JP3107649B2 - 蛍光免疫測定装置 - Google Patents
蛍光免疫測定装置Info
- Publication number
- JP3107649B2 JP3107649B2 JP04160234A JP16023492A JP3107649B2 JP 3107649 B2 JP3107649 B2 JP 3107649B2 JP 04160234 A JP04160234 A JP 04160234A JP 16023492 A JP16023492 A JP 16023492A JP 3107649 B2 JP3107649 B2 JP 3107649B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- excitation light
- optical fiber
- antibody
- antigen
- fluorescence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/968—High energy substrates, e.g. fluorescent, chemiluminescent, radioactive
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/969—Multiple layering of reactants
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/80—Fluorescent dyes, e.g. rhodamine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、蛍光免疫反応を用いた
免疫測定装置であって、特に光ファイバーを用いる蛍光
免疫測定装置に関する。
免疫測定装置であって、特に光ファイバーを用いる蛍光
免疫測定装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、抗原、抗体の濃度の測定方法とし
てはラジオアイソトープや酵素で抗原抗体を標識する方
法が用いられてきたが、これらの方法は感度、安全性な
どの面で問題があり、これらの方法に代わって蛍光色素
で抗原抗体を標識し、これを用いて抗原抗体の濃度を測
定する方法が種々研究されている。
てはラジオアイソトープや酵素で抗原抗体を標識する方
法が用いられてきたが、これらの方法は感度、安全性な
どの面で問題があり、これらの方法に代わって蛍光色素
で抗原抗体を標識し、これを用いて抗原抗体の濃度を測
定する方法が種々研究されている。
【０００３】例えば、特開昭５９−５０１８７３号（米
国特許番号４８５２８０９号）などでは、光ファイバー
の側面に抗原、抗体を結合させ、蛍光色素で標識した抗
体、抗原をこの光ファイバー表面で免疫反応させるとと
もに、この光ファイバーに励起光を導波することによ
り、光ファイバー上の蛍光色素を励起させ、この蛍光を
光ファイバーの出射端面で反射させ、光ファイバーの入
射端面から蛍光と残余の励起光を取り出し、これをビー
ムスプリッターを経由することにより分光させ、蛍光の
みを測定する方法が記載されている（図４参照）。
国特許番号４８５２８０９号）などでは、光ファイバー
の側面に抗原、抗体を結合させ、蛍光色素で標識した抗
体、抗原をこの光ファイバー表面で免疫反応させるとと
もに、この光ファイバーに励起光を導波することによ
り、光ファイバー上の蛍光色素を励起させ、この蛍光を
光ファイバーの出射端面で反射させ、光ファイバーの入
射端面から蛍光と残余の励起光を取り出し、これをビー
ムスプリッターを経由することにより分光させ、蛍光の
みを測定する方法が記載されている（図４参照）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上述し
た技術では実用化のために小型化、低廉化、高感度化し
ようとすると、次に示す問題が発生した。即ち、１．反
射機能を備えるため、光ファイバーの先端に反射体を形
成するための加工が必要であり、コストがかかること、
２．反射機能を備えるため励起光が蛍光に混入し、励起
光をカットするためのカットフィルターが必要であるこ
と、３．高感度化のために光源の出力を上げた場合、カ
ットフィルターで除去できない励起光がバックグラウン
ドとなること、４．光学系が複雑で光軸調整が困難で小
型化しにくい、などの問題である。このように、従来技
術では安全で、実用化に不可欠な小型、低廉、高感度化
が可能な免疫分析装置がなかった。
た技術では実用化のために小型化、低廉化、高感度化し
ようとすると、次に示す問題が発生した。即ち、１．反
射機能を備えるため、光ファイバーの先端に反射体を形
成するための加工が必要であり、コストがかかること、
２．反射機能を備えるため励起光が蛍光に混入し、励起
光をカットするためのカットフィルターが必要であるこ
と、３．高感度化のために光源の出力を上げた場合、カ
ットフィルターで除去できない励起光がバックグラウン
ドとなること、４．光学系が複雑で光軸調整が困難で小
型化しにくい、などの問題である。このように、従来技
術では安全で、実用化に不可欠な小型、低廉、高感度化
が可能な免疫分析装置がなかった。
【０００５】本発明者らは鋭意研究した結果、上記課題
を解決するために、抗原あるいは抗体を光ファイバーの
励起光出射端面に結合し、励起光と蛍光を分光器で分光
するとともに、従来必要とされてきた光ファイバー検出
部端面での反射を逆になくして、励起光を透過させるこ
とにより、前記課題を解決できることを見出し、本発明
を完成するに至った。
を解決するために、抗原あるいは抗体を光ファイバーの
励起光出射端面に結合し、励起光と蛍光を分光器で分光
するとともに、従来必要とされてきた光ファイバー検出
部端面での反射を逆になくして、励起光を透過させるこ
とにより、前記課題を解決できることを見出し、本発明
を完成するに至った。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は励起光源、蛍光
検出器、抗原あるいは抗体が結合した光ファイバー、お
よび分光器を備えた蛍光免疫測定装置において、該抗原
あるいは抗体が光ファイバーの励起光出射端面に結合
し、該分光器が該励起光源から発せられた励起光を該光
ファイバーの励起光入射端面に導くと共に、該抗原ある
いは抗体と免疫複合体を形成する蛍光標識された抗体あ
るいは抗原から発する蛍光を該蛍光検出器へ導くよう構
成され、該光ファイバーの励起光出射端面が該励起光源
からの励起光に対して透過性を有することを特徴とする
蛍光免疫測定装置である。
検出器、抗原あるいは抗体が結合した光ファイバー、お
よび分光器を備えた蛍光免疫測定装置において、該抗原
あるいは抗体が光ファイバーの励起光出射端面に結合
し、該分光器が該励起光源から発せられた励起光を該光
ファイバーの励起光入射端面に導くと共に、該抗原ある
いは抗体と免疫複合体を形成する蛍光標識された抗体あ
るいは抗原から発する蛍光を該蛍光検出器へ導くよう構
成され、該光ファイバーの励起光出射端面が該励起光源
からの励起光に対して透過性を有することを特徴とする
蛍光免疫測定装置である。
【０００７】本発明における励起光源は、通常、半導体
レーザ、ＬＥＤ、Ｘｅランプ、気体レーザ等が挙げられ
特に限定されるものではないが、中でも半導体レーザ、
ＬＥＤが小型化、低廉化しやすいことから好ましく使用
される。
レーザ、ＬＥＤ、Ｘｅランプ、気体レーザ等が挙げられ
特に限定されるものではないが、中でも半導体レーザ、
ＬＥＤが小型化、低廉化しやすいことから好ましく使用
される。
【０００８】本発明における蛍光検出器は、通常、光電
子増倍管、フォトダイオード等が挙げられ、特に限定さ
れるものではないが、中でもフォトダイオードが小型化
しやすく強度が大きく実用的であることから好ましく使
用される。
子増倍管、フォトダイオード等が挙げられ、特に限定さ
れるものではないが、中でもフォトダイオードが小型化
しやすく強度が大きく実用的であることから好ましく使
用される。
【０００９】本発明における抗原あるいは抗体が結合し
た光ファイバーは、光ファイバーとしてガラス製、樹脂
製など種々の材質を使用できるが、特に価格の観点から
樹脂製が望ましい。光ファイバーに抗原、抗体を結合さ
せる方法としては、公知の方法を種々利用できる。例え
ば、ガラス製の光ファイバーの表面に３、４−アミノプ
ロピルトリメトキシシラーネなどのシリル化合物を反応
させ、光ファイバーの表面にアミノ基を導入し、これに
抗原、抗体のカルボキシル基を結合させることができ
る。
た光ファイバーは、光ファイバーとしてガラス製、樹脂
製など種々の材質を使用できるが、特に価格の観点から
樹脂製が望ましい。光ファイバーに抗原、抗体を結合さ
せる方法としては、公知の方法を種々利用できる。例え
ば、ガラス製の光ファイバーの表面に３、４−アミノプ
ロピルトリメトキシシラーネなどのシリル化合物を反応
させ、光ファイバーの表面にアミノ基を導入し、これに
抗原、抗体のカルボキシル基を結合させることができ
る。
【００１０】また、樹脂製光ファイバーに抗原、抗体を
結合させる場合は、光ファイバーとして、アクリル酸エ
ステルポリマーなどのエステル構造を持つものが好まし
く、このエステル基に＞ＣＨ−ＣＨＯ構造をもつ化合物
を反応させ、ホルミル基を導入し、このホルミル基に抗
原あるいは抗体などのアミノ基を結合させる。
結合させる場合は、光ファイバーとして、アクリル酸エ
ステルポリマーなどのエステル構造を持つものが好まし
く、このエステル基に＞ＣＨ−ＣＨＯ構造をもつ化合物
を反応させ、ホルミル基を導入し、このホルミル基に抗
原あるいは抗体などのアミノ基を結合させる。
【００１１】抗原あるいは抗体を光ファイバーに結合さ
せる部位は、光ファイバーの励起光出射端面に結合させ
ることが励起効率が高くなるので望ましい。抗体を結合
させる場合、抗体としては、モノクローナル抗体であっ
てもポリクローナル抗体であってもよい。
せる部位は、光ファイバーの励起光出射端面に結合させ
ることが励起効率が高くなるので望ましい。抗体を結合
させる場合、抗体としては、モノクローナル抗体であっ
てもポリクローナル抗体であってもよい。
【００１２】本発明における分光器は、光源から発せら
れた光を抗原あるいは抗体が結合した光ファイバーの励
起光入射端面に導くと共に、該抗原あるいは抗体と免疫
複合体を形成する蛍光標識された抗体あるいは抗原から
発する蛍光を蛍光検出器へ導くよう構成されていること
が必要である。この理由は、分光器を備えることによ
り、検出部である光ファイバーへの入出射を単一の光学
系で実現でき、小型化に適するからである。本発明にお
ける分光器は、このような作用を有するものであれば特
に限定されるものではない。例えば、１対のプリズムを
組み合わせたものが挙げられる。この場合、図３に示す
ように１対のプリズムの間に、励起光を全反射し、蛍光
を全透過する膜層１９および蛍光の反射防止膜層２１を
付けることができ、これにより検出器２の前に励起光除
去フィルターを付ける必要がなくなるからである。蛍光
を全透過する膜あるいは蛍光の反射防止膜は、Ｍｇ
Ｆ2 、ＭｇＯ、ＺｎＯ、ＳｉＯ2 、ＣａＦ2 を用いて調
製することができる。膜の形成方法としては、蒸着法等
の公知の方法を使用することができる。
れた光を抗原あるいは抗体が結合した光ファイバーの励
起光入射端面に導くと共に、該抗原あるいは抗体と免疫
複合体を形成する蛍光標識された抗体あるいは抗原から
発する蛍光を蛍光検出器へ導くよう構成されていること
が必要である。この理由は、分光器を備えることによ
り、検出部である光ファイバーへの入出射を単一の光学
系で実現でき、小型化に適するからである。本発明にお
ける分光器は、このような作用を有するものであれば特
に限定されるものではない。例えば、１対のプリズムを
組み合わせたものが挙げられる。この場合、図３に示す
ように１対のプリズムの間に、励起光を全反射し、蛍光
を全透過する膜層１９および蛍光の反射防止膜層２１を
付けることができ、これにより検出器２の前に励起光除
去フィルターを付ける必要がなくなるからである。蛍光
を全透過する膜あるいは蛍光の反射防止膜は、Ｍｇ
Ｆ2 、ＭｇＯ、ＺｎＯ、ＳｉＯ2 、ＣａＦ2 を用いて調
製することができる。膜の形成方法としては、蒸着法等
の公知の方法を使用することができる。
【００１３】また、このようなプリズムの代わりに、励
起光を全て透過させるが、蛍光は全て反射させる性質を
有するミラーを適宜調製して用いてもよい。このような
ミラーとしては、例えば誘電体多層膜ミラーが挙げら
れ、これを調製するには、例えば、ガラス基板の両面に
ＭｇＦ2 とＳｉＯ2 を蒸着法により交互に多層に積層す
ることにより容易に得ることができる。
起光を全て透過させるが、蛍光は全て反射させる性質を
有するミラーを適宜調製して用いてもよい。このような
ミラーとしては、例えば誘電体多層膜ミラーが挙げら
れ、これを調製するには、例えば、ガラス基板の両面に
ＭｇＦ2 とＳｉＯ2 を蒸着法により交互に多層に積層す
ることにより容易に得ることができる。
【００１４】本発明においては、励起光源と分光器の光
学的接続、分光器と蛍光検出器の光学的接続は、光ファ
イバーにて行うことができるが、光ファイバーを介さ
ず、直接光源からの光を分光器に照射、発生した蛍光を
直接蛍光検出器に照射する方が小型化の観点から望まし
い。
学的接続、分光器と蛍光検出器の光学的接続は、光ファ
イバーにて行うことができるが、光ファイバーを介さ
ず、直接光源からの光を分光器に照射、発生した蛍光を
直接蛍光検出器に照射する方が小型化の観点から望まし
い。
【００１５】励起光源からの励起光を抗原あるいは抗体
が結合した光ファイバーに導入する場合は、レンズなど
の光学系を使用することができるが、本発明では、高感
度の測定が可能であるため、レーザ等で励起光の集光を
省略でき、従来必要であった光軸合わせの工程が不要で
装置が簡便なものとなる。
が結合した光ファイバーに導入する場合は、レンズなど
の光学系を使用することができるが、本発明では、高感
度の測定が可能であるため、レーザ等で励起光の集光を
省略でき、従来必要であった光軸合わせの工程が不要で
装置が簡便なものとなる。
【００１６】本発明においては、抗原あるいは抗体が結
合した光ファイバーの励起光出射端面は、励起光源から
の励起光に対して透過性を有することが必要である。こ
の理由は、励起光を透過させることにより、従来技術で
見られるような励起光の反射を防止でき、また、励起光
源の出力を大きくしてもバックグラウンドを低くするこ
とができ、高感度化が可能なためである。
合した光ファイバーの励起光出射端面は、励起光源から
の励起光に対して透過性を有することが必要である。こ
の理由は、励起光を透過させることにより、従来技術で
見られるような励起光の反射を防止でき、また、励起光
源の出力を大きくしてもバックグラウンドを低くするこ
とができ、高感度化が可能なためである。
【００１７】本発明において、励起光出射端面が励起光
源からの励起光に対して透過性を有するとは、出射端面
で生じ得る反射光が蛍光検出において実質的に影響を与
えない程度に励起光の反射を防止し、励起光を透過させ
る性質をいう。即ち、具体的には光ファイバーの励起光
の出射端面は、励起光が実質的に反射することなく透過
性をもたせるため、通常Ｒｍａｘが５μｍ以下の面粗度
となるように加工され、好ましくはＲｍａｘが０．００
５〜５μｍ、さらに好ましくは０．０１〜０．５μｍで
ある。この理由は、Ｒｍａｘが５μｍを超える場合は、
励起光が出射端面で乱反射を起こして反射光が蛍光検出
器に混入しやすくなったり、出射端面から透過して出射
される光の出射率が低下する。またＲｍａｘが０．００
５μｍより低面粗度の場合は、加工に手間がかかり、ま
た表面積が小さくなるため、結合できる抗原や抗体の量
が減少するため感度が低下するからである。本発明にお
いて面粗度を表示するＲｍａｘはＪＩＳ Ｂ０６０１に
準拠したものである。
源からの励起光に対して透過性を有するとは、出射端面
で生じ得る反射光が蛍光検出において実質的に影響を与
えない程度に励起光の反射を防止し、励起光を透過させ
る性質をいう。即ち、具体的には光ファイバーの励起光
の出射端面は、励起光が実質的に反射することなく透過
性をもたせるため、通常Ｒｍａｘが５μｍ以下の面粗度
となるように加工され、好ましくはＲｍａｘが０．００
５〜５μｍ、さらに好ましくは０．０１〜０．５μｍで
ある。この理由は、Ｒｍａｘが５μｍを超える場合は、
励起光が出射端面で乱反射を起こして反射光が蛍光検出
器に混入しやすくなったり、出射端面から透過して出射
される光の出射率が低下する。またＲｍａｘが０．００
５μｍより低面粗度の場合は、加工に手間がかかり、ま
た表面積が小さくなるため、結合できる抗原や抗体の量
が減少するため感度が低下するからである。本発明にお
いて面粗度を表示するＲｍａｘはＪＩＳ Ｂ０６０１に
準拠したものである。
【００１８】光ファイバーの出射端面を上記のような面
粗度となるよう加工する方法としては、特に限定される
ものではなく、常法により容易に行うことができる。例
えば、Ｖ溝加工した治具のＶ溝部分に光ファイバーを導
入して固定し、各種の粗さの耐水研磨紙（例えば、８０
０番、１５００番、２０００番など）及びラッピングフ
ィルムを用いて順次研磨することにより所望の面粗度に
調整することができる。面粗度の測定は、光ファイバー
を前記の治具に固定した状態で触針式表面粗さ計（東京
精密社製）により測定することができる。
粗度となるよう加工する方法としては、特に限定される
ものではなく、常法により容易に行うことができる。例
えば、Ｖ溝加工した治具のＶ溝部分に光ファイバーを導
入して固定し、各種の粗さの耐水研磨紙（例えば、８０
０番、１５００番、２０００番など）及びラッピングフ
ィルムを用いて順次研磨することにより所望の面粗度に
調整することができる。面粗度の測定は、光ファイバー
を前記の治具に固定した状態で触針式表面粗さ計（東京
精密社製）により測定することができる。
【００１９】さらに、励起光の出射端面は、光の伝搬方
向に対して角度θを有してなることが望ましい。所望の
角度としては、θが出来るだけ小さい方が光ファイバー
先端の出射端面の表面積が大きくなるため、光ファイバ
ーへ結合できる抗原、抗体の量を増やすことができるた
め好ましいが、反面小さくなり過ぎると励起光が反射し
やすくなり、バックグラウンドが大きくなってしまうの
で好ましくない。従って、前記励起光の出射端面の光の
伝搬方向に対する角度θは、少なくとも下記の数式
（１）を満たすことが望ましい。
向に対して角度θを有してなることが望ましい。所望の
角度としては、θが出来るだけ小さい方が光ファイバー
先端の出射端面の表面積が大きくなるため、光ファイバ
ーへ結合できる抗原、抗体の量を増やすことができるた
め好ましいが、反面小さくなり過ぎると励起光が反射し
やすくなり、バックグラウンドが大きくなってしまうの
で好ましくない。従って、前記励起光の出射端面の光の
伝搬方向に対する角度θは、少なくとも下記の数式
（１）を満たすことが望ましい。
【００２０】 θ＞（π／２）−ｓｉｎ-1（ｎ２／ｎ１） ・・・（１） （式中、θは出射端面と光の伝搬方向のなす角度を、ｎ
１は光ファイバーのコア部の屈折率を、ｎ２は光ファイ
バーに接している媒質の屈折率を表わす。）
１は光ファイバーのコア部の屈折率を、ｎ２は光ファイ
バーに接している媒質の屈折率を表わす。）
【００２１】本発明における免疫複合体とは、測定試料
である抗体あるいは抗原を光ファイバーの励起光出射端
面に結合した抗原あるいは抗体と蛍光色素により標識さ
れた抗体あるいは抗原とによりサンドイッチ状に結合し
たもの、あるいは測定試料である抗体あるいは抗原と蛍
光色素により標識された抗体あるいは抗原とを競合させ
て光ファイバーの励起光出射端面に結合した抗原あるい
は抗体と結合させた抗原抗体複合体をさし、いずれであ
ってもよい。
である抗体あるいは抗原を光ファイバーの励起光出射端
面に結合した抗原あるいは抗体と蛍光色素により標識さ
れた抗体あるいは抗原とによりサンドイッチ状に結合し
たもの、あるいは測定試料である抗体あるいは抗原と蛍
光色素により標識された抗体あるいは抗原とを競合させ
て光ファイバーの励起光出射端面に結合した抗原あるい
は抗体と結合させた抗原抗体複合体をさし、いずれであ
ってもよい。
【００２２】また、蛍光標識に用いる蛍光色素として
は、特に限定されるものではなく例えばシアニン系色
素、フルオレセイン等が使用される。また、蛍光色素量
を増加させる目的で、例えば抗体にビオチン−アビジン
を介して蛍光色素を結合させたもの（抗体−ビオチン−
アビジン−蛍光色素）、キトサン−ビオチン−アビジン
を介して蛍光色素を結合させたもの（抗体−キトサン−
ビオチン−アビジン−蛍光色素）等の公知の方法（ＷＯ
９０／１３０２９号公報）により調製された蛍光標識体
を用いてもよい。
は、特に限定されるものではなく例えばシアニン系色
素、フルオレセイン等が使用される。また、蛍光色素量
を増加させる目的で、例えば抗体にビオチン−アビジン
を介して蛍光色素を結合させたもの（抗体−ビオチン−
アビジン−蛍光色素）、キトサン−ビオチン−アビジン
を介して蛍光色素を結合させたもの（抗体−キトサン−
ビオチン−アビジン−蛍光色素）等の公知の方法（ＷＯ
９０／１３０２９号公報）により調製された蛍光標識体
を用いてもよい。
【００２３】本発明においては、励起光を導入する光フ
ァイバーと検出部である抗原、抗体が結合した光ファイ
バーが分離可能であることが望ましい。この理由は、通
常検出部である抗原、抗体が結合した光ファイバーは使
い捨てであるため、測定終了後、新しい検出部を付け替
えることがたやすくできるからである。
ァイバーと検出部である抗原、抗体が結合した光ファイ
バーが分離可能であることが望ましい。この理由は、通
常検出部である抗原、抗体が結合した光ファイバーは使
い捨てであるため、測定終了後、新しい検出部を付け替
えることがたやすくできるからである。
【００２４】本発明においては、検出器の前に励起光を
除去するフィルターを設置することが可能であるが、従
来技術の装置と異なり励起光の混入がないため、フィル
ターを設置しない方が、フィルターでの損失を改善でき
るため好ましい。
除去するフィルターを設置することが可能であるが、従
来技術の装置と異なり励起光の混入がないため、フィル
ターを設置しない方が、フィルターでの損失を改善でき
るため好ましい。
【００２５】
【作用】本発明の蛍光免疫測定装置は、励起光源、蛍光
検出器、抗原あるいは抗体が結合した光ファイバーおよ
び分光器を備えてなるものであり、抗原あるいは抗体が
結合した光ファイバーは検出部として作用し、測定試料
である抗原、抗体溶液と蛍光色素で標識された抗原や抗
体の溶液と共に、いわゆるサンドイッチ法や競合法によ
り免疫反応を行い、光ファイバー上に抗原、抗体、蛍光
標識（色素）からなる免疫複合体を形成した後、これを
励起光源で励起し、発した蛍光を蛍光検出器で測定する
ものである。本発明の蛍光免疫測定装置は、検出部での
励起光の反射を防止しているため、蛍光に励起光の混入
がなく、高感度化が可能である。
検出器、抗原あるいは抗体が結合した光ファイバーおよ
び分光器を備えてなるものであり、抗原あるいは抗体が
結合した光ファイバーは検出部として作用し、測定試料
である抗原、抗体溶液と蛍光色素で標識された抗原や抗
体の溶液と共に、いわゆるサンドイッチ法や競合法によ
り免疫反応を行い、光ファイバー上に抗原、抗体、蛍光
標識（色素）からなる免疫複合体を形成した後、これを
励起光源で励起し、発した蛍光を蛍光検出器で測定する
ものである。本発明の蛍光免疫測定装置は、検出部での
励起光の反射を防止しているため、蛍光に励起光の混入
がなく、高感度化が可能である。
【００２６】
【実施例】以下、実施例および比較例により本発明をさ
らに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等によ
りなんら限定されるものではない。
らに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等によ
りなんら限定されるものではない。
【００２７】実施例１ （１）ポリメタクリル酸メチルを主成分とする直径１ｍ
ｍの樹脂製光ファイバー（三菱レイヨン製、商品名：エ
スカ）の先端を酢酸エチルに浸して拭きとり、クラッド
層を１ｃｍ剥離し、水洗した。さらにその端面を光の伝
搬方向に対して３０°の角度になるようにカッティング
し、そのカッティング面を研磨紙でポリッシングし、面
粗度をＲｍａｘが０．１０μｍになるように調整した。
なお、本実施例で用いる光ファイバーについて、前記の
数式（１）におけるｎｌは１．４９５であり、ｎ２は
１．３３０である。
ｍの樹脂製光ファイバー（三菱レイヨン製、商品名：エ
スカ）の先端を酢酸エチルに浸して拭きとり、クラッド
層を１ｃｍ剥離し、水洗した。さらにその端面を光の伝
搬方向に対して３０°の角度になるようにカッティング
し、そのカッティング面を研磨紙でポリッシングし、面
粗度をＲｍａｘが０．１０μｍになるように調整した。
なお、本実施例で用いる光ファイバーについて、前記の
数式（１）におけるｎｌは１．４９５であり、ｎ２は
１．３３０である。
【００２８】（２）０．５ｍｌの水に１０ｍｇのＮｉＳ
Ｏ4 を溶解させ、次いでエタノール２．５ｍｌを加え
た。この時、白色沈澱が生ずるため、これを３０００ｒ
ｐｍで遠心分離して上澄液を採取し、これをＮｉ−エタ
ノール溶液とした。５０ｍＭ水酸化カリウム−エタノー
ル溶液０．４ｍｌにＮｉ−エタノール溶液０．１ｍｌを
加えさらに５０％グルタルアルデヒドを５０μｌ添加し
反応溶液とした。
Ｏ4 を溶解させ、次いでエタノール２．５ｍｌを加え
た。この時、白色沈澱が生ずるため、これを３０００ｒ
ｐｍで遠心分離して上澄液を採取し、これをＮｉ−エタ
ノール溶液とした。５０ｍＭ水酸化カリウム−エタノー
ル溶液０．４ｍｌにＮｉ−エタノール溶液０．１ｍｌを
加えさらに５０％グルタルアルデヒドを５０μｌ添加し
反応溶液とした。
【００２９】（３）前記（２）で調製した反応溶液に前
記（１）の樹脂製光ファイバーを４５℃で、１０分間浸
漬した後水洗した。
記（１）の樹脂製光ファイバーを４５℃で、１０分間浸
漬した後水洗した。
【００３０】（４）ついで２０ｍＭの塩酸溶液に５〜１
０分浸漬した後、水で洗浄し樹脂製光ファイバーのコア
部分表面にホルミル基を導入した。
０分浸漬した後、水で洗浄し樹脂製光ファイバーのコア
部分表面にホルミル基を導入した。
【００３１】（５）バチルス由来の耐熱性α−アミラー
ゼに対するモノクローナル抗体であるマウスＩｇＧ（抗
体８）を常法により調製し、１ｍｇをりん酸緩衝生理食
塩水（ｐＨ＝７．５）に溶かした。この溶液に樹脂製光
ファイバーを４℃で１２時間浸漬した。
ゼに対するモノクローナル抗体であるマウスＩｇＧ（抗
体８）を常法により調製し、１ｍｇをりん酸緩衝生理食
塩水（ｐＨ＝７．５）に溶かした。この溶液に樹脂製光
ファイバーを４℃で１２時間浸漬した。
【００３２】（６）樹脂製光ファイバーを溶液から取り
出し、水で洗浄した後、１％ＮａＢＨ4 水溶液に１５分
間浸漬した後、水で洗浄してマウスＩｇＧ（抗体８）を
固定化し、検出部６（センシングチップ）とした（図２
参照）。
出し、水で洗浄した後、１％ＮａＢＨ4 水溶液に１５分
間浸漬した後、水で洗浄してマウスＩｇＧ（抗体８）を
固定化し、検出部６（センシングチップ）とした（図２
参照）。
【００３３】（７）ついで前記検出部と同径の光ファイ
バー４の一方の端面に接続ガイド５を装着した。
バー４の一方の端面に接続ガイド５を装着した。
【００３４】（８）１対の石英製４５°プリズムを用
い、励起光源１側のプリズムの斜面には励起光を全反射
し、ＭｇＦ2 のような蛍光を全透過する膜を蒸着法によ
り形成し、検出器２側のプリズムの斜面には、ＳｉＯ2
のような蛍光の反射防止膜を蒸着法により形成した後、
この１対のプリズムを光学接着剤で１体型として分光器
７を作成した（図３参照）。
い、励起光源１側のプリズムの斜面には励起光を全反射
し、ＭｇＦ2 のような蛍光を全透過する膜を蒸着法によ
り形成し、検出器２側のプリズムの斜面には、ＳｉＯ2
のような蛍光の反射防止膜を蒸着法により形成した後、
この１対のプリズムを光学接着剤で１体型として分光器
７を作成した（図３参照）。
【００３５】（９）前記（８）で作成した分光器７のプ
リズムに励起光源である６５０ｎｍの半導体レーザ１の
レーザ発振面、検出器２、および光ファイバー４の接続
ガイド５が装着されていない端面を近接させ、分光ユニ
ット１１に固定して蛍光免疫測定装置とした（図１参
照）。
リズムに励起光源である６５０ｎｍの半導体レーザ１の
レーザ発振面、検出器２、および光ファイバー４の接続
ガイド５が装着されていない端面を近接させ、分光ユニ
ット１１に固定して蛍光免疫測定装置とした（図１参
照）。
【００３６】この測定装置は、光源ユニット１より発す
る励起光を分光器７により光ファイバーコネクター３を
介して光ファイバー４に導かれ、光ファイバー接続ガイ
ド５により光ファイバー４と容易に光軸調整された検出
部６に導かれ図２に示された蛍光標識２次抗体１０の蛍
光物質１２を励起し、それにより蛍光物質１２は蛍光を
発振する。この蛍光は検出部６、光ファイバー４および
光ファイバーコネクター３を介して分光ユニットに導か
れ、この蛍光は分光器７によって、検出器２に導入さ
れ、蛍光強度を測定される。蛍光物質１２を励起した励
起光は検出部６に戻ることはないが、蛍光物質１２が発
する蛍光は方向性がないので、検出部６に導かれる。こ
のため、励起光によるバックグラウンドはフィルターが
なくても低くなる。
る励起光を分光器７により光ファイバーコネクター３を
介して光ファイバー４に導かれ、光ファイバー接続ガイ
ド５により光ファイバー４と容易に光軸調整された検出
部６に導かれ図２に示された蛍光標識２次抗体１０の蛍
光物質１２を励起し、それにより蛍光物質１２は蛍光を
発振する。この蛍光は検出部６、光ファイバー４および
光ファイバーコネクター３を介して分光ユニットに導か
れ、この蛍光は分光器７によって、検出器２に導入さ
れ、蛍光強度を測定される。蛍光物質１２を励起した励
起光は検出部６に戻ることはないが、蛍光物質１２が発
する蛍光は方向性がないので、検出部６に導かれる。こ
のため、励起光によるバックグラウンドはフィルターが
なくても低くなる。
【００３７】（１０）１００μｌの水に３ｍｇのＮａ2
ＣＯ3 と４ｍｇのビオチンを溶かした。ついで、１．８
μＭのキトサン溶液の２ｍｌに前記溶液を添加した。水
１００μｌを添加した後、５０ｍｇのＣＨＭＣ（水溶性
カルボジイミド）を添加した。さらに攪拌しながら、５
時間〜一晩室温で反応させた。酢酸を３滴滴下して、反
応を停止させた。ついで、Ｎａ2 ＣＯ3 ０．３ｇ／ｍｌ
及びＮａＣｌ０．３ｇ／ｍｌの混合液４ｍｌを加えて、
ビオチン化キトサンを沈澱させた。遠心分離器で沈澱を
回収した後、０．３ｇ／ｍｌのＮａＣｌと０．１ｇ／ｍ
ｌＮａ2 ＣＯ3 緩衝液で沈澱を洗浄した。沈澱を１０ｍ
ｌの１０ｍＭのカリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ＝７）で
一晩４℃で透析してビオチン化キトサンの懸濁液を得
た。
ＣＯ3 と４ｍｇのビオチンを溶かした。ついで、１．８
μＭのキトサン溶液の２ｍｌに前記溶液を添加した。水
１００μｌを添加した後、５０ｍｇのＣＨＭＣ（水溶性
カルボジイミド）を添加した。さらに攪拌しながら、５
時間〜一晩室温で反応させた。酢酸を３滴滴下して、反
応を停止させた。ついで、Ｎａ2 ＣＯ3 ０．３ｇ／ｍｌ
及びＮａＣｌ０．３ｇ／ｍｌの混合液４ｍｌを加えて、
ビオチン化キトサンを沈澱させた。遠心分離器で沈澱を
回収した後、０．３ｇ／ｍｌのＮａＣｌと０．１ｇ／ｍ
ｌＮａ2 ＣＯ3 緩衝液で沈澱を洗浄した。沈澱を１０ｍ
ｌの１０ｍＭのカリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ＝７）で
一晩４℃で透析してビオチン化キトサンの懸濁液を得
た。
【００３８】（１１）前記ビオチン化キトサンの懸濁液
に別途常法により調製したバチルス由来の耐熱性α−ア
ミラーゼに対するポリクローナル抗体（抗体１０）溶液
と、ＣＨＭＣを添加して、４℃で１夜反応させた。反応
終了後、１２時間透析を行い、さらに、陰イオン交換カ
ラムを用いて未反応物を除去し、抗体が結合したビオチ
ン化キトサンを得た。
に別途常法により調製したバチルス由来の耐熱性α−ア
ミラーゼに対するポリクローナル抗体（抗体１０）溶液
と、ＣＨＭＣを添加して、４℃で１夜反応させた。反応
終了後、１２時間透析を行い、さらに、陰イオン交換カ
ラムを用いて未反応物を除去し、抗体が結合したビオチ
ン化キトサンを得た。
【００３９】（１２）アビジン１ｍｇ及びトリエチルア
ミン０．２ｍｌを１ｍｌのエタノールに溶解させた。次
いで、２ｍｇのＮＫ１１６０（日本感光色素研究所製）
を加えて充分に溶解させ、溶液を作成した。さらに前記
溶液にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）１４
ｍｇ加えて、室温で４時間反応させた。反応終了後、エ
バポレータでエタノールとトリエチルアミンを減圧除去
した。残留物を、０．０１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ＝６．
５）２ｍｌに懸濁した後、遠心分離器を用いて５０００
ｒｐｍで１０分間分離を行って、上澄みを採取し、再度
遠心分離にかけてＮＫ１１６０で修飾されたアビジンの
溶液を得た。
ミン０．２ｍｌを１ｍｌのエタノールに溶解させた。次
いで、２ｍｇのＮＫ１１６０（日本感光色素研究所製）
を加えて充分に溶解させ、溶液を作成した。さらに前記
溶液にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）１４
ｍｇ加えて、室温で４時間反応させた。反応終了後、エ
バポレータでエタノールとトリエチルアミンを減圧除去
した。残留物を、０．０１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ＝６．
５）２ｍｌに懸濁した後、遠心分離器を用いて５０００
ｒｐｍで１０分間分離を行って、上澄みを採取し、再度
遠心分離にかけてＮＫ１１６０で修飾されたアビジンの
溶液を得た。
【００４０】（１３）検体試料（抗原９の溶液）として
バチルス由来の耐熱性α−アミラーゼを含有する溶液の
中に検出部６を浸漬し、生理食塩水の溶液で洗浄、（１
１）の溶液に浸漬したのち、（１２）の溶液に浸漬して
抗原９に蛍光標識２次抗体１０を結合させた。
バチルス由来の耐熱性α−アミラーゼを含有する溶液の
中に検出部６を浸漬し、生理食塩水の溶液で洗浄、（１
１）の溶液に浸漬したのち、（１２）の溶液に浸漬して
抗原９に蛍光標識２次抗体１０を結合させた。
【００４１】（１４）３ｍＷの６５０ｎｍの半導体レー
ザで励起し、蛍光を測定した。検出感度は、１．２×１
０-4（ｍｇ／ｍｌ）であった。半導体レーザの出力を高
くし、３０ｍＷとしたが、検出感度は０．２×１０
-4（ｍｇ／ｍｌ）であり、向上が見られた。
ザで励起し、蛍光を測定した。検出感度は、１．２×１
０-4（ｍｇ／ｍｌ）であった。半導体レーザの出力を高
くし、３０ｍＷとしたが、検出感度は０．２×１０
-4（ｍｇ／ｍｌ）であり、向上が見られた。
【００４２】実施例２ 実施例１において分光器７として一対のプリズムを接着
したものを使用した代わりに、ガラス基板上にＭｇＦ2
とＳｉＯ2 を交互に３層ずつ蒸着法により積層した誘電
体多層膜ミラーを用い、光ファイバーの出射端面に結合
させる抗体８を牛血清アルブミン（ＢＳＡ）に対するモ
ノクローナル抗体であるマウスＩｇＧに、抗体１０をＢ
ＳＡに対するポリクローナル抗体に、そして抗原９をＢ
ＳＡ溶液とする以外は、実施例１と同様にして蛍光を測
定した。検出感度は、１．０×１０-5（ｍｇ／ｍｌ）で
あり、良好な結果が得られた。
したものを使用した代わりに、ガラス基板上にＭｇＦ2
とＳｉＯ2 を交互に３層ずつ蒸着法により積層した誘電
体多層膜ミラーを用い、光ファイバーの出射端面に結合
させる抗体８を牛血清アルブミン（ＢＳＡ）に対するモ
ノクローナル抗体であるマウスＩｇＧに、抗体１０をＢ
ＳＡに対するポリクローナル抗体に、そして抗原９をＢ
ＳＡ溶液とする以外は、実施例１と同様にして蛍光を測
定した。検出感度は、１．０×１０-5（ｍｇ／ｍｌ）で
あり、良好な結果が得られた。
【００４３】比較例 本発明は、図４に示される装置を用いて測定を行った。
光ファイバーは、ナイロン製の物を使用し、表面を塩酸
で加水分解してアミノ基を光ファイバーの表面に生成さ
せ、このアミノ基に実施例１で用いたのと同様の抗体８
を結合させた。また、光ファイバーの先端にはスパッタ
で銀を打ち込みミラー１３を形成した。また分光器とし
て、ハーフミラー１４を設けた。被測定物質、測定方法
は実施例１と同様である。３ｍＷの６５０ｎｍの半導体
レーザで励起し、蛍光を測定した結果、検出感度は、
２．１×１０-4（ｍｇ／ｍｌ）であった。また、半導体
レーザの出力を高くし、３０ｍＷとしたが、バックグラ
ウンドの妨害により測定不能であった。
光ファイバーは、ナイロン製の物を使用し、表面を塩酸
で加水分解してアミノ基を光ファイバーの表面に生成さ
せ、このアミノ基に実施例１で用いたのと同様の抗体８
を結合させた。また、光ファイバーの先端にはスパッタ
で銀を打ち込みミラー１３を形成した。また分光器とし
て、ハーフミラー１４を設けた。被測定物質、測定方法
は実施例１と同様である。３ｍＷの６５０ｎｍの半導体
レーザで励起し、蛍光を測定した結果、検出感度は、
２．１×１０-4（ｍｇ／ｍｌ）であった。また、半導体
レーザの出力を高くし、３０ｍＷとしたが、バックグラ
ウンドの妨害により測定不能であった。
【００４４】
【発明の効果】このように本発明の蛍光免疫測定装置
は、検出部での励起光の反射を防止しているため、従来
の技術のように検出部の光ファイバーの先端に反射体を
形成する必要もなく、また励起光の反射がないため蛍光
に励起光の混入がなく、光源を高出力化する場合、励起
光を除去するフィルターにかかる負担を軽減でき、また
フィルターを省くこともできるため、フィルターでの損
失を低減でき高感度化が可能である。また、本発明では
励起光を除去したり、検出器のデータを補正する必要が
ないため、装置全体の小型化が可能である。
は、検出部での励起光の反射を防止しているため、従来
の技術のように検出部の光ファイバーの先端に反射体を
形成する必要もなく、また励起光の反射がないため蛍光
に励起光の混入がなく、光源を高出力化する場合、励起
光を除去するフィルターにかかる負担を軽減でき、また
フィルターを省くこともできるため、フィルターでの損
失を低減でき高感度化が可能である。また、本発明では
励起光を除去したり、検出器のデータを補正する必要が
ないため、装置全体の小型化が可能である。
【図１】図１は本発明の蛍光免疫測定装置の概略構成を
示す図である。
示す図である。
【図２】図２は本発明の装置の検出部の概略構成を示す
図である。
図である。
【図３】図３は分光器の概略構成を示す図である。
【図４】図４は従来技術の装置の概略構成を示す図であ
る。
る。
１ 光源 ２ 検出器 ３ 光ファイバーコネクター ４ 光ファイバー ５ 接続ガイド ６ 検出部（センシングチップ） ７ 分光器 ８ １次抗体 ９ 抗原 １０ 蛍光標識２次抗体 １１ 分光ユニット １２ 蛍光物質 １３ ミラー １４ ハーフミラー １５ プリズム １６ 参照光検出器 １７ 比率増幅計 １８ 記録計 １９ 励起光を全反射し、蛍光を全透過する膜 ２０ 光学接着剤 ２１ 蛍光の反射防止膜 ２２ 励起光 ２３ 蛍光
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 島田 憲一 岐阜県揖斐郡揖斐川町北方１−１ イビ デン株式会社内 (56)参考文献 特表 昭59−501873（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/543 595 G01N 21/64
Claims (4)
- 【請求項１】 励起光源、蛍光検出器、抗原あるいは抗
体が結合した光ファイバー、および分光器を備えた蛍光
免疫測定装置において、該抗原あるいは抗体が光ファイ
バーの励起光出射端面に結合し、該分光器が該励起光源
から発せられた励起光を該光ファイバーの励起光入射端
面に導くと共に、該抗原あるいは抗体と免疫複合体を形
成する蛍光標識された抗体あるいは抗原から発する蛍光
を該蛍光検出器へ導くよう構成され、該光ファイバーの
励起光出射端面が該励起光源からの励起光に対して透過
性を有することを特徴とする蛍光免疫測定装置。 - 【請求項２】 分光器がプリズム又は誘電体多層膜ミラ
ーである請求項１記載の蛍光免疫測定装置。 - 【請求項３】 光ファイバーの励起光出射端面が、Ｒｍ
ａｘが５μｍ以下の面粗度を有する請求項１記載の蛍光
免疫測定装置。 - 【請求項４】 光ファイバーの励起光出射端面が、光の
伝搬方向に対して数式（１）で表される角度θを有する
請求項１記載の蛍光免疫測定装置。 θ＞（π／２）−ｓｉｎ-1（ｎ２／ｎ１） ・・・（１） （式中、θは出射端面と光の伝搬方向のなす角度を、ｎ
１は光ファイバーのコア部の屈折率を、ｎ２は光ファイ
バーに接している媒質の屈折率を表わす。）
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04160234A JP3107649B2 (ja) | 1991-12-20 | 1992-05-26 | 蛍光免疫測定装置 |
| US08/098,394 US5449625A (en) | 1991-12-20 | 1992-12-17 | Optical fiber based fluorescent immunoassay apparatus |
| PCT/JP1992/001652 WO1993013418A1 (en) | 1991-12-20 | 1992-12-17 | Fluorescent immunity measuring instrument |
| DE4294539T DE4294539T1 (de) | 1991-12-20 | 1992-12-17 | Vorrichtung für Immunanalysen |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3-356001 | 1991-12-20 | ||
| JP35600191 | 1991-12-20 | ||
| JP04160234A JP3107649B2 (ja) | 1991-12-20 | 1992-05-26 | 蛍光免疫測定装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05223818A JPH05223818A (ja) | 1993-09-03 |
| JP3107649B2 true JP3107649B2 (ja) | 2000-11-13 |
Family
ID=26486794
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04160234A Expired - Lifetime JP3107649B2 (ja) | 1991-12-20 | 1992-05-26 | 蛍光免疫測定装置 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5449625A (ja) |
| JP (1) | JP3107649B2 (ja) |
| DE (1) | DE4294539T1 (ja) |
| WO (1) | WO1993013418A1 (ja) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5354574A (en) * | 1992-06-23 | 1994-10-11 | Ibiden Co., Ltd. | Method for producing optical fiber having formyl groups on core surface thereof |
| JPH07110330A (ja) * | 1993-09-01 | 1995-04-25 | Bio Sensor Kenkyusho:Kk | 光学センサー |
| US5814565A (en) * | 1995-02-23 | 1998-09-29 | University Of Utah Research Foundation | Integrated optic waveguide immunosensor |
| US5690894A (en) * | 1995-05-23 | 1997-11-25 | The Regents Of The University Of California | High density array fabrication and readout method for a fiber optic biosensor |
| US5837196A (en) * | 1996-01-26 | 1998-11-17 | The Regents Of The University Of California | High density array fabrication and readout method for a fiber optic biosensor |
| US5938595A (en) * | 1996-05-24 | 1999-08-17 | The Regents Of The University Of California | Fiber optic D dimer biosensor |
| US5859937A (en) * | 1997-04-04 | 1999-01-12 | Neomecs Incorporated | Minimally invasive sensor |
| US5929453A (en) * | 1997-06-03 | 1999-07-27 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Underwater spectroscopic detector |
| EP0898162A1 (en) * | 1997-08-20 | 1999-02-24 | Suzuki Motor Corporation | Immunoassay apparatus |
| US6222619B1 (en) | 1997-09-18 | 2001-04-24 | University Of Utah Research Foundation | Diagnostic device and method |
| DE19747572C1 (de) * | 1997-10-28 | 1999-04-08 | Inst Chemo Biosensorik | Vorrichtung und Verfahren zur Durchführung von Fluoreszenzimmuntests |
| US6289229B1 (en) | 1998-01-20 | 2001-09-11 | Scimed Life Systems, Inc. | Readable probe array for in vivo use |
| US7167615B1 (en) | 1999-11-05 | 2007-01-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Resonant waveguide-grating filters and sensors and methods for making and using same |
| US7496392B2 (en) * | 2003-11-26 | 2009-02-24 | Becton, Dickinson And Company | Fiber optic device for sensing analytes |
| FR2891366B1 (fr) * | 2005-09-29 | 2007-11-30 | Univ Nice Sophia Antipolis Eta | Dispositif pour l'analyse par spectrofluorimetrie d'un materiel biologique |
| JP4986137B2 (ja) * | 2006-12-13 | 2012-07-25 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | ナノ構造体を有する光学素子用又はナノ構造体用成形型の製造方法 |
| WO2010101931A2 (en) * | 2009-03-03 | 2010-09-10 | Access Medical System Co., Ltd. | Detection system and method for high sensitivity fluorescent assays |
| WO2012145270A2 (en) | 2011-04-20 | 2012-10-26 | Access Medical Systems, Ltd. | Luminescent polymer cyclic amplification |
| US9568431B2 (en) | 2012-04-16 | 2017-02-14 | Access Medical Systems, Ltd. | Luminescent immunoassays for quantitating analytes having a wide concentration range |
| JP6291278B2 (ja) * | 2014-02-19 | 2018-03-14 | 株式会社エンプラス | 検出装置 |
| CN113063759B (zh) * | 2021-03-15 | 2023-05-05 | 国科大杭州高等研究院 | 基于半球空间类复眼结构的体细胞激光诱导荧光探测方法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4582809A (en) * | 1982-06-14 | 1986-04-15 | Myron J. Block | Apparatus including optical fiber for fluorescence immunoassay |
| US4558014A (en) * | 1983-06-13 | 1985-12-10 | Myron J. Block | Assay apparatus and methods |
| US4666862A (en) * | 1984-08-14 | 1987-05-19 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Fluorescent energy transfer with phycobiliproteins |
| CH660633A5 (fr) * | 1984-11-06 | 1987-05-15 | Battelle Memorial Institute | Appareil d'analyse pour la determination optique de substances en solution. |
| DE3481644D1 (de) * | 1984-12-10 | 1990-04-19 | Prutec Ltd | Verfahren zum optischen nachweis von parametern von substanzen in einem fluessigen analyt. |
| DE3617763A1 (de) * | 1985-05-28 | 1986-12-04 | Olympus Optical Co., Ltd., Tokio/Tokyo | Verfahren zur durchfuehrung immunologischer bestimmungen und dafuer geeignete vorrichtung |
| JP2533845B2 (ja) * | 1985-05-28 | 1996-09-11 | オリンパス光学工業株式会社 | 免疫学的分析方法 |
| US4716121A (en) * | 1985-09-09 | 1987-12-29 | Ord, Inc. | Fluorescent assays, including immunoassays, with feature of flowing sample |
| US5019350A (en) * | 1986-02-13 | 1991-05-28 | Pfizer Hospital Products, Inc. | Fluorescent polymers |
| US4925268A (en) * | 1988-07-25 | 1990-05-15 | Abbott Laboratories | Fiber-optic physiological probes |
| DE68919032T2 (de) * | 1988-08-29 | 1995-06-08 | Mitsubishi Rayon Co | Polymerzusammensetzung und optische Faser, umhüllt mit diese Zusammensetzung. |
| JPH07113638B2 (ja) * | 1989-07-14 | 1995-12-06 | 松下電器産業株式会社 | 免疫測定方法および免疫センサー |
-
1992
- 1992-05-26 JP JP04160234A patent/JP3107649B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-12-17 US US08/098,394 patent/US5449625A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-12-17 WO PCT/JP1992/001652 patent/WO1993013418A1/ja active Application Filing
- 1992-12-17 DE DE4294539T patent/DE4294539T1/de not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE4294539T1 (de) | 1994-01-13 |
| US5449625A (en) | 1995-09-12 |
| JPH05223818A (ja) | 1993-09-03 |
| WO1993013418A1 (en) | 1993-07-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3107649B2 (ja) | 蛍光免疫測定装置 | |
| US5166515A (en) | Method of optical analysis of a fluid including an optical waveguide | |
| US4582809A (en) | Apparatus including optical fiber for fluorescence immunoassay | |
| US5830766A (en) | Enhanced signal-to-noise ratio and sensitivity optical immunoassay | |
| US5300423A (en) | Specific binding assay involving separation of light emissions | |
| JP3474880B2 (ja) | 免疫分析を行うための光学装置 | |
| US20090116020A1 (en) | Biosensor, method for producing the same and sensor measurement system | |
| JPS6279333A (ja) | 免疫検定装置 | |
| WO1989009408A1 (en) | Method of assay | |
| JPH03502610A (ja) | 固有化学センサーであるファイバーオプティック | |
| JP2969177B2 (ja) | 分析方法 | |
| JP3283065B2 (ja) | 癌の免疫検査法とそれに使用される検査用内視鏡 | |
| JP2000009732A (ja) | 生体活性物質測定用装置 | |
| JP3025078B2 (ja) | 蛍光分析法 | |
| JP2951398B2 (ja) | 生体活性物質測定用試薬、その製法及び測定方法 | |
| Kooyman et al. | A fiber-optic fluorescence immunosensor | |
| JPH0688785A (ja) | 発光免疫測定装置 | |
| JP3167176B2 (ja) | 蛍光酵素免疫測定法 | |
| WO1990013029A1 (en) | Reagent for assaying biologically active substance, method of production thereof, and method and apparatus for assaying | |
| JP3129482B2 (ja) | リン脂質抗体の測定法、測定用チップ及び試薬 | |
| JP3095903B2 (ja) | ホルミル基を導入した光ファイバーの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080908 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090908 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090908 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100908 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100908 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110908 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120908 Year of fee payment: 12 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120908 Year of fee payment: 12 |