル 材料及び方法： パーキンソン病発生剤（Parkinsongenic agents）、
１−メチル−４−フェニル−1,2,3,6−テトラヒドロピ
リジン（MPTP）（フリーラジカルを形成することにより
ドーパミン黒色線条体系を破壊することが知られている
（30.0mg/kg b.w.、i.p.を１日１回６日間、及び４日後
に50.0mg/kg b.w.、i.p.を１回）又はレセルピン（カテ
コールアミン小胞枯渇剤）（5.0mg/kg b.w.、i.p.）を
適用した。NaBPC157（1.50μｇ又は15.0ng/kg b.w.、i.
p.）を各々のMPTP投与の15分前、又はその代わりに15分
後に適用した。レセルピン研究においては、NaBPC157
（10.0μｇ又は10.0ng/kg b.w.、i.p.）をレセルピンの
15分前、又は既に確立された完全なカテレプシーの状態
でその24時間後に投与した。

結果： NaBPC157はMPTP障害性体性感覚見当識を大きく改善
し、MPTP誘発機能亢進を低下させた。さらに、NaBPC157
はMPTP運動異常（振戦、無動症、カタレプシー、生理食
塩水対照において非常に顕著な他のもの）を減少させ、
これは対照におけるMPTP処置の通常の致死的経過のほぼ
完全な消滅につながる。レセルピン実験において、NaBP
C157は他の非常に顕著なカタレプシーの発生を強く妨げ
た。24時間後に適用した場合、NaBPC157は確立されたカ
タレプシーを逆転させた。これを支持するものとして、
レセルピン低体温の減少（NaBPC157予備処置）及びさら
に顕著な温度低下の逆転（NaBPC157後処置）が一貫して
観察されている。

上で用いられる通常の動物モデルの両者はヒトの障害
及びそれらの治療を示すものとして知られている。μｇ
及びngで処方する予備処置及び後び後処置研究において
高い有効性が示されたという事実から、NaBPC157はパー
キンソン病及びパーキンソン病様病理の治療における使
用について十分に適したものと考えられる。

さらに、レセルピン低体温において観察された効果か
ら、NaBPC157は温度障害の治療について十分に適してい
ると結論付けることが可能である。

実施例27:骨の欠損の治癒に対する効果 材料及び方法： 分節状の骨の欠損の治癒に対する骨髄及びTRIS−BPC1
57の造骨効果を42羽のウサギにおいて術後６週間研究し
た。傷害誘発（0.8センチメートルの骨膜欠損を両橈骨
の中央に創出した）の後、骨髄及びTRIS−BPC157を用い
る実験（１群当たり６羽のウサギ）を以下のように行っ
た：生理食塩水（2mlを筋肉内に、かつ2mlを骨の欠損の
各々に局所的に）処置傷害動物を対照として用いた（群
１）。第２及び第３群においては、骨の欠損の各々を2m
lの自己骨髄（術後第７日）又はTRIS−BPC157（10μg/k
g b.w.、術後第７日及び第14日）のいずれかで局所的に
処置した。群４、５、６においては、TRIS−BPC157を術
後第７日、第９日、第14日及び第16日（10μg/kg b.
w.）に、又は術後第７日−第21日の期間１日１回（10μ
ｇ又は10ng/kg b.w.）、筋肉内（i.m.）に適用した。標
準処置として、その形成の直後に、第７群の骨の欠損を
自己皮質移植片で充填した。

全ての動物を術後第６週で屠殺した。分節状の欠損の
治癒を隔週のＸ線像及び組織学的検査で評価した。

結果： ４つの時間間隔で撮影されたＸ線像（仮骨表面、骨の
欠損の顕微鏡写真濃度測定）及び定量的組織形態測定を
平行して比較することで、骨の欠損に局所的に注入され
た骨髄及び筋肉内に適用されたTRIS−BPC157（特に、10
μg/kg b.w.の１日用量を14日間で）が骨の治癒を有意
に改善した（ｐ＜0.001）ことが明らかとなった。この
効果は自己皮質移植片の効果に匹敵した。

この研究の臨床的な関連性を考慮すると、骨髄及びTR
IS−BPC157（特に、10μg/kg b.w.の１日用量を14日間
で）は骨の欠損の治癒を誘発した。その簡潔な投与及び
合併症の危険性の低さのため、局所的に適用される骨髄
及び、特に、TRIS−BPC157のような筋肉内に投与される
造骨性物質は他のより複雑な外科的方法（すなわち、骨
移植片、血管新生化骨移植片、イリザロフ（Ilizarov）
の方法）よりもヒトにおける治癒障害の治療にとって有
利である。

実施例28:創傷の治癒に対する効果 材料及び方法： NaBPC157を、治癒プロセスに関連する種々の要素に対
するその影響を証明するために用いた。治癒のプロセス
において重要なものであると考えられる要素は肉芽組織
の形成、血管形成及びコラーゲンの産生である。肉芽組
織の形成、コラーゲンの形成、及び血管形成に加えて、
引張り強さの生成に対するNaBPC157の影響を３種類の実
験ラットモデルを用いて試験した:1）皮膚切開創傷、
２）結腸−結腸吻合及び３）食道−十二指腸吻合。検体
を、評点及び形態測定法を用いて、コラーゲン、レチク
リン及び血管について組織学的に評価した。

結果： 全ての実験において、NaBPC157処置ラットと対照との
間に大きな相違が見出された。これらの実験は、治癒プ
ロセスにおけるNaBPC157の強力な増進性の関与を示す。
これらの効果は胃内及び局所適用を含む種々の適用経路
で達成された。さらに、引張り強さの評価では、NaBPC1
57処置ラットにおける値の増加が一貫して明らかとなっ
た。

この動物モデルと対応するヒトの障害との密接な類似
性並びにラット及びヒトにおける治癒プロセスの類似性
の程度の高さに基づくと、NaBPC157はヒトにおける創傷
治癒のための治療において用いることができる。

実施例29:呼吸器障害に対する効果 材料及び方法： 全身脈波検査、ウレタン麻酔（1.5g/kg i.p.）、一定
圧力（0.98kPa）の下での人工呼吸、及びスキサメトニ
ウム（0.2mg/kg i.v.）による骨格筋の弛緩を施したモ
ルモット（ハートレー、両方の性、500−700g b.w.）を
これらの実験において用いた。膨張容積（mm、平均±S
D）を、収縮因子（ヒスタミン、セロトニン、アセチル
コリン、ブラジキニン、i.v.）又はNaBPC157（反復収縮
因子適用の10分前、i.v.）の適用の前後に評価した。

結果： セロトニン、ヒスタミン、アセチルコリン及びブラジ
キニンによって誘発される膨張容積の減少がNaBPC157
（10μg/kg b.w.、i.v.及び／又は10ng/kg b.w.、i.
v.）によって阻害された。

様々な収縮因子によって誘発される気管支収縮に対す
るNaBPC157の観察された有益な効果及び用いたモデルと
ヒトの状態との知られている密接な類似性に基づい、気
管支収縮及び／又は気道の障害に関連する様々な疾患の
治療においてNaBPC157の適用が好結果をもたらすことが
明らかである。

実施例30:肺高血圧症候群に対する効果 材料及び方法： この実験では、雛鳥における肺高血圧症候群（PHS）
及び組織病変の発生に対する一酸化窒素（NO）アゴニス
ト及びアンタゴニストの効果及びNaBPC157の影響を記載
する。急性毒性を調べる実験を行った。これらには、生
理食塩水（1ml i.p.）、NaBPC157（10μg/kg b.w.）、
Ｌ−NAME（NOアンタゴニスト／用量50、100、150mg/kg
b.w.）、Ｌ−アルギニン（NOアゴニスト/100mg/kg b.w.
/それらの組み合わせ（Ｌ−NAME＋NaBPC157、Ｌ−NAME
＋Ｌ−アルギニン）を含む））の１回用量の適用が含ま
れる。脾臓、心臓、肝臓及び肺の病理組織学的（pathoh
istological）検査並びに血液学的分析を行った。さら
に慢性毒性試験を行なった。動物を、５週間毎日、Ｌ−
NAME（10mg/kg b.w.）、Ｌ−アルギニン（100mg/kg b.
w.）、NaBPC157（10μg/kg b.w.）及びそれらの組み合
わせ（Ｌ−NAME＋NaBPC157、Ｌ−NAME＋Ｌ−アルギニ
ン）で腹腔内投与により処置した。各々の群からの対照
（生理食塩水 1ml i.p.）を含む７匹の動物を毎週屠殺
した。

結果： Ｌ−NAMEの適用により処置雛鳥にPHSが生じた。この
効果はＬ−アルギニン及びNaBPC157の同時適用によって
妨げられた。急性及び慢性毒性の両者の病理組織学的検
査により、Ｌ−LAMEが重度の組織損傷（心筋及び肝細胞
の壊死、並びに脾臓におけるリンパ球の壊死）を生じ、
これに対してＬ−アルギニンが全ての臓器において主と
して鬱血、浮腫及び出血を引き起こすことが明らかにな
った。血液学的分析では、Ｌ−NAME処置群の雛鳥におい
て有意のヘモグロビン及び白血球数の減少が示された。
このＬ−NAMEの効果はＬ−アルギニン及びNaBPC157を適
用することによりうまく阻害された。NaBPC157はいかな
る組織又は臓器の損傷をも引き起こさなかった。

上で用いられた動物モデルと対応するヒトの障害との
類似性を考慮すると、NaBPC157は肺高血圧症候群の治療
に用いることができる。さらに、商業的な飼育における
その有用な用途が明らかである。

実施例31:実験的高血圧 材料、方法及び結果： 腎臓を２つ（2K1C）又は腎臓を１つ（1K1C）有する高
血圧動物（ゴールドブラット（Goldblatt）高血圧）に
おいて、NaBPC157は血圧を迅速に低下させる（例えば、
注射後５又は10分）。この効果は1K1Cラットにおいて20
分、2K1C動物においては少なくとも12時間持続した。こ
の効果は、その24−48時間後の第２又は第３の適用の後
に繰り返し得られた。同様に、高果糖（80％）又は高塩
分（15％）餌のいずれかを長期間給餌したラットにおい
て、NaBPC157は他の機構で継続的に上昇した血圧値を正
常値に向けて顕著に低下させた。この治療効果は長期間
持続し、６ヶ月の期間の後でさえ耐性は生じなかった。
基礎血圧値に対するNaBPC157の影響は認められなかっ
た。

他の機構で上昇する血圧値の低下に加えて、NaBPC157
は、様々な臓器に通常現れる病変及び障害の顕著な減
弱、又は消滅さえも引き起こした。これらの病変及び障
害は（対照における塩を増加した餌の３週間後の）：顕
著な実質の出血を伴う非常に重度のヒアリン変性、動脈
壁の変性、心臓における細胞の空胞化、副腎における
（特には、髄質の）重度の鬱血、腎臓における重度の鬱
血、血尿を伴う実質性出血並びに脾臓におけるヘモシデ
ローシス及び赤血球吸収（erythrocytophagia）であっ
た。血管は、NaBPC157処置ラットにおいては、壁の空胞
化が少なく、かつ出血がないことに加えて、損傷が非常
に少なかった。さらに、NaBPC157処置ラットにおいて
は、基底損傷に対する明瞭な保護が一貫して明らかであ
った。

動物の高血圧の種々のモデルを用いて、10μｇ又は10
ng/kg b.w.、i.v.、i.p.又はi.g.で投与されたNaBPC157
は一貫した結果を種々の投薬プログラムの範囲内で達成
した。これらの動物と対応するヒトの状態との明らかな
類似性を考慮すると、NaBPC157は高血圧症及び高血圧に
よって引き起こされる様々な臓器の損傷の治療に用いる
ことができる。

実施例32:出血時間に対する効果 材料及び方法： マウス及びラット（ヘパリン予備処置を施し、又は施
していない）の出血時間に対する２−AMP−BPC157の効
果を、ヒトの血液における凝固パラメータに対するin v
itro活性と共に調べた。

結果： 基礎状態（２−AMP−BPC157、10μｇ、10ng、10pg、1
pg、10fg/kg b.w.、尾の切断と同時のi.p.）において、
強力な用量依存性の出血時間の減少がマウス及びラット
の両者において一貫して示された。ヘパリン（1000IU/k
g i.p.）予備処置研究（出血開始の２時間前）では、10
μｇ又は10ng/kg b.w.、i.p.のいずれかで２−AMP−BPC
157処置した動物において、他の機構で大幅に増加した
出血時間の顕著な減少が正式に認められた。ヒト血液中
の凝固パラメータに対する影響（10μg/mlの濃度での２
−AMP−BPC157、インキュベーション１時間）はin vitr
oでは示されなかった。したがって、内皮層に対する効
果が示唆される。

ヒト及び動物における出血機構の密接な類似性並びに
薬剤スクリーニングに用いられるこれらのモデルの広く
認められている重要性を考慮すると、２−AMP−BPC157
は凝固障害（例えば、ヘパリン処置）の治療に用いるこ
とができる。

実施例33:実験的糖尿病に対する効果 材料、方法及び結果： 腹腔内に投与（すなわち、10μg/kg b.w.）した場
合、NaBPC157は、ラットにおけるアロキサン誘発糖尿病
に加えてストレプトゾトシン誘発糖尿病の発症を妨げる
ことが示された。14日間に糖尿の減少及びより少ない島
病変が見出された。我々の予備実験においては、NaBPC1
57は、既に確立された14日のアロキサン病変の存在下で
適用した場合でも有効であった。さらなる実験におい
て、NaBPC157の抗糖尿病効果を、胃内に適用した場合の
それらの可能性のある活性に特に焦点を当ててさらに研
究した。NaBPC157（10μｇ及び10ng/kg b.w.）を、予備
（アロキサンの適用の24時間又は１時間前）、同時及び
後（アロキサンの適用の48時間後）処置において、300m
g/kg s.c.又は200mg/kg b.w.、s.c.のアロキサンの適用
と組み合わせた。一般には、NaBPC157は上昇したグルコ
ース血清濃度を低下させ、アロキサン処置動物の生存を
有意に高めた（この効果は高投与量のアロキサンで処置
した群において特に明らかであった）。興味深いこと
に、アロキサン処置動物におけるグルコース血清濃度の
上昇に加えて、胃の病変の外見の悪化が対照糖尿病ラッ
トにおいて認められた。NaBPC157投薬プログラムの各々
は、処置条件に関わりなく、潰瘍の重篤性を有意に軽減
した。本質的に、同じ結果がマウスにおいて得られた。

ヒトの病理と用いられたモデルとの類似性を考慮し、
それらが薬剤活性のスクリーニングに広く用いられてい
るという観点から、NaBPC157は糖尿病の治療に用いるこ
とができる。

実施例34:抗侵害効果 材料及び方法： NaBPC157の抗侵害効果を、間接／直接侵害受容及び神
経毒性の様々な実験モデルにおいて、アスピリン及びモ
ルヒネ参照標準と比較することで評価した：苦悶（酢酸
／硫酸マグネシウム）、テール・ピンチング（tail pin
ching）、ホットプレート及びカプサイシン適用。

結果： NaBPC157（ng又はμg/kgの範囲のいずれかで投与、i.
p.）は苦悶（炎症性及び非炎症性、プロスタグランジン
依存性及び非依存性）及びテール・ピンチング試験にお
ける反応を有意に減少させた。ホットプレート試験にお
いては、NaBPC157は、モルヒネとは異なり、正常動物に
対する効果はなかった。さらに、NaBPC157を予備処置の
形態で、又はカプサイシン注射の後14日間に１日１回投
与した。これらの試験において、NaBPC157はカプサイシ
ン異痛症を大幅に減少させた。このカプサイシンの効果
における減少は、確立されたカプサイシン体性感覚ニュ
ーロンの変性が存在する状態でNaBPC157を適用した場合
（カプサイシンの後第14日にのみ適用）には得ることが
できなかった。したがって、他の方法では逃れることが
できない、カプサイシンを適用した後の体性ニューロン
（somatoneuron）の欠乏が毎日のNaBPC157の適用で完全
に回避できたことから、NaBPC157の効果はカプサイシン
感受性体性ニューロンの統合性及びそれらの保護（すな
わち、小径細胞体及び無髄（Ｃ−）もしくは僅かに有髄
化した（Ａ−８）繊維を有する一次求心路ニューロン）
に特異的に関連し得る可能性がある。

カプサイシンがヒト及び動物の両者において本質的に
同じ障害を誘発することを考慮すると、NaBPC157は、様
々な痛みの障害の治療はもちろん、体性感覚ニューロン
の機能障害につながる状態においても用いることができ
る。

実施例35:痙攣に対する効果 材料及び方法 ビククリン、ピクロトキシン、ストリキニーネ及びイ
ソニアジドによって誘発される痙攣に対するKBPC157の
効果を調べた。KBPC157（100μｇ、10μｇ又は10ng/kg
b.w.）は、痙攣剤（mg/kg b.w.、i.p.）ピクロトキシン
（３）、ストリキニーネ（６、３又は1.5）、ビククリ
ン（2.5）及びイソニアジド（800mg）の投与と同時に、
又はその15分前に適用した（i.p.）。

結果： KBPC157は、適用した痙攣剤の全てに対して一貫して
肯定的な（用量及び時間依存性の）抗痙攣効果を生じ
た。用いたモデルとヒトの状態との類似性を考慮する
と、KBPC157は痙攣障害の治療に用いることができる。

実施例36:脊髄損傷 材料及び方法： 雄アルビノ・ウィスター・ラットにおいて、（Th12の
レベルで）露出した脊髄に制御された圧力（血管クリッ
プ・エスラップ（Aesulap）0.10−0.15N）を30秒間加え
ることにより脊髄損傷を誘発した。これらの動物を、損
傷直後及び損傷後第10日まで１日１回、NaBPC157（10μ
ｇ、10ng/kg b.w.、i.p.）又は生理食塩水で処置した。
これらの動物を最後の適用の24時間後に屠殺した。

結果： 臨床的（毎日評価、評点１−５）及び微視的の両者で
注意深く調べた。NaBPC157で処置したラットにおいて、
（対照ラットにおける）他の方法では持続する麻痺の大
幅な減弱が明らかになった。用いたモデルとヒトの状態
との類似性を考慮すると、NaBPC157は脊髄損傷の治療に
おいて用いることができる。

実施例37:慢性アルコール中毒 材料及び方法： 慢性アルコール中毒に対するNaBPC157の効果を調べ
た。雄アルビノ・ウィスター・ラットをこれらの実験に
用いた。これらのラットに市販ウィスキー又はエタノー
ル（10−20％水溶液）のいずれかを３ヶ月間飲ませた。
NaBPC157（10μｇ、10ng/kg b.w.）、プロプラノロール
（10mg/kg b.w.）、及びラニチジン（10mg/kg b.w.）
（対照ラットには等容積の生理食塩水5.0ml/kgを投与し
た）を、胃内又は腹腔内のいずれかで、予防的に（アル
コール開始の10日前）、又はアルコールとの同時処置と
して、又は治療的に（２ヶ月間の終わりに開始、すなわ
ち、この実験の最終月間）適用した。

結果： 門脈における血圧の直接評価により、プロプラノロー
ル（全ての投薬プログラムで投与）に加えてNaBPC157
が、対照において他の方法では増加する門脈血圧値を顕
著に予防及び／又は減少させることが明らかに示され
た。これとは対照的に、ラニジン（ranidine）治療は、
対照動物に存在するものよりもさらに高い門脈圧値につ
ながった。さらに、プロプラノロールよりも、NaBPC157
はアルコール処置ラット胃内の他の方法では進行する病
変も顕著に減弱することが可能であった。同様の有益な
効果は他の臓器病変（すなわち、腎臓、心臓）について
も認められた。

これらの一貫した肯定的な効果と、アルコール摂取の
増加がヒトにおいて同様の変化を生じるという一般に公
知の証拠とを考慮すると、NaBPC157がアルコール傷害の
治療において有用であることが明らかである。

実施例38:脳虚血性障害に対する効果 材料及び方法： NaBPC157（10μｇ、10ng/kg b.w.、i.p.）又は生理食
塩水（5.0ml/kg b.w.、i.p.）を、ラットにおいて頸動
脈を３又は６時間結紮する１時間前、又はその１時間後
のいずれかに適用した。

結果： NaBPC157の強力で肯定的な効果が、予備処置（結紮の
１時間前）に加えて後処置（結紮の１時間後）適用の両
者において明らかである。これは、μｇ及びng範囲の両
者において、並びに３又は６時間の研究の両者において
当てはまるものであった。評点の値とは別に、脳の鬱血
を伴う重度の血管周囲及び脳組織浮腫が最もはっきりと
した、かつ特徴的な所見であった。また、特に小脳にお
いて、脱髄領域も認められた。これらの特徴の全ては、
処置条件に関わらず、NaBPC157処置群の動物においては
ほとんど目立たなかった。

対照において認められる重度の虚血性病変及びラット
とヒトとの虚血性障害の明白な類似性を考慮すると、Na
BPC157がヒトにおける脳虚血性障害の治療に好ましく適
用されることが明らかである。

実施例39:神経損傷に対する効果 材料及び方法： 末梢神経の再生に対するNaBPC157の効果を調べた。麻
酔した成体雄ウィスター・ラット（225−250g）におい
て、右座骨神経を露出させ、結合組織を取り除き、座骨
ノッチに対して遠位側に5cm切除した。３本の神経周囲
縫合糸（10.0エチロン（Ehilon）、エチコン（Ethico
n））をその吻合に用い、正しい神経束の配置を確実な
ものとした。吻合が形成された直後に、1mlのNaBPC157
（２μg/ml又は2ng/ml）の浴で吻合部位に局所的に、胃
内に、又は腹腔内に投与して動物を処置した。対照群は
等量の生理食塩水で処した。指定された術後日数（第
３、６、９、12、及び30日）に、機能試験を行った。こ
れらの試験には、熱水試験（60℃）、冷水試験（２
℃）、歩行路分析、EMG遠位潜伏期間（EMG−distal lat
ency）、及びCMAPの広がりが含まれていた。組織学的及
び形態測定分析のための検体も採取した。同じ手術手順
及び同じ神経部位を用いる他の実験において、顕微手術
用ピンセットで粉砕傷害を60秒間誘発し、NaBPC157を局
所的に適用した。２、７、10、50、及び100日後に評価
を行った。

結果： 臨床的に、又は微視的に評価したところ、特に早期に
おいて、傷害を受けたラットの治癒がNaBPC157の適用に
より顕著に改善された。

この動物の傷害とヒトの状態との密接な類似性を考慮
すると、NaBPC157は末梢神経損傷の治療に用いることが
できる。

実施例40:神経遮断性障害に対する効果 様々な神経遮断薬誘発障害に対するNaBPC157の効果を
調べた。

材料、方法及び結果： NaBPC157（10μｇ又は10ng/kg b.w.、i.p.）を適用す
ることで、ハロペリドール及びフルフェナジン（ハロペ
リドール 0.625、1.25、2.5、5.0及び10.0mg/kg b.
w.、i.p.、フルフェナジン 0.3125、0.625、1.25、2.5
及び5.0mg/kg b.w.、i.p.（4.0ml/kg））の両方の神経
遮断薬の低投与量でのカタレプシーが、その後の時間間
隔において一貫して減弱された。低用量の神経遮断薬に
対する有益な効果に加えて、NaBPC157のさらに強力で有
益な抗カタレプシー効果が、観察した高投与量の両神経
遮断薬に関して、μｇ及びngの両者の用量のNaBPC157で
現れる。また、この効果は、対照スルピリドマウスにお
いてカタレプシーを観察することはできなかったが、ス
ルピリド（20、40、80、及び160mg/kg b.w.、i.p.）処
置動物の体性感覚見当識においても認められた。

ドーパミン系、カタレプシー障害及び神経遮断性障害
に関連する障害の治療においてNaBPC157が好ましく適用
されることが明らかである。

実施例41:ショックの治療における適用 材料及び方法： 実験的な出血性ショックを麻酔したラット（総頸動脈
及び頸静脈内のカニューレ）において調べた。死ぬま
で、又は低血圧（30−35mmHg）で安定するまで、容積を
制御して血液を除去した。これらの実験において、CaBP
C157（10μｇ又は10ng/kg b.w.）又は生理食塩水を、出
血の15分前に腹腔内に（5.0ml/kg）、又は低血圧が５分
間安定した後に静脈内に（3.0ml/kg）投与した。

結果： 対照の値に対して、死亡の前に持続する有意に多量の
血液容積の損失（これは用量依存性）がCaBPC157処置ラ
ットにおいて認められた。CaBPC157で処置した血液量が
少ない低血圧動物において、死を伴わない迅速で長期間
持続する有意の血圧増加が示された。これは、対照群に
おける45分の実験期間が終了する前の短くて弱い血圧上
昇及び75％の死亡率とは対照的である。イグザンギュエ
ート（exanguated）していないことを除いて麻酔後に手
術のみを施したラットにおいて、65分の安定化期間の後
に投与したCaBPC157（i.p.又はi.v.）は同じ適用後の期
間内に動脈血圧に有意の影響を及ぼさなかった。これら
のデータは、CaBPC157が急性の血液容積損失の結果を緩
和する上で有効であり得ることを示唆する。用いた動物
モデルとヒトとの障害との明らかな類似性を考慮する
と、CaBPC157はショックの治療に用いることができる。

実施例42:異常リンパ球に対する効果 材料、方法、及び結果： 臨床的に希なもの−上皮内水疱皮膚炎に関連する遺伝
性好酸球増加症及び亜急性硬化性全脳炎−を患う２名の
女性患者における免疫学的所見を調べた。リンパ球染色
体異常及びＴ細胞増殖に対するNaBPC157の効果（in vit
ro）を調べた。NaBPC157は重症型染色体異常の有意の減
少を誘発し（すなわち、リンパ球所見の正常化）、有糸
分裂サイクルに対する刺激効果を示した。

実施例43:形成異常に対する効果 材料及び方法： マウスにおけるビタミンＡ誘発形成異常に対するNaBP
C157の効果を調べた。NaBPC157（10ng/kg b.w.又は10μ
g/kg b.w.、i.p.）又は生理食塩水（5ml/kg b.w.、i.
p.）を妊娠の第10日にビタミンＡ（15,700IU/kg b.w.、
i.m.）と同時に投与した。ビタミンＡで処置せず、同時
に同じ投与量で生理食塩水を投与したマウスを対照とし
て用いた。

結果： ビタミンＡを適用することにより幾らかの形成異常が
誘発された。形成異常の数の有意の減少がNaBPC157で処
置した群において観察された。胎児障害の治療において
NaBPC157が好ましく適用されることが明らかである。

実施例44:卵巣切除 材料及び方法： 通常の卵巣除去を行った。NaBPC157を、卵巣除去の後
第15日から開始して１日に１回28日間、又は１日に１回
14日間適用した（10μｇ又は10ng/kg b.w.、i.p.）。正
規には、長期化した投薬プログラムにおいて、最後の適
用の24時間後に屠殺した。他の群には、卵巣切除の後第
15日にμｇ量の適用を１回行った。５つの群を対照とし
て用いた:2群を卵巣切除し、生理食塩水で処置して卵巣
切除の後第15日及び第28日に屠殺し、１群を卵巣切除せ
ずに生理食塩水で処置し、かつ２つの非卵巣切除群をNa
BPC157（10μｇ又は10ng/kg b.w.、i.p.）で１日１回28
日間処置した。膣塗沫を各々の動物から手術の５分前、
この実験の第９、14、及び28日に採取し、細胞学的評価
のためにPapを染色した。膣上皮の成熟度を成熟値で表
した。屠殺した後、以下に簡単に記載される生化学的試
験のために肢の骨を各動物から集めた。

生化学的試験： 全ての骨を、種々の方向、前方−、後方−及び側方−
側方への種々の曲げモーメント（一点曲げ）（曲げモー
メント＝Nm）に基づいて試験した。大腿骨及び腓骨をこ
の実験において用いた。これらの骨の遠位部分を骨セメ
ント（パラコス（Palacos））で1cm長の金属管に固定し
た。金属管は装填システムに固定した。これらの骨を継
続的に湿潤に保った。骨の自由な部分の長さを、固定部
分から装填部分までの長さと同様に測定した。一点に固
定された棒状体の曲げの原理に従い、弾性の限度内で実
験を行った、負荷は0.1、0.2、0.5、0.7、1.0Nであっ
た。変形、すなわち曲げの角度を、その骨の末端に固定
された小さい鏡から反射されるレーザービームの偏向の
角度として測定した。この鏡の重量を加えた曲げ力に追
加した。レーザービームを向ける方眼紙（millimeter−
paper）は小さな鏡を載せた骨から約1.5−1.8m離した。
変形の角度は三角法を用いて測定した。毎回、１回の負
荷の間に変形（及び引き続く回復）の持続を測定した。
負荷を除いた後、骨はその開始位置に戻ったが、これは
構造的な変化がその骨に存在せず、かつフックの図（Ho
ok's diagram）の弾性限度内の負荷が加えられたことを
立証する。この観察から、その構造を変化させることな
く、同じ骨に２回、種々の方向に負荷を加えることが可
能であることが示された。引き続く２分間にさらなる変
形が観察されない場合、又はさらなる回復が達成された
場合、これらの点を最終点と見積もった（一般には、測
定時間は約30秒（卵巣切除対照）又は16分（健常）であ
った）。骨の角度変形（負荷及び負荷後の回復）はmm/
秒で表した。

結果： 両方の用量のNaBPC157で毎日処置することにより、非
処置対照ラットにおける萎縮性の成熟値の減少と比較し
て、顕著な成熟値の増加が生じた。したがって、NaBPC1
57は去勢によって生じるラットの膣萎縮を予防できるこ
とが示唆される。

卵巣切除対照群において、最も短い時間での最も小さ
い幅の曲げに加えて、最も小さい幅の戻りが観察され
た。同じ低い値が15又は28日後のいずれかに屠殺した両
対照群において得られた。これは、（第15日又は第28日
のいずれかに屠殺した）両方の卵巣切除した生理食塩水
処置群で認められた。卵巣切除の後第15日に１回、NaBP
C157のμｇ量の適用を受けた群においては、肯定的な傾
向が観察された。NaBPC157で、ng又はμｇ量のいずれか
で処置された他の群の全てにおいて、有意に良好な結果
が得られた。最良の結果は、NaBPC157−μｇ量の処置を
28日間毎日受けた群において得られた。卵巣切除動物に
おけるパラメータの全ては顕著に改善され、改善のレベ
ルは健常群において認められる値を達成する傾向にあっ
た。健常ラットの間では、それらが生理食塩水で処置さ
れたのかNaBPC157（μｇ又はng投与量）で処置されたの
かに関わりなく、相違は認められなかった。

膣萎縮及び骨粗鬆症の発症の両者に関するヒト卵巣切
除状態に関してこれらの動物モデルの一般に受け入れら
れる重要性を考慮すると、NaBPC157を卵巣切除治療にお
いて用いることができることが明らかである。

実施例45:腫瘍 材料、方法及び結果： 実験的腫瘍の一般に用いられるモデルの１つは、マウ
スにおける癌腫及び黒色腫Ｂ−16の転移数の評価に関与
する。様々な実験的腫瘍のモデルと同様に、これらの実
験的腫瘍はヒトの患者において観察される障害とかなり
の類似性を共有する。種々のプロトコルで適用すること
で、NaBPC157は、対応する対照よりも処置したマウスに
おける転移数を減少させることが示された。エールリッ
ヒ腹水腫瘍（EAT）はマウスの全ての系統において成長
可能な腫瘍である。これは、それらの腫瘍細胞が投与さ
れる方法に応じて、腹水又は固体の形態で成長すること
が可能である。一般には、動物腫瘍モデルはヒトの疾患
と部分的にのみ類似性を共有するが、このモデルの使用
は、抗腫瘍剤の研究に適用された場合のその考えられる
有用性のため、一般に受け入れられている。

エールリッヒ腹水腫瘍を注射したマウスの生存（日
数）はほとんど25日未満に限られていた。腫瘍細胞をNa
BPC157（２μg/ml）と共に予備インキュベーションする
ことは、その腫瘍細胞を注射した動物の寿命の長期化に
つながった。90％を上回る動物が45日の観察期間の最後
まで生存した。加えて、様々な細胞成長抑制薬が、実験
動物に加えて、患者における好中球減少を誘発した。シ
クロホスファミドは好中球減少の誘発に一般に用いられ
る薬剤である。シクロホスファミド（180mg/kg i.p.）
を適用することで、有意の障害が誘発された。NaBPC157
は好中球減少を妨げ、網状赤血球を減少させ、かつヘモ
グロビン値を改善した。

したがって、NaBPC157の抗腫瘍潜在能力は明らかであ
る。動物モデルとヒトの状態との明らかな類似性並びに
in vivo及びin vitro実験の両者において得られた有益
な効果を考慮すると、NaBPC157は抗腫瘍治療において有
用である。NaBPC157は細胞成長抑制性の有害効果の減弱
に適する。

実施例46:抗ウイルス活性 材料及び方法： ARBO−ウイルス（ダニ媒介脳炎（TBE）、バーニア（B
hania）、デング（Dengue）１、２、３、４、シンビス
（Sinbis）、ウェストナイル、エアロボ（Ealovo））、
Ａ型肝炎、リンパ球性脈絡髄膜炎（LCM）及び１型ヘル
ペスを、10^-2（0.02ml/マウス）の希釈率のウイルス懸
濁液としてi.c.（又はp.o.（術後）−Ａ型肝炎）で適用
した。NaBPC157（20μg/kg b.w.）又は0.9％NaCl（0.02
ml/マウス）を、ａ）予備処置投薬プログラムで、ｂ）
ウイルスの適用と同時に、又はｃ）確立された疾患症状
の存在下で感染の４日後に、i.c.又はi.p.で適用した。

結果： 疾患症状の発症及びその結果の死（対照マウスにおい
て他の方法では通例感染後第４及び第５日に現れる）の
有意の遅延が、NaBPC157のウイルスとの同時適用の後に
認められた。重度の疾患状況の存在下で投与された場合
には、生存期間の有意の長期化が一貫して認められた。
NaBPC157予備処置の後には症状又は引き続く死のいずれ
もが完全に欠如していることが明らかであった。

得られた結果を立証するため、NaBPC157又は生理食塩
水で予め処置し、かつそれぞれ生存し（NaBPC157）（ウ
イルスの適用にも関わらず）、又は自然に死亡した（生
理食塩水）マウスから調製した脳懸濁液を接種すること
により、適用したウイルス懸濁液（ARBO−ウイルス感
染）の毒力も試験した。生理食塩水−脳懸濁液接種マウ
ス（これは、ウイルス懸濁液を接種した生理食塩水処置
マウスと変わりがなかった）とは異なり、NaBPC157−脳
懸濁液接種マウスにおいては疾患症状又は死亡は観察さ
れなかった。これらのマウスは脳懸濁液接種の後50日間
観察した。

NaBPC157の有益な効果は高温（56℃で30分間）インキ
ュベーションに耐性であった。

これらのウイルスがヒトにおいて同様の障害を誘発す
ることを考慮すると、NaBPC157はウイルス疾患の治療、
特には、一般的な状態が大きく損なわれる（例えば、AI
DS及びAIDS関連状態）治療において用いることができ
る。

実施例47:腸の病変 材料及び方法： NaBPC157（10μｇ又は10ng/kg i.p.、i.D.）の効果
を、ラットにおいて、幾つかの参照標準との比較で、幾
つかの実験的潰瘍モデル（48時間拘束ストレス、皮下シ
ステアミン、胃内96％エタノール潰瘍試験、NSAIAs−病
変、DNFB（ジニトロフルオレンゼン（Dinitrofluorhenz
ene））、食道空腸（esophagojejunal）末梢−側方吻合
の後の逆流性食道炎）（予備／同時／後処置）において
調べた。

結果： NaBPC157投与プログラムのみが試験したモデルの全て
において一貫して有効であった。ブロモクリプチン、ア
マタジン、ファモチジン、シメチジン及びソマトスタチ
ンは無効である（拘束ストレス）か、又は部分的にのみ
有効（ブロモクリプチン、DNFB−腸病変；スクラルフェ
ート、ラニチジン、コレスチラミン、逆流性食道炎）で
あった。参照ペプチドを考慮すると、用量依存性の保護
（システアミン）及び／又は部分的な肯定的効果（処置
条件に関連）（エタノール）がグルカゴン、NPY及びセ
クレチンで得られ、これに対してCCK/26−30/は有効で
はなかった。

これらのモデルは全て胃腸の病変の治療において現在
用いられる薬剤のスクリーニングに用いられているこ
と、及びNaBPC157の一貫した有益な効果を考慮すると、
全腸管の病変の治療において好ましく適用されることが
明らかである。

実施例48:認知障害に対する効果 材料及び方法： 抗コリン作動性薬剤（スコポラミン、アトロピン、10
mg/kg b.w.、i.p.）の適用はラットにおける有意の認識
欠如、水中Ｔ字迷路における動物の行動を長期間評価す
る、うまく再現された知見につながった。

結果： 対照に対する、スコポラミン及びアトロピン処置ラッ
トにおける誤りの数の増加を明瞭に立証することができ
た。この認識欠如は、引き続くNaBPC157（10μｇ又は10
ng/kg b.w.、i.p.）によって消滅した（得られた値は対
照値と同等であった）。

ヒトの認識機能障害に関するこれらのモデルの広範に
関わり合う重要性を考慮すると、NaBPC157が認識障害の
治療において有用であることが明らかである。

実施例49:禁断障害に対する効果 材料、方法及び結果： NaBPC157はGABA作動系と相互作用する抗痙攣効果を示
し、ジアゼパム（5.0mg/kg i.p.、１日２回10日間）と
同時投与（10μg/kg、10ng/kg i.p.）された場合にジア
ゼパムの効力を改善した。NaBPC157はジアゼパム寛容を
減弱させ、禁断効果及び身体的依存を後送りにした。順
化投薬プログラムの24時間後の寛容検定において、ジア
ゼパム単独で前もって順化されているマウスにジアゼパ
ム（5.0mg/kg i.p.）が再度投与された場合、イソニア
ジド処置（800mg/kg i.p.）の後に健常マウスよりも短
い前痙攣潜伏期が観察された。これは、NaBPC157（両用
量）及びジアゼパムで順化した動物においては完全に回
避された。身体的依存の検定（順化処置の６、14、42、
及び72時間後に評価）においては、ジアゼパム順化マウ
スにおいて、その順化処置の42及び72時間後にイソニア
ジド処置した後に、非順化健常マウスよりも短い前痙攣
潜伏期が認められた。ジアゼパムと組み合わせたNaBPC1
57（10μg/kg用量）は、この効果を最後に観察した間隔
まで後送りにした。この群においては、６時間間隔で、
ジアゼパム順化マウスとは異なり、イソニアジド前痙攣
潜伏期は対応する対照よりも依然として長かった。NaBP
C157はいかなる寛容効果をも生じない。

ヒトの状態に関してこれらのモデルの重要性を考慮す
ると、NaBPC157が禁断障害の治療において有用であるこ
とが明らかである。

実施例50:腎臓障害に対する効果 材料及び方法： 塩化第二水銀（1mg/kg i.v.）又はシスプラチナ（10m
g/kg s.c.）を投与することで実験動物に急性腎不全が
生じる。このようにして誘発した場合、腎不全は対応す
るヒトの障害と強く相関する。したがって、ラットにお
いて誘発された病変はヒトの患者における対応する病変
とかなり高い程度の類似性を共有する。

結果： NaBPC157は、予備処置及び後処置条件の両者におい
て、ラットにおける病変を著しく減弱した。片側の腎を
摘出することで、残りの腎臓の著しい機能的過負荷及び
機能的肥大が生じた。NaBPC157処置は片側腎摘出動物に
おける利尿を増進し、残りの腎臓の肥大を減少した。し
たがって、代償性腎肥大の機能的理論の点からは、これ
らの所見は残りの腎臓の機能の改善ということを強く強
調している。これはまた、さらなる生化学的な結果によ
っても支持される。加えて、これらのデータは、腎動脈
狭窄症の、及び／又は片側腎摘出した高血圧ラットにお
いて得られる効果と完全に一致する。腎臓障害の治療に
おけるNaBPC157の有用な用途が明らかである。

実施例51:末梢血リンパ球の細胞性免疫応答 BPCに対する末梢血リンパ球の細胞性免疫応答を、対
照及び表２に示される種々の疾患の患者において調べ
た。BPCに対する末梢血Ｔ細胞の応答を、７日細胞培養
物を用いる、deSmetらによって記述される方法（deSmet
MDら，“Cellular immune responses of patients wit
h uveitis to retinal antigens and their fragment
s."Am.J.Ophthal.,110:135−142,1990）によって試験し
た。細胞を抗原なしで、及び20μg/lの抗原（BPC157ペ
ンタデカペプチド）と共にインキュベートした。各々の
患者について、抗原刺激培養物の平均カウントを抗原、
すなわちBPC157ペンタデカペプチドを添加していない対
照細胞培養物の平均カウントで割ることにより刺激指数
を算出した。これらの結果を表２に示す。

対照被験体において測定された≦２の対照値（表２）
は他の研究者の同様の分子量を有するペプチドについて
の値と一致し、すなわち、BPC157ペンタデカペプチドに
対する末梢血リンパ球の感作は対照被験体においては観
察されなかった。種々の疾患の患者において、表２に示
されるBPCに対する著しい細胞性応答はこの胃液ペプチ
ドに対する全身性のリンパ球感作を示していた。これら
のデータは、明らかに種々の疾患の患者におけるBPC関
連障害の存在を明瞭に示す。これは、対応する障害の免
疫調節治療におけるBPC関連薬剤（例えば、ペンタデカ
ペプチドBPC157の塩）の適用を示唆する。

上記薬理学的研究の結果は、ストレス及び疾患に対す
る臓器の保護及び、一般には、臓器の機能の正常化にお
けるBPCペプチドの塩の有利な活性を示す。また、本発
明のペプチド塩は、幾つかのヒト及び／又は動物の疾患
及び障害の予防及び治療に有効でもある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (73)特許権者 999999999 ターコヴィック，ブランコ クロアチア共和国 エイチアール― 41000 ザグレブ，バウエロヴァ 18 (73)特許権者 999999999 グラバレヴィック，ゼリコ クロアチア共和国 エイチアール― 41000 ザグレブ，ミクリック オドヴ ォジャク ７ (73)特許権者 999999999 ロトクヴィック，イーヴォ クロアチア共和国 エイチアール― 41000 ザグレブ，クヴィエトノ，ナセ リエ 21 (73)特許権者 999999999 ミセ，スティエパン クロアチア共和国 エイチアール― 58000 スプリト，ルーズヴェルトヴァ 37 (73)特許権者 999999999 ドゥヴニャック，マルコ クロアチア共和国 エイチアール― 41000 ザグレブ，メドゥリセヴァ 18 ビー (73)特許権者 999999999 ウドヴィシック，イヴァン スイス国 シーエイチ―6370 スタン ス，エネトモーセルシュトラーセ 16 (72)発明者 シキリク，プレドラグ クロアチア共和国 エイチアール― 41000 ザグレブ，ジュリシセヴァ ５ (72)発明者 ペテク，マリジャン クロアチア共和国 エイチアール― 41000 ザグレブ，ヴィスンジカ 29 (72)発明者 セイワース，スヴェン クロアチア共和国 エイチアール― 41000 ザグレブ，パルモティセヴァ 17 (72)発明者 ターコヴィック，ブランコ クロアチア共和国 エイチアール― 41000 ザグレブ，バウエロヴァ 18 (72)発明者 グラバレヴィック，ゼリコ クロアチア共和国 エイチアール― 41000 ザグレブ，ミクリック オドヴ ォジャク ７ (72)発明者 ロトクヴィック，イーヴォ クロアチア共和国 エイチアール― 41000 ザグレブ，クヴィエトノ，ナセ リエ 21 (72)発明者 ミセ，スティエパン クロアチア共和国 エイチアール― 58000 スプリト，ルーズヴェルトヴァ 37 (72)発明者 ドゥヴニャック，マルコ クロアチア共和国 エイチアール― 41000 ザグレブ，メドゥリセヴァ 18 ビー (72)発明者 ウドヴィシック，イヴァン スイス国 シーエイチ―6370 スタン ス，エネトモーセルシュトラーセ 16 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07K 7/06 - 7/08 C07K 14/47 A61K 38/00 - 38/17 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (17)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】負に帯電したペプチドおよび無機または有
   機の無毒な塩基のカチオンを含むBPC（Body Protection
   Compound）ペプチド塩であって、前記負に帯電したペ
   プチドが８〜15個のアミノ酸残基からなり、下記の一般
   式： 〔Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala］
   ^{（−）または（２−）} ［式中、 Xaaは、中性脂肪族アミノ酸残基であり、 Yaaは、塩基性アミノ酸残基であり、 Zaaは、酸性アミノ酸残基である〕 で表されるアミノ酸配列を含むものである、前記BPCペ
   プチド塩。
2. 【請求項２】前記カチオンが、アルカリ金属、アルカリ
   土類金属、Zn²⁺、第１級、第２級、および第３級アミ
   ン、特に、Na⁺、K⁺、Li⁺、Cs⁺、Ca²⁺、NH⁴⁺、トリエタ
   ノールアミン^＋、シクロヘキシルアミン^＋、２−AMP
   ⁺（２−アミノ−１−プロパノール）、およびTRIS⁺（ト
   リス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン）からなる
   群より選ばれる、請求項１に記載の塩。
3. 【請求項３】Xaaが、Ala、bAla、Leu、Ile、Gly、Val、
   Nle、またはNvaであり、 Yaaが、Lys、Arg、Orn、またはHisであり、 Zaaが、Glu、Asp、Aad、またはApmである、請求項１ま
   たは２に記載の塩。
4. 【請求項４】請求項１〜３のいずれか１項に記載の塩及
   び製薬上許容される担体を含む医薬用組成物。
5. 【請求項５】トレハロースを更に含んでなる、請求項４
   に記載の医薬用組成物。
6. 【請求項６】前記一般式が、 である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の塩。
7. 【請求項７】前記ペプチドが、 からなる群より選ばれる、請求項１〜６のいずれか１項
   に記載の塩。
8. 【請求項８】前記ペプチドが、特に最初と最後のアミノ
   酸残基間でアミド結合により環化されている、請求項１
   〜７のいずれか１項に記載の塩。
9. 【請求項９】前記塩が、好ましくはpH6.0〜8.5の水性ま
   たは水性／アルコール性の溶液中に溶解されている、請
   求項１〜８のいずれか１項に記載の塩。
10. 【請求項１０】製薬上有効な量の、請求項１〜９のいず
    れか１項に記載のBPCペプチド塩と、場合により、生理
    学的に許容される担体とを含んでなる、適合性および貯
    蔵安定性のある医薬組成物。
11. 【請求項１１】トレハロースと混合された、経口投与で
    使用するための、請求項10に記載の医薬組成物。
12. 【請求項１２】８〜15個のアミノ酸残基を含み、下記の
    一般式： ［Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala］
    ^{（−）または（２−）} 〔式中、 Xaaは、中性脂肪族アミノ酸残基であり、 Yaaは、塩基性アミノ酸残基であり、 Zaaは、酸性アミノ酸残基である〕 で表されるアミノ酸配列を含む負に帯電したペプチドと
    無機または有機の無毒な塩基のカチオンとを含むBPCペ
    プチド塩の、適合性および貯蔵安定性のある医薬組成物
    を製造するための使用であって、前記医薬組成物が製薬
    上有効な量の前記BPCペプチド塩と場合により生理学的
    に許容される担体とを含み、以下の疾患： 高血圧症、アンギナ、インポテンス、循環性および敗血
    症性ショック、卒中、炎症、呼吸窮迫症候群、血小板お
    よび白血球の粘着および凝集、内皮機能不全、胃腸炎、
    蠕動異常、糖尿病、膵炎、低血圧症、ならびにパーキン
    ソン病； 感覚神経障害、ヘルペス後神経痛、アトピー性皮膚炎、
    損傷組織の治癒障害、後天性の寒冷および温熱蕁麻疹、
    乾癬、水疱性類天疱瘡、湿疹、光線過敏症、慢性関節
    炎、胃腸炎、ならびに上気道および下気道の特異的また
    は非特異的反応亢進（喘息、鼻炎）； 内皮障害； 創傷、潰瘍； 慢性関節炎、および遅延型過敏症に関連した疾患、なら
    びに胃腸炎； 放射線照射により発生する遊離基によって誘発される器
    官障害； 神経分裂症、アンフェタミン攻撃作用、薬物乱用； ストレス関連症状； 随伴性胃十二指腸炎を伴う急性膵炎； 心臓障害； 抑鬱症； パーキンソン病およびパーキンソン病様症状； 体温障害； 骨機能障害； 高血圧により誘発される種々の器官損傷； 凝固障害； 疼痛障害； 痙攣障害； 脊髄損傷； アルコール乱用またはアルコール摂取量の増大により誘
    発されるアルコール性障害； 脳虚血性疾患； 末梢神経障害； カタレプシー疾患および神経弛緩障害； 異常および突然変異リンパ球に関連した疾患； 胎児障害； 卵巣摘出状態から生じる膣萎縮および骨粗鬆症の進行； 腫瘍； AIDSまたはARC; 胃腸炎； 認知障害； 退薬症状； 腎臓障害および細胞性免疫応答の障害； の治療を行うためのものである、前記BPCペプチド塩の
    使用。
13. 【請求項１３】適合性および貯蔵安定性のある医薬組成
    物を製造するための請求項１〜９のいずれか１項に記載
    のBPCペプチド塩の使用であって、前記医薬組成物が製
    薬上有効な量の前記BPCペプチド塩と場合により生理学
    的に許容される担体とを含み、以下の疾患： 高血圧症、アンギナ、インポテンス、循環性および敗血
    症性ショック、卒中、炎症、呼吸窮迫症候群、血小板お
    よび白血球の粘着および凝集、内皮機能不全、胃腸炎、
    蠕動異常、糖尿病、膵炎、低血圧症、ならびにパーキン
    ソン病； 感覚神経障害、ヘルペス後神経痛、アトピー性皮膚炎、
    損傷組織の治癒障害、後天性の寒冷および温熱蕁麻疹、
    乾癬、水疱性類天疱瘡、湿疹、光線過敏症、慢性関節
    炎、胃腸炎、ならびに上気道および下気道の特異的また
    は非特異的反応亢進（喘息、鼻炎）； 内皮障害； 創傷、潰瘍； 慢性関節炎、および遅延型過敏症に関連した疾患、なら
    びに胃腸炎； 放射線照射により発生する遊離基によって誘発される器
    官障害； 神経分裂症、アンフェタミン攻撃作用、薬物乱用； ストレス関連症状； 随伴性胃十二指腸炎を伴う急性膵炎； 心臓障害； 抑鬱症； パーキンソン病およびパーキンソン病様症状； 体温障害； 骨機能障害； 高血圧により誘発される種々の器官損傷； 凝固障害； 疼痛障害； 痙攣障害； 脊髄損傷； アルコール乱用またはアルコール摂取量の増大により誘
    発されるアルコール性障害； 脳虚血性疾患； 末梢神経障害； カタレプシー疾患および神経弛緩障害； 異常および突然変異リンパ球に関連した疾患； 胎児障害； 卵巣摘出状態から生じる膣萎縮および骨粗鬆症の進行； 腫瘍； AIDSまたはARC; 胃腸炎； 認知障害； 退薬症状； 腎臓障害および細胞性免疫応答の障害； の治療を行うためのものである、前記BPCペプチド塩の
    使用。
14. 【請求項１４】８〜15個のアミノ酸残基を含み、下記の
    一般式： ［Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala］
    ^{（−）または（２−）} 〔式中、 Xaaは、中性脂肪族アミノ酸残基であり、 Yaaは、塩基性アミノ酸残基であり、 Zaaは、酸性アミノ酸残基である〕 で表されるアミノ酸配列を含む負に帯電したペプチドと
    無機または有機の無毒な塩基のカチオンとを含むBPCペ
    プチド塩の、適合性および貯蔵安定性のある医薬組成物
    を製造するための使用であって、前記医薬組成物が製薬
    上有効な量の前記BPCペプチド塩と場合により生理学的
    に許容される担体とを含む細胞保護剤および器官保護剤
    としての医薬組成物である、前記BPCペプチド塩の使
    用。
15. 【請求項１５】適合性および貯蔵安定性のある医薬組成
    物を製造するための請求項１〜９のいずれか１項に記載
    のBPCペプチド塩の使用であって、前記医薬組成物が製
    薬上有効な量の前記BPCペプチド塩と生理学的に許容さ
    れる担体とを含む細胞保護剤および器官保護剤としての
    医薬組成物である、前記BPCペプチド塩の使用。
16. 【請求項１６】８〜15個のアミノ酸残基を含み、下記の
    一般式： ［Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala］
    ^{（−）または（２−）} 〔式中、 Xaaは、中性脂肪族アミノ酸残基であり、 Yaaは、塩基性アミノ酸残基であり、 Zaaは、酸性アミノ酸残基である〕 で表されるアミノ酸配列を含む負に帯電したペプチドと
    無機または有機の無毒な塩基のカチオンとを含むBPCペ
    プチド塩を製造する方法であって、少なくとも１種のBP
    Cペプチドを水性または水性／アルコール性の溶媒中で
    １種以上の塩基と混合してBPCペプチド塩にすることを
    含む、前記方法。
17. 【請求項１７】少なくとも１種のBPCペプチドを水性ま
    たは水性／アルコール性の溶媒中で１種以上の塩基と混
    合してBPCペプチド塩にすることにより、請求項１〜９
    のいずれか１項に記載のBPCペプチド塩を製造する方法
    であって、前記塩のカチオンが無機または有機の無毒な
    塩基のカチオンである前記方法。