JP2913010B2 - 有機溶媒可溶化リパーゼを用いる糖質−脂肪酸複合体の製造方法 - Google Patents
有機溶媒可溶化リパーゼを用いる糖質−脂肪酸複合体の製造方法Info
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- JP2913010B2 JP2913010B2 JP7077164A JP7716495A JP2913010B2 JP 2913010 B2 JP2913010 B2 JP 2913010B2 JP 7077164 A JP7077164 A JP 7077164A JP 7716495 A JP7716495 A JP 7716495A JP 2913010 B2 JP2913010 B2 JP 2913010B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、有機溶媒可溶化リパー
ゼを用いる糖質−脂肪酸複合体の製造方法に関し、詳し
くは界面活性剤により有機溶媒に可溶性としたリパーゼ
を、有機溶媒中で糖質と脂肪酸及び／又は油脂の混合物
に作用させることにより糖質−脂肪酸複合体を生成させ
る該糖質−脂肪酸複合体の製造方法に関する。
ゼを用いる糖質−脂肪酸複合体の製造方法に関し、詳し
くは界面活性剤により有機溶媒に可溶性としたリパーゼ
を、有機溶媒中で糖質と脂肪酸及び／又は油脂の混合物
に作用させることにより糖質−脂肪酸複合体を生成させ
る該糖質−脂肪酸複合体の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来の
糖質−脂肪酸複合体の製造法としては、化学合成法が主
として用いられており、例えばグリセリン脂肪酸エステ
ル，シュガーエステル，ソルビタン脂肪酸エステル，プ
ロピレングリコール脂肪酸エステルなどがあるが、何れ
も化学合成品であることから、食品素材として利用する
場合に不利であった。
糖質−脂肪酸複合体の製造法としては、化学合成法が主
として用いられており、例えばグリセリン脂肪酸エステ
ル，シュガーエステル，ソルビタン脂肪酸エステル，プ
ロピレングリコール脂肪酸エステルなどがあるが、何れ
も化学合成品であることから、食品素材として利用する
場合に不利であった。
【０００３】最近、欧州のある企業がリパーゼを用いて
グルコース−脂肪酸エステルを生産したことが報告され
ている（Bjorkling, F., Godtfredsen, S.E., and Kir
k, O.(1991)Tibtech 9, 360-363)が、この方法は基質と
してエチルグルコシドを用い、Molten acid を溶媒とし
ているので、食品素材としての利用には不利であると考
えられる。
グルコース−脂肪酸エステルを生産したことが報告され
ている（Bjorkling, F., Godtfredsen, S.E., and Kir
k, O.(1991)Tibtech 9, 360-363)が、この方法は基質と
してエチルグルコシドを用い、Molten acid を溶媒とし
ているので、食品素材としての利用には不利であると考
えられる。
【０００４】そこで、本発明者らは、上記の課題を解決
すべく検討を重ね、水に不溶性で有機溶媒に溶け、有機
溶媒中でも活性を保持しているリパーゼの調製方法を既
に確立した。この方法で得られる有機溶媒可溶化リパー
ゼを用いることにより、どのような糖質と脂肪酸及び／
又は油脂からも糖質−脂肪酸複合体が得られることを見
出し、本発明を完成した。
すべく検討を重ね、水に不溶性で有機溶媒に溶け、有機
溶媒中でも活性を保持しているリパーゼの調製方法を既
に確立した。この方法で得られる有機溶媒可溶化リパー
ゼを用いることにより、どのような糖質と脂肪酸及び／
又は油脂からも糖質−脂肪酸複合体が得られることを見
出し、本発明を完成した。
【０００５】
【課題を解決するための手段】すなわち、請求項１記載
の本発明は、界面活性剤で処理して有機溶媒に可溶性と
したリパーゼを、有機溶媒中で糖質と脂肪酸及び／又は
油脂の混合物に作用させることを特徴とする糖質−脂肪
酸複合体の製造方法である。
の本発明は、界面活性剤で処理して有機溶媒に可溶性と
したリパーゼを、有機溶媒中で糖質と脂肪酸及び／又は
油脂の混合物に作用させることを特徴とする糖質−脂肪
酸複合体の製造方法である。
【０００６】有機溶媒可溶化リパーゼの調製には、界面
活性剤のうち、特にジドデシルグルコシルグルタメイト
を用いるが、本原料の成分は糖，高級アルコール及びア
ミノ酸であり、安価で大量に供給することが可能であ
る。
活性剤のうち、特にジドデシルグルコシルグルタメイト
を用いるが、本原料の成分は糖，高級アルコール及びア
ミノ酸であり、安価で大量に供給することが可能であ
る。
【０００７】この界面活性剤を用いて、リパーゼをテト
ラヒドロフランを含む水溶液中で処理することによっ
て、水に不溶性のリパーゼ複合体を調製することができ
る。その１例を次に示す。界面活性剤としてジドデシル
グルコシルグルタメイトを用い、市販のリパーゼ（商品
名：リパーゼＰ、天野製薬製）の粉末１００ｍｇを含む
水溶液２ｍＬと、界面活性剤４００ｍｇを含むテトラヒ
ドロフラン溶液４ｍＬを混合し、４℃で１６時間激しく
撹拌し、その後、溶液をエバポレーターで除去し、得ら
れた沈澱に水を加えて２回洗浄して、未反応のタンパク
質を除去し、一晩沈澱を凍結乾燥した。得られた界面活
性剤−リパーゼ複合体粉末における活性の回収率は５
１．２％であったが、界面活性剤の添加量を増加させる
ことにより、さらに回収率を高めることができる。該複
合体は、４℃で１カ月以上保存しても失活せず、また有
機溶媒中では極めて安定で２週間以上でも失活しない。
ラヒドロフランを含む水溶液中で処理することによっ
て、水に不溶性のリパーゼ複合体を調製することができ
る。その１例を次に示す。界面活性剤としてジドデシル
グルコシルグルタメイトを用い、市販のリパーゼ（商品
名：リパーゼＰ、天野製薬製）の粉末１００ｍｇを含む
水溶液２ｍＬと、界面活性剤４００ｍｇを含むテトラヒ
ドロフラン溶液４ｍＬを混合し、４℃で１６時間激しく
撹拌し、その後、溶液をエバポレーターで除去し、得ら
れた沈澱に水を加えて２回洗浄して、未反応のタンパク
質を除去し、一晩沈澱を凍結乾燥した。得られた界面活
性剤−リパーゼ複合体粉末における活性の回収率は５
１．２％であったが、界面活性剤の添加量を増加させる
ことにより、さらに回収率を高めることができる。該複
合体は、４℃で１カ月以上保存しても失活せず、また有
機溶媒中では極めて安定で２週間以上でも失活しない。
【０００８】市販のリパーゼにはこの他、各種の製品が
あり、また界面活性剤にも各種のものがあるが、これら
を組み合わせて生産される有機溶媒可溶化リパーゼは勿
論のこと、同様にして得られる有機溶媒可溶化エステラ
ーゼも本発明に適用できる。さらに、サイクロデキスト
リン合成酵素，α−アミラーゼ，グルコアミラーゼなど
糖質関連酵素も、上記のようにして有機溶媒可溶化酵素
とすることができ、これを用いて、本発明を適用して有
機溶媒中で、糖質間、糖質−アルコール間などで縮合、
合成反応させて各種の糖質や複合糖質等を生産できる。
あり、また界面活性剤にも各種のものがあるが、これら
を組み合わせて生産される有機溶媒可溶化リパーゼは勿
論のこと、同様にして得られる有機溶媒可溶化エステラ
ーゼも本発明に適用できる。さらに、サイクロデキスト
リン合成酵素，α−アミラーゼ，グルコアミラーゼなど
糖質関連酵素も、上記のようにして有機溶媒可溶化酵素
とすることができ、これを用いて、本発明を適用して有
機溶媒中で、糖質間、糖質−アルコール間などで縮合、
合成反応させて各種の糖質や複合糖質等を生産できる。
【０００９】リパーゼの活性は、基質として４−メチル
ウンベリフェリルオレイトを用い、蛍光を測定して行っ
た。その結果、リパーゼの活性は１２．１ nmol mg-1 m
in-1であった。
ウンベリフェリルオレイトを用い、蛍光を測定して行っ
た。その結果、リパーゼの活性は１２．１ nmol mg-1 m
in-1であった。
【００１０】有機溶媒可溶化リパーゼを用いる糖質−脂
肪酸複合体の実際の合成は以下のようにして行った。 反応液組成： グルコース １ｍｇ パルミチン酸 １．４ｍｇ 有機溶媒可溶化リパーゼ １０ｍｇ （蛋白質含量１．２ｍｇ） 全体を１ｍｌのヘキサンに加えて懸濁液とし、３７℃で
振盪しながら反応を行い、反応液を経時的に２０μＬ採
取し、エバポレーターで蒸発乾固、１００μＬのＨＰＬ
Ｃ用溶媒を加えて溶解し、フィルター（DISMIC-3JP
０．５μｍ）で濾過し、濾液２０μＬをＨＰＬＣで分析
し、成分を定量した。
肪酸複合体の実際の合成は以下のようにして行った。 反応液組成： グルコース １ｍｇ パルミチン酸 １．４ｍｇ 有機溶媒可溶化リパーゼ １０ｍｇ （蛋白質含量１．２ｍｇ） 全体を１ｍｌのヘキサンに加えて懸濁液とし、３７℃で
振盪しながら反応を行い、反応液を経時的に２０μＬ採
取し、エバポレーターで蒸発乾固、１００μＬのＨＰＬ
Ｃ用溶媒を加えて溶解し、フィルター（DISMIC-3JP
０．５μｍ）で濾過し、濾液２０μＬをＨＰＬＣで分析
し、成分を定量した。
【００１１】ＨＰＬＣ条件は、カラム：Waters Bondapa
k-C18 、検出装置：東京理化 EYELAPLC-5D （UV210nm
で検出）、溶出：室温、溶媒：アセトニトリル／水＝９
３／７、流速：１ｍＬ／ｍｉｎであり、本条件下で、パ
ルミチン酸の保持時間は９．４分、グルコース−パルミ
テートは１２．１分であり、ピーク面積より生成率を計
算した。本条件では、図１に示したように、１２時間程
度で反応はほぼプラトーに達し、９０％以上の収率であ
った。なお、図１中の●は有機溶媒可溶化リパーゼを用
いた場合、■は通常のリパーゼ（無処理）を用いた場合
を示している。図２は各種リパーゼを用いた場合の反応
生成物をＨＰＬＣで分析した結果を示し、図２（Ｂ）は
有機溶媒可溶化リパーゼを用いて２４時間反応を行った
場合のＨＰＬＣによる成分分析例を示したものである。
反応時間を延長すると、３の成分が増大してくる。ま
た、図２（Ａ）は通常のリパーゼ（無処理）を用いて同
様に反応させた場合の溶出パターンを示したものであ
る。図２中の各ピークの記号は、Ｓがソルベント、Ｃが
有機溶媒可溶化リパーゼ、１がパルミチン酸、２が複合
体（グルコース−パルミテート）、３がグルコース−ジ
パルミテートである。
k-C18 、検出装置：東京理化 EYELAPLC-5D （UV210nm
で検出）、溶出：室温、溶媒：アセトニトリル／水＝９
３／７、流速：１ｍＬ／ｍｉｎであり、本条件下で、パ
ルミチン酸の保持時間は９．４分、グルコース−パルミ
テートは１２．１分であり、ピーク面積より生成率を計
算した。本条件では、図１に示したように、１２時間程
度で反応はほぼプラトーに達し、９０％以上の収率であ
った。なお、図１中の●は有機溶媒可溶化リパーゼを用
いた場合、■は通常のリパーゼ（無処理）を用いた場合
を示している。図２は各種リパーゼを用いた場合の反応
生成物をＨＰＬＣで分析した結果を示し、図２（Ｂ）は
有機溶媒可溶化リパーゼを用いて２４時間反応を行った
場合のＨＰＬＣによる成分分析例を示したものである。
反応時間を延長すると、３の成分が増大してくる。ま
た、図２（Ａ）は通常のリパーゼ（無処理）を用いて同
様に反応させた場合の溶出パターンを示したものであ
る。図２中の各ピークの記号は、Ｓがソルベント、Ｃが
有機溶媒可溶化リパーゼ、１がパルミチン酸、２が複合
体（グルコース−パルミテート）、３がグルコース−ジ
パルミテートである。
【００１２】糖質としては、グルコースの他に、アラビ
ノース，キシロース，フルクトース，ガラクトース，マ
ンノースなどの単糖、マルトース，ショ糖，マルトトリ
オース，パノース，ラクトスクロース，テアンダロース
など各種のオリゴ糖、澱粉，デキストラン，イヌリン，
寒天，グルコマンナンなど各種の多糖がある。また、本
発明では糖質として、グリセリン，エリスリトール，キ
シリトール，ソルビトールなどの糖アルコールも含め
る。また、サイクロデキストリンとしては、α−，β
−，γ−サイクロデキストリン，大環状サイクロデキス
トリンの他、これらに置換基が導入された分岐サイクロ
デキストリンも用いられる。
ノース，キシロース，フルクトース，ガラクトース，マ
ンノースなどの単糖、マルトース，ショ糖，マルトトリ
オース，パノース，ラクトスクロース，テアンダロース
など各種のオリゴ糖、澱粉，デキストラン，イヌリン，
寒天，グルコマンナンなど各種の多糖がある。また、本
発明では糖質として、グリセリン，エリスリトール，キ
シリトール，ソルビトールなどの糖アルコールも含め
る。また、サイクロデキストリンとしては、α−，β
−，γ−サイクロデキストリン，大環状サイクロデキス
トリンの他、これらに置換基が導入された分岐サイクロ
デキストリンも用いられる。
【００１３】次に、脂肪酸としては各種のものがあり、
例えばカプロン酸，カプリル酸，カプリン酸，ラウリン
酸，ミリスチン酸，パルミチン酸，ステアリン酸などの
飽和脂肪酸、オレイン酸，リノール酸，リノレン酸，Ｄ
ＨＡ，ＥＰＡなどの不飽和脂肪酸などがある。これら脂
肪酸の他に、油脂を用いることができ、大豆油，なたね
油，ヒマワリ油，ベニハナ油，コーン油などの植物油や
魚油，鯨油などの動物油が利用できる。この他、例えば
酢酸，クエン酸等の有機酸などのカルボキシル基をもつ
ものであれば、何れでも本発明の方法を適用できる可能
性がある。
例えばカプロン酸，カプリル酸，カプリン酸，ラウリン
酸，ミリスチン酸，パルミチン酸，ステアリン酸などの
飽和脂肪酸、オレイン酸，リノール酸，リノレン酸，Ｄ
ＨＡ，ＥＰＡなどの不飽和脂肪酸などがある。これら脂
肪酸の他に、油脂を用いることができ、大豆油，なたね
油，ヒマワリ油，ベニハナ油，コーン油などの植物油や
魚油，鯨油などの動物油が利用できる。この他、例えば
酢酸，クエン酸等の有機酸などのカルボキシル基をもつ
ものであれば、何れでも本発明の方法を適用できる可能
性がある。
【００１４】本発明によれば、有機溶媒中で前記有機溶
媒可溶化リパーゼをこれらに作用させることによって、
グルコース−パルミテート、マルトース−パルミテー
ト、スクロース−パルミテート、グルコース−ＤＨＡな
ど各種の複合体が生産でき、特に糖質と不飽和脂肪酸と
の複合体は安定性に優れたものになる。
媒可溶化リパーゼをこれらに作用させることによって、
グルコース−パルミテート、マルトース−パルミテー
ト、スクロース−パルミテート、グルコース−ＤＨＡな
ど各種の複合体が生産でき、特に糖質と不飽和脂肪酸と
の複合体は安定性に優れたものになる。
【００１５】エリスリトールの場合、脂肪酸はＣ１位に
結合したものが主として生成し、ソルビトールでもＣ１
またはＣ６位に結合した複合体が主として生成する。
結合したものが主として生成し、ソルビトールでもＣ１
またはＣ６位に結合した複合体が主として生成する。
【００１６】また、グルコースのポリマーを基質とした
場合、マルトース，マルトトリオースまでは、９０％以
上の収率でＣ６位に脂肪酸が１分子当たり１分子結合し
た複合体が得られるが、反応条件を強化すると、僅かな
がら糖質１分子に２分子以上の脂肪酸が結合した成分も
認められた。マルトテトラオースからマルトヘプタオー
スのように糖基質の重合度が増すに従い、糖質１分子に
２分子以上の脂肪酸が結合した複合体の生成量は増加す
る。
場合、マルトース，マルトトリオースまでは、９０％以
上の収率でＣ６位に脂肪酸が１分子当たり１分子結合し
た複合体が得られるが、反応条件を強化すると、僅かな
がら糖質１分子に２分子以上の脂肪酸が結合した成分も
認められた。マルトテトラオースからマルトヘプタオー
スのように糖基質の重合度が増すに従い、糖質１分子に
２分子以上の脂肪酸が結合した複合体の生成量は増加す
る。
【００１７】単糖又はオリゴ糖と脂肪酸との複合体は、
反応終了後、清澄な有機溶媒部分を取り出し、温水また
は熱水抽出すれば得られる。また、未反応油脂との分離
は、極性の異なる溶媒系で分別することにより行うこと
が可能である。
反応終了後、清澄な有機溶媒部分を取り出し、温水また
は熱水抽出すれば得られる。また、未反応油脂との分離
は、極性の異なる溶媒系で分別することにより行うこと
が可能である。
【００１８】澱粉粒のような多糖でも、同様に反応させ
て、ヘキサンで数回洗浄した後、乾燥して脂肪酸結合多
糖を調製することができる。結合した脂肪酸量を合成条
件の１００倍希釈で元のリパーゼＰ（商品名）を反応さ
せ、遊離した脂肪酸をＨＰＬＣで定量して求めた結果、
結合量は５％程度であるが、澱粉の物性変化が期待でき
る。
て、ヘキサンで数回洗浄した後、乾燥して脂肪酸結合多
糖を調製することができる。結合した脂肪酸量を合成条
件の１００倍希釈で元のリパーゼＰ（商品名）を反応さ
せ、遊離した脂肪酸をＨＰＬＣで定量して求めた結果、
結合量は５％程度であるが、澱粉の物性変化が期待でき
る。
【００１９】工業的な製造法の場合には、基質濃度をさ
らに高め、有機溶媒可溶化リパーゼを固定化して用いる
方法が望ましい。
らに高め、有機溶媒可溶化リパーゼを固定化して用いる
方法が望ましい。
【００２０】また、基質の混合比は通常は１：１分子に
なるように調整すればよいが、脂肪酸又は油脂は有機溶
媒中に溶解するので、大過剰に加えれば、糖質に対する
収率は効果的に増大する。生成する複合体が有機溶媒に
溶解し難い場合は、反応生成物を取り出して、糖質を加
える連続的生産が可能となる。
なるように調整すればよいが、脂肪酸又は油脂は有機溶
媒中に溶解するので、大過剰に加えれば、糖質に対する
収率は効果的に増大する。生成する複合体が有機溶媒に
溶解し難い場合は、反応生成物を取り出して、糖質を加
える連続的生産が可能となる。
【００２１】通常の反応では複合体主成分が９０％以上
を占めるので、精製は容易である。しかし、実用的には
未反応油脂との混合物の状態でも利用できる。また、精
製品は食品以外、例えば医薬，化粧品，化学工業分野等
でも目的に応じて利用できる可能性がある。
を占めるので、精製は容易である。しかし、実用的には
未反応油脂との混合物の状態でも利用できる。また、精
製品は食品以外、例えば医薬，化粧品，化学工業分野等
でも目的に応じて利用できる可能性がある。
【００２２】本発明に用いる有機溶媒としては、通常ヘ
キサンが使用されるが、本発明で用いるリパーゼが溶解
するものであれば種類を限定せずに各種の有機溶媒を用
いることができる。水と混合しない溶媒系であれば、生
成物は水と振盪して水層に移すことができるので便利で
あり、酵素を含む溶媒系は繰り返し利用することができ
る。本発明ではヘキサンの他にクロロホルム，ベンゼ
ン，石油エーテル，ヘプタン，オクタン，イソオクタ
ン，酢酸エチル，アセトンなどの有機溶媒の使用も可能
であり、これらの中から２種以上の溶媒を混合して用い
ることもできる。
キサンが使用されるが、本発明で用いるリパーゼが溶解
するものであれば種類を限定せずに各種の有機溶媒を用
いることができる。水と混合しない溶媒系であれば、生
成物は水と振盪して水層に移すことができるので便利で
あり、酵素を含む溶媒系は繰り返し利用することができ
る。本発明ではヘキサンの他にクロロホルム，ベンゼ
ン，石油エーテル，ヘプタン，オクタン，イソオクタ
ン，酢酸エチル，アセトンなどの有機溶媒の使用も可能
であり、これらの中から２種以上の溶媒を混合して用い
ることもできる。
【００２３】
【実施例】次に、本発明を実施例により説明する。な
お、実施例での収率は加えた脂肪酸から換算した値であ
り、脂肪酸又は油脂を大過剰量加えた場合は、何れの場
合でも加えた糖質を１００とした時の、糖質−脂肪酸複
合体生成率は９０％以上となった。有機溶媒可溶化リパ
ーゼは、前記した方法で調製したものを使用した。 実施例１ グルコース（１ｍｇ）、パルミチン酸（１．４ｍｇ）、
有機溶媒可溶化リパーゼ（１０ｍｇ、蛋白質含量１．２
ｍｇ）を１ｍＬのオクタンに混合し、３７℃で１７時
間、振盪反応した後、室温で減圧乾固し、アセトニトリ
ル／水＝９３／７を５ｍＬ加えて溶解し、濾過した後、
ＨＰＬＣで分析した結果、９２％の収率でグルコース−
パルミテートが得られた。
お、実施例での収率は加えた脂肪酸から換算した値であ
り、脂肪酸又は油脂を大過剰量加えた場合は、何れの場
合でも加えた糖質を１００とした時の、糖質−脂肪酸複
合体生成率は９０％以上となった。有機溶媒可溶化リパ
ーゼは、前記した方法で調製したものを使用した。 実施例１ グルコース（１ｍｇ）、パルミチン酸（１．４ｍｇ）、
有機溶媒可溶化リパーゼ（１０ｍｇ、蛋白質含量１．２
ｍｇ）を１ｍＬのオクタンに混合し、３７℃で１７時
間、振盪反応した後、室温で減圧乾固し、アセトニトリ
ル／水＝９３／７を５ｍＬ加えて溶解し、濾過した後、
ＨＰＬＣで分析した結果、９２％の収率でグルコース−
パルミテートが得られた。
【００２４】実施例２ オクタンの代わりに石油エーテルを用いた以外は実施例
１と同様にして９０％の収率でグルコース−パルミテー
トが得られた。
１と同様にして９０％の収率でグルコース−パルミテー
トが得られた。
【００２５】実施例３ オクタンの代わりにヘキサン、グルコースの代わりにガ
ラクトースを用いた以外は実施例１と同様にして９１％
の収率でガラクトース−パルミテートが得られた。
ラクトースを用いた以外は実施例１と同様にして９１％
の収率でガラクトース−パルミテートが得られた。
【００２６】実施例４ ガラクトースの代わりにソルビトール、パルミチン酸の
代わりにステアリン酸を用いた以外は実施例３と同様に
して８４％の収率でソルビトール−ステアレートが得ら
れた。
代わりにステアリン酸を用いた以外は実施例３と同様に
して８４％の収率でソルビトール−ステアレートが得ら
れた。
【００２７】実施例５ マルトース（２ｍｇ）とヘキサンを用いた以外は実施例
１と同様にして８７％の収率でマルトース−パルミテー
トが得られた。なお、本生成物を０．０１％の濃度に水
に溶かし、未処理リパーゼに作用させると、マルトース
とパルミチン酸がモル等量生成することから、１：１に
結合した複合体であり、ＮＭＲ分析から１，６結合した
糖質アセテートであることが認められた。
１と同様にして８７％の収率でマルトース−パルミテー
トが得られた。なお、本生成物を０．０１％の濃度に水
に溶かし、未処理リパーゼに作用させると、マルトース
とパルミチン酸がモル等量生成することから、１：１に
結合した複合体であり、ＮＭＲ分析から１，６結合した
糖質アセテートであることが認められた。
【００２８】実施例６ ショ糖を用いた以外は実施例５と同様にして９１％の収
率でショ糖−パルミテートが得られた。
率でショ糖−パルミテートが得られた。
【００２９】実施例７ マルトテトラオース（４ｍｇ）を用いた以外は実施例５
と同様にしてマルトテトラオース−パルミテートを９８
％の収率で得た。
と同様にしてマルトテトラオース−パルミテートを９８
％の収率で得た。
【００３０】実施例８ マルトヘキサオース（６ｍｇ）を用いた以外は実施例５
と同様にしてマルトヘキサオース−パルミテートを９７
％の収率で得た。なお、ジパルミテート，トリパルミテ
ートなどを得るには、糖質分子に対して２倍、３倍等の
脂肪酸成分を加え、反応を強化すればよい。
と同様にしてマルトヘキサオース−パルミテートを９７
％の収率で得た。なお、ジパルミテート，トリパルミテ
ートなどを得るには、糖質分子に対して２倍、３倍等の
脂肪酸成分を加え、反応を強化すればよい。
【００３１】実施例９ α−ＣＤ（５ｍｇ）、ＤＨＡ（１．７ｍｇ）、有機溶媒
可溶化リパーゼ（１０ｍｇ、蛋白質含量１．２ｍｇ）を
１ｍＬのヘキサンに混合し、３７℃で２４時間、振盪反
応した後、室温で減圧乾固し、アセトニトリル／水＝９
３／７を５ｍｌ加えて溶解し、濾過した後、ＨＰＬＣで
分析した結果、６４％の収率でＣＤ−ＤＨＡ複合体が得
られた。なお、β−、γ−ＣＤを各々６ｍｇ、７ｍｇを
加えた場合でも６０％程度の収率であった。
可溶化リパーゼ（１０ｍｇ、蛋白質含量１．２ｍｇ）を
１ｍＬのヘキサンに混合し、３７℃で２４時間、振盪反
応した後、室温で減圧乾固し、アセトニトリル／水＝９
３／７を５ｍｌ加えて溶解し、濾過した後、ＨＰＬＣで
分析した結果、６４％の収率でＣＤ−ＤＨＡ複合体が得
られた。なお、β−、γ−ＣＤを各々６ｍｇ、７ｍｇを
加えた場合でも６０％程度の収率であった。
【００３２】実施例１０ α−ＣＤの代わりにグルコシル−α−ＣＤ（４．５ｍ
ｇ）、ＤＨＡの代わりにパルミチン酸（１ｍｇ）を用い
た以外は実施例９と同様にして９６％の収率でグルコシ
ル−α−ＣＤ−パルミテートを得た。ＮＭＲによる分析
結果ではグルコースの枝部分のＣ６位にパルミチン酸が
結合した構造の複合体が主成分であった。分岐ＣＤとし
てグルコシル−、マルトシル−β−ＣＤ、γ−ＣＤでも
同様の結果が得られた。
ｇ）、ＤＨＡの代わりにパルミチン酸（１ｍｇ）を用い
た以外は実施例９と同様にして９６％の収率でグルコシ
ル−α−ＣＤ−パルミテートを得た。ＮＭＲによる分析
結果ではグルコースの枝部分のＣ６位にパルミチン酸が
結合した構造の複合体が主成分であった。分岐ＣＤとし
てグルコシル−、マルトシル−β−ＣＤ、γ−ＣＤでも
同様の結果が得られた。
【００３３】実施例１１ グルコースの代わりにトウモロコシ澱粉（２０ｍｇ）、
オクタンの代わりにヘキサンを用いた以外は実施例１と
同様にして澱粉−パルミチン酸複合体を２％の収率で得
た。なお、収率は本実施例で得られた複合体を水に懸濁
し、未処理リパーゼを反応させ、遊離した脂肪酸の量と
未反応の脂肪酸量から計算して求めた。
オクタンの代わりにヘキサンを用いた以外は実施例１と
同様にして澱粉−パルミチン酸複合体を２％の収率で得
た。なお、収率は本実施例で得られた複合体を水に懸濁
し、未処理リパーゼを反応させ、遊離した脂肪酸の量と
未反応の脂肪酸量から計算して求めた。
【００３４】実施例１２ トウモロコシ澱粉の代わりに市販「アビセル」セルロー
ス（２０ｍｇ）を用いた以外は実施例１１と同様にして
セルロース−パルミチン酸複合体を５％の収率で得た。
ス（２０ｍｇ）を用いた以外は実施例１１と同様にして
セルロース−パルミチン酸複合体を５％の収率で得た。
【００３５】実施例１３ ショ糖（２ｍｇ）と大豆油（１．６ｍｇ）及び有機溶媒
可溶化リパーゼ（１０ｍｇ、蛋白質含量１．２ｍｇ）を
１ｍｌのヘキサンに混合し、３７℃で２４時間振盪反応
した後、室温で減圧乾固し、アセトニトリル／水＝９３
／７を５ｍｌ加えて溶解し、濾過した後、ＨＰＬＣで分
析した結果、各種ショ糖−脂肪酸複合体が得られ、複合
体の構成比はパルミチン酸を含むもの９％、ステアリン
酸を含むもの３％、オレイン酸を含むもの２１％、リノ
ール酸を含むもの５６％、リノレン酸を含むもの８％で
あった。なお、構成比は大豆油を未処理リパーゼに作用
させて分解して得られる遊離脂肪酸の全体量を１００と
した時の各脂肪酸複合体に含まれる量比（％）で表し
た。
可溶化リパーゼ（１０ｍｇ、蛋白質含量１．２ｍｇ）を
１ｍｌのヘキサンに混合し、３７℃で２４時間振盪反応
した後、室温で減圧乾固し、アセトニトリル／水＝９３
／７を５ｍｌ加えて溶解し、濾過した後、ＨＰＬＣで分
析した結果、各種ショ糖−脂肪酸複合体が得られ、複合
体の構成比はパルミチン酸を含むもの９％、ステアリン
酸を含むもの３％、オレイン酸を含むもの２１％、リノ
ール酸を含むもの５６％、リノレン酸を含むもの８％で
あった。なお、構成比は大豆油を未処理リパーゼに作用
させて分解して得られる遊離脂肪酸の全体量を１００と
した時の各脂肪酸複合体に含まれる量比（％）で表し
た。
【００３６】実施例１４ 大豆油の代わりになたね油（１．６ｍｇ）を用いた以外
は実施例１３と同様にして構成比でパルミチン酸４％、
ステアリン酸１％、オレイン酸５５％、リノール酸２２
％、リノレン酸１１％を含む組成の複合体が得られた。
は実施例１３と同様にして構成比でパルミチン酸４％、
ステアリン酸１％、オレイン酸５５％、リノール酸２２
％、リノレン酸１１％を含む組成の複合体が得られた。
【００３７】実施例１５ 大豆油の代わりに市販魚油を用いた以外は実施例１３と
同様にしてミリスチン酸７％、パルミチン酸１９％、ヘ
キサデセン酸９％、オレイン酸１５％、エイコサペンタ
エン酸２０％、ドコサペンタエン酸とドコサヘキサエン
酸１４％を含む組成の複合体が得られた。
同様にしてミリスチン酸７％、パルミチン酸１９％、ヘ
キサデセン酸９％、オレイン酸１５％、エイコサペンタ
エン酸２０％、ドコサペンタエン酸とドコサヘキサエン
酸１４％を含む組成の複合体が得られた。
【００３８】
【発明の効果】本発明の方法によれば、有機溶媒可溶化
リパーゼを用いることにより糖質に脂肪酸を効率的に結
合して各種の糖質−脂肪酸複合体を生成させることがで
きる。しかも、本発明で生産される複合体は、反応条件
を適切に選択すれば、ほぼ９０％以上の収率で１糖質分
子に１分子の脂肪酸が結合した複合体が生産でき、精製
も容易であり、純品を得易いという利点もある。
リパーゼを用いることにより糖質に脂肪酸を効率的に結
合して各種の糖質−脂肪酸複合体を生成させることがで
きる。しかも、本発明で生産される複合体は、反応条件
を適切に選択すれば、ほぼ９０％以上の収率で１糖質分
子に１分子の脂肪酸が結合した複合体が生産でき、精製
も容易であり、純品を得易いという利点もある。
【００３９】さらに、本発明の方法では、有機溶媒中で
反応を行うので、加水分解反応は殆ど起こらず、糖質を
選ばずに極めて効率的に反応が進行する。また、糖質に
限らずアルコール性の水酸基をもつ物質とカルボキシル
基をもつ物質であれば、本発明と同様の反応が起こり、
例えばセルロースとクエン酸のような糖質と有機酸の組
合せ、グルコースとグルタミン酸のような糖質とアミノ
酸の組合せ、糖質と安息香酸、没食子酸などの組合せの
複合体があり、特にセルロースと有機酸の組合せでゲル
用複合体が生産できる。
反応を行うので、加水分解反応は殆ど起こらず、糖質を
選ばずに極めて効率的に反応が進行する。また、糖質に
限らずアルコール性の水酸基をもつ物質とカルボキシル
基をもつ物質であれば、本発明と同様の反応が起こり、
例えばセルロースとクエン酸のような糖質と有機酸の組
合せ、グルコースとグルタミン酸のような糖質とアミノ
酸の組合せ、糖質と安息香酸、没食子酸などの組合せの
複合体があり、特にセルロースと有機酸の組合せでゲル
用複合体が生産できる。
【００４０】一方、遊離脂肪酸のみならず、各種油脂を
用いることもできるので、経済的であり、これら複合体
は、混合した状態でも商品化でき、乳化能があることか
ら、天然の新しい乳化剤としての利用が考えられる。さ
らには、乳化剤としてのみならず、物性変換素材として
各種の食品への利用も可能である。また、糖質基質とし
て、オリゴ糖や多糖を選択することにより、油脂の粉末
化も可能である。
用いることもできるので、経済的であり、これら複合体
は、混合した状態でも商品化でき、乳化能があることか
ら、天然の新しい乳化剤としての利用が考えられる。さ
らには、乳化剤としてのみならず、物性変換素材として
各種の食品への利用も可能である。また、糖質基質とし
て、オリゴ糖や多糖を選択することにより、油脂の粉末
化も可能である。
【００４１】本発明の方法で不飽和脂肪酸を複合体にし
た場合、酸化に対して安定性を付与することも可能であ
り、安定化して使用範囲を広げることができるので、各
種食品素材と混合して用いることもできる。また、逆に
糖質部分も脂肪酸を付けることにより、α−アミラーゼ
など糖質分解酵素の作用に対して抵抗性を付与すること
も可能である。
た場合、酸化に対して安定性を付与することも可能であ
り、安定化して使用範囲を広げることができるので、各
種食品素材と混合して用いることもできる。また、逆に
糖質部分も脂肪酸を付けることにより、α−アミラーゼ
など糖質分解酵素の作用に対して抵抗性を付与すること
も可能である。
【図１】 グルコースとパルミチン酸を混合し、ヘキサ
ン中で３７℃、撹拌反応させた時の複合体（グルコース
−パルミテート）の収率を表す曲線である。
ン中で３７℃、撹拌反応させた時の複合体（グルコース
−パルミテート）の収率を表す曲線である。
【図２】 脂肪酸と複合体（グルコース−パルミテー
ト）の高速液体クロマトグラフィーによる分析例を示し
たもので、（Ａ）は通常のリパーゼ（無処理）を用いた
場合を、（Ｂ）は有機溶媒可溶化リパーゼを用いた場合
を示す。
ト）の高速液体クロマトグラフィーによる分析例を示し
たもので、（Ａ）は通常のリパーゼ（無処理）を用いた
場合を、（Ｂ）は有機溶媒可溶化リパーゼを用いた場合
を示す。
Claims (6)
- 【請求項１】 界面活性剤で処理して有機溶媒に可溶性
としたリパーゼを、有機溶媒中で糖質と脂肪酸及び／又
は油脂の混合物に作用させることを特徴とする糖質−脂
肪酸複合体の製造方法。 - 【請求項２】 界面活性剤が、ジドデシルグルコシルグ
ルタメイトである請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 糖質が、単糖，オリゴ糖，サイクロデキ
ストリン及び多糖の中から選ばれたものである請求項１
記載の方法。 - 【請求項４】 脂肪酸が、飽和脂肪酸又は不飽和脂肪酸
である請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 油脂が、植物油又は動物油である請求項
１記載の方法。 - 【請求項６】 ヘキサン，ヘプタン，オクタン，イソオ
クタン，クロロホルム，酢酸エチル，アセトン，ベンゼ
ン及び石油エーテルよりなる群から選ばれた少なくとも
１種の有機溶媒中でリパーゼを混合物に作用させる請求
項１記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7077164A JP2913010B2 (ja) | 1995-03-09 | 1995-03-09 | 有機溶媒可溶化リパーゼを用いる糖質−脂肪酸複合体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7077164A JP2913010B2 (ja) | 1995-03-09 | 1995-03-09 | 有機溶媒可溶化リパーゼを用いる糖質−脂肪酸複合体の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08245680A JPH08245680A (ja) | 1996-09-24 |
| JP2913010B2 true JP2913010B2 (ja) | 1999-06-28 |
Family
ID=13626155
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7077164A Expired - Lifetime JP2913010B2 (ja) | 1995-03-09 | 1995-03-09 | 有機溶媒可溶化リパーゼを用いる糖質−脂肪酸複合体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2913010B2 (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004518777A (ja) * | 2000-11-30 | 2004-06-24 | チェラネーゼ ベンツレス ゲーエムベーハー | 生化学触媒反応により製造される、直鎖状、水不溶性、ポリサッカライド及び脂肪酸またはその誘導体からなる分子包接化合物 |
| US20020123624A1 (en) * | 2001-02-23 | 2002-09-05 | Lei Qiao | Hydrophobically esterified starch products and process of making the same |
| US7754864B2 (en) | 2002-10-10 | 2010-07-13 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Tyrosinase activity controlling agent, process for producing the same and external preparation containing the same |
| EP1551362A2 (en) * | 2002-10-15 | 2005-07-13 | L'oreal | Use of amide or ester of sugar and of fatty acid, for treating and/or preventing dry skin. |
| FR2845596B1 (fr) * | 2002-10-15 | 2005-01-07 | Oreal | Utilisation d'au moins une amide ou un ester de sucre et d'acide linoleique pour generer de l'acide 13-hydroxyoctadecadienoique dans l'epiderme cutane |
| FR2845595B1 (fr) * | 2002-10-15 | 2005-02-25 | Oreal | Utilisation d'au moins une amide ou un ester de sucre d'acide gras pour prevenir et/ou traiter les peaux seches oligoseborrheiques |
| JP4853909B2 (ja) * | 2006-08-11 | 2012-01-11 | 東洋紡績株式会社 | 糖脂質の製造方法 |
| JP5282252B2 (ja) * | 2009-03-25 | 2013-09-04 | 石川県 | 澱粉粒又はセルロース粉末固定化リパーゼの製造方法、乳化素材の製造方法及び乳化剤 |
| CN114424823B (zh) * | 2022-01-20 | 2023-07-04 | 江苏海王健康生物科技有限公司 | 一种含天然提取物的降血脂软胶囊及其制备方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61268192A (ja) * | 1985-05-24 | 1986-11-27 | Meito Sangyo Kk | 糖類脂肪酸エステル化合物の製造法 |
| JP3125809B2 (ja) * | 1991-12-26 | 2001-01-22 | 不二製油株式会社 | 糖脂質の製造法 |
-
1995
- 1995-03-09 JP JP7077164A patent/JP2913010B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08245680A (ja) | 1996-09-24 |
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