TW521087B - A process for producing a product containing high content of Α-monoglucosylhesperidin - Google Patents

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經濟部中央標準局員工消費合作社印製 521087 Μ Β7 五、發明説明（1 ) 本發明乃α-單葡糖基橙皮苷高含有物之製法有關者 。更詳言之，處理含有α-葡糖基橙皮苷和橙皮苷之溶液 而析出分離並採集a -單葡糖基橙皮苷高含有物之製造方 法有關者。 橙皮^(Hesperidin)具有下列一般式[I]:所示構造： [橙皮t ]

芸香糖 係由橙皮素（5,7,3’ -三羥基- 4’-甲氧基黃烷_)的7-位置的羥基和芝香糖（4 -鼠李糖基-(« 146卜葡萄糖）以 /3-結合而形成之化合物。這種橙皮苷一般存在於柑桔類 之未熟果皮中，具有強化微细血管、預防出血、調整血壓 等生理作用而做為維生素P提供醫藥品或化粧品上之用途 。該橙皮甘可溶解於鹼性水溶液，但難溶於水或酸中，在 室溫下5 0公升的水中僅能溶解1公克（大約0 . 0 0 2 / V % )左 右。因此，橙皮苷少量存在於缶裝溶液中，該溶液就呈顯 白濁現象而影響其商品價值。 過去，為防止因為橙皮甘所引起的溶液白濁·現象，有 各種方法見諸文獻。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 3 9 6 42 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

521087 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（4 )

橙皮素 葡萄糖 · · · · [III] 另外，米谷、寺田等人Μ藉「環糊精合成酶形成橙皮 f配糖體和天然色素之穩定化」（參考日本食品科學工學 會誌，第42卷第5期，第376〜382,頁1995年）報告使糖受 體之橙皮甘和糖供體之/8 -CDM及糖轉移酶之CGT酶反應， 獲得橙皮苛配糖體（Hsp-Gn)之後，再於該橙皮苷配糖體之 精製過程，Μα-鼠李糖苷酶作用在該橙皮苷配糖體，祗 有未反應之橙皮苷被水解，然後利用交聯葡聚糖LH-20分 離管層析法可Μ很有效地分離橙皮苷配糖體（精製物）和未 反應之橙皮苷，所得上述橙皮苷配糖體（精製物）添加在天 然色素溶液中，可抑制紫外光所引起之天然色素之褪色。 然而下列一般式[IV]所示α-單葡糖基橙皮苷，依據 上述米谷、寺田等人之文獻所記載，要預先利用離子交換 樹脂之Amberlite XAD-16分離所含有橙皮素，再從所得 /3 -單葡糖基橙皮素和α -單葡糖基橙皮苷和cx -雙葡糖基 橙皮苷之混合物中，利用更昂價的層析分離法分離cx-單 葡糖基橙皮苷和α-雙葡糖基橙皮苷，所Μ很難有效地採 集得α-單葡糖基橙皮苷高含物。如果有更簡單經濟的採 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 看· 、1Τ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 4 39 6 42 521087 A7 B7 五、發明説明（5 ) 集方法出現，可在醫藥品，化粧品，食品添加物等廣泛領 域裡期得更多用途。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Ο C Η [cx-單葡糖基橙皮苷]

’ C Η IV] 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 另外，前記日本專利之特開平3-7593號公報中記載利 用葡糖澱粉酶（E.C.3.2.U3)處理α -葡糖基橙皮苷和橙皮 t之混合液，將α-葡糖基橙皮甘改變成α-單葡糖基橙皮 苷，再通過Diaion ΗΡ-20分離管，水洗後，依照梯次提升 乙醇水溶液中的乙醇濃度，然後分離採集α-單葡糖基橙 皮苷含有部分。據該公報所公開方法仍然無法廉價提供 α-單葡糖基橙皮苷高含有物。 本發明研究者有鑑及此，更銳意研究結果，發現含有 α-葡糖基橙皮苷和橙皮苷之溶液中，利用葡糖澱粉酶和 α-L-鼠李糖¥酶“.（：，3.2.1.40)作用後，使α-單葡糖基 橙皮苷析出分離而採集之方法，或利用葡糖澱粉_和 α -L -鼠李糖¥酶，Θ -D-配醣_ (Ε·(：·3·2·1·21)作用後， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 5 396 42 521087 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（6 ) 使α-單葡糖基橙皮苷析出分離而採集之方法之任意一種 方法，都能從所得混合物中有效率地分離採集〇c-單葡糖 基橙皮苷而完成本發明。 本發明中，從原來之混合物中藉固態和液態之分離方 法，就能極高效率地分雛所析出單葡糖基橙皮苷而製 得其高含物。 另外，橙皮苷Μ具有α-L-鼠李糖苷活性的酵素作用， 使橙皮苷變成/3-單葡糖基橙皮素，提升其水溶性之方法， 現為柑桔缶糖漿之白濁現象之工業上常用方法。 然而本發明所發現方法乃過去文獻中所未記載方法。 也就是在含有ex-葡糖基橙皮甘和未反應橙皮苷的溶液中， 利用葡糖澱粉酶，a-L -鼠李糖管酶作用，或用具葡糖澱 粉酶，a-L-鼠李糖苷酶和/3-D -配糖酶各活性之酵素劑作 用，使a-葡糖基橙皮ΐ之鼠李糖原封不動，僅將4 -位置 上結合多數的葡萄糖（G)n僅留下一個葡萄糖而加Μ水解， 變成ex-單萄糖基橙皮苷，另一方面，將橙皮苷之鼠李糖 水解而變成泠-單葡糖基橙皮素（7-0-/3 -單葡糖基橙皮素） ,或更進而將單葡糖基橙皮素的葡萄糖加水分解而 變成橙皮素，藉此有效率地析出分離a-葡糖基橙皮苷加 Μ採取之方法，過去均未有人暗示過。 又，特開平8-80177號公報中記載含有橙皮¥的水溶 液中添加可溶性橙皮苷以防止橙皮苷结晶析出之方法，該 可溶性橙皮苛乃係橙皮苷中的葡萄糖基的4 -位置上Κ a -1,4 -结合依序結合有1〜10多個葡萄糖之化合物，這種 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

521087 A7 B7 五、發明説明（ 作 皮 橙 和 _ 移， 轉酶 糖GT 用如 利舉 下例 在之 存酶 精移 糊轉 環糖 在述 係上 ¥ 而 皮， 橙產 性生 溶而 可用 即 α 聚 糖 葡 α 之 言 基 A 糖 之 葡 羼 聚菌 4-桿 1,用 /fv I 可 酶 移 轉 集 採 所 中 物 養 培 株 菌 3 在皮 加橙 添的 苷中 皮質 橙物 性苷 溶皮 可橙 將有 於含 止止 僅防 。者Μ 途開藉 用公 ， 產所合 生中混 其報而 供 公¥ 酶該皮 移而橙 轉然應 糖 反 的 未

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本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 10 396 42 521087 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Λ7 B7五、發明説明（11) 活性和/S-D -配醣酶活性中，具有其中兩個以上之活性的 市販酵素劑（例如纖維酶素A〈天野>3(日本天野製藥公司製 品）），當使用之際，可K酌量加減其使用量。 又，上述酵素劑用K處理上述含有α-葡糖基橙皮甘 和橙皮苷的溶液中之ot-葡糖基橙皮苷或橙皮苷時，通常 在ΡΗ3〜7範圍，最好在ρΗ3〜4下，通常在40〜70C範圍 ,最好在50〜60¾溫度下，一般反應0.5〜72小時，最好 保持6〜4 8小時左右之反應時間。 按照上述條件處理含有上述α-葡糖基橙皮苷和橙皮 甘的溶液時，ex-葡糖基橙皮节在實質上不受上述oc-L -鼠 李糖苷酶（例如橙皮苷酶）處理之影響。 然而上述cx -葡糖基橙皮管會受葡糖澱粉酶之水解作 用，其α-葡糖基橙皮苷之橙皮素架構上之7 -位置的葡萄 糖上M cx -1,4 -鐽結合依序按η次結合（η=1〜10多個）存 在的葡萄糖僅留下1個而其他經水解，而成為一般式[II] 所示中η = 1的《 -單葡糖基橙皮f。 又，葡糖基橙皮苷（包括α-單萄糖基橙皮苷）以点-D-配醣酶作用時，實質上也不被水解。 另一方面，橙皮苷會受到上述α-L -鼠李糖苷酶之作 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本1) f

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素 酵 之 量 上 Μ 份 量 il S 中 J 液 理 處 素 酵 將 前 之 作 操 合 混 述 上 但 之 分 成 糖 雛 游 該 ο 想 trtll 理 為 除 去 Μ 加 理除 處去 分 成 糖 凝 游 之 中 液 從 能 是 要 祗 法 方 離 游 除 去 地 率 效 高 中 液 理 處 素 酵 處 脂 樹 附 吸 性 孔 多 用 採 常 通 用 採 可 都 法 ο 方便 意方 任為 之較 分法 成方 jUBJI It 糖理 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) # 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 3 96 42 該多孔性吸附樹脂之種類，具體而言，例如HP-20, Η P - 5 0 , X A D - 2等非極性樹脂，X A D - 7等中間極性樹脂較為 適用。其方法乃將多孔性吸附樹脂填充分雛管中，再用高 濃度的乙醇水溶液活化處理後，在10〜601C溫度下，將上 述酵素處理之含有ex-單葡糖基橙皮苷溶液注入，使該樹 脂和上述含有α-單葡糖基橙皮苷溶液接觸，吸附α-單葡 糖基橙皮苷，/9-單葡糖基橙皮素，橙皮素等。 繼之，Μ所填充樹脂容量之1〜4倍量左右的水洗淨 而去除游雛糖為主成分之夾雛物後，再用乙醇，乙醇-水 (50〜100/25〜1)等洗提液在10〜60P溫度下注入，溶洗 出該樹脂上所吸附之cx-單葡糖基橙皮管，單葡糖基橙 皮素，橙皮素等。 第I製法中，據本操作方法可得對於a-單葡糖基橙 皮苷1重量份計，/3-單葡糖基橙皮素為0.5重量份以下， 14 521087 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（I5 ) 橙皮苷和橙皮素分別各為0.1重量份Μ下，又糖類等其他 成分含量在0.1重量份Κ下之洗提液。 又，第II製法中，據本操作方法可得對於α-單葡糖 基橙皮甘1重量份計，橙皮素為0.4重量份Μ下，單葡 糖基橙皮素和橙皮苷分別各為0.1重量份Μ下，又糖類等 其他成分含量在0.1重量份Μ下之洗提液。 上述混合用之醇類，可採用甲醇，乙醇，丙醇，丁醇 等碳數為1〜5之低級醇類。 繼之，將上述洗提液中之α-單葡糖基橙皮苷在低級 醇類中析出，藉固液分離而採集，可得ot-單葡糖基橙皮 甘高含有物。 本操作乃利用ct -單葡糖基橙皮苷在加溫下之低級醇 類中容易溶解，另一方面在室溫，（例如15〜25 °C)K下溫 度很容易析出之琨象，K及yS-單葡糖基橙皮素易溶解於 低級醇類，在室溫K下溫度也不容易析出之現象的發現而 完成本發明。 析出分離操作分別按第I製法和第II製法詳述如下。 無論是上述任意製法，經酵素處理的上述洗提液在溶解於 上述低鈒醇類之前，宜K乾物保存為理想。 〈析出分離操作〉 m τ製法： 將含有對於C(-單葡糖基橙皮苷1重量份計，/3-單葡 糖基橙皮素0.5重量份Μ下，橙皮苷和橙皮素分別各為〇·1 重量份Μ下，又糖類等其他成分為0.1重量份Κ下之乾物， 15 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α^4規格（210X 297公釐） 3 9 6 42 521087 A7 B7 五、發明説明（l6 ) 溶解在低級醇類，最好是溶解在甲醇中。甲醇用量對於乾 物lg計，使用0.2〜20ml,其中以使用1〜10ml為較宜，加 熱至20〜120 °C範圍，最好在60〜90 °C溫度下溶解。 然後，冷却上述溶液，例如室溫至上述醇類的熔點以 上溫度下冷却，或放置室溫下，祗有α-單葡糖基橙皮苛 會析出。上述溶液在冷却時，將預先調製為微粉末狀的 oc -單葡糖基橙皮苷做為晶種少量添加到該溶液，更能使 ex-單葡糖基橙皮¥迅速析出。 然後，利用離心機等進行固液分離，就能獲得α -單 葡糖基橙皮t高含有物。 固液分離時，所析出〇t-單葡糖基橙皮苷結晶用低級 醇類洗淨時，可得cx-單葡糖基橙皮苷含率更高的單葡 糖基橙皮苷高含有物。 第T丨製法： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 上述第I製法中，除改用含有對於a-單葡糖基橙皮 苷1重量份計，橙皮素為0.4重量份Μ下，泠-單葡糖基橙 皮素和橙皮苷分別各為0.1重量份Κ下，又糖類等其他成 分在0.1重量份Μ下之乾物以外，其他按照第I製法操作 處理，可從該乾物獲得α-單葡糖基橙皮苷高含有物。 按照上述方法所製成單葡糖基橙皮苷高含有物 ((a), (b))中含有ex-單葡糖基橙皮苷在85重量％以上， 最高時含量Μ高達95重量％以上為理想，又和α-單葡糖 基橙皮¥共存的橙皮苷，/3-單葡糖基橙皮素（7-0-/S -單 葡糖基橙皮素），橙皮素最好都不存在，含有時，和該 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 16 3 9 6 42 521087 A7 B7 五、發明説明（1 7 ) 單葡糖基橙皮苷共存的橙皮苷含量，Μ該單葡糖基橙 皮甘1重量份計，宜去0.10重量份以下，較好是0.05重量 份Κ下，最好是0〜0.01重量份範圍，又，/3-單葡糖基橙 皮素（7-0-泠-單葡糖基橙皮素）含量在0.10重量份Μ下， 較好在0.05重量份以下，最好是0〜0.02重量份為理想。 並且橙皮素含量在0.10重量份Μ下，較宜為0.05重量份从 下，特別是Μ0〜0.01重量份Μ下為理想。 上述這種oc-單葡糖基橙皮t高含有物（（d), (f))的 水溶性極優，例如固形物濃度為30重量％之《-單葡糖基 橙皮甘高含有物溶液在室溫（例如25C)下保持4星期，以 肉眼幾乎看不見橙皮苷，橙皮素等之析出，也幾乎看不到 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 奢. 生 1 之 1/ C ο 11 f /IV 塊 聚 凝 得 所 法 方 述 上 照 按 當 苷 皮 橙 基 糖 葡 單- α 之會 中 用 物作 有之 含素 高酵 节 至 皮受 橙 內 基體 糖人 葡別 單取 -攝 α 時 該 〇 能 機 種 各 之 Ρ 素 生 」*»*·* 維 si 擇 發 能 ¥ 皮 橙 之 來 原 為 復 恢 含 高 其 或 /IV 苷 皮 橙 糖 葡 單- a 將 時 用 併 C 素 生 a.三 绅 和

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521087 A7 B7 五、發明説明（19 ) 佳 最 視 可 之 有 固 有 具 物 有 含 高 ¥ 皮 橙 基 糖 葡 單 - α 該 又 也 Μ 所 薄 淡 〇 為途 極用 色等 顏 品 其粧 時化 同在 ， 用 性應 特而 譜等 光劑 收光 吸外 之紫 外除 圍為 範做 uu tt 为 M. 具 a 得 有製 含的 從率 K 收 可 高 明而 發單 本簡 據 ， 依中 , 液 能溶 功的 之苷 明皮 發橙 本和 ¥ 皮 橙 基 糖 SJ 葡 水 異 優 備 生 發々 會 ， 不苷 , 皮 性橙 溶有 含基 不糖 乎葡 幾單 時-α 同 i 的 K 等 用素 作皮 出橙 析 ， 晶 素 結皮 {橙 象 現 濁 白 基 糖 葡 單 明 物 α 說 有之體 含明具 高發更 甘本例 皮 施 橙 實 藉 法 方 造 製 之 物 有 含 高 ¥ 皮 橙 基 糖 葡 單 下 如 限 局 之 圍 範 例 施 實 受 不 明 發 本 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 看· 指 所 中 文 下 ο > 述外 赘另 得 不 量 重 重 表 代 皆 形 情 殊 特 無 如

、*|T 例 者 參 解 溶 的 升 9 ο 於 皮 橙 的 克 液 溶 水 鈉 化 氧 氫 的 克 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 為 整 15酸 入硫 1 N 加 4 再 % 中 之 解 溶 與 並 精 糊 的 孢 ί牙 肪 脂 熱 嗜 於 源 來 入 加 後 品 製 司 公 究 研 學 化 te物 S生 US原 11林 C 本 Ba日 /IV /1. 菌酶 桿移 Γ ο 轉 糖 聚 葡 精 糊 環 之 加 計 精 糊 克 1 Μ 至 整 調 酸 硫 Π 4 加 滴 再 V ο 6 至 溫 加 位 單 5 11 素 酵 該 入 時 小 6 應 反 並 為 整 5¾ 酸 硫 Η 4 加 滴 再 後 然 並 OC 8 6 至 溫 加 時 小 ο 4 應 反 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 19 3 9 6 42 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 521087 Λ7 B7 五、發明説明（20 ) 反應結束後，加熱使酵素失去活性，過滤而製得酵素 處理橙皮ΐ溶液（稱為A液）。 Μ下述條件藉HPLC分析A液之結果，反應前溶液中之 橙皮苷的72%變成oc-葡糖基橙皮甘，其餘28%為未反應 狀態之橙皮¥。 〈HPLC分析條件〉 分離管柱：C 1 8 洗提液：甲醇/水/乙酸= 30/65/5 檢測波長：2 8 0 n m 溫度：4 0 C 流速：0.5ml /分鐘 f糌皮甘.β-Μ葡糖某糌皮素.厘葡纊某糌皮y. ry-葡煻某糌皮y等夕鑑宙1 橙皮节、/3-單葡糖基橙皮素，OC-單葡糖基橙皮苷， or-葡糖基橙皮苷等依據下述方法分別鑑定之。 1. 橙皮苷：使用橙皮节試劑（日本東京化成公司製品）為標 準試料鑑定之。 2. /3-單葡糖基橙皮素： Μ a -L -鼠李糖苷酶作用在上述橙皮苷試劑（東京化成 公司製品）並MHPLC分析（分析條件如上述）。繼之，採取 橙皮苷之保持時間（R.T = 10·90)Μ後之單一高峰α·τ· = 12. 13)部分，經水解檢測得葡萄糖。更進一步由紫外光吸 收光譜確認上述吸收高峰和橙皮苷者符合一致，認定該高 峰為/3 -單葡糖基橙皮素（橙皮素-7 -葡糖苷）。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 20 3 9 6 42 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 521087 A7 ___B7 五、發明説明（21 ) 3.ot-單葡糖基橙皮苷，α-葡糖基橙皮苷： 將橙皮苷試劑（東京化成公司製品）之反應物MHPLC分 析（分析條件如上述）之。確定各高峰之紫外光吸收光譜和 橙皮ΐ者符合一致。另外，Μ葡糖澱粉酶作用，再行HPLC 分析（分析條件如上述）。其結果皆為橙皮苷的保持時間前 (1?·Τ· = 10.90)之單一高峰 U.T. = 10.34)。 分離上述保持時間R.T.= 10.34之部分，Kcx-葡糖t _(E.C.3.2. 1.20)作用，使之水解而確認產生葡萄糖和橙 皮苷。Μ保持時間10.31之高峰部分為ot -單葡糖基 橙皮該高峰部分和保持時間低於該高峰部分之各高峰 部分做為α -葡糖基橙皮苷部分。 「糌皮赞、θ-屋葡鑛某糌皮素· nr-置葡糖基橙皮苷j rv-葡鏞某糌皮苷箬夕輋畺分析1 依據下列方法測定橙皮甘、/3-單葡糖基橙皮素， CX-單葡糖基橙皮Ot-葡糖基橙皮f等之重量。 1 .橙皮苷： 藉HPLC分析，據橙皮苷試劑（東京化成公司製品）為標 品計算之。 2. 單葡糖基橙皮素： 藉HPLC分析，據橙皮¥試劑（東京化成公司製品）為標 品換算其分子量而求之。 3. α -單葡糖基橙皮管： 藉HPLC分析，據橙皮苷試劑（東京化成公司製品）為標 品換算其分子量而求之。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 21 3 9 6 42 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 521087 Α7 Β7 五、發明説明（22) 4. α-葡糖基橙皮苷部分： 將1.0克之本試料乾燥物溶解於50毫升水中。再預先 用高濃度乙醇溶液活化處理，並用水充分洗淨之XAD-7樹 脂1 0 0毫升中，按照S V = 1將上述溶液導入，然後水洗， Μ50%乙醇水溶液200毫升洗提之。洗提液去除乙醇，經 濃縮、乾燥後稱量之。藉HPLC分析，如果含有橙皮f, /3-單葡糖基橙皮素時，減去上述1、2項所求得值而求得 α-葡糖基橙皮苷部分之重量。 啻淪例1 加入橙皮苷酶2克（橙皮t睛2號，日本田邊製藥公 司製品）於參考例1中所得之酵素處理橙皮苷溶液（A液） 中，用4N硫酸調整為pH4,在55°C下反應24小時後，加入 1.0克的葡糖澱粉酶（Glucozyme,日本長瀨產業公司製品） ，再於551下繼續反應24小時。 反應結束後，所得反應溶液保持在901下20分鐘，使 酵素加熱失去活性後，過濾而製得酵素處理橙皮苷溶液 (B液）。按照參考例1所記載HPLC分析條件進行分析結果， B液中的cx-葡糖基橙皮苷幾乎全部變成a-單葡糖基橙皮 苷，另外B液中的未反應橙皮者幾乎（99%以上）變成/3-單葡糖基橙皮素（橙皮素-7-葡糖苷）。 準備填充有5升的中間極性多孔性吸附樹脂（XAD-7), Μ高濃度乙醇水溶液活化處理的分離管柱，導入上述酵素 處理橙皮¥溶液（Β液），繼之，使用分離管柱容量之二倍 量的水洗淨，再用80% (V/V)的乙醇溶液3升洗提被樹脂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、!' 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 22 3 96 42 521087 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ΑΊ Β7 五、發明説明（23) 所吸附的成分。洗提液去除乙醇後，凍結乾燥而得固形物 (Β - r ) 〇 該固形物（Β-rO中，據分析含有81重量％的〇(-單葡糖 基橙皮苷，18重量％的々-單葡糖基橙皮素，1重量％之 其他成分，而不含橙皮苷和橙皮素。 該固形物（Β-rO中，加人100毫升之99%(V/V)甲醇， 在80t!下加熱溶解後，放置室溫下使結晶析出。所析出结 晶M99%(V/V)甲醇洗淨後乾燥而得固形物（Bn)。12克 。該固形物（Bn)據分析結果，含有98重量％之α -單葡 糖基橙皮t, 1重量％的單葡糖基橙皮素，1重量％ 之其他成分，而不含有橙皮苷和橙皮素。 其結果合併示於表1〜2中。 啻_例2 參考例1所得酵素處理橙皮管溶液（Α液）中，加入 1克之葡糖锻粉酶（Glucozyme,長瀨產業公司製品）， 2克的橙皮苷酶（橙皮苷酶2號，田邊製藥公司製品）， 10克的纖維素酶A〈天野>3號（日本天野製藥公司製品）， K4N硫酸調整為PH4.0後，在55°C下反應48小時。 反應結束後，加熱使酵素不活化後，過滤而得酵素處 理橙皮苷溶液（C液）。 依據參考例1所示HPLC分析條件分析結果，A液中所 含ct-葡糖基橙皮苷在C液中幾乎全部變成α-單葡糖基橙 皮苷，又Α液中所含之未反應橙皮苷，在C液中幾乎 (99%以上）變成橙皮素。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 23 3 96 42 521087 Λ7 五、發明説明（25 ) 多孔性吸附樹脂（XAD-7)處理，凍結乾燥而得固形物（D-r) Ο 該固形物（D-r)據分析含有76重量％之oc -單葡糖基橙 皮苷，23重量％之橙皮苷，1重量％之其他成分，而不含 有/3 -單葡糖基橙皮素和橙皮素。 該固形物（D - r )按照實施例1 , 2所示相同方法加入 99% (V/V)甲醇100毫升，在80 °C下加熱，固形物僅有局部 溶解，很難使用析出分離方法獲得結晶。再追加1 〇 〇毫升 的99% (V/V)甲醇後·，在80 °C下加熱，也是僅有一部分的 固形物（D-r)溶解，很難使結晶析出而分離得oc-單葡糖基 橙皮苷。 其結果合併示於表1〜2中。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 25 3 9 6 42 521087 ΑΊ B7 五、發明説明) 表1酵素處理橙皮苷溶液中所含各成分重量比率 (重量％) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 成分 酵素處理橙皮苷 α—單葡糖基橙皮苛 橙皮苷 /3—單葡糖基橙皮素 橙皮素 其他成分 Β—r 81 0 18 0 1 C一r 85 0 2 12 1 D—r 76 23 0 0 1 表2結晶中之各組成分重量比率(重量％) 成分 結晶(固形物） OC—單葡糖基橙皮苷 橙皮苷 /3-單葡糖基橙皮素 橙皮素 其他組成分 實施例1 (B-r-c) 98 0 1 0 1 實腌例2 (c-r-c) 96 0 2 1 1 比較例1 (不能析晶） 一 一 一 一 一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 26 39642 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 曰 Α7 Β7 i 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（2 ) 例如日本專利特開平3 - 7 5 9 3號公報中報告橙皮苷和澱 粉局部分解產物（a-葡糖基糖化物）共同存在下，Μ糖轉 移酶（具有ct-葡糖基轉移活性多酵素）作用，而產生下列 一般式[II]所示α-葡糖基橙皮苷，提升其水溶性有關酵 素處理橙皮f之製造方法。[α -葡糖基橙皮苷] 0·

〇Η

鼠李籍 該cc -葡糖基橙皮苷如上述一般式[I I ]所示，係在一 般式[I]所示橙皮苷的葡萄糖的4 -位置上，以α-1，4结合 方式依序结合有η個（1〜20個）萄葡糖（G)而形成之化合物 ，或上述不同葡萄糖數目之cx-葡糖基橙皮节之混合物所 成 構 之 皮 橙 有 含 所 中 液 溶 料 原 中 應 反 素 酵 述 上 皮 橙 基 糖 葡 α 和 ΐ 皮 橙 的 應 反 未 α ο 成 ？ 變皮 而橙 用的 作 應 素 反 酵未 被的 會% %60 時 在 存 同 共 ψ α 皮於 橙對 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) *«·! ·

I 存 留 尚 但 基 糖 葡 是 但 升 提 會 性 解 溶 的 中 液 溶 水 在 其 高 過 率 比 之 皮 橙 的 應 反 未 計 而 •甘 皮 橙 基 糖 葡 〇 維 來孅 出基 析甲 而羧 化加 溶添 不盧 的考 甘可 皮 ， 橙出 的析 應 f 反皮 未橙 生的 產應 裡 反 間 未 時止 短 防 很 為 在 會 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 2 (修正頁） 3 9 6 4 2 521087 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 修正 年β C•qm?補充 A7 B7 五、發明說明（3 ) 素（簡稱為C M C )等糊料在含有橙皮甘之溶液中，提升水溶 印 ， 好在 的存 品 題 商問 及等 響用 影採 會 能 料不 糊上 加品 添產 。 種銷法 這外方 而是用 然別常 , 特般 法 ，一 方宜為 等適成 性甚難 粘不很 之而Κ 液象所 等 3 的 0 、、 應 isw 。 反 用Tfe法 利 方 之 . ， 之 出 、出 皮 析 析 橙 ¥ 基 皮 皮 糖 橙 Θ 橙 5 葡 Ϊ 的 I 應 α 應 反於反 未對未 使低緩 告降延 報而而 有 ， ， 也除率 , 去 比 外離之 另分甘 法皮 方橙 未 〇 有題 , 問 , 決 後解 之本 間根 時 有 長 沒 過上 經際 有實 然 ， 仍在 , 存 法題 方問 述之 上出 用析 採苷 而皮 然橙 應 反 原 濟 α α 經 有離合 含分符 從僅非 , , 並 法中 ， 方 液 昂 等 溶高 離水本 分的成 析¥而 層 皮然 用橙 ， 利之法 , 應 方 外反之 另未分 和 部 Ψ¥ 皮皮 橙 橙 基基 糖糖 葡 葡 法 方 之 含 現 發 果 结 究 研 力 努 題 問 述 上 決 解 為 者 究 研 明 發 本 有 具Μ 中 液 溶 的 皮 橙 的 應 反 未 和 ¥ 皮 橙 基 糖 葡 I α 有 時 用 作 ^ Μ Μ 一不 的 加 所 隱 素 酵 之 性 活 酶 糖 李 鼠 動列 不下 封成 原變 乎而 α 幾糖 苛李水 皮 鼠 其 橙離 ， 基 分素 糖而皮 葡解橙 _水基 被糖 就葡 Ψ 單 皮-橙 的 應 反II 未[1 是式 但般 α 致Μ 皮 橙 m: 理 處 素 酵 生 產 再 不 也 後 間 時 長 過 〇 經象 , 現 異濁 優白 性生 溶發 素 皮 橙 基 糖 葡 單 I ___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 3 (修正頁） 3 9 6 4 2 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •線- 521087 Α7 Β7 五、發明說明（24 ) 該C液按照實施例1所示用1 . 5升的中間極性多孔性 吸附樹脂（XAD-7)處理，經凍結乾燥而得固形物（〇r)。該 固形物（C-「）中，據分析结果含有85重量％之《_單葡糖基 橙皮节，2重量％之3-單蔔糖基橙皮素，12重量％之橙 皮素，1重量％之其他成分，而不含有橙皮苷。 該固形物（C-r)中加人99% (V/V)之甲醇200毫升，在 8 0它下加熱溶解後，放置室溫使结晶析出。所析出結晶用 99% (V/V)甲醇洗淨後乾燥而得固形物（〇r-c)8g。， 該固形物（C-r-c)中據分析结果，含有96重量％之 oc-單葡糖基橙皮苷，2重量％之/3-單葡糖基橙皮素， 1重量％之橙皮素，1重量％之其他成分，而不含有橙皮 其結果合併示於表1〜2中 比較例1 參考例1中所得酵素處理橙皮苷溶液（A液）中加入 l.Og的葡糖澱粉_(Glncozyme,長瀨產業公司製品），用 4N硫酸調整為ρΗ4·0,在55P下反應48小時。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂- •線. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 rTT: 理 處 素 酵 得 而 0 過 化 活 不 素 酵 使 熱 加 。 後⑹ 束(D 結液 應溶 反苷 皮 橙

A α 例 考 參 據α 依有 液 含 D 所 該中 液 示 所 果 结 析 分 件 條 析 分 成 f 變皮 部橙 全應 乎反 幾未 中有 液含 D 所 在中 , 液 Ϋ A 皮 ， 橙外 基另 糖。 葡¥ -皮 橙 基 糖 葡 單 例 。 施 化實 變照 未按 並液 中 ， 液該 D 在 性 極 間 中 之 升 5 1—I 用 行 進 所 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 24(修正頁） 39642

Claims (1)

1. •本 9i2ii S 公告本 H3 第87104066號專利申請案 申請專利範圍修正本 (91年2月7曰） 一種〇(-單葡糖基橙皮甘高含有物之製造方法，其特徵 為於含有α -葡糖基橙皮苷和橙皮甘溶液中，利用葡糖 澱粉酶和 L -鼠李糖苷_在40至70°C, pH 3至7之範 圍下同時作用或任意一方為優先依序作用0.5至72小時 之後，由所得混合物中使α-單葡糖基橙皮节析出分離 而獲得之方法。 2. —種α-單葡糖基橙皮苷高含有物之製造方法，其特徵 為於含有α-葡糖基橙皮苛和橙皮苷溶液中，利用葡糖 澱粉酶，α-L -鼠李糖苷酶和/3 -D -配糖酶在40至70它， pH 3至7之範圍下同時作用或任意一種為優先依序作用 單葡糖基橙 0 . 5至7 2小時之後，由所得混合物中使 皮苷析出分離而獲得之方法。 3.如申請專利範圍第1項或第2項之方法，其特徵為利 單葡糖基橙皮节高 用在低级醇類中析出而分離得 物 有 含 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 a 為 徵 特 其 法 方 之 項 2 第 或 項 1 第 圍 範 利 專 請 串 如 % 量 重 5 8 有 含 係 物 有 含 高 皮 橙 基 糖a 葡 之 單上 皮 橙 基 糖 葡 單 基 糖 葡 單 I a 為 徵 特 其 法 方 之 項 3 第 圍 範 利 專 請 申 如 5 有 含 係 物 有 含 高 ΐ 皮 橙 基 糖 葡 單 I a 之 上 以 % 量 重 1Ρ 皮 橙 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) Α4規格（210 X 297公釐）. 3 9 6 4 2