JP2862810B2 - 免疫不全レトロウイルス（ｈｉｖ）関連抗原性ペプチド及びこれをコードする核酸配列 - Google Patents

免疫不全レトロウイルス（ｈｉｖ）関連抗原性ペプチド及びこれをコードする核酸配列

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は、ヒトの体内で後天性免疫不全症
候群(AIDS)に変性し得るリンパ節障害を誘発し得るウイ
ルスから精製状態で得ることのできる抗原と共通の免疫
学的性質、場合によっては免疫原性を有するペプチドに
係わる。
【０００２】本発明は特定的には、NATUREで規定された
命名法に従いHIV と略して呼ばれるウイルスによってヒ
ト体内で誘導される抗体により認識され得る抗原ペプチ
ドに係わる。本発明はまた、免疫原性を有するか又はin
vivo で免疫原になり得るペプチドにも係わる。この免
疫原性は、ウイルスHIV-2 の特徴的抗原を認識し且つ、
少なくともこれらペプチドのうちの或るものに関して
は、HIV-1 に由来する抗原さえも認識する抗体のin viv
o 誘導という形で現れ得る。
【０００３】本発明は更に、HIV-2 及びSIV-1 （サル免
疫不全ウイルス）のゲノム由来の核酸配列及びその部分
配列に関する。
【０００４】LAV-1 又はHIV-1 と称する第１のレトロウ
イルスは、既に特許出願GB.83/24.800及び14/09/84付出
願EP.84/401.834 で単離され且つ開示されている。この
ウイルスはまた、Science,220 no.45-99,20,868-871 ペ
ージで、F.Barre Sinoussi他によっても記述されてい
る。
【０００５】LAV ELI 及びLAV MAL と称する前記ウイル
スHIV-1 の変異体も特許出願EP.84/401.834 で単離され
且つ特徴分析されている。
【０００６】ウイルスHIV-1 及びその変異体は下記の特
性を有する： − ヒトLeu3細胞（又はT4リンパ球）及びこれらの細胞
から誘導した「無限増殖性(immortalisees) 」細胞を好
ましいターゲットとする。
【０００７】− Mg2+イオンの存在を必要とする逆転写
酵素活性を有し且つポリ（アデニレート- オリゴ- デオ
キシチミジラーゼ） ポリ(A)-オリゴ(dT)12-18)に対して大きな活性を示す。
【０００８】− ショ糖勾配で1.16〜1.17の密度を有す
る。
【０００９】− 平均直径が139 ナノメートルであり、
且つ平均直径41ナノメートルの核を有する。
【００１０】− これらウイルスの溶解物(lysat) がHT
LV-1のタンパク質p24 と免疫学的に交差反応しないタン
パクp25(コアタンパク質）を含む。
【００１１】− それ自体のエンベロープを構成するタ
ンパク質p42 を含む。
【００１２】− 分子量110,000 のエンベロープタンパ
ク質gp110 も含む。
【００１３】欧州特許出願No. 87/400,151,4には、別の
部類に属し且つ前記レトロウイルスに対してわずかな免
疫学的関係しかもたないレトロウイルスの単離及び特徴
分析が記載されている。これらのレトロウイルスはまと
めてHIV-2 と称され、リンパ節障害又はエイズの症状を
有する複数のアフリカ人患者から単離された。
【００１４】HIV-2 型レトロウイルスはHIV-1 型レトロ
ウイルスと同様にT4ヒトリンパ球に対して指向性を示
し、これらリンパ球中で増殖すると細胞変性効果を及ぼ
し、その結果全身に及ぶ慢性の多発腺症又はエイズを引
き起こすという特徴を有する。
【００１５】より一般的には、HIV-2 について純化され
たウイルスは通常下記の特性を有する： − レトロウイルスHIV-2 が好むターゲットはヒトLeu3
細胞（又はT4リンパ球）及びこれらT4リンパ球から誘導
された「無限増殖性」細胞である。
【００１６】− T4ヒトリンパ球に対して細胞毒性を示
す。
【００１７】− Mg2+イオンの存在を必要とする逆転写
酵素活性を有し且つポリ（アデニレート- オリゴデオキ
シチルミジラーゼ)(ポリ(A)-オリゴ(dT) 12-18) に対し
て大きな活性を示す。
【００１８】− ショ糖勾配で1.16の密度を有する。
【００１９】− 平均直径が140 ナノメートルであり、
且つ平均直径41ナノメートルの核を有する。
【００２０】− HUT 型の又はT4タンパク質を発現する
永代細胞系で培養できる。
【００２１】− T8リンパ球に対しては感染性を示さな
い。
【００２２】− これらウイルスの溶解物がウイルスHT
LV-I又はHTLV-II のタンパク質p24 と免疫学的に交差反
応しないタンパク質p26 を含む。
【００２３】− これらの溶解物が更に、放射線免疫沈
降テストでHTLV-I又はHTLV-II のタンパク質p19 により
免疫学的に認識されないタンパク質p16 も含む。
【００２４】− HTLV-Iのgp110 とは免疫学的に交差反
応しないが、STLV-III（サルから単離したウイルス）の
エンベロープ糖タンパク質gp140 とは免疫学的に交差反
応する分子量約130,000 〜140,000 のエンベロープ糖タ
ンパク質も含む。
【００２５】− これらウイルスの溶解物が更に、分子
量32,000から42,000〜45,000の範囲の35S-システインで
標識できる抗原も含む。これらの抗原は特に分子量約3
6,000の抗原と分子量約42,000の抗原とを含み、これら
抗原(p36及びp42)の一方がウイルスHIV-2 のトランスメ
ンブラン糖タンパク質を構成すると考えられる。
【００２６】− HIV-2 のゲノムRNA が緊縮条件下でHI
V-1 のゲノムRNA とハイブリダイズしない。 − 非緊縮条件下でHIV-2 のゲノムRNA がHIV-1 のenv
遺伝子及びその隣のLTRとも、HIV-1 のゲノムのpol 領
域の配列ともハイブリダイズしない。
【００２７】− 非緊縮条件下で、HIV-1 領域のヌクレ
オチド配列と僅かにハイブリダイズする。
【００２８】以前はSTLV IIIという呼称で知られてお
り、現在はSIV-1 と称する別のレトロウイルスは、アカ
ゲザル(singe macaque rhesus)から単離された（M.D.Da
niel他,Science 228, 1201(1985)、N.L.Letwin他,Scien
ce 230, 71(1985)、“STLV-IIImac ”という呼称で）。
【００２９】野性ミドリザルからは更に別の“STLV-III
AGM ”（又は SIVAGM ）と称するレトロウイルスが単離
された。しかしながらアカゲザルの体内に存在する前記
ウイルスと異なり、“STLV-IIIAGM ”の存在はアフリカ
ミドリザルの体内でエイズタイプの病気を誘発すること
はないと推測される。
【００３０】1986年２月７日にはレトロウイルスSIV-1m
acの株が番号I-521 でCNCMに寄託された。研究の結果レ
トロウイルスSIV-1 は、HIV-2 から類似の条件で単離で
きる構造タンパク質又は糖タンパク質に対して或る程度
の免疫学的関係を有する或る種のタンパク質を含むこと
が判明した。このレトロウイルスSIV-1 はサル体内で感
染性を示すことが判明しており、これを単離した研究者
等によってSTLV-IIIと命名された（前出の文献参照）。
【００３１】便宜上、これらのウイルスは以下の説明で
はSIV(英語の“Simian Immunodeficiency Virus ”（サ
ルの免疫不全ウイルス）の略字）と称し、場合によって
はその後に由来となるサルの種類を示す略字、例えばア
カゲザルであればMAC(又はmac)、アフリカミドリザルで
あればAGM （“African Green Monkey”の略字）を付加
して示すことにする。
【００３２】前述の方法と同じ方法を使用して調べたと
ころ、SIV-1macからは下記のタンパク質も得られること
が判明した： − 分子量約27キロダルトンの主要核タンパク質p27 。
【００３３】− エンベロープの主糖タンパク質gp140
。
【００３４】− トランスメンブランと思われるタンパ
ク質p32 。このタンパク質は、ウイルスを予め35S-シス
テインで標識しておくとRIPAでは殆ど観察されないが、
ウェスターン法では広い帯の形態で観察され得る。
【００３５】前述のウイルスHIV-2 及びSIV を更に深く
研究した。その結果レトロウイルスHIV-2 に関しては、
該レトロウイルスのゲノムのRNA の相補DNA(cDNA) 配列
も得ることができた。HIV-2 グループの代表的レトロウ
イルス(HIV-2 ROD) のcDNAの完全ヌクレオチド配列を19
86年2 月21日に番号I-522 、名称LAV-II RODでCNCMに寄
託した。
【００３６】このヌクレオチド配列とその中に含まれる
読取り枠(phases de lecture ouverte) とを第1A図に示
す。
【００３７】また、別のレトロウイルスに関しては、こ
れらレトロウイルスの完全ヌクレオチド配列も得ること
ができた。特にSIV のゲノムRNA から誘導したcDNAにつ
いてこれが得られた。
【００３８】ウイルスSIV-1macのヌクレオチド配列を解
明するに必要な該ウイルスのクローニング及び配列決定
は下記の条件で実施した：ウイルスSIV(Daniel他により
Science(1985), 228, p.1201-1204 に記載の単離体STLV
-IIImac142-83)に感染した細胞HUT 78のDNA を制限酵素
Sau3A で部分的に消化したものをバクテリオファージベ
クターLambda ELBL3のBamHI 位にクローニングしてゲノ
ムライブラリー(banque genomique)を構成した。このよ
うにして形成したゲノムライブラリーの２百万個の組換
えファージを、クローンLambda-ROD4 、Lambda-ROD35及
びE2(Clavel 他(1986), Nature, 324, p. 691)に由来す
るウイルスHIV-2 の配列を用いて、安全性P3条件の下に
その場でスクリーニングし、ニックトランスレーション
にかけた。
【００３９】50℃の5 ｘSSC でハイブリダイゼーション
を行い、50℃の2 ｘSSC で洗浄した。ウイルス配列を全
部含むクローンが１つだけ得られた。このクローンはLa
mbda-SIV-1と称する。このファージLambda-SIV-1の挿入
体は全体で16.5kbの大きさを有し、左方LTR の最初の25
0 個の塩基が欠失しているだけで右方LTR は完全である
組込みプロウイルスを含む。
【００４０】この組込みプロウイルスを、ファージM13m
p8におけるランダムフラグメントのサブクローニングの
後でジデオキシヌクレオチド法により配列決定した。30
0 個のサブクローンが解析された。
【００４１】プラスミドpSIV-1.1及びpSIV-1.2に挿入し
たクローンLambda-SIV-1に由来するcDNAフラグメント
を、1987年4 月15日に番号I-658(pSIV-1.1) 及びI-659
(pSIV-1.2) でCNCMに寄託した。
【００４２】結果を添付図面に示した。
【００４３】これらの図面のうち、第1B図はSIV のウイ
ルスゲノムのヌクレオチド配列と、遺伝子生成物gag 、
pol 、env 、Q 、X 、R 、tat 、art 、F に対応するウ
イルスタンパク質に関して前記ヌクレオチド配列から誘
導した配列とを示している。
【００４４】したがって、本発明は、第1B図に示すアミ
ノ酸配列の全体又は一部分をコードするヌクレオチド配
列を含むDNA を提供する。
【００４５】第３図から第11図及び第1C図は、ウイルス
遺伝子及びLTR の理論的生成物をHIV2とSIVmacとの間で
比較している（λSIV-1)。
【００４６】本発明は、SIV-1 の完全ゲノムに由来する
cDNAから得られるcDNAフラグメントにも係わる。これら
のフラグメントは、cDNAの完全配列に由来し且つ本発明
の有利なペプチドをコードする１つ以上の配列を含む。
これらの配列は第1B図に示し、該ウイルスのLTR 配列に
関するものは第1C図に示した。
【００４７】LTR 配列（第1C図）に関しては、SIV のcD
NAのヌクレオチド配列をウイルスHIV-2 ROD のヌクレオ
チド配列に対応させて配置した。第1B図を第３図から第
11図までと対比させるとゲノム全体に関して得られるこ
の対応状態によって、これら２つのウイルスに共通の基
本的構造エレメントを有するヌクレオチド配列の位置付
け又は演繹が可能になる。
【００４８】本発明においては、SIV に由来するcDNA及
びそのフラグメント（又はそれらを含む組換体）を、ウ
イルスHIV-2 保菌者の疑いのある患者から得た血清又は
その他の生物学的液体もしくは組織の試料中にウイルス
HIV-2 が存在するか否かを診断する場合のプローブとし
て使用することにも係わる。これらのプローブは標識す
るのが好ましい（放射性標識、酵素標識、蛍光標識、
等）。ウイルスHIV-2 又はHIV-2 変異体の診断で使用す
るのに特に適したプローブは、ウイルスSIV のゲノムの
相補cDNAの全体もしくは一部分を含むか、又は特に種々
のクローンに含まれる組換えフラグメントを含むことを
特徴とし得る。
【００４９】ウイルスHIV-2 の診断法及び診断キットで
使用されるプローブは前述のプローブには限定されな
い。エイズの疑いのある個体の生物学的流体中でHIV-2
又はこれに類似したウイルスに対する抗体を検出できる
ものであれば、ウイルスSIV 、SIV 変異体又はこれらと
類似の構造をもつウイルスに由来する総てのヌクレオチ
ド配列をこの種のプローブとして使用し得る。
【００５０】前記検出はそれ自体公知の任意の方法で実
施し得る。一例として、前記プローブを血清又はその他
の生物学的流体、例えば髄液、唾液等の中に含まれる細
胞から得た核酸と接触させてもよい。あるいは、前述の
ごとき生物学的流体中の核酸がこれらプローブとハイブ
リダイズできるような状態になっていれば、これらプロ
ーブと核酸との間のハイブリダイゼーションを生起させ
る条件の下に、前記プローブを前記流体自体と接触させ
る方法も使用し得る。この場合には、ハイブリダイゼー
ションが生起したか否かの検出がin vitro診断の最終ス
テップとなる。ハイブリダイゼーション反応を利用する
前記診断は、所期のウイルスのタイプを区別する必要が
ない場合には、夫々HIV-2 及びSIV-1 又はHIV-1 、HIV-
2 及びSIV に由来する複数のプローブの混合物を用いて
実施することもできる。
【００５１】一般的には、ウイルスHIV-2 保菌者の疑い
のある患者から得た血清又は他の生物学的液体もしくは
組織の試料中にウイルスHIV-2 又はその変異体が存在す
るか否かを診断する方法は、下記の諸ステップからな
る： １／疑いのある患者から採取した試料中の細胞のDNA
を、適当な膜上で標識を付けた前記プローブの１つと接
触させることにより、緊縮条件下で少なくとも１回のハ
イブリダイゼーションを行う。
【００５２】２／前記ハイブリダイゼーションの緊縮条
件を保持できる溶液で前記膜を洗浄する。
【００５３】３／免疫検出法でウイルスHIV-2 の存在を
検出する。
【００５４】本発明の方法の別の好ましい実施態様で
は、前記ハイブリダイゼーションを非緊縮条件で実施
し、且つ前記膜の洗浄を該ハイブリダイゼーション条件
に適合した条件で行う。
【００５５】本発明は勿論、SIV 変異体の類似領域に位
置した配列に対応する核酸、並びに遺伝子コードの縮重
による改変を利用することによって得られる総ての核酸
に係わる。
【００５６】前出の欧州特許87/400,151,4には、以後
“gag タンパク質”と称するコアタンパク質、及び以後
“env タンパク質”と称するエンベロープタンパク質の
解明にもつながった比較研究も記載されている。この研
究の結果によれば、HIV-2 のコアタンパク質(gagタンパ
ク質）はHIV-1 のコアタンパク質に対してエンベロープ
タンパク質(envタンパク質) より小さい差を示す。全体
的に言えば、HIV-2 のenv タンパク質はウイルスHIV-１
の対応env タンパク質に対する免疫学的関係が無いとは
いわないまでも極めて薄い。
【００５７】これに対し、ウイルスHIV-2 及びSIV のcD
NA配列構造の比較検査では、タンパク質レベルに現れる
或る共通の特徴が明らかになった。
【００５８】全体的に言えば、HIV-2 及びSIV-1 のタン
パク質には大きな免疫学的関係が存在する。
【００５９】HIV-2 のエンベロープの主糖タンパク質
は、免疫学的には、HIV-1 のエンベロープの主糖タンパ
ク質よりもSIV のエンベロープの主糖タンパク質の方に
近いことが判明した。
【００６０】これは分子量レベル、即ちHIV-2 及びSIV
の主糖タンパク質が130 〜140 キロダルトンであるのに
対しHIV-1 の主糖タンパク質が約110 キロダルトンであ
るという点だけにとどまらず、免疫学的特性についても
言えることである。というのも、HIV-2 に感染した患者
から採取した血清、より特定的にはHIV-2 のgp140 に対
して形成された抗体はSIV-1macのgp140 を認識するが、
これと同じ血清及び同じHIV-2 抗体が類似のテストでHI
V-1 のgp110 を認識することはないからである。HIV-2
のgp140 と反応しなかった抗HIV-1 血清はHIV-2 抽出物
の中に含まれる35S-システインで標識された分子量26キ
ロダルトンのタンパク質を沈降させる。
【００６１】HIV-2 の主コアタンパク質は、HIV-1 のp2
5 とSIV のp27 との中間の平均分子量（約26,000）を有
すると思われる。
【００６２】これらの所見は、前述のごとき患者の１人
から単離したHIV-2 から得たウイルス抽出物について行
ったテストの結果に基づくものである。第２の患者から
単離したHIV-2 のウイルス抽出物に関しても同様の結果
が得られた。
【００６３】研究を更に進めた結果、本発明者等はHIV-
2 又はSIV 、更にはHIV-1 のタンパク質gag 及びenv の
構造内に含まれる配列と同じか又は類似のアミノ酸配列
をもつ第１のペプチドグループを発見するに至った。こ
れらのペプチドは特に、ウイルスHIV-2 又はその変異体
の１つによるヒトの感染の診断に使用できる。
【００６４】したがって、本発明はHIV-2 型ウイルスの
糖タンパク質（特に、エンベロープ糖タンパク質）のペ
プチド骨格と共通の免疫学的特性を有するペプチドであ
って、SIV-1 の糖タンパク質のペプチド骨格と共通した
ペプチド構造も有するペプチドを提供する。
【００６５】本発明は、より特定的にはウイルスHIV-2
に感染した患者の生物学的試料、特に血清中のウイルス
HIV-2 又はその変異体に対する抗体のin vitro検出を行
うための診断方法及び診断組成物に使用可能である。こ
れらペプチドのうちの或るものは、ウイルスHIV-2 によ
る感染とウイルスHIV-1 による感染との相違をより明確
に示してくれる。
【００６６】このような研究の推進の結果、HIV-1 及び
HIV-2 両者のenv タンパク質を認識し得る抗体の産生を
in vivo で誘導することができるような構造的特徴を有
する免疫原ペプチド又は免疫原になり得るペプチドの合
成も可能になった。これらのペプチドの少なくとも一部
分は、ウイルスHIV-1 にもウイルスHIV-2 にも結合して
主にこれらウイルスの中和をより特定的に行うことがで
きるような構造的特徴も有する。このようなタイプのペ
プチドは特にウイルスHIV に対するワクチン、従ってエ
イズに対するワクチンの有効成分の製造に使用すると有
利であるといえる。
【００６７】以後、本発明のペプチドの構造に含まれる
アミノ酸残基は、一義的意味を有するアミノ酸残基に関
しては下記の表に示すように単一文字（大文字）で各天
然アミノ酸を示す国際命名法を用いて表すことにする。
【００６８】Ｍ メチオニン、 Ｌ ロイシン、 Ｉ イソロイシン、 Ｖ バリン、 Ｆ フェニルアラニン、 Ｓ セリン、 Ｐ プロリン、 Ｔ スレオニン、 Ａ アラニン、 Ｙ チロシン、 Ｈ ヒスチジン、 Ｑ グルタミン、 Ｎ アスパラギン、 Ｋ リジン、 Ｄ アスパラギン酸、 Ｅ グルタミン酸、 Ｃ システイン、 Ｗ トリプトファン、 Ｒ アルギニン、 Ｇ グリシン。
【００６９】所定タンパク質の特徴的アミノ酸鎖中の位
置に起因して複数の意味を有し得るアミノ酸は、その意
味が重要でなければ（どのアミノ酸でもよければ）
「−」で示し、そのアミノ酸が１つより多い限定数の好
ましい意味を有する場合には小文字で示し得る。この場
合には、その小文字が表し得る意味はそのアミノ酸が属
するペプチドに対して必ず正確に定義される。
【００７０】説明の便宜上これらのペプチドは、場合に
応じて特定のHIV-1 、HIV-2 又はSIV のenv もしくはga
g タンパク質に含まれるアミノ酸配列に関する数字を後
に付加した略字env 又はgag で表すことにする。
【００７１】また、下記の式では、 − 基Ｘは遊離NH2 基、もしくは特に炭素原子を１〜５
個含む１つ又は２つのアルキル基によってアミド化され
たNH2 基を表すか、又はアミノ酸を１〜５個含み、その
N 末端アミノ酸自体が前述のごとき遊離もしくはアミド
化NH2 基を有するようなペプチド基を表し、 − 基Ｚは遊離-OH 基、もしくは１〜５個の炭素原子含
むアルキル基を有するアルコキシルを表すか、又はアミ
ノ酸を１〜５個含み、そのＣ末端アミノ酸自体が前述の
ごとき遊離-OH 基もしくはアルコキシルを有するような
ペプチド基を表す。この場合ＸもしくはＺ又はその両方
に含まれる１〜５個のアミノ酸を有する基は、その存在
がこれらを含まないペプチドの免疫学的特性、場合によ
っては免疫原性の保持と基本的に両立するような基であ
る。
【００７２】本発明のペプチドはHIV-2 の抗原と共通の
免疫学的特性を有し、これらペプチドのうちのあるもの
はHIV-1 もしくはその変異体の抗原とも共通の免疫学的
特性を有する。これら本発明のペプチドの特徴は、SIV
の抗原と共通のペプチド構造も有することにある。これ
らのペプチドは通常40個以下のアミノ酸残基を含むと有
利である。
【００７３】以下に好ましいペプチドを挙げる。
【００７４】env1 XRV-AIEKYL-DQA-LN-WGCAFRQVCZ；env2 X-LE-AQI-QQEKNMYELQKLNZ ；env3 XELGDYKLVEITPIG-APT--KR-----Z ；env4 X----VTV-YGVP-WK-AT--LFCA-Z ；env5 X---QE--L-NVTE-F--W-NZ；env6 XL---S-KPCVKLTPLCV--Z ；env7 X---N-S-IT--C-K----Z；env8 X-I---YC-P-G-A-L-C-N-TZ ；env9 X------A-C------W--Z；env10 X-G-DPE------NC-GEF-YCN-----NZ；env11 X-----C-IKQ-I------G---YZ 。
【００７５】本発明はより特定的には下記のペプチドに
係わる。
【００７６】env1 XRV-AIEKYL-DQA-LN-WGCAFRQVCZ；env2 X-LE-AQIQQEKNMYELQKLNZ；env3 XELGDYKLVEITPIG-APT--KR-----Z ；env4 X----VTV-YGVP-W--AT--LFCA-Z ；env5 X----E--L-NVTE-F--W-NZ；env6 XL---S-KPCVKL-PLC---Z ；env7 X---N-S-I---C-K----Z；env8 X-I---YC-P-G-A-L-C-N-TZ ；env9 X------A-C------W--Z；env10 X-G-DPE------NC-GEF-YC------NZ；env11 X-----C-I-Q-I------G---YZ 。
【００７７】前記ペプチドに対応する有利なペプチドは
下記の構造を有する。
【００７８】env1 XRVTAIEKYLQDQARLNSWGCAFRQVCZ、又は XRVTAIEKYLKDQAQLNAWGCAFRQVCZ；env2 XSLEQAQIQQEKNMYELQKLNSWZ、又は XLLEEAQIQQEKNMYELQKLNSWZ；env3 XELGDYKLVEITPIGFAPTKEKRYSSAHZ 、又は XELGDYKLVEITPIGLAPTNVKRYTTG-Z ； （これから明らかなように、ペプチドenv1、env2、env3
はHIV-2 とSIV-1 との間の極めて大きい免疫学的関係を
証明している。実際、第１番目のペプチドはHIV-2 ゲノ
ムに含まれ、第２番目のペプチドはSIV-1 に含まれ
る）；env4 XabcdVTVeYGVPfWogAThiLFCAjZ （a からj までの文字は下記の意味を有し得る：ａは
Ｃ、Ｅ又はＤ；ｂはＴ、Ｋ、Ｄ、Ｎ又はＩ；ｃはＱ又は
Ｌ；ｄはＹ又はＷ；ｅはＦ又はＹ；ｆはＴ、Ｖ又はＡ；
ｇはＮ又はＥ；ｈはＩ又はＴ；ｉはＰ又はＴ；ｊはＴ又
はＳ；ｏはＫ又はＲ）；env5 XabcoEdeLfNVTEgFhiWjNZ （ａからｊまでの文字は下記の意味を有し得る：ａはＤ
又はＰ；ｂはＤ又はＮ；ｃはＹ又はＰ；ｄはＩ、Ｖ、Ｉ
又はＬ；ｅはＴ、Ｖ、Ｅ又はＡ；ｆはＶ、Ｇ又はＥ又は
−；ｇはＡ、Ｎ、Ｇ又はＳ；ｈはＤ又はＮ；ｉはＡ又は
Ｍ；ｊはＮ、Ｋ又はＥ；ｏはＱ又はＳ）；env6 XLabcSdKPCVKLoPLCuefKZ （ａからｆまでの文字は下記の意味を有し得る：ａはＦ
又はＷ；ｂはＥ又はＤ；ｃはＴ又はＱ；ｄはＩ又はＬ；
ｅはＡ、Ｓ又はＴ；ｆはＭ又はＬ；ｏはＴ又はＳ；ｕは
Ｖ又はＩ）；env7 XabCNxSyIocdCeKfghiZ （文字ａからｉ並びにｘ及びｙは下記の意味を有し得
る：ａはＮ又はＴ又はＩ；ｂはＨ又はＳ又はＮ；ｃはＥ
又はＱ；ｄはＳ、Ａ又はＣ；ｅはＤ又はＰ；ｆはＨ、Ｖ
又はＤ；ｇはＹ又はＳ；ｈはＷ又はＦ；ｉはＤ又はＥ；
ｘはＴ又はＲ；ｙはＶ又はＡ；ｏはＴ又はＱ）；env8 XaIbcdYCxPeGfAgLhCiNjTZ （文字ａからｋ並びにｘは下記の意味を有し得る：ａは
Ａ又はＰ；ｂはＲ又はＰ；ｃはＦ、Ｉ又はＣ；ｄはＲ又
はＨ；ｅはＰ又はＡ；ｆはＹ又はＦ；ｇはＬ又はＩ；ｈ
はＲ又はＫ；ｉは−又はＮ；ｊはＤ又はＫ；ｘはＡ又は
Ｔ）；env9 XwabcxyAdCefghizWjkZ （文字ａからｋ並びにｘからｚは下記の意味を有し得
る：ａはＫ又は−又はＥ；ｂはＲ又は−；ｃはＰ又はＭ
又はＩ；ｄはＷ又はＨ又はＹ；ｅはＷ又はＮ又はＴ又は
Ｒ；ｆはＦ又はＩ；ｇはＫ又はＳ又はＮ又はＧ；ｈはＧ
又はＲ又はＥ；ｉは−又はＡ又はＴ；ｊはＫ又はＮ又は
Ｄ又はＳ；ｋはＤ又はＡ又はＮ又はＫ又はＥ；ｗはＮ、
Ｄ又はＩ；ｘはＲ又はＧ又はＫ；ｙはＱ又はＫ又はＲ；
ｚはＫ又はＥ又はＱ又はＮ）；env10 XaGbDPEcdefghNCiGEFjYCokxlmnNZ （文字ａからｎ並びにｘは下記の意味を有し得る：ａは
Ｋ又は−又はＧ；ｂはＳ又はＧ又は−；ｃはＶ又はＩ；
ｄはＡ又はＶ又はＴ；ｅはＹ又はＴ又はＭ又はＦ；ｆは
Ｍ又はＨ；ｇはＷ又はＳ；ｈはＴ又はＦ；ｉはＲ又は
Ｇ；ｊはＬ又はＦ；ｏはＮ又はＫ；ｋはＭ又はＳ；ｌは
Ｗ又はＱ又はＫ又はＧ；ｍはＦ又はＬ；ｎはＬ又はＦ；
ｘはＴ又はＳ又はＮ）；env11 XabcdwCeIoQfIxgyhizGjklYZ （文字ａからｌ並びにｗからｚは下記の意味を有し得
る：ａはＲ又はＴ又はＳ又はＮ；ｂはＮ又はＩ；ｃはＹ
又はＴ；ｄはＡ又はＬ又はＶ；ｅはＨ又はＲ；ｆはＩ又
はＦ；ｇはＴ又はＭ；ｈはＨ又はＱ又はＡ；ｉはＫ又は
Ｅ；ｊはＲ又はＫ；ｋはＮ又はＡ；ｌはＶ又はＭ；ｗは
Ｐ又はＱ；ｘはＮ又はＫ；ｙはＷ又はＶ；ｚはＶ又はＴ
又はＫ；ｏはＫ又はＲ）。
【００７９】遺伝子gag によりコードされ且つgag1で表
される抗原ペプチドの構造も以下に示す： XDCKLVLKGLGaNPTLEEMLTAZ （文字ａはＭ又はＴを意味する）。
【００８０】一般的には、本発明のペプチドの前記式中
に存在する単一の意味をもつ（従って国際命名法に対応
する大文字で表される）アミノ酸は、HIV 又はSIV-1 の
うち少なくとも一方のenv 又はgag タンパク質の対応en
v 又はgag 配列中に同じ順序で配列された同一のアミノ
酸に対応することが知見されよう。
【００８１】これらの配列の位置は、第２図に示したHI
V-2 ROD(CNCMNo.I-532) 及びHIV-1BRU(CNCM No.I-232)
夫々のenv タンパク質のアミノ酸配列中で下線によって
明示されている。
【００８２】SIV-1mac(CNCM No.I.521) 及びHIV-2 ROD
夫々のenv 及びgag タンパク質のアミノ酸配列は第３図
及び第４図に示した。
【００８３】これらの配列の特定位置に出現する実線
は、HIV-1 及びHIV-2 の対応タンパク質配列並びにSIV
及びHIV-2 の対応タンパク質配列において互いに同じア
ミノ酸（その場合は星印がつく）又は２つの点を同一鉛
直線上に配置できるように、これらの配列に含まれる特
定アミノ酸を図面から故意に除去したことを示すための
ものである。
【００８４】本発明は前述のペプチドの他に、これらペ
プチドの抗原性又は免疫原性を変化させない範囲で、且
つこれらのペプチドによる抗原又は抗体の認識の特性を
実質的に変化させない範囲で、１つ以上のアミノ酸の挿
入及び／又は欠失及び／又は置換によって改変したペプ
チドにも係わる。
【００８５】特に好ましい具体例として、本発明はHIV-
2 型ウイルスのエンベロープ糖タンパク質のペプチド構
造と共通の免疫学的特性を有するペプチドに係わる。こ
れらのペプチドは40個以下の個数のアミノ酸残基を含
む。
【００８６】本発明のこれらの好ましいペプチドは下記
の配列を有する：env1 RVTAIEKYLQDQARLNSWGCAFRQVC， AIEKYLQDQ， RVSAIEKYLKDQAQLNAWGCAFRQVC， AIEKYLKDQ；env2 SLEQAQIQQEKNMYELQKLNSW， QIQQEKN， LLEEAQIQQEKNMYELQKLNSW；env3 ELGDYKLVEITPIGFAPTKEKRYSSAH ， YKLVEITPIGFAPTKEK ， ELGDYKLVEITPIGLAPTNVKRYTTG- ， YKLVEITPIGLAPTNVK ；env4 CTQYVTVFYGVPTWKNATIPLFCAT ， VTVFYGVPTWKNAT， CIQYVTVFYGVPAWRNATIPLFCAT ， VTVFYGVPAWRNAT， EKLWVTVYYGVPVWKEATTTLFCAS ， VTVYYGVPVWKEAT， EDLWVTVYYGVPVWKEATTTLFCAS ， VTVYYGVPVWKEAT， DNLWVTVYYGVPVWKEATTTLFCAS ， VTVYYGVPVWKEAT；env5 DDYQEITL-NVTEAFDAWNN， L-NVTEAF ， DDYSELAL-NVTESFDAWEN， L-NVTESF ， PNPQEVVLVNVTENFNMWKN， LVNVTENF ， PNPQEIELENVTEGFNMWKN， LENVTEGF ， PNPQEIALENVTENFNMWKN， LENVTENF ；env6 ETSIKPCVKLTPLCVAMK， ETSIKPCVKLSPLCITMR， DQSLKPCVKLTPLCVSLK， DQSLKPCVKLTPLCVTLN， PCVKLTPLCV ；env7 NHCNTSVITESCD ， NTSVIT ， NHCNTSVIQECCD ， NTSVIQ ， TSCNTSVITQACP ， NTSVIT ， INCNTSVITQACP ， NTSVIT ， INCNTSAITQACP ， NTSAIT ；env8 YCAPPGYALLRC-NDT， YCAPAGFAILKCNNKT， YCAPAGFAILKCNDKK， YCAPAGFAILKCRDKK；env9 NKRPRQAWCWFKG-KWKD， NERPKQAWCRFGG-NWKE， N--MRQAHCNISRAKWNA， D--IRRAYCTINETEWDK， I--IGQAHCNISRAQWSK；env10 KGSDPEVAYMWTNCRGEFLYCNMTWFLN， NCRGEFLYCN， GG-DPEVTFMWTNCRGEFLYCKMNWFLN， NCRGEFLYCK， -GGDPEIVTHSFNCGGEFFYCNSTQLFN， NCGGEFFYCN， -GGDPEITTHSFNCRGEFFYCNTSKLFN， NCRGEFFYCN， -GGDPEITTHSFNCGGEFFYCNTSGLFN， NCGGEFFYCN；env11 RNYAPCHIKQIINTWHKVGRNVY ， CHIKQII， RNYVPCHIRQIINTWHKVGKNVY ， CHIRQII， TITLPCRIKQFINMWQEVGKAMY ， CRIKQFI， SITLPCRIKQIINMWQKTCKAMY ， CRIKQII， NITLQCRIKQIIKMVAGR-KAIY ， CRIKQII；gag1 DCKLVLKGLGTNPTLEEMLTA 。
【００８７】本発明のペプチドは更に有利になことに、
ペプチド合成分野で一般に使用されている方法によって
製造することができる。この合成は、均質溶液中又は固
相上で実施し得る。
【００８８】一例として、E. Wunsch 編“Methoden der
Organischen Chemie(有機化学の方法) ”，Vol. 15-I
及びII.,THIEME，Stuttgart 1974でHOUVENWEYLにより記
載されている均質溶液中合成法を使用してもよい。
【００８９】この合成法は、連続したアミノ酸を２つず
つ所定の順序で逐次縮合させるか、又はアミノ酸と予め
形成されており既に複数のアミノ酸を含んでいるフラグ
メントとを適切な順序で縮合させるか、又は前述のごと
く予め形成した複数のフラグメントを縮合させることか
らなる。勿論、これらのアミノ酸又はフラグメントが有
する反応基は、特にカルボキシル基の活性化の後でペプ
チド結合に通常使用されることになる前記成分の一方の
アミン基及びその他の成分のカルボキシル基を除いて、
ペプチド合成でよく知られている方法により予め総て保
護しておく必要がある。別の方法として、カルボジイミ
ド型の一般的結合試薬、例えば1-エチル-3-(3-ジメチル
- アミノプロピル)-カルボジイミドを用いる結合反応を
使用することもできる。使用するアミノアシルが更に別
の酸官能基を有する場合（特にグルタミン酸の場合）に
は、これらの官能基を例えばt-ブスチルエステルで保護
する。
【００９０】アミノ酸を１つずつ結合させていく漸進的
合成法では、先ずＣ末端アミノ酸を所望配列中の近隣ア
ミノアシルに対応するアミノ酸と縮合させることによっ
て合成を開始し、これをＮ末端アミノ酸まで順次繰り返
すようにするが好ましい。本発明の別の好ましい方法で
は、“Solid phasepeptide synthesis”(J.Am.Soc.,45
, 2149-2154)と題する論文でR.D.MERRIFIELDによって
開示されている方法を使用する。
【００９１】MERRIFIELDの方法でペプチド鎖を形成する
には、多孔率の極めて高いポリマー樹脂を使用し、これ
に当該鎖の第１のＣ末端アミノ酸を固定する。このアミ
ノ酸はそのカルボキシル基を介して前記樹脂に固定し、
そのアミン官能基は例えばt-ブチルオキシカルボニル基
で保護する。
【００９２】このようにして第１のＣ末端アミノ酸を樹
脂に固定したら、この樹脂を酸で洗浄して前記アミン官
能基の保護基を除去する。
【００９３】アミン官能基の保護基がt-ブチルオキシカ
ルボニル基の場合には、前記樹脂をトリフルオロ酢酸で
洗浄することによって該保護基を除去し得る。
【００９４】次いで、Ｃ末端アミノアシル残基から数え
て所期の配列の第２アミノアシルを供給する第２のアミ
ノ酸を、当該鎖に固定した第１Ｃ末端アミノ酸の脱保護
アミン官能基に結合させる。好ましくは、この第２アミ
ノ酸のカルボキシル官能基を例えばジシクロヘキシルカ
ルボジイイミドによって活性化し且つアミン官能基を例
えばt-ブチルオキシカルボニルで保護する。
【００９５】このようにして、アミノ酸を２つ含み且つ
その末端アミン官能基が保護された所期のペプチド鎖の
第１部分が得られる。次いで、前記アミン官能基の脱保
護を前述のごとく行い、第３のアミノアシルの固定を第
２番目のＣ末端アミノ酸の付加の場合と類似の条件で実
施し得る。
【００９６】このようにして、ペプチド鎖を構成するこ
とになるアミノ酸を、既に形成され且つ樹脂に固定され
たペプチド鎖部分にあってその都度予め脱保護されたア
ミン基に次々に結合させていく。
【００９７】所望のペプチド鎖が完成したら、このペプ
チド鎖を構成する種々のアミノ酸の保護基を除去し、例
えばフッ化水素酸によって樹脂からペプチドを離脱させ
る。
【００９８】本発明は、前述のごときペプチドモノマー
の水溶性オリゴマーにも係わる。このオリゴマー化は本
発明のペプチドモノマーの免疫原性を増加させ得る。こ
れらのオリゴマーはモノマー単位を例えば２〜10個含み
得るが、この個数は限定的なものではない。
【００９９】このオリゴマーに含まれるモノマー単位は
総てが配列１のポリペプチドもしくは配列２のポリペプ
チドのみで構成されるか、又はこれらポリペプチドの双
方によって構成される。
【０１００】このオリゴマー化の実施には、ペプチド分
野で通常使用されている任意の重合法を使用し得る。こ
の重合は、所望の免疫原性を得るのに必要な数のモノマ
ー単位を含むオリゴマー又はポリマーが得られるまで続
ける。
【０１０１】このモノマーのオリゴマー化又は重合は、
１つの方法として、該モノマーと架橋剤、例えばグルタ
ルアルデヒドとを反応させることにより実施し得る。
【０１０２】その他、例えば、ホモ二官能性又はヘテロ
二官能性結合剤の存在下でモノマー単位をそのカルボキ
シル末端基及びアミン末端基を介して逐次結合させるこ
とからなる別のオリゴマー化又は結合方法を使用するこ
ともできる。
【０１０３】また、前述のごときアミノ酸を17個含む単
位を１つ以上有する分子を製造する場合には、適当な対
応ヌクレオチド配列を含む所定の核酸によって形質転換
した微生物を用いる遺伝子工学技術を使用し得る。
【０１０４】本発明は、ウイルスHIV-2 ROD のcDNA配列
に由来する配列を１つ以上含む核酸にも係わる。これら
の配列は前述の配列で使用した番号付けによって示さ
れ、本発明の有利な特定ペプチドをコードする。
【０１０５】env1 をコードする配列 ヌクレオチド7850〜7927；env2 〃 〃 〃 8030〜8095；env3 〃 〃 〃 7601〜7636；env4 〃 〃 〃 6170〜6247；env5 〃 〃 〃 6294〜6349；env6 〃 〃 〃 6392〜6445；env7 〃 〃 〃 6724〜6763；env8 〃 〃 〃 6794〜6838；env9 〃 〃 〃 7112〜7162；env10 〃 〃 〃 7253〜7336；env11 〃 〃 〃 7358〜7426；gag1 〃 〃 〃 1535〜1597。
【０１０６】本発明はまた、ウイルスSIV に対応する核
酸にも係わる。これらの核酸はウイルスSIV-1 のcDNAに
由来する配列を１つ以上含む。ペプチドenv1〜env11 と
gag1とをコードするこれらの配列は、HIV-2 に関して説
明した対応配列との比較によって第３図で位置決定し得
る。
【０１０７】勿論、本発明はHIV-2 ROD 又はSIV の変異
体から誘導されたcDNAの類似領域に配置された配列に対
応する核酸、並びに遺伝子コードの縮重を利用すること
による前記核酸の改変によって得られるような核酸にも
係わる。
【０１０８】本発明は更に、本発明のペプチド（又は前
記オリゴマー）と生理学的に許容し得る非毒性キャリヤ
分子（天然又は合成）とを、これらキャリヤ分子及びペ
プチドに夫々担持された相補的反応基を介して共有結合
させることにより得られる結合体にも係わる。適切な基
の具体例は下記の通りである。
【０１０９】本発明の結合体の構成に使用されるキャリ
ヤ分子又は高分子支持体の具体例としては、破傷風アナ
トキシン、卵白アルブミン、血清アルブミン、ヘモシア
ミン等のような天然タンパク質が挙げられる。
【０１１０】合成高分子支持体としては、例えばポリリ
ジン又はポリ(D-L- アラニン)-ポリ(L- リジン) が挙げ
られる。
【０１１１】文献には別のタイプの使用可能な高分子支
持体も記載されており、これらの支持体は通常20,000よ
り大きい分子量を有する。
【０１１２】本発明の結合体はそれ自体公知の方法、例
えばInfect. and Immunity,33 ,193-198(1981)でFRANTZ
及びROBERTSON により開示されている方法、又はApplie
d and Environmen- tal Microbiology,(1981年10月),Vo
l.42,no.4,611-4,614 にP.E.KAUFFMANにより開示されて
いる方法に従い、適当なペプチド及びキャリヤ分子を用
いて合成し得る。
【０１１３】実際の操作では、非限定的具体例として下
記に挙げるような化合物：グルタルアルデヒド、クロル
ギ酸エチル、水溶性カルボジイミド即ち[N- エチル-N'
(3-ジメチルアミノ- プロピル) カルボジイミド,HCl]
、ジイソシアネート、ビス−ジアゾベンジジン、ジク
ロロ-s- トリアジン、トリクロロ-s- トリアジン、臭化
シアン、及びScand.J.Immunol., (1978),Vol.8,p.7-23
(AVRAMEAS,TERNYNCK,GUESDON)に記載の結合剤を結合剤
として使用すると有利である。
【０１１４】結合方法としては、ペプチドの１つ以上の
反応基とキャリヤ分子の１つ以上の反応基とを用いる任
意の方法を使用し得る。有利には、カルボキシル官能基
及びアミン官能基を使用する。これらの官能基はタンパ
ク質の合成で使用されている種類の結合剤、例えば1-エ
チル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド、
N-ヒドロキシベンゾトリアゾール、等の存在下で結合反
応を生起し得る。特にペプチド及びキャリヤ分子に夫々
担持されたアミノ基を相互に結合する場合には、結合剤
としてグルタルアルデヒドも使用し得る。
【０１１５】本発明のペプチドは抗原性を有する。従っ
てこれらのペプチドはウイルスHIV-2 による感染の診断
に使用できる。
【０１１６】前述のごとく、ウイルスHIV-2 に対する抗
体をヒトの生物学的流体、特に血清又は髄液中で検出す
る方法に使用できるペプチドは研究の結果２つのグルー
プに分けられた。
【０１１７】第１のグループ(I) はペプチドgag １を含
む。これらのペプチドは抗HIV-2 抗体を識別し、従って
HIV-2 による感染を検出することができる。これらのペ
プチドは抗HIV-1 抗体も或る程度認識し得る。
【０１１８】第２のグループ(II)は、より特定的にはト
ランスメンブラン部分及びエンベロープタンパク質の外
側部分の末端に存在するペプチドに対応するペプチドを
含む。これらのペプチドは先にenv1、env2及びenv3と称
したペプチドである。これらのペプチドを用いればHIV-
2 に対する抗体の存在を特異的に識別することができ、
従ってヒト体内でHIV に起因する過去又は現在の感染、
より特定的にはHIV-2によって生じた感染とHIV-1 によ
って生じた感染とを区別することができる。
【０１１９】本発明は更に、前記ペプチドのうちの少な
くとも１つ、又はこのペプチドのオリゴマーの少なくと
も１つを含む組成物にも係わる。この組成物は、ウイル
スHIV-2 に対する抗体を含むヒト由来血清によって認識
され得るという特徴を有する。
【０１２０】本発明は、生物学的流体、特にヒト血清中
でHIV-2 に対する抗体を検出すべく本発明のペプチドを
1 種以上使用するin vitro診断法にも適用可能であり、
一般的には、in vitro診断法は下記のステップを含む： − 前記生物学的液体を前記ペプチドと接触させ、 − 物理学的又は化学的方法により前記生物学的液体中
にペプチド- 抗体複合体が存在するか否かを検出する。
【０１２１】好ましい実施態様の１つでは、抗原- 抗体
複合体の検出を免疫酵素テスト(ELISAタイプ) 、免疫蛍
光テスト(IFAタイプ) 、放射線免疫テスト(RIAタイプ)
又は放射線免疫沈降テスト(RIPA タイプ) によって行
う。
【０１２２】従って本発明は、酵素、蛍光性、放射性等
の適当な標識で標識された本発明のペプチドにも係わ
る。
【０１２３】このような方法は例えば下記のステップを
含む： − 所定量の本発明ペプチド組成物を微量滴定プレート
の複数の凹部に沈着させ、 − 診断すべき血清を希釈度を上げながら前記凹部に導
入し、 − 前記微量滴定プレートをインキュベーションにか
け、 − 前記微量滴定プレートを繰り返し洗浄し、 − 基質を加水分解して該基質の吸収スペクトラムを少
なくとも１つの所定波長で変化させることのできる酵素
の中から選択した酵素を用いて標識した血液のイムノグ
ロブリンに対する抗体を前記微量滴定プレートの凹部に
導入し、 − 加水分解された基質の量を対照との比較により検出
する。
【０１２４】本発明は、生物学的流体中にウイルスHIV-
2 に対する抗体が存在するか否かを診断し、場合によっ
てはHIV-1 に対する抗体の存在も診断するin vitro診断
に使用するためのキットにも適用でき、このキットは、 − 本発明のペプチド組成物と、 − 免疫反応を生起させるのに適した媒体を構成するた
めの試薬と、 − 免疫反応によって生じた抗原- 抗体複合体を検出す
るための試薬と、 − 前記ペプチド組成物によって認識される抗体を含ま
ない基準となる生物学的流体組織、 とを含み、前記抗原−抗体複合体検出用試薬は、特に前
記ポリペプチド組成物が標識されていない場合には、標
識を有し得、又は標識した試薬で認識され得るようなも
のであってよい。
【０１２５】本発明は本発明のペプチドに対して形成さ
れた抗体自体にも係わる。
【０１２６】本発明の抗体は勿論、ポリクローナル抗体
には限定されない。
【０１２７】本発明は、本発明のペプチドの１つに対し
て免疫した動物、特にマウス又はラットの脾臓細胞と適
当な骨髄腫細胞系の細胞とから通常の方法で形成し得、
且つこれら動物の免疫のために最初に使用されたペプチ
ドを認識するモノクローナル抗体を産生する能力に鑑み
て選択され得る任意のハイブリドーマによって産生され
る総てのモノクローナル抗体にも係わる。
【０１２８】本発明はまた、有効成分が本発明のペプチ
ドの少なくとも１つ又は該ペプチドのオリゴマー、又は
キャリヤ分子と結合した状態のペプチドからなるような
ワクチンの製造に使用するための免疫原組成物であっ
て、製薬的に許容し得るベヒクルとの組合わせにより、
レトロウイルスHIV-2 のタンパク質の阻害、更にはレト
ロウイルスHIV-2 自体の阻害を生起するに十分な量で前
記ペプチドに対する抗体の産生を誘導することを特徴と
する。
【０１２９】ワクチン製造用の前記免疫原組成物は、よ
り特定的には前記ペプチドenv4、env5、env6、env7、en
v8、env9、env 10、env11 のうちの少なくとも１つ、更
にはこれらの混合物を含むと有利である。
【０１３０】ワクチンの有効成分を構成するのに適した
これらのペプチドのうちの或るものは、HIV-2 及びSIV
中だけでなくHIV-1 中でも大きな保存度を示すエンベロ
ープ糖タンパク質の領域に対応するアミノ酸基本構造を
有するため特に好ましい。これらの特に好ましいペプチ
ドはenv4と称するペプチド、並びにペプチドenv5、env6
及びe10 のうち特定のものである。
【０１３１】本発明の好ましい実施態様の１つでは、ワ
クチンの有効成分を構成するのに適した免疫原ペプチド
（又はこれらペプチドのフラグメント）を、HIV-2 、SI
V 及びHIV-1 のエンベロープ糖タンパク質中で50％を越
えるアミノ酸相同性を示し、ウイルスのエンベロープの
外側部分に属し、欠失が全くもしくは殆ど無く、且つ結
合の安定化と結合ループの構成とに有利なシステイン残
基を含む配列に対応する式で示されるものの中から選択
する。
【０１３２】下記のペプチドはこの好ましいペプチドの
部類に属する：env4 XVTV-YGVP-W--ATZ；env5 XL-NVTE-FZ；env6 XKPCVKL-PLC-Z ；env7 XN-S-I-Z；env10 XNC-GEF-YC-Z；env11 XC-I-Q-IZ 。
【０１３３】有利な薬剤組成物は、本発明の少なくとも
１種類の生成物を有効量含む溶液、懸濁液又は注射用の
リポソームからなる。これらの溶液、懸濁液又はリポソ
ームは滅菌等張水相、好ましくは食塩水又はグルコース
含有水相で構成する。 本発明はより特定的には、真皮
内注射、筋内注射又は皮下注射、又は乱切法で投与する
のに適した溶液、懸濁液又はリポソームに係わる。
【０１３４】本発明はまた、別の投与形態、特に経口投
与に適した薬剤組成物にも係わる。
【０１３５】ウイルスHIV-2 に対する抗体の産生におい
て有効なワクチンとして使用し得る本発明の薬剤組成物
は、例えば、本発明のペプチドの量が10〜500 μg/kg、
好ましくは50〜100 μg/kgになるような用量で投与し得
る。
【０１３６】但し、これらの用量値は非限定的なものに
すぎない。
【０１３７】前述のごとく、先に述べた種々のペプチド
はその免疫学的特性を根本的（実質的に）に変えること
はないような改変を含み得る。このような改変の結果得
られる等価ペプチドも本発明に含まれる。これら等価ペ
プチドの具体例としては、HIV-2 、SIV 又はHIV-1 の別
の変異体のcDNAの領域中の、HIV-2 ROD 、SIV 及びHIV-
1 BRU に関して説明した条件と類似の条件で一直線に並
べた時の等価領域に対応する構造を有するペプチドが挙
げられる。これらのペプチドの別の具体例としては、CN
CMに寄託されたcDNA、特に寄託番号I-502 、I-642(HIV-
2 IRMO) 、I-643(HIV-2 EHO)における前述のごとき領
域、並びに場合によってはCNCMに番号I-232 、I-240 、
I-241 、I-550 、I-551 で寄託されたHIV-1 変異体のcD
NA中の等価領域に対応する構造を有するペプチドが挙げ
られる。
【０１３８】本発明のペプチドは更に下記の式で示すこ
ともできる（式中、Ｘ、Ｚ及びダッシュ「−」は前述の
意味を表す）： XRV-AIEKYL-DQA-LN-WGCAFRQVCZ； XAIEKYL-DZ ； X-LE-AQIQQEKNMYELQKLNSWZ； XQIQQEKNZ； XELGDYKLVEITPIG-APT--KR-----Z ； XYKLVEITPIG-APT--KRZ； X----VTV-YGVP-W--AT--LFCA-Z ； XVTV-YGVP-W--ATZ； X----E----NVTE-F--W-NZ； XL-NVTE-FZ； XL---S-KPCVKL-PLC----Z； XKPCVKL-PLC-Z ； XS-KPCVKL-PLC-Z ； X---N-S-I---C-Z ； XN-S-I-Z ； XYC-P-G-A-L-C-N-TZ； X------A-C------W--Z； NKRPRQAWCWFKG-KWKD； X-G-DPE------NC-GEF-YC------NZ； X-----C-I-Q-I------G---YZ 。
【０１３９】本発明は、前述のSIV ペプチド以外に、ウ
イルスSIV のcDNAでコードされたタンパク質にも係わ
る。本発明はまた、免疫学的にSIV-1macと密接な関係を
もつ総てのウイルスのタンパク質、特にそのエンベロー
プのタンパク質及び糖タンパク質が免疫学的に交差反応
し且つcDNAが少なくとも95％、好ましくは98％以上の相
同性を有する総てのウイルスのタンパク質にも係わる。
【０１４０】本発明は特に下記のタンパク質に係わる。
【０１４１】１／遺伝子env によってコードされた第３
図のエンベロープのタンパク質及び糖タンパク質、 ２／第４図に示したタンパク質GAG 、 ３／第５図に示したタンパク質POL 、 ４／第６図に示したタンパク質Ｑ、 ５／第７図に示したタンパク質Ｒ、 ６／第８図に示したタンパク質Ｘ、 ７／第９図に示したタンパク質Ｆ、 ８／第10図に示したタンパク質TAT 。
【０１４２】SIV の前述のタンパク質のアミノ酸はウイ
ルスHIV-2 の対応タンパク質のアミノ酸配列と一直線上
になるように示した。これら２つの配列の間に配置され
た鉛直点はこれら２つのウイルスのタンパク質に共通の
アミノ酸に対応する。
【０１４３】前述のタンパク質をコードするcDNA配列は
第1B図に示した。本発明は、前述のヌクレオチド配列以
外に、やはりレトロウイルスSIV 又はその変異体のタン
パク質をコードする改変ヌクレオチド配列にも係わる。
【０１４４】前述の配列（第1B図）における番号付けで
示されるこれらのcDNA配列には下記のものがある。
【０１４５】 − GAG をコードする配列、ヌクレオチド 551 〜2068； − POL 〃 〃 〃 1726 〜4893； − Ｑ 〃 〃 〃 4826 〜5467； − Ｘ 〃 〃 〃 5298 〜5633； − Ｒ 〃 〃 〃 5637 〜5939； − Ｆ 〃 〃 〃 8569 〜9354； − TAT-1 〃 〃 〃 5788 〜6084； − ART-1 〃 〃 〃 6014 〜6130； − TAT-2 〃 〃 〃 8296 〜8391； − ART-2 〃 〃 〃 8294 〜8548； − ENV 〃 〃 〃 6090 〜8732。
【０１４６】従って本発明は、前述のタンパク質がウイ
ルスSIV から得られる場合又は、特により小さいペプチ
ドの合成に関して説明した前述のごとき方法の１つに従
い合成によって製造される場合には、当然これらのタン
パク質にも係わる。
【０１４７】本発明はまた、HIV-2 のタンパク質、更に
はHIV-2 自体に対する抗体が存在するか否かを調べる診
断における前述のごときタンパク質の使用、又はこれら
タンパク質のうちの或るものに関しては、いずれかのウ
イルスHIV に起因する感染の診断における使用にも係わ
る。例えば、対応遺伝子によってコードされたペプチド
GAG は、抗HIV-1 抗体又は抗HIV-2 抗体の存在を検出す
るのに使用できる。ENV タンパク質は好ましくはHIV-2
又はその変異体の１つに起因する感染の特異的診断に使
用され、時にはHIV-2 又はHIV-1 による感染の診断に使
用される。
【０１４８】従って本発明は更に、生物学的流体特にヒ
ト血清中のHIV-2 に対する抗体、及び場合によってはHI
V-1 に対する抗体も検出するin vitro診断の方法にも係
わる。SIV の前記タンパク質を診断目的に使用し得るこ
のような方法は、本発明で既に説明した。
【０１４９】本発明はまた、生物学的流体中のウイルス
HIV-2 に対する抗体、及び場合によってはHIV-1 に対す
る抗体の存在をin vitro診断するための「キット」にも
適用可能である。前述のごときペプチドを使用するこの
種のキットについても本発明で既に説明した。
【０１５０】本発明は更に、ワクチンの製造に使用する
ための、有効成分が有利には少なくともウイルスSIV の
ENV タンパク質の一部分で構成されるような免疫原組成
物にも適用可能である。前記タンパク質はキャリヤ分子
と結合した形態を有していてもよい。この免疫原組成物
はレトロウイルスHIV-2 のタンパク質、更にはレトロウ
イルスHIV-2 自体を阻害するのに十分な量で前記ペプチ
ドに対する抗体の産生を誘導する。
【０１５１】但し、SIV タンパク質の診断に使用できる
のはENV 又はGAG タンパク質のみに限らない。先に説明
したタンパク質のうちの別のタンパク質も診断用、更に
はワクチン用の組成物の製造に使用し得る。
【図面の簡単な説明】
【図１】HIV-2 ROD ゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す。
【図２】HIV-2 ROD ゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図１のつづき）。
【図３】HIV-2 ROD ゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図２のつづき）。
【図４】HIV-2 ROD ゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図３のつづき）。
【図５】HIV-2 ROD ゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図４のつづき）。
【図６】HIV-2 ROD ゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図５のつづき）。
【図７】HIV-2 ROD ゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図６のつづき）。
【図８】HIV-2 ROD ゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図７のつづき）。
【図９】HIV-2 ROD ゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図８のつづき）。
【図１０】SIV-1macゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す。
【図１１】SIV-1macゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図10のつづき）。
【図１２】SIV-1macゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図11のつづき）。
【図１３】SIV-1macゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図12のつづき）。
【図１４】SIV-1macゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図13のつづき）。
【図１５】SIV-1macゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図14のつづき）。
【図１６】SIV-1macゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図15のつづき）。
【図１７】SIV-1macゲノム由来cDNAの完全ヌクレオチド
配列を示す（図16のつづき）。
【図１８】LTR に関して、SIV のcDNAヌクレオチド配列
（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）に対
応させて配置し比較した図である。
【図１９】LTR に関して、SIV のcDNAヌクレオチド配列
（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）に対
応させて配置し比較した図である（図18のつづき）。
【図２０】ENV に関して、HIV-2 のcDNAヌクレオチド配
列（上側）をHIV-1 のヌクレオチド配列（下側）と対応
させて配置し比較した図である。
【図２１】ENV に関して、HIV-2 のcDNAヌクレオチド配
列（上側）をHIV-1 のヌクレオチド配列（下側）と対応
させて配置し比較した図である（図20のつづき）。
【図２２】ENV に関して、HIV-2 のcDNAヌクレオチド配
列（上側）をHIV-1 のヌクレオチド配列（下側）と対応
させて配置し比較した図である（図21のつづき）。
【図２３】ENV に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド
配列（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）
と対応させて配置し比較した図である。
【図２４】ENV に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド
配列（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）
と対応させて配置し比較した図である（図23のつづ
き）。
【図２５】GAG に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド
配列（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）
と対応させて配置し比較した図である。
【図２６】GAG に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド
配列（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）
と対応させて配置し比較した図である（図25のつづ
き）。
【図２７】POL に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド
配列（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）
と対応させて配置し比較した図である。
【図２８】POL に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド
配列（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）
と対応させて配置し比較した図である（図27のつづ
き）。
【図２９】POL に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド
配列（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）
と対応させて配置し比較した図である（図28のつづ
き）。
【図３０】Q に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド配
列（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）と
対応させて配置し比較した図である。
【図３１】R に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド配
列（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）と
対応させて配置し比較した図である。
【図３２】X に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド配
列（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）と
対応させて配置し比較した図である。
【図３３】F に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド配
列（上側）をHIV-2 ROD のフクレオチド配列（下側）と
対応させて配置し比較した図である。
【図３４】TAT に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド
（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）と対
応させて配置し比較した図である。
【図３５】ART に関して、SIV-1macのcDNAヌクレオチド
（上側）をHIV-2 ROD のヌクレオチド配列（下側）と対
応させて配置し比較した図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｈ 微生物の受託番号 ＣＮＣＭ Ｉ−６５９ 微生物の受託番号 ＣＮＣＭ Ｉ−５０２ 微生物の受託番号 ＣＮＣＭ Ｉ−６４２ 微生物の受託番号 ＣＮＣＭ Ｉ−６４３ 微生物の受託番号 ＣＮＣＭ Ｉ−２３２ 微生物の受託番号 ＣＮＣＭ Ｉ−２４０ 微生物の受託番号 ＣＮＣＭ Ｉ−２４１ 微生物の受託番号 ＣＮＣＭ Ｉ−５５０ 微生物の受託番号 ＣＮＣＭ Ｉ−５５１ 前置審査 (72)発明者 フランソワ・クラベル アメリカ合衆国、ロツクビル・エム・デ ー・20852、ポートリー・ドライブ・ 12103 (72)発明者 ピエール・ソニゴ フランス国、75015・パリ、リユ・ギユ タンベール・23 (72)発明者 ミレイユ・ギアデール フランス国、75017・パリ、リユ・ロジ エ、68 (72)発明者 ピエール・テイオレ フランス国、75013・パリ、リユ・ド ウ・ラ・グラシエール・16 (72)発明者 リザ・シヤクラバルテイ フランス国、75005・パリ、リユ・デ・ トロワ・ポルト・16 (72)発明者 ロナルド・デイスロジヤーズ アメリカ合衆国、マサチユーセツツ・ 01749、ユーデイサン、コーズウエイ・ ストリート・13 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12N 15/48 - 15/50 C12Q 1/68 C07K 14/155 - 14/16 ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＢＩＯＳＹＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) Ｇｅｎｂａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ

Claims (5)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 特定のヌクレオチド配列を含むＤＮＡで
    あって、該特定のヌクレオチド配列が、下記に示すヌク
    レオチド配列に相応するヌクレオチド配列、下記に示す
    ヌクレオチド配列を包含するヌクレオチド配列、又は下
    記に示すヌクレオチド配列の一部分であって少なくとも
    １８ヌクレオチドを含むヌクレオチド配列［ここで、該
    ヌクレオチド配列の一部分は、ＨＩＶ−２レトロウイル
    スに感染した患者の血清中に存在する抗体により認識さ
    れるペプチドをコードするか、又は、生物学的試料中の
    ＨＩＶ−２レトロウイルスの存在を特異的に検出する為
    のプローブとして利用可能である］であることを特徴と
    する前記ＤＮＡ。 【化１】 【化２】 【化３】 【化４】 【化５】 【化６】 【化７】 【化８】
  2. 【請求項２】 部分ヌクレオチド配列が、 であることを特徴とする請求項１に記載のＤＮＡ。
  3. 【請求項３】 特定のヌクレオチド配列を含むＤＮＡで
    あって、該特定のヌクレオチド配列が、下記に示すヌク
    レオチド配列に相応するヌクレオチド配列、下記に示す
    ヌクレオチド配列を包含するヌクレオチド配列、又は下
    記に示すヌクレオチド配列の一部分であって少なくとも
    １８ヌクレオチドを含むヌクレオチド配列［ここで、該
    ヌクレオチド配列の一部分は、ＨＩＶ−２レトロウイル
    スに感染した患者の血清中に存在する抗体により認識さ
    れるペプチドをコードするか、又は、生物学的試料中の
    ＨＩＶ−２レトロウイルスの存在を特異的に検出する為
    のプローブとして利用可能である］であることを特徴と
    する前記ＤＮＡ。 【化９】 【化１０】
  4. 【請求項４】 ベクターに由来する核酸中に挿入した、
    請求項１〜３のいずれか一項に記載のＤＮＡを含むこと
    を特徴とする組換え核酸。
  5. 【請求項５】 標識されていることを特徴とする請求項
    ４に記載の組換え核酸。
JP7117839A 1987-01-16 1995-04-19 免疫不全レトロウイルス（ｈｉｖ）関連抗原性ペプチド及びこれをコードする核酸配列 Expired - Lifetime JP2862810B2 (ja)

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US07/003,764 US5051496A (en) 1986-01-22 1987-01-16 Peptides related to human immunodeficiency virus II (HIV-2)
FR8701739A FR2610632B1 (fr) 1987-02-11 1987-02-11 Peptides caracteristiques des retrovirus d'immunodeficience humaine (virus hiv) leurs applications au diagnostic des infections dues a certains de ces virus et, le cas echeant, a la vaccination contre le sida
FR8705398A FR2614025B1 (fr) 1987-04-15 1987-04-15 Peptides susceptibles d'etre reconnus par des anticorps induits contre des retrovirus d'immunodeficience humaine (virus hiv) leurs applications au diagnostic des infections dues a certains de ces virus et, le cas echeant, a la vaccination contre le sida
FR3764 1987-04-15
FR8701739 1987-04-15
FR8705398 1987-04-15

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