JP2956090B2 - オリゴ糖誘導体 - Google Patents
オリゴ糖誘導体Info
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- laminaripentaose
- laminari
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は新規なオリゴ糖誘導体を提供するものであ
り、さらに本発明はその様な化合物の製造法を提供する
ものである。
り、さらに本発明はその様な化合物の製造法を提供する
ものである。
（従来の技術） ラミナリオリゴ糖（β−1,3位で結合されたグルコー
スの特に２〜10個の重合度をもった糖化合物）は公知の
化合物で、製法、生理作用などが公知（特開昭61−6258
9号公報、特開昭62−163685号公報として）である。し
かし本発明の硫酸化したオリゴ糖誘導体はこれまで知ら
れていない新規糖化合物である。
スの特に２〜10個の重合度をもった糖化合物）は公知の
化合物で、製法、生理作用などが公知（特開昭61−6258
9号公報、特開昭62−163685号公報として）である。し
かし本発明の硫酸化したオリゴ糖誘導体はこれまで知ら
れていない新規糖化合物である。
（発明が解決しょうとする課題） 本発明は生理活性、特に抗ウイルス作用を有した新規
糖化合物であるオリゴ糖誘導体を提供するものである。
糖化合物であるオリゴ糖誘導体を提供するものである。
（課題を解決するための手段） 一般式（Ｉ）（式中のｎは０〜８の整数でありＲはＨ
またはSO3Mであり、Ｍはアルカリ金属またはNH4であ
る。）で表わされるオリゴ糖誘導体はラミナリオリゴ糖
を硫酸化剤により硫酸化して得られる。
またはSO3Mであり、Ｍはアルカリ金属またはNH4であ
る。）で表わされるオリゴ糖誘導体はラミナリオリゴ糖
を硫酸化剤により硫酸化して得られる。
（構成） ラミナリオリゴ糖とはグルコース（Ｇ）を構成糖と
し、各々β−1,3位で２〜10個程度結合した水溶性の糖
である。その具体例としては、ラミナリビオース
（G2）、ラミナリトリオース（G3）、ラミナリテトラオ
ース（G4）、ラミナリペンタオース（G5）、ラミナリヘ
キサオース（G6）、ラミナリヘプタオース（G7）、ラミ
ナリオクタオース（G8）、ラミナリノナオース（G9）、
ラミナリデカノース（G10）等である。ラミナリオリゴ
糖は、β−1,3グリコシル糖化合物を酵素的に加水分解
することにより重合度２以上のものが得られる。更にラ
ミナリペンタオースのみを酵素的に得る方法についても
本発明者らにより開示してきた（特開昭61−92589号公
報）。すなわち、その方法は、β−1,3グリコシル糖化
合物、例えばカードラン、パキマン、ラミナラン、酵母
細胞壁に、β−1,3グリカナーゼを作用させて重合度２
以上のラミナリオリゴ糖を得る方法であり、又ストレプ
トマイセス属より得られたβ−1,3グルカナーゼを用い
てラミナリオリゴ糖を得る方法である。
し、各々β−1,3位で２〜10個程度結合した水溶性の糖
である。その具体例としては、ラミナリビオース
（G2）、ラミナリトリオース（G3）、ラミナリテトラオ
ース（G4）、ラミナリペンタオース（G5）、ラミナリヘ
キサオース（G6）、ラミナリヘプタオース（G7）、ラミ
ナリオクタオース（G8）、ラミナリノナオース（G9）、
ラミナリデカノース（G10）等である。ラミナリオリゴ
糖は、β−1,3グリコシル糖化合物を酵素的に加水分解
することにより重合度２以上のものが得られる。更にラ
ミナリペンタオースのみを酵素的に得る方法についても
本発明者らにより開示してきた（特開昭61−92589号公
報）。すなわち、その方法は、β−1,3グリコシル糖化
合物、例えばカードラン、パキマン、ラミナラン、酵母
細胞壁に、β−1,3グリカナーゼを作用させて重合度２
以上のラミナリオリゴ糖を得る方法であり、又ストレプ
トマイセス属より得られたβ−1,3グルカナーゼを用い
てラミナリオリゴ糖を得る方法である。
又これらラミナリオリゴ糖を硫酸化する方法も従来の
技術を応用することにより調製できる（K.Hatanaka et
al.J.Med.C−hem.1987.Vol.30,No.5,810−814;特許公告
63−05482号及び公告63−054283号）。即ちそれらの方
法は、ジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解させた後ラ
ミナリオリゴ糖にピペリジン−Ｎ−硫酸を加え、加熱し
ながら反応させるものである。又これらの化合物の構造
を基本的に有する誘導体も従来技術や慣用技術を応用し
て調製することができる。
技術を応用することにより調製できる（K.Hatanaka et
al.J.Med.C−hem.1987.Vol.30,No.5,810−814;特許公告
63−05482号及び公告63−054283号）。即ちそれらの方
法は、ジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解させた後ラ
ミナリオリゴ糖にピペリジン−Ｎ−硫酸を加え、加熱し
ながら反応させるものである。又これらの化合物の構造
を基本的に有する誘導体も従来技術や慣用技術を応用し
て調製することができる。
（実施例） 以下実施例により本発明をより具体的に説明する。
実施例１ エンド型β−1,3グルカナーゼの調製 ストレプトマイセス・マテンシスDIC−108（微工研菌
寄第6593号）を酵母エキス0.2w/v％、ポリペプトン0.2w
/V％、MgSO4・7H2 0.1w/v％、K2HPO4 0.2w/v％からな
る培地35リットルに植菌し、同時に別殺菌したカードラ
ン350gを加えて70リットルジャーにて35℃で40時間通気
撹拌培養した。得られた培養液23リットルを遠心分離し
てその上澄液を硫安0.65飽和で塩析し、エンド型β−1,
3グルカナーゼ活性を有し粗酵素標品を得た。これを0.0
1M酢酸バッファー（pH5.0）にて溶解した（この時タン
パク濃度を5mg/ml以下に調製する）溶液を栓付三角フラ
スコに入れトルエン一滴を加えて、45℃のウオーターバ
ス中で一昼夜放置した。熱処理した酵素液中にはエシソ
型β−1,3グルカナーゼ活性はまったく見られず、エン
ド型β−1,3グルカナーゼが約25,000単位得られた。
寄第6593号）を酵母エキス0.2w/v％、ポリペプトン0.2w
/V％、MgSO4・7H2 0.1w/v％、K2HPO4 0.2w/v％からな
る培地35リットルに植菌し、同時に別殺菌したカードラ
ン350gを加えて70リットルジャーにて35℃で40時間通気
撹拌培養した。得られた培養液23リットルを遠心分離し
てその上澄液を硫安0.65飽和で塩析し、エンド型β−1,
3グルカナーゼ活性を有し粗酵素標品を得た。これを0.0
1M酢酸バッファー（pH5.0）にて溶解した（この時タン
パク濃度を5mg/ml以下に調製する）溶液を栓付三角フラ
スコに入れトルエン一滴を加えて、45℃のウオーターバ
ス中で一昼夜放置した。熱処理した酵素液中にはエシソ
型β−1,3グルカナーゼ活性はまったく見られず、エン
ド型β−1,3グルカナーゼが約25,000単位得られた。
尚ここで言うエンド型β−1,3グルカナーゼ活性の１
単位とは、0.01Mのリン酸バッファー（pH6.0）にカード
ラン１重量％を懸濁させそれに適量の酵素を加えて水で
5.0mlとし45℃で反応させる。この条件で１時間に1mgの
グルコースに相当する還元力を生成する酵素量をいう。
単位とは、0.01Mのリン酸バッファー（pH6.0）にカード
ラン１重量％を懸濁させそれに適量の酵素を加えて水で
5.0mlとし45℃で反応させる。この条件で１時間に1mgの
グルコースに相当する還元力を生成する酵素量をいう。
ラミナリオリゴ糖の調製 カードラン50gを0.01Mリン酸バッファー（pH6.0）1.0
リットルにて懸濁させ、実施例１ので得られたエンド
型β−1,3グルカナーゼ200単位を加えて45℃で２時間分
解反応を行った。分解反応後の組成物を高速液体クロマ
トグラフィー（HPLC）にて分析したところ、G213.7％、
G30.5％、G411.0％、G548.9％、G62.8％、G72.8％、そ
の他0.3％のラミナリオリゴ糖組成物から得られた。尚P
LCによるラミナリオリゴ糖の分離条件は カラム:Lichrosorb−NH2 5mμ 溶媒：アセトニトリル：水＝（60:40） 流速： 1.5ml/min 温度： 30℃ で行った。（第１図参照） この組成物を活性炭カラムに吸着させ、５％エタノー
ルで溶出するとグルコースとラミナリビオース（G2）は
溶出され、G3以上のラミナリオリゴ糖は50％エタノール
溶液で溶出して回収できる。
リットルにて懸濁させ、実施例１ので得られたエンド
型β−1,3グルカナーゼ200単位を加えて45℃で２時間分
解反応を行った。分解反応後の組成物を高速液体クロマ
トグラフィー（HPLC）にて分析したところ、G213.7％、
G30.5％、G411.0％、G548.9％、G62.8％、G72.8％、そ
の他0.3％のラミナリオリゴ糖組成物から得られた。尚P
LCによるラミナリオリゴ糖の分離条件は カラム:Lichrosorb−NH2 5mμ 溶媒：アセトニトリル：水＝（60:40） 流速： 1.5ml/min 温度： 30℃ で行った。（第１図参照） この組成物を活性炭カラムに吸着させ、５％エタノー
ルで溶出するとグルコースとラミナリビオース（G2）は
溶出され、G3以上のラミナリオリゴ糖は50％エタノール
溶液で溶出して回収できる。
実施例２ ラミナリペンタオースの調製 実施例１で用いたと同様の菌株を同条件で培養し、そ
の培養液を65％硫安飽和として沈澱を回収した。透析
後、0.01Mトリス−HCl緩衝液で平衡化したDEAE−セファ
デックスＡ−25カラムの未吸着区分を回収することによ
りβ−1,3−グルカナーゼFiIを得た。ついでカードラン
（ｎ＝550、和光純薬工業株式会社製）50gを１リットル
の0.01M酢酸バッファーに懸濁させ、該酵素液200単位を
添加後、45℃で24時間反応させた。反応液より未反応カ
ードランを過して取り除き、上清液は凍結乾燥を行っ
た。その結果34.5gの粗ラミナリペンタオースを得た。
粗ラミナリペンタオースをエタノールを用いて再結晶法
より精製を行い純度95％以上の精製ラミナリペンタオー
ス23.8gを得た。
の培養液を65％硫安飽和として沈澱を回収した。透析
後、0.01Mトリス−HCl緩衝液で平衡化したDEAE−セファ
デックスＡ−25カラムの未吸着区分を回収することによ
りβ−1,3−グルカナーゼFiIを得た。ついでカードラン
（ｎ＝550、和光純薬工業株式会社製）50gを１リットル
の0.01M酢酸バッファーに懸濁させ、該酵素液200単位を
添加後、45℃で24時間反応させた。反応液より未反応カ
ードランを過して取り除き、上清液は凍結乾燥を行っ
た。その結果34.5gの粗ラミナリペンタオースを得た。
粗ラミナリペンタオースをエタノールを用いて再結晶法
より精製を行い純度95％以上の精製ラミナリペンタオー
ス23.8gを得た。
実施例３ 硫酸化ラミナリペンタオース（DS＝2.3の製
造 実施例２で調製したラミナリペンタオース（以下LPと
略す）0.5gをあらかじめ乾燥させたジメチルスルホキシ
ド（以後DMSOと略す）（20ml）に溶解し、ピペリジン−
Ｎ−硫酸（以後PSAと略す）（2.32g）を加え撹拌し10％
過剰の2.5N水酸化ナトリウム水溶液で中和し、濃縮す
る。メタノールを加えて沈澱したオリゴ糖を水に溶解し
て、イオン交換樹脂による生成、濃縮、凍結乾燥して硫
酸化ラミナリペンタオール（LPS−１）0.81gを得た。こ
のLPS−１の物性値は次に示す通りである。
造 実施例２で調製したラミナリペンタオース（以下LPと
略す）0.5gをあらかじめ乾燥させたジメチルスルホキシ
ド（以後DMSOと略す）（20ml）に溶解し、ピペリジン−
Ｎ−硫酸（以後PSAと略す）（2.32g）を加え撹拌し10％
過剰の2.5N水酸化ナトリウム水溶液で中和し、濃縮す
る。メタノールを加えて沈澱したオリゴ糖を水に溶解し
て、イオン交換樹脂による生成、濃縮、凍結乾燥して硫
酸化ラミナリペンタオール（LPS−１）0.81gを得た。こ
のLPS−１の物性値は次に示す通りである。
［α］＝＋3.1゜（Cl,H2O） Ｃ＝16.32％ Ｈ＝ 2.65％ Ｓ＝16.6％
第１図はエンド型β−1,3グルカナーゼで得られたラミ
ナリオリゴ糖のHPLCチャートである。第２図はβ−１、
３グルカナーゼFiIによりカードランを分解して得られ
たラミナリペンタオースのHPLCチャートであり、数字は
各々1.ラミナリトリオース 2.ラミナリラトラオース
3.ラミナリペンタオース 4.ラミナリヘキサオース 5.
ラミナリペプタオース 6.ラミナリオクタオースを示す
第３図はラミナリペンタオースの２次元NMRのチャート
を示す。第４図の上図は硫酸化ラミナリペンタオースの
13C−NMRのチャートであり下図のラミナリペンタオース
の13C−NMRのチャートと比較した。
ナリオリゴ糖のHPLCチャートである。第２図はβ−１、
３グルカナーゼFiIによりカードランを分解して得られ
たラミナリペンタオースのHPLCチャートであり、数字は
各々1.ラミナリトリオース 2.ラミナリラトラオース
3.ラミナリペンタオース 4.ラミナリヘキサオース 5.
ラミナリペプタオース 6.ラミナリオクタオースを示す
第３図はラミナリペンタオースの２次元NMRのチャート
を示す。第４図の上図は硫酸化ラミナリペンタオースの
13C−NMRのチャートであり下図のラミナリペンタオース
の13C−NMRのチャートと比較した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/715 ６１８ Ａ６１Ｋ 31/715 ６１８ (56)参考文献 特開 昭63−45223（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−92589（ＪＰ，Ａ) 国際公開89／3684（ＷＯ，Ａ１) Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃ ｈ，Ｖｏｌ．９（1988）Ｐ．335−343 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07H 11/00 ＣＡｐｌｕｓ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】一般式 （式中のｎは０〜８の整数であり、ＲはＨまたはSO3Mで
あり、その少なくとも１つはSO3Mであり、Ｍはアルカリ
金属またはNH4である。） で表されるオリゴ糖誘導体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28278389A JP2956090B2 (ja) | 1989-10-30 | 1989-10-30 | オリゴ糖誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28278389A JP2956090B2 (ja) | 1989-10-30 | 1989-10-30 | オリゴ糖誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03145496A JPH03145496A (ja) | 1991-06-20 |
| JP2956090B2 true JP2956090B2 (ja) | 1999-10-04 |
Family
ID=17657025
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28278389A Expired - Fee Related JP2956090B2 (ja) | 1989-10-30 | 1989-10-30 | オリゴ糖誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2956090B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992003453A1 (fr) * | 1990-08-23 | 1992-03-05 | Dainippon Ink & Chemicals, Inc. | Agent antiviral |
| AU700451B2 (en) * | 1993-10-07 | 1999-01-07 | Glycomed Incorporated | Highly sulfated maltooligosaccharides with heparin-like properties |
| AUPN261895A0 (en) * | 1995-04-28 | 1995-05-18 | Australian National University, The | Preparation and use of sulfated oligosaccharides |
-
1989
- 1989-10-30 JP JP28278389A patent/JP2956090B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．９（１９８８）Ｐ．３３５−３４３ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH03145496A (ja) | 1991-06-20 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |