JPH10323196A - α−モノグルコシルヘスペリジン高含有物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】本発明のα-モノグルコシルヘスペリジン
高含有物の製造方法は、α-グルコシルヘスペリジンと
ヘスペリジンとを含有する溶液に、グルコアミラーゼと
α-L-ラムノシダーゼとを同時に、または何れか一方を
先にして順次作用させ、得られた混合物からα-モノグ
ルコシルヘスペリジンを析出分離し、これを採取するこ
とを特徴としている。 【効果】本発明によれば、α-グルコシルヘスペリジン
とヘスペリジンとを含有する溶液から、ヘスペリジン、
β-モノグルコシルヘスペレチン、ヘスペレチンなどを
ほとんど含まず、著しく水溶性に優れたα-モノグルコ
シルヘスペリジン高含有物が容易に得られる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の技術分野】本発明は、α-モノグルコシルヘス
ペリジン高含有物の製造方法に関し、さらに詳しくはα
-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する
溶液を処理してα-モノグルコシルヘスペリジンを析出
分離し、これを採取することによるα-モノグルコシル
ヘスペリジン高含有物の製造方法に関する。

【０００２】

【発明の技術的背景】ヘスペリジン（Hesperidin）は、
下記式［Ｉ］：

【０００３】

【化１】

【０００４】で示されるようにヘスペレチン（５，７，
３’-トリヒドロキシ-４’-メトキシフラバノン）の７
位の水酸基に、ルチノース（Ｌ-ラムノシル-（α１→
６）-グルコース）がβ-結合したものをいう。このヘス
ペリジンは柑橘類の未熟な果皮に含まれ、毛細血管の強
化、出血予防、血圧調整等の生理作用を有するビタミン
Ｐとして医薬品、化粧品等に供される。またこのヘスペ
リジンは、アルカリ性水溶液には可溶であるが、水、酸
に難溶であり、室温では、５０リットルの水に僅かに１
ｇ（約０．００２Ｗ／Ｖ％）程度しか溶けず、このヘス
ペリジンが、例えば、缶詰の液汁に少量でも含まれてい
ると、液汁が白濁し商品価値が損なわれる。

【０００５】従来、ヘスペリジンによる液汁の白濁を防
止するとの観点から、種々の方法が提案されている。例
えば、特開平３-７５９３号公報には、ヘスペリジンに
澱粉部分分解物（α-グルコシル糖化合物）共存下で糖
転移酵素（α-グルコシル転移活性を有する酵素）を作
用させて、下記式［II］で示されるα-グルコシルヘス
ペリジンを生成させて、水溶性を高めた酵素処理ヘスペ
リジンの製造方法が開示されている。

【０００６】

【化２】

【０００７】このα-グルコシルヘスペリジンは、上記
式［II］に示されるように、式［Ｉ］で示されるヘスペ
リジンのグルコースの４位の位置にグルコース（Ｇ）が
α-１，４結合で順次ｎ個（１〜２０個）結合した化合
物、またはこれらグルコース数の異なるα-グルコシル
ヘスペリジンの混合物である。

【０００８】この酵素反応においては、原料液に含まれ
るヘスペリジンの４０〜８０％が酵素処理によりα-グ
ルコシルヘスペリジンに変換されるが、２０〜６０％は
未反応ヘスペリジンとして残存してしまう。未反応ヘス
ペリジン（ヘスペリジン）は、α-グルコシルヘスペリ
ジンが共存すると、水溶液中での溶解性が高まるが、α
-グルコシルヘスペリジンに対して未反応ヘスペリジン
の比率が高いと、短時間に未反応ヘスペリジンが不溶化
して析出してくる。

【０００９】この未反応ヘスペリジンの析出を防ぐ手段
の一つとして、ＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）
等の糊料をヘスペリジン含有液に添加し、水溶液の粘性
を上げることが考えられるが、このような糊料の添加は
商品イメージ上好ましくなく、また輸出商品には使用で
きないなど、一般的な方法とは言いがたい。

【００１０】他方、未反応ヘスペリジンを析出させ、ろ
過などで分離除去してα-グルコシルヘスペリジンに対
して未反応ヘスペリジンの比率を低減させることによ
り、未反応ヘスペリジンの析出を遅らせる方法がある。

【００１１】しかしこの方法を採用しても、長時間経過
するとやはり未反応ヘスペリジンが析出するとの問題点
があり、本質的な解決になっていない。また、クロマト
分離などの方法で、α-グルコシルヘスペリジンと未反
応ヘスペリジンとを含有する水溶液からα-グルコシル
ヘスペリジン区分のみを取り出して用いる方法もある
が、コストアップになり、経済的な方法とは言いがた
い。

【００１２】このような問題点を解決すべく本発明者ら
は鋭意研究を重ねて、先に、α-グルコシルヘスペリジ
ンと未反応ヘスペリジンとを含有する溶液に、α-L-ラ
ムノシダーゼ活性を有する酵素を作用させると、α-グ
ルコシルヘスペリジンは殆ど変化せずそのままである
が、未反応ヘスペリジンは、加水分解されてラムノース
を分離して下記式［III］で示されるβ-モノグルコシル
ヘスペレチンに変換され、著しく水溶性に優れ、長期間
経過しても白濁などが生じないような酵素処理ヘスペリ
ジンが得られることなどを見出している。

【００１３】

【化３】

【００１４】また、「サイクロデキストリン合成酵素に
よるヘスペリジン配糖体生成と天然色素の安定化」と題
する米谷、寺田らの論文（日本食品科学工学会誌、第４
２巻第５号、第３７６〜３８２頁、１９９５年５月刊）
には、糖受容体のヘスペリジンと糖供与体のβ-ＣＤと
糖転移酵素のＣＧＴａｓｅを反応させて、ヘスペリジン
配糖体（Ｈｓｐ−Ｇｎ）を得た後、このヘスペリジン配
糖体の精製段階で、このヘスペリジン配糖体にα-ラム
ノシダーゼを作用させると、未反応ヘスペリジンのみが
加水分解され、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマ
トグラフィーにより効果的にヘスペリジン配糖体（精製
物）と未反応ヘスペリジンとを分離できるとの知見を得
たことが記載され、得られたヘスペリジン配糖体（精製
物）を天然色素溶液に添加したところ、紫外線による天
然色素の退色を抑制できたことが記載されている。

【００１５】しかしながら、式IVで示されるα-モノグ
ルコシルヘスペリジンについては、この米谷、寺田らの
論文に記載の方法では、含有されているヘスペレチンを
予めＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ−１６で分離し、得ら
れたβ-モノグルコシルヘスペレチンとα-モノグルコシ
ルヘスペリジンとα-ジグルコシルヘスペリジンとの混
合物から、さらにα-モノグルコシルヘスペリジンとα-
ジグルコシルヘスペリジンとを高価なカラムクロマトグ
ラフィーにより分離する方法であるため、α-モノグル
コシルヘスペリジン高含有物のみを効率よく採取するこ
とが困難であり、これをより簡単・安価に採取できれ
ば、医薬品、化粧品、食品添加物など広範な用途へのい
っそうの利用が期待できる。

【００１６】

【化４】

【００１７】なお、前記の特開平３-７５９３号公報で
は、α-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジンの混合
液にグルコアミラーゼ（Ｅ.Ｃ.3.2.1.3）を作用させ、
α-グルコシルヘスペリジンをα-モノグルコシルヘスペ
リジンに変え、ダイヤイオンＨＰ-２０カラムに通液し
水洗した後、エタノール水溶液中のエタノール濃度を段
階的に高めながらα-モノグルコシルヘスペリジン画分
を採取する方法が開示されている。この特開平３-７５
９３号公報に記載の方法においても、α-モノグルコシ
ルヘスペリジン高含有物を安価に供給することは困難で
あると思われる。

【００１８】そこで、本発明者らはさらに鋭意研究を重
ねた結果、α-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジン
とを含有する溶液に、グルコアミラーゼとα-L-ラムノ
シダーゼ（Ｅ.Ｃ.3.2.1.40）を作用させた後、α-モノ
グルコシルヘスペリジンを析出分離し、これを採取する
方法、あるいはグルコアミラーゼとα-L-ラムノシダー
ゼ、β-D-グルコシダーゼ（Ｅ.Ｃ.3.2.1.21）を作用さ
せた後、α-モノグルコシルヘスペリジンを析出分離
し、これを採取する方法のうちの何れかの方法を採用す
ることにより、得られた混合物からα-モノグルコシル
ヘスペリジンを効率良く分離・採取（分取）できること
などを見出して、本発明を完成するに至った。

【００１９】本発明では、析出したα-モノグルコシル
ヘスペリジンを元の混合物から固液分離するだけで、極
めて効率良くα-モノグルコシルヘスペリジン高含有物
を製造することができる。

【００２０】なお、ヘスペリジンにα-L-ラムノシダー
ゼ活性を有する酵素を作用させてヘスペリジンをβ-モ
ノグルコシルヘスペレチンに変換し、水溶性を向上させ
る方法はみかん缶詰シラップの白濁防止法として工業的
に行なわれている。

【００２１】しかし本発明のように、α-グルコシルヘ
スペリジンと未反応ヘスペリジンとを含有する溶液にグ
ルコアミラーゼ、α-L-ラムノシダーゼを作用させる
か、またはグルコアミラーゼ、α-L-ラムノシダーゼ及
びβ-D-グルコシダーゼの各活性を有する酵素剤を作用
させて、α-グルコシルヘスペリジンのラムノースはそ
のままでグルコース４位に多数結合しているグルコース
（Ｇ）ｎのうちの１個のみ残して加水分解してα-モノ
グルコシルヘスペリジンとし、一方ヘスペリジンのラム
ノースを加水分解してβ-モノグルコシルヘスペレチン
（７-Ｏ-β-モノグルコシルヘスペレチン）に変える
か、さらにはβ-モノグルコシルヘスペレチンのβ-グル
コースを加水分解してヘスペレチンに変えるかすること
により、効率良くα-モノグルコシルヘスペリジンのみ
を析出分離し、これを採取する方法は示唆すらされてい
なかった。

【００２２】また特開平８-８０１７７号公報には、可
溶化ヘスペリジンを、ヘスペリジンが含有されている水
溶液に添加するヘスペリジン結晶の析出防止方法が開示
され、この可溶化ヘスペリジンは、ヘスペリジン中のグ
ルコース基の４位の位置にグルコースがα-１，４結合
で順次１〜十数個結合した化合物であり、このような可
溶化ヘスペリジンは、糖転移酵素をサイクロデキストリ
ン等の存在下にヘスペリジンに作用させることで生産で
き、該糖転移酵素としては、例えばＣＧＴａｓｅすなわ
ち、１，４-α-Ｄ-グルカン；１，４-α-Ｄ-（１，４-
グルカノ）-トランスフェラーゼ（Ｅ.Ｃ.2.4.1.19）、
さらに具体的には、バチルス属のＡ２-５ａ菌株培養物
から採取された糖転移酵素を利用して生産できる旨記載
されている。

【００２３】しかしながら、該公報には、可溶化ヘスペ
リジンを未反応ヘスペリジンに添加混合してヘスペリジ
ン含有物中のヘスペリジン結晶析出を防止するとの技術
思想の開示にとどまる。また該公報に記載の方法で得ら
れるものはα-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジン
の混合物であり、生成物には、未反応ヘスペリジンがそ
のまま含有されているため、例えばこのような方法で調
製した缶詰ではその液汁が次第に白濁しやすいという問
題点がある。この対処方法として、該公報の実施例で
は、α-モノグルコシルヘスペリジンとα-ジグルコシル
ヘスペリジン画分を採取し用いている。しかしながら、
前記２成分画分を経済的に採取することは、技術的に困
難を伴う。

【００２４】

【発明の目的】本発明は、上記のような従来技術に伴う
問題点を解決しようとするものであって、α-グルコシ
ルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する溶液に簡単
な処理を施すことにより、α-モノグルコシルヘスペリ
ジン高含有物を分取する方法を提供することを目的とし
ている。

【００２５】

【発明の概要】本発明に係るα-モノグルコシルヘスペ
リジン高含有物の製造方法では、α-グルコシルヘスペ
リジンとヘスペリジンとを含有する溶液(a)に、グルコ
アミラーゼとα-L-ラムノシダーゼとを同時にまたは別
々に作用させた後、得られた混合物（酵素反応液）(b-
1)からα-モノグルコシルヘスペリジンを析出分離する
か（第Ｉ法）、あるいは上記溶液(a)に、グルコアミラ
ーゼとα-L-ラムノシダーゼ、β-D-グルコシダーゼの各
活性とを有する酵素剤類を同時にまたは別々に作用させ
た後、得られた混合物（酵素反応液）(b-2)からα-モノ
グルコシルヘスペリジンを析出分離するか（第ＩＩ
法）、の何れかの方法により、上記溶液(a)からα-モノ
グルコシルヘスペリジンを分離し、これを採取すること
を特徴としている。

【００２６】本発明の好ましい態様においては、α-モ
ノグルコシルヘスペリジンを析出分離させる前に、上記
酵素反応液を多孔性吸着樹脂と接触させ、α-モノグル
コシルヘスペリジン、β-モノグルコシルヘスペレチ
ン、ヘスペレチン等を該樹脂に吸着させ、次いで水洗に
よりデキストリン等を流出させた後、有機溶剤（例：ア
ルコール）でα-モノグルコシルヘスペリジン、β-モノ
グルコシルヘスペレチン、ヘスペレチンを溶出させるこ
とが望ましく、さらにはこのようにして得られた溶出液
中に含まれる使用された有機溶剤を除去しておくことが
好ましい。さらに、本発明の好ましい態様においては、
低級アルコール（例：メタノール）中で、この溶出液中
に含まれるα-モノグルコシルヘスペリジンを析出さ
せ、分取することが望ましい。

【００２７】本発明によれば、α-グルコシルヘスペリ
ジンとヘスペリジンとを含有する溶液から、ヘスペリジ
ン、β-モノグルコシルヘスペレチン、ヘスペレチンな
どをほとんど含まず、著しく水溶性に優れたα-モノグ
ルコシルヘスペリジン高含有物が容易に得られる。

【００２８】

【発明の具体的説明】以下、本発明に係るα-モノグル
コシルヘスペリジン高含有物の製造方法について具体的
に説明する。

【００２９】本発明に係るα-モノグルコシルヘスペリ
ジン高含有物の分取（製造）方法では、α-グルコシル
ヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する溶液に、グル
コアミラーゼとα-L-ラムノシダーゼとβ-D-グルコシダ
ーゼとを同時にまたは別々に作用させ（但し、β-D-グ
ルコシダーゼを、グルコアミラーゼおよびα-L-ラムノ
シダーゼより先に作用させることはない）、得られた酵
素処理液からα-モノグルコシルヘスペリジンを析出分
離し、これを採取しているが、この際に用いられる「α
-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する
溶液」についてまず初めに説明する。

【００３０】［α-グルコシルヘスペリジンとヘスペリ
ジンとを含有する溶液］このような酵素処理の対象とな
る溶液としては、α-グルコシルヘスペリジンとヘスペ
リジンとを含有するものであれば、その含量比、濃度な
どは特に限定されないが、好ましくは、処理すべき溶液
中のα-グルコシルヘスペリジン濃度が、０．１〜３０
重量％、好ましくは１〜１０重量％であり、ヘスペリジ
ン濃度が、０．０２〜１５重量％、好ましくは０．２〜
５重量％であり、α-グルコシルヘスペリジン／ヘスペ
リジン（重量比）が、１００／１〜２００、好ましくは
１００／１〜２０であるものが望ましい。

【００３１】α-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジ
ンとを含有する溶液としては、例えば、下記〜に示
すものが挙げられる。 ： 特開平３-７５９３号公報に記載されているよう
に、ヘスペリジンに澱粉部分分解物（α-グルコシル糖
化合物）共存下で糖転移酵素（α-グルコシル転移活性
を有する酵素）を作用させてなり、α-グルコシルヘス
ペリジンと未反応のヘスペリジンとを含有しているも
の。 ： 上記のようにして得られたα-グルコシルヘスペリ
ジン含有物中のヘスペリジンを析出させた後、さらにろ
過などによりヘスペリジンを分離除去してα-グルコシ
ルヘスペリジンに対してヘスペリジンの比率を低減させ
たもの。

【００３２】［グルコアミラーゼ、α-L-ラムノシダー
ゼ、β-D-グルコシダーゼの各活性を有する酵素剤］本
発明においては、グルコアミラーゼ、α-L-ラムノシダ
ーゼ、β-D-グルコシダーゼは、それぞれの酵素活性を
有するものであれば、何れも用いることができる。

【００３３】グルコアミラーゼとしては、具体的には、
例えば、「グルクザイムＮＬ４，２」（天野製薬（株）
製）、「セルラーゼＡ＜アマノ＞３」（天野製薬（株）
製）、「グルコチーム」（長瀬産業（株）製）、「ユニ
アーゼ３０」（（株）ヤクルト製）、「ナリンギナー
ゼ」（田辺製薬（株）製）などの市販の酵素剤のよう
に、α-１，４グルコシド結合をグルコース単位で切断
しうる酵素が挙げられる。

【００３４】α-L-ラムノシダーゼとしては、具体的に
は、例えば、「ヘスペリジナーゼ」（田辺製薬（株）
製）、「ナリンギナーゼ」（田辺製薬（株）製）、「セ
ルラーゼＡ＜アマノ＞３」（天野製薬（株）製）等の市
販の酵素剤が挙げられ、好ましくは「ヘスペリジナー
ゼ」が用いられる。

【００３５】β-D-グルコシダーゼとしては、具体的に
は、例えば、「セルラーゼＡ＜アマノ＞３」（天野製薬
（株）製）等の市販の酵素剤が挙げられる。これらの酵
素剤のうちグルコアミラーゼ活性を有する酵素剤は、上
記α-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有
する溶液中のα-グルコシルヘスペリジン１００重量部
当たり、好ましくは０．０１〜１０重量部、さらに好ま
しくは０．１〜１重量部程度の量で用いられる。

【００３６】α-L-ラムノシダーゼ活性を有する酵素剤
は、上記α-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジンと
を含有する溶液中のヘスペリジン１００重量部当たり、
好ましくは０．０５〜５０重量部、さらに好ましくは
１．５〜１５重量部程度の量で用いられる。

【００３７】またβ-D-グルコシダーゼ活性を有する酵
素剤は、上記α-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジ
ンとを含有する溶液中のヘスペリジン１００重量部当た
り、好ましくは０．０１〜２０重量部、さらに好ましく
は０．１〜１０重量部程度の量で用いられる。なお、グ
ルコアミラーゼ活性、α-L-ラムノシダーゼ活性、β-D-
グルコシダーゼ活性のうち２つ以上の活性を有する市販
の酵素剤｛例：「セルラーゼＡ＜アマノ＞３」（天野製
薬（株）製）｝を用いる場合には、その量を適宜加減し
設定することができる。

【００３８】また、これらの酵素を、上記α-グルコシ
ルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する溶液中のα
-グルコシルヘスペリジンあるいはヘスペリジンに作用
させるには、通常、ｐＨ３〜７、好ましくはｐＨ３〜４
で、通常４０〜７０℃、好ましくは５０〜６０℃の温度
で、通常０．５〜７２時間、好ましくは６〜４８時間程
度保持すればよい。

【００３９】このような条件で上記α-グルコシルヘス
ペリジンとヘスペリジンとを含有する溶液を酵素処理し
た場合、α-グルコシルヘスペリジンは、上記α-L-ラム
ノシダーゼ（例：ヘスペリジナーゼ）処理によっては、
その作用を実質上受けない。

【００４０】しかしながらこのα-グルコシルヘスペリ
ジンは、グルコアミラーゼの加水分解作用を受けて、こ
のα-グルコシルヘスペリジンのヘスペレチン骨格７位
のグルコースにα-１，４結合でｎ個順次結合（ｎ＝１
〜十数個）しているグルコースが１個残して加水分解さ
れ、上記式［II］中、ｎ＝１のα-モノグルコシルヘス
ペリジンになる。

【００４１】なお、α-グルコシルヘスペリジン（含む
α-モノグルコシルヘスペリジン）にβ-D-グルコシダー
ゼを作用させても実質上加水分解されない。一方のヘス
ペリジンは、上記のα-L-ラムノシダーゼの作用を受け
てそのラムノース基が加水分解され、β-モノグルコシ
ルヘスペレチン（７-Ｏ-β-モノグルコシルヘスペレチ
ン）になる。

【００４２】このβ-モノグルコシルヘスペレチンに、
さらにβ-D-グルコシダーゼが作用すると、このβ-モノ
グルコシルヘスペレチンのヘスペレチン骨格７位に結合
しているβ-グルコース基が加水分解されて、β-モノグ
ルコシルヘスペレチンは、水に難溶性のヘスペレチンに
なる。

【００４３】従って、本発明では、上記α-グルコシル
ヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する溶液への上記
各酵素の添加順序としては、α-グルコシルヘスペリジ
ンとヘスペリジンとを含有する溶液に、グルコアミラー
ゼとα-L-ラムノシダーゼを作用させ、得られた混合物
（酵素反応液）からα-モノグルコシルヘスペリジンを
析出分離する第Ｉ法では、α-グルコシルヘスペリジン
のα-モノグルコシルヘスペリジン化と、ヘスペリジン
のβ-モノグルコシルヘスペレチン化の何れか一方を先
に、あるいは同時に進行させればよいため、グルコアミ
ラーゼとα-L-ラムノシダーゼの何れか一方を先に、あ
るいは同時に進行させればよい。得られた酵素反応液中
の各成分含量は、α-モノグルコシルヘスペリジン１重
量部に対してβ-モノグルコシルヘスペレチンが０．５
重量部以下で、ヘスペリジン及びヘスペレチンがそれぞ
れ０．１重量部以下である。また、糖類等その他の成分
は、該酵素反応液中のα-モノグルコシルヘスペリジン
１重量部に対して１重量部以上の量で含まれることが多
い。

【００４４】α-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジ
ンとを含有する溶液に、グルコアミラーゼ、α-L-ラム
ノシダーゼ、β-D-グルコシダーゼを同時に、または何
れか一種を先にして順次作用させ、得られた混合物（酵
素反応液）からα-モノグルコシルヘスペリジンを析出
分離する第ＩＩ法では、 グルコアミラーゼと、α-L-ラムノシダーゼと、β-D-
グルコシダーゼを同時に添加する方法、 グルコアミラーゼとα-L-ラムノシダーゼとを添加し
て作用させた後、β-D-グルコシダーゼを添加して作用
させる方法、 グルコアミラーゼとα-L-ラムノシダーゼを任意の順
序で添加して作用させた後、β-D-グルコシダーゼを作
用させる方法、 ヘスペリジンのヘスペレチン化を先に進めるべく、α
-L-ラムノシダーゼとβ-D-グルコシダーゼとを作用させ
た後、グルコアミラーゼを作用させる方法等が挙げられ
る。何れの場合も、これらの各酵素は一度にあるいは少
量ずつ添加することができる。

【００４５】得られた酵素反応液中の各成分含量は、α
-モノグルコシルヘスペリジン１重量部に対して、ヘス
ペレチンが０．４重量部以下で、β-モノグルコシルヘ
スペレチンとヘスペリジンがそれぞれ０．１重量部以下
の量である。そして、糖類等のその他の成分は、該酵素
反応液中のα-モノグルコシルヘスペリジン１重量部に
対して、１重量部以上の量で含まれることが多い。

【００４６】本発明では、これらのうちでは、第Ｉ法で
は、α-L-ラムノシダーゼを先に作用させた後、グルコ
アミラーゼを作用させることが望ましい。また、第ＩＩ
法では、α-L-ラムノシダーゼを作用させた後、グルコ
アミラーゼとβ-D-グルコシダーゼを作用させることが
反応効率の点から望ましい。

【００４７】［α-モノグルコシルヘスペリジンの分
取］本発明では、上記のように、α-グルコシルヘスペ
リジンとヘスペリジンとを含有する溶液を酵素処理して
得られる、α-モノグルコシルヘスペリジンを含有する
酵素処理液（酵素処理α-モノグルコシルヘスペリジン
含有液とも言う）から、α-モノグルコシルヘスペリジ
ンを分取する。

【００４８】このように酵素処理液からα-モノグルコ
シルヘスペリジンを分取するには、第Ｉ法では、低級ア
ルコールに、下記酵素処理液すなわち、「α-モノグル
コシルヘスペリジン１重量部に対して、β-モノグルコ
シルヘスペレチンが０．５重量部以下で、ヘスペリジン
及びヘスペレチンがそれぞれ０．１重量部以下であり、
そして糖類その他の成分が多くの場合１重量部以上の量
で含まれる酵素処理液」を混合し、第ＩＩ法では、下記
酵素処理液すなわち、「α-モノグルコシルヘスペリジ
ン１重量部に対して、ヘスペレチンが０．４重量部以下
で、β-モノグルコシルヘスペレチンとヘスペリジンが
それぞれ０．１重量部以下であり、そして糖類等その他
の成分が多くの場合１重量部以上の量で含まれる酵素処
理液」を混合するが、本操作に先だって酵素処理液中の
遊離糖分を除去しておくことが望ましい。遊離糖分の除
去方法は、酵素処理液中の遊離糖分を効率良く除去出き
る方法であればどんな方法でもよいが、多孔性吸着樹脂
を用いる方法が簡便である。

【００４９】多孔性吸着樹脂としては、具体的には、例
えば、ＨＰ−２０、ＨＰ−５０、ＸＡＤ−２等の非極性
樹脂、ＸＡＤ−７等の中間極性樹脂が好ましく用いられ
る。これらの方法では、カラムに多孔性吸着樹脂を充填
し、高濃度のエタノール水溶液等で活性化しておいたカ
ラムに上記酵素処理α-モノグルコシルヘスペリジン含
有液を１０〜６０℃の温度で通液する等の方法で、該樹
脂に上記酵素処理α-モノグルコシルヘスペリジン含有
液を接触させ、α-モノグルコシルヘスペリジン、β-モ
ノグルコシルヘスペレチン、ヘスペレチン等を吸着させ
る。

【００５０】次いで、充填樹脂容量の１〜４倍量程度の
水で洗浄して遊離糖を主体とする夾雑物を除去した後、
アルコール、アルコール−水（アルコール／水＝５０〜
１００／２５〜１）等の溶離液を１０〜６０℃の温度で
通液する等の方法で、該樹脂に吸着しているα-モノグ
ルコシルヘスペリジン、β-モノグルコシルヘスペレチ
ン、ヘスペレチン等を溶出させる。

【００５１】第Ｉ法では、本操作により、α-モノグル
コシルヘスペリジン１重量部に対して、β-モノグルコ
シルヘスペレチンが０．５重量部以下で、ヘスペリジン
及びヘスペレチンがそれぞれ０．１重量部以下であり、
そして糖類等のその他の成分が０．１重量部以下の量で
ある溶出液が得られ、また第ＩＩ法では、本操作により
α-モノグルコシルヘスペリジン１重量部に対して、ヘ
スペレチンが０．４重量部以下で、β-モノグルコシル
ヘスペレチンとヘスペリジンとがそれぞれ０．１重量部
以下であり、そして糖類等その他の成分が０．１重量部
以下の量である溶出液が得られる。

【００５２】上記アルコールとしては、メタノール、エ
タノール、プロパノール、ブタノール等の炭素数が１〜
５の低級アルコールが挙げられる。次いで上記溶出液中
のα-モノグルコシルヘスペリジンを低級アルコール中
で析出させ、固液分離し、これを採取することにより、
α-モノグルコシルヘスペリジン高含有物を得ることが
できる。

【００５３】本操作は、α-モノグルコシルヘスペリジ
ンが、加温された低級アルコール中には容易に溶解する
一方、それを室温（例：１５〜２５℃）以下の温度に下
げるとα-モノグルコシルヘスペリジンが容易に析出し
てくる現象と、β-モノグルコシルヘスペレチンは低級
アルコール中に溶解しやすく、室温以下の温度に下げて
もβ-モノグルコシルヘスペレチンは析出しにくい現象
を見出して、完成させたものである。

【００５４】以下に、析出分離操作を第Ｉ法、第ＩＩ法
毎に詳述するが、第Ｉ法、第ＩＩ法とも、酵素処理され
た上記溶出液を上記低級アルコールに溶解するに先立
ち、乾燥物としておくことが好ましい。

【００５５】＜析出分取操作＞第Ｉ法： α-モノグルコシルヘスペリジン１重量部に対
して、β-モノグルコシルヘスペレチンが０．５重量部
以下で、ヘスペリジン及びヘスペレチンがそれぞれ０．
１重量部以下であり、そして糖類等のその他の成分が
０．１重量部以下の量で含まれることのある乾燥物を低
級アルコール、好ましくはメタノールに溶解する。該乾
燥物１ｇに対して、メタノールを０．２〜２０ｍｌ、好
ましくは１〜１０ｍｌ加え、２０〜１２０℃、好ましく
は６０〜９０℃の温度に加熱して溶解する。

【００５６】その後、この溶液を冷却、例えば、室温以
下〜上記アルコールの融点以上の温度に冷却しあるいは
室温下に放置すると、ほとんどα-モノグルコシルヘス
ペリジンのみが析出してくる。このように溶液を冷却す
る際には、予め微粉末状に調製しておいたα-モノグル
コシルヘスペリジンを該溶液に種晶として少量加える等
の操作を行えば、より迅速にα-モノグルコシルヘスペ
リジンが析出してくる。

【００５７】その後、遠心分離機等で固液分離すればα
-モノグルコシルヘスペリジン高含有物を得ることがで
きる。固液分離に際しては、析出したα-モノグルコシ
ルヘスペリジン結晶を低級アルコールで洗浄すれば、よ
りα-モノグルコシルヘスペリジン含有率の高いα-モノ
グルコシルヘスペリジン高含有物が得られる。

【００５８】第ＩＩ法：上記第Ｉ法において、α-モノ
グルコシルヘスペリジン１重量部に対して、ヘスペレチ
ンが０．４重量部以下で、β-モノグルコシルヘスペレ
チンとヘスペリジンがそれぞれ０．１重量部以下であ
り、そして糖類等のその他の成分が０．１重量部以下の
量で含まれることのある乾燥物を用いる以外は、第Ｉ法
と同様に操作すれば、該乾燥物からα-モノグルコシル
ヘスペリジン高含有物が得られる。

【００５９】このようにして得られたα-モノグルコシ
ルヘスペリジン高含有物（(a)、(b)）中には、α-モノ
グルコシルヘスペリジンが８５重量％以上、好ましくは
９５重量％以上の量で含有され、またこのα-モノグル
コシルヘスペリジンと共存するヘスペリジン、β-モノ
グルコシルヘスペレチン（７-Ｏ-β-モノグルコシルヘ
スペレチン）、ヘスペレチンは、何れも全く含まれない
ことが最も望ましいが、これらを含む場合には、このα
-モノグルコシルヘスペリジンと共存するヘスペリジン
の含有量は、このα-モノグルコシルヘスペリジン１重
量部に対して０．１０重量部以下、好ましくは０．０５
重量部以下、特に好ましくは０〜０．０１重量部の量で
あり、またβ-モノグルコシルヘスペレチン（７-Ｏ-β-
モノグルコシルヘスペレチン）の含有量は、０．１０重
量部以下、好ましくは０．０５重量部以下、特に好まし
くは０〜０．０２重量部の量であることが望ましい。し
かも、ヘスペレチン含有量は、０．１０重量部以下、好
ましくは０．０５重量部以下、特に好ましくは０〜０．
０１重量部の量であることが望ましい。

【００６０】このようなα-モノグルコシルヘスペリジ
ン高含有物（(a)(b)）は、水溶性に優れ、例えば、固形
分濃度が３０重量％のα-モノグルコシルヘスペリジン
高含有物溶液を室温（例：２５℃）で４週間保持して
も、肉眼ではヘスペリジン、ヘスペレチン等の析出な
ど、フロック（ｆｌｏｃ：凝集塊）の生成が殆ど見られ
ない。

【００６１】このようにして得られたα-モノグルコシ
ルヘスペリジン高含有物中のα-モノグルコシルヘスペ
リジンは、体内に摂取されると生体内酵素の作用を受け
て元のヘスペリジンに戻り、ビタミンＰとしての諸機能
を発揮することができる。この場合、α-モノグルコシ
ルヘスペリジン（あるいはその高含有物）をビタミンＣ
と併用すれば、毛細血管の抵抗性の増強等のビタミンＰ
作用において相乗効果を発揮することができる。

【００６２】また、このようなα-モノグルコシルヘス
ペリジン高含有物は、天然色素の退色防止剤等の用途に
好適に使用できる。このようにα-モノグルコシルヘス
ペリジン高含有物を天然色素の退色防止に用いる場合、
天然色素で着色された試料重量当たり、０．００１〜
０．２重量％、好ましくは０．００５〜０．１重量％、
より好ましくは０．０１〜０．０５重量％の量で使用す
ることが望ましい。

【００６３】ここでさらに詳説すれば、ヘスペリジンは
特有の紫外部吸収スペクトルを持ち、可視部に目立った
吸収がないためほとんど無色であり、従来、紫外線で退
色の起きやすい色素、特に天然色素の退色防止に利用が
試みられてきたが、ヘスペリジンは水にほとんど溶けな
かったため効果を発揮するまでに至らなかった。また水
溶性を高めた酵素処理ヘスペリジンであっても、従来品
では、未反応ヘスペリジンの析出・沈澱が発生する恐れ
があり、その場合商品イメージを損ねるためその利用に
は問題があった。

【００６４】これに対して本発明に係るα-モノグルコ
シルヘスペリジン高含有物は、沈澱発生の恐れのほとん
どない水溶性のものであるため、天然色素の退色防止に
幅広く利用できる。特にパプリカ、β-カロチン、アス
タキサンチン等のカロチノイド系色素に有効であるが、
ブドウ果皮、ベニバナ黄等のフラボノイド色素、ビート
レッド、ウコン色素、クチナシ青、紅麹色素等にも効果
的に使うことができる。

【００６５】この場合、酵素処理ルチン、Ｌ-アスコル
ビン酸（またはＬ-アスコルビン酸ソーダ）の何れか１
つまたは両方を併用することにより、上記天然色素の退
色防止に相乗効果が得られる。

【００６６】また、このα-モノグルコシルヘスペリジ
ン高含有物をみかん缶詰の白濁防止に用いる場合、該α
-モノグルコシルヘスペリジン高含有物は、みかんおよ
び溶液（みかん缶詰の内の溶液）中に存在するヘスペリ
ジン（未反応ヘスペリジン）１重量部に対して、０．１
〜１０重量部、好ましくは０．１〜２重量部、より好ま
しくは０．１〜１重量部の量であることが望ましい。

【００６７】さらに、このα-モノグルコシルヘスペリ
ジン高含有物は、ヘスペリジンを含有するカンキツ類飲
料（例：温州みかん、ネーブル、オレンジなど。）の白
濁防止に使用することができ、この場合、用いるα-モ
ノグルコシルヘスペリジン高含有物の使用量は、溶液中
に存在するヘスペリジン（未反応ヘスペリジン）１重量
部に対して０．０１〜１０重量部、好ましくは０．１〜
２重量部、より好ましくは０．１〜１重量部であること
が望ましい。

【００６８】また、このα-モノグルコシルヘスペリジ
ン高含有物は、特有の視外部吸収特性を持つと共に、色
が極めて薄い等の特質を持つため、ＵＶカット剤などと
して化粧品などに利用することができる。

【００６９】

【発明の効果】本発明によれば、α-グルコシルヘスペ
リジンとヘスペリジンとを含有する溶液から、ヘスペリ
ジン、β-モノグルコシルヘスペレチン、ヘスペレチン
などをほとんど含まず、著しく水溶性に優れ、白濁（結
晶析出）が生じないようなα-モノグルコシルヘスペリ
ジン高含有物が収率よく簡単に得られる。

【００７０】

【実施例】以下、本発明に係るα-モノグルコシルヘス
ペリジン高含有物の分取（製造）方法について実施例に
基づいてさらに具体的に説明するが、本発明は、このよ
うな実施例により何等限定されるものではない。

【００７１】なお、以下の例において、「％」は、特に
その趣旨に反しない限り「重量％」の意味である。

【００７２】

【参考例１】ヘスペリジン５０．０ｇを０．２５Ｎ-苛
性ソーダ（ＮａＯＨ）０．９リットルに溶解し、そこに
ＤＥ８のデキストリン１５０ｇを加え溶解した。

【００７３】４Ｎ-硫酸でｐＨ９．０に調整し、バチル
ス・ステアロサーモフィルス由来のシクロデキストリン
グルカノトランスフィラーゼ（株式会社 林原生物化学
研究所 販売）をデキストリン１ｇ当たり１５単位加
え、６０℃まで加温しながらさらに４Ｎ-硫酸を滴下し
てｐＨ８．３に調整し、６時間反応させた。

【００７４】その後、再び４Ｎ-硫酸を滴下してｐＨ
７．０に調整し、６８℃に加温して４０時間反応させ
た。反応終了後、酵素を加熱失活させた後、濾過して酵
素処理ヘスペリジン溶液（Ａ液）を得た。

【００７５】Ａ液を下記条件下にＨＰＬＣ分析したとこ
ろ、反応前液中のヘスペリジンの７２％がα-グルコシ
ルヘスペリジンになっており、残り２８％は未反応のま
まであった。

【００７６】＜ＨＰＬＣ分析条件＞ カラム：Ｃ１８ 溶離液：メタノール／水／酢酸＝３０／６５／５ 検出 ：２８０ｎｍ 温度 ：４０℃ 流速 ：０．５ｍｌ／分 ［ヘスペリジン、β-モノグルコシルヘスペレチン、α-
モノグルコシルヘスペリジン、α-グルコシルヘスペリ
ジンなどの確認］ヘスペリジン、β-モノグルコシルヘ
スペレチン、α-モノグルコシルヘスペリジン、α-グル
コシルヘスペリジンなどの確認は以下の方法で行った。 １．ヘスペリジン： 試薬ヘスペリジン（東京化成）を
用いて同一であることを確認した。 ２．β-モノグルコシルヘスペレチン：試薬ヘスペリジ
ン（東京化成）にα-L-ラムノシダーゼを作用させ、高
速液体クロマトグラフィーで分析（上記分析条件）す
る。次いで、ヘスペリジンのＲ．Ｔ．（＝１０．９０）
の後の単一ピーク（Ｒ．Ｔ．＝１２．１３）画分を採取
し加水分解しグルコースを検出する。さらに本ピークの
紫外部吸収スペクトルがヘスペリジンと一致することを
確認し、このピークをβ-モノグルコシルヘスペレチン
（ヘスペレチン−７−グルコシド）とした。 ３．α-モノグルコシルヘスペリジン、α-グルコシルヘ
スペリジン：試薬ヘスペリジン（東京化成）を用いての
反応物を高速液体クロマトグラフィーで分析（上記分析
条件）する。各ピークの紫外部吸収スペクトルがヘスペ
リジンと一致することを確認する。またグルコアミラー
ゼを作用させ、高速液体クロマトグラフィーで分析（上
記分析条件）する。その結果、いずれもヘスペリジンの
Ｒ．Ｔ．（＝１０．９０）の前の単一ピーク（Ｒ．Ｔ．
＝１０．３４）になった。

【００７７】さらに本画分（Ｒ．Ｔ．＝１０．３４）を
採取し、α-グルコシダーゼ（Ｅ.Ｃ.3.2.1.20）を作用
させて加水分解するとグルコースとヘスペリジンが生成
することを確認する。Ｒ．Ｔ．＝１０．３４のピークを
α-モノグルコシルヘスペリジンとし、本ピーク及び本
ピークよりＲ．Ｔ．の小さいピーク群をα-グルコシル
ヘスペリジン画分とした。

【００７８】［ヘスペリジン、β-モノグルコシルヘス
ペレチン、α-モノグルコシルヘスペリジン、α-グルコ
シルヘスペリジンなどの重量の測定］またヘスペリジ
ン、β-モノグルコシルヘスペレチン、α-モノグルコシ
ルヘスペリジン、α-グルコシルヘスペリジンなどの重
量の測定は以下の方法で行った。 １．ヘスペリジン： 高速液体クロマトグラフィーで分
析し、試薬ヘスペリジン（東京化成）をもとに算出し
た。 ２．β-モノグルコシルヘスペレチン：高速液体クロマ
トグラフィーで分析し、試薬ヘスペリジン（東京化成）
をもとに分子量換算し算出した。 ３．α-モノグルコシルヘスペリジン：高速液体クロマ
トグラフィーで分析し、試薬ヘスペリジン（東京化成）
をもとに分子量換算し算出した。 ４．α-グルコシルヘスペリジン画分：本品（試料）の
乾燥品１．０ｇを水５０ｍｌに溶解し、この溶液を予め
高濃度のエタノール水溶液で活性化し水で充分水洗して
おいたＸＡＤ-７樹脂１００ｍｌにＳＶ＝１で通液し、
その後水洗し、５０％エタノール水溶液２００ｍｌで溶
出する。この液（溶出液）からエタノールを除いてから
濃縮・乾燥し重量を求める。高速液体クロマトグラフィ
ーで分析し、もしヘスペリジン、β-モノグルコシルヘ
スペレチンが含まれていたならば、前述の１，２に基づ
いて算出した値を減じてα-グルコシルヘスペリジン画
分重量を算出する。

【００７９】

【実施例１】参考例１の酵素処理ヘスペリジン溶液（Ａ
液）に、ヘスペリジナーゼ（ヘスペリジナーゼ２号，田
辺製薬 製）２ｇを加え、４Ｎ-硫酸でｐＨ４に調整し、
５５℃で２４時間反応させた後、グルコアミラーゼ（グ
ルコチーム，長瀬産業 製）１．０ｇを加え、さらに５
５℃で２４時間反応を継続させた。

【００８０】反応終了後、得られた反応液を９０℃で２
０分間保持して酵素を加熱失活させてから濾過して酵素
処理ヘスペリジン溶液（Ｂ液）を得た。Ｂ液を参考例１
に記載の条件でＨＰＬＣ分析したところ、Ｂ液中のα-
グルコシルヘスペリジンはその殆どがα-モノグルコシ
ルヘスペリジンに変化し、またＢ液中の未反応ヘスペリ
ジンは、殆ど（９９％以上）がβ-モノグルコシルヘス
ペレチン（ヘスペレチン−モノグルコサイド）に変わっ
ていた。

【００８１】１．５リットルの中間極性多孔性吸着樹脂
（ＸＡＤ-７）が充填され、高濃度のエタノール水溶液
で活性化しておいたカラムに上記酵素処理ヘスペリジン
溶液（Ｂ液）を通過させ、次いで、カラム容量の２倍量
の水で洗浄してから８０（Ｖ／Ｖ）％エタノール水溶液
３リットルで樹脂への吸着成分を脱着した。脱着液中の
エタノールを除去してから、凍結乾燥し固形物（Ｂ−
ｒ）を得た。

【００８２】この固形物（Ｂ−ｒ）には、α-モノグル
コシルヘスペリジンが８１重量％、β-モノグルコシル
ヘスペレチンが１８重量％、その他の成分が１重量％の
量で含まれており、またヘスペリジンとヘスペレチンは
検出されなかった。

【００８３】この固形物（Ｂ−ｒ）に９９％（Ｖ／Ｖ）
メタノール１００ｍｌを加えて８０℃で加熱溶解後、室
温下に放置し結晶を析出させた。析出した結晶は、９９
％（Ｖ／Ｖ）メタノールで洗浄してから乾燥させて固形
物（Ｂ−ｒ−ｃ）１２ｇを得た。この固形物（Ｂ−ｒ−
ｃ）には、α-モノグルコシルヘスペリジンが９８重量
％、β-モノグルコシルヘスペレチンが１重量％、その
他の成分が１重量％の量で含まれており、またヘスペリ
ジンとヘスペレチンは検出されなかった。

【００８４】併せて結果を表１〜２に示す。

【００８５】

【実施例２】参考例１に記載の酵素処理ヘスペリジン溶
液（Ａ液）にグルコアミラーゼ（グルコチーム，長瀬産
業 製）１ｇ、ヘスペリジナーゼ（ヘスペリジナーゼ２
号，田辺製薬 製）２ｇ、セルラーゼＡ＜アマノ＞３
［天野製薬（株）製］１０ｇを加え、４Ｎ-硫酸でｐＨ
４．０に調整し、５５℃で４８時間反応させた。

【００８６】反応終了後、酵素を加熱失活させてから濾
過して酵素処理ヘスペリジン溶液（Ｃ液）を得た。Ｃ液
を参考例１に記載の条件でＨＰＬＣ分析したところ、Ａ
液中に存在していたα-グルコシルヘスペリジンは、Ｃ
液中では、ほとんどがα-モノグルコシルヘスペリジン
に変化し、またＡ液中に存在していた未反応ヘスペリジ
ンは、Ｃ液中ではほとんど（９９％以上）がヘスペレチ
ンに変わっていた。

【００８７】このＣ液を実施例１で行ったように、１．
５リットルの中間極性多孔性吸着樹脂（ＸＡＤ-７）で
処理し、凍結乾燥して固形物（Ｃ−ｒ）を得た。この固
形物（Ｃ−ｒ）には、α-モノグルコシルヘスペリジン
が８５重量％、β-モノグルコシルヘスペレチンが２重
量％、ヘスペレチンが１２重量％、その他の成分が１重
量％の量で含まれ、ヘスペリジンは検出されなかった。

【００８８】この固形物（Ｃ−ｒ）に９９％（Ｖ／Ｖ）
メタノール２００ｍｌを加え８０℃で加熱溶解した後、
室温下に放置し、結晶を析出させた。析出した結晶は、
９９％（Ｖ／Ｖ）メタノールで洗浄してから乾燥させ固
形物（Ｃ−ｒ−ｃ）８ｇを得た。

【００８９】この固形物（Ｃ−ｒ−ｃ）には、α-モノ
グルコシルヘスペリジンが９６重量％、β-モノグルコ
シルヘスペレチンが２重量％、ヘスペレチンが１重量
％、その他の成分が１重量％の量で含有され、ヘスペリ
ジンは含まれていなかった。

【００９０】併せて結果を表１〜２に示す。

【００９１】

【比較例１】参考例１の酵素処理ヘスペリジン溶液（Ａ
液）にグルコアミラーゼ（グルコチーム，長瀬産業
製）１ｇを加え、４Ｎ-硫酸でｐＨ４．０に調整し、５
５℃で４８時間反応させた。

【００９２】反応終了後、酵素を加熱失活させてから濾
過して酵素処理ヘスペリジン溶液（Ｄ液）を得た。Ｄ液
を参考例１に記載の条件でＨＰＬＣ分析したところ、Ａ
液中には存在していたα-グルコシルヘスペリジンは、
Ｄ液中では、ほとんどがα-モノグルコシルヘスペリジ
ンに変化し、またＡ液中には存在していた未反応ヘスペ
リジンは、Ｄ液中でも変化はなかった。

【００９３】このＤ液を実施例１、２で行ったように
１．５リットルの中間極性多孔性吸着樹脂（ＸＡＤ-
７）で処理し、凍結乾燥して固形物（Ｄ−ｒ）を得た。
この固形物（Ｄ−ｒ）には、α-モノグルコシルヘスペ
リジンが７６重量％、ヘスペリジンが２３重量％、その
他の成分が１重量％の量で含まれ、β-モノグルコシル
ヘスペレチンとヘスペレチンは検出されなかった。

【００９４】この固形物（Ｄ−ｒ）に、実施例１、２と
同様に９９％（Ｖ／Ｖ）メタノール１００ｍｌを加え、
８０℃で加熱したが、固形物（Ｄ−ｒ）は一部しか溶解
せず、結晶を析出させて分取するのは困難であった。さ
らに、９９％（Ｖ／Ｖ）メタノール１００ｍｌを追加し
８０℃で加熱したが、固形物（Ｄ−ｒ）は一部しか溶解
せず、結晶を析出させてα-モノグルコシルヘスペリジ
ンを分取するのは困難であった。

【００９５】併せて結果を表１〜２に示す。

【００９６】

【表１】

【００９７】

【表２】

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】α-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジ
   ンとを含有する溶液に、グルコアミラーゼとα-L-ラム
   ノシダーゼとを同時に、または何れか一方を先にして順
   次作用させ、 得られた混合物からα-モノグルコシルヘスペリジンを
   析出分離し、これを採取することを特徴とするα-モノ
   グルコシルヘスペリジン高含有物の製造方法。
2. 【請求項２】α-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジ
   ンとを含有する溶液に、グルコアミラーゼとα-L-ラム
   ノシダーゼとβ-D-グルコシダーゼを同時に、または何
   れか一種を先にして順次作用させ、 得られた混合物からα-モノグルコシルヘスペリジンを
   析出分離し、これを採取することを特徴とするα-モノ
   グルコシルヘスペリジン高含有物の製造方法。
3. 【請求項３】低級アルコール中で析出させることにより
   α-モノグルコシルヘスペリジン高含有物を分離し、こ
   れを採取することを特徴とする請求項１または２に記載
   の方法。
4. 【請求項４】α-モノグルコシルヘスペリジン高含有物
   がα-モノグルコシルヘスペリジンを８５重量％以上の
   量で含むことを特徴とする請求項１〜３の何れかに記載
   の方法。