JP3208942B2 - 水溶性テトラアザポルフィン、蛍光標識用色素、標識された生物由来物質、これらを含有する試薬及びこれらを用いた蛍光分析法 - Google Patents

水溶性テトラアザポルフィン、蛍光標識用色素、標識された生物由来物質、これらを含有する試薬及びこれらを用いた蛍光分析法

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、水溶性テトラアザポル
フィン、蛍光標識用色素、蛍光標識用色素で標識された
生物由来物質、これらを含有する試薬及びこれらを用い
た蛍光分析法に関する。
【０００２】
【従来の技術】標識法は、古くから分子、細胞、抗原、
抗体、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリペプチドなど数多くの物質
を対象にして利用されている。これまでは、その研究の
歴史が古いことからラジオアイソトープ（ＲＩ）法によ
る標識法が広く利用されていた。ＲＩは、被爆の危険性
が高いために、その使用に際しては特殊な免許が必要で
あると同時に特殊な実験室を必要とし、限られた施設で
限られた人しか用いることができなかった。
【０００３】これに対して、着色物質、化学発光法及び
蛍光法などは、ＲＩを用いる必要がないために、危険性
のない標識法として注目されている。着色物質は、検出
感度を高くできないためにＲＩ法に置き換わるほどの有
用性はない。一方、化学発光法及び蛍光法は、検出感度
を高くすることができることから、ＲＩ法に替わる安全
な標識法とされている。しかしながら、化学発光法は２
種以上の化学反応の組み合わせによる発光であるため
に、その操作が繁雑となる。したがって、蛍光標識法が
安全、簡便、高感度という点において最も優れた標識法
ということになる。
【０００４】従来は、紫外域で蛍光を発する色素しか知
られていなかったが、最近、ローダミン系及びオキサジ
ン系色素が、アルゴンレーザ又はＨｅ−Ｎｅレーザで励
起できる色素として、この分野で知られるようになって
きた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】最近、光源としては、
小型の半導体レーザ（６７０〜８４０nm）が安価に入手
できるようになったことから、機器の安価、小型、軽量
化をめざし、今後これが主流となるものと考えられる。
しかし、従来用いられているローダミン系色素及びオキ
サジン系色素等はこの半導体レーザでは使用できない問
題がある。
【０００６】最近、適度な蛍光量子収率を示し水に対し
て高い溶解性を示すフタロシアニンを蛍光標識用色素と
して用いることが提案された（ＷＯ公開特許第８８／０
４７７７号公報、ＷＯ公開特許第９０／０２７４７号公
報）。しかし、フタロシアニン類はそのＱ−バンドの極
大吸収域及び蛍光発光域が６７０〜６９０nmの領域にあ
って、発振波長が７００nm以上の半導体レーザでは励起
できないばかりか、６７０〜６８０nmの半導体レーザを
用いた場合には、レーザの発振波長域と蛍光発光域が重
なっているために、検出される光が、発光された蛍光に
よるものであるのか、散乱されたレーザ光源によるもの
かの区別ができないために、利用できない。つまり、主
流となっている半導体レーザを用いた系には全く使うこ
とができないという致命的な欠陥がある。
【０００７】また、生体内物質である血液中のヘムなど
が共存した系では、ヘムが７００nm以下に吸収域を有し
ており、フタロシアニンでは、これと重なるために、生
体内物質による測定上の妨害を受けるという問題があ
る。本発明は、血液中に存在するヘム等の生体内物質に
影響されず、また、安価で小型の半導体レーザ（６７０
〜８４０nm）を用いて測定するための、種々の抗原、薬
物、ＤＮＡ等の分析やあるいはＤＮＡの塩基配列の分析
等に有用な新規な化合物、蛍光標識色素、試薬及び臨床
検査試薬並びに蛍光分析法を提供するものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記問題
を解決するため鋭意検討を行った結果、本発明に至った
ものである。本発明は下記（１）〜（１２）に関するも
のである。すなわち、 （１）一般式（Ｉ）
【化３】 〔一般式（Ｉ）中、Ｍは、Ａｌ、Ｓｉ、Ｐ、Ｇａ、Ｇｅ
又はＳｃを示し、ｋは０又は１の整数を示し、ｋが１の
場合Ｌは、 −Ｓｉ(ＣＨ3)2(ＣＨ2)aＮＨ−、 −Ｓｉ(ＣＨ3)2(ＣＨ2)bＮＨ・ＣＯＯ−、 −Ｓｉ(ＣＨ3)2Ｏ−又は −Ｓｉ(ＣＨ3)2ＮＨ− （ただし、ａ及びｂは、それぞれ独立に１〜６の整数を
示す）を示し、ｘは１〜６の整数を示し、ｙは１〜２０
０の整数を示し、Ｒ1は水素原子、直鎖、分岐若しくは
環状のアルキル基、アリール基、複素環基又はアラルキ
ル基を示し、ｐは、
【化４】 のＭへの結合数を表わす１〜２の整数を示し、Ａは、ｍ
個の置換基ＸＱ又はＱを有していてもよい２つ以上の芳
香環が縮環した縮合多環芳香族環を示し、４個のＡはそ
れぞれ異なっていてもよく、Ｘは、酸素原子、イオウ原
子、窒素原子、リン原子、ケイ素原子、セレン原子、Ｎ
Ｈ・ＣＯ、ＮＨ・ＰＯ2、ＮＨ・ＳＯ2、Ｏ・ＣＯ、Ｏ・
ＳＯ2、Ｏ・ＰＯ2、Ｓ・ＣＯ、Ｓ・ＳＯ2、Ｓ・ＰＯ2、
ＣＯ、ＳＯ2又はＰＯ2を示し、Ｑは、飽和若しくは不飽
和の炭化水素基又は複素環基を示し、ｍは、４個のＡに
ついて、それぞれ独立に１〜４の正の整数を示し、ｎ
は、４個のＡについてそれぞれ独立に０以上の整数を示
し、４ｎ（４個のｎの合計、即ちＥＺの合計数）は、１
以上の整数を示し、４ｎ個の置換基（ＥＺ）は、それぞ
れ独立であってかつそれぞれ独立に、Ａを構成する縮合
多環芳香族環及び／又はＱに結合しており、Ｅ及びＺ
は、Ｚがアニオンの場合Ｅはカチオン性基、Ｚがカチオ
ンの場合Ｅはアニオン性基、Ｚはなくてもよく、その場
合にはＥはポリエチレングリコール残基、ポリエーテル
残基、ポリアミン残基、ポリアルコール残基又はポリカ
ルボン酸残基を含む結合基を示す〕で表わされる新規な
水溶性テトラアザポルフィン。
【０００９】（２）上記（１）記載の水溶性テトラアザ
ポルフィンからなる蛍光標識用色素。 （３）上記（２）記載の蛍光標識用色素を含有する試
薬。 （４）上記（２）記載の蛍光標識用色素及び非イオン系
界面活性剤を含有する試薬。 （５）上記（２）記載の蛍光標識用色素で標識された生
物由来物質。 （６）上記（５）記載の標識された生物由来物質を含有
する試薬。 （７）上記（５）記載の標識された生物由来物質及び非
イオン系界面活性剤を含有する試薬。 （８）生物由来物質が抗原、抗体又はヌクレオチドであ
る上記（５）記載の生物由来物質又は上記（６）若しく
は（７）記載の試薬。 （９）抗原が薬物である上記（８）記載の生物由来物質
又は試薬。 （１０）抗体がモノクローナル抗体である上記（８）記
載の生物由来物質又は試薬。 （１１）ヌクレオチドがオリゴヌクレオチド又はポリヌ
クレオチドである上記（８）記載の生物由来物質又は試
薬。 （１２）ヌクレオチドがＡＴＰ、ＣＴＰ、ＧＴＰ、ＴＴ
Ｐ、ＵＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴ
Ｐ、ｄＵＴＰ、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ、ｄｄＧＴＰ、
ｄｄＴＴＰ、ｄｄＵＴＰ又はこれらの誘導体である上記
（８）記載の生物由来物質又は試薬。 （１３）（２）記載の蛍光標識用色素を蛍光標識として
用いることを特徴とする蛍光分析法。 （１４）光源として波長６７０〜８４０nmの半導体レー
ザーを用いる（１３）記載の蛍光分析法。 （１５）（５）記載の標識された生物由来物質を用いる
（１３）又は（１４）記載の蛍光分析法。
【００１０】一般式（Ｉ）で表わされる水溶性テトラア
ザポルフィン誘導体は、水だけでなく、メタノール、エ
タノールなどの極性有機溶媒にも優れた溶解性を示すこ
とからクロマトグラフィー法、再結晶法及び再沈殿法な
どにより、容易に精製し純度を向上できる。
【００１１】本発明の一般式（Ｉ）の化合物において、
Ｒ1で表わされる直鎖、分岐若しくは環状のアルキル
基、アリール基、複素環基又はアラルキル基としてはメ
チル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチ
ル基、イソブチル基、sec−ブチル基、tert−ブチル
基、ペンチル基、sec−ペンチル基、tert−ペンチル
基、ネオペンチル基、２−エチルヘキシル基、シクロプ
ロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロ
ヘキシル基、フェニル基、ｏ−トリル基、ｍ−トリル
基、ｐ−トリル基、２，３−キシリル基、２，４−キシ
リル基、ｏ−クメニル基、ｍ−クメニル基、ｐ−クメニ
ル基、メシチル基、チエニル基、フリル基、テトラヒド
ロフルフリル基、ベンジル基、フェネチル基、トリチル
基、ナフチル基、ノルボルニル基等がある。
【化５】 で表わされる基としては、平均分子量２００〜１０，０
００のポリエチレングリコール残基、ポリプロピレング
リコール残基などがある。
【００１２】一般式（Ｉ）においてＡが有していてもよ
い置換基であるＸＱ又はＱにおける、Ｑで表わされる飽
和又は不飽和の直鎖状、分枝状又は環状の炭化水素基の
具体例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イ
ソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec−ブチル
基、tert−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネ
オペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、
ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、ビニ
ル基、１−プロペニル基、アリル基、イソプロペニル
基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、２−ペンテニル
基、エチニル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、
シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘキセニ
ル基、フェニル基、トリル基、キシリル基、メシチル
基、クメニル基、ベンジル基、フェネチル基、ナフチル
基等があり、複素環基の具体例としては、フリル基、チ
エニル基、ピロリル基等がある。
【００１３】Ｚで表わされるアニオンの例としては、Ｃ
ｌ-、Ｂｒ-、Ｉ-、ＣｌＯ4 -、ＳＯ4 -、ＰＯ4 3-などがあ
り、Ｚで表わされるカチオンの例としては、Ｈ+、Ｌ
ｉ+、Ｎａ+、Ｋ+、Ｍｇ2+、Ｃａ2+、アンモニウムイオ
ンなどがあり、Ｅで表わされるカチオン性基としては、
【化６】 〔ただし、Ｒ2及びＲ3は、前記Ｒ1で示したアルキル
基、アリール基、複素環基又はアラルキル基と同意義
か、または親水性置換基を有するこれらの基である〕な
どがあり、Ｅで表わされるアニオン性基としては、−Ｃ
ＯＯ−、−ＯＳＯ3−、−ＯＰＯ3−、−ＳＯ3−などが
あり、Ａで表わされる２つ以上の芳香環が縮環した縮合
多環芳香族環としては、ナフタレン環、アントラセン
環、フェナントレン環、キノリン環、キノキザリン環、
クリセン環などがあり、その結合位置は特に制限しな
い。
【００１４】これらの置換基の種類及び形状は、前記一
般式（Ｉ）で表わされる新規なテトラアザポルフィンを
水あるいは極性有機溶媒に溶解するときの溶解度だけで
なく、溶液中における吸収スペクトル波形及び吸収極大
波長あるいは蛍光発光極大波長及び蛍光発光強度に大き
な影響を及ぼす。
【００１５】またｐは、
【化７】 のＭへの結合数を表わす１〜２の整数を示し、ＭがＡ
ｌ、Ｓｃ、Ｇａの場合ｐは１、ＭがＳｉ、Ｐ、Ｇｅの場
合ｐは２を表わす。一般式（Ｉ）の化合物においてＥＺ
で表わされる水溶性基は、Ａで表わされる縮合多環芳香
族環及び／又はその芳香族環に結合しているＱである炭
化水素基又は複素環基に結合している。このＥＺが結合
している位置については、一般式（Ｉ）の化合物の合成
経路の違いによって決まる。たとえば、後述する実施例
２で示すように、加水分解することによりＥＺとなりう
る置換基（エステル基）を有するＸＱをＡで表わされる
縮合多環芳香族環に導入後、加水分解すれば、水溶性基
ＥＺは、Ｑにのみ置換していることになる。
【００１６】以下に本発明の水溶性テトラアザポルフィ
ンを例示する。
【００１７】
【表１】
【００１８】
【表２】
【００１９】
【表３】
【００２０】
【表４】
【００２１】
【表５】
【００２２】
【表６】
【００２３】
【表７】
【００２４】
【表８】
【００２５】
【表９】
【００２６】
【表１０】
【００２７】
【表１１】
【００２８】
【表１２】
【００２９】
【表１３】
【００３０】
【表１４】
【００３１】
【表１５】
【００３２】
【表１６】
【００３３】
【表１７】
【００３４】
【表１８】
【００３５】一般式（Ｉ）で示される水溶性テトラアザ
ポルフィンは、種々の合成方法によって得ることができ
る。例えば、次の経路により合成できる。
【化８】 ここで、ＮｃＡは一般式（Ｉ）において、
【化９】 −(ＥＺ)ｎ及びＸＱ（但し、Ｑを含む、以下同様）を除
いた部分を示し、ＹR−ＮｃＡ−(ＸＱ)−ＥＺは、一般
式（Ｉ）の化合物であり、ＹRはＭに結合する
【化１０】 を示し、ＹH−ＮｃＡ−(ＸＱ)−ＥＺは一般式（Ｉ）に
おいて、Ｍの置換基がＹRでなく−ＯＨである化合物で
あり、ＹX−ＮｃＡ−(ＸＱ)−ＥＺは、一般式（Ｉ）
の、Ｍの置換基がＹRでなくハロゲン原子である化合物
であり、ＹR−ＮｃＡ−(ＸＱ)は、一般式（Ｉ）におい
て、
【化１１】 及びＸＱを有し、加水分解することによりＥＺとなりう
る置換基をＮｃＡの縮合多環芳香族環上又はＸＱに有し
ていてもよい化合物であり、ＹH−ＮｃＡ−(ＸＱ)は、
一般式（Ｉ）において、Ｍの置換基が−ＯＨであり、Ｘ
Ｑを有し、加水分解することによりＥＺとなりうる置換
基をＮｃＡの縮合多環芳香族環上又はＸＱに有していて
もよい化合物であり、ＹX−ＮｃＡ−(ＸＱ)は、一般式
（Ｉ）において、Ｍの置換基がハロゲン原子であり、Ｘ
Ｑを有し、加水分解することによりＥＺとなりうる置換
基をＮｃＡの縮合多環芳香族環上又はＸＱに有していて
もよい化合物であり、ＹR−ＮｃＡは、一般式（Ｉ）に
おいて、
【化１２】 を有し、ＸＱと置換可能な脱離基を有していてもよい化
合物であり、ＹH−ＮｃＡは、一般式（Ｉ）において、
Ｍの置換基が−ＯＨであり、ＸＱと置換可能な脱離基を
有していてもよい化合物であり、ＹX−ＮｃＡは、一般
式（Ｉ）において、Ｍの置換基がハロゲン原子であり、
ＸＱと置換可能な脱離基を有していてもよい化合物であ
る。
【００３６】上記経路において各化合物間の反応は、周
知のものであり、導入する構造によって相違する。また
その好ましい経路は、得るべき最終化合物によって異な
る。上記経路において、下の化合物から上の化合物への
変更、即ち、ＹXからＹHへの置換は、加水分解等により
行うことができ、また、ＹHからＹRへの置換は、相当す
るポリエチレングリコール誘導体、シラノール、クロロ
シランなどを反応させることによって行うことができ
る。また、上記経路において、右の化合物から左の化合
物への変更、即ち、ＸＱ及びＥＺの導入は、所望のこれ
らを有するか又はこれらに成りうる部位を有する化学種
を、一工程又は複数の工程により反応させて行うことが
できる。
【００３７】また、上式で、ＹX−ＮｃＡ−(ＸＱ)−Ｅ
Ｚ、ＹX−ＮｃＡ−(ＸＱ)及びＹX−ＮｃＡで表わされる
化合物は、文献（Zh.Obshch.Khim.第39巻、2554-2558頁
（1969年）、J.Am.Chem.Soc.第106巻、7404-7410頁（19
84年）、Zh.Obshch.Khim.第39巻、2536-2541頁（1969
年）、Chem.Ber.第121巻、1479-1486頁（1988年）、Syn
thetic Metals、第９巻、329-340頁（1984年）等）の方
法を参考にして、相当するジシアノ芳香族化合物又はイ
ソインドリン誘導体から合成することができる。
【００３８】蛍光標識色素として用いるために要求され
る最も重要な特徴は、蛍光量子収率が高い（＞０．１）
ことである。テトラアザポルフィン誘導体が、このよう
な高い蛍光量子収率を示すためには、中心金属は重金属
並びに遷移金属でないこと、及び、テトラアザポルフィ
ンが溶液中で単分子状態であることが必要である。この
ようなことから、中心金属Ｍは、Ａｌ、Ｓｉ、Ｐ、Ｇ
ａ、Ｇｅ又はＳｃとされる。特に中心金属ＭをＳｉ又は
Ｇｅという４価金属とし、Ｍに２つの置換基
【化１３】 をテトラアザポルフィン環の上下に有する化合物を用
い、テトラアザポルフィンに特徴的な分子間のｆａｃｅ
−ｔｏ−ｆａｃｅ Ｈ−会合体生成を抑えることによ
り、水溶液中において単分子状態を保てるようにするこ
とが最も好ましい。水溶液中において単分子状態を実現
するためには、他に、界面活性剤を共存させるのが好ま
しく、その濃度は０．０１〜５重量％の範囲が好まし
く、さらには０．０４〜２重量％が好ましい。
【００３９】上記界面活性剤としては、イオン系界面活
性剤又は非イオン系界面活性剤があげられ、その中でも
トリトンＸ−１００、ツウィーン（Tween）系、ブリッ
ジ（Brij）系などの非イオン系界面活性剤が特に好まし
い。このようにして得られる水溶液中で単分子状態を示
すテトラアザポルフィンは、特に、水及び極性有機溶媒
に対する溶解度が高く合成時の分離精製が容易であり、
蛍光量子収率も蛍光標識色素として使用するに充分高い
（＞０．３）という点で、本発明の水溶性テトラアザポ
ルフィンを用いるのが特に好ましい。
【００４０】前述の蛍光標識色素は、各種蛍光分析のた
めの試薬とすることができる。該試薬は前述のように、
その色素の種類によっては非イオン系界面活性剤を含む
ことが好ましい。実際には前記蛍光標識色素は、分析の
目的に応じて、種々の物質に結合されて試薬とされる。
免疫分析に用いられる場合、該物質は、各種抗原（ハプ
テンや薬物等も含む）、抗体であり、ＤＮＡの塩基配列
分析や、ＤＮＡプローブとして、分析に用いられる場合
は、該ＤＮＡすなわちヌクレオチドである。
【００４１】これらの分析等を含め、特に生物由来物質
の蛍光標識として用いられることが多い。本発明におい
て用いられる前記蛍光標識色素で標識できる生物由来物
質としては、動物、植物、微生物（ウイルスを含む）等
の生物から得られるタンパク質・ペプチド、ヌクレオチ
ド、糖類、脂質、ホルモン、ビタミン、アルカロイド、
抗生物質、それらの複合物等があり、これらは、天然か
ら抽出したもの、人工的に完全合成したもの、あるいは
人工的に半合成したもののいずれかであってもよい。
【００４２】タンパク質、ペプチドの具体例としては、
血清アルブミン、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、Ｉ
ｇＥ等の免疫グロブリン、種々のタンパク質や白血球の
膜抗原に対するモノクローナル抗体、パーオキシダー
ゼ、グルコースオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ
等の酵素等が挙げられ、ヌクレオチドの具体例としては
ＤＮＡ、ＲＮＡ、合成オリゴヌクレオチド、合成ポリヌ
クレオチド、ＡＴＰ、ＣＴＰ、ＧＴＰ、ＴＴＰ、ＵＴ
Ｐ、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＵＴ
Ｐ、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ、ｄｄＧＴＰ、ｄｄＴＴ
Ｐ、ｄｄＵＴＰ、あるいはそれらの誘導体等が挙げら
れ、糖類の具体例としては、グリコーゲン、デンプン、
マンナン等の多糖類のほかオリゴ糖やグルコース、マン
ノース糖の単糖類が挙げられ、脂質としては、ホスファ
チジルコリン、ホスファチジルエタノラミン、脂肪、脂
肪酸等が挙げられ、ホルモンとしてはインシュリン、成
長ホルモン、オキシトシン、バソプレッシン、セクレチ
ン、上皮細胞成長因子、ガストリン、グルカゴン、カル
シトニン等のペプチド性ホルモン、アンドロゲン、エス
トロゲン、ハイドロコーチゾン等のステロイドホルモ
ン、アドレナリン、ノルアドレナリン等のカテコラミン
類等が挙げられ、ビタミンとしてはビタミンＡ、ビタミ
ンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、ビオチン、葉酸、ビタミ
ンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ等の各種ビタミンが挙げ
られ、アルカロイドとしてはモルフィン等のアヘンアル
カロイド、アトロピン、スコポラミン等のトロパンアル
カロイド、ビンブラスチン、ビンクリスチン等のインド
ールアルカロイド、オウレン等のイソキノリンアルカロ
イド等が挙げられ、抗生物質としては、ペニシリン、セ
ファロスポリン、カナマイシン、エリスロマイシン、ク
ロラムフェニコール等が挙げられる。
【００４３】生物由来物質と蛍光標識色素を結合させる
ためには、生物由来物質中のリン酸基、カルボン酸、ア
ミノ基、水酸基、チオール基等の官能基と蛍光標識用色
素中のカルボキシル基、スルフォン基等の官能基を、イ
オン結合的又は共有結合的に直接結合させるか、あるい
は結合生成反応がしやすいように、リンカーと呼ばれる
結合補助基を介して生物由来物質と蛍光標識色素を結合
することが可能である。蛍光標識用色素で標識された生
物由来物質は、クロマトグラフィー法、再結晶法等の慣
用の分離手段により精製することができる。
【００４４】上記リンカーとしては、生物由来物質と蛍
光標識色素の両方に結合を形成する必要があるため、少
なくとも２つ以上の官能基を有する基であることが必要
である。そのためには、ジオール類、ジアミン類、アミ
ノアルコール類、ジカルボン酸類、ジチオール類、アミ
ノ−カルボン酸類、ヒドロキシ−カルボン酸類等を用い
ることができる。
【００４５】本発明における蛍光標識用色素、これを含
む試薬は、種々の蛍光分析法に用いることができる。特
に、一般式（Ｉ）で示される化合物は、半導体レーザ光
（６７０〜８４０nm）を効率よく吸収して蛍光を発する
ので、安価で小型の半導体レーザを用いて測定する、種
々の抗原、薬物、ＤＮＡ等の分析やあるいはＤＮＡの塩
基配列の分析（ＤＮＡシーケンサ）等に非常に有用であ
る。
【００４６】
【実施例】以下、本発明を実施例により説明するが、本
発明は、これらに制限されるものではない。 合成例１ 〔３，４−ビス（ジブロモメチル）ブロモベンゼンの合
成〕４−ブロモ−ｏ−キシレン（７５％）〔Aldrich社
製〕３７ｇ（０．２mol）及びＮ−ブロモこはく酸イミ
ド１４２．４ｇ（０．８mol）の四塩化炭素５００ｍｌ
溶液に過酸化ベンゾイル１ｇを加え内部照射管（ウシオ
電気工業社製）中で還流しながら８〜１２時間高圧水銀
灯（１００Ｗ）により光照射した。放冷後、析出した白
色結晶を吸引ろ過して除き、母液の四塩化炭素溶液を減
圧下濃縮した。得られた固体をヘキサン／塩化メチレン
より再結晶し、無色結晶として３，４−ビス（ジブロモ
メチル）ブロモベンゼン６４ｇを得た。３，４−ビス
（ジブロモメチル）ブロモベンゼンの物性は下記に示す
ものであった。 （１）融点 １０８．５〜１１０．５℃ （２）元素分析値：
【表１９】 （３）ＮＭＲスペクトル値：ＣＤＣｌ３溶媒 δ値：７．８１（１Ｈ，ｂｒ−ｓ）、７．５７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．５４Hz）、７．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
８．５４，１．８３Hz）、７．０６（１Ｈ，ｓ）、７．
０２（１Ｈ，ｓ） （４）ＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）を図１に示す。
【００４７】合成例２ 〔６−ブロモ−２，３−ジシアノナフタレンの合成〕
３，４−ビス（ジブロモメチル）ブロモベンゼン１０
０．２ｇ（０．２mol）、フマロニトリル２７ｇ（０．
３４６mol）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド８０
０ml溶液に、よくかくはんしながらヨウ化ナトリウム２
００ｇ（０．６７mol）を加え、窒素雰囲気下約７５℃
で約７時間かくはんした。反応後、内容物を約４kgの氷
中へ注ぎ出した。赤かっ色水溶液が淡黄色になるまで徐
々に亜硫酸水素ナトリウムを加え、わずかに過剰量亜硫
酸水素ナトリウムを加え、しばらくかくはんした後、室
温下一晩放置した。析出した淡黄色固体を吸引ろ過し充
分に水、次にメタノールで洗浄した。淡黄色固体をアセ
トン／エタノールから再結晶することによって無色針状
晶が３３ｇ得られた。この結晶は、下記の分析結果から
６−ブロモ−２，３−ジシアノナフタレンであることを
確認した。 （１）融点 ２５４．５〜２５５．５℃ （２）元素分析値：
【表２０】 （３）ＮＭＲスペクトル値：ＣＤＣｌ3溶媒（ＮＭＲス
ペクトルを図２に示す） δ値：８．３４（１Ｈ，ｓ）、８．２７（１Ｈ，ｓ）、
８．１７（１Ｈ，ｂｒ−ｓ）、７．８８（２Ｈ，ｍ） （４）ＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）を図３に示す。
【００４８】合成例３ 〔６−ブロモ−１，３−ジイミノベンゾ〔ｆ〕イソイン
ドリンの合成〕窒素雰囲気下、無水メタノール２７０ml
に金属ナトリウム１．９２ｇ（８４mmol）を５回に分け
て加えて調整したナトリウムメトキシド−メタノール溶
液に６−ブロモ−２，３−ジシアノナフタレン４４．１
ｇ（０．１７mol）を加え、よくかくはんしながら室温
下、無水アンモニアガスを約１時間ゆっくりとバブルし
た。無水アンモニアガスをバブルしながら約３時間還流
した。冷却後、析出した黄色固体をろ過しメタノールで
充分に洗浄し、減圧乾燥すると６−ブロモ−１，３−ジ
イミノベンゾ〔ｆ〕イソインドリンが黄色固体として４
５ｇ得られた。この６−ブロモ−１，３−ジイミノベン
ゾ〔ｆ〕イソインドリンのＩＲスペクトルを図４に示
す。６−ブロモ−１，３−ジイミノベンゾ〔ｆ〕イソイ
ンドリンは、これ以上精製せずに次の反応に用いた。
【００４９】合成例４ 〔ジクロロシリコン−テトラブロモナフタロシアニンの
合成〕窒素雰囲気下、６−ブロモ−１，３−ジイミノベ
ンゾ〔ｆ〕イソインドリン２２．５ｇ（８１．８mmol）
の無水テトラリン１１０ml懸濁液に無水トリ−ｎ−ブチ
ルアミン５４mlを加え、次いで四塩化ケイ素１４．４ml
（０．１２６mol）を加えて約３時間還流した。冷却後
メタノール７００mlを加え一晩放置した。赤かっ色反応
混合物をろ過しメタノールで充分に洗浄後、減圧乾燥す
ると濃緑色の固体としてジクロロシリコン−テトラブロ
モナフタロシアニンが約２０ｇ得られた。このジクロロ
シリコン−テトラブロモナフタロシアニンは、これ以上
精製せずに次の反応に用いた。ジクロロシリコン−テト
ラブロモナフタロシアニンのＩＲスペクトルを図５に示
す。電子スペクトルを図６に示す。
【００５０】合成例５ 〔ジヒドロキシシリコン−テトラブロモナフタロシアニ
ンの合成〕ジクロロシリコン−テトラブロモナフタロシ
アニン９．７ｇ（８．６mmol）を濃硫酸２５０ml中に加
え、約２時間かくはんした。反応混合物を氷約８００ｇ
中に注ぎ一晩放置した。析出した沈殿をろ過し、水次い
でメタノールで充分に洗浄した後、この沈殿を濃アンモ
ニア水１８０ml中で約１時間還流した。放冷後、吸引ろ
過し、水、メタノール次いでアセトンで充分に洗浄し減
圧乾燥すると、濃緑色固体としてジヒドロキシシリコン
−テトラブロモナフタロシアニンが８．７ｇ得られた。
このジヒドロキシシリコン−テトラブロモナフタロシア
ニンは、これ以上精製せずに次の反応に用いた。ジヒド
ロキシシリコン−テトラブロモナフタロシアニンのＩＲ
スペクトルを図７に示す。電子スペクトルを図８に示
す。
【００５１】合成例６ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００））化シリコン−テトラブロモナフタロシアニンの
合成〕ジヒドロキシシリコン−テトラブロモナフタロシ
アニン２２mg（０．０２mmol）、ポリエチレングリコー
ルモノメチルエーテル（Ｍｗ約２０００）４０mg（０．
０２mmol）、ラウリン酸４mg（０．０２mmol）の混合物
をかきまぜながら徐々に２２０℃に加熱し、２２０℃で
２時間加熱した。放冷後、分子ふるいカラムクロマトグ
ラフィーにより生成物を分離精製したところ、ビス（メ
トキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０００））化
シリコン−テトラブロモナフタロシアニンが６９mg（６
８％）濃緑色固体として得られた。この化合物の電子ス
ペクトル（メタノール溶液）を図９に示す。
【００５２】合成例７ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００）−ＮＨ−(ＣＨ2)3−Ｓｉ(ＣＨ3)2−Ｏ）化シリコ
ン−テトラブロモナフタロシアニンの合成〕ジヒドロキ
シシリコン−テトラブロモナフタロシアニン１７４mg
（０．１６mmol）、イミダゾール４８mg（０．７mmol）
の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１ml溶液を２０℃
で撹拌しながら、（３−クロロプロピル）ジメチルクロ
ロシラン１２０mg（０．７mmol）を滴下した。２０℃で
２０時間撹拌した後、減圧下溶媒を除き残査をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーで分離精製することによ
り、ビス（３−クロロプロピルジメチルシロキシ）シリ
コン−テトラブロモナフタロシアニンが８４mg（４１
％）得られた。得られたビス（３−クロロプロピルジメ
チルシロキシ）シリコン−テトラブロモナフタロシアニ
ン１３mg（０．０１mmol）、末端アミノ化ポリエチレン
グリコールモノメチルエーテル（Ｍｗ約２０００）４０
０mg（０．２mmol）、ヨウ化ナトリウム１．５mg（０．
０１mmol）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１ml溶液を
９０℃で１５時間かくはんした後、減圧下溶媒を留去し
合成例６と同様にクロマトグラフィー法を用いて生成物
の分離精製を行ったところ、ビス（メトキシポリエチレ
ングリコール（Ｍｗ約２０００）−ＮＨ−(ＣＨ2)3−Ｓ
ｉ(ＣＨ3)2−Ｏ）化シリコン−テトラブロモナフタロシ
アニン３８mg（７３％）が得られた。この化合物の電子
スペクトル（メタノール溶液）を図１０に示す。
【００５３】合成例８ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００）−ＮＨ−ＣＯ・ＮＨ−(ＣＨ2)3−Ｓｉ(ＣＨ3)2−
Ｏ）化シリコン−テトラブロモナフタロシアニンの合
成〕ジヒドロキシ−テトラブロモナフタロシアニン１７
４mg（０．１６mmol）、イミダゾール１５０mg（２．２
mmol）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ml溶液を撹拌
しながら、３−イソシアネートプロピルジメチルクロロ
シラン１２４mg（０．７mmol）を１分かけて滴下した。
室温下３０時間撹拌を続けた後、減圧下溶媒を留去し残
査の固体を得た。得られた固体１０mg、末端アミノ化ポ
リエチレングリコールモノメチルエーテル（Ｍｗ約２０
００）５０mg（０．０２５mmol）のメタノール３ml溶液
を１時間還流した。溶媒を留去した後、逆相クロマトグ
ラフィー（展開溶媒：メタノール）を用いて生成物の分
離精製を行ったところ、ビス（メトキシポリエチレング
リコール（Ｍｗ約２０００）−ＮＨ−ＣＯ・ＮＨ−(Ｃ
Ｈ2)3−Ｓｉ(ＣＨ3)2−Ｏ）化シリコン−テトラブロモ
ナフタロシアニン２６mgが得られた。この化合物の電子
スペクトルを図１１に示す。
【００５４】合成例９ 〔３，４−ジメチル安息香酸メチルの合成〕３，４−ジ
メチル安息香酸４７．６ｇ（０．３１７mol） をメタノ
ール２００ml中に加え、約６mlの濃硫酸存在下、モレキ
ュラーシーブス３Ａ（和光純薬工業（株）製乾燥剤）で
脱水しながら、約４時間還流した。放冷後、水６００ml
を加え、ベンゼン約２００mlを用いて３回抽出した。ベ
ンゼン溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で３回、続
いて水で３回洗浄後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥
した。ベンゼン溶液を濃縮後、減圧下蒸留すると、沸点
１３３〜１３４℃／３０mmHgで４９．４ｇの無色液体を
得た。下記の分析結果から、この液体は３，４−ジメチ
ル安息香酸メチルであることを確認した。 （１）元素分析値：
【表２１】 （２）ＮＭＲスペクトル値：ＣＤＣｌ3溶媒 δ値：７．８１（１Ｈ，ｂｒ−ｓ）、７．７６（１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝７．９３，１．５３Hz）、７．１８（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．９３Hz）、３．８９（３Ｈ，ｓ）、２．３
０（６Ｈ，ｓ） （３）ＩＲスペクトル（塗布法）を図１２に示す。約１
７１０cm-1付近にエステルのＣ＝Ｏ伸縮振動に起因する
吸収を有する。
【００５５】合成例１０ 〔６−メトキシカルボニル−２，３−ジシアノナフタレ
ンの合成〕３，４−ジメチル安息香酸メチル３３．８ｇ
（０．２mol）及びＮ−ブロモこはく酸イミド１４２．
２ｇ（０．８mol）の四塩化炭素５００ml溶液に過酸化
ベンゾイル１ｇを加え内部照射管中で還流しながら８〜
１２時間高圧水銀灯（１００Ｗ）により光照射した。放
冷後、析出した白色結晶を吸引ろ過して除き、母液の四
塩化炭素溶液を減圧下濃縮した。得られた固体をヘキサ
ン／塩化メチレンより再結晶すると無色の結晶として
３，４−ビス（ジブロモメチル）安息香酸メチル７９ｇ
を得た。３，４−ビス（ジブロモメチル）安息香酸メチ
ルの物性は下記に示すものであった。 （１）融点 ９９．５〜１００．５℃ （２）元素分析値：
【表２２】 （３）ＮＭＲスペクトル値：ＣＤＣｌ3溶媒 δ値：８．２９（１Ｈ，ｂｒ−ｓ）、８．０３（１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝８．２４，１．５３Hz）、７．８１（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．２４Hz）、７．１８（１Ｈ，ｂｒ−ｓ）、
７．０９（１Ｈ，ｂｒ−ｓ）、３．９６（３Ｈ，ｓ） （４）ＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）を図１３に示す。約
１７０５cm-1付近にエステルのＣ＝Ｏ伸縮振動に起因す
る吸収を有する。
【００５６】次に、得られた３，４−ビス（ジブロモメ
チル）安息香酸メチル４８ｇ（０．１mol）、フマロニ
トリル１３．５ｇ（０．１７３mol）の無水Ｎ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド４００ml溶液に、よくかくはんしな
がらヨウ化ナトリウム１００ｇ（０．６７mol）を加
え、窒素雰囲気下約７５℃で約７時間かくはんした。反
応後、内容物を約２kgの氷中へ注ぎ出した。赤かっ色水
溶液が淡黄色になるまで徐々に亜硫酸水素ナトリウムを
加え、わずかに過剰量亜硫酸水素ナトリウムを加え、し
ばらくかくはんした後、室温下一晩放置した。析出した
淡黄色固体を吸引ろ過し充分に水、次にメタノールで洗
浄した。淡黄色固体をアセトン／メタノールから再結晶
することによって無色針状晶が１３．９ｇ得られた。こ
の結晶は、下記の分析結果から６−メトキシカルボニル
−２，３−ジシアノナフタレンであることを確認した。 （１）融点 ２６４〜２６５℃ （２）元素分析値：
【表２３】 （３）ＮＭＲスペクトル値：ＣＤＣｌ3溶媒 δ値：８．７２（１Ｈ，ｂｒ−ｓ）、８．４７（１Ｈ，
ｓ）、８．４１（１Ｈ，ｓ）、８．３８（１Ｈ，ｄｄ，
Ｊ＝８．５５，１．５３Hz）、８．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝８．５５Hz）、４．０４（３Ｈ，ｓ） （４）ＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）を図１４に示す。約
１７００cm-1付近にエステルのＣ＝Ｏ伸縮振動に起因す
る吸収を有する。
【００５７】合成例１１ 〔６−クロロ−２，３−ジシアノキノキザリンの合成〕
ジアミノマレオニトリル５ｇ（４６．３mmol）、無水硫
酸マグネシウム５ｇ（４１．５mmol）、活性二酸化マン
ガン１５ｇ（１７０．３mmol）を酢酸エチル３００ml中
に加え、約４５℃で３０時間、超音波照射した。反応混
合物をろ過し、酢酸エチルで充分洗浄した。淡黄色母液
を濃縮し、シリカゲル−カラムクロマトグラフィー（ヘ
キサン／酢酸エチル＝７５／２５で展開）を用いて分離
精製したところ、２．９０ｇ（５９％）のジイミノスク
シノニトリルが無色結晶として得られた。ジイミノスク
シノニトリル０．５ｇ（４．７mmol）と４−クロロ−
１，２−フェニレンジアミン０．６７ｇ（４．７mmol）
の混合物を、トリフルオロ酢酸１０ml中へ、約２０℃で
３０分かけて徐々に加え、室温下８時間かくはん後、一
晩放置した。反応混合物へ水５０ml加え、析出した固体
をろ過し、水で充分洗浄した。得られた固体は、減圧乾
燥後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン
／酢酸エチル（７５／２５）で展開）続いて、クロロホ
ルム／エタノールから再結晶することにより、無色結晶
として６−クロロ−２，３−ジシアノキノキザリンが、
０．６ｇ（５９％）得られた。 （１）ＮＭＲスペクトル値：ＣＤＣｌ3溶媒 δ値：８．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１３Hz）、８．２
３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１６Hz）、８．０４（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝９．１６，２．１３Hz） （２）融点 １８８〜１８９℃ （３）ＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）を図１５に示す。
【００５８】合成例１２ 〔ジヒドロキシシリコン−テトラクロロキノキザロシア
ニンの合成〕窒素雰囲気下、無水メタノール７５mlに金
属ナリウム０．１２ｇ（５．４ｍｍｏｌ）を加えて調整
したナトリウムメトキシドのメタノール溶液に６−クロ
ロ−２，３−ジシアノキノキザリン５．９７ｇ（２７．
８ｍｍｏｌ）を加え、よくかくはんしながら室温下、無
水アンモニアガスを約１時間バブルした。さらに、無水
アンモニアガスをバブルしながら約３時間還流した。放
冷後、内容物をろ過し、メタノールで充分に洗浄し、減
圧乾燥すると淡灰色固体として、６−クロロ−２，３−
ジシアノキノキザリンのイソインドリン誘導体が５．２
３ｇ得られた。このイソインドリン誘導体は、これ以上
精製せずに次の反応に用いた。窒素雰囲気下、上記イソ
インドリン誘導体５．１ｇ（２２．０mmol）の無水キノ
リン１０８ml懸濁液に四塩化ケイ素１０ml（９０mmol）
を加え、約３時間還流した。放冷後、メタノール３００
ml中に反応混合物を注ぎ出し室温下一晩放置した。析出
した固体をろ過し、メタノールで充分に洗浄した後、減
圧乾燥すると黒色の固体が定量的に得られた。この黒色
固体６ｇをエタノール（１００ml）中に加え、さらにア
ンモニア水１００mlを加えて約５時間還流した。放冷
後、内容物をろ過しメタノールで充分に洗浄した後、減
圧乾燥すると黒色固体が４．５ｇ得られた。この黒色固
体は、ジヒドロキシシリコン−テトラクロロキノキザロ
シアニンと考えられるが、これ以上精製せずに次の反応
に用いた。
【００５９】実施例１ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００））化シリコンナフタロシアニンテトラカルボン酸
ナトリウム（例示化合物Ｎｏ.１７）の合成〕無水メタ
ノール２０mlに金属ナトリウム０．１ｇ（４．３５mmo
l）を加えて調整したナトリウムメトキシド−メタノー
ル溶液に６−メトキシカルボニル−２，３−ジシアノナ
フタレン２ｇ（８．４７mmol）を加え、よくかくはんし
ながら室温下、無水アンモニアガスを約１時間バブルし
た。無水アンモニアガスをバブルしながら約３時間還流
した。冷却後、析出した黄色固体をろ過しメタノールで
充分に洗浄し、減圧乾燥すると６−カルバモイル−１，
３−ジイミノベンゾ［ｆ］イソインドリンが黄色固体と
して１．７８５ｇ（８８％）得られた。この６−カルバ
モイル−１，３−ジイミノベンゾ［ｆ］イソインドリン
のＩＲスペクトルを図１６に示す。６−カルバモイル−
１，３−ジイミノベンゾ［ｆ］イソインドリンは、これ
以上精製せずに次の反応に用いた。６−カルバモイル−
１，３−ジイミノベンゾ［ｆ］イソインドリン５００mg
（２．１０mmol）の無水キノリン１０ml懸濁液に四塩化
ケイ素１．８mlを加えて、２２０℃、３時間かくはんし
た後、減圧下大部分の四塩化ケイ素を留去した。放冷
後、エタノール４０ml、濃アンモニア水２０mlを加え５
時間還流した。放冷後、黒緑色固体をろ過しメタノール
で充分に洗浄した後、減圧乾燥したところ、黒緑色固体
が９３４mg得られた。この黒緑色固体は、図１７に示す
電子クペクトルより、ジヒドロキシシリコン−テトラカ
ルバモイルナフタロシアニンを含む固体であると考えら
れるが、ジヒドロキシシリコン−テトラカルバモイルナ
フタロシアニンは、これ以上精製せずに次の反応に用い
た。ジヒドロキシシリコン−テトラカルバモイルナフタ
ロシアニン１９mg（０．０２mmol）、ポリ（エチレング
リコール）メチルエーテル（Ｍｗ約２０００）４０mg
（０．０２mmol）、ラウリン酸４mg（０．０２mmol）の
混合物を、２００℃、３時間かくはんした。反応後、内
容物に、１％ＮａＯＨ水溶液５ml、エタノール１０ｍｌ
を加え、５時間還流した。反応混合物は熱いうちにろ過
しメタノール、アセトンで充分に洗浄した。集めた母液
を濃縮後、逆相クロマトグラフィー（展開溶媒：メタノ
ール）により分離精製したところ、目的のビス（メトキ
シポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０００））化シリ
コンナフタロシアニンテトラカルボン酸ナトリウム（例
示化合物Ｎｏ.１７）を緑色固体として４６mg得た。そ
の電子スペクトルを図１８に示す。
【００６０】実施例２ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００）化シリコン−テトラフェニルチオナフタロシアニ
ンオクタカルボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎｏ.１
９）の合成〕ビス（メトキシポリエチレングリコール
（Ｍｗ約２０００）化シリコン−テトラブロモナフタロ
シアニン１０mg（０．００２mmol）、３，５−ジメトキ
シカルボニルフェニルチオ化銅（Ｉ）３mg（０．００９
mmol）のキノリン１ml懸濁液を１４０℃で１５時間撹拌
した。反応後、内容物を減圧乾固させて得た残査に２％
ＮａＯＨ水溶液２ml及びエタノール５mlを加え、９０℃
で２時間撹拌した。放冷後、内容物を減圧下濃縮し、逆
相クロマトグラフィーを用いて生成物の分離精製するこ
とによりビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ
約２０００）化シリコン−テトラフェニルチオナフタロ
シアニンオクタカルボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎ
ｏ.１９）８mgが黒緑色結晶として得られた。この化合
物の電子スペクトル（メタノール溶液）を図１９に示
す。
【００６１】実施例３ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００））化シリコン−テトラフェニルチオキノキザロシ
アニンオクタカルボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎｏ.
１６９）の合成〕ジヒトロキシシリコン−テトラクロロ
キノキザロシアニン１８mg（０．０２mmol）、ポリ（エ
チレングリコール）メチルエーテル（Ｍｗ約２０００）
４０mg（０．０２mmol）、ラウリン酸４mg（０．０２mm
ol）の混合物を合成例６と同様に処理し、濃緑色固体５
８mgを得た。次にこの固体１０mg（０．００２mmol）を
実施例２と同様に処理することにより、ビス（メトキシ
ポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０００））化シリコ
ン−テトラフェニルチオキノキザロシアニンオクタカル
ボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎｏ.１６９）４mgが黒
緑色結晶として得られた。この化合物の電子スペクトル
（メタノール溶液）を図２０に示す。
【００６２】実施例４ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００））化シリコン−オクタフェニルチオフェナントラ
シアニンヘキサデカカルボン酸ナトリウム（例示化合物
Ｎｏ.７９）の合成〕４−ブロモフェニルアセトニトリ
ルを原料として用い文献（Synthetie Metals、第９巻、
329-340頁（1984年））記載の方法及び合成例３、４及
び５に準じて合成したジヒドロキシシリコン−オクタブ
ロモフェナントラシアニン３２mg（０．０２mmol）、ポ
リ（エチレングリコール）メチルエーテル（Ｍｗ約２０
００）４０mg（０．０２mmol）、ラウリン酸４mg（０．
０２mmol）の混合物を合成例６と同様に処理し、濃緑色
固体７２mgを得た。次にこの固体１１mg（０．００２mm
ol）を実施例２と同様に処理することにより、ビス（メ
トキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０００））化
シリコン−オクタフェニルチオフェナントラシアニンヘ
キサデカカルボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎｏ.７
９）５mgが黒緑色結晶として得られた。
【００６３】実施例５ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００））化シリコン−オクタフェニルチオアントラシア
ニンヘキサデカカルボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎ
ｏ.１０９）の合成〕文献（Monatshefte Fur Chemie 第
117巻、745-489頁（1986年）、J.prakt.Chem.第329巻，
S365-373頁（1972年）記載の方法、続いて合成例３、４
及び５に準じて合成したジヒドロキシシリコン−オクタ
ブロモアントラシアニン３２mg（０．０２mmol）、ポリ
（エチレングリコール）メチルエーテル（Ｍｗ約２００
０）４０mg（０．０２mmol）、ラウリン酸４mg（０．０
２mmol）の混合物を合成例６と同様に処理し、濃緑色固
体６５mgを得た。次にこの固体１１mg（０．００２mmo
l）を実施例２と同様に処理することにより、ビス（メ
トキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０００））化
シリコン−オクタフェニルチオアントラシアニンヘキサ
デカカルボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎｏ.１０９）
４mgが黒緑色結晶として得られた。
【００６４】実施例６ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００）化シリコン−テトラフェニルチオ（１，２−ナフ
タロシアニン）オクタカルボン酸ナトリウム（例示化合
物Ｎｏ.１３９）の合成〕文献（Chem.Ber.第121巻、147
9-1486頁（1988年））記載の方法、続いて合成例３、４
及び５に準じて合成したジヒドロキシシリコン−テトラ
ブロモ（１，２−ナフタロシアニン）２２mg（０．０２
mmol）、ポリ（エチレングリコール）メチルエーテル
（Ｍｗ約２０００）４０mg（０．０２mmol）、ラウリン
酸４mg（０．０２mmol）の混合物を合成例６と同様に処
理し、濃緑色固体５１mgを得た。次にこの固体１０mg
（０．００２mmol）を実施例２と同様に処理することに
より、ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約
２０００））化シリコン−テトラフェニルチオ（１，２
−ナフタロシアニン）オクタカルボン酸ナトリウム（例
示化合物Ｎｏ.１３９）６mgが黒緑色結晶として得られ
た。
【００６５】実施例７ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００））化シリコン−テトラフェニルチオキノロシアニ
ンオクタカルボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎｏ.４
９）の合成〕文献（USP4,459,409（1984年）及びKhim.G
eterotsikl.Soedin 274-278頁（1972年））記載の方
法、続いて合成例３、４及び５に準じて合成したジヒド
ロキシシリンコン−テトラブロモキノロシアニン２２mg
（０．０２mmol）、ポリエチレングリコールモノメチル
エーテル（Ｍｗ約２０００）４０mg（０．０２mmol）、
ラウリン酸４mg（０．０２mmol）の混合物を合成例６と
同様に処理し、濃緑色固体３２mgを得た。次にこの固体
１０mg（０．００２mmol）を実施例２と同様に処理する
ことにより、ビス（メトキシポリエチレングリコール
（Ｍｗ約２０００））化シリコン−テトラフェニルチオ
キノロシアニンオクタカルボン酸ナトリウム（例示化合
物Ｎｏ.４９）５mgが黒緑色結晶として得られた。この
化合物の電子スペクトル（メタノール溶液）を図２１に
示す。
【００６６】実施例８ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００）−ＮＨ−(ＣＨ2)3−Ｓｉ(ＣＨ3)2−Ｏ）化シリコ
ン−テトラフェニルチオナフタロシアニンオクタカルボ
ン酸ナトリウム（例示化合物Ｎｏ.３）の合成〕ビス
（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０００）
−ＮＨ−(ＣＨ2)3−Ｓｉ(ＣＨ3)2−Ｏ）化シリコン−テ
トラブロモナフタロシアニン１１mg（０．００２mmol）
を３，５−ジメトキシカルボニルフェニルチオ化銅
（Ｉ）３mg（０．００９mmol）と、実施例２と同様に処
理することにより、ビス（メトキシポリエチレングリコ
ール（Ｍｗ約２０００）−ＮＨ−(ＣＨ2)3−Ｓｉ(Ｃ
Ｈ3)2−Ｏ）化シリコン−テトラフェニルチオナフタロ
シアニンオクタカルボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎ
ｏ.３）５mgが黒緑色結晶として得られた。
【００６７】実施例９ 〔ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２０
００）−ＮＨ−ＣＯ・ＮＨ(ＣＨ2)3Ｓｉ(ＣＨ3)2−Ｏ）
化シリコン−テトラフェニルチオナフタロシアニンオク
タカルボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎｏ.７）の合
成〕ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ約２
０００）−ＮＨ−ＣＯ・ＮＨ(ＣＨ2)3Ｓｉ(ＣＨ3)2−
Ｏ）化シリコン−テトラブロモナフタロシアニン１１mg
（０．００２mmol）を３，５−ジメトキシカルボニルフ
ェニルチオ化銅（Ｉ）３mg（０．００９mmol）と、実施
例２と同様に処理することにより、ビス（メトキシポリ
エチレングリコール（Ｍｗ約２０００）−ＮＨ−ＣＯ・
ＮＨ(ＣＨ2)3Ｓｉ(ＣＨ3)2−Ｏ）化シリコン−テトラフ
ェニルチオナフタロシアニンオクタカルボン酸ナトリウ
ム（例示化合物Ｎｏ.７）６mgが黒緑色結晶として得ら
れた。
【００６８】試験例１ 〔螢光量子収率の測定〕１，１′，３，３，３′，３′
−ヘキサメチルインドトリカルボシアニン パークロレ
ート又はオキサジン−７２０を近赤外域での標準物質と
して用いて、文献（J.Photochem.Photobiol.,A.Chemist
ry,第45巻，117-121頁（1988年））記載の相対量子収率
測定法により、実施例１〜９で得られた本発明のテトラ
アザポルフィンの螢光量子収率を求めた。結果を表２４
に示す。表２４から明らかなように、本発明の螢光標識
色素はいずれも、充分な螢光量子収率を示すことがわか
る。
【００６９】
【表２４】
【００７０】実施例１０〜１８ 〔実施例１〜９で得られた化合物のモノヒドロキシプロ
ピルエステル化〕実施例１〜９で得られた化合物４．７
×１０-6molのメタノール１０ml溶液を希塩酸で酸性に
し、すばやく減圧下濃縮乾固した。得られた残査を無水
ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）３０mlに溶けるものだ
け溶解し、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン０．１mg
（８．１４×１０-7mol）及び１，３−プロパンジオー
ル０．３５mg（４．６０×１０-6mol）を加えて、よく
かくはんしながら１，３−ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド（ＤＣＣ）１mg（４．８５×１０-6mol）を加え、
室温下５時間かくはんを続けた。反応混合物に０．２Ｍ
−Ｎａ2ＣＯ3緩衝液（pH９．３）１mlを加えた後、減圧
下濃縮した。得られた残査を逆相クロマトグラフィーに
より分離精製したところ、実施例１〜９で得られた化合
物のそれぞれモノヒドロキシプロピルエステルが４〜６
mg得られた。
【００７１】実施例１９ 〔リン酸化されたオリゴヌクレオチドプライマーの合
成〕固相ＣＥＤ−フォスフォラミド法を用いた自動ＤＮ
Ａ合成装置によりプライマー（５′−ＧＴＴＴＣＣＣＡ
ＧＴＣＡＣＧＡＣ−３′）を合成した。合成したプライ
マーのリン酸化は、５０ｍＭトリス−塩酸（pH７．
６）、１０ｍＭ塩化マグネシウム、１０ｍＭジチオスレ
イトール、３ｍＭＡＴＰ、Ｔ４−ヌクレオチドカイネー
スを含む１００μｌの反応液中で３７℃、１時間保温し
て行った。リン酸化されたプライマーは、ゲルろ過用カ
ラムを使用して高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）で分離し、リン酸化されたプライマーのピークを集
め、凍結乾燥で溶媒を除いた。
【００７２】実施例２０〜２８ 実施例１０〜１８で合成したモノヒドロキシプロピルエ
ステルの０．０５ｍＭ−ＤＭＦ溶液１００μｌに、実施
例１９で得たリン酸化されたオリゴヌクレオチドプライ
マーの０．０５ｍＭ−ＤＭＦ溶液１００μｌを加え、さ
らにＤＣＣの０．０５ｍＭ−ＤＭＦ溶液１００μｌを加
えて、室温下一晩かくはんした。反応混合物に１００μ
ｌの０．２Ｍ−Ｎａ2ＣＯ3緩衝液（pH９．３）を加えた
後、減圧下濃縮した。得られた残査をＨＰＬＣで分離す
ることにより、実施例１〜９で合成した化合物により標
識されたオリゴヌクレオチドプライマーがそれぞれ得ら
れた。
【００７３】実施例２９ 〔ＤＮＡの塩基配列の分析〕既知の塩基配列のＤＮＡを
サンプルとし、実施例２０〜２８で合成したリンカーを
介してテトラアザポルフィンが結合したプライマーを用
いて、それぞれ４種の塩基でサンガー反応を行ったの
ち、それぞれ別々のレーンで電気泳動分離し、半導体レ
ーザを装備したＤＮＡシークエンサで分析した。その結
果をまとめて表２５に示す。これらの系は、必要に応じ
て非イオン系界面活性剤を添加剤として加えている。
【００７４】
【表２５】
【００７５】実施例３０ 〔テトラアザポルフィン標識プライマー（標識化合物−
ＡＣＡＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＣＡＣＴＡＧＣ）の合成〕
実施例１９及び実施例２０〜２８と同様にして、種々の
５′末端にテトラアザポルフィン（実施例１〜９）が標
識されたプライマー（標識化合物−ＡＣＡＣＡＡＣＴＧ
ＴＧＴＴＣＡＣＴＡＧＣ）を合成した。
【００７６】〔ヒトＤＮＡ中のβ−グロビン遺伝子の検
出〕ＰＣＲ（Polymerase Chain Reaction）法を用いた
遺伝子の検出法でヒトのβ−グロビン遺伝子を検出し
た。 試料１：ヒト胎盤のＤＮＡ（１μg）、上記により合成
した、標識化合物−ＡＣＡＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＣＡＣ
ＴＡＧＣ（３００ng）、ＨＯ−ＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＣ
ＡＣＧＴＴＣＡＣＣ（３００ng）、非イオン系界面活性
剤およびＴａｑＤＮＡポリメラーゼ（パーキン エルマ
ー シータス社）を用いてパーキン エルマー シータス
社のプロトコールに従って２０サイクルの遺伝子増幅を
行った（全液量：１００μl）。 試料２：ヒト胎盤のＤＮＡ（１μg）、試料１と同じ標
識化合物−ＡＣＡＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＣＡＣＴＡＧＣ
（３００ng）、ＨＯ−ＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴ
ＴＣＡＣＣ（３００ng）、非イオン系界面活性剤を、Ｔ
ａｑＤＮＡポリメラーゼを含まない反応液（パーキン
エルマー シータス社のプロトコールに従って調整した
もの。全液量：１００μl）に加えた。これらの試料
（５０μl）に緩衝液Ａ（非イオン系界面活性剤、５０
ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、０．１ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ、pH８．０）を４５０μl加え、予め緩衝液
Ａで洗浄しておいたオクタデシルシラン樹脂（マイクロ
ボンダパックＣ−１８、ウォーターズ社）に添加した。
オクタデシルシラン樹脂はピペットチップ（１ml用）の
先端にシリコナイズしたグラスウールをつめたミニカラ
ムに、エタノールに懸濁して重層したものを用いた。
【００７７】緩衝液Ａ（５００μl）および５％エタノ
ールを含んだ緩衝液Ａ（５００μl）で洗浄したのち、
１０％エタノールを含んだ緩衝液Ａ（５００μl）で溶
出した。この溶出液のpHを約８に調整し、半導体レーザ
を励起光源に用いて、螢光強度をフォトダイオードアレ
イにより測定した。その結果、表２６に示すような相対
強度が得られた。なお、未反応の標識化合物−ＡＣＡＣ
ＡＡＣＴＧＴＧＴＴＣＡＣＴＡＧＣは、通常１０％エタ
ノールを含んだ緩衝液Ａではまったく溶出されず、１５
％エタノールを含んだ緩衝液Ａではじめて溶出された。
これらの結果により、本発明のテトラアザポルフィンを
５′末端に標識したオリゴデオキシヌクレオチドを用い
て、ヒトＤＮＡ中のβ−グロビン遺伝子を検出できるこ
とがわかった。
【００７８】
【表２６】
【００７９】比較例１ ＷＯ特許第０３８０７号特許（１９８９年）記載のフタ
ロシアニン類を、既特許及び本願実施例２０〜２８の方
法に準じて、実施例１９で得られた、オリゴヌクレオチ
ドプライマーに結合した。このようにして得られたフタ
ロシアニン結合オリゴヌクレオチドを用いて実施例２９
と同様にしてＤＮＡの塩基配列の分析を行った。本実験
で用いたフタロシアニン類を以下に示す。 比較例化合物Ａ：アルミニウムヒドロキシ２，９，１
６，２３−テトラフェノキシフタロシアニンスルホネー
ト 比較例化合物Ｂ：アルミニウムヒドロキシ２，９，１
６，２３−テトラチオフェニルフタロシアニンスルホネ
ート 比較例化合物Ｃ：マグネシウム２０−フェニルテトラベ
ンズトリアザポルフィンスルホネート 比較例化合物Ｄ：ビス（トリブチルシロキシ）シリコン
−フタロシアニンテトラカルボン酸ナトリウム塩 結果を表２７に示す。表２７に示すように、フタロシア
ニン類では、７３０nm以上の発振波長を有する半導体レ
ーザでは励起できないために螢光がまったく観測され
ず、測定不能となるだけでなく、６８０nmの半導体レー
ザを用いた場合には、散乱光の妨害を受けてその精度が
著しく低下した。
【００８０】
【表２７】
【００８１】比較例２ 比較例化合物Ａ〜Ｄのフタロシアニン類を、実施例３０
と同様にして、ヒトＤＮＡ中のβ−グロビン遺伝子の検
出に利用した。結果を表２８に示す。表２８に示すよう
に、フタロシアニン類では、７３０nm以上の発振波長を
有する半導体レーザでは励起できないために螢光がまっ
たく観測されず、測定不能となるだけでなく、６８０nm
の半導体レーザを用いた場合には、励起光の妨害を受け
てその相対強度の区別を試料１と試料２の間でつけにく
くなった。
【００８２】
【表２８】
【００８３】実施例３１〜３９ テトラアザポルフィン（実施例１〜９で合成したもの）
０．１３mmolをメタノール中で、濃塩酸を用いて酸性と
し、すばやく減圧下濃縮して得た残査をＤＭＦ２０mlに
溶けるものだけ溶かし出し、濃緑色のＤＭＦ溶液を得
た。この溶液にｐ−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）１８mg
（０．１３mmol）を加えた。この溶液を約０℃に冷却し
ながら、ジエチルフォスホリルシアニド（ＤＥＰＣ）
０．０２mlのＤＭＦ３ml溶液を加え、さらにトリエチル
アミン０．０４ml（０．２８mmol）を加えて、０℃で３
０分間かくはんした後、室温下３時間かくはんを続け
た。反応後、水１mlを加え減圧下濃縮し逆相カラムクロ
マトグラフィーにより分離精製したところ、それぞれ実
施例１〜９で合成したテトラアザポルフィンが１分子の
ＰＡＢＡと結合した化合物を得た。
【００８４】実施例４０〜４８ 実施例３１〜３９で得たテトラアザポルフィン（実施例
１〜９で合成したもの）−ＰＡＢＡと３−（４−アミノ
ブチル）モルフィンのＤＭＦ溶液を、トリエチルアミン
存在下、ＤＥＰＣを用いて実施例３１〜３９と同様に処
理することにより、それぞれテトラアザポルフィン−Ｐ
ＡＢＡ−モルフィンを得た。
【００８５】実施例４９ ｛アンチモルフィンモノクロナール抗体に対する相対免
疫親和性の測定｝モルフィン、アミノモルフィン及び前
述の螢光色素で標識されたモルフィンについて、アンチ
モルフィンモノクロナール抗体に対する相対免疫親和性
を、トリチウムでラベルしたモルフィンとの競争反応を
用いて測定した。その結果を表２９にまとめて示す。表
２９の結果から分子種の違いによる相対親和性の違いは
ほとんどみられず、螢光色素で標識してもモルフィンと
モノクロナール抗体の反応性は、ほとんど変化がないこ
とがわかる。
【００８６】
【表２９】
【００８７】
【発明の効果】本発明の化合物を蛍光標識色素として用
いることにより、血液中に存在するヘム等の生体内物質
に影響されず、また、安価で小型の半導体レーザ（６７
０〜８４０nm）を用いて、種々の抗原、薬物、ＤＮＡ等
の定性若しくは定量分析、又はＤＮＡの塩基配列の分析
などに有用な蛍光分析用試薬又は臨床検査試薬を提供で
きる。
【図面の簡単な説明】
【図１】３，４−ビス（ジブロモメチル）プロモベンゼ
ンのＩＲスペクトル（塗布法）である。
【図２】６−ブロモ−２，３−ジシアノナフタレンのＣ
ＤＣｌ3中でのＮＭＲスペクトルである。
【図３】６−ブロモ−２，３−ジシアノナフタレンのＩ
Ｒスペクトル（ＫＢｒ法）である。
【図４】６−ブロモ−１，３−ジイミノベンゾ〔ｆ〕イ
ソインドリンのＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）である。
【図５】ジクロロシリコン−テトラブロモナフタロシア
ニンのＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）である。
【図６】ジクロロシリコン−テトラブロモナフタロシア
ニンの電子スペクトル（テトラヒドロフラン溶液）であ
る。
【図７】ジヒドロキシシリコン−テトラブロモナフタロ
シアニンのＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）である。
【図８】ジヒドロキシシリコン−テトラブロモナフタロ
シアニンの電子スペクトル（テトラヒドロフラン溶液）
である。
【図９】ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍｗ
約２０００））化シリコンテトラブロモナフタロシアニ
ンの電子スペクトル（メタノール溶液）である。
【図１０】ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍ
ｗ約２０００）−ＮＨ−(ＣＨ2)3−Ｓｉ(ＣＨ3)2−Ｏ）
化シリコン−テトラブロモナフタロシアニンの電子スペ
クトル（メタノール溶液）である。
【図１１】ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍ
ｗ約２０００）−ＮＨ−ＣＯ・ＮＨ−(ＣＨ2)3Ｓｉ(Ｃ
Ｈ3)2−Ｏ）化シリコン−テトラブロモナフタロシアニ
ンの電子スペクトル（メタノール溶液）である。
【図１２】３，４−ジメチル安息香酸メチルのＩＲスペ
クトル（塗布法）である。
【図１３】３，４−ビス（ジブロモメチル）安息香酸メ
チルのＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）である。
【図１４】６−メトキシカルボニル−２，３−ジシアノ
ナフタレンのＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）である。
【図１５】６−クロロ−２，３−ジシアノキノキザリン
のＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）である。
【図１６】６−カルバモイル−１，３−ジイミノベンゾ
〔ｆ〕イソインドリンのＩＲスペクトル（ＫＢｒ法）で
ある。
【図１７】ジヒドロキシシリコン−テトラカルバモイル
ナフタロシアニンの電子スペクトル（キノリン溶液）で
ある。
【図１８】ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍ
ｗ約２０００）化）シリコンナフタロシアニンテトラカ
ルボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎｏ.１７）の電子ス
ペクトル（メタノール溶液）である。
【図１９】ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍ
ｗ約２０００））化シリコン−テトラフェニルチオナフ
タロシアニンオクタカルボン酸ナトリウム（例示化合物
Ｎｏ.１９）の電子スペクトル（メタノール溶液）であ
る。
【図２０】ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍ
ｗ約２０００））化シリコン−テトラフェニルチオキノ
キザロシアニンオクタカルボン酸ナトリウム（例示化合
物Ｎｏ.１６９）の電子スペクトル（メタノール溶液）
である。
【図２１】ビス（メトキシポリエチレングリコール（Ｍ
ｗ約２０００））化シリコン−テトラフェニルチオキノ
ロシアニンオクタカルボン酸ナトリウム（例示化合物Ｎ
ｏ.４９）の電子スペクトル（メタノール溶液）であ
る。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/533 Ｇ０１Ｎ 33/533 (56)参考文献 特開 平４−288022（ＪＰ，Ａ) 特開 平５−163439（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−177287（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−136786（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−193045（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−167449（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C09B 47/18 C09B 47/24 C12Q 1/68 G01N 33/533 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (15)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 一般式（Ｉ） 【化１】 〔一般式（Ｉ）中、Ｍは、Ａｌ、Ｓｉ、Ｐ、Ｇａ、Ｇｅ
    又はＳｃを示し、ｋは０又は１の整数を示し、ｋが１の
    場合Ｌは、 −Ｓｉ(ＣＨ3)2(ＣＨ2)aＮＨ−、 −Ｓｉ(ＣＨ3)2(ＣＨ2)bＮＨ・ＣＯＯ−、 −Ｓｉ(ＣＨ3)2Ｏ−又は −Ｓｉ(ＣＨ3)2ＮＨ− （ただし、ａ及びｂは、それぞれ独立に１〜６の整数を
    示す）を示し、ｘは１〜６の整数を示し、ｙは１〜２０
    ０の整数を示し、Ｒ1は水素原子、直鎖、分岐若しくは
    環状のアルキル基、アリール基、複素環基又はアラルキ
    ル基を示し、ｐは、 【化２】 のＭへの結合数を表わす１〜２の整数を示し、Ａは、ｍ
    個の置換基ＸＱ又はＱを有していてもよい２つ以上の芳
    香環が縮環した縮合多環芳香族環を示し、４個のＡはそ
    れぞれ異なっていてもよく、Ｘは、酸素原子、イオウ原
    子、窒素原子、リン原子、ケイ素原子、セレン原子、Ｎ
    Ｈ・ＣＯ、ＮＨ・ＰＯ2、ＮＨ・ＳＯ2、Ｏ・ＣＯ、Ｏ・
    ＳＯ2、Ｏ・ＰＯ2、Ｓ・ＣＯ、Ｓ・ＳＯ2、Ｓ・ＰＯ2、
    ＣＯ、ＳＯ 2又はＰＯ2を示し、Ｑは、飽和若しくは不飽
    和の炭化水素基又は複素環基を示し、ｍは、４個のＡに
    ついて、それぞれ独立に１〜４の正の整数を示し、ｎ
    は、４個のＡについてそれぞれ独立に０以上の整数を示
    し、４ｎ（４個のｎの合計、即ちＥＺの合計数）は、１
    以上の整数を示し、４ｎ個の置換基（ＥＺ）は、それぞ
    れ独立であってかつそれぞれ独立に、Ａを構成する縮合
    多環芳香族環及び／又はＱに結合しており、Ｅ及びＺ
    は、Ｚがアニオンの場合Ｅはカチオン性基、Ｚがカチオ
    ンの場合Ｅはアニオン性基、Ｚはなくてもよく、その場
    合にはＥはポリエチレングリコール残基、ポリエーテル
    残基、ポリアミン残基、ポリアルコール残基又はポリカ
    ルボン酸残基を含む結合基を示す〕で表わされる水溶性
    テトラアザポルフィン。
  2. 【請求項２】 請求項１記載の水溶性テトラアザポルフ
    ィンからなる蛍光標識用色素。
  3. 【請求項３】 請求項２記載の蛍光標識用色素を含有す
    る試薬。
  4. 【請求項４】 請求項２記載の蛍光標識用色素及び非イ
    オン系界面活性剤を含有する試薬。
  5. 【請求項５】 請求項２記載の蛍光標識用色素で標識さ
    れた生物由来物質。
  6. 【請求項６】 請求項５記載の標識された生物由来物質
    を含有する試薬。
  7. 【請求項７】 請求項５記載の標識された生物由来物質
    及び非イオン系界面活性剤を含有する試薬。
  8. 【請求項８】 生物由来物質が抗原、抗体又はヌクレオ
    チドである請求項６又は７記載の試薬。
  9. 【請求項９】 抗原が薬物である請求項８記載の試薬。
  10. 【請求項１０】 抗体がモノクローナル抗体である請求
    項８記載の試薬。
  11. 【請求項１１】 ヌクレオチドがオリゴヌクレオチド又
    はポリヌクレオチドである請求項８記載の試薬。
  12. 【請求項１２】 ヌクレオチドがＡＴＰ、ＣＴＰ、ＧＴ
    Ｐ、ＴＴＰ、ＵＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、
    ｄＴＴＰ、ｄＵＴＰ、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ、ｄｄＧ
    ＴＰ、ｄｄＴＴＰ、ｄｄＵＴＰ又はこれらの誘導体であ
    る請求項８記載の試薬。
  13. 【請求項１３】 請求項２記載の蛍光標識用色素を蛍光
    標識として用いることを特徴とする蛍光分析法。
  14. 【請求項１４】 光源として波長６７０〜８４０nmの半
    導体レーザーを用いる請求項１３記載の蛍光分析法。
  15. 【請求項１５】 請求項５記載の標識された生物由来物
    質を用いる請求項１３又は１４記載の蛍光分析法。
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