JPH07113638B2 - 免疫測定方法および免疫センサー - Google Patents
免疫測定方法および免疫センサーInfo
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- JPH07113638B2 JPH07113638B2 JP1182918A JP18291889A JPH07113638B2 JP H07113638 B2 JPH07113638 B2 JP H07113638B2 JP 1182918 A JP1182918 A JP 1182918A JP 18291889 A JP18291889 A JP 18291889A JP H07113638 B2 JPH07113638 B2 JP H07113638B2
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、主として臨床検査における病原体、あるいは
疾病マーカーなどの検出、さらに広く産業上の極微量の
物質を簡便にかつ迅速に測定する免疫測定方法および免
疫センサーに関する。
疾病マーカーなどの検出、さらに広く産業上の極微量の
物質を簡便にかつ迅速に測定する免疫測定方法および免
疫センサーに関する。
従来の技術 従来、極微量の物質の迅速かつ高感度な免疫測定方法に
は、被検出物質あるいは蛍光プローブで標識された被検
出物質（蛍光プローブ標識被検出物質）の結合による抗
体および蛍光プローブの蛍光強度の変化を蛍光測定装置
内で測定する方法が用いられて来た。この方法は、あら
かじめ蛍光測定装置内のミクロセルに抗体溶液、または
蛍光プローブを用いる場合は抗体溶液と蛍光プローブ標
識被検出物質を注入しておき、次に被検出物質を加えて
抗体に結合させ、一定時間経過後の蛍光強度を測定する
ことによって被検出物質の量を測定するものである。
は、被検出物質あるいは蛍光プローブで標識された被検
出物質（蛍光プローブ標識被検出物質）の結合による抗
体および蛍光プローブの蛍光強度の変化を蛍光測定装置
内で測定する方法が用いられて来た。この方法は、あら
かじめ蛍光測定装置内のミクロセルに抗体溶液、または
蛍光プローブを用いる場合は抗体溶液と蛍光プローブ標
識被検出物質を注入しておき、次に被検出物質を加えて
抗体に結合させ、一定時間経過後の蛍光強度を測定する
ことによって被検出物質の量を測定するものである。
発明が解決しようとする課題 前項で記載したように従来の免疫検出方法では被検出溶
液を蛍光測定装置内のミクロセルに注入し、一定時間後
に蛍光強度を測定しなければならず、被検出溶液の運搬
が困難なものや被検出溶液の数が多い時にはミクロセル
への被検出溶液の注入に時間と手間がかかり、これを改
善する方法が望まれていた。
液を蛍光測定装置内のミクロセルに注入し、一定時間後
に蛍光強度を測定しなければならず、被検出溶液の運搬
が困難なものや被検出溶液の数が多い時にはミクロセル
への被検出溶液の注入に時間と手間がかかり、これを改
善する方法が望まれていた。
本発明は、このような従来技術の課題を解決することを
目的とする。
目的とする。
課題を解決するための手段 本発明は、従来蛍光測定装置内に備えられていた反応相
を蛍光測定装置外に出し、光ファイバーで蛍光測定装置
と反応相を結び、被検出物質と結合前後で蛍光特性が変
化する抗体を含有した反応相を半透膜を介して被検出溶
液に設置することによって被検出物質の検出を行なう。
を蛍光測定装置外に出し、光ファイバーで蛍光測定装置
と反応相を結び、被検出物質と結合前後で蛍光特性が変
化する抗体を含有した反応相を半透膜を介して被検出溶
液に設置することによって被検出物質の検出を行なう。
作用 被検出物質の検出の際に、光ファイバーの一端に備えた
反応相は、検出物質は透過するが抗体は透過しない半透
膜を介して被検出物質に接しており、被検出溶液中の被
検出物質が半透膜を通過して反応相に入り、これが反応
相内の抗体と結合することにより蛍光強度が変化して被
検出溶液中の被検出物質の濃度が測定される。
反応相は、検出物質は透過するが抗体は透過しない半透
膜を介して被検出物質に接しており、被検出溶液中の被
検出物質が半透膜を通過して反応相に入り、これが反応
相内の抗体と結合することにより蛍光強度が変化して被
検出溶液中の被検出物質の濃度が測定される。
実施例 以下に、本発明の実施例について図面を参照しながら説
明する。
明する。
実施例１ トリニトロトルエンの免疫測定方法； 抗トリニトロトルエン抗体は280nmの励起光による340nm
の蛍光がトリニトロトルエンと結合することにより減少
する性質（蛍光消光性）を持つ。この抗体を光ファイバ
ーの先端に備えられた反応相に加え、反応相を直接被検
出溶液に浸し、蛍光の伝達を光ファイバーで行うことに
よって被検出物質を検出した。
の蛍光がトリニトロトルエンと結合することにより減少
する性質（蛍光消光性）を持つ。この抗体を光ファイバ
ーの先端に備えられた反応相に加え、反応相を直接被検
出溶液に浸し、蛍光の伝達を光ファイバーで行うことに
よって被検出物質を検出した。
（Ａ） バッファー（pH7のリン酸バッファーを0.45μ
ｍのフィルターでろ過したもの）で抗トリニトロトルエ
ン抗体を溶解して２×10-7Mの濃度とした。この溶液380
μｌを反応相（20℃に設定）に加えた。この反応相に28
0nmの蛍光を光ファイバーにより伝達し340nmの蛍光を光
ファイバーにより取り出して強度を測定すると蛍光強度
は約45であった。
ｍのフィルターでろ過したもの）で抗トリニトロトルエ
ン抗体を溶解して２×10-7Mの濃度とした。この溶液380
μｌを反応相（20℃に設定）に加えた。この反応相に28
0nmの蛍光を光ファイバーにより伝達し340nmの蛍光を光
ファイバーにより取り出して強度を測定すると蛍光強度
は約45であった。
（Ｂ） 上記（Ａ）のセンサーの反応相を種々の濃度の
トリニトロトルエン溶液に浸し280nm励起の340nmの蛍光
強度を測定するとトリニトロトルエンの濃度に依存して
340nmの蛍光強度は減少した。減少率Ｉ（％）を、次式
を用いて算出した。
トリニトロトルエン溶液に浸し280nm励起の340nmの蛍光
強度を測定するとトリニトロトルエンの濃度に依存して
340nmの蛍光強度は減少した。減少率Ｉ（％）を、次式
を用いて算出した。
ここでは、Ｆはトリニトロトルエン溶液に反応相を浸す
前の蛍光強度、またFobsは反応相をトリニトロトルエン
溶液に浸したときの蛍光強度を示す。
前の蛍光強度、またFobsは反応相をトリニトロトルエン
溶液に浸したときの蛍光強度を示す。
トリニトロトルエンの濃度に対する蛍光強度の減少率を
第１図に示す。第１図の結果から、約10−7.5Ｍ濃度の
トリニトロトルエンが本発明により検出できたことが証
明された。
第１図に示す。第１図の結果から、約10−7.5Ｍ濃度の
トリニトロトルエンが本発明により検出できたことが証
明された。
なお、本実施例では被検出物質と結合時に蛍光強度が消
光する性質を持つ抗体として抗トリニトロトルエン抗体
を用いたが、一般にこのような蛍光消光についての性質
を持つ抗体を用いれば上記の方法での極微量の物質の検
出が可能である。
光する性質を持つ抗体として抗トリニトロトルエン抗体
を用いたが、一般にこのような蛍光消光についての性質
を持つ抗体を用いれば上記の方法での極微量の物質の検
出が可能である。
実施例２ メタンフェタミンの免疫測定方法； 抗メタンフェタミン抗体は蛍光消光性は持っていない
が、ダンシル基で標識したメタンフェタミン（ダンシル
標識メタンフェタミン）と結合した時、280nmの波長で
励起すると530nmの波長の蛍光強度が増強する性質を持
つ。この抗体しダンジル標識メタンフェタミンを光ファ
イバーの先端に備えられた反応相に加え、反応相を直接
被検出液に浸し、蛍光の伝達を光ファイバーで行うこと
によって被検出物質を検出した。
が、ダンシル基で標識したメタンフェタミン（ダンシル
標識メタンフェタミン）と結合した時、280nmの波長で
励起すると530nmの波長の蛍光強度が増強する性質を持
つ。この抗体しダンジル標識メタンフェタミンを光ファ
イバーの先端に備えられた反応相に加え、反応相を直接
被検出液に浸し、蛍光の伝達を光ファイバーで行うこと
によって被検出物質を検出した。
（Ａ） バッファー（pH7のリン酸バッファーを0.45μ
ｍのフィルターでろ過したもの）で抗メタンフェタミン
抗体を溶解して２×10-7Mの濃度とした。この溶液360μ
ｌを反応相（20℃に設定）に入れ、さらに10-6Mのダン
シル標識メタンフェタミンを20μｌ加えた。この反応相
に280nmの蛍光を光ファイバーにより伝達し530nmの蛍光
を光ファイバーにより取り出してその強度を測定すると
蛍光強度は約60であった。
ｍのフィルターでろ過したもの）で抗メタンフェタミン
抗体を溶解して２×10-7Mの濃度とした。この溶液360μ
ｌを反応相（20℃に設定）に入れ、さらに10-6Mのダン
シル標識メタンフェタミンを20μｌ加えた。この反応相
に280nmの蛍光を光ファイバーにより伝達し530nmの蛍光
を光ファイバーにより取り出してその強度を測定すると
蛍光強度は約60であった。
（Ｂ） 上記（Ａ）のセンサーの反応相を種々の濃度の
メタンフェタミン溶液に浸し280nm励起の530nmの蛍光強
度を測定するとメタンフェタミンの濃度に依存して530n
mの蛍光強度は減少した。減少率Ｉ（％）を、次式を用
いて算出した。
メタンフェタミン溶液に浸し280nm励起の530nmの蛍光強
度を測定するとメタンフェタミンの濃度に依存して530n
mの蛍光強度は減少した。減少率Ｉ（％）を、次式を用
いて算出した。
ここで、Ｆは反応相をメタンフェタミン溶液に浸す前の
蛍光強度、またFobsは反応相をメタンフェタミン溶液に
浸したときの蛍光強度を示す。メタンフェタミンの濃度
に対する蛍光強度の減少率を第２図に示す。第２図の結
果から約10−5.5Ｍの濃度のメタンフェタミンが本発明
により検出できたことが証明された。
蛍光強度、またFobsは反応相をメタンフェタミン溶液に
浸したときの蛍光強度を示す。メタンフェタミンの濃度
に対する蛍光強度の減少率を第２図に示す。第２図の結
果から約10−5.5Ｍの濃度のメタンフェタミンが本発明
により検出できたことが証明された。
また、ダンシル基で標識したメタンフェタミンの代わり
にダンシル基で標識したアンフェタミンを用いても同様
の結果を得ることができた。
にダンシル基で標識したアンフェタミンを用いても同様
の結果を得ることができた。
以上、主としてメタンフェタミンの検出を例にとって本
発明の説明を行なったが、もちろんその他の化学物質す
べてに応用可能な一般方法である。
発明の説明を行なったが、もちろんその他の化学物質す
べてに応用可能な一般方法である。
実施例３ 免疫センサー； 実施例１および２で説明した反応相を光ファイバーを介
して蛍光測定装置に結合させ、免疫センサーを作製し
た。第３図（ａ）に示すように、測定機構は、蛍光測定
装置１で調整した波長の光を光ファイバー２によって反
応相３に伝達し、反応相３内の抗体を励起し、反応相３
より出六された蛍光を光ファイバー２によって蛍光測定
装置１に伝達しここで蛍光強度を測定するものである。
第３図（ｂ）は、その反応相３を中心とする略示断面図
である。半透膜５がＯリング４を介して、光ファイバー
２の先端に取り付けられている。
して蛍光測定装置に結合させ、免疫センサーを作製し
た。第３図（ａ）に示すように、測定機構は、蛍光測定
装置１で調整した波長の光を光ファイバー２によって反
応相３に伝達し、反応相３内の抗体を励起し、反応相３
より出六された蛍光を光ファイバー２によって蛍光測定
装置１に伝達しここで蛍光強度を測定するものである。
第３図（ｂ）は、その反応相３を中心とする略示断面図
である。半透膜５がＯリング４を介して、光ファイバー
２の先端に取り付けられている。
なお、本実施例１および実施例２は本免疫センサーを用
いて行なったものである。
いて行なったものである。
また、光ファイバー２の末端に備えられた反応相３が光
ファイバー２と脱着が可能であってもよい。
ファイバー２と脱着が可能であってもよい。
発明の効果 本発明は、上記の手法により、被検出溶液の運搬が困難
なものや被検出溶液の数が多いものでも簡便に極微量の
迅速かつ高感度な測定が可能となり、水溶液中の極微量
物質を迅速にかつ簡便に測定することが可能になった。
なものや被検出溶液の数が多いものでも簡便に極微量の
迅速かつ高感度な測定が可能となり、水溶液中の極微量
物質を迅速にかつ簡便に測定することが可能になった。
第１図は本発明の実施例１の免疫測定方法によって測定
した各トリニトロトルエン濃度における蛍光減少率を示
したグラフ、第２図は本発明の実施例２の免疫測定方法
によって測定した各メタンフェタミン濃度における蛍光
減少率を示したグラフ、第３図は本発明における免疫セ
ンサーの略示断面図であり、（ａ）は免疫センサーの全
体略示図、（ｂ）は反応相付近の拡大図を示すものであ
る。 １……蛍光測定装置、２……光ファイバー、３……反応
相、４……Ｏリング、５……半透膜。
した各トリニトロトルエン濃度における蛍光減少率を示
したグラフ、第２図は本発明の実施例２の免疫測定方法
によって測定した各メタンフェタミン濃度における蛍光
減少率を示したグラフ、第３図は本発明における免疫セ
ンサーの略示断面図であり、（ａ）は免疫センサーの全
体略示図、（ｂ）は反応相付近の拡大図を示すものであ
る。 １……蛍光測定装置、２……光ファイバー、３……反応
相、４……Ｏリング、５……半透膜。
Claims (13)
- 【請求項１】光ファイバーを通して励起光および出力光
の伝達を行い、前記光ファイバーの一端に、被検出物質
と結合前後で蛍光特性が変化する抗体を含有した反応相
を有し、前記反応相を半透膜を介して被検出溶液中に設
置し、半透膜を通過して前記反応相内に入った被検出物
質と前記抗体との結合反応に伴う蛍光特性の変化を測定
することを特徴とする免疫測定方法。 - 【請求項２】光ファイバーを通して励起光および出力光
の伝達を行い、前記光ファイバーの一端に、被検出物質
と結合する抗体および蛍光プローブで標識した被検出物
質を含有した反応相を有し、前記反応相を半透膜を介し
て被検出溶液中に設置し、半透膜を通過して前記反応相
内に入った被検出物質と蛍光プローブで標識した被検出
物質との抗体結合の競合反応に伴う蛍光特性の変化を測
定することを特徴とする免疫測定方法。 - 【請求項３】光ファイバーの一端に備えた反応相がpH6
〜９の緩衝溶液で満たされていることを特徴とする請求
項（１）又は（２）記載の免疫測定方法。 - 【請求項４】蛍光強度が被検出物質との結合により減少
する抗体を用いることを特徴とする請求項（１）記載の
免疫測定方法。 - 【請求項５】蛍光プローブで標識した被検出物質の蛍光
強度が抗体と結合することによって増強することを特徴
とする請求項（２）記載の免疫測定方法。 - 【請求項６】被検出物質に標識する蛍光プローブがダン
シル基であることを特徴とする請求項（２）記載の免疫
測定方法。 - 【請求項７】被検出物質および蛍光プローブで標識した
被検出物質と結合する抗体がポリクローナル抗体である
ことを特徴とする請求項（１）又は（２）記載の免疫測
定方法。 - 【請求項８】被検出物質および蛍光プローブで標識した
被検出物質と結合する抗体がモノクローナル抗体である
ことを特徴とする請求項（１）又は（２）記載の免疫測
定方法。 - 【請求項９】被検出物質がトリニトロトルエンであるこ
とを特徴とする請求項（１）記載の免疫測定方法。 - 【請求項１０】被検出物質がメタンフェタミン、アンフ
ェタミン又はエフェドリンであることを特徴とする請求
項（２）記載の免疫的測定方法。 - 【請求項１１】励起光を照射し、出力光を測定する測定
部と測定結果を表示する表示部からなる蛍光測定装置
と、前記蛍光測定装置に一端が結合し、励起光および出
力光の伝達を行う光ファイバーと、前記光ファイバーの
もう一端が半透膜で覆われた反応相を有し、前記反応相
内に被検出物質と結合前後で蛍光特性が変化する抗体を
含有した免疫センサー。 - 【請求項１２】励起光を照射し、出力光を測定する測定
部と測定結果を表示する表示部からなる蛍光測定装置
と、前記蛍光測定装置に一端が結合し、励起光および出
力光の伝達を行う光ファイバーと、前記光ファイバーの
もう一端が半透膜で覆われた反応相を有し、前記反応相
内に被検出物質と結合する抗体および蛍光プローブで標
識した被検出物質を含有した免疫センサー。 - 【請求項１３】光ファイバーの末端に備えられた反応相
が光ファイバー部と脱着が可能であることを特徴とする
請求項（11）又は（12）記載の免疫センサー。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1182918A JPH07113638B2 (ja) | 1989-07-14 | 1989-07-14 | 免疫測定方法および免疫センサー |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1182918A JPH07113638B2 (ja) | 1989-07-14 | 1989-07-14 | 免疫測定方法および免疫センサー |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0346564A JPH0346564A (ja) | 1991-02-27 |
| JPH07113638B2 true JPH07113638B2 (ja) | 1995-12-06 |
Family
ID=16126660
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1182918A Expired - Fee Related JPH07113638B2 (ja) | 1989-07-14 | 1989-07-14 | 免疫測定方法および免疫センサー |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07113638B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3107649B2 (ja) * | 1991-12-20 | 2000-11-13 | イビデン株式会社 | 蛍光免疫測定装置 |
| JP2706616B2 (ja) * | 1994-02-04 | 1998-01-28 | 株式会社バイオセンサー研究所 | 液体の光学的測定装置 |
-
1989
- 1989-07-14 JP JP1182918A patent/JPH07113638B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0346564A (ja) | 1991-02-27 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |