KR100274927B1 - α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명의 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 제조방법은 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액에 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제를 동시에 또는 어느 한쪽을 우선적으로 순차 작용시키고, 얻어진 혼합물로부터 α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하여 이를 채취하는 것을 특징으로 하고 있다.

본 발명에 따르면 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액으로부터 헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴, 헤스페레틴 등을 전혀 포함하지 않고, 현저하게 수용성이 우수해진 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물이 쉽게 얻어진다.

Description

α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 제조방법

본 발명은 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 제조방법에 관한 것으로, 더 상세하게는 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액을 처리하여 α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하고, 이를 채취하는 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 제조방법에 관한 것이다.

헤스페리딘(Hesperidin)은 하기 화학식 1:

의 헤스페레틴(5,7,3'-트리히드록시-4'-메톡시후라바논)의 7번 위치의 수산기에 루티노스(L-람노실-(α1-〉6)-글루코스)가 β-결합한 것을 말한다. 이 헤스페리딘은 감귤류의 미숙한 과피에 함유되어 있고, 모세혈관의 강화, 출혈예방, 혈압조정 등의 생리작용을 갖는 비타민 P로서 의약품, 화장품 등으로 제공된다. 또한 이 헤스페리딘은 알칼리성 수용액에는 가용성이지만 물, 산에는 난용성이고, 실온에서는 50ℓ의 물에 겨우 1g(약 0.002W/V%)정도밖에 녹지 않고, 이 헤스페리딘이 예를 들어 통조림의 액즙에 소량이라도 함유되어 있으면 액즙이 백탁하여 상품가치가 떨어진다.

종래 헤스페리딘에 의한 액즙의 백탁을 방지하기 위하여 여러 방법이 제안되어 왔다.

예를 들어 일본 공개특허공보 평3-7593호 공보에는 헤스페리딘에 전분 부분분해물(α-글루코실 당화합물) 공존 하에 당전이효소(α-글루코실 전이 활성을 갖는 효소)를 작용시켜, 하기 화학식 2의 α-글루코실헤스페리딘을 생성시켜 수용성을 높인 효소처리 헤스페리딘의 제조방법이 개시되어 있다.

이 α-글루코실헤스페리딘은 상기 화학식 2에 기재한 바와 같이 화학식 1의 헤스페리딘의 글루코스의 4번 위치에 글루코스(G)가 α-1,4 결합으로 순차 n 개(1~20개) 결합한 화합물 또는 이들 글루코스 수가 다른 α-글루코실헤스페리딘의 혼합물이다.

이 효소반응에 있어서는 원료액에 포함되는 헤스페리딘의 40~80%가 효소처리에 의해 α-글루코실헤스페리딘으로 변환되지만 20~60%는 미반응헤스페리딘으로서 잔존해 버린다. 미반응헤스페리딘(헤스페리딘)은 α-글루코실헤스페리딘이 공존하면 수용액 중에서의 용해성이 높아지지만 α-글루코실헤스페리딘에 대해서 미반응헤스페리딘의 비율이 높으면 단시간에 미반응헤스페리딘이 불용화되어 석출하게 된다.

이 미반응헤스페리딘의 석출을 예방하는 수단의 일종으로서 CMC(카르복시메틸셀룰로오스) 등의 호료를 헤스페리딘 함유액에 첨가하여, 수용액의 점성을 높이는 것을 고려할 수 있지만 이와 같은 호료의 첨가는 상품 이미지상 바람직하지 않고 또한 수출상품에는 사용할 수 없는 등, 일반적인 방법이라고는 할 수 없다.

한편 미반응헤스페리딘을 석출시키고 여과 등으로 분리 제거하여 α-글루코실헤스페리딘에 대한 미반응헤스페리딘의 비율을 낮춤으로써 미반응헤스페리딘의 석출을 지연시키는 방법이 있다.

그러나 이 방법을 사용해도 오랜 시간이 경과하면 원래대로 미반응헤스페리딘이 석출하는 문제점이 있어서 본질적인 해결책이 된다고는 할 수 없다.

또한 크로마토그래피 분리 등의 방법으로 α-글루코실헤스페리딘과 미반응헤스페리딘을 함유하는 수용액에서 α-글루코실헤스페리딘 구분만을 빼내서 이용하는 방법도 있지만 비용발생이 커져 경제적인 방법이라고는 할 수 없다.

이와 같은 문제점을 해결하기 위하여 본 발명자들은 예의 연구를 거듭하여, 우선 α-글루코실헤스페리딘과 미반응헤스페리딘을 함유하는 용액에 α-L-람노시다아제 활성을 갖는 효소를 작용시키면 α-글루코실헤스페리딘은 조금도 변하지 않고 그대로이지만 미반응헤스페리딘은 가수분해되어 람노오스가 분리되고 하기 화학식 3의 β-모노글루코실헤스페레틴으로 변환되어 수용성이 현저하게 높아지므로 장기간이 경과해도 백탁 등이 생기지 않는 효소처리 헤스페리딘을 얻을 수 있다는 것을 발견하였다.

또한 "사이클로덱스트린 합성효소에 의한 헤스페리딘 배당체 생성과 천연색소의 안정화"라는 제목의 요네타니(米谷), 데라다(寺田) 등의 논문(일본식품과학공학회지, 제42권 제5호, p376~382, 1995년 5월 발간)에는 당수용체의 헤스페리딘, 당공여체의 β-CD 및 당전이효소의 CGTase를 반응시켜 헤스페리딘 배당체(Hsp-Gn)을 얻은 후, 이 헤스페리딘 배당체의 정제단계에서 이 헤스페리딘 배당체에 α-람노시다아제를 작용시키면 미반응헤스페리딘만이 가수분해되고, 세파덱스 LH-20 칼럼 크로마토그래피에 의해 효과적으로 헤스페리딘 배당체(정제물)와 미반응헤스페리딘을 분리할 수 있다는 것을 알게된 내용이 기재되어 있고, 얻어진 헤스페리딘 배당체(정제물)를 천연색소 용액에 첨가한 경우 자외선에 의한 천연색소의 퇴색을 억제할 수 있다는 것이 기재되어 있다.

그렇지만 화학식 4의 α-모노글루코실헤스페리딘에 있어서는 이 요네타니, 데라다 등의 논문에 기재된 방법으로는, 함유되어 있는 헤스페레틴을 미리 앰버라이트(Amberlite) XAD-16으로 분리하고, 얻어진 β-모노글루코실헤스페레틴과 α-모노글루코실헤스페리딘 및 α-디글루코실헤스페리딘의 혼합물로부터 α-모노글루코실헤스페리딘과 α-디글루코실헤스페리딘을 고가인 칼럼 크로마토그래피에 의해 한번 더 분리해야하기 때문에 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물만을 좋은 효율로 얻는 것은 어렵다. 따라서 이를 보다 간단하고 낮은 가격으로 얻을 수 있다면 의약품, 화장품, 식품첨가물 등과 같은 폭 넓은 용도로의 더 많은 이용을 기대할 수 있다.

또한 상기 일본 공개특허공보 평3-7593호 공보에는 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘의 혼합액에 글루코아밀라아제(E.C.3.2.1.3)을 작용시켜, α-글루코실헤스페리딘을 α-모노글루코실헤스페리딘으로 변화시키고, 다이야이온 HP-20 칼럼으로 통과시키고 세척한 후, 에탄올 수용액 중의 에탄올 농도를 단계적으로 높이면서 α-모노글루코실헤스페리딘 분획을 얻는 방법이 개시되어 있다. 이 일본 공개특허공보 평3-7593호 공보에 기재된 방법에 있어서도 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물을 낮은 가격에 공급하는 것은 어렵다고 생각된다.

여기서 본 발명자들은 더 많은 연구를 거듭한 결과 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액에,

글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제(E.C.3.2.1.40)을 작용시킨 후, α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하여 이를 채취하는 방법, 또는

글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제, β-D-글루코시다아제(E.C.3.2.1.21)를 작용시킨 후, α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하여 이를 채취하는 방법

중의 어느 한 방법을 사용하여,

얻어진 혼합물에서 α-모노글루코실헤스페리딘을 좋은 효율로 분리·채취(분취)할 수 있음을 알게되어 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명에는 석출한 α-모노글루코실헤스페리딘을 원래 혼합물에서 고액 분리할 정도로 대단히 좋은 효율로 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물을 제조할 수 있다.

또한 헤스페리딘에 α-L-람노시다아제 활성을 갖는 효소를 작용시켜 헤스페리딘을 β-모노글루코실헤스페레틴으로 변환하여 수용성을 향상시키는 방법은 밀감 통조림 시럽의 백탁 방지법으로서 공업적으로 행해지고 있다.

그러나 본 발명과 같이 α-글루코실헤스페리딘과 미반응헤스페리딘을 함유하는 용액에 글루코아밀라아제, α-L-람노시다아제를 작용시키거나 또는 글루코아밀라아제, α-L-람노시다아제 및 β-D-글루코시다아제의 각 활성을 갖는 효소제를 작용시키고, α-글루코실헤스페리딘의 람노오스는 그 자체로 글루코스 4번 위치에 다수 결합하고 있는 글루코스(G) n 중의 1개만 남기고 가수분해하여 α-모노글루코실헤스페리딘으로 하고, 한편 헤스페리딘의 람노오스를 가수분해하여 β-모노글루코실헤스페레틴(7-O-β-모노글루코실헤스페레틴)으로 바꾸거나, 또는 β-모노글루코실헤스페레틴의 β-글루코스를 가수분해하여 헤스페레틴으로 바꿈으로써 좋은 효율로 α-모노글루코실헤스페리딘만을 석출, 분리하여 이를 채취하는 방법은 시사되어 있지 않았다.

또한 일본 공개특허공보 평8-80177호 공보에는 가용화 헤스페리딘을 헤스페리딘이 함유되어 있는 수용액에 첨가하는 헤스페리딘 결정의 석출방지법이 개시되어 있고, 이 가용화 헤스페리딘은 헤스페리딘 중 글루코스기의 4번 위치의 글루코스가 α-1,4결합으로 순차 1~십수개 결합한 화합물이고, 이와 같은 가용화 헤스페리딘은 당전이효소를 사이클로덱스트린 등의 존재하에 헤스페리딘에 작용시켜 생산할 수 있으며, 그 당전이효소로서는 예를 들어 CGTase 즉, 1,4-α-D-글루칸; 1,4-α-D(1,4-글루카노)-트랜스퍼라아제(E.C.2.4.1.19), 더욱 구체적으로는 바티루스 속의 A2-5a균주 배양물로부터 채취된 당전이효소를 이용하여 생산할 수 있다는 취지로 기재되어 있다.

그렇지만 그 공보에는 가용화헤스페리딘을 미반응헤스페리딘에 첨가, 혼합하여 헤스페리딘 함유물 중의 헤스페리딘 결정석출을 방지한다는 기술사상이 개시되는데 그친다. 또한 그 공보에 기재된 방법으로 얻어지는 것은 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘의 혼합물이고, 생성물에는 미반응헤스페리딘이 그대로 함유되어 있기 때문에, 예를 들어 그와 같은 방법으로 제조한 통조림에는 그 액즙이 점차로 백탁하기 쉬운 문제점이 있다. 이에 대한 대처방법으로서 그 공보의 실시예에는 α-모노글루코실헤스페리딘과 α-디글루코실헤스페리딘 분획을 채취하여 사용하고 있다. 그렇지만 상기 2성분 분획을 경제적으로 채취하는 것은 기술적으로 어렵다.

본 발명은 상기와 같은 종래기술에 수반되는 문제점을 해결하기 위한 것으로 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액에 간단한 처리를 하여 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물을 분취하는 방법의 제공을 목적으로 하고 있다.

본 발명의 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 제조방법으로는,

α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액(a)에 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제를 동시에 또는 각각 작용시킨 후, 얻어진 혼합물(효소반응액)(b-1)에서 α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하거나(제I법) 또는

상기 용액(a)에 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제, β-D-글루코시다아제의 각 활성을 갖는 효소제류를 동시에 또는 각각 작용시킨 후, 얻어진 혼합물(효소반응액)(b-2)에서 α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하는 방법(제II법)

의 어느 한 방법으로 상기 용액(a)에서 α-모노글루코실헤스페리딘을 분리하고, 이를 채취하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 바람직한 태양에 있어서는 α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하기 전에 상기 효소반응액을 다공성 흡착수지와 접촉시키고, α-모노글루코실헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴, 헤스페레틴 등을 그 수지에 흡착시키고, 다음으로 세척에 의해 덱스트린 등을 유출시킨 후, 유기용제(예: 알콜)로 α-모노글루코실헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴, 헤스페레틴을 용출시키는 것이 바람직하며, 또는 이와 같이 하여 얻어진 용출액 중에 포함되는 사용된 유기용제를 제거하여 방치하는 것이 바람직하다. 본 발명의 더욱 바람직한 태양에 있어서는 저급알콜(예:메탄올)중에서 이 용출액 중에 포함되는 α-모노글루코실헤스페리딘을 석출시켜, 분취하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따르면 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액으로부터 헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴, 헤스페레틴 등을 조금도 포함하지 않고 현저하게 수용성이 우수해진 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물을 쉽게 얻을 수 있다.

이하, 본 발명의 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 제조방법에 대해서 구체적으로 설명한다.

본 발명의 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 분취(제조)방법으로는 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액에 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제 및 β-D-글루코시다아제를 동시에 또는 각각 작용시키고(단 β-D-글루코시다아제를 글루코아밀라아제 및 α-L-람노시다아제보다 먼저 작용시키는 것은 아니다), 얻어진 효소처리액으로부터 α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하여 이를 채취하고 있지만,

이때 사용되는 "α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액"에 대해서 먼저 설명한다.

[α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액]

이와 같은 효소처리의 대상이 되는 용액으로서는 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 것이라면 그 함량비, 농도 등은 특별히 한정되지는 않지만 바람직하게는 처리해야할 용액 중의 α-글루코실헤스페리딘 농도가 0.1~30중량%, 바람직하게는 1~10중량%이고, 헤스페리딘 농도가 0.02~15중량%, 바람직하게는 0.2~5중량%이며, α-글루코실헤스페리딘/헤스페리딘(중량비)가 100/1~200, 바람직하게는 100/1~20이다.

α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액으로서는 하기 ①~②에 기재한 것을 예로 들 수 있다.

①: 일본 공개특허공보 평3-7593호 공보에 기재되어 있는 바와 같이 헤스페리딘에 전분 부분분해물(α-글루코실당화합물) 공존 하에 당전이효소(α-글루코실전이활성을 갖는 효소)를 작용시켜 얻어지고, α-글루코실헤스페리딘과 미반응헤스페리딘을 함유하고 있는 것.

②: 상기와 같이 해서 얻어진 α-글루코실헤스페리딘 함유물 중의 헤스페리딘을 석출시킨 후, 여과 등에 의해 한번 더 헤스페리딘을 분리, 제거하여 α-글루코실헤스페리딘에 대한 헤스페리딘의 비율을 낮춘 것.

[글루코아밀라아제, α-L-람노시다아제, β-D-글루코시다아제의 각 활성을 갖는 효소제]

본 발명에 있어서는 글루코아밀라아제, α-L-람노시다아제, β-D-글루코시다아제는 각각의 효소활성을 갖는 것이라면 어느 것이라도 사용할 수 있다.

글루코아밀라아제로서는 구체적으로, "글루코자임NL4,2"(천야제약(주)제), "셀룰라아제A〈아마노〉3"(천야제약(주)제), "글루코팀"(장뢰산업(주)제), "유니아제30"((주)야쿠르트제), "나린기나아제"(전변제약(주)제) 등의 시판 효소제와 같이 α-1,4 글루코시드 결합을 글루코스 단위로 절단한 효소를 예로 들 수 있다.

α-L-람노시다아제로서는 구체적으로 "헤스페리디나아제"(전변제약(주)제", "나린기나아제"(전변제약(주)제), "셀룰라아제A〈아마노〉3"(천야제약(주)제) 등의 시판 효소제를 예로 들 수 있고, 바람직하게는 "헤스페리디나아제"를 사용할 수 있다.

β-D-글루코시다아제로서는 구체적으로는, 예를 들어 "셀룰라아제 A〈아마노〉3"(천야제약(주)제) 등의 시판 효소제를 예로 들 수 있다.

이들 효소제 중 글루코아밀라아제 활성을 갖는 효소제는 상기 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액 중의 α-글루코실헤스페리딘 100중량부당 바람직하게는 0.01~10중량부, 더욱 바람직하게는 0.1~1중량부 정도로 사용된다.

α-L-람노시다아제 활성을 갖는 효소제는, 상기 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액 중의 헤스페리딘 100중량부당 바람직하게는 0.05~50중량부, 더욱 바람직하게는 1.5~15중량부 정도로 사용된다.

또한 β-D-글루코시다아제 활성을 갖는 효소제는 상기 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액 중의 헤스페리딘 100중량부당 바람직하게는 0.01~20중량부, 더욱 바람직하게는 0.1~10중량부 정도로 사용된다. 또한 글루코아밀라아제 활성, α-L-람노시다아제 활성, β-D-글루코시다아제 활성 중 2개 이상의 활성을 갖는 시판 효소제 {예:"셀룰라아제A〈아마노〉3"(천야제약(주)제)}를 사용하는 경우에는 그 양을 적의 가감하여 설정할 수 있다.

또한 이들 효소를 상기 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액 중의 α-글루코실헤스페리딘 또는 헤스페리딘에 작용시키는 경우에는 통상 pH 3~7, 바람직하게는 pH 3~4로, 통상 40~70℃, 바람직하게는 50~60℃의 온도에서, 통상 0.5~72시간, 바람직하게는 6~48시간 정도 유지하면 좋다.

이와 같은 조건에서 상기 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액을 효소 처리한 경우, α-글루코실헤스페리딘은 상기 α-L-람노시다아제(예:헤스페리디나아제) 처리에 의해서는 그 작용을 실질적으로 받을 수 없다.

그렇지만 이 α-글루코실헤스페리딘은 글루코아밀라아제의 가수분해작용을 받아서, 이 α-글루코실헤스페리딘의 헤스페레틴 골격 7번 위치의 글루코스에 α-1,4 결합으로 n개 순차 결합(n=1~십수개)하고 있는 글루코스가 1개 남아서 가수분해되어 상기 화학식 2 중 n=1의 α-모노글루코실헤스페리딘이 된다.

다시 말해 α-글루코실헤스페리딘(포함하는 α-모노글루코실헤스페리딘)에 β-D-글루코시다아제를 작용시켜도 실질적으로 가수분해되지 않는다.

한쪽의 헤스페리딘은 상기 α-L-람노시다아제의 작용을 받아서 그 람노오스기가 가수분해되어, β-모노글루코실헤스페레틴(7-O-β-모노글루코실헤스페레틴)이 된다.

이 β-모노글루코실헤스페레틴에 한번 더 β-D-글루코시다아제가 작용하면 이 β-모노글루코실헤스페레틴의 헤스페레틴 골격 7번 위치에 결합하고 있는 β-글루코스기가 가수분해되어 β-모노글루코실헤스페레틴은 물에 난용성의 헤스페레틴이 된다.

따라서 본 발명에서 상기 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액으로의 상기 각 효소의 첨가순서는,

α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액에 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제를 작용시키고, 얻어진 혼합물(효소반응액)에서 α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하는 제I법에서는 α-글루코실헤스페리딘의 α-모노글루코실헤스페리딘화와 헤스페리딘의 β-모노글루코실헤스페레틴화의 어느 한쪽을 먼저 또는 동시에 진행시키면 좋기 때문에 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제의 어느 한쪽을 먼저 또는 동시에 진행시키는 것이 좋다. 얻어진 효소반응액 중의 각 성분 함량은 α-모노글루코실헤스페리딘 1중량부에 대해서 β-모노글루코실헤스페레틴이 0.5중량부 이하, 헤스페리딘 및 헤스페레틴이 각각 0.1중량부 이하이다. 또한 당류 등 기타 성분은 그 효소반응액 중의 α-모노글루코실헤스페리딘 1중량부에 대해서 1중량부 이상으로 함유되는 것이 많다.

α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액에 글루코아밀라아제, α-L-람노시다아제, β-D-글루코시다아제를 동시에 또는 어느 한종을 우선적으로 순차 작용시키고, 얻어진 혼합물(효소반응액)로부터 α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하는 제II법에서는,

① 글루코아밀라아제, α-L-람노시다아제 및 β-D-글루코시다아제를 동시에 첨가하는 방법,

② 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제를 첨가하여 작용시킨 후, β-D-글루코시다아제를 첨가하여 작용시키는 방법,

③ 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제를 임의 순서로 첨가하여 작용시킨 후, β-D-글루코시다아제를 작용시키는 방법,

④ 헤스페리딘의 헤스페레틴화를 먼저 진행하기 위해 α-L-람노시다아제와 β-D-글루코시다아제를 작용시킨 후, 글루코아밀라아제를 작용시키는 방법 등을 예로 들 수 있다. 어느 경우도 이들 각 효소는 한번에 또는 소량씩 첨가하는 것이 가능하다.

얻어진 효소반응액 중의 각 성분 함량은 α-모노글루코실헤스페리딘 1중량부에 대해서 헤스페레틴이 0.4중량부 이하, β-모노글루코실헤스페레틴과 헤스페리딘이 각각 0.1중량부 이하이다. 그리고 당류 등 기타 성분은 그 효소반응액 중의 α-모노글루코실헤스페리딘 1중량부에 대해서 1중량부 이상으로 포함되는 것이 많다.

본 발명에 있어서, 이들 중 제I법에서는 α-L-람노시다아제를 먼저 작용시킨 후, 글루코아밀라아제를 작용시키는 것이 바람직하다.

또한 제II법으로는 α-L-람노시다아제를 작용시킨 후, 글루코아밀라아제와 β-D-글루코시다아제를 작용시키는 것이 반응 효율면에서 바람직하다.

[α-모노글루코실헤스페리딘의 분취]

본 발명에서는 상기와 같이 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액을 효소처리하여 얻어지는 α-모노글루코실헤스페리딘을 함유하는 효소처리액(효소처리α-모노글루코실헤스페리딘 함유액이라고도 한다)으로부터 α-모노글루코실헤스페리딘을 분취한다.

이와 같이 효소처리액으로부터 α-모노글루코실헤스페리딘을 분취하는 경우 제I법에서는 저급알콜에 하기 효소처리액 즉 "α-모노글루코실헤스페리딘 1중량부에 대해서 β-모노글루코실헤스페레틴이 0.5중량부 이하, 헤스페리딘 및 헤스페레틴이 각각 0.1중량부 이하, 그리고 당류 기타 성분이 많은 경우 1중량부 이상으로 포함되는 효소처리액"을 혼합하고,

제II법에서는 하기 효소처리액 즉 "α-모노글루코실헤스페리딘 1중량부에 대해서 헤스페레틴이 0.4중량부 이하, β-모노글루코실헤스페레틴과 헤스페리딘이 각각 0.1중량부 이하, 그리고 당류 등 기타 성분이 많은 경우 1중량부 이상으로 포함되는 효소처리액"을 혼합하지만,

본 조작에 앞서서 효소처리액 중의 유리 당분을 제거해 두는 것이 바람직하다. 유리 당분의 제거방법은 효소처리액 중의 유리 당분을 좋은 효율로 제거하는 방법이면 어느 것이나 좋지만 다공성 흡착수지를 사용하는 방법이 간편하다.

다공성 흡착수지로서는 구체적으로 예를 들어 HP-20, HP-50, XAD-2 등의 비극성수지, XAD-7 등의 중간극성수지가 바람직하게 사용된다. 이들 방법으로는 칼럼에 다공성 흡착수지를 충진하고, 고농도의 에탄올 수용액 등으로 활성화해 둔 칼럼에 상기 효소처리 α-모노글루코실헤스페리딘 함유액을 10~60℃의 온도에서 통과시키는 등의 방법으로 그 수지에 상기 효소처리 α-모노글루코실헤스페리딘 함유액을 접촉시키고, α-모노글루코실헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴, 헤스페레틴 등을 흡착시킨다.

다음으로 충진 수지 용량의 1~4배량 정도의 물로 세척하여 유리당을 주체로 하는 불순물을 제거한 후, 알콜, 알콜수(알콜/물=50~100/25~1) 등의 용리액을 10~60℃의 온도에서 통과하는 등의 방법으로 그 수지에 흡착하고 있는 α-모노글루코실헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴, 헤스페레틴 등을 용출시킨다.

제I법에서는 본 조작에 의해 α-모노글루코실헤스페리딘 1중량부에 대해서 β-모노글루코실헤스페레틴이 0.5중량부 이하, 헤스페리딘 및 헤스페레틴이 각각 0.1중량부 이하, 그리고 당류 등 기타 성분이 0.1중량부 이하인 용출액이 얻어지고,

또한 제II법에서는 본 조작에 의해 α-모노글루코실헤스페리딘 1중량부에 대해서 헤스페레틴이 0.4중량부 이하, β-모노글루코실헤스페레틴과 헤스페리딘이 각각 0.1중량부 이하, 그리고 당류 등 기타 성분이 0.1중량부 이하인 용출액이 얻어진다.

상기 알콜로서는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등의 탄소수 1~5의 저급알콜을 예로 들 수 있다.

다음으로 상기 용출액 중의 α-모노글루코실헤스페리딘을 저급알콜 중에서 용출시키고 고액분리하여, 이를 채취함으로써 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물을 얻는 것이 가능하다.

본 조작은 α-모노글루코실헤스페리딘이 가온된 저급알콜 중에는 쉽게 용해되는 반면, 그것을 실온(예:15~25℃) 이하의 온도로 낮추면 α-모노글루코실헤스페리딘이 쉽게 석출되는 현상과 β-모노글루코실헤스페레틴은 저급알콜 중에 용해하기 쉽고, 실온 이하의 온도로 낮추어도 β-모노글루코실헤스페레틴은 석출하기 어려운 현상을 발견하여 완성된 것이다.

이하에서 석출분리 조작을 제I법, 제II법 각각 상술하지만, 제I법, 제II법도 효소처리된 상기 용출액을 상기 저급알콜에 용해하기 전에 미리 건조물로서 두는 것이 바람직하다.

〈석출분취조작〉

제I법:

α-모노글루코실헤스페리딘 1중량부에 대해서 β-모노글루코실헤스페레틴이 0.5중량부 이하, 헤스페리딘 및 헤스페레틴이 각각 0.1중량부 이하, 그리고 당류 등 기타 성분이 0.1중량부 이하로 포함되는 건조물을 저급알콜, 바람직하게는 메탄올에 용해한다. 그 건조물 1g에 대해서 메탄올을 0.2~20ml, 바람직하게는 1~10ml 가하고, 20~120℃, 바람직하게는 60~90℃의 온도로 가열하여 용해한다.

그 후, 이 용액을 냉각, 예를 들어 실온 이하∼상기 알콜의 융점 이상의 온도로 냉각하거나 또는 실온 하에 방치하면 대부분 α-모노글루코실헤스페리딘만이 석출된다. 이와 같이 용액을 냉각할 때에는 미리 미분말상으로 조제한 α-모노글루코실헤스페리딘을 그 용액에 시드로서 소량 가하는 등의 조작을 행하면 보다 신속하게 α-모노글루코실헤스페리딘이 석출된다.

그 후, 원심분리기 등으로 고액분리하면 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물을 얻는 것이 가능하다.

고액분리하는 경우는 석출한 α-모노글루코실헤스페리딘 결정을 저급알콜로 세척하면 보다 α-모노글루코실헤스페리딘 함유율이 높은 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물이 얻어진다.

제II법

상기 제I법에 있어서, α-모노글루코실헤스페리딘 1중량부에 대해서 헤스페레틴이 0.4중량부 이하, β-모노글루코실헤스페레틴과 헤스페리딘이 각각 0.1중량부 이하, 그리고 당류 등 기타 성분이 0.1중량부 이하로 포함되어 있는 건조물의 사용 이외에는 제I법과 동일하게 조작하면 그 건조물로부터 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물이 얻어진다.

이와 같이 해서 얻어진 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물((a),(b)) 중에는 α-모노글루코실헤스페리딘이 85중량% 이상, 바람직하게는 95중량% 이상으로 함유되고, 또한 이 α-모노글루코실헤스페리딘과 공존하는 헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴(7-O-β-모노글루코실헤스페레틴), 헤스페레틴은 어느 것이라도 전혀 포함되어 있지 않은 것이 가장 바람직하지만 이들을 포함하는 경우에는 이 α-모노글루코실헤스페리딘과 공존하는 헤스페리딘의 함유량이 이 α-모노글루코실헤스페리딘 1중량부에 대해서 0.10중량부 이하, 바람직하게는 0.05중량부 이하, 특히 바람직하게는 0~0.01중량부이고, 또한 β-모노글루코실헤스페레틴(7-O-β-모노글루코실헤스페레틴)의 함유량은 0.10중량부 이하, 바람직하게는 0.05중량부 이하, 특히 바람직하게는 0~0.02 중량부인 것이 바람직하다. 그렇지만 헤스페레틴 함유량은 0.10중량부 이하, 바람직하게는 0.05중량부 이하, 특히 바람직하게는 0~0.01중량부인 것이 바람직하다.

이와 같은 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물((a), (b))은 수용성이 우수하고, 예를 들어 고형분 농도가 30중량%의 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물 용액을 실온(예:25℃)에서 4주간 유지해도 육안으로 헤스페리딘, 헤스페레틴 등의 석출 등, 플록(floc:응집괴)의 생성이 전혀 발견되지 않는다.

이와 같이 해서 얻어진 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물 중의 α-모노글루코실헤스페리딘은 체내에 섭취되면 생체 내 효소작용을 받아서 원래의 헤스페리딘으로 돌아가고, 비타민 P로서의 제기능을 발휘할 수 있다. 이 경우 α-모노글루코실헤스페리딘(또는 그 고함유물)을 비타민 C와 병용하면 모세혈관의 저항성의 증강 등의 비타민 P 작용에 있어서 상승효과를 발휘하는 것이 가능하다.

또한 이와 같은 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물은 천연색소의 퇴색방지제 등의 용도에 바람직하게 사용할 수 있다.

이와 같이 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물을 천연색소의 퇴색방지에 사용하는 경우, 천연색소로 착색된 시료 중량당 0.001~0.2중량%, 바람직하게는 0.005~0.1중량%, 더욱 바람직하게는 0.01~0.05중량%로 사용하는 것이 바람직하다.

여기서 더 상세히 설명하면 헤스페리딘은 특유의 자외부 흡수 스펙트럼을 가지고, 가시부에 두드러진 흡수가 없으므로 대부분 무색이며, 종래 자외선으로 퇴색을 일으키기 쉬운 색소, 특히 천연색소의 퇴색방지에 시험삼아 이용되어 왔지만 헤스페리딘은 물에 전혀 녹지 않았기 때문에 효과를 발휘하지는 못했다. 또한 수용성을 높인 효소처리 헤스페리딘이었어도 종래품으로는 미반응헤스페리딘의 석출·침전이 발생할 위험이 있어서 그 경우 상품 이미지를 훼손하므로 그 이용에는 문제가 있었다.

여기에 대해서 본 발명의 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물은 침전발생의 위험이 전혀 없는 수용성이므로 천연색소의 퇴색방지에 폭 넓게 이용할 수 있다. 특히 파프리카, β-카로틴, 아스타키센틴 등의 카로티노이드계 색소에 유효하지만 포도 과피, 홍화황(紅花黃) 등의 후라보노이드 색소, 비토레드, 울금색소, 치자청, 홍국색소 등에도 효과적으로 사용할 수 있다.

이 경우 효소처리 루틴, L-아스콜빈산(또는 L-아스콜빈산소다)의 어느 1개 또는 양쪽을 병용함으로써 상기 천연색소의 퇴색방지에 상승효과가 얻어진다.

또한 이 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물을 밀감통조림의 백탁방지에 사용하는 경우, 그 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물은 밀감 및 용액(밀감통조림 내의 용액)중에 존재하는 헤스페리딘(미반응헤스페리딘) 1중량부에 대하여 0.1~10중량부, 바람직하게는 0.1~2중량부, 더욱 바람직하게는 0.1~1중량부가 바람직하다.

더욱이 이 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물은 헤스페리딘을 함유하는 감귤류 음료(예:온주밀감, 네불, 오렌지 등.)의 백탁방지에 사용하는 것이 가능하고, 이 경우 사용하는 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 사용량은 용액 중에 존재하는 헤스페리딘(미반응헤스페리딘) 1중량부에 대해 0.01~10중량부, 바람직하게는 0.1~2중량부, 더욱 바람직하게는 0.1~1중량부이다.

또한 이 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물은 특유의 시외부 흡수특성을 가짐과 함께 색이 매우 연한 등의 특징을 가지므로 UV 차단제 등으로서 화장품 등에 이용할 수 있다.

본 발명에 따르면 α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액으로부터 헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴, 헤스페레틴 등을 전혀 포함하지 않고, 현저하게 수용성이 우수하고, 백탁(결정석출)이 발생하지 않는 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물이 좋은 수율로 간단하게 얻어진다.

이하 본 발명의 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 분취(제조)방법에 대해서 실시예에 기초해서 더욱 구체적으로 설명하지만 본 발명은 이와 같은 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

또한 이하의 예에서 "%"는 특히 그 취지에 반하지 않는 한도에서 "중량%"의 의미이다.

참고예 1

헤스페리딘 50.0g을 0.25N-가성소다(NaOH) 0.9리터에 용해하고, 거기에 DE8의 덱스트린 150g을 가하여 용해하였다.

4N-황산으로 pH 9.0으로 조정하고, 바티루스·스테아로사모피루스 유래의 시클로덱스트린글카노트랜스퍼라아제(주식회사 임원생물화학연구소 판매)를 덱스트린 1g당 15단위 가하고, 60℃까지 가온하면서 한번 더 4N-황산을 적하하여 pH 8.3으로 조정하고 6시간 반응시켰다.

그 후 다시 4N-황산을 적하하여 pH 7.0으로 조정하고, 68℃에서 가온하여 40시간 반응시켰다.

반응 종료 후, 효소를 가열하여 활성을 없앤 후, 여과하여 효소처리 헤스페리딘 용액(A액)을 얻었다.

A액을 하기 조건하에 HPLC 분석한 경우, 반응전 액 중의 헤스페리딘의 72%가 α-글루코실헤스페리딘이 되었고, 남은 28%는 미반응 상태였다.

〈HPLC 분석조건〉

칼럼 : C18

용리액 : 메탄올/물/초산=30/65/5

검출 : 280nm

온도 : 40℃

유속 : 0.5ml/분

[헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴, α-모노글루코실헤스페리딘, α-글루코실헤스페리딘 등의 확인]

헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴, α-모노글루코실헤스페리딘, α-글루코실헤스페리딘 등의 확인은 이하의 방법으로 행하였다.

1. 헤스페리딘 : 시약 헤스페리딘(동경화성)을 이용해서 동일한 것을 확인하였다.

2. β-모노글루코실헤스페레틴:

시약 헤스페리딘(동경화성)에 α-L-람노시다아제를 작용시켜, 고속액체 크로마토그래피로 분석(상기 분석조건)한다. 다음으로 헤스페리딘의 R.T.(=10.90)의 뒤에 단일 피크(R.T.=12.13) 분획을 채취하고 가수분해하여 글루코스를 검출한다. 한번 더 본 피크의 자외부 흡수 스펙트럼이 헤스페리딘과 일치하는 것을 확인하고, 이 피크를 β-모노글루코실헤스페레틴(헤스페레틴-7-글루코시드)로 하였다.

3. α-모노글루코실헤스페리딘, α-글루코실헤스페리딘:

시약 헤스페리딘(동경화성)을 이용해서 반응물을 고속액체 크로마토그래피로 분석(상기분석 조건)한다. 각 피크의 자외부흡수 스펙트라가 헤스페리딘과 일치하는 것을 확인한다. 또한 글루코아밀라아제를 작용시켜, 고속액체 크로마토그래피로 분석(상기 분석조건)한다. 그 결과 어느 것이나 헤스페리딘의 R.T.(=10.90)의 앞의 단일피크(R.T.=10.34)가 되었다.

한번 더 본 분획(R.T.=10.34)을 채취하고, α-글루코시다아제(E.C.3.2.1.20)를 작용시켜 가수분해하면 글루코스와 헤스페리딘이 생성되는 것을 확인한다. R.T.=10.34의 피크를 α-모노글루코실헤스페리딘으로 하여 본 피크 및 본 피크보다 R.T.이 작은 피크군을 α-글루코실헤스페리딘 분획으로 하였다.

[헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴, α-모노글루코실헤스페리딘, α-글루코실헤스페리딘 등의 중량 측정]

또한 헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴, α-모노글루코실헤스페리딘, α-글루코실헤스페리딘 등의 중량 측정은 이하의 방법으로 행하였다.

1. 헤스페리딘 : 고속액체 크로마토그래피로 분석하고, 시약 헤스페리딘(동경화성)을 기초로 산출하였다.

2. β-모노글루코실헤스페레틴:

고속액체 크로마토그래피로 분석하고, 시약 헤스페리딘(동경화성)을 기초로 분자량 환산하여 산출하였다.

3. α-모노글루코실헤스페리딘 :

고속액체 크로마토그래피로 분석하고, 시약 헤스페리딘(동경화성)을 기초로 분자량을 환산하여 산출하였다.

4. α-글루코실헤스페리딘 분획 :

본품(시료)의 건조품 1.0g을 물 50ml에 용해하고, 이 용액을 미리 고농도의 에탄올 수용액으로 활성화하여 물로 충분히 세척한 XAD-7수지 100ml에 SV=1로 통과시키고, 그후 세척하여 50% 에탄올 수용액 200ml로 용출한다. 이 액(용출액)으로부터 에탄올을 제거하고 나서 농축·건조하여 중량을 구한다. 고속액체 크로마토그래피로 분석하여, 만약 헤스페리딘, β-모노글루코실헤스페레틴이 포함되어 있지 않다면 전술한 1, 2에 기초해서 산출한 값을 낮춰서 α-글루코실헤스페리딘 분획 중량을 산출한다.

실시예 1

참고예 1의 효소처리 헤스페리딘 용액(A액)에 헤스페리디나아제(헤스페리디나아제 2호, 전변제약 제) 2g을 가하고, 4N-황산으로 pH 4로 조정하고, 55℃에서 24시간 반응시킨 후, 글루코아밀라아제(글루코팀, 장뢰산업제) 1.0g을 가하고, 한번 더 55℃에서 24시간 반응을 계속시켰다.

반응 종료 후, 얻어진 반응액을 90℃에서 20분간 유지하고 효소를 가열하여 활성을 없애고 나서 여과하여 효소처리헤스페리딘 용액(B액)을 얻었다. B 액을 참고예 1에 기재한 조건으로 HPLC 분석한 경우, B액 중의 α-글루코실헤스페리딘은 그 대부분이 α-모노글루코실헤스페리딘으로 변화하고, 또한 B액 중의 미반응헤스페리딘은 대부분(99%이상)이 β-모노글루코실헤스페레틴(헤스페레틴-모노글루코사이드)로 변해갔다.

1.5리터의 중간극성 다공성 흡착수지(XAD-7)을 충진하고, 고농도의 에탄올 수용액을 활성화시켜 방치한 칼럼에 상기 효소처리 헤스페리딘 용액(B액)을 통과시키고, 다음으로 칼럼 용량의 2배량의 물로 세척하고 나서 80(V/V)% 에탄올 수용액 3리터로 수지의 흡착성분을 탈착하였다. 탈착액 중의 에탄올을 제거하고 나서 동결건조하여 고형물(B-r)을 얻었다.

이 고형물(B-r)에는 α-모노글루코실헤스페리딘이 81중량%, β-모노글루코실헤스페레틴이 18중량%, 기타 성분이 1중량%로 포함되어 있고, 한편 헤스페리딘과 헤스페레틴은 검출되지 않았다.

이 고형물(B-r)에 99(V/V)% 메탄올 100ml을 가하여 80℃로 가열용해 후, 실온 하에 방치하여 결정을 석출시켰다. 석출한 결정은 99(V/V)% 메탄올로 세척하고 나서 건조시켜 고형물(B-r-c) 12g을 얻었다. 이 고형물(B-r-c)에는 α-모노글루코실헤스페리딘이 98중량%, β-모노글루코실헤스페레틴이 1중량%, 기타 성분이 1중량%로 포함되어 있고, 한편 헤스페리딘과 헤스페레틴은 검출되지 않았다.

이들 결과를 합하여 표 1~2에 기재한다.

실시예 2

참고에 1에 기재한 효소처리 헤스페리딘 용액(A액)에 글루코아밀라아제(글루코팀, 장뢰산업제) 1g, 헤스페리디나아제(헤스페리디나아제 2호, 전변제약 제) 2g, 셀룰라아제 A〈아마노〉3[천야제약(주)제] 10g을 가하고, 4N-황산으로 pH 4.0으로 조정하고, 55℃에서 48시간 반응시켰다.

반응 종료 후, 효소를 가열하여 활성을 없애고 나서 여과하여 효소처리헤스페리딘 용액(C액)을 얻었다.

C액을 참고예 1에 기재한 조건으로 HPLC 분석할 때, A액 중에 존재하고 있던 α-글루코실헤스페리딘은 C액 중에는 대부분이 α-모노글루코실헤스페리딘으로 변화되고, 또한 A액 중에 존재하고 있던 미반응헤스페리딘은 C액 중에는 대부분(99%이상)이 헤스페레틴으로 변하였다.

이 C액을 실시예 1에서 행한 바와 같이 1.5리터의 중간극성 다공성 흡착수지(XAD-7)로 처리하고, 동결건조하여 고형물(C-r)을 얻었다. 이 고형물(C-r)에는 α-모노글루코실헤스페리딘이 85중량%, β-모노글루코실헤스페레틴이 2중량%, 헤스페레틴이 12중량%, 기타 성분이 1중량%로 포함되고, 헤스페리딘은 검출되지 않았다.

이 고형물(C-r)에 99(V/V)% 메탄올 200ml을 가하고 80℃에서 가열 용해한 후, 실온 하에 방치하여 결정을 석출시켰다. 석출한 결정은 99(V/V)% 메탄올로 세척한 후 건조시켜 고형물(C-r-c) 8g을 얻었다.

이 고형물(C-r-c)에는 α-모노글루코실헤스페리딘이 96중량%, β-모노글루코실헤스페레틴이 2중량%, 헤스페레틴이 1중량%, 기타 성분이 1중량%로 함유되고, 헤스페리딘은 포함되어 있지 않았다.

결과를 합하여 표 1~2에 기재한다.

비교예 1

참고예 1의 효소처리 헤스페리딘 용액(A액)에 글루코아밀라아제(글루코팀, 장뢰산업제) 1.0g을 가하고, 4N-황산으로 pH 4.0으로 조종하고, 55℃에서 48시간 반응시켰다.

반응 종료 후, 효소를 가열하여 활성을 없애고 나서 여과하여 효소처리 헤스페리딘 용액(D액)을 얻었다.

D액을 참고예 1에 기재한 조건으로 HPLC 분석한 경우, A액 중에는 존재하고 있던 α-글루코실헤스페리딘은 D액 중에는 대부분이 α-모노글루코실헤스페리딘으로 변화되고, 또한 A액 중에 존재하고 있던 미반응헤스페리딘은 D액 중에서도 변화되지 않았다.

이 D액을 실시예 1, 2에서 행한 바와 같이 1.5리터의 중간극성 다공성 흡착수지(XAD-7)로 처리하고, 동결건조하여 고형물(D-r)을 얻었다.

이 고형물(D-r)에는 α-모노글루코실헤스페리딘이 76중량%, 헤스페리딘이 23중량%, 기타 성분이 1중량%로 포함되고, β-모노글루코실헤스페레틴과 헤스페레틴은 검출되지 않았다.

이 고형물(D-r)에 실시예 1, 2와 같이 99(V/V)% 메탄올 100ml을 가하고, 80℃에서 가열하면 고형물(D-r)은 일부밖에 용해되지 않아서 결정을 석출시켜 분취하는 것은 곤란하였다. 한번 더 99(V/V)% 메탄올 100ml를 추가하고 80℃에서 가열하였지만 고형물(D-r)은 일부밖에 용해하지 않아서 결정을 석출시켜 α-모노글루코실헤스페리딘을 분취하는 것은 곤란하였다.

결과를 합하여 표 1~2에 기재한다.

효소처리헤스페리딘 중의 성분 중량비(중량%)

효소처리헤스페리딘	성분
	α-모노글루코실헤스페리딘	헤스페리딘	β-모노글루코실헤스페레틴	헤스페레틴	기타 성분
B-r	81	0	18	0	1
C-r	85	0	2	12	1
D-r	76	23	0	0	1

결정품의 성분 중량비(중량%)

결정품(고형물)	성분
	α-모노글루코실헤스페리딘	헤스페리딘	β-모노글루코실헤스페레틴	헤스페레틴	기타 성분
실시예 1(B-r-c)	98	0	1	0	1
실시예 2(C-r-c)	96	0	2	1	1
비교예 1(결정석출불가)	-	-	-	-	-

Claims (5)

1. α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액에 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제를 동시에 또는 어느 한쪽을 우선적으로 순차 작용시키고,

   얻어진 혼합물로부터 α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하고, 이를 채취하는 것을 특징으로 하는 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 제조방법.
2. α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 용액에 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제 및 β-D-글루코시다아제를 동시에 또는 어느 1종을 우선적으로 순차 적용시키고,

   얻어진 혼합물로부터 α-모노글루코실헤스페리딘을 석출, 분리하고, 이를 채취하는 것을 특징으로 하는 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물의 제조방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 저급알콜 중에 석출시키는 것에 의해 α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물을 분리하여 이를 채취하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서, α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물이 α-모노글루코실헤스페리딘을 85중량% 이상으로 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
5. 제3항에 있어서, α-모노글루코실헤스페리딘 고함유물이 α-모노글루코실헤스페리딘을 85중량% 이상으로 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.