JP2003171328A - 有効物質の抽出方法および精製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 生理活性物質を簡便かつ安価に精製するため
の方法を提供すること。 【解決手段】 疎水基含有水溶性有機化合物の抽出方
法であって、該疎水基含有水溶性有機化合物および糖質
を含有する水溶液と、極性有機溶媒とを接触させて、水
相と有機相とを得、それにより該疎水基含有水溶性有機
化合物を該有機相に移動させる工程を包含する方法。上
記水溶液中の糖質の濃度は、この水溶液１００ｍｌあた
り１２ｇ以上であり得る。上記水溶液は相分離補助剤を
さらに含有し得る。相分離補助剤は、塩化ナトリウム、
クエン酸ナトリウム、硫酸マグネシウムおよび硫酸アン
モニウムからなる群より選択され得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、疎水基含有水溶性
有機化合物を含む水溶液（例えば、動物または植物由来
の抽出物ならびに酵素反応液）から疎水基含有水溶性有
機化合物を高純度でかつ高収率で抽出する方法に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】生薬抽出物に代表されるように、さまざ
まな生理活性を持った天然化合物が数多く知られてい
る。これらの天然化合物は、生理活性物質とも呼ばれ
る。多くの生理活性物質は、一般に、生理活性物質を含
む材料と水、お湯または低濃度のアルコール水溶液とを
用いて抽出操作を行って抽出液を得て、その後、抽出液
を濃縮し、濃縮された抽出液をカラムクロマトグラフィ
ーにかけることによって精製される。しかしながら、こ
の精製方法によって生理活性物質を大量に生産するため
には、大きなカラムおよびそれに付随する設備が必要で
ある。また、小さいカラムでは効率が非常に悪い。その
ため、精製された生理活性物質は非常に高価である。

【０００３】生理活性物質を溶媒抽出方法によって精製
することも試みられている。しかし、酢酸エチル、ブタ
ノール、クロロホルム等の本来水と混ざらない有機溶媒
を水溶液に添加し、攪拌し、静置して水相と有機溶媒相
との２相を得たのち、有機溶媒相に移動した生理活性物
質を回収する方法は、安全性の問題上食品に使用するこ
とはできない。生理活性物質を食品以外の用途に用いる
場合であっても、有機溶媒相にあまり移動しないため、
有機溶媒による抽出が非効率的である生理活性物質も存
在する。エタノール、アセトン等の、食品に使用できる
有機溶媒は水と混ざってしまうので、これらの有機溶媒
を用いて生理活性物質を水溶液から抽出および精製する
ことはできない。

【０００４】オレンジ果汁に含まれる代表的なフラボノ
イド類の一つにヘスペリジンがある。ヘスペリジンを代
表とするフラボノイド類は、例えば、以下のような生理
作用を有することが知られている。ヘスペリジンおよび
ルチンは、以前はビタミンＰと呼ばれ、血圧を下げる作
用が古くから知られている（神谷真太郎、新ビタミン
学、（日本ビタミン学会）１９６９、ｐ４３９）。ヘス
ペリジンはまた、以下の生理作用を有することも報告さ
れている：抗炎症作用、抗痛み作用（Ｅ，Ｍ．Ｇａｌａ
ｔｉ ｅｔ ａｌ．， Ｉｌ Ｆａｒｍａｃｏ，４９，
７０９−７１２（１９９４））、抗アレルギー作用（松
田英秋ｅｔ ａｌ．；薬学雑誌、１１１、１９３−１９
８（１９９１）、Ｊ．Ａ．Ｄａ Ｓｉｌｖａ Ｅｍｉｍ
ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌ．，４６，１１８−７１２（１９９４））、ＬＤＬ−
コレステロールを減少させ血中コレステロール値を改善
する作用（Ｍ．Ｔ．Ｍｏｎｆｏｒｔｅ ｅｔ ａｌ．；
Ｉｌ Ｆａｒｍａｃｏ，５０，５９５−５９９（１９９
５））、抗癌作用（Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．；
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５４，４６５３−４
６５９（１９９４）、Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａ
ｌ．；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５７，２４６
−２５２（１９９７）、Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａ
ｌ．；Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１８，７６１−
７６９（１９９７）、Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔａｌ．；
Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１８，９５７−９６５
（１９９７））。さらに、最近の研究では、ヘスペリジ
ンは前駆脂肪細胞の分化を促進し、糖尿病などの症状を
改善する作用も有することが期待されている。ディオス
ミンは強い抗酸化活性を有する。

【０００５】ディオスミンおよびヘスペリジンを含有す
る薬剤は、静脈不全、痔疾などの治療薬として利用され
ている（Ｃ．Ｌａｂｒｉｄ；Ａｎｇｉｏｌｏｇｙ，４
５，５２４−５３０（１９９４））。さらに、ヘスペリ
ジン単独、ディオスミン単独およびヘスペリジンとディ
オスミンとの混合物が口腔ガン、食道ガン、大腸ガンな
どを抑制することも報告されている（Ｔ．Ｔａｎａｋ
ａ，ｅｔ ａｌ．；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
５４，４６５３−４６５９（１９９４）、Ｔ．Ｔａｎａ
ｋａ，ｅｔ ａｌ．；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ，５７，２４６−２５２（１９９７）、Ｔ．Ｔａｎａ
ｋａ，ｅｔ ａｌ．；Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，
１８， ７６１−７６９（１９９７）、Ｔ．Ｔａｎａｋ
ａ，ｅｔ ａｌ．；Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１
８，９５７−９６５（１９９７））。

【０００６】ナリンジンおよびネオヘスペリジンは柑橘
類の苦味物質として知られており、苦味の付与を目的に
食品および飲料に用いられている。

【０００７】さらに最近では、イソフラボンが骨密度の
向上に有効であること、乳ガンの発生を抑制することな
どが明らかにされてきている（戸田ｅｔ ａｌ．；ＦＯ
ＯＤＳ ａｎｄ ＩＮＧＲＥＤＩＥＮＴＳ ＪＯＵＲＮ
ＡＬ ＯＦ ＪＡＰＡＮ，Ｎｏ．１７２，８３−８９
（１９９７））。

【０００８】ヘスペリジンおよびルチンは本来アセトン
に溶解しない。

【０００９】一方、ヘスペリジン、ナリンジン、ネオヘ
スペリジン、ルチンなどのフラボノイド類は水に難溶で
ある。この難溶性という欠点を克服する目的で、これら
の難溶性化合物を効率よく可溶化する試みがなされてい
る。例えば、ヘスペリジン、ナリンジン、ネオヘスペリ
ジン、ルチンなどのフラボノイド類を酵素的に配糖化
し、溶解性を高める方法が知られている（日本国特許公
開平７−１０７９７２）。

【００１０】上記フラボノイド以外でもカテキン、コー
ヒー酸、コウジ酸、ハイドロキノン、カテコール、レゾ
ルシノール、プロトカテキュー酸、没食子酸、バニリ
ン、ダイゼイン、ゲニステイン、α−レゾルシル酸およ
びフロログルシノールを同様の目的の為に酵素的に配糖
化し、溶解性を高める方法が知られている（日本国特許
公告平７−３６７５８およびＴ．Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ
著、Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．，７８（１９
９４）ｐ３７）。

【００１１】しかしながら、配糖体自身の水溶性が向上
しているため水と混ざらない溶媒では効率的に抽出でき
なかったり、配糖化を行った酵素反応液から生成した配
糖体を精製するためには、安全性上の問題から、吸着ク
ロマトグラフィーなどのカラムクロマトグラフィーを行
う必要がある。

【００１２】従来の精製法では、部分精製されたフラボ
ノイド類、カテキン類、フェノール類およびこれらの配
糖体を天然の材料から得るためには、天然の材料および
アルカリ性水溶液、有機溶媒、熱水などを用いて抽出を
行った後、抽出液をカラムクロマトグラフィーで精製す
る方法がとられている。しかし、これらの物質を高収率
で安価に大量に得るためには食品に使用できる安全な有
機溶媒による抽出を行い精製する必要がある。しかしな
がら、食品に利用できるアセトンは水と混ざってしまう
ので、アセトンでこれらの物質を抽出することはできな
い。また食品および薬品の分野で有効な生理活性物質の
多くは、水、エタノール、アセトン等の極性の高い溶媒
に溶けやすく、極性の低い溶媒に溶けにくい性質を持っ
ている。そのため、極性の低い溶媒では効率的に抽出す
ることができない。

【００１３】

【特許文献１】特開平７−１０７９７２号公報

【特許文献２】特公平７−３６７５８号公報

【特許文献３】特開平８−８０１７７号公報

【特許文献４】特開平６−２７７０５３号公報

【００１４】

【非特許文献１】神谷真太郎，「新ビタミン学」，（日
本ビタミン学会）１９６９年，ｐ．４３９

【非特許文献２】Ｅ，Ｍ．Ｇａｌａｔｉ ｅｔ ａ
ｌ．，「Ｉｌ Ｆａｒｍａｃｏ」，１９９４年，４９，
ｐ．７０９−７１２

【非特許文献３】松田英秋ｅｔ ａｌ．，「薬学雑
誌」、１９９１年，１１１，ｐ．１９３−１９８

【非特許文献４】Ｊ．Ａ．Ｄａ Ｓｉｌｖａ Ｅｍｉｍ
ｅｔ ａｌ．，「Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌ．」，１９９４年，４６，ｐ．１１８−７１２

【非特許文献５】Ｍ．Ｔ．Ｍｏｎｆｏｒｔｅ ｅｔ ａ
ｌ．，「Ｉｌ Ｆａｒｍａｃｏ」，１９９５年，５０，
５９５−５９９

【非特許文献６】Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．，
「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」，１９９４年，５
４，ｐ．４６５３−４６５９

【非特許文献７】Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．，
「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」，１９９７年，５
７，ｐ．２４６−２５２

【非特許文献８】Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．，
「Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ」，１９９７，１８，
ｐ．７６１−７６９

【非特許文献９】Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．，
「Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ」，１９９７年，１
８，ｐ．９５７−９６５

【非特許文献１０】Ｃ．Ｌａｂｒｉｄ，「Ａｎｇｉｏｌ
ｏｇｙ」，１９９４年，４５，ｐ．５２４−５３０

【非特許文献１１】戸田ｅｔ ａｌ．，「ＦＯＯＤＳ
ＡＮＤ ＩＮＧＲＥＤＩＥＮＴＳＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ
ＪＡＰＡＮ」，１９９７年，Ｎｏ．１７２，ｐ．８３
−８９

【非特許文献１２】Ｔ．Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，「Ｊ．Ｆ
ｅｒｍｅｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．」，１９９４年，７８，
ｐ．３７

【００１５】

【発明が解決しようとする課題】生理活性物質を簡便か
つ安価に精製するための方法を提供すること。

【００１６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは鋭意研究を
行った結果、本来水またはお湯に混ぜた際に水相と分離
しにくい有機溶媒であっても、生理活性物質を含有する
水溶液中に糖質などの保水性の性質をもつ物質が存在す
ることにより、この水溶液と有機溶媒とを混合し、攪拌
した後に水相と有機相とを容易に分離できることを見出
し、さらに有機相に生理活性物質が移動することを見出
した。本発明者らはさらに、塩化ナトリウムおよびクエ
ン酸ナトリウムなどの塩、または有機酸をこの水溶液に
添加して、この水溶液のイオン強度を上げることによ
り、糖質が存在しても水相から分離されない、あるいは
分離されにくい有機溶媒を用いた場合であっても水相か
ら分離され、生理活性物質を有機溶媒相に効率的に移動
させることができることを見出した。本発明者らは、こ
れらの知見に基づいて本発明を完成させた。

【００１７】本発明の方法は、疎水基含有水溶性有機化
合物の抽出方法であって、該疎水基含有水溶性有機化合
物および糖質を含有する水溶液と、極性有機溶媒とを接
触させて、水相と有機相とを得、該疎水基含有水溶性有
機化合物を該有機相に移動させる工程を包含する。

【００１８】１つの実施形態では、上記水溶液中の糖質
の濃度は、該水溶液１００ｍｌあたり１２ｇ以上であり
得る。

【００１９】１つの実施形態では、上記疎水基含有水溶
性有機化合物は、水溶性芳香族化合物であり得る。

【００２０】１つの実施形態では、上記疎水基含有水溶
性有機化合物は、フェノール誘導体およびそれらの配糖
体からなる群より選択され得る。

【００２１】１つの実施形態では、上記疎水基含有水溶
性有機化合物は、ハイドロキノン配糖体、カテキン、サ
リシン、ヘスペリジン、ヘスペリジン配糖体、コーヒー
酸、サリシルアルコールおよびエラジタンニンからなる
群より選択され得る。

【００２２】１つの実施形態では、上記水溶液は相分離
補助剤をさらに含有し得る。

【００２３】１つの実施形態では、上記相分離補助剤
は、塩または有機酸であり得る。

【００２４】１つの実施形態では、上記相分離補助剤
は、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、硫酸マグネ
シウムおよび硫酸アンモニウムからなる群より選択され
得る。

【００２５】１つの実施形態では、上記極性有機溶媒
は、テトラヒドロフランまたはアセトニトリルであり得
る。

【００２６】１つの実施形態では、上記極性有機溶媒
は、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、アセトンま
たはイソプロピルアルコールであり得る。

【００２７】１つの実施形態では、上記疎水基含有水溶
性有機化合物は、酵素反応溶液に由来し得る。

【００２８】１つの実施形態では、上記酵素反応溶液
は、配糖化反応溶液であり得る。

【００２９】１つの実施形態では、上記配糖化反応溶液
は、ヘスペリジンまたはハイドロキノンの配糖化反応溶
液であり得る。

【００３０】１つの実施形態では、上記疎水基含有水溶
性有機化合物は、動物または植物から選択される生物に
由来し得る。

【００３１】１つの実施形態では、上記疎水基含有水溶
性有機化合物は、果汁に由来し得る。

【００３２】１つの実施形態では、上記水溶液は、上記
疎水基含有水溶性有機化合物および糖質を含有する酵素
反応溶液を濃縮することにより調製され得る。

【００３３】１つの実施形態では、上記酵素反応溶液
は、配糖化反応溶液であり得る。

【００３４】１つの実施形態では、上記配糖化反応溶液
は、ヘスペリジンまたはハイドロキノンの配糖化反応溶
液であり得る。

【００３５】１つの実施形態では、上記水溶液は、上記
疎水基含有水溶性有機化合物および糖質を含有する生物
抽出物を濃縮または希釈することにより調製され得、こ
こで該生物が動物または植物であり得る。

【００３６】１つの実施形態では、上記水溶液は、果汁
を濃縮することにより調製され得る。

【００３７】１つの実施形態では、上記水溶液は、上記
疎水基含有水溶性有機化合物および糖質を含有する酵素
反応溶液またはその濃縮液に上記相分離補助剤を添加す
ることにより調製され得る。

【００３８】１つの実施形態では、上記酵素反応溶液
は、配糖化反応溶液であり得る。

【００３９】１つの実施形態では、上記配糖化反応溶液
は、ヘスペリジンまたはハイドロキノンの配糖化反応溶
液であり得る。

【００４０】１つの実施形態では、上記水溶液は、上記
疎水基含有水溶性有機化合物および糖質を含有する生物
抽出物またはそれらの濃縮物もしくは希釈物に上記相分
離補助剤を添加することにより調製され得、ここで該生
物が動物または植物であり得る。

【００４１】１つの実施形態では、上記水溶液は、果汁
またはその濃縮物に上記相分離補助剤を添加することに
より調製され得る。

【００４２】本発明の精製方法は、フェノール誘導体配
糖体の精製方法であって、フェノール誘導体、フェノー
ル誘導体配糖体および糖質を含有する第１の水溶液と、
極性有機溶媒とを接触させて、第１の水相と少量の水を
含む有機相とを得、該フェノール誘導体およびフェノー
ル誘導体配糖体を該有機相に移動させる工程；該少量の
水を含む有機相を分取する工程；該少量の水を含む有機
相から該極性有機溶媒を除去して、該フェノール誘導体
およびフェノール誘導体配糖体を含有する第２の水溶液
を得る工程；該第２の水溶液と酢酸エチルとを接触させ
て、第２の水相と酢酸エチル相とを得、該フェノール誘
導体を該酢酸エチル相に移動させる工程；該第２の水相
を分取する工程；および該第２の水相を濃縮し、そして
冷却することにより、該フェノール誘導体配糖体を沈殿
させる工程を包含する。

【００４３】１つの実施形態では、上記フェノール誘導
体およびフェノール誘導体配糖体は、該フェノール誘導
体の配糖化酵素反応溶液に由来し得る。

【００４４】１つの実施形態では、上記配糖化反応溶液
は、ヘスペリジンまたはハイドロキノンの配糖化反応溶
液であり得る。

【００４５】１つの実施形態では、上記第１の水溶液
は、相分離補助剤をさらに含有し得る。

【００４６】１つの実施形態では、上記配糖化反応溶液
は、ヘスペリジンまたはハイドロキノンの配糖化反応溶
液であり得る。

【００４７】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本明細書において、特にことわらない限り、濃度は、溶
液１００立方センチメートルあたりのグラム数で表され
る。例えば、「１０％塩化ナトリウム水溶液」とは、溶
液１００立方センチメートル当たり１０ｇの塩化ナトリ
ウムが溶解している塩化ナトリウム水溶液をいう。

【００４８】本発明の方法は、疎水基含有水溶性有機化
合物の抽出方法である。本発明の方法は、疎水基含有水
溶性有機化合物および糖質を含有する水溶液と、極性有
機溶媒とを接触させて、水相と有機相とを得、疎水基含
有水溶性有機化合物を有機相に移動させる工程を包含す
る。

【００４９】（１）疎水基含有水溶性有機化合物 本明細書中では、「疎水基含有水溶性有機化合物」と
は、疎水基を含有し、水に溶ける、有機化合物をいう。

【００５０】「水溶性」化合物とは、本明細書中では、
２０℃の水１リットルに０．０１ｇ以上溶解し得る化合
物をいう。疎水基含有水溶性有機化合物は、２０℃の水
１リットルに好ましくは０．１ｇ以上、より好ましくは
１ｇ以上、さらに好ましくは５ｇ以上、最も好ましくは
１０ｇ以上溶解する。溶解度に上限は特にないが、好ま
しくは２０℃の水１リットルに３００ｇ以下である。よ
り好ましくは溶解度は２０℃の水１リットルに１００ｇ
以下である。

【００５１】疎水基は、好ましくは炭素原子を３個以上
含む疎水基であり、より好ましくは芳香族残基である。
疎水基含有水溶性有機化合物の例としては、フラボノイ
ド類、イソフラボン類、フェノール性化合物、フラボノ
イド配糖体、イソフラボン配糖体、フェノール性化合物
配糖体、ハイドロキノン配糖体、アントラセン配糖体、
カルコン配糖体などの水溶性芳香族化合物、テルペン配
糖体、ステロイド配糖体、トリテルペノイド配糖体、ア
ルカロイド配糖体、およびＣ−配糖体が挙げられる。疎
水基含有水溶性有機化合物は、好ましくは水溶性芳香族
化合物である。

【００５２】本明細書中では、「水溶性芳香族化合物」
とは、水に溶ける化合物であって、芳香族基を有する化
合物をいう。

【００５３】水溶性芳香族化合物は、好ましくはフェノ
ール誘導体およびそれらの配糖体からなる群より選択さ
れる。

【００５４】「フェノール誘導体」とは、フェノール骨
格（すなわち、ベンゼン環）またはフラボノイド骨格を
含む化合物であって、フェノール骨格またはフラボノイ
ド骨格に結合している水酸基を有する化合物、フェノー
ルおよびコウジ酸をいう。フェノール誘導体の例として
は、単一のフェノール骨格またはフラボノイド骨格上に
１つのフェノール性水酸基を有する化合物、および単一
のフェノール骨格またはフラボノイド骨格上に２つ以上
のフェノール性水酸基を有する化合物が挙げられる。以
下、本明細書中では便宜上、１つのフェノール性水酸基
を単一のフェノール骨格またはフラボノイド骨格上に有
する化合物をモノフェノール系（ｍｏｎｏ−ｐｈｅｎｏ
ｌ ｔｙｐｅ）化合物と呼び、２つ以上のフェノール性
水酸基を単一のフェノール骨格またはフラボノイド骨格
上に有する化合物をポリフェノール系（ｐｏｌｙ−ｐｈ
ｅｎｏｌ ｔｙｐｅ）化合物と呼ぶ。

【００５５】２つのフェノール性水酸基を単一のフェノ
ール骨格またはフラボノイド骨格上に有する化合物をジ
フェノール化合物と呼ぶ。

【００５６】フェノール性水酸基を有するフェノール誘
導体配糖体は、フェノール誘導体に含まれる。

【００５７】単一のフェノール骨格またはフラボノイド
骨格上に１つのフェノール性水酸基を有するモノフェノ
ール系化合物の例としては、フェノール、サリシルアル
コール、コウジ酸、ジメトキシフェノール、アセトアミ
ノフェン、バニリン、およびダイゼインが挙げられる。

【００５８】モノフェノール化合物の例としてはまた、
モノフェノール系フラボノイド系化合物が挙げられる。
モノフェノール系フラボノイド系化合物の例としては、
モノフェノール系フラボン系化合物、モノフェノール系
イソフラボン系化合物、モノフェノール系フラボノール
系化合物、モノフェノール系フラバノン系化合物、モノ
フェノール系フラバノノール系化合物、モノフェノール
系カテキン系化合物、モノフェノール系オーロン系化合
物、モノフェノール系カルコン系化合物およびモノフェ
ノール系ジヒドロカルコン系化合物が挙げられる。

【００５９】ジメトキシフェノールの例としては、２，
３−ジメトキシフェノール、２，４−ジメトキシフェノ
ール、２，５−ジメトキシフェノール、２，６−ジメト
キシフェノール、３，４−ジメトキシフェノールおよび
３，５−ジメトキシフェノールが挙げられる。３，４−
ジメトキシフェノールおよび３，５−ジメトキシフェノ
ールが好ましい。

【００６０】単一のフェノール骨格またはフラボノイド
骨格上に２つ以上のフェノール性水酸基を有するポリフ
ェノール系化合物の例としては、ハイドロキノン、ヘス
ペレチン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、
アントシアニジン系化合物、アントシアニン系化合物、
コーヒー酸、カテコール、レゾルシノール、プロトカテ
キュー酸、没食子酸、ゲニステイン、β‐レゾルシル
酸、およびフロログルシノールが挙げられる。

【００６１】ジフェノール化合物の例としてはまた、ジ
フェノール系フラボノイド系化合物が挙げられる。ジフ
ェノール系フラボノイド系化合物の例としては、ジフェ
ノール系フラボン系化合物、ジフェノール系イソフラボ
ン系化合物、ジフェノール系フラボノール系化合物、ジ
フェノール系フラバノン系化合物、ジフェノール系フラ
バノノール系化合物、ジフェノール系カテキン系化合
物、ジフェノール系オーロン系化合物、ジフェノール系
カルコン系化合物およびジフェノール系ジヒドロカルコ
ン系化合物が挙げられる。

【００６２】レゾルシル酸の例としては、α−レゾルシ
ル酸、β−レゾルシル酸、およびγ−レゾルシル酸が挙
げられる。本発明では、β−レゾルシル酸が好ましい。

【００６３】本明細書中では、「フェノール誘導体配糖
体」とは、フェノール誘導体部分と、１以上の糖部分と
がグリコシド結合によって結ばれた物質である。フェノ
ール誘導体配糖体は、ハイドロキノン−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシド、サリシン、コーヒー酸−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド、３，４−ジメトキシフェノール−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシド、カテキン−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシドのようなモノグルコピラノシドであっ
てもよいし、上記のモノグルコピラノシドにさらに糖部
分が結合したジグルコピラノシド（例えば、ヘスペリジ
ン誘導体）、トリグルコピラノシドなどであってもよ
い。

【００６４】本明細書中では、配糖体とは、アグリコン
と１以上の糖部分とがグリコシド結合によって結ばれた
物質である。糖部分の重合度は、好ましくは１〜１０で
あり、より好ましくは１〜５であり、さらに好ましくは
１〜３である。糖部分は、単糖部分であってもよく、２
糖部分であってもよい。本明細書中では、グルコシドは
配糖体の定義に含まれる。グルコシドは、１以上のグル
コース部分がアグリコンに結合した配糖体である。

【００６５】疎水基含有水溶性有機化合物は、好ましく
は、サリシン、コニフェリン、アルブチン、センノシ
ド、ステビオサイド、ルブソサイド、ルチン、ヘスペリ
ジン、ナリンジン、ダイゼイン、ゲニスチン、バルバロ
イン、バニリン、サポニン、ベルベリン、ケンフェロー
ル、バイカリン、カピラリン、カテキン、コリダリン、
エスクレチン、エピカテキン、ジンゲロール、グリチル
リチン、ディオスミン、ネオヘスペリジン、コーヒー
酸、サリシルアルコール、エラジタンニンおよびハイド
ロキノンからなる群より選択される。疎水基含有水溶性
有機化合物は、より好ましくは、ハイドロキノン配糖
体、カテキン、サリシン、ヘスペリジン、ヘスペリジン
配糖体、コーヒー酸、サリシルアルコールおよびエラジ
タンニンからなる群より選択される。

【００６６】疎水基含有水溶性有機化合物は、水溶液中
に任意の濃度で存在し得る。疎水基含有水溶性有機化合
物の濃度は、好ましくは０．０１％〜５０％、より好ま
しくは０．１％〜４０％、さらに好ましくは０．５％〜
３０％であり、さらに好ましくは１％〜２０％であり、
最も好ましくは５％〜１５％である。水溶液中に存在す
る疎水基含有水溶性有機化合物の濃度が低すぎると、精
製の効率が悪い場合がある。水溶液中に存在する疎水基
含有水溶性有機化合物の濃度が高すぎると、疎水基含有
水溶性有機化合物が沈殿する場合がある。疎水基含有水
溶性有機化合物が沈殿しない濃度が好ましい。

【００６７】疎水基含有水溶性有機化合物は、疎水基含
有水溶性有機化合物を含有する酵素反応溶液に由来し得
る。本明細書において酵素反応溶液とは、任意の出発物
質を酵素反応に供することにより得られる溶液をいう。
このような酵素反応溶液の例としては、疎水基含有水溶
性有機化合物の配糖化反応溶液、加水分解反応溶液、転
移反応溶液および縮合反応溶液が挙げられる。酵素反応
溶液は好ましくは、糖質を含む。酵素反応溶液は通常、
反応が進行して、反応生成物が産生された後の反応溶液
である。

【００６８】配糖化反応の例としては、代表的には、サ
イクロデキストリングルカノトランスフェラーゼによっ
て触媒される、糖転移受容体に対する糖転移反応があ
る。このような糖転移受容体の例としては、糖を構造中
に含むフラボノイド、構造中に糖を含まないフラボノイ
ド、フェノール化合物およびフェノール性化合物配糖体
が挙げられる。代表的な糖転移受容体の例としては、ヘ
スペリジン、ナリンジン、ネオヘスペリジンおよびルチ
ンが挙げられる。

【００６９】配糖化反応の別の例は、転移型アミラーゼ
によって触媒される、糖転移受容体に対する糖転移反応
がある。このような糖転移受容体の例としては、カテキ
ン、コーヒー酸、コウジ酸、ハイドロキノン、カテコー
ル、レゾルシノール、プロトカテキュー酸、没食子酸、
バニリン、ダイゼイン、ゲニステイン、α−レゾルシル
酸およびフロログルシノールが挙げられる。

【００７０】配糖化反応溶液は、好ましくはヘスペリジ
ンまたはハイドロキノンの配糖化反応溶液である。

【００７１】酵素反応を触媒する酵素の例としては、サ
イクロデキストリングルカノトランスフェラーゼおよび
転移型アミラーゼ以外に、α−アミラーゼ、プルラナー
ゼ、アミロマルターゼ、Ｄ−酵素、ネオプルラナーゼ、
サイクロデキストリナーゼ、α−グルコシダーゼ、セル
ラーゼ、β−グルコシダーゼおよびβ−ガラクトシダー
ゼが挙げられる。

【００７２】疎水基含有水溶性有機化合物を含有する酵
素反応溶液は、当業者に公知の方法によって設計および
入手され得る。

【００７３】疎水基含有水溶性有機化合物はまた、疎水
基含有水溶性有機化合物を含有する任意の天然材料に由
来し得る。疎水基含有水溶性有機化合物は例えば、生物
（例えば、動物または植物）に由来し得る。あるいは、
動物抽出物または植物抽出物を用いることもできる。動
物抽出物とは、動物から抽出される任意の物質をいい、
植物抽出物とは、植物から抽出される任意の物質をい
う。例えば、植物の葉、茎、根、花、実などから得られ
る任意の疎水基含有水溶性有機化合物が使用可能であ
る。植物材料の例としては、大豆、大豆加工品、ナマ
コ、五倍子、黄ごん、アロエ、地黄、薬用人参、芍薬、
クチナシ、甘草、柴胡、大黄、ドクダミ、クマコケモ
モ、茶、甜茶および柑橘類（例えば、オレンジの実）が
挙げられる。また、動物の体内に存在する任意の疎水基
含有水溶性有機化合物が使用可能である。

【００７４】（２）糖質 本明細書中では、糖質とは、Ｃ_ｎ（Ｈ_２Ｏ）_ｍという一
般式を有する化合物をいう。糖質は、構成要素である糖
単位の数によって単糖、オリゴ糖、および多糖に分けら
れる。本発明では、単糖およびオリゴ糖が好ましい。本
発明では、水に溶解する糖質または水に溶解しないが保
水性を有する糖質が好ましい。

【００７５】単糖の例としては、Ｄ−グルコース、ガラ
クトース、フルクトース、アラビノース、キシロース、
ラムノースが挙げられる。単糖は、Ｄ−グルコースであ
ることが好ましい。

【００７６】オリゴ糖とは、本明細書中では、２〜１０
個の単糖が脱水縮合して生じた物質をいう。オリゴ糖
は、好ましくは２〜９個の糖単位、より好ましくは２〜
８個の糖単位、さらに好ましくは２〜７個の糖単位を有
する。オリゴ糖の例としては、スクロース、ラクトー
ス、マルトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、ラクトオリゴ
糖およびフルクトオリゴ糖が挙げられる。マルトオリゴ
糖の例としては、マルトース、マルトトリオース、マル
トテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオ
ース、マルトヘプタオース、マルトオクタオース、マル
トノナオースおよびマルトデカオースが挙げられる。オ
リゴ糖は、直鎖状のオリゴ糖であってもよいし、分枝状
のオリゴ糖であってもよい。オリゴ糖は、その分子内
に、環状部分を有し得る。

【００７７】多糖とは、本明細書中では、１１個以上の
単糖が脱水縮合して生じた物質をいう。多糖は、好まし
くは少なくとも１つのα−１，４結合を有する。多糖の
例としては、デキストリン、アミロース、アミロペクチ
ン、デンプン、デキストランおよびセルロースが挙げら
れる。

【００７８】デキストリンとは、デンプンを化学的また
は酵素的方法で低分子化した物質をいう。デキストリン
の例としては、ブリティシュガム、黄色デキストリン、
白色デキストリン、パインデクス（松谷化学工業株式会
社）、サンデック（三和澱粉株式会社）、テトラップ
（林原商事株式会社）が挙げられる。

【００７９】アミロースとは、α−１，４結合によって
連結されたグルコース単位から構成される直鎖分子であ
る。アミロースは、天然のデンプン中に含まれる。

【００８０】アミロペクチンとは、α−１，４結合によ
って連結されたグルコース単位に、α−１，６結合でグ
ルコース単位が連結された、分枝状分子である。アミロ
ペクチンは天然のデンプン中に含まれる。アミロペクチ
ンとしては、例えば、アミロペクチン１００％からなる
ワキシーコーンスターチが用いられ得る。

【００８１】デンプンは、アミロースとアミロペクチン
との混合物である。デンプンとしては、通常市販されて
いるデンプンであればどのようなデンプンでも用いられ
得る。デンプンに含まれるアミロースとアミロペクチン
との比率は、デンプンを生産する植物の種類によって異
なる。モチゴメ、モチトウモロコシなどに含まれるデン
プンは、そのほとんどがアミロペクチンである。デンプ
ンは、天然のデンプン、デンプン分解物および化工デン
プンに区分される。

【００８２】天然のデンプンは、原料により、いも類デ
ンプンおよび穀類デンプンに分けられる。いも類デンプ
ンの例としては、馬鈴薯デンプン、タピオカデンプン、
甘藷デンプン、くずデンプン、およびわらびデンプンな
どが挙げられる。穀類デンプンの例としては、コーンス
ターチ、小麦デンプン、および米デンプンなどが挙げら
れる。

【００８３】化工デンプンは、天然のデンプンに加水分
解、エステル化、またはα化などの処理を施して、より
利用しやすい性質を持たせたデンプンである。糊化開始
温度、糊の粘度、糊の透明度、老化安定性などを様々な
組み合わせで有する幅広い種類の化工デンプンが入手可
能である。化工デンプンの種類には種々ある。このよう
なデンプンの例は、デンプンの糊化温度以下においてデ
ンプン粒子を酸に浸漬することにより得られる、デンプ
ン分子は切断するが、デンプン粒子は破壊していないデ
ンプンである。

【００８４】デンプン分解物は、デンプンに酵素処理ま
たは加水分解などの処理を施して得られる、処理前より
も分子量が小さいオリゴ糖もしくは多糖である。デンプ
ン分解物の例としては、デンプン枝切り酵素分解物、デ
ンプンホスホリラーゼ分解物およびデンプン部分加水分
解物が挙げられる。

【００８５】デンプン枝切り酵素分解物は、デンプンに
枝切り酵素を作用させることによって得られる。枝切り
酵素の作用時間を種々に変更することによって、任意の
程度に分岐部分（すなわち、α−１，６−グルコシド結
合）が切断されたデンプン枝切り酵素分解物が得られ得
る。デンプン枝切り酵素分解物の例としては、糖単位数
４〜１００００のうちα−１，６−グルコシド結合を１
個〜２０個有する分解物、糖単位数３〜５００のα−
１，６−グルコシド結合を全く有さない分解物、マルト
オリゴ糖およびアミロースが挙げられる。デンプン枝切
り酵素分解物の場合、分解されたデンプンの種類によっ
て得られる分解物の分子量の分布が異なり得る。デンプ
ン枝切り酵素分解物は、種々の長さの糖鎖の混合物であ
り得る。

【００８６】デキストリンおよびデンプン部分加水分解
物は、デンプンを、酸、アルカリ、酵素などの作用によ
って部分的に分解して得られる分解物をいう。本発明で
は、デキストリンおよびデンプン部分加水分解物の有す
る糖単位数は、好ましくは約１０〜約１００，０００、
より好ましくは約５０〜約５０，０００、さらにより好
ましくは約１００〜約１０，０００である。デキストリ
ンおよびデンプン部分加水分解物の場合、分解されたデ
ンプンの種類によって得られる分解産物の分子量の分布
が異なり得る。デキストリンおよびデンプン部分加水分
解物は、種々の長さを持つ糖鎖の混合物であり得る。

【００８７】デキストランとは、α−１，６−グルカン
をいう。

【００８８】セルロースとは、β−１，４−グルコシド
結合によって連結されたグルコース単位から構成される
直鎖分子である。

【００８９】糖質は１種類の化合物であってもよいし、
複数種の化合物の混合物であってもよい。

【００９０】糖質は、疎水基含有水溶性有機化合物を含
有する水溶液中にもともと含まれていてもよいし、疎水
基含有水溶性有機化合物を含有する水溶液に添加されて
もよい。疎水基含有水溶性有機化合物を含有する水溶液
中に糖質がもともと含まれていることが好ましい。この
ような水溶液の例としては、上記に列挙したような配糖
化反応溶液および果汁が挙げられる。

【００９１】糖質は低分子であることが好ましい。配糖
化反応溶液のように、比較的高分子量の多糖を含有する
溶液は、グルコアミラーゼのような、糖鎖を切断する酵
素をその溶液に添加して反応させることによって、多糖
を単糖またはオリゴ糖まで分解し得る。水溶液中の多糖
は、有機溶媒との接触前に単糖またはオリゴ糖に分解さ
れることが好ましい。糖質は、水溶液中にすべて溶解し
ていることが好ましい。しかし、水溶液と有機溶媒との
分離を妨げない限り、糖質は水溶液中に一部懸濁してい
てもよい。

【００９２】水溶液中の糖質の濃度は、任意の濃度であ
り得る。水溶液中の糖質の濃度は、好ましくは１２％以
上、より好ましくは２０％以上、さらに好ましくは３０
％以上、さらに好ましくは４０％以上であり、最も好ま
しくは５０％以上である。糖質の濃度の上限は、糖質お
よび疎水基含有水溶性有機化合物が沈殿しなければ任意
の濃度であり得る。例えば、上限は、９０％以下、８０
％以下、７０％以下、６０％以下または５５％以下であ
る。

【００９３】水溶液中の糖質の濃度は、当該分野で公知
の方法によって測定され得る。例えば、簡便な方法とし
ては、ブリックス糖度計による測定方法がある。ブリッ
クス糖度計による測定方法は、簡便ではあるが、各種糖
質を区別して測定することができない。各種糖質につい
て区別して測定するためには、例えば、糖質を含有する
水溶液を水：アセトニトリル＝２５：７５（ｖ／ｖ）の
溶液を移動相として用いて、カラムＬｉＣｈｒｏｓｏｒ
ｂ ＮＨ_２（Ｍｅｒｃｋ製；４．０×２５０ｍｍ)を用
いたＨＰＬＣにかけ、溶出液をＲＩ検出器を用いて測定
することにより測定が可能である。

【００９４】水溶液のｐＨは、好ましくは２〜１１であ
り、より好ましくは３〜９であり、さらに好ましくは４
〜８である。

【００９５】（３）極性有機溶媒 本明細書中では、「極性有機溶媒」とは、アルミナに対
する溶媒強度（ε^０）が０．４以上であり、蒸留水と混
ざる有機溶媒をいう。極性有機溶媒の溶媒強度は、好ま
しくは０．４２〜０．９８であり、より好ましくは０．
４４〜０．９５であり、最も好ましくは０．４４〜０．
９０である。極性有機溶媒は、２０℃での誘電率が７．
０以上の有機溶媒であってもよい。極性有機溶媒は、２
０℃での誘電率が好ましくは７．３〜４０．０であり、
より好ましくは７．４〜３９．０であり、最も好ましく
は７．５〜３８．０である。

【００９６】アルミナに対する溶媒強度の例を表１に示
す。誘電率の例を表２に示す。本発明で使用される極性
有機溶媒の例としては、以下の表１および表２に示さ
れ、上記範囲に溶媒強度または誘電率を有する極性有機
溶媒が挙げられる。

【００９７】

【表１】

【００９８】

【表２】 極性有機溶媒は、好ましくはテトラヒドロフラン、イソ
プロパノール、アセトニトリル、アセトン、エタノー
ル、メタノール、プロパノール、ピリジンまたはジメト
キシスルホキシドであり、より好ましくはテトラヒドロ
フラン、イソプロパノール、アセトニトリルまたはアセ
トンであり、最も好ましくはテトラヒドロフランまたは
アセトニトリルである。水溶液が相分離補助剤をさらに
含む場合、極性有機溶媒は、好ましくはテトラヒドロフ
ラン、アセトニトリル、アセトンまたはイソプロピルア
ルコールであり、より好ましくはアセトンまたはイソプ
ロピルアルコールである。

【００９９】極性有機溶媒は、１種類の化合物であるこ
とが好ましい。しかし、有機相が２相に分離しない限
り、２種類以上の極性有機溶媒を混合して用い得る。当
業者は、水溶液からの疎水基含有水溶性有機化合物の抽
出のために適切な種類の極性有機溶媒を必要に応じて選
択し得る。

【０１００】水溶液と接触させる極性有機溶媒の量は、
代表的には水溶液の容積の０．１倍〜１０倍であり、よ
り好ましくは０．２倍〜２倍である。

【０１０１】（４）相分離補助剤 水溶液は、相分離補助剤をさらに含有し得る。本明細書
中では、「相分離補助剤」とは、水溶液と極性有機溶媒
との混合物が水相と有機相とに分離するのを補助する物
質をいう。ただし、相分離を補助する作用を有していて
も、糖質および疎水基含有水溶性有機化合物は相分離補
助剤ではない。相分離補助剤は、例えば、塩析効果のあ
る塩およびイオン強度を高めることが可能な水溶性物質
であり得る。相分離補助剤は、塩または有機酸であり得
る。相分離補助剤の例としては、硫安、硫酸マグネシウ
ム等の硫酸塩、塩化ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等の
ナトリウム塩、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、リ
ン酸マグネシウム、リン酸アンモニウム等のリン酸塩、
酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等の酢酸塩、乳酸ナトリ
ウム、乳酸マグネシウム、乳酸カルシウム等の乳酸塩、
クエン酸、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、アス
コルビン酸ナトリウム、リンゴ酸等の有機酸、塩化アン
モニウムが挙げられるがこれらに限定されない。相分離
補助剤は、好ましくは塩であり、より好ましくは塩化ナ
トリウム、クエン酸ナトリウム、硫酸マグネシウムおよ
び硫酸アンモニウムからなる群より選択される。

【０１０２】相分離補助剤は、相分離補助能を発揮する
に十分な量で水溶液に含有され得る。このような量は当
業者に公知である。相分離補助剤は、水溶液中に好まし
くは５％以上、より好ましくは１０％以上、さらに好ま
しくは１５％以上、最も好ましくは２０％以上含有され
る。相分離補助剤の量の上限は特にないが、好ましくは
５０％以下であり、より好ましくは４０％以下である。

【０１０３】相分離補助剤は、予め水溶液に含有させる
ことが好ましい。しかし、水溶液と極性有機溶媒とを接
触させている間に相分離補助剤を添加することも可能で
ある。

【０１０４】（疎水基含有水溶性有機化合物および糖質
を含有する水溶液の調製）疎水基含有水溶性有機化合物
および糖質を含有する水溶液は、当業者に公知の方法に
よって調製され得る。このような水溶液は、酵素反応を
させた後、何の処理も施していない酵素反応溶液であっ
てもよいし、酵素反応後に濃縮、希釈、濾過、ｐＨ調整
などを行った酵素反応溶液であってもよい。特に、酵素
反応溶液の粘度が高すぎて攪拌できない場合は希釈する
ことが好ましい。水溶液はまた、疎水基含有水溶性有機
化合物および糖質を含有する酵素反応溶液またはその濃
縮液に相分離補助剤を添加することにより調製されても
よい。

【０１０５】水溶液はまた、疎水基含有水溶性有機化合
物を含有する、動物または植物から選択される生物の抽
出物であり得る。このような抽出物は、疎水基含有水溶
性有機化合物を含有する、動物材料または植物材料を、
当該分野で公知の方法によって抽出することにより調製
され得る。代表的な抽出方法は、疎水基含有水溶性有機
化合物を含有する、動物材料または植物材料を、水（例
えば、０℃より高く、４０℃未満の水）、温水（例え
ば、４０℃以上６０℃未満の水）、熱水（例えば、６０
℃以上１００℃未満の水）、アルコール、ピリジン、酢
酸エチルまたはこれらの混合物のような抽出溶媒中に入
れ、動物材料または植物材料からこれらの抽出溶媒へと
疎水基含有水溶性有機化合物を移動させ、抽出溶媒から
動物材料および植物材料を除去して抽出液を得て、そし
て必要に応じてこの抽出液を濃縮または乾固することを
含む。抽出物は有機溶媒を含まないことが好ましい。抽
出溶媒が有機溶媒である場合、抽出液を濃縮することに
よって、有機溶媒を除去することが好ましい。抽出物
は、液体であっても、固体であってもよい。なお、本明
細書中では、動物材料または植物材料の搾汁も、抽出物
の定義に含まれる。水溶液は好ましくは、果汁である。
動物材料は、動物全体であってもよいし、動物のうちの
任意の器官または組織であってもよい。植物材料は、植
物全体であってもよいし、植物のうちの任意の器官（例
えば、花、果実、種子、根、茎および葉）または組織で
あってもよい。抽出に使用される動物材料および植物材
料は、生の状態でも乾燥状態でもよい。抽出物が水溶液
であれば、そのまま本発明で使用され得る。水溶液はま
た、抽出物から、濃縮、希釈などによって調製され得
る。特に、抽出物の粘度が高すぎて攪拌できない場合は
希釈することが好ましい。なお、本発明の方法で使用さ
れる水溶液には、目的とする疎水基含有水溶性有機化合
物が溶解している限り、他の任意の成分が懸濁していて
もよい。水溶液はまた、疎水基含有水溶性有機化合物お
よび糖質を含有する動物抽出物に、疎水基含有水溶性有
機化合物および糖質を含有する植物抽出物に、またはこ
れらの抽出物の濃縮物もしくは希釈物に、相分離補助剤
を添加することにより調製されてもよい。例えば、水溶
液は、果汁またはその濃縮物に相分離補助剤を添加する
ことにより調製されてもよい。

【０１０６】抽出液には、サリシン、コニフェリン、ア
ルブチン、センノシド、ステビオサイド、ルブソサイ
ド、ルチン、ヘスペリジン、ナリンジン、ダイゼイン、
ゲニスチン、バルバロイン、バニリン、サポニン、ベル
ベリン、ケンフェロール、バイカリン、カピラリン、カ
テキン、コリダリン、エスクレチン、エピカテキン、ジ
ンゲロールおよびグリチルリチンからなる群より選択さ
れる有効成分が溶解していることが好ましい。

【０１０７】（疎水基含有水溶性有機化合物の抽出）本
発明の方法では、疎水基含有水溶性有機化合物および糖
質を含有する水溶液と、極性有機溶媒とを接触させて、
水相と有機相とを得、それによって疎水基含有水溶性有
機化合物を有機相に移動させる。

【０１０８】水溶液と極性有機溶媒とは、例えば、水溶
液と極性有機溶媒とを混合することによって接触され得
る。水溶液と極性有機溶媒とを接触させることを、抽出
するともいう。水溶液と極性有機溶媒とを接触させると
きの温度は、好ましくは１０℃〜５０℃、より好ましく
は２５℃〜４５℃、さらに好ましくは２０℃〜４０℃、
最も好ましくは２５℃〜３５℃である。

【０１０９】水溶液と極性有機溶媒とを混合および攪拌
した後に静置することにより、水相と有機相とに分離す
る。一般的には、水相および有機相がそれぞれ層を形成
し、水層および有機層となる。一般的には、比重の大き
い溶媒層が下層となる。水よりも軽い比重の有機溶媒が
使用される場合、通常、下層が水層となり、上層が有機
層となる。

【０１１０】通常、水相には少量の極性有機溶媒が含ま
れており、有機相には少量の水が含まれている。例え
ば、疎水基含有水溶性有機化合物（例えば、ヘスペリジ
ンおよびルチン）を含む水溶液または懸濁液にアセトン
を添加し、攪拌し、そして静置することによって水相と
有機相（アセトン相）とが分離した場合、アセトン相に
は水が少量溶解しているために、有機相に水が含まれな
い場合と比較して疎水基含有水溶性有機化合物の溶解度
が増し、アセトン中に疎水基含有水溶性有機化合物が効
率的に溶解する。

【０１１１】水溶液と極性有機溶媒とを混合して接触さ
せている際には、その混合液を攪拌することが好まし
い。攪拌の方法の例としては、回転、振とうおよびこれ
らの併用が挙げられるがこれらに限定されない。疎水基
含有水溶性有機化合物を効率的に抽出および精製するた
めには、多段式向流分配装置（連続式液々抽出装置とも
いう）を使用することが可能である。

【０１１２】（フェノール誘導体配糖体の精製）本発明
の方法は、フェノール誘導体配糖体を精製する場合に特
に有用である。フェノール誘導体配糖体の精製の場合を
例にしてより詳細に説明する。

【０１１３】フェノール誘導体配糖体は、例えば、糖質
(例えば、マルトオリゴ糖またはデンプン)とフェノール
誘導体とを酵素の存在下で反応させることによって形成
され得る。通常、この反応は、ある段階で平衡化してそ
れ以上反応が進まなくなる。それゆえ、この酵素反応溶
液中には、フェノール誘導体、フェノール誘導体配糖体
および糖質が存在する。この酵素反応溶液が多糖または
オリゴ糖を含む場合、グルコアミラーゼのような糖分解
酵素をこの酵素反応溶液に添加してインキュベートする
ことにより、酵素反応溶液中の多糖またはオリゴ糖を単
糖に分解し得る。多糖またはオリゴ糖を単糖に分解する
と、糖質の合計重量は変化しなくてもモル数が増加し、
つまり、モル濃度が上昇して、その結果、水相と有機相
との分離がより促進される。酵素反応溶液を極性有機溶
媒と接触させて、第１の水相と少量の水を含む有機相と
を得ると、この有機相には、フェノール誘導体およびフ
ェノール誘導体配糖体が移動する。上記のように、相の
分離を促進するために、水相中に相分離補助剤を添加し
て、相分離補助剤を含有する水溶液を得て、この水溶液
を極性有機溶媒と接触させてもよい。

【０１１４】次いで、この少量の水を含む有機相を分取
する。フェノール誘導体およびフェノール誘導体配糖体
は、疎水性部分を含むので糖質よりも有機相との親和性
が高い。そのため、フェノール誘導体およびフェノール
誘導体配糖体は有機相に効率的に移動するが、糖質は有
機相にあまり移動しない。そのため、分取された有機相
の中には、フェノール誘導体およびフェノール誘導体配
糖体が抽出される。一般に、全体として同じ量の極性有
機溶媒を用いて分配抽出を行う場合、全量を水溶液に１
回に接触させて抽出を行うよりも、全量をいくつかのア
リコートに分割して水溶液の抽出を複数回行う方が抽出
効率が上がる。そのため、有機相を分取した後残った水
相に極性有機溶媒を接触させて、水相と少量の水を含む
有機相とを再度得て、この有機相を分取する工程を２回
以上行ってもよい。有機相の分取を２回以上行った場
合、得られた有機相を合わせて次の工程に用い得る。

【０１１５】次いで、少量の水を含む有機相から極性有
機溶媒が除去される。有機相から極性有機溶媒を除去す
る方法は、当業者に公知の任意の方法であり得る。この
ような方法の例としては、エバポレーターおよびエバポ
ールによる濃縮が挙げられる。極性有機溶媒は、完全に
除去されてもよく、この次の工程を妨害しない限り、少
量残存していてもよい。極性有機溶媒を除去すると、極
性有機溶媒中に含まれていた少量の水の中にフェノール
誘導体およびフェノール誘導体配糖体が残る。この除去
の工程では、水をあまり除去しないことが好ましい。こ
の除去の工程では、フェノール誘導体およびフェノール
誘導体配糖体が沈殿しないことが好ましい。沈殿してし
まった場合、水を加えてフェノール誘導体およびフェノ
ール誘導体配糖体を再度溶解することが好ましい。この
ようにして、フェノール誘導体およびフェノール誘導体
配糖体を含有する第２の水溶液が得られる。

【０１１６】次いで、第２の水溶液と酢酸エチルとを接
触させて、第２の水相と酢酸エチル相とを得ることによ
り、フェノール誘導体を酢酸エチル相に移動する。

【０１１７】次いで、第２の水相を分取する。フェノー
ル誘導体は配糖体部分を含まないので、フェノール誘導
体配糖体よりも酢酸エチル相との親和性が高い。そのた
め、フェノール誘導体は酢酸エチル相に効率的に移動す
るが、フェノール誘導体配糖体は酢酸エチル相にあまり
移動しない。そのため、分取された水相の中には、フェ
ノール誘導体配糖体が残存する。また、上記の第２の溶
液中に糖質が微量に残存していた場合、この糖質はこの
水相中に残存する。水溶液と極性有機溶媒との接触工程
および有機相の分取工程と同様に、酢酸エチル相を分取
した後残った水相に酢酸エチルを接触させて、水相と酢
酸エチル相とを再度得て、第２の水相を分取する工程を
２回以上行ってもよい。

【０１１８】なお、本明細書中では、水溶液と極性有機
溶媒との接触工程および有機相の分取工程の後に有機相
と酢酸エチルとの接触を行う方法を記載したが、水溶液
と酢酸エチルとを接触させて水相を分取した後に、この
水相と極性有機溶媒との接触を行ってもよい。

【０１１９】次いで、この第２の水相を濃縮し、そして
冷却することにより、フェノール誘導体配糖体を沈殿さ
せる。第２の水相中のフェノール誘導体配糖体の濃度が
１０％以上になるまでこの第２の水相を濃縮することが
好ましい。好ましくは１５％以上、より好ましくは２０
％以上、そして最も好ましくは２５％以上になるまで濃
縮する。これは、糖質の水中飽和濃度よりもフェノール
誘導体配糖体の水中飽和濃度の方が低いことを利用して
いる。例えば、糖質がグルコースであり、フェノール誘
導体配糖体がハイドロキノン配糖体である場合、グルコ
ースの水中飽和濃度が約１８％であり、ハイドロキノン
配糖体の水中飽和濃度が約１０％であることを利用して
いる。

【０１２０】

【実施例】次に実施例を示して本発明を更に詳しく説明
するが、本発明はこれらにより何ら制限されない。

【０１２１】＜実験例１：相分離に対する糖の影響＞各
種糖質の代表としてグルコース、スクロースおよびフル
クトースを用い、水溶液と極性有機溶媒との相の分離に
及ぼす影響を検討した。

【０１２２】詳細には、グルコース、スクロースまたは
フルクトースをそれぞれ水に溶解して、１０％、１５
％、２０％、２５％、３０％および５０％水溶液を作製
した。これらの糖の水溶液１０ｍｌに、アセトニトリル
またはテトラヒドロフランを１０ｍｌ添加した後、分液
ロートにより５分間激しく攪拌した。アセトニトリルお
よびテトラヒドロフランはいずれも、水と混和する極性
有機溶媒であり、水と混合した場合には水相と有機相に
は分離しない。攪拌終了後、混合物を３０分間静置し、
水相と有機相との２相に分離するかどうかを観察した。
テトラヒドロフランまたはアセトニトリルを各種水溶液
に添加した場合の結果を表３〜５に示す。表中ＴＨＦと
はテトラヒドロフラン、ＡｃＣＮとはアセトニトリルを
指す。

【０１２３】

【表３】

【０１２４】

【表４】

【０１２５】

【表５】 表３〜５に示すように、アセトニトリルまたはテトラヒ
ドロフランを糖の水溶液と混合した場合、ある程度の量
の糖が存在することによって、相が分離することがわか
った。

【０１２６】これらの結果から、水溶液中に含まれる糖
質の種類および濃度を調整すれば相を分離させることが
容易になり、例えば、１２％程度以上の濃度に糖を調整
することが好ましいことがわかった。

【０１２７】＜実験例２：相分離に対する塩の影響＞次
に、相分離に対する塩の影響について検討を行った。

【０１２８】詳細には、グルコース濃度が２５％または
５０％のグルコース水溶液に、それぞれ２０％または１
０％となるように塩化ナトリウムを添加して、塩化ナト
リウム含有グルコース水溶液を作製した。これらの水溶
液１０ｍｌに、極性有機溶媒であるアセトンまたはイソ
プロパノールを１０ｍｌ添加した後、分液ロートにより
５分間激しく攪拌した。攪拌終了後、混合物を３０分間
静置し、２相に分離するかどうかを観察した。結果を表
６に示す。

【０１２９】

【表６】 デキストリン濃度が２５％の水溶液に、２０％となるよ
うにクエン酸ナトリウムを添加して、クエン酸ナトリウ
ム含有デキストリン水溶液を作製した。なお、デキスト
リンは、ＤＥが７〜９の松谷化学社製のパインデックス
＃１であった。本明細書中では、「ＤＥ」とは、デンプ
ンの分解程度を示す指標であって、固形分中のグルコー
スに換算した直接還元糖百分率である。また、グルコー
ス濃度が２５％の水溶液に、１０％となるように硫酸マ
グネシウムを添加して、硫酸マグネシウム含有グルコー
ス水溶液を作製した。これらの水溶液１０ｍｌに、それ
ぞれ、極性有機溶媒であるアセトンを１０ｍｌ添加した
後、分液ロートにより５分間激しく攪拌した。攪拌終了
後、混合物を３０分間静置し、混合物が２相に分離する
かどうかを観察した。結果を表７に示す。

【０１３０】

【表７】 表６および表７に示すように、塩化ナトリウム含有グル
コース水溶液、クエン酸ナトリウム含有デキストリン水
溶液および硫酸マグネシウム含有グルコース水溶液の各
々とアセトンまたはイソプロパノールとを混合した場
合、相が分離した。５０％糖水溶液では相が分離しなか
った極性有機溶媒であっても、塩化ナトリウム、クエン
酸ナトリウム、硫酸マグネシウムなどの塩を添加するこ
とによって相が分離した。この結果、塩化ナトリウムの
ような塩が相分離補助剤として作用することがわかっ
た。塩は、水溶液に溶解した際に水溶液のイオン強度を
上昇させることによって相分離補助剤として作用すると
考えられるので、イオン強度を高めるものであれば相分
離補助剤として使用できると考えられる。

【０１３１】（実施例１：カテキン類の抽出） （実施例１ａ）カテキン類混合物（サンフェノン；太陽
化学社製）１ｇを３０％のグルコースを含む水溶液１０
０ｍｌに溶解して試料水溶液を得た。この試料水溶液の
２８０ｎｍの吸光度を測定した。この試料水溶液１０ｍ
ｌに、テトラヒドロフランを１０ｍｌ添加し、分液ロー
トにより５分間激しく攪拌した後、混合物を３０分間静
置した。その結果、混合物は２相に分離した。下相（水
相）を分取し、その容量および２８０ｎｍの吸光度を測
定した。上相（極性有機溶媒相）に抽出されたカテキン
類の量を、下相の２８０ｎｍの吸光度の減少および下相
の溶液量から算出した。その結果、１回の抽出でテトラ
ヒドロフラン相に出発物質の全量の９４．１％のカテキ
ン類が抽出されたことが解った。

【０１３２】（実施例１ｂ）テトラヒドロフラン１０ｍ
ｌに代えてアセトニトリル１０ｍｌを用いた以外は実施
例１ａと同様の操作を行った。その結果、１回の抽出で
アセトニトリル相に出発物質の全量の８４．４％のカテ
キン類が抽出されたことが解った。

【０１３３】（実施例２：カテキン類の抽出） （実施例２ａ）カテキン類混合物（サンフェノン；太陽
化学社製）１ｇを３０％のグルコースおよび１０％の塩
化ナトリウムを含む水溶液１００ｍｌに溶解して試料水
溶液を得た。この試料水溶液の２８０ｎｍの吸光度を測
定した。この試料水溶液１０ｍｌに、アセトンを１０ｍ
ｌ添加し、分液ロートにより５分間激しく攪拌した後、
混合物を３０分間静置した。その結果、混合物は２相に
分離した。下相（水相）を分取し、その容量および２８
０ｎｍの吸光度を測定した。上相（極性有機溶媒相）に
抽出されたカテキン類の量を、下相の２８０ｎｍの吸光
度の減少および下相の溶液量から算出した。その結果、
１回の抽出でアセトン相に出発物質の全量の９１．８％
のカテキン類が抽出されたことが解った。

【０１３４】（実施例２ｂ）アセトン１０ｍｌに代えて
イソプロパノール１０ｍｌを用いた以外は実施例２ａと
同様の操作を行った。その結果、１回の抽出でイソプロ
パノール相に出発物質の全量の９３．２％のカテキン類
が抽出されたことが解った。

【０１３５】（実施例３：ヘスペリジン配糖体の抽出） （実施例３ａ）ヘスペリジン配糖体（東洋精糖社製）１
ｇを３０％のグルコースを含む水溶液１００ｍｌに溶解
して試料水溶液を得た。この試料水溶液の２８０ｎｍの
吸光度を測定した。この試料水溶液１０ｍｌに、テトラ
ヒドロフランを１０ｍｌ添加し、分液ロートにより５分
間激しく攪拌した後、混合物を３０分間静置した。その
結果、混合物は２相に分離した。下相（水相）を分取
し、その容量および２８０ｎｍの吸光度を測定した。上
相（極性有機溶媒相）に抽出されたヘスペリジン配糖体
の量を、下相の２８０ｎｍの吸光度の減少および下相の
溶液量から算出した。その結果、１回の抽出でテトラヒ
ドロフラン相に出発物質の全量の５０．０％のヘスペリ
ジン配糖体が抽出されたことが解った。さらにテトラヒ
ドロフラン抽出後に分取した水相に５ｍｌのテトラヒド
ロフランを添加し同様の操作および測定を再度行ったと
ころ、合計８０．０％のヘスペリジン配糖体が抽出され
たことが解った。

【０１３６】（実施例３ｂ）テトラヒドロフラン１０ｍ
ｌに代えてアセトニトリル１０ｍｌを用いた以外は実施
例３ａと同様の操作を行った。その結果、１回の抽出で
アセトニトリル相に出発物質の全量の２７．６％のヘス
ペリジン配糖体が抽出されたことが解った。

【０１３７】（実施例４：ヘスペリジン配糖体の抽出） （実施例４ａ）ヘスペリジン配糖体（東洋精糖社製）１
ｇを３０％のグルコースおよび１０％の塩化ナトリウム
を含む水溶液１００ｍｌに溶解して試料水溶液を得た。
この試料水溶液の２８０ｎｍの吸光度を測定した。この
試料水溶液１０ｍｌに、アセトンを１０ｍｌ添加し、分
液ロートにより５分間激しく攪拌した後、混合物を３０
分間静置した。その結果、混合物は２相に分離した。下
相（水相）を分取し、その容量および２８０ｎｍの吸光
度を測定した。上相（極性有機溶媒相）に抽出されたヘ
スペリジン配糖体の量を、下相の２８０ｎｍの吸光度の
減少および下相の溶液量から算出した。その結果、１回
の抽出でアセトン相に出発物質の全量の４３．５％のヘ
スペリジン配糖体が抽出されたことが解った。さらにア
セトン抽出後に分取した水相に５ｍｌのアセトンを添加
し同様の操作および測定を２回行ったところ、合計９
０．０％のヘスペリジン配糖体が抽出されたことが解っ
た。

【０１３８】（実施例４ｂ）アセトン１０ｍｌに代えて
イソプロパノール１０ｍｌを用いた以外は実施例４ａと
同様の操作を行った。その結果、１回の抽出でイソプロ
パノール相に出発物質の全量の３２．０％のヘスペリジ
ン配糖体が抽出されたことが解った。

【０１３９】（実施例５：サリシンの抽出） （実施例５ａ）サリシン１ｇを３０％のグルコースを含
む水溶液１００ｍｌに溶解して試料水溶液を得た。この
試料水溶液の２８０ｎｍの吸光度を測定した。この試料
水溶液１０ｍｌに、テトラヒドロフランを１０ｍｌ添加
し、分液ロートにより５分間激しく攪拌した後、混合物
を３０分間静置した。その結果、混合物は２相に分離し
た。下相（水相）を分取し、その容量および２８０ｎｍ
の吸光度を測定した。上相（極性有機溶媒相）に抽出さ
れたサリシンの量を、下相の２８０ｎｍの吸光度の減少
および下相の溶液量から算出した。その結果、１回の抽
出でテトラヒドロフラン相に出発物質の全量の９６．５
％のサリシンが抽出されたことが解った。

【０１４０】（実施例５ｂ）テトラヒドロフラン１０ｍ
ｌに代えてアセトニトリル１０ｍｌを用いた以外は実施
例５ａと同様の操作を行った。その結果、１回の抽出で
アセトニトリル相に出発物質の全量の９８．１％のサリ
シンが抽出されたことが解った。

【０１４１】（実施例６：サリシンの抽出） （実施例６ａ）サリシン１ｇを３０％のグルコースおよ
び１０％の塩化ナトリウムを含む水溶液１００ｍｌに溶
解して試料水溶液を得た。この試料水溶液の２８０ｎｍ
の吸光度を測定した。この試料水溶液１０ｍｌに、アセ
トンを１０ｍｌ添加し、分液ロートにより５分間激しく
攪拌した後、混合物を３０分間静置した。その結果、混
合物は２相に分離した。下相（水相）を分取し、その容
量および２８０ｎｍの吸光度を測定した。上相（極性有
機溶媒相）に抽出されたサリシンの量を、下相の２８０
ｎｍの吸光度の減少および下相の溶液量から算出した。
その結果、１回の抽出でアセトン相に出発物質の全量の
５８．０％のサリシンが抽出されたことが解った。

【０１４２】（実施例６ｂ）アセトン１０ｍｌに代えて
イソプロパノール１０ｍｌを用いた以外は実施例６ａと
同様の操作を行った。その結果、１回の抽出でイソプロ
パノール相に出発物質の全量の９７．０％のサリシンが
抽出されたことが解った。

【０１４３】（実施例７：コーヒー酸の抽出） （実施例７ａ）コーヒー酸１ｇを３０％のグルコースを
含む水溶液１００ｍｌに溶解して試料水溶液を得た。こ
の試料水溶液の２８０ｎｍの吸光度を測定した。この試
料水溶液１０ｍｌに、テトラヒドロフランを１０ｍｌ添
加し、分液ロートにより５分間激しく攪拌した後、混合
物を３０分間静置した。その結果、混合物は２相に分離
した。下相（水相）を分取し、その容量および２８０ｎ
ｍの吸光度を測定した。上相（極性有機溶媒相）に抽出
されたコーヒー酸の量を、下相の２８０ｎｍの吸光度の
減少および下相の溶液量から算出した。その結果、１回
の抽出でテトラヒドロフラン相に出発物質の全量の８
８．６％のコーヒー酸が抽出されたことが解った。

【０１４４】（実施例７ｂ）テトラヒドロフラン１０ｍ
ｌに代えてアセトニトリル１０ｍｌを用いた以外は実施
例７ａと同様の操作を行った。その結果、１回の抽出で
アセトニトリル相に出発物質の全量の７６．２％のコー
ヒー酸が抽出されたことが解った。

【０１４５】（実施例８：コーヒー酸の抽出） （実施例８ａ）コーヒー酸１ｇを３０％のグルコースお
よび１０％の塩化ナトリウムを含む水溶液１００ｍｌに
溶解して試料水溶液を得た。この試料水溶液の２８０ｎ
ｍの吸光度を測定した。この試料水溶液１０ｍｌに、ア
セトンを１０ｍｌ添加し、分液ロートにより５分間激し
く攪拌した後、混合物を３０分間静置した。その結果、
混合物は２相に分離した。下相（水相）を分取し、その
容量および２８０ｎｍの吸光度を測定した。上相（極性
有機溶媒相）に抽出されたコーヒー酸の量を、下相の２
８０ｎｍの吸光度の減少および下相の溶液量から算出し
た。その結果、１回の抽出でアセトン相に出発物質の全
量の７８．２％のコーヒー酸が抽出されたことが解っ
た。

【０１４６】（実施例８ｂ）アセトン１０ｍｌに代えて
イソプロパノール１０ｍｌを用いた以外は実施例８ａと
同様の操作を行った。その結果、１回の抽出でイソプロ
パノール相に出発物質の全量の８７．２％のコーヒー酸
が抽出されたことが解った。

【０１４７】（実施例９：サリシルアルコールの抽出） （実施例９ａ）サリシルアルコール１ｇを３０％のグル
コースを含む水溶液１００ｍｌに溶解して試料水溶液を
得た。この試料水溶液の２８０ｎｍの吸光度を測定し
た。この試料水溶液１０ｍｌに、テトラヒドロフランを
１０ｍｌ添加し、分液ロートにより５分間激しく攪拌し
た後、混合物を３０分間静置した。その結果、混合物は
２相に分離した。下相（水相）を分取し、その容量およ
び２８０ｎｍの吸光度を測定した。上相（極性有機溶媒
相）に抽出されたサリシルアルコールの量を、下相の２
８０ｎｍの吸光度の減少および下相の溶液量から算出し
た。その結果、１回の抽出でテトラヒドロフラン相に出
発物質の全量の９８．７％のサリシルアルコールが抽出
されたことが解った。

【０１４８】（実施例９ｂ）テトラヒドロフラン１０ｍ
ｌに代えてアセトニトリル１０ｍｌを用いた以外は実施
例９ａと同様の操作を行った。その結果、１回の抽出で
アセトニトリル相に出発物質の全量の９８．２％のサリ
シルアルコールが抽出されたことが解った。

【０１４９】（実施例１０：サリシルアルコールの抽
出） （実施例１０ａ）サリシルアルコール１ｇを３０％のグ
ルコースおよび１０％の塩化ナトリウムを含む水溶液１
００ｍｌに溶解して試料水溶液を得た。この試料水溶液
の２８０ｎｍの吸光度を測定した。この試料水溶液１０
ｍｌに、アセトンを１０ｍｌ添加し、分液ロートにより
５分間激しく攪拌した後、混合物を３０分間静置した。
その結果、混合物は２相に分離した。下相（水相）を分
取し、その容量および２８０ｎｍの吸光度を測定した。
上相（極性有機溶媒相）に抽出されたサリシルアルコー
ルの量を、下相の２８０ｎｍの吸光度の減少および下相
の溶液量から算出した。その結果、１回の抽出でアセト
ン相に出発物質の全量の８７．７％のサリシルアルコー
ルが抽出されたことが解った。

【０１５０】（実施例１０ｂ）アセトン１０ｍｌに代え
てイソプロパノール１０ｍｌを用いた以外は実施例１０
ａと同様の操作を行った。その結果、１回の抽出でイソ
プロパノール相に出発物質の全量の９８．７％のサリシ
ルアルコールが抽出されたことが解った。

【０１５１】（実施例１１：エラジタンニンおよびその
重合物の抽出） （実施例１１ａ）甜茶抽出物水溶液（サン甜茶；サント
リー社製）を水で２倍希釈して２倍希釈液を得た。この
２倍希釈液にグルコースを１０％、塩化ナトリウムを１
０％となるように添加し溶解して水溶液を得た。この水
溶液の２８０ｎｍの吸光度を測定した。この水溶液２０
ｍｌに、アセトン２０ｍｌを添加し、分液ロートにより
５分間激しく攪拌した後、混合物を３０分間静置した。
その結果、混合物は２相に分離した。下相（水相）を分
取し、その容量および２８０ｎｍの吸光度を測定した。
上相（極性有機溶媒相）に抽出された有効成分（エラジ
タンニンおよびその重合物が有効成分である）の量を、
下相の２８０ｎｍの吸光度の減少および下相の溶液量か
ら算出した。その結果、１回の抽出でアセトン相に４
３．１％の有効成分が抽出されたことが解った。さらに
着色のレベルはアセトン相の方が水相の３分の１程度と
なっていた。このことから、抽出によって、有効成分が
抽出され、そして脱色効果が得られたことがわかった。

【０１５２】（実施例１２：果汁からのヘスペリジンの
抽出）カリフォルニアオレンジ果汁濃縮液（５倍濃縮
液）１０ｍｌに１５％の塩化ナトリウム水を１０ｍｌ添
加し、均一になるように攪拌して水溶液を得た。使用し
たカリフォルニアオレンジ果汁濃縮液中のヘスペリジン
の量を、カラムＯＤＳを用い、移動相をアセトニトリ
ル：水＝２０：８０とし、流速０．５ｍｌ／分でカラム
温度４０℃でＨＰＬＣを行い、溶出液の吸光度を２８０
ｎｍで検出することにより測定した。ヘスペリジン量の
詳細な検出方法は、日本国特許公開平８−８０１７７号
公報に記載される。得られた水溶液２０ｍｌに、アセト
ン２０ｍｌを添加し、分液ロートにより５分間激しく攪
拌した後、混合物を３０分間静置した。その結果、混合
物は２相に分離した。上相（極性有機溶媒相）を分取
し、その容量を測定し、そしてヘスペリジンの量を、上
記のようにＨＰＬＣにより測定した。その結果、１回の
抽出でアセトン相に７５％のヘスペリジンが抽出されて
いた。

【０１５３】（実施例１３：配糖化反応溶液からのヘス
ペリジンの抽出）可溶性デンプン（メルク社製）５％お
よびヘスペリジン０．５％が溶解している水溶液を塩酸
によりｐＨ９．０に調整し、アルカリ耐性のＣＧＴａｓ
ｅ（日本国特許公開平７−１０７９７２号公報に記載の
ＣＧＴａｓｅ）を５ユニット／ｍｌの濃度になるように
この水溶液に添加し、次いで３７℃で１６時間酵素反応
させた。酵素反応終了後、酵素反応溶液の一部を採取し
て、ＨＰＬＣ分析方法によってヘスペリジンおよびヘス
ペリジン配糖体の量を測定した。ＨＰＬＣ分析方法にお
いては、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ １００ＲＰ１８（Ｍ
ｅｒｃｋ；４．０×２５０ｍｍ）のカラムを用い、移動
相はアセトニトリル：水＝２０：８０（ｖ／ｖ）であ
り、流速は０．５ｍｌ／分であり、カラム温度は４０℃
であり、溶出液の吸光度を２８０ｎｍで検出した。ヘス
ペリジンおよびヘスペリジン配糖体の分析方法は、日本
国特許公開平８−８０１７７号号公報に記載される。そ
の結果、酵素反応により、反応開始時に投入したヘスペ
リジンの約８０％がヘスペリジン配糖体となったことが
わかった。

【０１５４】次いで、この酵素反応終了後の酵素反応溶
液にグルコースを２０％および塩化ナトリウムを１０％
となるように添加し、溶解してグルコースおよび塩化ナ
トリウムを含有する酵素反応溶液を得た。グルコースお
よび塩化ナトリウムを含有する酵素反応溶液に、等容量
のアセトンを添加した。分液ロートにより５分間激しく
攪拌した後、混合物を３０分間静置した。その結果、混
合物は２相に分離した。上相のアセトン相を分取し、そ
の容量を測定し、そしてアセトン相に溶解しているヘス
ペリジン配糖体の量を、上記のようにＨＰＬＣにより測
定した。その結果、酵素反応終了後の酵素反応溶液中に
存在したヘスペリジン配糖体のうちの約４５％のヘスペ
リジン配糖体がアセトン相中に抽出されていた。さら
に、下相の水相に、酵素反応溶液の容量の半分量のアセ
トンを添加し、攪拌し、静置し、上相を分取するとい
う、同様の抽出操作を３回行った結果、ヘスペリジン配
糖体を全量回収することができた。

【０１５５】（実施例１４：配糖化反応溶液からのハイ
ドロキノン配糖体の抽出）デキストリン（ＤＥが７〜９
のパインデックス＃１；松谷化学社製）３５％およびハ
イドロキノン１５％が溶解している水溶液を５Ｎ水酸化
ナトリウム水溶液によりｐＨ６．５に調整し、配糖化酵
素（日本国特許公開平６−２７７０５３号公報に記載の
アミラーゼＸ−２３）を２０ユニット／ｍｌの濃度にな
るようにこの水溶液に添加し、次いで４５℃で４０時間
インキュベートしてハイドロキノンへの配糖化反応をお
こなった。酵素反応終了後、酵素反応溶液の一部を採取
して、ＨＰＬＣ分析方法によってハイドロキノンおよび
ハイドロキノン配糖体の量を測定した。このＨＰＬＣ分
析方法においては、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ １００Ｒ
Ｐ１８（Ｍｅｒｃｋ；４．０×２５０ｍｍ）のカラムを
用い、移動相は水：メタノール：リン酸＝８０：１９．
７：０．３（ｖ／ｖ）であり、流速は０．５ｍｌ／分で
あり、カラム温度は４０℃であり、溶出液中のハイドロ
キノンおよびハイドロキノン配糖体の量を紫外分光法に
よって検出した。この酵素反応溶液を用いて、ＨＰＬＣ
分析方法によって生成物グルコースおよびマルトオリゴ
糖の量を測定した。このＨＰＬＣ分析方法においては、
ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ ＮＨ_２（Ｍｅｒｃｋ；４．０×
２５０ｍｍ）のカラムを用い、移動相は水：アセトニト
リル＝２５：７５（ｖ／ｖ）であり、流速は１．０ｍｌ
／分であり、カラム温度は４０℃であり、溶出液中のマ
ルトオリゴ糖をＲＩ検出器によって検出した。その結
果、この酵素反応によりハイドロキノンの約３５％がハ
イドロキノン配糖体となっており、デキストリンはグル
コースおよびマルトオリゴ糖に分解されていることがわ
かった。さらに、酵素反応終了後の酵素反応溶液に、グ
ルコアミラーゼ（ナガセケムテックス社製；商品名ＸＬ
−４）を８．８ユニット／ｍｌの濃度になるように添加
して４５℃で３時間インキュベートすることによって、
酵素反応溶液中のオリゴ糖をグルコースに分解した。

【０１５６】次いで、このオリゴ糖分解後の酵素反応溶
液に、酵素反応溶液と等容量のテトラヒドロフランを添
加した。分液ロートにより５分間激しく攪拌した後、混
合物を３０分間静置した。その結果、混合物は２相に分
離した。上相のテトラヒドロフラン相を分取し、その容
量を測定し、そしてテトラヒドロフラン相に溶解してい
るハイドロキノン配糖体の量を、上記のようにＨＰＬＣ
により分析した。その結果、酵素反応終了後の酵素反応
溶液中に存在したハイドロキノン配糖体のうちの約６５
％のハイドロキノン配糖体がテトラヒドロフラン相中に
抽出されていた。さらに、下相の水相に、酵素反応溶液
の容量の半分量のテトラヒドロフランを添加し、攪拌
し、静置し、上相を分取するという、同様の抽出操作を
３回行った結果、ハイドロキノン配糖体を全量回収する
ことができた。

【０１５７】（実施例１５：配糖化反応溶液からのハイ
ドロキノン配糖体の抽出）デキストリン（ＤＥが７〜９
のパインデックス＃１；松谷化学社製）３５％およびハ
イドロキノン１５％が溶解している水溶液を５Ｎ水酸化
ナトリウム水溶液によりｐＨ６．５に調整し、配糖化酵
素（日本国特許公開平６−２７７０５３号公報に記載の
アミラーゼＸ−２３）を２０ユニット／ｍｌの濃度にな
るように添加し、次いで４５℃で４０時間インキュベー
トしてハイドロキノンへの配糖化反応をおこなった。酵
素反応終了後、酵素反応溶液の一部を採取して、ＨＰＬ
Ｃ分析方法によってハイドロキノンおよびハイドロキノ
ン配糖体の量を測定した。このＨＰＬＣ分析方法におい
ては、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ １００ＲＰ１８（Ｍｅ
ｒｃｋ；４．０×２５０ｍｍ）のカラムを用い、移動相
は水：メタノール：リン酸＝８０：１９．７：０．３
（ｖ／ｖ）であり、流速は０．５ｍｌ／分であり、カラ
ム温度は４０℃であり、溶出液中のハイドロキノンおよ
びハイドロキノン配糖体の量を紫外分光法によって検出
した。この酵素反応溶液を用いて、ＨＰＬＣ分析方法に
よって生成物グルコースおよびマルトオリゴ糖の量を測
定した。このＨＰＬＣ分析方法においては、ＬｉＣｈｒ
ｏｓｏｒｂ ＮＨ_２（Ｍｅｒｃｋ；４．０×２５０ｍ
ｍ）のカラムを用い、移動相は水：アセトニトリル＝２
５：７５であり、流速は１．０ｍｌ／分であり、カラム
温度は４０℃であり、溶出液中のマルトオリゴ糖をＲＩ
検出器によって検出した。その結果、この酵素反応によ
りハイドロキノンの約３５％がハイドロキノン配糖体と
なっており、デキストリンはグルコースおよびマルトオ
リゴ糖に分解されていることがわかった。さらに、酵素
反応終了後の酵素反応溶液に、グルコアミラーゼ（ナガ
セケムテックス社製；商品名ＸＬ−４）を８．８ユニッ
ト／ｍｌの濃度になるように添加して４５℃で３時間イ
ンキュベートすることによって、酵素反応溶液中のオリ
ゴ糖をグルコースに分解した。

【０１５８】次いで、このオリゴ糖分解後の酵素反応液
をエバポレーターを用いて、約１．４倍に減圧濃縮し
た。この濃縮液に対して２０％となるよう硫酸アンモニ
ウムを添加して、硫酸アンモニウム含有濃縮液を得た。
この硫酸アンモニウム含有濃縮液に対して、この濃縮液
と等容量のアセトンを添加した。分液ロートにより５分
間激しく攪拌した後、混合物を３０分間静置した。その
結果、混合物は２相に分離した。上相のアセトン相を分
取し、その容量を測定し、そしてアセトン相に溶解して
いるハイドロキノン配糖体量を上記のようにＨＰＬＣに
より分析した。その結果、酵素反応終了後の酵素反応溶
液中に存在したハイドロキノン配糖体のうちの約６０％
のハイドロキノン配糖体がアセトン相中に抽出されてい
た。さらに、下相の水相に、濃縮液の容量の０．８容量
のアセトンを添加し、攪拌し、静置し、上相を分取する
という、同様の抽出操作を３回行った結果、ハイドロキ
ノン配糖体を全量回収することができた。

【０１５９】（実施例１６：配糖化反応溶液からのハイ
ドロキノン配糖体の抽出）デキストリン（ＤＥが７〜９
のパインデックス＃１；松谷化学社製）３５％およびハ
イドロキノン１５％が溶解している水溶液を５Ｎ水酸化
ナトリウム水溶液によりｐＨ６．５に調整し、配糖化酵
素（日本国特許公開平６−２７７０５３号公報に記載の
アミラーゼＸ−２３）を２０ユニット／ｍｌの濃度にな
るように添加し、次いで４５℃で４０時間インキュベー
トしてハイドロキノンへの配糖化反応をおこなった。酵
素反応終了後、酵素反応溶液の一部を採取して、ＨＰＬ
Ｃ分析方法によってハイドロキノンおよびハイドロキノ
ン配糖体の量を測定した。このＨＰＬＣ分析方法におい
ては、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ １００ＲＰ１８（Ｍｅ
ｒｃｋ；４．０×２５０ｍｍ）のカラムを用い、移動相
は水：メタノール：リン酸＝８０：１９．７：０．３
（ｖ／ｖ）であり、流速は０．５ｍｌ／分であり、カラ
ム温度は４０℃であり、溶出液中のハイドロキノンおよ
びハイドロキノン配糖体の量を紫外分光法によって検出
した。この酵素反応溶液を用いて、ＨＰＬＣ分析方法に
よって生成物グルコースおよびマルトオリゴ糖の量を測
定した。このＨＰＬＣ分析方法においては、ＬｉＣｈｒ
ｏｓｏｒｂ ＮＨ_２（Ｍｅｒｃｋ；４．０×２５０ｍ
ｍ）のカラムを用い、移動相は水：アセトニトリル＝２
５：７５（ｖ／ｖ）であり、流速は１．０ｍｌ／分であ
り、カラム温度は４０℃であり、溶出液中のマルトオリ
ゴ糖をＲＩ検出器によって検出した。その結果、この酵
素反応によりハイドロキノンの約３５％がハイドロキノ
ン配糖体となっており、デキストリンはグルコースおよ
びマルトオリゴ糖に分解されていることがわかった。さ
らに、酵素反応終了後の酵素反応溶液に、グルコアミラ
ーゼ（ナガセケムテックス社製；商品名ＸＬ−４）を
８．８ユニット／ｍｌの濃度になるように添加して４５
℃で３時間インキュベートすることによって、酵素反応
溶液中のオリゴ糖をグルコースに分解した。

【０１６０】次いで、このオリゴ糖分解後の酵素反応液
に、この酵素反応液と等容量のアセトニトリルを添加し
た。分液ロートにより５分間激しく攪拌した後、混合物
を１時間静置した。その結果、混合物は２相に分離し
た。上相のアセトニトリル相を分取し、その容量を測定
し、そしてアセトニトリル相に溶解しているハイドロキ
ノン配糖体量を上記のようにＨＰＬＣにより分析した。
その結果、酵素反応終了後の酵素反応溶液中に存在した
ハイドロキノン配糖体のうちの約３０％のハイドロキノ
ン配糖体がアセトニトリル相に抽出されていた。さら
に、下相の水相に、酵素反応溶液と等容量のアセトニト
リルを添加し、攪拌し、静置し、上相を分取するとい
う、同様の抽出操作を５回行った結果、酵素反応終了後
の酵素反応溶液中に存在したハイドロキノン配糖体のう
ちの約９０％のハイドロキノン配糖体を回収することが
できた。

【０１６１】（実施例１７：グルコアミラーゼ処理条件
の検討）出発物質としてデキストリンまたはデンプンを
用いて配糖化酵素反応を行った場合、反応終了後の酵素
反応溶液中には出発物質よりも低分子量の多量のグルコ
ースおよびデキストリンが存在する。糖質全体の濃度が
同じであっても、モル数が高い方が、有機相への糖の移
動が少なくなる。そこで、配糖化酵素反応後に残存する
デキストリンを効率的にグルコースへと分解するため
に、デキストリン分解反応の条件を検討した。

【０１６２】デキストリン（ＤＥが７〜９のパインデッ
クス＃１；松谷化学社製）３５％およびハイドロキノン
１５％が溶解している水溶液を５Ｎ水酸化ナトリウム水
溶液によりｐＨ６．５に調整し、配糖化酵素（日本国特
許公開平６−２７７０５３号公報に記載のアミラーゼＸ
−２３）を２０ユニット／ｍｌの濃度になるように添加
し、次いで４５℃で４０時間インキュベートしてハイド
ロキノンへの配糖化反応をおこなった。

【０１６３】この反応終了後の配糖化反応溶液１ｍｌに
対して、１．４μｌ（１倍量）、２．１μｌ（１．５倍
量）または２．８μｌ（２倍量）のグルコアミラーゼ
（ナガセケムテックス社製；商品名ＸＬ−４）を加え
た。この後、４５℃で３時間または４時間インキュベー
トした。インキュベート終了後、ＨＰＬＣ分析方法によ
ってこの溶液中のグルコースおよびマルトースの含量を
確認した。このＨＰＬＣ分析方法においては、ＬｉＣｈ
ｒｏｓｏｒｂ ＮＨ_２（Ｍｅｒｃｋ；４．０×２５０ｍ
ｍ）のカラムを用い、移動相は水：アセトニトリル＝２
５：７５（ｖ／ｖ）であり、流速は１．０ｍｌ／分であ
り、カラム温度は４０℃であり、溶出液中のグルコース
およびマルトースをＲＩ検出器によって検出した。ま
た、ＨＰＬＣ分析方法によって溶出液中のハイドロキノ
ンおよびハイドロキノン配糖体の量を測定した。このＨ
ＰＬＣ分析方法においては、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ
１００ＲＰ１８（Ｍｅｒｃｋ；４．０×２５０ｍｍ）の
カラムを用い、移動相は水：メタノール：リン酸＝８
０：１９．７：０．３（ｖ／ｖ）であり、流速は０．５
ｍｌ／分であり、カラム温度は４０℃であり、溶出液中
のハイドロキノンおよびハイドロキノン配糖体の量を紫
外分光法によって検出した。得られたハイドロキノンお
よびハイドロキノン配糖体（ＨＱＧ）の量から、ハイド
ロキノン配糖化率を算出した。結果を以下の表８に示
す。

【０１６４】

【表８】 １倍量のグルコアミラーゼを用いて糖の分解を３時間ま
たは４時間行っても、グルコアミラーゼを添加する前の
酵素反応溶液と糖組成がほぼ同じであった。このことか
ら、グルコアミラーゼが１倍量である場合、反応を１、
２時間延長した程度ではマルトース量は劇的には減量し
ない可能性が示唆された。

【０１６５】また、グルコアミラーゼを増量しても配糖
化率はほとんど変わらなかった。このことは、目的の生
成物であるハイドロキノン配糖体を分解することなく、
グルコアミラーゼがデキストリンを分解できることを示
す。それゆえ、デキストリンの分解を促進するために
は、分解反応の時間を延長するよりも、グルコアミラー
ゼを増量するほうが効果的であることがわかった。

【０１６６】次いで、このグルコアミラーゼ処理の違い
がＴＨＦ処理に及ぼす影響を調べた。上記で得られた
（ＸＬ−４）処理液１ｍｌとＴＨＦ１ｍｌとを混合し、
分液ロートにより１分間激しく振盪し、混合物を振盪後
１時間静置した。その結果、混合物は２相に分離した。
水相を分取し、この水相に水を加えて１ｍｌにした。こ
の水相を用いて、ＨＰＬＣ分析方法によってグルコース
およびマルトースの量を測定した。このＨＰＬＣ分析方
法においては、ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ ＮＨ_２（Ｍｅｒ
ｃｋ；４．０×２５０ｍｍ）のカラムを用い、移動相は
水：アセトニトリル＝２５：７５（ｖ／ｖ）であり、流
速は１．０ｍｌ／分であり、カラム温度は４０℃であ
り、溶出液中のグルコースおよびマルトースをＲＩ検出
器によって検出した。また、ＨＰＬＣ分析方法によって
ハイドロキノンおよびハイドロキノン配糖体の量を測定
した。このＨＰＬＣ分析方法においては、ＬｉＣｈｒｏ
ｓｐｈｅｒ １００ＲＰ１８（Ｍｅｒｃｋ；４．０×２
５０ｍｍ）のカラムを用い、移動相は水：メタノール：
リン酸＝８０：１９．７：０．３（ｖ／ｖ）であり、流
速は０．５ｍｌ／分であり、カラム温度は４０℃であ
り、溶出液中のハイドロキノンおよびハイドロキノン配
糖体の量を紫外分光法によって測定した。得られた結果
と、ＴＨＦでの抽出前の上記のグルコース濃度、マルト
ース濃度およびＨＱＧ濃度とに基づいて、ＴＨＦ相への
抽出率を計算した。結果を以下の表９に示す。

【０１６７】

【表９】 この結果、グルコアミラーゼ処理を行ってグルコース濃
度が上昇するほど、ＴＨＦ相へのグルコースの抽出が抑
えられる傾向が確認された。

【０１６８】グルコアミラーゼ添加量が多いサンプルほ
ど、ＴＨＦとの振盪、分液後の水相の液量が少なくなる
（ＴＨＦ相への水の流入が少なくなる）傾向もまた確認
された。

【０１６９】（実施例１８：テトラヒドロフラン相への
抽出に対する糖質濃度の影響）テトラヒドロフラン（Ｔ
ＨＦ）相への抽出に対する、水溶液中のグルコース濃度
の影響を検討した。

【０１７０】まず、４２％グルコースおよび９％ハイド
ロキノン配糖体を含む水溶液を調製した。この水溶液を
水で段階的に希釈することによって、グルコース濃度が
４０％〜２０％の水溶液を作製した。当然、水溶液を希
釈することによって、グルコースだけでなく、ハイドロ
キノン配糖体も希釈されている。このようにして調製さ
れた水溶液５ｍｌに５ｍｌのＴＨＦを加え、３０℃にて
５分間ミキサーで攪拌し、攪拌終了後、混合物を３００
０ｒｐｍにて５分間遠心分離を行った。上相を分取し
た。グルコース濃度が低くなるに従ってＴＨＦ相が少な
くなっていき、２０％では１回目抽出で相が分離しなか
った。下相に再度５ｍｌのＴＨＦを加え、同様にして上
相を分取した。各水溶液について得られた２つの上相を
それぞれ合わせた。ＨＰＬＣ分析方法によってこの溶液
中のグルコースおよびマルトースの含量を測定した。こ
のＨＰＬＣ分析方法においては、ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ
ＮＨ_２（Ｍｅｒｃｋ；４．０×２５０ｍｍ）のカラム
を用い、移動相は水：アセトニトリル＝２５：７５であ
り、流速は１．０ｍｌ／分であり、カラム温度は４０℃
であり、溶出液中のグルコースおよびマルトースをＲＩ
検出器によって検出した。また、ＨＰＬＣ分析方法によ
ってハイドロキノンおよびハイドロキノン配糖体の量を
測定した。このＨＰＬＣ分析方法においては、ＬｉＣｈ
ｒｏｓｐｈｅｒ１００ＲＰ１８（Ｍｅｒｃｋ；４．０×
２５０ｍｍ）のカラムを用い、移動相は水：メタノー
ル：リン酸＝８０：１９．７：０．３（ｖ／ｖ）であ
り、流速は０．５ｍｌ／分であり、カラム温度は４０℃
であり、溶出液中のハイドロキノンおよびハイドロキノ
ン配糖体の量を紫外分光法によって測定した。

【０１７１】結果を図１に示す。図１からわかるよう
に、ハイドロキノン配糖体の移動率はグルコース濃度に
それほど依存しなかった。しかし、グルコースの移動率
は、グルコース濃度が高くなるにしたがって低くなっ
た。このことから、抽出に用いる水溶液中の糖質濃度を
高めれば、疎水基含有水溶性有機化合物と比較して糖の
極性有機溶媒相への移動が少なくなり、高純度の疎水基
含有水溶性有機化合物が得られることがわかった。

【０１７２】（実施例１９：ハイドロキノン配糖体の抽
出に対する、配糖化反応溶液の濃縮の影響）上記実施例
１８に示すように、水溶液中の糖質の濃度を高めれば、
有機相への糖質の移動が抑制されて、疎水基含有水溶性
有機化合物が有機相に効率よく移動することがわかっ
た。それゆえ、疎水基含有水溶性有機化合物を含む酵素
反応溶液を濃縮することによって、有機相への糖質の移
動が抑えられ、疎水基含有水溶性有機化合物の抽出効率
が上がるかどうかを確認した。

【０１７３】まず、デキストリン（ＤＥが７〜９のパイ
ンデックス＃１；松谷化学社製）３５％およびハイドロ
キノン１５％が溶解している水溶液を５Ｎ水酸化ナトリ
ウム水溶液によりｐＨ６．５に調整し、配糖化酵素（日
本国特許公開平６−２７７０５３号公報に記載のアミラ
ーゼＸ−２３）を２０ユニット／ｍｌの濃度になるよう
に添加し、次いで４５℃で４０時間インキュベートして
ハイドロキノンへの配糖化反応をおこなった。この反応
終了後の配糖化反応溶液１ｍｌあたり２．１μｌ（１．
５倍量）のグルコアミラーゼ（ナガセケムテックス社
製；商品名ＸＬ−４）を加えた。この後、４５℃で４時
間グルコアミラーゼ処理を行い、反応溶液を得た。

【０１７４】この反応溶液５ｍｌを、エバポレーターに
よって濃縮して、容積が８０％（４．０ｍｌ）または７
０％（３．５ｍｌ）になるように濃縮した。未濃縮の反
応溶液、８０％の濃縮液または７０％の濃縮液に、ＴＨ
Ｆを等容量加えて、ミキサーにより１分間激しく振盪
し、３０℃の条件下で抽出を行い、混合物を１時間静置
したところ、混合物は２相に分離した。上相のＴＨＦ相
を分取した。得られたＴＨＦ相を、上記のようにＨＰＬ
Ｃによってグルコース、マルトースおよびハイドロキノ
ン配糖体の含量について分析した。下相の水相に、水相
の容量の０．５倍の容量のＴＨＦを再度加え、振盪し、
抽出し、上相のＴＨＦ相を分取することをさらに２回繰
り返した。得られたＴＨＦ相を合わせた。なお、濃縮液
では分液時に中間層が発生したが、中間層は水相に加え
た。結果を以下の表１０〜１２に示す。

【０１７５】

【表１０】

【０１７６】

【表１１】

【０１７７】

【表１２】 この結果、予想した通り、グルコアミラーゼ処理後の反
応液を濃縮してからＴＨＦ抽出を行うことにより、ＴＨ
Ｆ相へのグルコース抽出量を、未濃縮の場合の５０％〜
６０％程度に抑制することができた。

【０１７８】（実施例２０：相の分離に対する疎水基含
有水溶性有機化合物の影響）実施例１７に記載されるよ
うに、配糖化反応溶液をＴＨＦで抽出する場合、グルコ
ース濃度が２０％以下でも水相と有機相とは完全に分離
し、ＴＨＦ相の方が水相よりも大きくなった。一方、上
記実施例１８では、４２％グルコースおよび９％ハイド
ロキノン配糖体を含有する溶液（この溶液には、ハイド
ロキノンがほとんど入っていない）を、グルコース濃度
が２０％になるように水で希釈した場合、ＴＨＦを添加
しても相が分離しなかった。そこで、相の分離に対する
疎水基含有水溶性有機化合物の影響を調べた。

【０１７９】上記実施例１８で調製した２０％グルコー
ス含有希釈液に、１０％となるようにハイドロキノンを
添加して水溶液を得た。この水溶液に、等容量のＴＨＦ
を添加して、ミキサーにより５分間攪拌し、そして１時
間静置した。その結果、ＴＨＦ相と水相とに完全に分離
した。また、ＴＨＦ相に水が混入して、ＴＨＦ相の方が
水相よりも大きくなった。ＴＨＦ相を分取し、ＴＨＦ中
のハイドロキノン配糖体の含量を上記のようにＨＰＬＣ
によって測定した。その結果、ハイドロキノンを添加し
ない場合よりも多量のハイドロキノン配糖体が抽出され
たことがわかった。これは、ハイドロキノンのようなＴ
ＨＦ相に良く溶ける物質を水相に加えることでＴＨＦが
水相に移動しなくなるため、分離がよくなったうえ、高
濃度のハイドロキノンがＴＨＦに溶解することでハイド
ロキノンが配糖体の移行を促進したためと考えられる。

【０１８０】（実施例２１：テトラヒドロフラン相への
抽出に対する温度の影響）テトラヒドロフラン相への抽
出に対する温度の影響を調べた。

【０１８１】まず、デキストリン（ＤＥが７〜９のパイ
ンデックス＃１；松谷化学社製）３５％およびハイドロ
キノン１５％が溶解している水溶液を５Ｎ水酸化ナトリ
ウム水溶液によりｐＨ６．５に調整し、配糖化酵素（日
本国特許公開平６−２７７０５３号公報に記載のアミラ
ーゼＸ−２３）を２０ユニット／ｍｌの濃度になるよう
に添加し、次いで４５℃で４０時間インキュベートして
ハイドロキノンへの配糖化反応をおこなった。この反応
終了後の配糖化反応溶液１ｍｌあたり２．１μｌ（１．
５倍量）のグルコアミラーゼ（ナガセケムテックス社
製；商品名ＸＬ−４）を加えた。この後、混合物を４５
℃で４時間インキュベートして、グルコアミラーゼ処理
後反応溶液を得た。

【０１８２】５ｍｌのグルコアミラーゼ処理後反応溶液
に５ｍｌのＴＨＦを加え、各温度（３、１０、２２、ま
たは４５℃）にてミキサーを用いて５分間攪拌した後、
混合物を３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。その結
果、混合物は２相に分離した。水相を分取し、この水相
に水を加えて５ｍｌに調整して水溶液を得た。この調整
後の水溶液を、上記のようにＨＰＬＣにてハイドロキノ
ン、ハイドロキノン配糖体およびグルコースの濃度を測
定した。

【０１８３】結果を以下の表１３に示す。

【０１８４】

【表１３】 表１３の結果にもとづいてハイドロキノン配糖体および
グルコースの移動率を算出した。移動率のグラフを図２
に示す。

【０１８５】表１３および図２からわかるように、抽出
温度が低い場合、ＴＨＦ相への糖の移動が多かった。温
度の上昇に従って、ハイドロキノン、ハイドロキノン配
糖体およびグルコースのＴＨＦ相への移動率は下がっ
た。これは、温度の上昇に従ってＨＱＧおよびグルコー
スの水相への溶解度が上がって、ＴＨＦ相への移動が減
少したものと考えられる。また、温度が高いほど、ハイ
ドロキノン配糖体とグルコースとの移動率の差が広がる
ので、なるべく高い温度で抽出することにより、ハイド
ロキノン配糖体の純度をより高めることができることが
わかった。

【０１８６】

【発明の効果】本発明により、疎水基含有水溶性有機化
合物の抽出方法が提供される。本発明の抽出方法および
精製方法は、各種動物および植物の有効成分を抽出およ
び精製する手法として、あるいは各種酵素反応溶液から
有効成分を抽出および精製する手法として用いることが
可能である。本発明の方法により、疎水基含有水溶性有
機化合物を容易でかつ安価に分離および精製することが
できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、テトラヒドロフラン抽出に対するグル
コース濃度の影響を示すグラフである。

【図２】図２は、ハイドロキノン配糖体およびグルコー
スのテトラヒドラフラン相への移動率を示すグラフであ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｃ 67/58 Ｃ０７Ｃ 67/58 69/90 69/90 Ｃ０７Ｄ 311/04 Ｃ０７Ｄ 311/04 311/28 311/28 Ｃ０７Ｈ 1/06 Ｃ０７Ｈ 1/06 1/08 1/08 15/203 15/203 17/07 17/07 Ｃ１２Ｐ 19/18 Ｃ１２Ｐ 19/18 19/44 19/44 Ｆターム(参考） 4B064 AF41 CA21 CB30 CE04 CE08 DA01 DA10 4C057 AA05 AA06 BB02 JJ23 KK08 4C062 EE56 EE99 4D056 AB18 AC06 AC11 AC21 AC22 AC27 BA03 CA01 CA14 CA20 CA26 CA28 CA39 DA05 4H006 AA02 AB20 AD16 BB14 BB21 BB25 BB47 BC33 BJ50 BN10 BN30 BS30 BT36

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 疎水基含有水溶性有機化合物の抽出方法
   であって、 該疎水基含有水溶性有機化合物および糖質を含有する水
   溶液と、極性有機溶媒とを接触させて、水相と有機相と
   を得、それにより該疎水基含有水溶性有機化合物を該有
   機相に移動させる工程を包含する方法。
2. 【請求項２】 前記水溶液中の糖質の濃度が、該水溶液
   １００ｍｌあたり１２ｇ以上である、請求項１に記載の
   方法。
3. 【請求項３】 前記疎水基含有水溶性有機化合物が、水
   溶性芳香族化合物である、請求項１に記載の方法。
4. 【請求項４】 前記疎水基含有水溶性有機化合物が、フ
   ェノール誘導体およびそれらの配糖体からなる群より選
   択される、請求項１に記載の方法。
5. 【請求項５】 前記疎水基含有水溶性有機化合物が、ハ
   イドロキノン配糖体、カテキン、サリシン、ヘスペリジ
   ン、ヘスペリジン配糖体、コーヒー酸、サリシルアルコ
   ールおよびエラジタンニンからなる群より選択される、
   請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】 前記水溶液が相分離補助剤をさらに含有
   する、請求項１に記載の方法。
7. 【請求項７】 前記相分離補助剤が、塩または有機酸で
   ある、請求項６に記載の方法。
8. 【請求項８】 前記相分離補助剤が、塩化ナトリウム、
   クエン酸ナトリウム、硫酸マグネシウムおよび硫酸アン
   モニウムからなる群より選択される、請求項６に記載の
   方法。
9. 【請求項９】 前記極性有機溶媒が、テトラヒドロフラ
   ンまたはアセトニトリルである、請求項１に記載の方
   法。
10. 【請求項１０】 前記極性有機溶媒が、テトラヒドロフ
    ラン、アセトニトリル、アセトンまたはイソプロピルア
    ルコールである、請求項６に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記疎水基含有水溶性有機化合物が、
    酵素反応溶液に由来する、請求項１に記載の方法。
12. 【請求項１２】 前記酵素反応溶液が、配糖化反応溶液
    である、請求項１１に記載の方法。
13. 【請求項１３】 前記配糖化反応溶液が、ヘスペリジン
    またはハイドロキノンの配糖化反応溶液である、請求項
    １２に記載の方法。
14. 【請求項１４】 前記疎水基含有水溶性有機化合物が、
    動物または植物から選択される生物に由来する、請求項
    １に記載の方法。
15. 【請求項１５】 前記疎水基含有水溶性有機化合物が、
    果汁に由来する、請求項１に記載の方法。
16. 【請求項１６】 前記水溶液が、前記疎水基含有水溶性
    有機化合物および糖質を含有する酵素反応溶液を濃縮す
    ることにより調製される、請求項１に記載の方法。
17. 【請求項１７】 前記酵素反応溶液が、配糖化反応溶液
    である、請求項１６に記載の方法。
18. 【請求項１８】 前記配糖化反応溶液が、ヘスペリジン
    またはハイドロキノンの配糖化反応溶液である、請求項
    １７に記載の方法。
19. 【請求項１９】 前記水溶液が、前記疎水基含有水溶性
    有機化合物および糖質を含有する生物抽出物を濃縮また
    は希釈することにより調製され、ここで該生物が動物ま
    たは植物である、請求項１に記載の方法。
20. 【請求項２０】 前記水溶液が、果汁を濃縮することに
    より調製される、請求項１に記載の方法。
21. 【請求項２１】 前記水溶液が、前記疎水基含有水溶性
    有機化合物および糖質を含有する酵素反応溶液またはそ
    の濃縮液に前記相分離補助剤を添加することにより調製
    される、請求項６に記載の方法。
22. 【請求項２２】 前記酵素反応溶液が、配糖化反応溶液
    である、請求項２１に記載の方法。
23. 【請求項２３】 前記配糖化反応溶液が、ヘスペリジン
    またはハイドロキノンの配糖化反応溶液である、請求項
    ２２に記載の方法。
24. 【請求項２４】 前記水溶液が、前記疎水基含有水溶性
    有機化合物および糖質を含有する生物抽出物またはそれ
    らの濃縮物もしくは希釈物に前記相分離補助剤を添加す
    ることにより調製され、ここで該生物が動物または植物
    である、請求項６に記載の方法。
25. 【請求項２５】 前記水溶液が、果汁またはその濃縮物
    に前記相分離補助剤を添加することにより調製される、
    請求項６に記載の方法。
26. 【請求項２６】 フェノール誘導体配糖体の精製方法で
    あって、 フェノール誘導体、フェノール誘導体配糖体および糖質
    を含有する第１の水溶液と、極性有機溶媒とを接触させ
    て、第１の水相と少量の水を含む有機相とを得、それに
    より該フェノール誘導体およびフェノール誘導体配糖体
    を該有機相に移動させる工程；該少量の水を含む有機相
    を分取する工程；該少量の水を含む有機相から該極性有
    機溶媒を除去して、該フェノール誘導体およびフェノー
    ル誘導体配糖体を含有する第２の水溶液を得る工程；該
    第２の水溶液と酢酸エチルとを接触させて、第２の水相
    と酢酸エチル相とを得、それにより該フェノール誘導体
    を該酢酸エチル相に移動させる工程；該第２の水相を分
    取する工程；および該第２の水相を濃縮し、そして冷却
    することにより、該フェノール誘導体配糖体を沈殿させ
    る工程を包含する方法。
27. 【請求項２７】 前記フェノール誘導体およびフェノー
    ル誘導体配糖体が、該フェノール誘導体の配糖化反応溶
    液に由来する、請求項２６に記載の方法。
28. 【請求項２８】 前記配糖化反応溶液が、ヘスペリジン
    またはハイドロキノンの配糖化反応溶液である、請求項
    ２７に記載の方法。
29. 【請求項２９】 前記第１の水溶液が、相分離補助剤を
    さらに含有する、請求項２６に記載の方法。
30. 【請求項３０】 前記配糖化反応溶液が、ヘスペリジン
    またはハイドロキノンの配糖化反応溶液である、請求項
    ２９に記載の方法。