JP2004002421A - ヒト免疫不全レトロウイルス(ウイルスhiv)に対して誘導された抗体により認識できるペプチド、及び前記ウイルスの或る種に起因する感染の診断、場合によってはエイズに対するワクチン接種における該ペプチドの使用。 - Google Patents
ヒト免疫不全レトロウイルス(ウイルスhiv)に対して誘導された抗体により認識できるペプチド、及び前記ウイルスの或る種に起因する感染の診断、場合によってはエイズに対するワクチン接種における該ペプチドの使用。 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】ヒト免疫不全ウイルスによってヒト体内で誘導される抗体により認識され得る抗原ペプチド、免疫原性を有するペプチド、特定形態のエイズの潜在性をヒトに関してin vitro診断するための組成物の製造における該ペプチドの使用、ヒトに関する特定形態のエイズのin vitro診断法におけるこれらペプチドのうち特定のものの使用、診断用キットの構成におけるこれらペプチドの使用を提供する。
【選択図】 なし
Description
本発明は、ヒトの体内で後天的免疫不全症候群(AIDS)に変性し得るリンパ節障害を誘発し得るウイルスから精製状態で得ることのできる抗原と共通の免疫学的性質、場合によっては免疫原性を有するペプチドに係わる。
【0002】
本発明は特定的には、NATUREで規定された命名法に従いHIVと略して呼ばれるウイルスによってヒト体内で誘導される抗体により認識され得る抗原ペプチドに係わる。本発明はまた、免疫原性を有するか又はin vivoで免疫原になり得るペプチドにも係わる。この免疫原性は、ウイルスHIV−2の特徴的抗原を認識し且つ、少なくともこれらペプチドのうちの或るものに関しては、HIV−1に由来する抗原さえも認識する抗体のin vivo誘導という形で現れ得る。
【0003】
本発明は更に、特定形態のエイズの潜在性をヒトに関してin vitro診断するための組成物の製造における前記ペプチドの使用にも係わり、且つ前記エイズウイルスのうちの特定のものに関しては、レトロウイルスHIVに対する免疫原組成物及びワクチン組成物の製造における使用にも係わる。
【0004】
本発明はまた、免疫原ペプチドもしくは免疫原になったペプチドによりin vivo誘導され得る抗体の前記と同じ目的における使用にも係わり、且つこれら抗体のうちの特定のものに関しては、これらヒトエイズに対する薬剤の有効成分の製造における使用にも係わる。
【0005】
本発明は更に、ヒトに関する特定形態のエイズのin vitro診断法におけるこれらペプチドのうちの特定のものの使用と、診断用「キット」の構成におけるこれらペプチドの使用とにも係わる。
【0006】
【従来の技術】
LAV−1又はHIV−1と称する第1のレトロウイルスは、既に特許出願GB.83/24.800及び14/09/84付出願EP.84/401.834で単離され且つ開示されている。このウイルスはまた、Science,220 no.45−99,20,868−871ページで、F.Barre Sinoussi他によっても記述されている。
【0007】
LAV ELI及びLAV MALと称する前記ウイルスHIV−1の変異体も特許出願EP.84/401.834で単離され且つ特徴分析されている。
【0008】
【発明が解決しようとする課題】
ウイルスHIV−1及びその変異体は下記の特性を有する:
− ヒトLeu3細胞(又はT4リンパ球)及びこれらの細胞から誘導した「無限増殖性(immortalisees)」細胞を好ましいターゲットとする。
− Mg2+イオンの存在を必要とする逆転写酵素活性を有し且つポリ(アデニレート−オリゴ−デオキシチミジラーゼ)
ポリ(A)−オリゴ(dT)12−18)に対して大きな活性を示す。
− ショ糖勾配で1.16〜1.17の密度を有する。
− 平均直径が139ナノメートルであり、且つ平均直径41ナノメートルの核を有する。
− これらウイルスの溶解物(lysat)がHTLV−1のタンパク質p24と免疫学的に交差反応しないタンパクp25(コアタンパク質)を含む。
− それ自体のエンベロープを構成するタンパク質p42を含む。
− 分子量110,000のエンベロープタンパク質gp110も含む。
【0009】
欧州特許No. 87/400,151,4には、別の部類に属し且つ前記レトロウイルスに対してわずかな免疫学的関係しかもたないレトロウイルスの単離及び特徴分析が記載されている。これらのレトロウイルスはまとめてHIV−2と称され、リンパ節障害又はエイズの症状を有する複数のアフリカ人患者から単離された。
【0010】
HIV−2型レトロウイルスはHIV−1型レトロウイルスと同様にT4ヒトリンパ球に対して指向性を示し、これらリンパ球中で増殖すると細胞変性効果を及ぼし、その結果全身に及ぶ慢性の多発腺症又はエイズを引き起こすという特徴を有する。
【0011】
より一般的には、HIV−2によって精製されたウイルスは通常下記の特性を有する:
− レトロウイルスHIV−2が好むターゲットはヒトLeu3細胞(又はT4リンパ球)及びこれらT4リンパ球から誘導された「無限増殖性」細胞である。
− T4ヒトリンパ球に対して細胞毒性を示す。
− Mg2+イオンの存在を必要とする逆転写酵素活性を有し且つポリ(アデニレート−オリゴデオキシチルミジラーゼ)(ポリ(A)−オリゴ(dT) 12−18)に対して大きな活性を示す。
− ショ糖勾配で1.16の密度を有する。
− 平均直径が140ナノメートルであり、且つ平均直径41ナノメートルの核を有する。
− HUT型の又はT4タンパク質を発現する永代細胞系で培養できる。
− T8リンパ球に対しては感染性を示さない。
− これらウイルスの溶解物がウイルスHTLV−I又はHTLV−IIのタンパク質p24と免疫学的に交差反応しないタンパク質p26を含む。
− これらの溶解物が更に、放射線免疫沈降テストでHTLV−I又はHTLV−IIのタンパク質p19により免疫学的に認識されないタンパク質p16も含む。
− HTLV−Iのgp110とは免疫学的に交差反応しないが、STLV−III(サルから単離したウイルス)のエンベロープ糖タンパク質gp140とは免疫学的に交差反応する分子量約130,000〜140,000のエンベロープ糖タンパク質も含む。
− これらウイルスの溶解物が更に、分子量32,000から42,000〜45,000の範囲の35S−システインで標識できる抗原も含む。これらの抗原は特に分子量約36,000の抗原と分子量約42,000の抗原とを含み、これら抗原(p36及びp42)の一方がウイルスHIV−2のトランスメンブラン糖タンパク質を構成すると考えられる。
− HIV−2のゲノムRNAが緊縮条件下でHIV−1のゲノムRNAとハイブリダイズしない。
− 非緊縮条件下でHIV−2のゲノムRNAがHIV−1のenv遺伝子及びその隣のLTRとも、HIV−1のゲノムのpol領域の配列ともハイブリダイズしない。
− 非緊縮条件下で、HIV−1領域のヌクレオチド配列と僅かにハイブリダイズする。
【0012】
以前はSTLV IIIという呼称で知られており、現在はSIV−1と称する別のレトロウイルスは、アカゲザル(singe macaque rhesus)から単離された(M.D.Daniel他,Science 228, 1201(1985)、N.L.Letwin他, Science 230, 71(1985)、“STLV−IIImac”という呼称で)。
【0013】
野性ミドリザルからは更に別の“STLV−IIIAGM”(又はSIVAGM)と称するレトロウイルスが単離された。しかしながらアカゲザルの体内に存在する前記ウイルスと異なり、”STLV−IIIAGM”の存在はアフリカミドリザルの体内でエイズタイプの病気を誘発することはないと推測される。
【0014】
1986年2月7日にはレトロウイルスSIV−1macの株が番号I−521でCNCMに寄託された。研究の結果レトロウイルスSIV−1は、HIV−2から類似の条件で単離できる構造タンパク質又は糖タンパク質に対して或る程度の免疫学的関係を有する或る種のタンパク質を含むことが判明した。このレトロウイルスSIV−1はサル体内で感染性を示すことが判明しており、これを単離した研究者等によってSTLV−IIIと命名された(前出の文献参照)。
【0015】
便宜上、これらのウイルスは以下の説明ではSIV(英語の”Simian Immunodeficiency Virus”(サルの免疫不全ウイルス)の略字)と称し、場合によってはその後に由来となるサルの種類を示す略字、例えばアカゲザルであればMAC(又はmac)、アフリカミドリザルであればAGM(”African Green Monkey”の略字)を付加して示すことにする。
【0016】
前述の方法と同じ方法を使用して調べたところ、SIV−1macからは下記のタンパク質も得られることが判明した:
− 分子量約27キロダルトンの主要核タンパク質p27。
− エンベロープの主糖タンパク質gp140。
− トランスメンブランと思われるタンパク質p32。このタンパク質は、ウイルスを予め35S−システインで標識しておくとRIPAでは殆ど観察されないが、ウェスターン法では広い帯の形態で観察され得る。
【0017】
【発明を解決するための手段】
前述のウイルスHIV−2及びSIVを更に深く研究した。その結果レトロウイルスHIV−2に関しては、該レトロウイルスのゲノムのRNAの相補DNA(cDNA)配列も得ることができた。HIV−2グループの代表的レトロウイルス(HIV−2 ROD)のcDNAの完全ヌクレオチド配列を1986年2月21日に番号I−522、名称LAV−II RODでCNCMに寄託した。
【0018】
このヌクレオチド配列とその中に含まれる読取り枠(phases de lecture ouverte)とを図1Aに示す。
【0019】
また、別のレトロウイルスに関しては、これらレトロウイルスの完全ヌクレオチド配列も得ることができた。特にSIVのゲノムRNAから誘導したcDNAについてこれが得られた。 ウイルスSIV−1macのヌクレオチド配列を解明するに必要な該ウイルスのクローニング及び配列決定は下記の条件で実施した:
ウイルスSIV(Daniel他によりScience(1985), 228, p.
1201−1204に記載の単離体STLV−IIImac142−83)に感染した細胞HUT 78のDNAを制限酵素Sau3Aで部分的に消化したものをバクテリオファージベクターLambda ELBL3のBamHI位にクローニングしてゲノムライブラリー(banque genomique)を構成した。このようにして形成したゲノムライブラリーの2百万個の組換えファージを、クローンLambda−ROD4、Lambda−ROD35及びE2(Clavel他(1986), Nature, 324, p.691)に由来するウイルスHIV−2の配列を用いて、安全性P3条件の下にその場でスクリーニングし、ニックトランスレーションにかけた。
【0020】
50℃の5×SSCでハイブリダイゼーションを行い、50℃の2×SSCで洗浄した。ウイルス配列を全部含むクローンが1つだけ得られた。このクローンはLambda−SIV−1と称する。このファージLambda−SIV−1の挿入体は全体で16.5kbの大きさを有し、左方LTRの最初の250個の塩基が欠失しているだけで右方LTRは完全である組込みプロウイルスを含む。
【0021】
この組込みプロウイルスを、ファージM13mp8におけるランダムフラグメントのサブクローニングの後でジデオキシヌクレオチド法により配列決定した。300個のサブクローンが解析された。
【0022】
プラスミドpSIV−1.1及びpSIV−1.2に挿入したクローンLambda−SIV−1に由来するcDNAフラグメントを、1987年4月15日に番号I−658(pSIV−1.1)及びI−659(pSIV−1.2)でCNCMに寄託した。
【0023】
結果を添付図面に示した。
【0024】
これらの図面のうち、図1BはSIVのウイルスゲノムのヌクレオチド配列と、遺伝子生成物gag、pol、env、Q、X、R、tat、art、Fに対応するウイルスタンパク質に関して前記ヌクレオチド配列から誘導した配列とを示している。
【0025】
図3から図11及び図1Cは、ウイルス遺伝子及びLTRの理論的生成物をHIV2とSIVmacとの間で比較している(λSIV−1)。
【0026】
本発明は、SIV−1の完全ゲノムに由来するcDNAから得られるcDNAフラグメントにも係わる。これらのフラグメントは、cDNAの完全配列に由来し且つ本発明の有利なペプチドをコードする1つ以上の配列を含む。これらの配列は図1Bに示し、該ウイルスのLTR配列に関するものは図1Cに示した。
【0027】
LTR配列(図1C)に関しては、SIVのcDNAのヌクレオチド配列をウイルスHIV−2 RODのヌクレオチド配列に対応させて配置した。図1Bを図3から図11までと対比させるとゲノム全体に関して得られるこの対応状態によって、これら2つのウイルスに共通の基本的構造エレメントを有するヌクレオチド配列の位置付け又は演繹が可能になる。
【0028】
本発明は勿論、SIVに由来するcDNA及びそのフラグメント(又はそれらを含む組換体)を、ウイルスHIV−2保菌者の疑いのある患者から得た血清又はその他の生物学的液体もしくは組織の試料中にウイルスHIV−2が存在するか否かを診断する場合のプローブとして使用することにも係わる。これらのプローブは標識するのが好ましい(放射性標識、酵素標識、蛍光標識、等)。ウイルスHIV−2又はHIV−2変異体の診断で使用するのに特に適したプローブは、ウイルスSIVのゲノムの相補cDNAの全体もしくは一部分を含むか、又は特に種々のクローンに含まれる組換えフラグメントを含むことを特徴とし得る。
【0029】
ウイルスHIV−2の診断法及び診断キットで使用されるプローブは前述のプローブには限定されない。エイズの疑いのある個体の生物学的流体中でHIV−2又はこれに類似したウイルスに対する抗体を検出できるものであれば、ウイルスSIV、SIV変異体又はこれらと類似の構造をもつウイルスに由来する総てのヌクレオチド配列をこの種のプローブとして使用し得る。
【0030】
前記検出はそれ自体公知の任意の方法で実施し得る。一例として、前記プローブを血清又はその他の生物学的流体、例えば髄液、唾液等の中に含まれる細胞から得た核酸と接触させてもよい。あるいは、前述のごとき生物学的流体中の核酸がこれらプローブとハイブリダイズできるような状態になっていれば、これらプローブと核酸との間のハイブリダイゼーションを生起させる条件の下に、前記プローブを前記流体自体と接触させる方法も使用し得る。この場合には、ハイブリダイゼーションが生起したか否かの検出がin vitro診断の最終ステップとなる。ハイブリダイゼーション反応を利用する前記診断は、所期のウイルスのタイプを区別する必要がない場合には、夫々HIV−2及びSIV−1又はHIV−1、HIV−2及びSIVに由来する複数のプローブの混合物を用いて実施することもできる。
【0031】
一般的には、ウイルスHIV−2保菌者の疑いのある患者から得た血清又は他の生物学的液体もしくは組織の試料中にウイルスHIV−2又はその変異体が存在するか否かを診断する方法は、下記の諸ステップからなる:
1/ 疑いのある患者から採取した試料中の細胞のDNAを、適当な膜上で標識を付けた前記プローブの1つと接触させることにより、緊縮条件下で少なくとも1回のハイブリダイゼーションを行う。
【0032】
2/ 前記ハイブリダイゼーションの緊縮条件を保持できる溶液で前記膜を洗浄する。
【0033】
3/ 免疫検出法でウイルスHIV−2の存在を検出する。
【0034】
本発明の方法の別の好ましい実施態様では、前記ハイブリダイゼーションを非緊縮条件で実施し、且つ前記膜の洗浄を該ハイブリダイゼーション条件に適合した条件で行う。
【0035】
本発明は勿論、SIV変異体の類似領域に位置した配列に対応する核酸、並びに遺伝子コードの縮重による修飾を利用することによって得られる総ての核酸に係わる。
【0036】
前出の欧州特許87/400,151,4には、以後“gagタンパク質”と称するコアタンパク質、及び以後”envタンパク質”と称するエンベロープタンパク質の解明にもつながった比較研究も記載されている。この研究の結果によれば、HIV−2のコアタンパク質(gagタンパク質)はHIV−1のコアタンパク質に対してエンベロープタンパク質(envタンパク質)より小さい差を示す。全体的に言えば、HIV−2のenvタンパク質はウイルスHIV−1の対応envタンパク質に対する免疫学的関係が無いとはいわないまでも極めて薄い。
【0037】
これに対し、ウイルスHIV−2及びSIVのcDNA配列構造の比較検査では、タンパク質レベルに現れる或る共通の特徴が明らかになった。
【0038】
全体的に言えば、HIV−2及びSIV−1のタンパク質には大きな免疫学的関係が存在する。
【0039】
HIV−2のエンベロープの主糖タンパク質は、免疫学的には、HIV−1のエンベロープの主糖タンパク質よりもSIVのエンベロープの主糖タンパク質の方に近いことが判明した。
【0040】
これは分子量レベル、即ちHIV−2及びSIVの主糖タンパク質が130〜140キロダルトンであるのに対しHIV−1の主糖タンパク質が約110キロダルトンであるという点だけにとどまらず、免疫学的特性についても言えることである。というのも、HIV−2に感染した患者から採取した血清、より特定的にはHIV−2のgp140に対して形成された抗体はSIV−1macのgp140を認識するが、これと同じ血清及び同じHIV−2抗体が類似のテストでHIV−1のgp110を認識することはないからである。HIV−2のgp140と反応しなかった抗HIV−1血清はHIV−2抽出物の中に含まれる35S−システインで標識された分子量26キロダルトンのタンパク質を沈降させる。
【0041】
HIV−2の主コアタンパク質は、HIV−1のp25とSIVのp27との中間の平均分子量(約26,000)を有すると思われる。
【0042】
これらの所見は、前述のごとき患者の1人から単離したHIV−2から得たウイルス抽出物について行ったテストの結果に基づくものである。第2の患者から単離したHIV−2のウイルス抽出物に関しても同様の結果が得られた。
【0043】
研究を更に進めた結果、本発明者等はHIV−2又はSIV、更にはHIV−1のタンパク質gag及びenvの構造内に含まれる配列と同じか又は類似のアミノ酸配列をもつ第1のペプチドグループを発見するに至った。これらのペプチドは特に、ウイルスHIV−2又はその変異体の1つによるヒトの感染の診断に使用できる。
【0044】
そこで本発明は、より特定的にはウイルスHIV−2に感染した患者の生物学的試料、特に血清中のウイルスHIV−2又はその変異体に対する抗体のin vitro検出を行うための診断方法及び診断組成物にも係わる。これらペプチドのうちの或るものは、ウイルスHIV−2による感染とウイルスHIV−1による感染との相違をより明確に示してくれる。
【0045】
このような研究の推進の結果、HIV−1及びHIV−2の両者のenvタンパク質を認識し得る抗体の産生をin vivoで誘導することができるような構造的特徴を有する免疫原ペプチド又は免疫原になり得るペプチドの合成も可能になった。これらのペプチドの少なくとも一部分は、ウイルスHIV−1にもウイルスHIV−2にも結合して主にこれらウイルスの中和をより特定的に行うことができるような構造的特徴も有する。このようなタイプのペプチドは特にウイルスHIVに対するワクチン、従ってエイズに対するワクチンの有効成分の製造に使用すると有利であるといえる。
【0046】
【発明の実施の形態】
以後、本発明のペプチドの構造に含まれるアミノ酸残基は、一義的意味を有するアミノ酸残基に関しては下記の表に示すように単一文字(大文字)で各天然アミノ酸を示す国際命名法を用いて表すことにする。
M メチオニン
L ロイシン
I イソロイシン
V バリン
F フェニルアラニン
S セリン
P プロリン
T スレオニン
A アラニン
Y チロシン
H ヒスチジン
Q グルタミン
N アスパラギン
K リジン
D アスパラギン酸
E グルタミン酸
C システイン
W トリプトファン
R アルギニン
G グリシン
所定タンパク質の特徴的アミノ酸鎖中の位置に起因して複数の意味を有し得るアミノ酸は、その意味が重要でなければ(どのアミノ酸でもよければ)「−」で示し、そのアミノ酸が1つより多い限定数の好ましい意味を有する場合には小文字で示し得る。この場合には、その小文字が表し得る意味はそのアミノ酸が属するペプチドに対して必ず正確に定義される。
【0047】
説明の便宜上これらのペプチドは、場合に応じて特定のHIV−1、HIV−2又はSIVのenvもしくはgagタンパク質に含まれるアミノ酸配列に関する数字を後に付加した略字env又はgagで表すことにする。
【0048】
また、下記の式では、
− 基Xは遊離NH2基、もしくは特に炭素原子を1〜5個含む1つ又は2つのアルキル基によってアミド化されたNH2基を表すか、又はアミノ酸を1〜5個含み、そのN末端アミノ酸自体が前述のごとき遊離もしくはアミド化NH2基を有するようなペプチド基を表し、
− 基Zは遊離−OH基、もしくは1〜5個の炭素原子含むアルキル基を有するアルコキシルを表すか、又はアミノ酸を1〜5個含み、そのC末端アミノ酸自体が前述のごとき遊離−OH基もしくはアルコキシルを有するようなペプチド基を表す。この場合XもしくはZ又はその両方に含まれる1〜5個のアミノ酸を有する基は、その存在がこれらを含まないペプチドの免疫学的特性、場合によっては免疫原性の保持と基本的に両立するような基である。
【0049】
本発明のペプチドはHIV−2の抗原と共通の免疫学的特性を有し、これらペプチドのうちのあるものはHIV−1もしくはその変異体の抗原とも共通の免疫学的特性を有する。これら本発明のペプチドの特徴は、SIVの抗原と共通のペプチド構造も有することにある。これらのペプチドは通常40個以下のアミノ酸残基を含むと有利である。
【0050】
以下に好ましいペプチドを挙げる。
env1
XRV−AIEKYL−DQA−LN−WGCAFRQVCZ
env2
X−LE−AQI−QQEKNMYELQKLNZ
env3
XELGDYKLVEITPIG−APT−−KR−−−−−Z
env4
X−−−−VTV−YGVP−WK−AT−−LFCA−Z
env5
X−−−QE−−L−NVTE−F−−W−NZ
env6
XL−−−S−KPCVKLTPLCV−−Z
env7
X−−−N−S−IT−−C−K−−−−Z
env8
X−I−−−YC−P−G−A−L−C−N−TZ
env9
X−−−−−−A−C−−−−−−W−−Z
env10
X−G−DPE−−−−−−NC−GEF−YCN−−−−−NZ
env11
X−−−−−C−IKQ−I−−−−−−G−−−YZ
本発明はより特定的には下記のペプチドに係わる。
env1
XRV−AIEKYL−DQA−LN−WGCAFRQVCZ
env2
X−LE−AQIQQEKNMYELQKLNZ
env3
XELGDYKLVEITPIG−APT−−KR−−−−−Z
env4
X−−−−VTV−YGVP−W−−AT−−LFCA−Z
env5
X−−−−E−−L−NVTE−F−−W−NZ
env6
XL−−−S−KPCVKL−PLC−−−Z
env7
X−−−N−S−I−−−C−K−−−−Z
env8
X−I−−−YC−P−G−A−L−C−N−TZ
env9
X−−−−−−A−C−−−−−−W−−Z
env10
X−G−DPE−−−−−−NC−GEF−YC−−−−−−NZ
env11
X−−−−−C−I−Q−I−−−−−−G−−−YZ
前記ペプチドに対応する有利なペプチドは下記の構造を有する。
env1
XRVTAIEKYLQDQARLNSWGCAFRQVCZ、又は
XRVTAIEKYLKDQAQLNAWGCAFRQVCZ
env2
XSLEQAQIQQEKNMYELQKLNSWZ、又は
XLLEEAQIQQEKNMYELQKLNSWZ
env3
XELGDYKLVEITPIGFAPTKEKRYSSAHZ、又は
XELGDYKLVEITPIGLAPTNVKRYTTG−Z
(これから明らかなように、ペプチドenv1、env2、env3は
HIV−2とSIV−1との間の極めて大きい免疫学的関係を証明している。実際、第1番目のペプチドはHIV−2ゲノムに含まれ、第2番目のペプチドはSIV−1に含まれる)。
env4
XabcdVTVeYGVPfWogAThiLFCAjZ
aからjまでの文字は下記の意味を有し得る:
aはC、E又はD
bはT、K、D、N又はI
cはQ又はL
dはY又はW
eはF又はY
fはT、V又はA
gはN又はE
hはI又はT
iはP又はT
jはT又はS
oはK又はR
env5
XabcoEdeLfNVTEgFhiWjNZ
aからjまでの文字は下記の意味を有し得る:
aはD又はP
bはD又はN
cはY又はP
dはI、V、I又はL
eはT、V、E又はA
fはV、G又はE又は−
gはA、N、G又はS
hはD又はN
iはA又はM
jはN、K又はE
oはQ又はS
env6
XLabcSdKPCVKLoPLCuefKZ
aからfまでの文字は下記の意味を有し得る:
aはF又はW
bはE又はD
cはT又はQ
dはI又はL
eはA、S又はT
fはM又はL
oはT又はS
uはV又はI
env7
XabCNxSyIocdCeKfghiZ
文字aからi並びにx及びyは下記の意味を有し得る:
aはN又はT又はI
bはH又はS又はN
cはE又はQ
dはS、A又はC
eはD又はP
fはH、V又はD
gはY又はS
hはW又はF
iはD又はE
xはT又はR
yはV又はA
oはT又はQ
env8
XaIbcdYCxPeGfAgLhCiNjTZ
文字aからk並びにxは下記の意味を有し得る:
aはA又はP
bはR又はP
cはF、I又はC
dはR又はH
eはP又はA
fはY又はF
gはL又はI
hはR又はK
iは−又はN
jはD又はK
xはA又はT
env9
XwabcxyAdCefghizWjkZ
文字aからk並びにxからzは下記の意味を有し得る:
aはK又は−又はE
bはR又は−
cはP又はM又はI
dはW又はH又はY
eはW又はN又はT又はR
fはF又はI
gはK又はS又はN又はG
hはG又はR又はE
iは−又はA又はT
jはK又はN又はD又はS
kはD又はA又はN又はK又はE
wはN、D又はI
xはR又はG又はK
yはQ又はK又はR
zはK又はE又はQ又はN
env10
XaGbDPEcdefghNCiGEFjYCokxlmnNZ
文字aからn並びにxは下記の意味を有し得る:
aはK又は−又はG
bはS又はG又は−
cはV又はI
dはA又はV又はT
eはY又はT又はM又はF
fはM又はH
gはW又はS
hはT又はF
iはR又はG
jはL又はF
oはN又はK
kはM又はS
lはW又はQ又はK又はG
mはF又はL
nはL又はF
xはT又はS又はN
env11
XabcdwCeIoQfIxgyhizGjklYZ
文字aからl並びにwからzは下記の意味を有し得る:
aはR又はT又はS又はN
bはN又はI
cはY又はT
dはA又はL又はV
eはH又はR
fはI又はF
gはT又はM
hはH又はQ又はA
iはK又はE
jはR又はK
kはN又はA
lはV又はM
wはP又はQ
xはN又はK
yはW又はV
zはV又はT又はK
oはK又はR
遺伝子gagによりコードされ且つgag1で表される抗原ペプチドの構造も以下に示す:
XDCKLVLKGLGaNPTLEEMLTAZ
文字aはM又はTを意味する。
【0051】
一般的には、本発明のペプチドの前記式中に存在する単一の意味をもつ(従って国際命名法に対応する大文字で表される)アミノ酸は、HIV又はSIV−1のうち少なくとも一方のenv又はgagタンパク質の対応env又はgag配列中に同じ順序で配列された同一のアミノ酸に対応することが知見されよう。
【0052】
これらの配列の位置は、図2に示したHIV−2 ROD(CNCMNo.I−532)及びHIV−1 BRU(CNCM No.I−232)夫々のenvタンパク質のアミノ酸配列中で下線によって明示されている。
SIV−1mac(CNCM No.I.521)及びHIV−2 ROD夫々のenv及びgagタンパク質のアミノ酸配列は図3及び図4に示した。 これらの配列の特定位置に出現する実線は、HIV−1及び
HIV−2の対応タンパク質配列並びにSIV及びHIV−2の対応タンパク質配列において互いに同じアミノ酸(その場合は星印がつく)又は2つの点を同一鉛直線上に配置できるように、これらの配列に含まれる特定アミノ酸を図面から故意に除去したことを示すためのものである。
【0053】
本発明は前述のペプチドの他に、これらペプチドの抗原性又は免疫原性を変化させない範囲で、且つこれらのペプチドによる抗原又は抗体の認識の特性を実質的に変化させない範囲で、1つ以上のアミノ酸の挿入及び/又は欠失及び/又は置換によって修飾したペプチドにも係わる。
【0054】
特に好ましい具体例として、本発明はHIV−2型ウイルスのエンベロープ糖タンパク質のペプチド構造と共通の免疫学的特性を有するペプチドに係わる。これらのペプチドは40個以下の個数のアミノ酸残基を含む。
【0055】
本発明のこれらの好ましいペプチドは下記の配列を有する:
本発明のペプチドは更に有利になことに、ペプチド合成分野で一般に使用されている方法によって製造することができる。この合成は、均質溶液中又は固相上で実施し得る。
【0056】
一例として、E. Wunsch編”Methoden der Organischen Chemie(有機化学の方法)”,Vol. 15−I及びII.,THIEME,Stuttgart 1974でHOUVENWEYLにより記載されている均質溶液中合成法を使用してもよい。
【0057】
この合成法は、連続したアミノ酸を2つずつ所定の順序で逐次縮合させるか、又はアミノ酸と予め形成されており既に複数のアミノ酸を含んでいるフラグメントとを適切な順序で縮合させるか、又は前述のごとく予め形成した複数のフラグメントを縮合させることからなる。勿論、これらのアミノ酸又はフラグメントが有する反応基は、特にカルボキシル基の活性化の後でペプチド結合に通常使用されることになる前記成分の一方のアミノ基及びその他の成分のカルボキシル基を除いて、ペプチド合成でよく知られている方法により予め総て保護しておく必要がある。別の方法として、カルボジイミド型の一般的結合試薬、例えば1−エチル−3−(3−ジメチル−アミノプロピル)−カルボジイミドを用いる結合反応を使用することもできる。使用するアミノアシルが更に別の酸官能基を有する場合(特にグルタミン酸の場合)には、これらの官能基を例えばt−ブスチルエステルで保護する。
【0058】
アミノ酸を1つずつ結合させていく漸進的合成法では、先ずC末端アミノ酸を所望配列中の近隣アミノアシルに対応するアミノ酸と縮合させることによって合成を開始し、これをN末端アミノ酸まで順次繰り返すようにするが好ましい。本発明の別の好ましい方法では、”Solid phase peptide synthesis”(J.Am.Soc.,45, 2149−2154)と題する論文でR.D.MERRIFIELDによって開示されている方法を使用する。
【0059】
MERRIFIELDの方法でペプチド鎖を形成するには、多孔率の極めて高いポリマー樹脂を使用し、これに当該鎖の第1のC末端アミノ酸を固定する。このアミノ酸はそのカルボキシル基を介して前記樹脂に固定し、そのアミン官能基は例えばt−ブチルオキシカルボニル基で保護する。
【0060】
このようにして第1のC末端アミノ酸を樹脂に固定したら、この樹脂を酸で洗浄して前記アミン官能基の保護基を除去する。
【0061】
アミン官能基の保護基がt−ブチルオキシカルボニル基の場合には、前記樹脂をトリフルオロ酢酸で洗浄することによって該保護基を除去し得る。
【0062】
次いで、C末端アミノアシル残基から数えて所期の配列の第2アミノアシルを供給する第2のアミノ酸を、当該鎖に固定した第1C末端アミノ酸の脱保護アミン官能基に結合させる。好ましくは、この第2アミノ酸のカルボキシル官能基を例えばジシクロヘキシルカルボジイイミドによって活性化し且つアミン官能基を例えばt−ブチルオキシカルボニルで保護する。
【0063】
このようにして、アミノ酸を2つ含み且つその末端アミン官能基が保護された所期のペプチド鎖の第1部分が得られる。次いで、前記アミン官能基の脱保護を前述のごとく行い、第3のアミノアシルの固定を第2番目のC末端アミノ酸の付加の場合と類似の条件で実施し得る。
【0064】
このようにして、ペプチド鎖を構成することになるアミノ酸を、既に形成され且つ樹脂に固定されたペプチド鎖部分にあってその都度予め脱保護されたアミン基に次々に結合させていく。
【0065】
所望のペプチド鎖が完成したら、このペプチド鎖を構成する種々のアミノ酸の保護基を除去し、例えばフッ化水素酸によって樹脂からペプチドを離脱させる。
【0066】
本発明は、前述のごときペプチドモノマーの水溶性オリゴマーにも係わる。このオリゴマー化は本発明のペプチドモノマーの免疫原性を増加させ得る。これらのオリゴマーはモノマー単位を例えば2〜10個含み得るが、この個数は限定的なものではない。
【0067】
このオリゴマーに含まれるモノマー単位は総てが配列1のポリペプチドもしくは配列2のポリペプチドのみで構成されるか、又はこれらポリペプチドの双方によって構成される。
【0068】
このオリゴマー化の実施には、ペプチド分野で通常使用されている任意の重合法を使用し得る。この重合は、所望の免疫原性を得るのに必要な数のモノマー単位を含むオリゴマー又はポリマーが得られるまで続ける。
【0069】
このモノマーのオリゴマー化又は重合は、1つの方法として、該モノマーと架橋剤、例えばグルタルアルデヒドとを反応させることにより実施し得る。
【0070】
その他、例えば、ホモ二官能性又はヘテロ二官能性結合剤の存在下でモノマー単位をそのカルボキシル末端基及びアミン末端基を介して逐次結合させることからなる別のオリゴマー化又は結合方法を使用することもできる。
【0071】
また、前述のごときアミノ酸を17個含む単位を1つ以上有する分子を製造する場合には、適当な対応ヌクレオチド配列を含む所定の核酸によって形質転換した微生物を用いる遺伝子工学技術を使用し得る。
【0072】
本発明は、ウイルスHIV−2 RODのcDNA配列に由来する配列を1つ以上含む核酸にも係わる。これらの配列は前述の配列で使用した番号付けによって示され、本発明の有利な特定ペプチドをコードする。
env1をコードする配列 ヌクレオチド7850〜7927
env2〃 〃 8030〜8095
env3〃 〃 7601〜7636
env4〃 〃 6170〜6247
env5〃 〃 6294〜6349
env6〃 〃 6392〜6445
env7〃 〃 6724〜6763
env8〃 〃 6794〜6838
env9〃 〃 7112〜7162
env10〃 〃 7253〜7336
env11〃 〃 7358〜7426
gag1〃 〃 1535〜1597
本発明はまた、ウイルスSIVに対応する核酸にも係わる。これらの核酸はウイルスSIV−1のcDNAに由来する配列を1つ以上含む。ペプチドenv1〜env11とgag1とをコードするこれらの配列は、HIV−2に関して説明した対応配列との比較によって図3で位置決定し得る。
【0073】
勿論、本発明はHIV−2 ROD又はSIVの変異体から誘導されたcDNAの類似領域に配置された配列に対応する核酸、並びに遺伝子コードの縮重を利用することによる前記核酸の修飾によって得られるような核酸にも係わる。
【0074】
本発明は更に、本発明のペプチド(又は前記オリゴマー)と生理学的に許容し得る非毒性キャリヤ分子(天然又は合成)とを、これらキャリヤ分子及びペプチドに夫々担持された相補的反応基を介して共有結合させることにより得られる結合体にも係わる。適切な基の具体例は下記の通りである。
【0075】
本発明の結合体の構成に使用されるキャリヤ分子又は高分子支持体の具体例としては、破傷風アナトキシン、卵白アルブミン、血清アルブミン、ヘモシアミン等のような天然タンパク質が挙げられる。
【0076】
合成高分子支持体としては、例えばポリリジン又はポリ(D−L−アラニン)−ポリ(L−リジン)が挙げられる。
【0077】
文献には別のタイプの使用可能な高分子支持体も記載されており、これらの支持体は通常20,000より大きい分子量を有する。
【0078】
本発明の結合体はそれ自体公知の方法、例えばInfect.and Immunity,33,193−198(1981)でFRANTZ及びROBERTSONにより開示されている方法、又はApplied and Environmen−tal Microbiology,(1981年10月),Vol.42,no.4,611−4,614にP.E.KAUFFMANにより開示されている方法に従い、適当なペプチド及びキャリヤ分子を用いて合成し得る。
【0079】
実際の操作では、非限定的具体例として下記に挙げるような化合物:グルタルアルデヒド、クロルギ酸エチル、水溶性カルボジイミド即ち[N−エチル−N’(3−ジメチルアミノ−プロピル)カルボジイミド,HCl]、ジイソシアネート、ビス−ジアゾベンジジン、ジクロロ−s−トリアジン、トリクロロ−s−トリアジン、臭化シアン、及びScand.J.Immunol.,(1978),Vol.8,p.7−23(AVRAMEAS,TERNYNCK,GUESDON)に記載の結合剤を結合剤として使用すると有利である。
【0080】
結合方法としては、ペプチドの1つ以上の反応基とキャリヤ分子の1つ以上の反応基とを用いる任意の方法を使用し得る。有利には、カルボキシル官能基及びアミン官能基を使用する。これらの官能基はタンパク質の合成で使用されている種類の結合剤、例えば1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)−カルボジイミド、N−ヒドロキシベンゾトリアゾール、等の存在下で結合反応を生起し得る。特にペプチド及びキャリヤ分子に夫々担持されたアミノ基を相互に結合する場合には、結合剤としてグルタルアルデヒドも使用し得る。
【0081】
本発明のペプチドは抗原性を有する。従ってこれらのペプチドはウイルスHIV−2による感染の診断に使用できる。
【0082】
前述のごとく、ウイルスHIV−2に対する抗体をヒトの生物学的流体、特に血清又は髄液中で検出する方法に使用できるペプチドは研究の結果2つのグループに分けられた。 第1のグループ(I)はペプチドgag1を含む。これらのペプチドは抗HIV−2抗体を識別し、従ってHIV−2による感染を検出することができる。これらのペプチドは抗HIV−1抗体も或る程度認識し得る。
【0083】
第2のグループ(II)は、より特定的にはトランスメンブラン部分及びエンベロープタンパク質の外側部分の末端に存在するペプチドに対応するペプチドを含む。これらのペプチドは先にenv1、env2及びenv3と称したペプチドである。これらのペプチドを用いればHIV−2に対する抗体の存在を特異的に識別することができ、従ってヒト体内でHIVに起因する過去又は現在の感染、より特定的にはHIV−2によって生じた感染とHIV−1によって生じた感染とを区別することができる。
【0084】
本発明は更に、前記ペプチドのうちの少なくとも1つ、又はこのペプチドのオリゴマーの少なくとも1つを含む組成物にも係わる。この組成物は、ウイルスHIV−2に対する抗体を含むヒト由来血清によって認識され得るという特徴を有する。
【0085】
本発明は、生物学的流体、特にヒト血清中でHIV−2に対する抗体を検出すべく本発明のペプチドを1種以上使用するin vitro診断法に係わる。
【0086】
一般的には、前記in vitro診断法は下記のステップを含む:
− 前記生物学的液体を前記ペプチドと接触させ、
− 物理学的又は化学的方法により前記生物学的液体中にペプチド−抗体複合体が存在するか否かを検出する。
【0087】
本発明の好ましい実施態様の1つでは、抗原−抗体複合体の検出を免疫酵素テスト(ELISAタイプ)、免疫蛍光テスト(IFAタイプ)、放射線免疫テスト(RIAタイプ)又は放射線免疫沈降テスト(RIPAタイプ)によって行う。
【0088】
従って本発明は、酵素、蛍光性、放射性等の適当な標識で標識された本発明のペプチドにも係わる。
【0089】
このような方法は例えば下記のステップを含む:
− 所定量の本発明ペプチド組成物を微量滴定プレートの複数の凹部に沈着させ、
− 診断すべき血清を希釈度を上げながら前記凹部に導入し、
− 前記微量滴定プレートをインキュベーションにかけ、
− 前記微量滴定プレートを繰り返し洗浄し、
− 基質を加水分解して該基質の吸収スペクトラムを少なくとも1つの所定波長で変化させることのできる酵素の中から選択した酵素を用いて標識した血液のイムノグロブリンに対する抗体を前記微量滴定プレートの凹部に導入し、
− 加水分解された基質の量を対照との比較により検出する。
【0090】
本発明は、生物学的流体中にウイルスHIV−2に対する抗体が存在するか否かを診断し、場合によってはHIV−1に対する抗体の存在も診断するin vitro診断に使用するためのキットにも係わる。このキットは、
− 本発明のペプチド組成物と、
− 免疫反応を生起させるのに適した媒体を構成するための試薬と、
− 免疫反応によって生じた抗原−抗体複合体を検出するための試薬と、
− 前記ペプチド組成物によって認識される抗体を含まない基準となる生物学的流体組織
とを含み、前記抗原−抗体複合体検出用試薬は、特に前記ポリペプチド組成物が標識されていない場合には、標識を有し得、又は標識した試薬で認識され得るようなものであってよい。
【0091】
本発明は本発明のペプチドに対して形成された抗体自体にも係わる。
【0092】
本発明の抗体は勿論、ポリクローナル抗体には限定されない。
【0093】
本発明は、本発明のペプチドの1つに対して免疫した動物、特にマウス又はラットの脾臓細胞と適当な骨髄腫細胞系の細胞とから通常の方法で形成し得、且つこれら動物の免疫のために最初に使用されたペプチドを認識するモノクローナル抗体を産生する能力に鑑みて選択され得る任意のハイブリドーマによって産生される総てのモノクローナル抗体にも係わる。
【0094】
本発明はまた、有効成分が本発明のペプチドの少なくとも1つ又は該ペプチドのオリゴマー、又はキャリヤ分子と結合した状態のペプチドからなるようなワクチンの製造に使用するための免疫原組成物であって、製薬的に許容し得るベヒクルとの組合わせにより、レトロウイルスHIV−2のタンパク質の阻害、更にはレトロウイルスHIV−2自体の阻害を生起するに十分な量で前記ペプチドに対する抗体の産生を誘導することを特徴とする。
【0095】
ワクチン製造用の前記免疫原組成物は、より特定的には前記ペプチドenv4、env5、env6、env7、env8、env9、env10、env11のうちの少なくとも1つ、更にはこれらの混合物を含むと有利である。
【0096】
ワクチンの有効成分を構成するのに適したこれらのペプチドのうちの或るものは、HIV−2及びSIV中だけでなくHIV−1中でも大きな保存度を示すエンベロープ糖タンパク質の領域に対応するアミノ酸基本構造を有するため特に好ましい。これらの特に好ましいペプチドはenv4と称するペプチド、並びにペプチドenv5、env6及びe10のうち特定のものである。
【0097】
本発明の好ましい実施態様の1つでは、ワクチンの有効成分を構成するのに適した免疫原ペプチド(又はこれらペプチドのフラグメント)を、HIV−2、SIV及びHIV−1のエンベロープ糖タンパク質中で50%を越えるアミノ酸相同性を示し、ウイルスのエンベロープの外側部分に属し、欠失が全くもしくは殆ど無く、且つ結合の安定化と結合ループの構成とに有利なシステイン残基を含む配列に対応する式で示されるものの中から選択する。
【0098】
下記のペプチドはこの好ましいペプチドの部類に属する。
env4
XVTV−YGVP−W−−ATZ
env5
XL−NVTE−FZ
env6
XKPCVKL−PLC−Z
env7
XN−S−I−Z
env10
XNC−GEF−YC−Z
env11
XC−I−Q−IZ
有利な薬剤組成物は、本発明の少なくとも1種類の生成物を有効量含む溶液、懸濁液又は注射用のリポソームからなる。これらの溶液、懸濁液又はリポソームは滅菌等張水相、好ましくは食塩水又はグルコース含有水相で構成する。
【0099】
本発明はより特定的には、真皮内注射、筋内注射又は皮下注射、又は乱切法で投与するのに適した溶液、懸濁液又はリポソームに係わる。
【0100】
本発明はまた、別の投与形態、特に経口投与に適した薬剤組成物にも係わる。
【0101】
ウイルスHIV−2に対する抗体の産生において有効なワクチンとして使用し得る本発明の薬剤組成物は、例えば、本発明のペプチドの量が10〜500μg/kg、好ましくは50〜100μg/kgになるような用量で投与し得る。
【0102】
但し、これらの用量値は非限定的なものにすぎない。
【0103】
前述のごとく、先に述べた種々のペプチドはその免疫学的特性を根本的(実質的に)に変えることはないような修飾を含み得る。このような修飾の結果得られる等価ペプチドも後の請求の範囲に含まれる。これら等価ペプチドの具体例としては、HIV−2、SIV又はHIV−1の別の変異体のcDNAの領域中の、HIV−2 ROD、SIV及びHIV−1 BRUに関して説明した条件と類似の条件で一直線に並べた時の等価領域に対応する構造を有するペプチドが挙げられる。これらのペプチドの別の具体例としては、CNCMに寄託されたcDNA、特に寄託番号I−502、I−642(HIV−2 IRMO)、I−643(HIV−2 EHO)における前述のごとき領域、並びに場合によってはCNCMに番号I−232、I−240、I−241、I−550、I−551で寄託されたHIV−1変異体のcDNA中の等価領域に対応する構造を有するペプチドが挙げられる。
【0104】
本発明のペプチドは更に下記の式で示すこともできる(式中、X、Z及びダッシュ「−」は前述の意味を表す)。
本発明は、前述のSIVペプチド以外に、ウイルスSIVのcDNAでコードされたタンパク質にも係わる。本発明はまた、免疫学的にSIV−1macと密接な関係をもつ総てのウイルスのタンパク質、特にそのエンベロープのタンパク質及び糖タンパク質が免疫学的に交差反応し且つcDNAが少なくとも95%、好ましくは98%以上の相同性を有する総てのウイルスのタンパク質にも係わる。
【0105】
本発明は特に下記のタンパク質に係わる。
1/遺伝子envによってコードされた図3のエンベロープのタンパク質及び糖タンパク質、
2/図4に示したタンパク質GAG、
3/図5に示したタンパク質POL、
4/図6に示したタンパク質Q
5/図7に示したタンパク質R、
6/図8に示したタンパク質X、
7/図9に示したタンパク質F、
8/図10に示したタンパク質TAT。
【0106】
SIVの前述のタンパク質のアミノ酸はウイルスHIV−2の対応タンパク質のアミノ酸配列と一直線上になるように示した。これら2つの配列の間に配置された鉛直点はこれら2つのウイルスのタンパク質に共通のアミノ酸に対応する。
【0107】
前述のタンパク質をコードするcDNA配列は図1Bに示した。本発明は、前述のヌクレオチド配列以外に、やはりレトロウイルスSIV又はその変異体のタンパク質をコードする修飾ヌクレオチド配列にも係わる。
【0108】
前述の配列(図1B)における番号付けで示されるこれらのcDNA配列には下記のものがある。
−GAGをコードする配列、ヌクレオチド 551〜2068
−POL〃 〃 1726〜4893
− Q 〃 〃 4826〜5467
− X 〃 〃 5298〜5633
− R 〃 〃 5637〜5939
− F 〃 〃 8569〜9354
− TAT−1 〃 〃 5788〜6084
− ART−1 〃 〃 6014〜6130
− TAT−2 〃 〃 8296〜8391
− ART−2 〃 〃 8294〜8548
− ENV 〃 〃 6090〜8732
従って本発明は、前述のタンパク質がウイルスSIVから得られる場合又は、特により小さいペプチドの合成に関して説明した前述のごとき方法の1つに従い合成によって製造される場合には、当然これらのタンパク質にも係わる。
【0109】
本発明はまた、HIV−2のタンパク質、更にはHIV−2自体に対する抗体が存在するか否かを調べる診断における前述のごときタンパク質の使用、又はこれらタンパク質のうちの或るものに関しては、いずれかのウイルスHIVに起因する感染の診断における使用にも係わる。例えば、対応遺伝子によってコードされたペプチドGAGは、抗HIV−1抗体又は抗HIV−2抗体の存在を検出するのに使用できる。ENVタンパク質は好ましくはHIV−2又はその変異体の1つに起因する感染の特異的診断に使用され、時にはHIV−2又はHIV−1による感染の診断に使用される。
【0110】
従って本発明は更に、生物学的流体特にヒト血清中のHIV−2に対する抗体、及び場合によってはHIV−1に対する抗体も検出するin vitro診断の方法にも係わる。SIVの前記タンパク質を診断目的に使用し得るこのような方法は、本発明で既に説明した。
【0111】
本発明はまた、生物学的流体中のウイルスHIV−2に対する抗体、及び場合によってはHIV−1に対する抗体の存在をin vitro診断するための「キット」にも係わる。前述のごときペプチドを使用するこの種のキットについても本発明で既に説明した。
【0112】
本発明は更に、ワクチンの製造に使用するための、有効成分が有利には少なくともウイルスSIVのENVタンパク質の一部分で構成されるような免疫原組成物にも係わる。前記タンパク質はキャリヤ分子と結合した形態を有していてもよい。この免疫原組成物はレトロウイルスHIV−2のタンパク質、更にはレトロウイルスHIV−2自体を阻害するのに十分な量で前記ペプチドに対する抗体の産生を誘導する。
【0113】
但し、SIVタンパク質の診断に使用できるのはENV又は
GAGタンパク質のみに限らない。先に説明したタンパク質のうちの別のタンパク質も診断用、更にはワクチン用の組成物の製造に使用し得る。
【図面の簡単な説明】
【図1A1】HIV−2 RODのcDNAの完全ヌクレオチド配列及びその中に含まれる読み取り枠である。
【図1A2】HIV−2 RODのcDNAの完全ヌクレオチド配列及びその中に含まれる読み取り枠である。
【図1A3】HIV−2 RODのcDNAの完全ヌクレオチド配列及びその中に含まれる読み取り枠である。
【図1A4】HIV−2 RODのcDNAの完全ヌクレオチド配列及びその中に含まれる読み取り枠である。
【図1A5】HIV−2 RODのcDNAの完全ヌクレオチド配列及びその中に含まれる読み取り枠である。
【図1A6】HIV−2 RODのcDNAの完全ヌクレオチド配列及びその中に含まれる読み取り枠である。
【図1A7】HIV−2 RODのcDNAの完全ヌクレオチド配列及びその中に含まれる読み取り枠である。
【図1A8】HIV−2 RODのcDNAの完全ヌクレオチド配列及びその中に含まれる読み取り枠である。
【図1A9】HIV−2 RODのcDNAの完全ヌクレオチド配列及びその中に含まれる読み取り枠である。
【図1B1】SIVのウイルスゲノムのヌクレオチド配列とgene生成物gag, pol, env, Q, X,R, tat, Fに対応するウイルスタンパク質に関して前記ヌクレオチド配列から誘導した配列である。
【図1B2】SIVのウイルスゲノムのヌクレオチド配列とgene生成物gag, pol, env, Q, X,R, tat, Fに対応するウイルスタンパク質に関して前記ヌクレオチド配列から誘導した配列である。
【図1B3】SIVのウイルスゲノムのヌクレオチド配列とgene生成物gag, pol, env, Q, X,R, tat, Fに対応するウイルスタンパク質に関して前記ヌクレオチド配列から誘導した配列である。
【図1B4】SIVのウイルスゲノムのヌクレオチド配列とgene生成物gag, pol, env, Q, X,R, tat, Fに対応するウイルスタンパク質に関して前記ヌクレオチド配列から誘導した配列である。
【図1B5】SIVのウイルスゲノムのヌクレオチド配列とgene生成物gag, pol, env, Q, X,R, tat, Fに対応するウイルスタンパク質に関して前記ヌクレオチド配列から誘導した配列である。
【図1B6】SIVのウイルスゲノムのヌクレオチド配列とgene生成物gag, pol, env, Q, X,R, tat, Fに対応するウイルスタンパク質に関して前記ヌクレオチド配列から誘導した配列である。
【図1B7】SIVのウイルスゲノムのヌクレオチド配列とgene生成物gag, pol, env, Q, X,R, tat, Fに対応するウイルスタンパク質に関して前記ヌクレオチド配列から誘導した配列である。
【図1B8】SIVのウイルスゲノムのヌクレオチド配列とgene生成物gag, pol, env, Q, X,R, tat, Fに対応するウイルスタンパク質に関して前記ヌクレオチド配列から誘導した配列である。
【図1C1】ウイルス遺伝子及びLTRの理論的生成物をHIV2とSIVmacとの間で比較した図である。
【図1C2】ウイルス遺伝子及びLTRの理論的生成物をHIV2とSIVmacとの間で比較した図である。
【図2a】HIV−2ROD及びHIV−1BRU夫々のenvタンパク質のアミノ酸配列である。
【図2b】HIV−2ROD及びHIV−1BRU夫々のenvタンパク質のアミノ酸配列である。
【図2c】HIV−2ROD及びHIV−1BRU夫々のenvタンパク質のアミノ酸配列である。
【図3a】SIV−macのenvタンパク質のアミノ酸配列である。
【図3b】HIV−2 RODのenvタンパク質のアミノ酸配列である。
【図4a】SIV−macのgagタンパク質のアミノ酸配列である。
【図4b】HIV−2 RODのgagタンパク質のアミノ酸配列である。
【図5a】SIV−mac及びHIV−2 ROD夫々のpolタンパク質のアミノ酸配列である。
【図5b】SIV−mac及びHIV−2 ROD夫々のpolタンパク質のアミノ酸配列である。
【図5c】SIV−mac及びHIV−2 ROD夫々のpolタンパク質のアミノ酸配列である。
【図6】SIV−mac及びHIV−2 ROD夫々のQタンパク質のアミノ酸配列である。
【図7】SIV−mac及びHIV−2 ROD夫々のRタンパク質のアミノ酸配列である。
【図8】SIV−mac及びHIV−2 ROD夫々のXタンパク質のアミノ酸配列である。
【図9】SIV−mac及びHIV−2 ROD夫々のFタンパク質のアミノ酸配列である。
【図10】SIV−mac及びHIV−2 ROD夫々のtatタンパク質のアミノ酸配列である。
【図11】SIV−mac及びHIV−2 ROD夫々のartタンパク質のアミノ酸配列である。
Claims (3)
- HIV−2のエンベロープタンパク質と共通な免疫学的特性を有し、40個以下のアミノ酸残基を有するペプチドであって、
(1)X−−−−VTV−YGVP−W−−AT−−LFCA−Z又は
XVTV−YGVP−W−−ATZ
[式中、X及びZはOH基もしくはNH2基を表すか又は、X及びZは1〜5個のアミノ酸残基を含む基を表すが、但し得られたペプチドは依然抗体産生を誘導できるものであり、各ダッシュは前述のごときペプチドが下記の配列
のうちの1つの免疫学的特性を保持できるようにするアミノアシル残基の中から選択したアミノアシル残基に対応する]
[式中、X及びZはOH基もしくはNH2基を表すか又は、X及びZは1〜5個のアミノ酸残基を含む基を表し、各ダッシュは前述のごときペプチドが下記の配列
のうちの1つの免疫学的特性を保持できるようにするアミノアシル残基の中から選択したアミノアシル残基に対応する]
[式中、X及びZはOH基もしくはNH2基を表すか又は、X及びZは1〜5個のアミノ酸残基を含む基を表し、各ダッシュは前述のごときペプチドが下記の配列
のうちの1つの免疫学的特性を保持できるようにするアミノアシル残基の中から選択したアミノアシル残基に対応する]
[式中、X及びZはOH基もしくはNH2基を表すか又は、X及びZは1〜5個のアミノ酸残基を含む基を表すし、各ダッシュは前述のごときペプチドが下記の配列
のうちの1つの免疫学的特性を保持できるようにするアミノアシル残基の中から選択したアミノアシル残基に対応する]
から成る群より選択される前記ペプチド。 - 請求項1に記載の少なくとも1つのペプチドを医薬上許容し得るビヒクルと組合せて含む抗原組成物。
- 請求項1に記載の少なくとも1つのペプチド又はこのペプチドと担体分子との結合体を、ワクチン製造で用いる医薬上許容し得るビヒクルと組み合わせて含む免疫原組成物。
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