JP2860319B2 - 殺虫性ポリペプチド - Google Patents
殺虫性ポリペプチドInfo
- Publication number
- JP2860319B2 JP2860319B2 JP7265417A JP26541795A JP2860319B2 JP 2860319 B2 JP2860319 B2 JP 2860319B2 JP 7265417 A JP7265417 A JP 7265417A JP 26541795 A JP26541795 A JP 26541795A JP 2860319 B2 JP2860319 B2 JP 2860319B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- toxin
- ser
- thr
- leu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 11
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 title description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 49
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 49
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 15
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 14
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 11
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 claims description 11
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 claims description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 claims description 5
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 3
- 241000193367 Bacillus thuringiensis serovar san diego Species 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 56
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 21
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 18
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 15
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 15
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 9
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 8
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 6
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101100300704 Prochlorococcus marinus (strain SARG / CCMP1375 / SS120) queF gene Proteins 0.000 description 6
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 6
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 6
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 6
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 241000223651 Aureobasidium Species 0.000 description 4
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical group [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 description 3
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 3
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 3
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 3
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- GWEHVDNNLFDJLR-UHFFFAOYSA-N 1,3-diphenylurea Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=O)NC1=CC=CC=C1 GWEHVDNNLFDJLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589220 Acetobacter Species 0.000 description 2
- 244000235858 Acetobacter xylinum Species 0.000 description 2
- 235000002837 Acetobacter xylinum Nutrition 0.000 description 2
- 241000256111 Aedes <genus> Species 0.000 description 2
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 2
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 description 2
- DPSUVAPLRQDWAO-YDHLFZDLSA-N Asn-Tyr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N DPSUVAPLRQDWAO-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 2
- 241000589151 Azotobacter Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 2
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 2
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 2
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 2
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 2
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N N-tosyl-L-phenylalanyl chloromethyl ketone Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N[C@H](C(=O)CCl)CC1=CC=CC=C1 MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 241000589615 Pseudomonas syringae Species 0.000 description 2
- 241000223252 Rhodotorula Species 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- HSWXBJCBYSWBPT-GUBZILKMSA-N Ser-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)C(O)=O HSWXBJCBYSWBPT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589634 Xanthomonas Species 0.000 description 2
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 229960000587 glutaral Drugs 0.000 description 2
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 2
- 230000002140 halogenating effect Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 231100001225 mammalian toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N Ala-Asp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- OMFMCIVBKCEMAK-CYDGBPFRSA-N Ala-Leu-Val-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OMFMCIVBKCEMAK-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- AJBVYEYZVYPFCF-CIUDSAMLSA-N Ala-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AJBVYEYZVYPFCF-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SSQHYGLFYWZWDV-UVBJJODRSA-N Ala-Val-Trp Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O SSQHYGLFYWZWDV-UVBJJODRSA-N 0.000 description 1
- 241001425390 Aphis fabae Species 0.000 description 1
- UXJCMQFPDWCHKX-DCAQKATOSA-N Arg-Arg-Glu Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UXJCMQFPDWCHKX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VNFWDYWTSHFRRG-SRVKXCTJSA-N Arg-Gln-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VNFWDYWTSHFRRG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FLYANDHDFRGGTM-PYJNHQTQSA-N Arg-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N FLYANDHDFRGGTM-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 1
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 description 1
- DNYRZPOWBTYFAF-IHRRRGAJSA-N Asn-Arg-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O DNYRZPOWBTYFAF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- HAJWYALLJIATCX-FXQIFTODSA-N Asn-Asn-Arg Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)CN=C(N)N HAJWYALLJIATCX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- LJUOLNXOWSWGKF-ACZMJKKPSA-N Asn-Asn-Glu Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LJUOLNXOWSWGKF-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VKCOHFFSTKCXEQ-OLHMAJIHSA-N Asn-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VKCOHFFSTKCXEQ-OLHMAJIHSA-N 0.000 description 1
- VYLVOMUVLMGCRF-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asp-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VYLVOMUVLMGCRF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- UYXXMIZGHYKYAT-NHCYSSNCSA-N Asn-His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N UYXXMIZGHYKYAT-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- PNHQRQTVBRDIEF-CIUDSAMLSA-N Asn-Leu-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N PNHQRQTVBRDIEF-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HDHZCEDPLTVHFZ-GUBZILKMSA-N Asn-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HDHZCEDPLTVHFZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HZZIFFOVHLWGCS-KKUMJFAQSA-N Asn-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HZZIFFOVHLWGCS-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- VLDRQOHCMKCXLY-SRVKXCTJSA-N Asn-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O VLDRQOHCMKCXLY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YHXNKGKUDJCAHB-PBCZWWQYSA-N Asn-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O YHXNKGKUDJCAHB-PBCZWWQYSA-N 0.000 description 1
- HCZQKHSRYHCPSD-IUKAMOBKSA-N Asn-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HCZQKHSRYHCPSD-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- MYRLSKYSMXNLLA-LAEOZQHASA-N Asn-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MYRLSKYSMXNLLA-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- KIJLEFNHWSXHRU-NUMRIWBASA-N Asp-Gln-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KIJLEFNHWSXHRU-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- DTNUIAJCPRMNBT-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DTNUIAJCPRMNBT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- CMCIMCAQIULNDJ-CIUDSAMLSA-N Asp-His-Cys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N CMCIMCAQIULNDJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MYLZFUMPZCPJCJ-NHCYSSNCSA-N Asp-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MYLZFUMPZCPJCJ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- MGSVBZIBCCKGCY-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MGSVBZIBCCKGCY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- KBJVTFWQWXCYCQ-IUKAMOBKSA-N Asp-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KBJVTFWQWXCYCQ-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- BYLPQJAWXJWUCJ-YDHLFZDLSA-N Asp-Tyr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O BYLPQJAWXJWUCJ-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- GIKOVDMXBAFXDF-NHCYSSNCSA-N Asp-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GIKOVDMXBAFXDF-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- QOJJMJKTMKNFEF-ZKWXMUAHSA-N Asp-Val-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O QOJJMJKTMKNFEF-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 241000589154 Azotobacter group Species 0.000 description 1
- 241001112741 Bacillaceae Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 1
- 241000397426 Centroberyx lineatus Species 0.000 description 1
- 241000395942 Chironius laurenti Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001124134 Chrysomelidae Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 241000605716 Desulfovibrio Species 0.000 description 1
- 241000489975 Diabrotica Species 0.000 description 1
- 241000489972 Diabrotica barberi Species 0.000 description 1
- 241000489973 Diabrotica undecimpunctata Species 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 1
- 101150082479 GAL gene Proteins 0.000 description 1
- YJIUYQKQBBQYHZ-ACZMJKKPSA-N Gln-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YJIUYQKQBBQYHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- JHPFPROFOAJRFN-IHRRRGAJSA-N Gln-Glu-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O JHPFPROFOAJRFN-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- YRWWJCDWLVXTHN-LAEOZQHASA-N Gln-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N YRWWJCDWLVXTHN-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- JKGHMESJHRTHIC-SIUGBPQLSA-N Gln-Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N JKGHMESJHRTHIC-SIUGBPQLSA-N 0.000 description 1
- ZBKUIQNCRIYVGH-SDDRHHMPSA-N Gln-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N ZBKUIQNCRIYVGH-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- JNENSVNAUWONEZ-GUBZILKMSA-N Gln-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JNENSVNAUWONEZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LURQDGKYBFWWJA-MNXVOIDGSA-N Gln-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N LURQDGKYBFWWJA-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- WPJDPEOQUIXXOY-AVGNSLFASA-N Gln-Tyr-Asn Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O WPJDPEOQUIXXOY-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- JTWZNMUVQWWGOX-SOUVJXGZSA-N Gln-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)C(=O)O JTWZNMUVQWWGOX-SOUVJXGZSA-N 0.000 description 1
- HPBKQFJXDUVNQV-FHWLQOOXSA-N Gln-Tyr-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O HPBKQFJXDUVNQV-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MXOODARRORARSU-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Ser Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N MXOODARRORARSU-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- CKOFNWCLWRYUHK-XHNCKOQMSA-N Glu-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O CKOFNWCLWRYUHK-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- BCYGDJXHAGZNPQ-DCAQKATOSA-N Glu-Lys-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BCYGDJXHAGZNPQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SUIAHERNFYRBDZ-GVXVVHGQSA-N Glu-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SUIAHERNFYRBDZ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- FGSGPLRPQCZBSQ-AVGNSLFASA-N Glu-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FGSGPLRPQCZBSQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- TZXOPHFCAATANZ-QEJZJMRPSA-N Glu-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N TZXOPHFCAATANZ-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- OCQUNKSFDYDXBG-QXEWZRGKSA-N Gly-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N OCQUNKSFDYDXBG-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- XBWMTPAIUQIWKA-BYULHYEWSA-N Gly-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CN XBWMTPAIUQIWKA-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- FZQLXNIMCPJVJE-YUMQZZPRSA-N Gly-Asp-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FZQLXNIMCPJVJE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PMNHJLASAAWELO-FOHZUACHSA-N Gly-Asp-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PMNHJLASAAWELO-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- SOEATRRYCIPEHA-BQBZGAKWSA-N Gly-Glu-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SOEATRRYCIPEHA-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- YTSVAIMKVLZUDU-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YTSVAIMKVLZUDU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IEGFSKKANYKBDU-QWHCGFSZSA-N Gly-Phe-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)NC(=O)CN)C(=O)O IEGFSKKANYKBDU-QWHCGFSZSA-N 0.000 description 1
- JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Arg Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N Gly-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- NGBGZCUWFVVJKC-IRXDYDNUSA-N Gly-Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 NGBGZCUWFVVJKC-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- 241000190714 Gymnosporangium clavipes Species 0.000 description 1
- VHHYJBSXXMPQGZ-AVGNSLFASA-N His-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N VHHYJBSXXMPQGZ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- PLCAEMGSYOYIPP-GUBZILKMSA-N His-Ser-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 PLCAEMGSYOYIPP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- FCPSGEVYIVXPPO-QTKMDUPCSA-N His-Thr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FCPSGEVYIVXPPO-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- 241001652646 Idia laurenti Species 0.000 description 1
- JRHFQUPIZOYKQP-KBIXCLLPSA-N Ile-Ala-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O JRHFQUPIZOYKQP-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- FJWYJQRCVNGEAQ-ZPFDUUQYSA-N Ile-Asn-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N FJWYJQRCVNGEAQ-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- OONBGFHNQVSUBF-KBIXCLLPSA-N Ile-Gln-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OONBGFHNQVSUBF-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- BALLIXFZYSECCF-QEWYBTABSA-N Ile-Gln-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N BALLIXFZYSECCF-QEWYBTABSA-N 0.000 description 1
- BEWFWZRGBDVXRP-PEFMBERDSA-N Ile-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BEWFWZRGBDVXRP-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- AXNGDPAKKCEKGY-QPHKQPEJSA-N Ile-Ile-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N AXNGDPAKKCEKGY-QPHKQPEJSA-N 0.000 description 1
- MLSUZXHSNRBDCI-CYDGBPFRSA-N Ile-Pro-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N MLSUZXHSNRBDCI-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- ZLFNNVATRMCAKN-ZKWXMUAHSA-N Ile-Ser-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)O)N ZLFNNVATRMCAKN-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- NAFIFZNBSPWYOO-RWRJDSDZSA-N Ile-Thr-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N NAFIFZNBSPWYOO-RWRJDSDZSA-N 0.000 description 1
- WXLYNEHOGRYNFU-URLPEUOOSA-N Ile-Thr-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N WXLYNEHOGRYNFU-URLPEUOOSA-N 0.000 description 1
- KXUKTDGKLAOCQK-LSJOCFKGSA-N Ile-Val-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O KXUKTDGKLAOCQK-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- 241000283160 Inia Species 0.000 description 1
- 240000007049 Juglans regia Species 0.000 description 1
- 235000009496 Juglans regia Nutrition 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000258915 Leptinotarsa Species 0.000 description 1
- KSZCCRIGNVSHFH-UWVGGRQHSA-N Leu-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O KSZCCRIGNVSHFH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- DLCXCECTCPKKCD-GUBZILKMSA-N Leu-Gln-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DLCXCECTCPKKCD-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- DPWGZWUMUUJQDT-IUCAKERBSA-N Leu-Gln-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O DPWGZWUMUUJQDT-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N Leu-Gly-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- VZBIUJURDLFFOE-IHRRRGAJSA-N Leu-His-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O VZBIUJURDLFFOE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- DBSLVQBXKVKDKJ-BJDJZHNGSA-N Leu-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DBSLVQBXKVKDKJ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- WXZOHBVPVKABQN-DCAQKATOSA-N Leu-Met-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N WXZOHBVPVKABQN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZAVCJRJOQKIOJW-KKUMJFAQSA-N Leu-Phe-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZAVCJRJOQKIOJW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N Leu-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N Leu-Phe-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N Leu-Ser-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- XOWMDXHFSBCAKQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C XOWMDXHFSBCAKQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZDJQVSIPFLMNOX-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N ZDJQVSIPFLMNOX-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- HGLKOTPFWOMPOB-MEYUZBJRSA-N Leu-Thr-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HGLKOTPFWOMPOB-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- ISSAURVGLGAPDK-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ISSAURVGLGAPDK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N Leu-Tyr-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- VHXMZJGOKIMETG-CQDKDKBSSA-N Lys-Ala-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N VHXMZJGOKIMETG-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- ALSRJRIWBNENFY-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ALSRJRIWBNENFY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HKCCVDWHHTVVPN-CIUDSAMLSA-N Lys-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HKCCVDWHHTVVPN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N Lys-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- DTUZCYRNEJDKSR-NHCYSSNCSA-N Lys-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN DTUZCYRNEJDKSR-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- QBEPTBMRQALPEV-MNXVOIDGSA-N Lys-Ile-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QBEPTBMRQALPEV-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- OVAOHZIOUBEQCJ-IHRRRGAJSA-N Lys-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O OVAOHZIOUBEQCJ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- ONPDTSFZAIWMDI-AVGNSLFASA-N Lys-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ONPDTSFZAIWMDI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N Lys-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- MSSABBQOBUZFKZ-IHRRRGAJSA-N Lys-Pro-His Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O MSSABBQOBUZFKZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QVTDVTONTRSQMF-WDCWCFNPSA-N Lys-Thr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QVTDVTONTRSQMF-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N Lys-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- 101710132699 Lysozyme 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100026848 Lysozyme-like protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000215495 Massilia timonae Species 0.000 description 1
- IHITVQKJXQQGLJ-LPEHRKFASA-N Met-Asn-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N IHITVQKJXQQGLJ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- UJDMTKHGWSBHBX-IHRRRGAJSA-N Met-Cys-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 UJDMTKHGWSBHBX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- UOENBSHXYCHSAU-YUMQZZPRSA-N Met-Gln-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O UOENBSHXYCHSAU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JHDNAOVJJQSMMM-GMOBBJLQSA-N Met-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N JHDNAOVJJQSMMM-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- 101100412856 Mus musculus Rhod gene Proteins 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 241000605159 Nitrobacter Species 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- HHOOEUSPFGPZFP-QWRGUYRKSA-N Phe-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O HHOOEUSPFGPZFP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- LXVFHIBXOWJTKZ-BZSNNMDCSA-N Phe-Asn-Tyr Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O LXVFHIBXOWJTKZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- WIVCOAKLPICYGY-KKUMJFAQSA-N Phe-Asp-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N WIVCOAKLPICYGY-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- IDUCUXTUHHIQIP-SOUVJXGZSA-N Phe-Gln-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)O IDUCUXTUHHIQIP-SOUVJXGZSA-N 0.000 description 1
- NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N Phe-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- XMQSOOJRRVEHRO-ULQDDVLXSA-N Phe-Leu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 XMQSOOJRRVEHRO-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- CMHTUJQZQXFNTQ-OEAJRASXSA-N Phe-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O CMHTUJQZQXFNTQ-OEAJRASXSA-N 0.000 description 1
- RTUWVJVJSMOGPL-KKUMJFAQSA-N Phe-Met-Glu Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N RTUWVJVJSMOGPL-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- OWSLLRKCHLTUND-BZSNNMDCSA-N Phe-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N OWSLLRKCHLTUND-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- YMIZSYUAZJSOFL-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YMIZSYUAZJSOFL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HBXAOEBRGLCLIW-AVGNSLFASA-N Phe-Ser-Gln Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N HBXAOEBRGLCLIW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- IAOZOFPONWDXNT-IXOXFDKPSA-N Phe-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IAOZOFPONWDXNT-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- BSKMOCNNLNDIMU-CDMKHQONSA-N Phe-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O BSKMOCNNLNDIMU-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- DBNGDEAQXGFGRA-ACRUOGEOSA-N Phe-Tyr-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N DBNGDEAQXGFGRA-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N Phe-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)O MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 1
- 241000607568 Photobacterium Species 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- TXPUNZXZDVJUJQ-LPEHRKFASA-N Pro-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O TXPUNZXZDVJUJQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- UEHYFUCOGHWASA-HJGDQZAQSA-N Pro-Glu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 UEHYFUCOGHWASA-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N Pro-Leu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- VGVCNKSUVSZEIE-IHRRRGAJSA-N Pro-Phe-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O VGVCNKSUVSZEIE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- JIWJRKNYLSHONY-KKUMJFAQSA-N Pro-Phe-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JIWJRKNYLSHONY-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- POQFNPILEQEODH-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ala Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O POQFNPILEQEODH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- JXVXYRZQIUPYSA-NHCYSSNCSA-N Pro-Val-Gln Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O JXVXYRZQIUPYSA-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- FIODMZKLZFLYQP-GUBZILKMSA-N Pro-Val-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FIODMZKLZFLYQP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000947836 Pseudomonadaceae Species 0.000 description 1
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 1
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N Purine Natural products N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000191043 Rhodobacter sphaeroides Species 0.000 description 1
- 241000223253 Rhodotorula glutinis Species 0.000 description 1
- 241000752065 Rhyzobius Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000235346 Schizosaccharomyces Species 0.000 description 1
- 241001479507 Senecio odorus Species 0.000 description 1
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- BTKUIVBNGBFTTP-WHFBIAKZSA-N Ser-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O BTKUIVBNGBFTTP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N Ser-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FCRMLGJMPXCAHD-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O FCRMLGJMPXCAHD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HQTKVSCNCDLXSX-BQBZGAKWSA-N Ser-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O HQTKVSCNCDLXSX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- UBRXAVQWXOWRSJ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Asp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N UBRXAVQWXOWRSJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- UICKAKRRRBTILH-GUBZILKMSA-N Ser-Glu-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N UICKAKRRRBTILH-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XXXAXOWMBOKTRN-XPUUQOCRSA-N Ser-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XXXAXOWMBOKTRN-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- YZMPDHTZJJCGEI-BQBZGAKWSA-N Ser-His Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 YZMPDHTZJJCGEI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- BKZYBLLIBOBOOW-GHCJXIJMSA-N Ser-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BKZYBLLIBOBOOW-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- IFPBAGJBHSNYPR-ZKWXMUAHSA-N Ser-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O IFPBAGJBHSNYPR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- CRJZZXMAADSBBQ-SRVKXCTJSA-N Ser-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CO CRJZZXMAADSBBQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZSLFCBHEINFXRS-LPEHRKFASA-N Ser-Met-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N ZSLFCBHEINFXRS-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- NQZFFLBPNDLTPO-DLOVCJGASA-N Ser-Phe-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CO)N NQZFFLBPNDLTPO-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- QUGRFWPMPVIAPW-IHRRRGAJSA-N Ser-Pro-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QUGRFWPMPVIAPW-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- GYDFRTRSSXOZCR-ACZMJKKPSA-N Ser-Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O GYDFRTRSSXOZCR-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N Ser-Ser-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N Ser-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- RXUOAOOZIWABBW-XGEHTFHBSA-N Ser-Thr-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N RXUOAOOZIWABBW-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- UQGAAZXSCGWMFU-UBHSHLNASA-N Ser-Trp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N UQGAAZXSCGWMFU-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- UKKROEYWYIHWBD-ZKWXMUAHSA-N Ser-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O UKKROEYWYIHWBD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 1
- 241000123675 Sporobolomyces roseus Species 0.000 description 1
- WFWLQNSHRPWKFK-UHFFFAOYSA-N Tegafur Chemical compound O=C1NC(=O)C(F)=CN1C1OCCC1 WFWLQNSHRPWKFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100242191 Tetraodon nigroviridis rho gene Proteins 0.000 description 1
- 241001441724 Tetraodontidae Species 0.000 description 1
- NJEMRSFGDNECGF-GCJQMDKQSA-N Thr-Ala-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O NJEMRSFGDNECGF-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N Thr-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- YBXMGKCLOPDEKA-NUMRIWBASA-N Thr-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YBXMGKCLOPDEKA-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- JXKMXEBNZCKSDY-JIOCBJNQSA-N Thr-Asp-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O JXKMXEBNZCKSDY-JIOCBJNQSA-N 0.000 description 1
- KGKWKSSSQGGYAU-SUSMZKCASA-N Thr-Gln-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O KGKWKSSSQGGYAU-SUSMZKCASA-N 0.000 description 1
- CQNFRKAKGDSJFR-NUMRIWBASA-N Thr-Glu-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)O CQNFRKAKGDSJFR-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- QQWNRERCGGZOKG-WEDXCCLWSA-N Thr-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QQWNRERCGGZOKG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- YJCVECXVYHZOBK-KNZXXDILSA-N Thr-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N YJCVECXVYHZOBK-KNZXXDILSA-N 0.000 description 1
- IHAPJUHCZXBPHR-WZLNRYEVSA-N Thr-Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N IHAPJUHCZXBPHR-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 1
- VTVVYQOXJCZVEB-WDCWCFNPSA-N Thr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VTVVYQOXJCZVEB-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- DXPURPNJDFCKKO-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(O)=O DXPURPNJDFCKKO-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- DOBIBIXIHJKVJF-XKBZYTNZSA-N Thr-Ser-Gln Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O DOBIBIXIHJKVJF-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- CSNBWOJOEOPYIJ-UVOCVTCTSA-N Thr-Thr-Lys Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O CSNBWOJOEOPYIJ-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- LXXCHJKHJYRMIY-FQPOAREZSA-N Thr-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O LXXCHJKHJYRMIY-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- 241000006364 Torula Species 0.000 description 1
- 244000288561 Torulaspora delbrueckii Species 0.000 description 1
- 235000014681 Torulaspora delbrueckii Nutrition 0.000 description 1
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 description 1
- WVHUFSCKCBQKJW-HKUYNNGSSA-N Trp-Gly-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WVHUFSCKCBQKJW-HKUYNNGSSA-N 0.000 description 1
- NLLARHRWSFNEMH-NUTKFTJISA-N Trp-Lys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N NLLARHRWSFNEMH-NUTKFTJISA-N 0.000 description 1
- OJKVFAWXPGCJMF-BPUTZDHNSA-N Trp-Pro-Ser Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O OJKVFAWXPGCJMF-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- UJGDFQRPYGJBEH-AAEUAGOBSA-N Trp-Ser-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)O)N UJGDFQRPYGJBEH-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- MPYZGXUYLNPSNF-NAZCDGGXSA-N Trp-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N)O MPYZGXUYLNPSNF-NAZCDGGXSA-N 0.000 description 1
- LGEYOIQBBIPHQN-UWJYBYFXSA-N Tyr-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 LGEYOIQBBIPHQN-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- HSVPZJLMPLMPOX-BPNCWPANSA-N Tyr-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HSVPZJLMPLMPOX-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- JRXKIVGWMMIIOF-YDHLFZDLSA-N Tyr-Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N JRXKIVGWMMIIOF-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- VFJIWSJKZJTQII-SRVKXCTJSA-N Tyr-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VFJIWSJKZJTQII-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UNUZEBFXGWVAOP-DZKIICNBSA-N Tyr-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UNUZEBFXGWVAOP-DZKIICNBSA-N 0.000 description 1
- CDHQEOXPWBDFPL-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gly-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CDHQEOXPWBDFPL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- QAYSODICXVZUIA-WLTAIBSBSA-N Tyr-Gly-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QAYSODICXVZUIA-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 1
- PJWCWGXAVIVXQC-STECZYCISA-N Tyr-Ile-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PJWCWGXAVIVXQC-STECZYCISA-N 0.000 description 1
- KIJLSRYAUGGZIN-CFMVVWHZSA-N Tyr-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KIJLSRYAUGGZIN-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 1
- JLKVWTICWVWGSK-JYJNAYRXSA-N Tyr-Lys-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 JLKVWTICWVWGSK-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- IEWKKXZRJLTIOV-AVGNSLFASA-N Tyr-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O IEWKKXZRJLTIOV-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 241001106462 Ulmus Species 0.000 description 1
- UEOOXDLMQZBPFR-ZKWXMUAHSA-N Val-Ala-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N UEOOXDLMQZBPFR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- BYOHPUZJVXWHAE-BYULHYEWSA-N Val-Asn-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N BYOHPUZJVXWHAE-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- QGFPYRPIUXBYGR-YDHLFZDLSA-N Val-Asn-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N QGFPYRPIUXBYGR-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N Val-Glu-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N Val-Gly-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- WNZSAUMKZQXHNC-UKJIMTQDSA-N Val-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N WNZSAUMKZQXHNC-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 1
- AGXGCFSECFQMKB-NHCYSSNCSA-N Val-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N AGXGCFSECFQMKB-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N Val-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- PHZGFLFMGLXCFG-FHWLQOOXSA-N Val-Lys-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N PHZGFLFMGLXCFG-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- MIKHIIQMRFYVOR-RCWTZXSCSA-N Val-Pro-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C(C)C)N)O MIKHIIQMRFYVOR-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- DVLWZWNAQUBZBC-ZNSHCXBVSA-N Val-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O DVLWZWNAQUBZBC-ZNSHCXBVSA-N 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241001143315 Xanthogaleruca luteola Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 150000001409 amidines Chemical class 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940051881 anilide analgesics and antipyretics Drugs 0.000 description 1
- 150000003931 anilides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960005475 antiinfective agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 description 1
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000012320 chlorinating reagent Substances 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- GRWZHXKQBITJKP-UHFFFAOYSA-L dithionite(2-) Chemical compound [O-]S(=O)S([O-])=O GRWZHXKQBITJKP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 239000004495 emulsifiable concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- YMTINGFKWWXKFG-UHFFFAOYSA-N fenofibrate Chemical group C1=CC(OC(C)(C)C(=O)OC(C)C)=CC=C1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 YMTINGFKWWXKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000012869 germination medium Substances 0.000 description 1
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010057083 glutamyl-aspartyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010013768 glutamyl-aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-prolyl-L-arginine Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010027668 glycyl-alanyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010025801 glycyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 108010045126 glycyl-tyrosyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000012336 iodinating agent Substances 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010044348 lysyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001473 noxious effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000019645 odor Nutrition 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052615 phyllosilicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- IGFXRKMLLMBKSA-UHFFFAOYSA-N purine Chemical compound N1=C[N]C2=NC=NC2=C1 IGFXRKMLLMBKSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 1
- WKEDVNSFRWHDNR-UHFFFAOYSA-N salicylanilide Chemical compound OC1=CC=CC=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 WKEDVNSFRWHDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950000975 salicylanilide Drugs 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M sodium perchlorate Chemical compound [Na+].[O-]Cl(=O)(=O)=O BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910001488 sodium perchlorate Inorganic materials 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- UMFCIIBZHQXRCJ-NSCUHMNNSA-N trans-anol Chemical compound C\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 UMFCIIBZHQXRCJ-NSCUHMNNSA-N 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- WRTMQOHKMFDUKX-UHFFFAOYSA-N triiodide Chemical compound I[I-]I WRTMQOHKMFDUKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150035767 trp gene Proteins 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010077037 tyrosyl-tyrosyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 235000020234 walnut Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000004563 wettable powder Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
- Y10S435/876—Pseudomonas fluorescens
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、殺虫性ポリペプチ
ド及びその製造方法に関する。 【０００２】 【先行技術及び課題】胞子形成微生物のバシラス・スリ
ンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅ
ｎｓｉｓ，Ｂｔ）は、最もよく知られた昆虫毒素をつく
る。この毒素は、δ−エンドトキシンと指定された蛋白
質である。これはＢｔの胞子形成細胞によって合成され
る。感受性のある昆虫の幼虫が毒素の結晶型を摂取する
と、毒素は昆虫の腸液プロテアーゼにより生物学的活性
のある部分に転化される。主要標的は昆虫の腸上皮細胞
であって、これが急激に破壊される。Ｂｔ毒素の活性は
非常に高く、感受性のある幼虫を殺すのにナノグラム単
位の量しか必要でないことが経験からわかっている。 【０００３】Ｂｔの報告された活性範囲は、農林業で大
きな問題となっている昆虫である鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏ
ｐｕｔｅｒａ）の範囲内の昆虫種を包含する。活性範囲
はまた双し類（Ｄｉｐｔｅｒａ）の昆虫も包含する。こ
れには蚊とブヨ（ｂｌａｃｋｆｌｙ）の幾つかの種が含
まれる。コーチ・ティー・エル（Ｃｏｕｃｈ，Ｔ．
Ｌ．）（１９８０年）「バシラス・スリンギエンシス・
バラエティ・イスラエレンシスの蚊病源性」Ｄｅｖｅｌ
ｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｌｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２２巻６１−６７頁；ビーグル・
シー・シー（Ｂｅｅｇｌｅ，Ｃ．Ｃ．）（１９７８年）
「農業生態系における昆虫性細菌の利用」Ｄｅｖｅｌｏ
ｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｌｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０巻９７−１０４頁を参照のこ
と。 【０００４】クリーグ（Ｋｒｅｉｇ）ら（Ｚ．ａｎｇ．
Ｅｎｔ．（１９８３年）９６巻５００−５０８頁）はバ
シラス・スリンギエンシス・バラエティ・テネブリオニ
ス（Ｂ．ｔｈｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｖａｒ．ｔｅｎｅｂ
ｒｉｏｎｉｓ）と名付けられたＢｔ分離体について記述
しているが、これは鞘翅目の２種類の甲虫に対して活性
があると言われている。これらはコロラド・ポテト・ビ
ートルのレプチノタルサ・デセムリネアータ（Ｌｅｐｔ
ｉｎｏｔａｒｓａ ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ）とアゲ
ラスチカ・アルニ（Ａｇｅｌａｓｔｉｃａ ａｌｎｉ）
である。このような活性をもつと報告された既知のＢｔ
分離体はこれだけである。すでに確認されたＢｔ菌株は
すべて、いも虫（鱗翅類）やハエの幼虫（双翅類）に対
して活性をもつものであった。 【０００５】クリーグらのＢｔ分離体は、本発明の新規
なＢｔ遺伝子源として使用されるＢｔ分離体との並行比
較のため入手できない。従って、クリーグらのＢｔ分離
体が公衆の手に入らない以上、クリーグらの公告は合衆
国法の下で法的に有効な特許法の参照ではない。 【０００６】 【課題を解決するための手段】鞘翅目の甲虫に有毒な毒
素遺伝子のクローン化及び発現が明らかにされ、特許請
求されている。クローン化された遺伝子でつくられる毒
素は、鞘翅目の甲虫に対して活性があるが、トリコプル
シア・ニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ）、スポド
プテラ・エクシグア（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇ
ｕａ）、又はネッタイシマ蚊（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐ
ｔｉ）に対しては活性がない。鞘翅目に含まれるものと
して、農業上大きな損害をもたらす種々のディアブロテ
ィカ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ）種（ハムシ科Ｃｈｒｙｓ
ｏｍｅｌｉｄａｅ）がある。 【０００７】例えば、ディー・ウンデシムプンクタータ
（Ｄ．ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ）（西部班点ウ
リハムシ）、ディー・ロンギコーニス（Ｄ．ｌｏｎｇｉ
ｃｏｒｎｉｓ）（ノーザン・コーン・ルートワーム）、
ディー・バージテラ（Ｄ．ｖｉｒｇｉｔｅｒａ）（ウエ
スタン・コーン・ルートワーム）、及びディー・ウンデ
シムプンクタータ・ハワーディ（Ｄ．ｕｎｄｅｃｉｍｐ
ｕｎｃｔａｔａ ｈｏｗａｒｄｉ）（サザン・コール・
ルートワーム）がある。 【０００８】「Ｍ−７」で指定される本発明の毒素遺伝
子給源として使用されるバシラス・スリンギエンシス分
離体は、独特のパラ胞子体（結晶）をもつ点で異例であ
る。これは位相差顕微鏡下に外観が暗色で、平らな角型
の外形を呈する。現在バシラス・スリンギエンシス菌株
サンディエゴ（Ｂ．ｔ．ｓｄ）として知られるバシラス
・スリンギエンシスＭ−７の二次培養基は、１９８５年
２月２７日、合衆国イリノイ州ピオリア、合衆国農務
省、北部研究所の永久保存施設に寄託された。 【０００９】培養基は、保存施設からＮＲＲＬ Ｂ−１
５９３９の寄託番号を指定された。この寄託物は、これ
を開示した特許の授与により一般に入手できる。寄託物
はまた、本出願又はその後代の対応出願がなされている
国の外国特許法での要求に応じて入手できる。しかし、
寄託物が入手できるからといって、政府決定によって授
与される特許権を侵害してまで、本発明の実施権を構成
するものではないことを了解されたい。 【００１０】バシラス・スリンギエンシス菌株サンディ
エゴ、ＮＲＲＬ Ｂ−１５９３９はこの技術の標準的な
培地及び醗酵手法を使用して培養できる。醗酵周期の完
了後、この技術に周知の手段により、まずＢｔ胞子と結
晶を醗酵液から分離することによって、細菌を収穫でき
る。細胞からのＤＮＡ（染色体とプラスミド）を標準手
順によって単離し、この技術で周知の手順によって精製
できる。例えば、このような標準手順はマニアティス
（Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら、分子クローン化（１９８２
年）、コールドスプリングハーバー研究所、に明らかに
されている。精製ＤＮＡを次に適当な制限エンドヌクレ
アーゼで消化させることができる。 【００１１】次にＢ．ｔ．ｓｄ ＤＮＡのジーンバンク
を構築することができる。本発明では、上記のように得
られる精製Ｂ．ｔ．ｓｄ ＤＮＡを制限エンドヌクレア
ーゼＢａｍＨＩで消化させ、周知の入手できるプラスミ
ドｐＢＲ３２２のＢａｍＨＩ位置へクローン化した。
Ｂ．ｔ．ｓｄのＤＮＡのジーンバンクが構築されたら、
次にこのジーンバンクを選別するためにＤＮＡプローブ
を構築する必要がある。この臨床的ＤＮＡプローブの構
築は、Ｂ．ｔ．ｓｄ培養基からＭ−７毒素結晶を単離す
ることによって開始された。 【００１２】回収されたＭ−７毒素結晶を標準手順によ
って精製し、次にトリプシンで消化させるとペプチド断
片がつくられる。これらのトリプシン性の断片の幾つか
のもののアミノ酸配列は標準手順によって決定された。
続いて、ある配列の選択後、プローブを既知手段により
化学的に合成した。生ずるプローブに標識を付け、この
技術で知られた手順によって交雑（ハイブリダイゼーシ
ョン）させた。その結果、陽性クローン、すなわち構築
されたプローブへ交雑したものが検出された。 【００１３】陽性クローンの代表を、標準手順によって
開発されたうさぎの抗Ｍ−７結晶抗血清を使用してウエ
スタン・ブロットにかけた。Ｍ−７毒素のクローン化と
発現は、陽性クローン及びＭ−７毒素結晶に対する抗体
で陽性反応が見られた時に、成功の確認が得られた。代
表的な陽性クローンから単離された組替えプラスミド
は、ＢａｍＨＩ位置へ挿入された５．８kb ＤＮＡ断片
をもつことがわかった。この５．８kb ＤＮＡ断片は、
ＢａｍＨＩによって代表的陽性クローン（ｐＣＨ−Ｂ
３）から切断、精製され、次に既知の入手できるプラス
ミドｐＲＯ１６１４のＢａｍＨＩ位置へ二次クローン化
された（Ｊ．Ｂａｃｔ．〔１９８２年〕１５０巻６０
頁；合衆国特許第４，３７４，２００号）。 【００１４】プラスミドｐＲＯ１６１４は、下記の住所
の北部研究所から入手でき、その寄託番号はＮＲＲＬ
Ｂ−１２１２７である。プラスミドはｐＢＲ３２２から
誘導され、特異なＨｉｎｄIII ，ＢａｍＨＩ，Ｓａｌ
Ｉ、及びＰｖｕII制限位置をもつ。ＰｓｔＩ挿入物はカ
ルベニシリン抵抗遺伝子と緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎ
ｏｓａ）複製系を包含している。シュードモナス・フル
オレッセンスはこの構築されたシャトルベクターによっ
て形質転換され、Ｍ−７毒素の発現はウエスタン・ブロ
ットでの確認により証明された。 【００１５】プラスミドｐＣＨ−Ｂ３、又は５．８kbの
断片挿入物をもつプラスミドｐＲＯ１６１４は、周知の
手順、例えば透明溶菌液−密度勾配平衡手順を使用し
て、細菌宿主から回収できる。所望によりＢａｍ−ＨＩ
での消化により、５．８kb断片をｐＲＯ１６１４から切
り取り、別の宿主への形質転換のため異なるベクターへ
クローン化できる。これらの手順はいずれも当業者に周
知である。 【００１６】大腸菌宿主中のプラスミドｐＣＨ−Ｂ３
は、６１６０４イリノイ州ピオリア、北部研究センタ
ー、培養基保存研究／醗酵研究所、ＡＲＳ特許保存施設
に寄託された。寄託物は、同施設の手で少なくとも３０
年間、永久保存施設内に保存される。寄託は１９８５年
７月１８日に行なわれ、ＮＲＲＬ Ｂ−１５９８１の寄
託番号を付された。二次培養基は、寄託物を明らかにし
た特許の授与により、一般に入手できる。寄託物はま
た、本出願又はその後代の対応出願がなされている国の
外国特許法での要求に応じて入手できる。しかし、寄託
物が入手できるからといって、政府決定によって授与さ
れる特許権を侵害してまで、本発明の実施権を構成する
ものではないことを了解されたい。 【００１７】本発明の毒素遺伝子は、広範囲の微生物宿
主中に導入できる。毒素遺伝子（Ｍ−７）の発現の結
果、直接又は間接的に殺虫剤が細胞内に生産され、維持
される。適当な宿主、例えばシュードモナスの場合、鞘
翅目の甲虫が生息する場所に微生物を施用すると、これ
らは増殖し、感受性のある甲虫に摂取される。その結
果、望んでいない甲虫が防除される。その代りに、毒素
Ｍ−７遺伝子の宿主となった微生物を、細胞内につくら
れる毒素の活性を持続させるような条件下に処理でき
る。次に処理細胞を目標害虫の環境に施用できる。生ず
る生成物は、Ｍ−７毒素の毒性を保持している。 【００１８】Ｍ−７毒素遺伝子を適当なベクター経由で
微生物宿主に導入し、宿主を生きた状態で環境に施用す
る場合、ある宿主微生物を使用することが必須である。
選択されるのは、対象となる一つ以上の作物の「植物領
域」（＝フィトスフェア）（葉面＝フィロプレイン、葉
周辺＝フィロスフェア、根周辺＝リゾスフェア、及び／
又は根表面＝リゾプレイン）を占めることがわかってい
る微生物宿主である。これらの微生物は、特定環境（作
物と他の昆虫の生息環境）で野性型微生物と順調に競合
でき、ポリペプチド殺虫剤を発現する遺伝子の安定な維
持と発現をもたらし、また望ましくは環境上の劣化や不
活性化からの殺虫剤の改良された保護を提供するような
ものが選択される。 【００１９】広範囲の重要作物の葉面や根周辺に生息す
る微生物は、多数知られている。これらの微生物は細
菌、藻類、及びカビを包含する。特に興味ある微生物は
次のようなものである。細菌では、属名でシュードモナ
ス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、エルウィニア（Ｅｒｗ
ｉｎｉａ）、セラティア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、キサン
トモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）、ストレプトミセ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、リゾビウム（Ｒｈｉ
ｚｏｂｉｕｍ）、ロードシュードモナス（Ｒｈｏｄｏｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、アグロバクテリウム（Ａｇｒ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、アセトバクター（Ａｃｅｔｏ
ｂａｃｔｅｒ）、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ）、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔ
ｅｒ）、アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）、
リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、及び
アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）。 【００２０】カビ、特に酵母では、属名でサッカロミセ
ス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、クリプトコッカス
（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、クルイベロミセス（Ｋ
ｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、スポロボロミセス（Ｓｐ
ｏｒｏｂｏｒｏｍｙｃｅｓ）、ロードトルラ（Ｒｈｏｄ
ｏｔｏｒｕｌａ）、及びアウレオバシジウム（Ａｕｒｅ
ｏｂａｓｉｄｉｕｍ）。 【００２１】特に興味あるのは、次のような植物領域細
菌種である。シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ）、シュードモナス・
フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏ
ｒｅｓｃｅｎｓ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒ
ａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、アセトバクター・
キシリヌム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌｉｎｕ
ｍ）、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、ロ
ードシュードモナス・スフェロイデス（Ｒｈｏｄｏｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｈｅｒｏｉｄｅｓ）、キサン
トモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、リゾビウム・メリオチ（Ｒｈ
ｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｏｔｉ）、アルカリゲネス・
エントロフス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｎｔｒｏｐ
ｈｕｓ）、及びアゾトバクター・ヴィンランジイ（Ａｚ
ｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｖｉｎｌａｎｄｉｉ）。 【００２２】また、興味ある植物領域の酵母種は次のも
のである。ロードトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕ
ｌａ ｒｕｂｒａ）、Ｒ．グルチニス（Ｒ．ｇｌｕｔｉ
ｎｉｓ）、Ｒ．マリナ（Ｒ．ｍａｒｉｎａ）、Ｒ．アウ
ランチアカ（Ｒ．ａｕｒａｎｔｉａｃａ）、クリプトコ
ッカス・アルビヅス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌ
ｂｉｄｕｓ）、Ｃ．ジフルエンス（Ｃ．ｄｉｆｆｌｕｅ
ｎｓ）、Ｃ．ラウレンチイ（Ｃ．ｌａｕｒｅｎｔｉ
ｉ）、サッカロミセス・ロゼイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ ｒｏｓｅｉ）、Ｓ．プレトリエンシス（Ｓ．ｐ
ｒｅｔｏｒｉｅｎｓｉｓ）、Ｓ．セレヴィシアエ（Ｓ．
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、スポロボロミセス・ロゼウス
（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ ｒｏｓｅｕｓ）、
Ｓ．オドルス（Ｓ．ｏｄｏｒｕｓ）、クルイヴェロミセ
ス・ヴェロナエ（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｖｅｒ
ｏｎａｅ）、及びアウレオバシジウム・ポルランス（Ａ
ｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｐｏｌｌｕｌａｎｓ）。有
色素微生物が特に興味がある。 【００２３】遺伝子の安定な維持と表現を可能にするよ
うな条件下に、毒素を表現するＭ−７遺伝子を微生物宿
主中に導入するには、多様な方法が広く利用できる。例
えば、毒素遺伝子の表現のため転写及び翻訳の調節信号
を包含するＤＮＡ構築物を提供できる。また、組み込み
が起こるように、調節制御下の毒素遺伝子と、宿主生物
中の配列と相同なＤＮＡ配列とを提供できる。及び／又
は、組み込み又は安定な維持が起こるように、宿主中で
機能的な複製系を提供できる。 【００２４】転写開始信号はプロモーターと転写開始ス
タート位置を包含する。ある場合には、毒素の調節的な
発現を提供するのが望ましい。その場合、毒素の発現は
環境への放出後にのみ生ずることになる。これはオペレ
ーターで、又は微生物の物理的ないし化学的環境の変化
により誘導可能なアクチベーターやエンハンサーへの領
域結合で達成できる。例えば、感温性調節領域を使用す
ると、生物は毒素の発現なしに実験室で生育できるが、
環境への放出により発現が始まる。他の手法は毒素の発
現を抑制するような特定的な栄養培地を実験室で使用
し、環境中の栄養培地で毒素の発現が可能になる。翻訳
開始には、リボゾームの結合位置と翻訳開始コドンが存
在する。 【００２５】伝令の表現を強化するには活性オプロモー
ターを使用するか、又は伝令ＲＮＡの安定性を強化する
ような配列を使用するなど、種々の操作を利用できる。
イニシエーション領域と翻訳終了領域は、停止コード
ン、ターミネーター領域、及び任意付加的にポリアデニ
ル化信号を包含する。 【００２６】転写方向、すなわちコーディングないしセ
ンス配列の５′から３′への方向で、構築物は転写調節
域があればこれと、調節域がプロモーターの５′又は
３′のいずれかでありうる場合はプロモーター、リボゾ
ーム結合位置、イニシエーションコドン、イニシエーシ
ョンコドンと同フェイズのオープンリーディングフレー
ムをもつ構造遺伝子、停止コドン、もしあればポリアデ
ニル化信号配列、及びターミネーション領域を包含す
る。２本鎖としてのこの配列は、それ自体、微生物宿主
の形質転換のために使用できるが、通常は、マーカーに
関係するＤＮＡ配列に含まれており、その場合第二のＤ
ＮＡ配列は毒素発現構築物に加わるか、又はＤＮＡの宿
主への導入中に、別個のＤＮＡ断片として毒素発現構築
物と一緒にできる。 【００２７】マーカーとは、変更又は形質転換された宿
主の選択に用いる構造遺伝子のことである。マーカー
は、通常、選択的な利点を提供するもので、例えば、抗
生物質や重金属抵抗性などの殺生物抵抗性、栄養要求宿
主に原栄養性を与えるような相補性などを提供する。変
更宿主が選択できるだけでなく、畑で競合できるよう
に、相補性を使用するのが好ましい。構築物の開発なら
びに宿主変更のため、一つ以上のマーカーを使用でき
る。 【００２８】畑での他の野性型微生物に対する競合的な
利点を提供することによって、生物を更に変更できる。
例えば、金属キレート化剤、例えば担鉄細胞を発現する
遺伝子を、毒素発現用の構造遺伝子と共に宿主に導入で
きる。こうして、担鉄細胞の強化された発現により、毒
素生産宿主に競合的な利点が得られ、宿主が野性型微生
物と効果的に競合し、保護しようとする植物の環境に生
態的地位を安定に占めることができる。 【００２９】機能的な複製系が存在しない場合、構築物
は宿主中の配列と相同な、少なくとも５０bp、好ましく
は少なくとも約１００bp、及び通常約１０００bpまでの
配列をも包含する。こうすると、正当な組替えの確率が
強化されるため、遺伝子が宿主中に組み込まれ、宿主に
よって安定に維持される。毒素遺伝子が、相補性を提供
する遺伝子や競合的利点を提供する遺伝子と近接してい
ることが望ましい。従って、毒素遺伝子が失われるよう
な場合は、生ずる生物は相補性の遺伝子や競合的利点を
提供する遺伝子も失う可能性があり、このため無傷の構
築物を保持している遺伝子と環境中で競合できなくな
る。 【００３０】細菌、バクテリオファージ、シアノ細菌、
藻類、カビ等のような広範囲の微生物宿主から、多数の
転写調節域が入手できる。種々の転写調節域は、ｔｒｐ
遺伝子、ｌａｃ遺伝子、ｇａｌ遺伝子、ラムダ左右プロ
モーター、Ｔａｃプロモーター、宿主中で機能的な場
合、毒素遺伝子と関連した天然に生ずるプロモーターを
包含する。例として、合衆国特許第４，３３２，８９８
号、第４，３４２，８３２号、及び第４，３５６，２７
０号を参照のこと。終了域は、転写開始域と通常関連し
た終了域か、又は二つの領域が宿主中で両立し機能的で
ある限り、異なる転写開始域と関連する終了域でもよ
い。 【００３１】安定なエピゾームの維持又は組み込みを望
んでいる場合は、宿主中で機能的な複製系をもつプラス
ミドが使用されよう。複製系は、染色体、宿主又は別の
宿主中に通常存在するエピソーム要素、又は宿主中で安
定なウィルスからの複製系から誘導される。プラスミド
は、ｐＢＲ３２２，ｐＡＣＹＣ１８４，ＲＳＦ１０１
０，ｐＲＯ１６１４等多数が利用できる。例として、オ
ルソン（Ｏｌｓｏｎ）ら（１９８２年）Ｊ．Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ．１５０巻６０６９頁、及びバグダサリアン
（Ｂａｇｄａｓａｒｉａｎ）ら、（１９８１年）Ｇｅｎ
ｅ １６巻２３７頁、及び合衆国特許第４，３５６，２
７０号、第４，３６２，８１７号、及び第４，３７１，
６２５号を参照のこと。 【００３２】Ｍ−７遺伝子は、開始域の調節制御下に置
かれるように、転写・翻訳開始域と転写・翻訳終了域と
の間に導入できる。この構築物はプラスミド中に含まれ
るものであって、プラスミドは少なくとも一つの複製系
を包含するが、プラスミド開発中のクローン化に一つの
複製系を使用し、最終宿主中での機能化に第二の複製系
が必要な場合は、一つ以上の複製系を包含できる。更
に、すでに述べた一つ以上のマーカーが存在しうる。組
み込みを望んでいる場合は、プラスミドが宿主ゲノムと
相同の配列を包含するのが望ましい。 【００３３】形質転換体は、慣用方法に従って単離でき
る。通常、選択的手法を使用し、望んでいる生物を未変
更生物から選び出し、存在していれば、これを移し替え
る。次に形質転換体の殺虫活性を試験できる。好ましい
宿主、特に植物領域（フィトスフェア）中のものは、宿
主中で毒素の環境的安定性を強めるようなある特性をも
っていよう。保護的性質は、低水準の蛋白分解的劣化、
厚い細胞壁、色素保有等を包含する。宿主向けに興味あ
る他の性質は、葉親和性、対哺乳類毒性の欠如、摂取害
虫への誘引力、取扱いと保存の容易さ、畑での増殖速
度、競合性等を包含する。 【００３４】畑施用においては、形質転換体菌株は、害
虫から保護しようとする植物の根周辺や葉面のような、
害虫の自然な生息環境に施用されよう。形質転換体菌株
は、Ｍ−７毒素を生産しつつ、その自然な生息環境中で
生育し、Ｍ−７毒素は幼虫又は成虫に吸収及び／又は摂
取されるか、卵に有毒な効果をもつであろう。微生物の
持続性が植生の長期保護をもたらすが、時どき投与を繰
り返す必要があるかもしれない。生物は、噴霧、浸漬、
地中への注入、種子被覆、苗木被覆又は噴霧等によって
施用できる。畑への投与の場合、生物濃度は、一般にml
当り細胞数で１０6 ないし１０10個、ヘクタール当り施
用容量は一般に約０．１オンスないし２lb以上であろ
う。植物部分に投与される場合、生物濃度は通常、cm2
当り細胞数で１０3 ないし１０6 個であろう。 【００３５】目標害虫の環境に死菌を施用する時に細胞
中の毒素の活性を持続させるために殺虫剤含有細胞を処
理する場合は、適当な宿主細胞は原核細胞又は真核細胞
のいずれかを包含するが、通常、哺乳類のような高等生
物に有毒な物質を生産しないものに限定される。しか
し、毒素が不安定であったり、施用水準が哺乳類宿主へ
の毒性の可能性を避けられるほど十分に低い場合は、高
等生物に有害な物質をつくる生物も使用できる。宿主と
して、特に興味あるものは、原核生物と、カビのような
低級真核生物である。 【００３６】グラム陰性及びグラム陽性双方の原核生物
の例はエシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、エル
ウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌ
ａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）及びプロテ
ウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）のような腸内細菌科（Ｅｎｔｅ
ｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）；バシラス科（Ｂａｃ
ｉｌｌａｃｅａｅ）；リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕ
ｍ）のようなリゾビウム科（Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａ
ｅ）；発光細菌（ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ザ
イモモナス（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）、セラチア（Ｓｅｒ
ｒａｔｉａ）、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）、
ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）、デスルホビブリオ（Ｄｅｓ
ｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ）、スピリルム（Ｓｐｉｒｉｌｌ
ｕｍ）のようならせん菌科（Ｓｐｉｒｉｌｌａｃｅａ
ｅ）；乳酸かん菌科（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａ
ｅ）；シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）やア
セトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）のようなシュ
ードモナス科（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）；
アゾトバクター科（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒａｃｅａ
ｅ）、及びニトロバクター科（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ
ａｃｅａｅ）である。 【００３７】真核生物ではサッカロミセス（Ｓａｃｃｈ
ａｒｏｍｙｃｅｓ）とシゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚ
ｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）のような酵母を含め
た、藻菌類（Ｐｈｙｃｏｍｙｃｅｔｅｓ）と子嚢菌類
（Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ）のようなカビ類（ｆｕｎｇ
ｉ）；及びロードトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）、
アウレオバシジウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、
スポロボロミセス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ）等
のような担子菌類（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）酵
母がある。 【００３８】生産を目的として宿主細胞を選択する際に
特に興味ある性質は、宿主へのＭ−７遺伝子導入の容易
さ、表現系の入手性、表現効率、宿主中における殺虫剤
の安定性、及び補助的遺伝能力の存在を包含する。殺虫
剤ミクロカプセル用に興味ある性質は厚い細胞壁、色素
保有、及び細胞内包装又は封入体の形成のような殺虫剤
保護性；葉親和性；対哺乳類毒性の欠如；摂取害虫への
誘引力；毒素へ損害を与えない殺菌固定の容易さ等を包
含する。他の考慮としては、処方と取り扱いの容易さ、
経済性、保存安定性等がある。 【００３９】特に興味ある宿主生物は、ロードトルラ
種、アウレオバシジウム種、サッカロミセス種、及びス
ポロボロミセス種のような酵母；シュードモナス種、エ
ルウィニア種及びフラボバクテリウム種のような葉面性
の生物；又はエシェリキア種、ラクトバシラス種、バシ
ラス種等の他の生物を包含する。特定的な生物は緑膿
菌、シュードモナス・フルオレッセンス、サッカロミセ
ス・セレビシアエ、バシラス・スリンギエンシス、大腸
菌、枯草菌等を包含する。 【００４０】細胞は通常、無傷であり、殺菌時に胞子型
よりは実質的に増殖型にあるが、場合によっては胞子も
使用できる。細胞増殖を種々の方法で抑制できるが、但
しその手法が殺虫剤の性状に悪影響したり、殺虫剤を保
護する際に細胞能力を消したりしてはならない。方法と
しては、物理的処理や化学的処理、細胞の物理的性状を
変える、又は細胞の物理的性質を無傷で残すなどがあ
る。 【００４１】宿主細胞を不活性化する種々の方法は、通
常５０℃ないし７０℃の加熱；凍結；ＵＶ照射；凍結乾
燥；毒素、例えば抗生物質；フェノール類；アニリド
類、例えばカルバニリドとサリチルアニリド；ヒドロキ
シユリア；第４級類；アルコール類；抗菌染料；ＥＤＴ
Ａ及びアミジン類；ハロゲン化剤、例えば塩素化剤、臭
素化剤又はヨウ素化剤のような非特異的有機及び無機化
学物質；アルデヒド類、例えばグルタルアルデヒド又は
ホルムアルデヒド；オゾンやエチレンオキシドのような
有害ガス；過酸化物；プソラレン類；乾燥剤等。これら
を個々に、又は組合わせて使用できる。薬剤の選択は特
定殺虫剤、宿主細胞の性質、架橋剤による細胞壁の固定
及び保存のような細胞構造の変更の性質などによって変
わる。 【００４２】細胞には、概して強化された構造的安定性
があり、これが畑での環境劣化抵抗性を強化している。
殺虫剤がプロ型の場合は、目標害虫病原体による殺虫剤
のプロ型から成熟型への加工を抑制するように不活性化
方法を選択すべきである。例えばホルムアルデヒドは蛋
白質を架橋するから、プロ型ポリペプチド殺虫剤の加工
を抑制できる。不活性化又は殺菌方法は毒素の生体利用
効率又は生物活性の少なくとも実質部分を保持する。 【００４３】Ｍ−７殺虫剤遺伝子を含有する細胞宿主
は、ＤＮＡ構築物が選択的利点をもつ場合、任意好都合
な栄養培地で生育でき選択培地を与えるので、細胞の全
部又は実質的に全部がＭ−７遺伝子を保持する。次にこ
れらの細胞を慣用方法に従って取り入れることができ
る。その代りに、取り入れる前の細胞を固定することも
できる。 【００４４】毒素を含有する宿主生物の処理方法は、幾
つかの役割を果たすものとなっている。第一に、処理は
構造的一体化を強めている。第二に、蛋白分解性の劣化
に対する感受性を減らすように毒素を変更し、かつ又は
細胞中に天然に存在するプロテアーゼの蛋白分解活性を
低下させることによって、処理は毒素の強化された蛋白
分解安定性を提供できる。細胞を無傷の段階で変更する
のが好ましく、また毒素蛋白質の実質的な蓄積があった
時も変更するのが好ましい。これらの変更は、広範囲の
化学的反応性をもつ化学試薬を使用するなど、種々の方
法で達成できる。約−１０ないし６０℃の範囲の温度
で、かきまぜを加えて、又は加えずに、化学試薬を含有
する液体試薬媒体と無傷の細胞を一緒にする。反応時間
は経験的に決定でき、試薬及び反応条件により大幅に変
わる。細胞濃度は約１０2 から１０ 10の範囲にある。 【００４５】化学試薬として特に興味あるものは、ハロ
ゲン化剤、特に原子番号１７−８０のハロゲン類であ
る。更に詳しくは、温和な条件下で、望んでいる結果を
達成するのに十分な時間に、ヨウ素を使用できる。他の
適当な手法としては、ホルムアルデヒドとグルタルアル
デヒドのようなアルデヒド類での処理；塩化ゼフィラン
と塩化セチルピリジニウムのような抗感染剤；イソプロ
パノールとエタノールのようなアルコール類；ブアン固
定剤やヘリー固定剤のような種々の組織学的固定剤〔フ
マソン（Ｈｕｍａｓｏｎ）、グレッチェン・エル（Ｇｒ
ｅｔｃｈｅｎ，Ｌ．）、Ａｎｉｍａｌ Ｔｉｓｓｕｅ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（動物組織技法）、ダブリュー・
エッチ・フリーマン社、１９６７年、を参照のこと〕；
又は目標害虫環境へ細胞を施用する時に細胞中に生産さ
れる毒素の活性を持続させる物理的処理（加熱）と化学
的薬剤との組合わせがある。 【００４６】ヨウ素でのハロゲン化には、温度は一般に
約０ないし５０℃の範囲にあるが、反応は室温で都合よ
く実施できる。酸性の水性媒体、特に約０．５〜５Ｍの
範囲のカルボン酸水溶液中における０．５ないし５％の
三ヨウ素化物又はヨウ素を使用してヨウ素化を行なうの
が好都合である。酢酸を都合よく使用できるが、概して
約１−４個の炭素原子の他のカルボン酸も使用できる。
反応時間は、一般に１分未満から約２４時間、通常約１
−６時間の範囲であろう。 【００４７】ジチオナイト、チオ硫酸ナトリウムのよう
な還元剤や、畑での最終使用に適合した他の還元剤との
反応により、任意の残留ヨウ素を除去できる。更に、変
更した細胞を、当業者に周知のように、全反応媒体を除
去するための洗浄や、乾燥型での単離、典型的な粘着
剤、展着剤、及び農業用に一般に利用される助剤での処
方といった処理に、なおもかけることができる。 【００４８】特に興味あるものは、細胞壁を架橋できる
試薬である。この目的には、幾つかの試薬が知られてい
る。その処理によって、殺虫剤の安定性が強化される。
すなわち、畑条件下に殺虫剤の持続性ないし残留活性が
強化されなければならない。こうして、未処理細胞の殺
虫活性が消滅するような条件下に、処理細胞の活性は１
〜３倍長い期間にわたって持続する。 【００４９】細胞を種々の方法で処方できる。無機材料
（フィロ珪酸塩、炭酸塩、硫酸塩、燐酸塩等）や植物材
料（とうもろこし芯粉末、もみ殻、くるみ殻等）のよう
な種々の不活性材料と混合することによって、これらを
水和剤、粒剤又は粉剤として使用できる。処方剤は、展
着／粘着助剤、安定化剤、その他の殺虫添加剤、又は表
面活性剤を包含しうる。液体処方剤は、水性基盤でも非
水性でもよく、フォーム、ゲル、懸濁液、乳化出来る濃
縮物等として使用できる。成分は流動剤、表面活性剤、
乳化剤、分散剤、又は重合体を包含しうる。 【００５０】殺虫剤濃度は、特定処方剤の性質、特に処
方剤が濃厚液か直接使用のものかによって大幅に変わ
る。殺虫剤は少なくとも１重量％、及び１００重量％で
も存在しうる。乾燥処方剤は約１−９５重量％の殺虫剤
をもつが、液体処方剤は液相中に概して１−６０重量％
の固形分をもっている。概して処方剤は、mg当り約１０
2 ないし約１０4 個の細胞をもつ。これらの処方剤は、
ヘクタール当り約５０mg（液体又は固体）ないし１kg以
上の率で投与される。 【００５１】処方剤を害虫環境へ、例えば植物、土壌又
は水へ、噴霧、散布、散水等によって施用できる。以下
は、最良の態様を含めた本発明の実施手順を示す実施例
である。これらの実施例は、限定的に考えられてはなら
ない。他に注意がなければ、百分率はすべて重量、溶媒
混合物の割合はすべて容量による。 【００５２】実施例１ バシラス・スリンギエンシス菌
株サンディエゴ、ＮＲＲＬ Ｂ−１ ５９３９の培養 バシラス・スリンギエンシス菌株サンディエゴＮＲＲＬ
Ｂ−１５９３９の二次培養基又は出発培養基を使用し
て、ＬＢブロスとして知られる次の培地に摂取できる。 【００５３】 【表１】 【００５４】標準的な微生物学的手法などによって、上
の培地を接種前に滅菌し、無菌手順を用いて接種を行な
う。Ｍ−７細胞を３０℃で３−４日生育させる。詳細な
手順は以下のとおりである。無菌のＰＷＹＥ培地（水１
リットル中ペプトン５．０％、酵母エキス０．１％，Ｎ
ａＣｌ ０．５％，pH７．５に調整）を含有する一連の
１５０ml三角フラスコに、バシラス・スリンギエンシス
菌株サンディエゴ、ＮＲＲＬ Ｂ−１５９３９をペトリ
皿培養基から接種する。フラスコを回転振とう機（２０
０rpm ）上、３０℃で一夜培養する。この出発培養基か
ら、その７．５mlを用いて２リットルフラスコ中のＬＢ
ブロス３００mlに接種する。ＬＢブロスのフラスコを出
発培養基と同じ条件下に培養するが、４日後に取り入れ
る。 【００５５】上の手順は、この技術で周知の手順によ
り、大醗酵容器まで容易に規模拡大できる。上の醗酵で
得られるＢｔ胞子及び結晶を、この技術で周知の手順に
より単離できる。しばしば使用される手順は、取り入れ
た醗酵液を分離手法、例えば遠心分離にかけることであ
る。 【００５６】実施例２ Ｍ−７毒素遺伝子のクローン化
及び発現 全体のＤＮＡ（染色体ＤＮＡとプラスミド）を実施例１
のＭ−７細胞から単離し、標準手順によって精製した。
生ずる精製ＤＮＡを、供給者の指示を用いて制限エンド
ヌクレアーゼＢａｍＨＩで消化させた。消化されたＤＮ
Ａを周知のプラスミドｐＢＲ３２２のＢａｍＨＩ位置に
クローン化すると、Ｍ−７ ＤＮＡのジーンバンクが得
られた。このクローン化手順を、周知の標準的な手順に
従って行なった。 【００５７】ジーンバンクを選別するためのＤＮＡプロ
ーブは、次のように得られた。ＮＹＳＭ培地（トリプト
ン１０ｇ，ＮａＣｌ ５ｇ、酵母エキス５ｇ，ＭｇＳＯ
4 ・７Ｈ2 Ｏ ２ｇ、水１０００ml，pH７．５）中３０
℃で一夜生育させた培養基から、Ｍ−７結晶を単離し
た。精製した結晶を８Ｍ尿素、０．１Ｍグリシン、pH
８．２に溶解し、室温で一夜、トリプシンで消化させ
た。生ずるペプチド断片をＣ 4 逆相多孔カラム上で、ア
セトニトリル中０．１％トリフルオロ酢酸中の９１％溶
液Ａ（０．１％トリフルオロ酢酸水溶液）から４０％溶
液Ａまでの１８０分勾配によって分離した。幾つかのト
リプシン断片のアミノ酸配列が得られ、３２の重剰性を
もつ長さ１７塩基の混合プローブの合成に６アミノ酸の
配列を選んだ。 【００５８】ポリヌクレオチドキナーゼと〔γ−32Ｐ〕
ＡＴＰでプローブに末端標識を付け、Ｍ−７ジーンバン
ク用に構築された組替えプラスミドを含有する細菌集落
にハイブリダイズさせた。集落のフィルターは、ハナハ
ン（Ｈａｎａｈａｎ）及びメセルソン（Ｍｅｓｅｌｓｏ
ｎ）（１９８０年）Ｇｅｎｅ １０巻６３−６７頁に従
ってつくられた。陽性集落は、オートラジオグラフィに
よって確認された。七つの陽性クローン（代表としてｐ
ＣＨ−Ｂ３）から単離された組替えプラスミドは、Ｂａ
ｍＨＩ位置に挿入された５．８kb（キロ塩基対）のＤＮ
Ａ断片をもつことがわかった。 【００５９】ｐＣＨ−Ｂ３のウェスタン・ブロット〔バ
ーネット・ダブリュー・エヌ（Ｂｕｒｎｅｔｔｅ，Ｗ．
Ｎ．）〔１９８１年〕Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１
２巻１９５頁〕は、ウサギ抗Ｍ−７結晶抗血清を用い
て、一夜培養基のＳＤＳ−ＰＡＧＥで行なった。約８６
キロダルトンの蛋白質が確認された。従って、クローン
ｐＣＨ−Ｂ３は、Ｍ−７からの結晶蛋白質による血清学
的身元証明のある蛋白質に対するコードをもつＭ−７
ＤＮＡ断片を含有している。組替え蛋白質は、所定のプ
ラスミド構築で転写及び／又は翻訳の停止信号が入手で
きないため、溶解化されたＭ−７結晶からの毒素より大
きいこともありうる。 【００６０】Ｂ．ｔ．ｓｄ毒素遺伝子を暗号化したヌク
レオチド配列を配列番号：１に示す。演えき的に導かれ
たアミノ酸配列を配列番号：２に示す。この技術で周知
のように、蛋白質のアミノ酸配列はＤＮＡのヌクレオチ
ド配列によって決まる。遺伝暗号の縮重性のため、すな
わち蛋白質をつくるために用いられるアミノ酸のほとん
どに対して、一つ以上の暗号化ヌクレオチドトリプレッ
ト（コードン）を使用できるため、ある特定のアミノ酸
に対して異なるヌクレオチド配列が暗号化できる。この
ため、遺伝暗号を次のように表わすことができる。 【００６１】 【表２】 【００６２】かぎ：各３文字のデオキシヌクレオチドト
リプレットは、左に５′−末端、右に３′−末端をもつ
ｍＲＮＡのトリヌクレオチドに対応している。本明細書
に記載のＤＮＡ配列は、いずれもｍＲＮＡの配列に対応
する配列のＤＮＡ鎖のものであって、但しウラシルには
チミンが置き変わる。文字はデオキシヌクレオチド配列
を形成するプリン又はピリミジン塩基を表わしている。 【００６３】 【表３】【００６４】以上は、Ｍ−７毒素又は他の有用な蛋白質
の新規なアミノ酸配列が、蛋白質の同じアミノ酸配列を
暗号化した同等なヌクレオチド配列によってつくられる
ことを示す。従って本発明は、このような同等なヌクレ
オチド配列を包含している。更に、アミノ酸配列を変更
しても蛋白質の二次構造が変化しないならば、確認され
た構造と機能の蛋白質をこのような変更によって構築で
きることがわかった〔カイザー・イー・ティー（Ｋａｉ
ｓｅｒ，Ｅ．Ｔ．）及びケズディ・エフ・ジェイ（Ｋｅ
ｚｄｙ，Ｆ．Ｊ．）〔１９８４年〕Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
２３巻２４９−２５５頁〕。このように本発明は、蛋白
質の二次構造を変更しないか、又は構造が変更される場
合でも生物活性が同程度に保持されるような、本明細書
に記載のアミノ酸配列の突然変異物を包含している。な
お、本発明においてアミノ酸配列の突然変異物とは、配
列番号：２に示すアミノ酸配列に対して、本件出願前に
周知であった部位特定変異誘発法等により可能な程度で
１又は数個のアミノ酸の付加、欠失及び／又は他のアミ
ノ酸による置換により変異しており且つ所定の毒性を維
持しているアミノ酸配列を意味する。 【００６５】実施例３ クローンｐＣＨ−Ｂ３によるＭ
−７毒素蛋白質の生産 ｐＣＨ−Ｂ３培養基２０リットル（アンピシリン７０μ
ｇ／mlを含有するＬ−ブロス）を醗酵容器中で生育さ
せ、ＯＤ６００＝３．３５で取り入れた。細胞ペレット
を水洗し、リゾチーム２ｇ，１mM ＰＭＳＦ（弗化フェ
ニルメチルスルホニル）、１mM ＴＰＣＫ（１−トシル
アミド−２−フェニルエチルクロロメチルケトン）及び
ＤＮａｓｅ Ｉ５００μｇを含有するグリシン緩衝液
（０．１Ｍグリシン、トリス塩基によりpH８．０）５０
０mlに再懸濁し、室温で３０分培養した。次にpHをＮａ
ＯＨで１０に上げ、ビードビーター（バイオスペック・
プロダクツ社、オクラホマ州バートルスビル）により、
氷上で３０秒の打撃を５分間隔で４回与えて細胞を破裂
させた。次に抽出液を１０，０００xGで３０分遠心分離
した。 【００６６】実施例４ クローンｐＣＨ−Ｂ３でつくら
れるＭ−７毒素蛋白質の単離及び精製 アフィニティークロマトグラフィ〔クァトレカサ・ビー
（Ｃｕａｔｒｅｃａｓａ，Ｐ．）及びアンフィンセン・
シー・ビー（Ａｎｆｉｎｓｅｎ，Ｃ．Ｂ．）〔１９７１
年〕Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２２巻〔ダブリ
ュー・ビー・ジャコビー編、アカデミックプレス社、ニ
ューヨーク〕を用いて、ｐＣＨ−Ｂ３からの蛋白質を次
のように精製した。クァトレカサ及びアンフィンセンの
記述のとおりに、臭化シアンでセファロースを活性化し
た。 【００６７】活性化したセファロースにうさぎ抗Ｍ−７
結晶血清を添加し、たえずかきまぜながら室温で一夜培
養した。アフィニティー樹脂を１％エタノールアミン、
３ＭＮａＣｌ，pH９．２で洗い、次に０．０２％ナトリ
ウムアジドを含有するＴＢＳ（０．０２Ｍ トリス−Ｈ
Ｃｌ，０．０７Ｍ ＮａＣｌ，pH７．５）で洗った。１
mM ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、１mM ＰＭ
ＳＦ，１mM ＴＰＣＫ、及び０．０２％ナトリウムアジ
ドを含有するpH１０（トリス塩基で）の０．１Ｍグリシ
ン中でカラムを平衡化した。 【００６８】上のように調製した大腸菌抽出液をカラム
に装填し、４℃で６４時間再循環させた。抽出液を１Ｍ
ＮａＣｌ及び０．１Ｍグリシン−トリス（pH１０）で
カラムから洗い、結合Ｍ−７毒素を３Ｍ過塩素酸ナトリ
ウム、０．１Ｍグリシン−トリス（pH１０）でカラムか
ら除去した。次にＭ−７毒素を水に対して透析し濃縮し
た（マイクロプロＤ：コン、ピアース・ケミカル社、イ
リノイ州ロックフォード）。植生を保護するため、精製
されたＭ−７毒素を、出没する鞘翅目の甲虫に感受性の
ある植生に投与（施用）できる。この技術で周知の適当
な被覆剤を用いて、Ｍ−７毒素を環境的に安定化させる
のが有利である。 【００６９】実施例５ シュードモナス・フルオレッセ
ンスへのＭ−７毒素遺伝子の二次クローン化及び発現 Ｍ−７毒素遺伝子をもつ５．８kb ＤＮＡ断片をプラス
ミドｐＣＨ−Ｂ３からＢａｍＨＩで切り取り、精製し、
プラスミドｐＲＯ１６１４のＢａｍＨＩ位置へ二次クロ
ーン化した。シュードモナス・フルオレッセンスをこの
プラスミドで形質転換した。組み替えシュードモナス細
胞によるＭ−７毒素の発現は、ウェスタン・ブロットで
の確認によって証明された。 【００７０】実施例６ バシラス・スリンギエンシス菌
株サンディエゴ、ＮＲＲＬ Ｂ−１５９３９、の胞子及
び結晶の試験 上に記述されたとおりに得られるバシラス・スリンギエ
ンシス菌株サンディエゴ、ＮＲＲＬ Ｂ−１５９３９、
の胞子と結晶を種々の昆虫に対して試験した。試験され
た昆虫種と結果の要約は、表４に一覧されている。 【００７１】Ｄ．ウンデシムプンクタータ（西部班点ウ
リハムシ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｓｐｏｔｔｅｄ ｃｕｃｕ
ｍｂｅｒ ｂｅｅｔｌｅ，ＷＳＣＢ）の活性についての
試験に使用される方法は、噴霧塔装置内でレタス葉のデ
ィスクへ胞子／結晶懸濁液を噴霧することからなる。
（この昆虫種の幼虫はレタス葉で生育する。）層流フー
ド内で噴霧液を乾燥し、容器内の湿ったろ紙上に置い
た。ＷＳＣＢの幼虫１０匹を加え、容器を２５℃，１４
時間の光周期で培養した。新しく処理したディスクを必
要に応じて加えた。食物接種の抑制が認められ、５日と
７日に死亡率を記録した。２回の生物検定の結果を第２
表に示す。 【００７２】ピラルタ・ルテオラ（Ｐｙｒｒｈａｌｔａ
ｌｕｔｅｏｌａ、ニレハムシ）に対するＭ−７毒素の
活性を試験するために、Ｍ−７結晶から溶解化された蛋
白質をニレの葉に施用した。次に乾燥した葉を容器内の
湿った砂の上に置いた。Ｐ．ルテオラ幼虫５〜１０匹を
加え、容器を室温で培養した。３日と５日に死亡率を記
録した。葉表面のcm2 当り毒素１２０ngのＬＣ50をこれ
らの検定から計算した。 【００７３】 【表４】 【００７４】 【表５】【００７５】 【表６】 【００７６】 【表７】【００７７】 【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：１９３２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ 配 列 ATGAATCCGA ACAATCGAAG TGAACATGAT ACAATAAAAA CTACTGAAAA TAATGAGGTG 60 CCAACTAACC ATGTTCAATA TCCTTTAGCG GAAACTCCAA ATCCAACACT AGAAGATTTA 120 AATTATAAAG AGTTTTTAAG AATGACTGCA GATAATAATA CGGAAGCACT AGATAGCTCT 180 ACAACAAAAG ATGTCATTCA AAAAGGCATT TCCGTAGTAG GTGATCTCCT AGGCGTAGTA 240 GGTTTCCCGT TTGGTGGAGC GCTTGTTTCG TTTTATACAA ACTTTTTAAA TACTATTTGG 300 CCAAGTGAAG ACCCGTGGAA GGCTTTTATG GAACAAGTAG AAGCATTGAT GGATCAGAAA 360 ATAGCTGATT ATGCAAAAAA TAAAGCTCTT GCAGAGTTAC AGGGCCTTCA AAATAATGTC 420 GAAGATTATG TGAGTGCATT GAGTTCATGG CAAAAAAATC CTGTGAGTTC ACGAAATCCA 480 CATAGCCAGG GGCGGATAAG AGAGCTGTTT TCTCAAGCAG AAAGTCATTT TCGTAATTCA 540 ATGCCTTCGT TTGCAATTTC TGGATACGAG GTTCTATTTC TAACAACATA TGCACAAGCT 600 GCCAACACAC ATTTATTTTT ACTAAAAGAC GCTCAAATTT ATGGAGAAGA ATGGGGATAC 660 GAAAAAGAAG ATATTGCTGA ATTTTATAAA AGACAACTAA AACTTACGCA AGAATATACT 720 GACCATTGTG TCAAATGGTA TAATGTTGGA TTAGATAAAT TAAGAGGTTC ATCTTATGAA 780 TCTTGGGTAA ACTTTAACCG TTATCGCAGA GAGATGACAT TAACAGTATT AGATTTAATT 840 GCACTATTTC CATTGTATGA TGTTCGGCTA TACCCAAAAG AAGTTAAAAC CGAATTAACA 900 AGAGACGTTT TAACAGATCC AATTGTCGGA GTCAACAACC TTAGGGGCTA TGGAACAACC 960 TTCTCTAATA TAGAAAATTA TATTCGAAAA CCACATCTAT TTGACTATCT GCATAGAATT 1020 CAATTTCACA CGCGGTTCCA ACCAGGATAT TATGGAAATG ACTCTTTCAA TTATTGGTCC 1080 GGTAATTATG TTTCAACTAG ACCAAGCATA GGATCAAATG ATATAATCAC ATCTCCATTC 1140 TATGGAAATA AATCCAGTGA ACCTGTACAA AATTTAGAAT TTAATGGAGA AAAAGTCTAT 1200 AGAGCCGTAG CAAATACAAA TCTTGCGGTC TGGCCGTCCG CTGTATATTC AGGTGTTACA 1260 AAAGTGGAAT TTAGCCAATA TAATGATCAA ACAGATGAAG CAAGTACACA AACGTACGAC 1320 TCAAAAAGAA ATGTTGGCGC GGTCAGCTGG GATTCTATCG ATCAATTGCC TCCAGAAACA 1380 ACAGATGAAC CTCTAGAAAA GGGATATAGC CATCAACTCA ATTATGTAAT GTGCTTTTTA 1440 ATGCAGGGTA GTAGAGGAAC AATCCCAGTG TTAACTTGGA CACATAAAAG TGTAGACTTT 1500 TTTAACATGA TTGATTCGAA AAAAATTACA CAACTTCCGT TAGTAAAGGC ATATAAGTTA 1560 CAATCTGGTG CTTCCGTTGT CGCAGGTCCT AGGTTTACAG GAGGAGATAT CATTCAATGC 1620 ACAGAAAATG GAAGTGCGGC AACTATTTAC GTTACACCGG ATGTGTCGTA CTCTCAAAAA 1680 TATCGAGCTA GAATTCATTA TGCTTCTACA TCTCAGATAA CATTTACACT CAGTTTAGAC 1740 GGGGCACCAT TTAATCAATA CTATTTCGAT AAAACGATAA ATAAAGGAGA CACATTAACG 1800 TATAATTCAT TTAATTTAGC AAGTTTCAGC ACACCATTCG AATTATCAGG GAATAACTTA 1860 CAAATAGGCG TCACAGGATT AAGTGCTGGA GATAAAGTTT ATATAGACAA AATTGAATTT 1920 ATTCCAGTGA AT 1932 【００７８】配列番号：２ 配列の長さ：６４４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配 列 Met Asn Pro Asn Asn Arg Ser Glu His Asp Thr Ile Lys Thr Thr Glu 5 10 15 Asn Asn Glu Val Pro Thr Asn His Val Gln Tyr Pro Leu Ala Glu Thr 20 25 30 Pro Asn Pro Thr Leu Glu Asp Leu Asn Tyr Lys Glu Phe Leu Arg Met 35 40 45 Thr Ala Asp Asn Asn Thr Glu Ala Leu Asp Ser Ser Thr Thr Lys Asp 50 55 60 Val Ile Gln Lys Gly Ile Ser Val Val Gly Asp Leu Leu Gly Val Val 65 70 75 80 Gly Phe Pro Phe Gly Gly Ala Leu Val Ser Phe Tyr Thr Asn Phe Leu 85 90 95 Asn Thr Ile Trp Pro Ser Glu Asp Pro Trp Lys Ala Phe Met Glu Gln 100 105 110 Val Glu Ala Leu Met Asp Gln Lys Ile Ala Asp Tyr Ala Lys Asn Lys 115 120 125 Ala Leu Ala Glu Leu Gln Gly Leu Gln Asn Asn Val Glu Asp Tyr Val 130 135 140 Ser Ala Leu Ser Ser Trp Gln Lys Asn Pro Val Ser Ser Arg Asn Pro 145 150 155 160 His Ser Gln Gly Arg Ile Arg Glu Leu Phe Ser Gln Ala Glu Ser His 165 170 175 Phe Arg Asn Ser Met Pro Ser Phe Ala Ile Ser Gly Tyr Glu Val Leu 180 185 190 Phe Leu Thr Thr Tyr Ala Gln Ala Ala Asn Thr His Leu Phe Leu Leu 195 200 205 Lys Asp Ala Gln Ile Tyr Gly Glu Glu Trp Gly Tyr Glu Lys Glu Asp 210 215 220 Ile Ala Glu Phe Tyr Lys Arg Gln Leu Lys Leu Thr Gln Glu Tyr Thr 225 230 235 240 Asp His Cys Val Lys Trp Tyr Asn Val Gly Leu Asp Lys Leu Arg Gly 245 250 255 Ser Ser Tyr Glu Ser Trp Val Asn Phe Asn Arg Tyr Arg Arg Glu Met 260 265 270 Thr Leu Thr Val Leu Asp Leu Ile Ala Leu Phe Pro Leu Tyr Asp Val 275 280 285 Arg Leu Tyr Pro Lys Glu Val Lys Thr Glu Leu Thr Arg Asp Val Leu 290 295 300 Thr Asp Pro Ile Val Gly Val Asn Asn Leu Arg Gly Tyr Gly Thr Thr 305 310 315 320 Phe Ser Asn Ile Glu Asn Tyr Ile Arg Lys Pro His Leu Phe Asp Tyr 325 330 335 Leu His Arg Ile Gln Phe His Thr Arg Phe Gln Pro Gly Tyr Tyr Gly 340 345 350 Asn Asp Ser Phe Asn Tyr Trp Ser Gly Asn Tyr Val Ser Thr Arg Pro 355 360 365 Ser Ile Gly Ser Asn Asp Ile Ile Thr Ser Pro Phe Tyr Gly Asn Lys 370 375 380 Ser Ser Glu Pro Val Gln Asn Leu Glu Phe Asn Gly Glu Lys Val Tyr 385 390 395 400 Arg Ala Val Ala Asn Thr Asn Leu Ala Val Trp Pro Ser Ala Val Tyr 405 410 415 Ser Gly Val Thr Lys Val Glu Phe Ser Gln Tyr Asn Asp Gln Thr Asp 420 425 430 Glu Ala Ser Thr Gln Thr Tyr Asp Ser Lys Arg Asn Val Gly Ala Val 435 440 445 Ser Trp Asp Ser Ile Asp Gln Leu Pro Pro Glu Thr Thr Asp Glu Pro 450 455 460 Leu Glu Lys Gly Tyr Ser His Gln Leu Asn Tyr Val Met Cys Phe Leu 465 470 475 480 Met Gln Gly Ser Arg Gly Thr Ile Pro Val Leu Thr Trp Thr His Lys 485 490 495 Ser Val Asp Phe Phe Asn Met Ile Asp Ser Lys Lys Ile Thr Gln Leu 500 505 510 Pro Leu Val Lys Ala Tyr Lys Leu Gln Ser Gly Ala Ser Val Val Ala 515 520 525 Gly Pro Arg Phe Thr Gly Gly Asp Ile Ile Gln Cys Thr Glu Asn Gly 530 535 540 Ser Ala Ala Thr Ile Tyr Val Thr Pro Asp Val Ser Tyr Ser Gln Lys 545 550 555 560 Tyr Arg Ala Arg Ile His Tyr Ala Ser Thr Ser Gln Ile Thr Phe Thr 565 570 575 Leu Ser Leu Asp Gly Ala Pro Phe Asn Gln Tyr Tyr Phe Asp Lys Thr 580 585 590 Ile Asn Lys Gly Asp Thr Leu Thr Tyr Asn Ser Phe Asn Leu Ala Ser 595 600 605 Phe Ser Thr Pro Phe Glu Leu Ser Gly Asn Asn Leu Gln Ile Gly Val 610 615 620 Thr Gly Leu Ser Ala Gly Asp Lys Val Tyr Ile Asp Lys Ile Glu Phe 625 630 635 640 Ile Pro Val Asn
ド及びその製造方法に関する。 【０００２】 【先行技術及び課題】胞子形成微生物のバシラス・スリ
ンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅ
ｎｓｉｓ，Ｂｔ）は、最もよく知られた昆虫毒素をつく
る。この毒素は、δ−エンドトキシンと指定された蛋白
質である。これはＢｔの胞子形成細胞によって合成され
る。感受性のある昆虫の幼虫が毒素の結晶型を摂取する
と、毒素は昆虫の腸液プロテアーゼにより生物学的活性
のある部分に転化される。主要標的は昆虫の腸上皮細胞
であって、これが急激に破壊される。Ｂｔ毒素の活性は
非常に高く、感受性のある幼虫を殺すのにナノグラム単
位の量しか必要でないことが経験からわかっている。 【０００３】Ｂｔの報告された活性範囲は、農林業で大
きな問題となっている昆虫である鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏ
ｐｕｔｅｒａ）の範囲内の昆虫種を包含する。活性範囲
はまた双し類（Ｄｉｐｔｅｒａ）の昆虫も包含する。こ
れには蚊とブヨ（ｂｌａｃｋｆｌｙ）の幾つかの種が含
まれる。コーチ・ティー・エル（Ｃｏｕｃｈ，Ｔ．
Ｌ．）（１９８０年）「バシラス・スリンギエンシス・
バラエティ・イスラエレンシスの蚊病源性」Ｄｅｖｅｌ
ｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｌｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２２巻６１−６７頁；ビーグル・
シー・シー（Ｂｅｅｇｌｅ，Ｃ．Ｃ．）（１９７８年）
「農業生態系における昆虫性細菌の利用」Ｄｅｖｅｌｏ
ｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｌｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０巻９７−１０４頁を参照のこ
と。 【０００４】クリーグ（Ｋｒｅｉｇ）ら（Ｚ．ａｎｇ．
Ｅｎｔ．（１９８３年）９６巻５００−５０８頁）はバ
シラス・スリンギエンシス・バラエティ・テネブリオニ
ス（Ｂ．ｔｈｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｖａｒ．ｔｅｎｅｂ
ｒｉｏｎｉｓ）と名付けられたＢｔ分離体について記述
しているが、これは鞘翅目の２種類の甲虫に対して活性
があると言われている。これらはコロラド・ポテト・ビ
ートルのレプチノタルサ・デセムリネアータ（Ｌｅｐｔ
ｉｎｏｔａｒｓａ ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ）とアゲ
ラスチカ・アルニ（Ａｇｅｌａｓｔｉｃａ ａｌｎｉ）
である。このような活性をもつと報告された既知のＢｔ
分離体はこれだけである。すでに確認されたＢｔ菌株は
すべて、いも虫（鱗翅類）やハエの幼虫（双翅類）に対
して活性をもつものであった。 【０００５】クリーグらのＢｔ分離体は、本発明の新規
なＢｔ遺伝子源として使用されるＢｔ分離体との並行比
較のため入手できない。従って、クリーグらのＢｔ分離
体が公衆の手に入らない以上、クリーグらの公告は合衆
国法の下で法的に有効な特許法の参照ではない。 【０００６】 【課題を解決するための手段】鞘翅目の甲虫に有毒な毒
素遺伝子のクローン化及び発現が明らかにされ、特許請
求されている。クローン化された遺伝子でつくられる毒
素は、鞘翅目の甲虫に対して活性があるが、トリコプル
シア・ニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ）、スポド
プテラ・エクシグア（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇ
ｕａ）、又はネッタイシマ蚊（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐ
ｔｉ）に対しては活性がない。鞘翅目に含まれるものと
して、農業上大きな損害をもたらす種々のディアブロテ
ィカ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ）種（ハムシ科Ｃｈｒｙｓ
ｏｍｅｌｉｄａｅ）がある。 【０００７】例えば、ディー・ウンデシムプンクタータ
（Ｄ．ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ）（西部班点ウ
リハムシ）、ディー・ロンギコーニス（Ｄ．ｌｏｎｇｉ
ｃｏｒｎｉｓ）（ノーザン・コーン・ルートワーム）、
ディー・バージテラ（Ｄ．ｖｉｒｇｉｔｅｒａ）（ウエ
スタン・コーン・ルートワーム）、及びディー・ウンデ
シムプンクタータ・ハワーディ（Ｄ．ｕｎｄｅｃｉｍｐ
ｕｎｃｔａｔａ ｈｏｗａｒｄｉ）（サザン・コール・
ルートワーム）がある。 【０００８】「Ｍ−７」で指定される本発明の毒素遺伝
子給源として使用されるバシラス・スリンギエンシス分
離体は、独特のパラ胞子体（結晶）をもつ点で異例であ
る。これは位相差顕微鏡下に外観が暗色で、平らな角型
の外形を呈する。現在バシラス・スリンギエンシス菌株
サンディエゴ（Ｂ．ｔ．ｓｄ）として知られるバシラス
・スリンギエンシスＭ−７の二次培養基は、１９８５年
２月２７日、合衆国イリノイ州ピオリア、合衆国農務
省、北部研究所の永久保存施設に寄託された。 【０００９】培養基は、保存施設からＮＲＲＬ Ｂ−１
５９３９の寄託番号を指定された。この寄託物は、これ
を開示した特許の授与により一般に入手できる。寄託物
はまた、本出願又はその後代の対応出願がなされている
国の外国特許法での要求に応じて入手できる。しかし、
寄託物が入手できるからといって、政府決定によって授
与される特許権を侵害してまで、本発明の実施権を構成
するものではないことを了解されたい。 【００１０】バシラス・スリンギエンシス菌株サンディ
エゴ、ＮＲＲＬ Ｂ−１５９３９はこの技術の標準的な
培地及び醗酵手法を使用して培養できる。醗酵周期の完
了後、この技術に周知の手段により、まずＢｔ胞子と結
晶を醗酵液から分離することによって、細菌を収穫でき
る。細胞からのＤＮＡ（染色体とプラスミド）を標準手
順によって単離し、この技術で周知の手順によって精製
できる。例えば、このような標準手順はマニアティス
（Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら、分子クローン化（１９８２
年）、コールドスプリングハーバー研究所、に明らかに
されている。精製ＤＮＡを次に適当な制限エンドヌクレ
アーゼで消化させることができる。 【００１１】次にＢ．ｔ．ｓｄ ＤＮＡのジーンバンク
を構築することができる。本発明では、上記のように得
られる精製Ｂ．ｔ．ｓｄ ＤＮＡを制限エンドヌクレア
ーゼＢａｍＨＩで消化させ、周知の入手できるプラスミ
ドｐＢＲ３２２のＢａｍＨＩ位置へクローン化した。
Ｂ．ｔ．ｓｄのＤＮＡのジーンバンクが構築されたら、
次にこのジーンバンクを選別するためにＤＮＡプローブ
を構築する必要がある。この臨床的ＤＮＡプローブの構
築は、Ｂ．ｔ．ｓｄ培養基からＭ−７毒素結晶を単離す
ることによって開始された。 【００１２】回収されたＭ−７毒素結晶を標準手順によ
って精製し、次にトリプシンで消化させるとペプチド断
片がつくられる。これらのトリプシン性の断片の幾つか
のもののアミノ酸配列は標準手順によって決定された。
続いて、ある配列の選択後、プローブを既知手段により
化学的に合成した。生ずるプローブに標識を付け、この
技術で知られた手順によって交雑（ハイブリダイゼーシ
ョン）させた。その結果、陽性クローン、すなわち構築
されたプローブへ交雑したものが検出された。 【００１３】陽性クローンの代表を、標準手順によって
開発されたうさぎの抗Ｍ−７結晶抗血清を使用してウエ
スタン・ブロットにかけた。Ｍ−７毒素のクローン化と
発現は、陽性クローン及びＭ−７毒素結晶に対する抗体
で陽性反応が見られた時に、成功の確認が得られた。代
表的な陽性クローンから単離された組替えプラスミド
は、ＢａｍＨＩ位置へ挿入された５．８kb ＤＮＡ断片
をもつことがわかった。この５．８kb ＤＮＡ断片は、
ＢａｍＨＩによって代表的陽性クローン（ｐＣＨ−Ｂ
３）から切断、精製され、次に既知の入手できるプラス
ミドｐＲＯ１６１４のＢａｍＨＩ位置へ二次クローン化
された（Ｊ．Ｂａｃｔ．〔１９８２年〕１５０巻６０
頁；合衆国特許第４，３７４，２００号）。 【００１４】プラスミドｐＲＯ１６１４は、下記の住所
の北部研究所から入手でき、その寄託番号はＮＲＲＬ
Ｂ−１２１２７である。プラスミドはｐＢＲ３２２から
誘導され、特異なＨｉｎｄIII ，ＢａｍＨＩ，Ｓａｌ
Ｉ、及びＰｖｕII制限位置をもつ。ＰｓｔＩ挿入物はカ
ルベニシリン抵抗遺伝子と緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎ
ｏｓａ）複製系を包含している。シュードモナス・フル
オレッセンスはこの構築されたシャトルベクターによっ
て形質転換され、Ｍ−７毒素の発現はウエスタン・ブロ
ットでの確認により証明された。 【００１５】プラスミドｐＣＨ−Ｂ３、又は５．８kbの
断片挿入物をもつプラスミドｐＲＯ１６１４は、周知の
手順、例えば透明溶菌液−密度勾配平衡手順を使用し
て、細菌宿主から回収できる。所望によりＢａｍ−ＨＩ
での消化により、５．８kb断片をｐＲＯ１６１４から切
り取り、別の宿主への形質転換のため異なるベクターへ
クローン化できる。これらの手順はいずれも当業者に周
知である。 【００１６】大腸菌宿主中のプラスミドｐＣＨ−Ｂ３
は、６１６０４イリノイ州ピオリア、北部研究センタ
ー、培養基保存研究／醗酵研究所、ＡＲＳ特許保存施設
に寄託された。寄託物は、同施設の手で少なくとも３０
年間、永久保存施設内に保存される。寄託は１９８５年
７月１８日に行なわれ、ＮＲＲＬ Ｂ−１５９８１の寄
託番号を付された。二次培養基は、寄託物を明らかにし
た特許の授与により、一般に入手できる。寄託物はま
た、本出願又はその後代の対応出願がなされている国の
外国特許法での要求に応じて入手できる。しかし、寄託
物が入手できるからといって、政府決定によって授与さ
れる特許権を侵害してまで、本発明の実施権を構成する
ものではないことを了解されたい。 【００１７】本発明の毒素遺伝子は、広範囲の微生物宿
主中に導入できる。毒素遺伝子（Ｍ−７）の発現の結
果、直接又は間接的に殺虫剤が細胞内に生産され、維持
される。適当な宿主、例えばシュードモナスの場合、鞘
翅目の甲虫が生息する場所に微生物を施用すると、これ
らは増殖し、感受性のある甲虫に摂取される。その結
果、望んでいない甲虫が防除される。その代りに、毒素
Ｍ−７遺伝子の宿主となった微生物を、細胞内につくら
れる毒素の活性を持続させるような条件下に処理でき
る。次に処理細胞を目標害虫の環境に施用できる。生ず
る生成物は、Ｍ−７毒素の毒性を保持している。 【００１８】Ｍ−７毒素遺伝子を適当なベクター経由で
微生物宿主に導入し、宿主を生きた状態で環境に施用す
る場合、ある宿主微生物を使用することが必須である。
選択されるのは、対象となる一つ以上の作物の「植物領
域」（＝フィトスフェア）（葉面＝フィロプレイン、葉
周辺＝フィロスフェア、根周辺＝リゾスフェア、及び／
又は根表面＝リゾプレイン）を占めることがわかってい
る微生物宿主である。これらの微生物は、特定環境（作
物と他の昆虫の生息環境）で野性型微生物と順調に競合
でき、ポリペプチド殺虫剤を発現する遺伝子の安定な維
持と発現をもたらし、また望ましくは環境上の劣化や不
活性化からの殺虫剤の改良された保護を提供するような
ものが選択される。 【００１９】広範囲の重要作物の葉面や根周辺に生息す
る微生物は、多数知られている。これらの微生物は細
菌、藻類、及びカビを包含する。特に興味ある微生物は
次のようなものである。細菌では、属名でシュードモナ
ス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、エルウィニア（Ｅｒｗ
ｉｎｉａ）、セラティア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、キサン
トモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）、ストレプトミセ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、リゾビウム（Ｒｈｉ
ｚｏｂｉｕｍ）、ロードシュードモナス（Ｒｈｏｄｏｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、アグロバクテリウム（Ａｇｒ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、アセトバクター（Ａｃｅｔｏ
ｂａｃｔｅｒ）、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ）、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔ
ｅｒ）、アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）、
リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、及び
アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）。 【００２０】カビ、特に酵母では、属名でサッカロミセ
ス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、クリプトコッカス
（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、クルイベロミセス（Ｋ
ｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、スポロボロミセス（Ｓｐ
ｏｒｏｂｏｒｏｍｙｃｅｓ）、ロードトルラ（Ｒｈｏｄ
ｏｔｏｒｕｌａ）、及びアウレオバシジウム（Ａｕｒｅ
ｏｂａｓｉｄｉｕｍ）。 【００２１】特に興味あるのは、次のような植物領域細
菌種である。シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ）、シュードモナス・
フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏ
ｒｅｓｃｅｎｓ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒ
ａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、アセトバクター・
キシリヌム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌｉｎｕ
ｍ）、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、ロ
ードシュードモナス・スフェロイデス（Ｒｈｏｄｏｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｈｅｒｏｉｄｅｓ）、キサン
トモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、リゾビウム・メリオチ（Ｒｈ
ｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｏｔｉ）、アルカリゲネス・
エントロフス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｎｔｒｏｐ
ｈｕｓ）、及びアゾトバクター・ヴィンランジイ（Ａｚ
ｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｖｉｎｌａｎｄｉｉ）。 【００２２】また、興味ある植物領域の酵母種は次のも
のである。ロードトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕ
ｌａ ｒｕｂｒａ）、Ｒ．グルチニス（Ｒ．ｇｌｕｔｉ
ｎｉｓ）、Ｒ．マリナ（Ｒ．ｍａｒｉｎａ）、Ｒ．アウ
ランチアカ（Ｒ．ａｕｒａｎｔｉａｃａ）、クリプトコ
ッカス・アルビヅス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌ
ｂｉｄｕｓ）、Ｃ．ジフルエンス（Ｃ．ｄｉｆｆｌｕｅ
ｎｓ）、Ｃ．ラウレンチイ（Ｃ．ｌａｕｒｅｎｔｉ
ｉ）、サッカロミセス・ロゼイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ ｒｏｓｅｉ）、Ｓ．プレトリエンシス（Ｓ．ｐ
ｒｅｔｏｒｉｅｎｓｉｓ）、Ｓ．セレヴィシアエ（Ｓ．
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、スポロボロミセス・ロゼウス
（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ ｒｏｓｅｕｓ）、
Ｓ．オドルス（Ｓ．ｏｄｏｒｕｓ）、クルイヴェロミセ
ス・ヴェロナエ（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｖｅｒ
ｏｎａｅ）、及びアウレオバシジウム・ポルランス（Ａ
ｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｐｏｌｌｕｌａｎｓ）。有
色素微生物が特に興味がある。 【００２３】遺伝子の安定な維持と表現を可能にするよ
うな条件下に、毒素を表現するＭ−７遺伝子を微生物宿
主中に導入するには、多様な方法が広く利用できる。例
えば、毒素遺伝子の表現のため転写及び翻訳の調節信号
を包含するＤＮＡ構築物を提供できる。また、組み込み
が起こるように、調節制御下の毒素遺伝子と、宿主生物
中の配列と相同なＤＮＡ配列とを提供できる。及び／又
は、組み込み又は安定な維持が起こるように、宿主中で
機能的な複製系を提供できる。 【００２４】転写開始信号はプロモーターと転写開始ス
タート位置を包含する。ある場合には、毒素の調節的な
発現を提供するのが望ましい。その場合、毒素の発現は
環境への放出後にのみ生ずることになる。これはオペレ
ーターで、又は微生物の物理的ないし化学的環境の変化
により誘導可能なアクチベーターやエンハンサーへの領
域結合で達成できる。例えば、感温性調節領域を使用す
ると、生物は毒素の発現なしに実験室で生育できるが、
環境への放出により発現が始まる。他の手法は毒素の発
現を抑制するような特定的な栄養培地を実験室で使用
し、環境中の栄養培地で毒素の発現が可能になる。翻訳
開始には、リボゾームの結合位置と翻訳開始コドンが存
在する。 【００２５】伝令の表現を強化するには活性オプロモー
ターを使用するか、又は伝令ＲＮＡの安定性を強化する
ような配列を使用するなど、種々の操作を利用できる。
イニシエーション領域と翻訳終了領域は、停止コード
ン、ターミネーター領域、及び任意付加的にポリアデニ
ル化信号を包含する。 【００２６】転写方向、すなわちコーディングないしセ
ンス配列の５′から３′への方向で、構築物は転写調節
域があればこれと、調節域がプロモーターの５′又は
３′のいずれかでありうる場合はプロモーター、リボゾ
ーム結合位置、イニシエーションコドン、イニシエーシ
ョンコドンと同フェイズのオープンリーディングフレー
ムをもつ構造遺伝子、停止コドン、もしあればポリアデ
ニル化信号配列、及びターミネーション領域を包含す
る。２本鎖としてのこの配列は、それ自体、微生物宿主
の形質転換のために使用できるが、通常は、マーカーに
関係するＤＮＡ配列に含まれており、その場合第二のＤ
ＮＡ配列は毒素発現構築物に加わるか、又はＤＮＡの宿
主への導入中に、別個のＤＮＡ断片として毒素発現構築
物と一緒にできる。 【００２７】マーカーとは、変更又は形質転換された宿
主の選択に用いる構造遺伝子のことである。マーカー
は、通常、選択的な利点を提供するもので、例えば、抗
生物質や重金属抵抗性などの殺生物抵抗性、栄養要求宿
主に原栄養性を与えるような相補性などを提供する。変
更宿主が選択できるだけでなく、畑で競合できるよう
に、相補性を使用するのが好ましい。構築物の開発なら
びに宿主変更のため、一つ以上のマーカーを使用でき
る。 【００２８】畑での他の野性型微生物に対する競合的な
利点を提供することによって、生物を更に変更できる。
例えば、金属キレート化剤、例えば担鉄細胞を発現する
遺伝子を、毒素発現用の構造遺伝子と共に宿主に導入で
きる。こうして、担鉄細胞の強化された発現により、毒
素生産宿主に競合的な利点が得られ、宿主が野性型微生
物と効果的に競合し、保護しようとする植物の環境に生
態的地位を安定に占めることができる。 【００２９】機能的な複製系が存在しない場合、構築物
は宿主中の配列と相同な、少なくとも５０bp、好ましく
は少なくとも約１００bp、及び通常約１０００bpまでの
配列をも包含する。こうすると、正当な組替えの確率が
強化されるため、遺伝子が宿主中に組み込まれ、宿主に
よって安定に維持される。毒素遺伝子が、相補性を提供
する遺伝子や競合的利点を提供する遺伝子と近接してい
ることが望ましい。従って、毒素遺伝子が失われるよう
な場合は、生ずる生物は相補性の遺伝子や競合的利点を
提供する遺伝子も失う可能性があり、このため無傷の構
築物を保持している遺伝子と環境中で競合できなくな
る。 【００３０】細菌、バクテリオファージ、シアノ細菌、
藻類、カビ等のような広範囲の微生物宿主から、多数の
転写調節域が入手できる。種々の転写調節域は、ｔｒｐ
遺伝子、ｌａｃ遺伝子、ｇａｌ遺伝子、ラムダ左右プロ
モーター、Ｔａｃプロモーター、宿主中で機能的な場
合、毒素遺伝子と関連した天然に生ずるプロモーターを
包含する。例として、合衆国特許第４，３３２，８９８
号、第４，３４２，８３２号、及び第４，３５６，２７
０号を参照のこと。終了域は、転写開始域と通常関連し
た終了域か、又は二つの領域が宿主中で両立し機能的で
ある限り、異なる転写開始域と関連する終了域でもよ
い。 【００３１】安定なエピゾームの維持又は組み込みを望
んでいる場合は、宿主中で機能的な複製系をもつプラス
ミドが使用されよう。複製系は、染色体、宿主又は別の
宿主中に通常存在するエピソーム要素、又は宿主中で安
定なウィルスからの複製系から誘導される。プラスミド
は、ｐＢＲ３２２，ｐＡＣＹＣ１８４，ＲＳＦ１０１
０，ｐＲＯ１６１４等多数が利用できる。例として、オ
ルソン（Ｏｌｓｏｎ）ら（１９８２年）Ｊ．Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ．１５０巻６０６９頁、及びバグダサリアン
（Ｂａｇｄａｓａｒｉａｎ）ら、（１９８１年）Ｇｅｎ
ｅ １６巻２３７頁、及び合衆国特許第４，３５６，２
７０号、第４，３６２，８１７号、及び第４，３７１，
６２５号を参照のこと。 【００３２】Ｍ−７遺伝子は、開始域の調節制御下に置
かれるように、転写・翻訳開始域と転写・翻訳終了域と
の間に導入できる。この構築物はプラスミド中に含まれ
るものであって、プラスミドは少なくとも一つの複製系
を包含するが、プラスミド開発中のクローン化に一つの
複製系を使用し、最終宿主中での機能化に第二の複製系
が必要な場合は、一つ以上の複製系を包含できる。更
に、すでに述べた一つ以上のマーカーが存在しうる。組
み込みを望んでいる場合は、プラスミドが宿主ゲノムと
相同の配列を包含するのが望ましい。 【００３３】形質転換体は、慣用方法に従って単離でき
る。通常、選択的手法を使用し、望んでいる生物を未変
更生物から選び出し、存在していれば、これを移し替え
る。次に形質転換体の殺虫活性を試験できる。好ましい
宿主、特に植物領域（フィトスフェア）中のものは、宿
主中で毒素の環境的安定性を強めるようなある特性をも
っていよう。保護的性質は、低水準の蛋白分解的劣化、
厚い細胞壁、色素保有等を包含する。宿主向けに興味あ
る他の性質は、葉親和性、対哺乳類毒性の欠如、摂取害
虫への誘引力、取扱いと保存の容易さ、畑での増殖速
度、競合性等を包含する。 【００３４】畑施用においては、形質転換体菌株は、害
虫から保護しようとする植物の根周辺や葉面のような、
害虫の自然な生息環境に施用されよう。形質転換体菌株
は、Ｍ−７毒素を生産しつつ、その自然な生息環境中で
生育し、Ｍ−７毒素は幼虫又は成虫に吸収及び／又は摂
取されるか、卵に有毒な効果をもつであろう。微生物の
持続性が植生の長期保護をもたらすが、時どき投与を繰
り返す必要があるかもしれない。生物は、噴霧、浸漬、
地中への注入、種子被覆、苗木被覆又は噴霧等によって
施用できる。畑への投与の場合、生物濃度は、一般にml
当り細胞数で１０6 ないし１０10個、ヘクタール当り施
用容量は一般に約０．１オンスないし２lb以上であろ
う。植物部分に投与される場合、生物濃度は通常、cm2
当り細胞数で１０3 ないし１０6 個であろう。 【００３５】目標害虫の環境に死菌を施用する時に細胞
中の毒素の活性を持続させるために殺虫剤含有細胞を処
理する場合は、適当な宿主細胞は原核細胞又は真核細胞
のいずれかを包含するが、通常、哺乳類のような高等生
物に有毒な物質を生産しないものに限定される。しか
し、毒素が不安定であったり、施用水準が哺乳類宿主へ
の毒性の可能性を避けられるほど十分に低い場合は、高
等生物に有害な物質をつくる生物も使用できる。宿主と
して、特に興味あるものは、原核生物と、カビのような
低級真核生物である。 【００３６】グラム陰性及びグラム陽性双方の原核生物
の例はエシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、エル
ウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌ
ａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）及びプロテ
ウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）のような腸内細菌科（Ｅｎｔｅ
ｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）；バシラス科（Ｂａｃ
ｉｌｌａｃｅａｅ）；リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕ
ｍ）のようなリゾビウム科（Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａ
ｅ）；発光細菌（ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ザ
イモモナス（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）、セラチア（Ｓｅｒ
ｒａｔｉａ）、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）、
ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）、デスルホビブリオ（Ｄｅｓ
ｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ）、スピリルム（Ｓｐｉｒｉｌｌ
ｕｍ）のようならせん菌科（Ｓｐｉｒｉｌｌａｃｅａ
ｅ）；乳酸かん菌科（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａ
ｅ）；シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）やア
セトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）のようなシュ
ードモナス科（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）；
アゾトバクター科（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒａｃｅａ
ｅ）、及びニトロバクター科（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ
ａｃｅａｅ）である。 【００３７】真核生物ではサッカロミセス（Ｓａｃｃｈ
ａｒｏｍｙｃｅｓ）とシゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚ
ｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）のような酵母を含め
た、藻菌類（Ｐｈｙｃｏｍｙｃｅｔｅｓ）と子嚢菌類
（Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ）のようなカビ類（ｆｕｎｇ
ｉ）；及びロードトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）、
アウレオバシジウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、
スポロボロミセス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ）等
のような担子菌類（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）酵
母がある。 【００３８】生産を目的として宿主細胞を選択する際に
特に興味ある性質は、宿主へのＭ−７遺伝子導入の容易
さ、表現系の入手性、表現効率、宿主中における殺虫剤
の安定性、及び補助的遺伝能力の存在を包含する。殺虫
剤ミクロカプセル用に興味ある性質は厚い細胞壁、色素
保有、及び細胞内包装又は封入体の形成のような殺虫剤
保護性；葉親和性；対哺乳類毒性の欠如；摂取害虫への
誘引力；毒素へ損害を与えない殺菌固定の容易さ等を包
含する。他の考慮としては、処方と取り扱いの容易さ、
経済性、保存安定性等がある。 【００３９】特に興味ある宿主生物は、ロードトルラ
種、アウレオバシジウム種、サッカロミセス種、及びス
ポロボロミセス種のような酵母；シュードモナス種、エ
ルウィニア種及びフラボバクテリウム種のような葉面性
の生物；又はエシェリキア種、ラクトバシラス種、バシ
ラス種等の他の生物を包含する。特定的な生物は緑膿
菌、シュードモナス・フルオレッセンス、サッカロミセ
ス・セレビシアエ、バシラス・スリンギエンシス、大腸
菌、枯草菌等を包含する。 【００４０】細胞は通常、無傷であり、殺菌時に胞子型
よりは実質的に増殖型にあるが、場合によっては胞子も
使用できる。細胞増殖を種々の方法で抑制できるが、但
しその手法が殺虫剤の性状に悪影響したり、殺虫剤を保
護する際に細胞能力を消したりしてはならない。方法と
しては、物理的処理や化学的処理、細胞の物理的性状を
変える、又は細胞の物理的性質を無傷で残すなどがあ
る。 【００４１】宿主細胞を不活性化する種々の方法は、通
常５０℃ないし７０℃の加熱；凍結；ＵＶ照射；凍結乾
燥；毒素、例えば抗生物質；フェノール類；アニリド
類、例えばカルバニリドとサリチルアニリド；ヒドロキ
シユリア；第４級類；アルコール類；抗菌染料；ＥＤＴ
Ａ及びアミジン類；ハロゲン化剤、例えば塩素化剤、臭
素化剤又はヨウ素化剤のような非特異的有機及び無機化
学物質；アルデヒド類、例えばグルタルアルデヒド又は
ホルムアルデヒド；オゾンやエチレンオキシドのような
有害ガス；過酸化物；プソラレン類；乾燥剤等。これら
を個々に、又は組合わせて使用できる。薬剤の選択は特
定殺虫剤、宿主細胞の性質、架橋剤による細胞壁の固定
及び保存のような細胞構造の変更の性質などによって変
わる。 【００４２】細胞には、概して強化された構造的安定性
があり、これが畑での環境劣化抵抗性を強化している。
殺虫剤がプロ型の場合は、目標害虫病原体による殺虫剤
のプロ型から成熟型への加工を抑制するように不活性化
方法を選択すべきである。例えばホルムアルデヒドは蛋
白質を架橋するから、プロ型ポリペプチド殺虫剤の加工
を抑制できる。不活性化又は殺菌方法は毒素の生体利用
効率又は生物活性の少なくとも実質部分を保持する。 【００４３】Ｍ−７殺虫剤遺伝子を含有する細胞宿主
は、ＤＮＡ構築物が選択的利点をもつ場合、任意好都合
な栄養培地で生育でき選択培地を与えるので、細胞の全
部又は実質的に全部がＭ−７遺伝子を保持する。次にこ
れらの細胞を慣用方法に従って取り入れることができ
る。その代りに、取り入れる前の細胞を固定することも
できる。 【００４４】毒素を含有する宿主生物の処理方法は、幾
つかの役割を果たすものとなっている。第一に、処理は
構造的一体化を強めている。第二に、蛋白分解性の劣化
に対する感受性を減らすように毒素を変更し、かつ又は
細胞中に天然に存在するプロテアーゼの蛋白分解活性を
低下させることによって、処理は毒素の強化された蛋白
分解安定性を提供できる。細胞を無傷の段階で変更する
のが好ましく、また毒素蛋白質の実質的な蓄積があった
時も変更するのが好ましい。これらの変更は、広範囲の
化学的反応性をもつ化学試薬を使用するなど、種々の方
法で達成できる。約−１０ないし６０℃の範囲の温度
で、かきまぜを加えて、又は加えずに、化学試薬を含有
する液体試薬媒体と無傷の細胞を一緒にする。反応時間
は経験的に決定でき、試薬及び反応条件により大幅に変
わる。細胞濃度は約１０2 から１０ 10の範囲にある。 【００４５】化学試薬として特に興味あるものは、ハロ
ゲン化剤、特に原子番号１７−８０のハロゲン類であ
る。更に詳しくは、温和な条件下で、望んでいる結果を
達成するのに十分な時間に、ヨウ素を使用できる。他の
適当な手法としては、ホルムアルデヒドとグルタルアル
デヒドのようなアルデヒド類での処理；塩化ゼフィラン
と塩化セチルピリジニウムのような抗感染剤；イソプロ
パノールとエタノールのようなアルコール類；ブアン固
定剤やヘリー固定剤のような種々の組織学的固定剤〔フ
マソン（Ｈｕｍａｓｏｎ）、グレッチェン・エル（Ｇｒ
ｅｔｃｈｅｎ，Ｌ．）、Ａｎｉｍａｌ Ｔｉｓｓｕｅ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（動物組織技法）、ダブリュー・
エッチ・フリーマン社、１９６７年、を参照のこと〕；
又は目標害虫環境へ細胞を施用する時に細胞中に生産さ
れる毒素の活性を持続させる物理的処理（加熱）と化学
的薬剤との組合わせがある。 【００４６】ヨウ素でのハロゲン化には、温度は一般に
約０ないし５０℃の範囲にあるが、反応は室温で都合よ
く実施できる。酸性の水性媒体、特に約０．５〜５Ｍの
範囲のカルボン酸水溶液中における０．５ないし５％の
三ヨウ素化物又はヨウ素を使用してヨウ素化を行なうの
が好都合である。酢酸を都合よく使用できるが、概して
約１−４個の炭素原子の他のカルボン酸も使用できる。
反応時間は、一般に１分未満から約２４時間、通常約１
−６時間の範囲であろう。 【００４７】ジチオナイト、チオ硫酸ナトリウムのよう
な還元剤や、畑での最終使用に適合した他の還元剤との
反応により、任意の残留ヨウ素を除去できる。更に、変
更した細胞を、当業者に周知のように、全反応媒体を除
去するための洗浄や、乾燥型での単離、典型的な粘着
剤、展着剤、及び農業用に一般に利用される助剤での処
方といった処理に、なおもかけることができる。 【００４８】特に興味あるものは、細胞壁を架橋できる
試薬である。この目的には、幾つかの試薬が知られてい
る。その処理によって、殺虫剤の安定性が強化される。
すなわち、畑条件下に殺虫剤の持続性ないし残留活性が
強化されなければならない。こうして、未処理細胞の殺
虫活性が消滅するような条件下に、処理細胞の活性は１
〜３倍長い期間にわたって持続する。 【００４９】細胞を種々の方法で処方できる。無機材料
（フィロ珪酸塩、炭酸塩、硫酸塩、燐酸塩等）や植物材
料（とうもろこし芯粉末、もみ殻、くるみ殻等）のよう
な種々の不活性材料と混合することによって、これらを
水和剤、粒剤又は粉剤として使用できる。処方剤は、展
着／粘着助剤、安定化剤、その他の殺虫添加剤、又は表
面活性剤を包含しうる。液体処方剤は、水性基盤でも非
水性でもよく、フォーム、ゲル、懸濁液、乳化出来る濃
縮物等として使用できる。成分は流動剤、表面活性剤、
乳化剤、分散剤、又は重合体を包含しうる。 【００５０】殺虫剤濃度は、特定処方剤の性質、特に処
方剤が濃厚液か直接使用のものかによって大幅に変わ
る。殺虫剤は少なくとも１重量％、及び１００重量％で
も存在しうる。乾燥処方剤は約１−９５重量％の殺虫剤
をもつが、液体処方剤は液相中に概して１−６０重量％
の固形分をもっている。概して処方剤は、mg当り約１０
2 ないし約１０4 個の細胞をもつ。これらの処方剤は、
ヘクタール当り約５０mg（液体又は固体）ないし１kg以
上の率で投与される。 【００５１】処方剤を害虫環境へ、例えば植物、土壌又
は水へ、噴霧、散布、散水等によって施用できる。以下
は、最良の態様を含めた本発明の実施手順を示す実施例
である。これらの実施例は、限定的に考えられてはなら
ない。他に注意がなければ、百分率はすべて重量、溶媒
混合物の割合はすべて容量による。 【００５２】実施例１ バシラス・スリンギエンシス菌
株サンディエゴ、ＮＲＲＬ Ｂ−１ ５９３９の培養 バシラス・スリンギエンシス菌株サンディエゴＮＲＲＬ
Ｂ−１５９３９の二次培養基又は出発培養基を使用し
て、ＬＢブロスとして知られる次の培地に摂取できる。 【００５３】 【表１】 【００５４】標準的な微生物学的手法などによって、上
の培地を接種前に滅菌し、無菌手順を用いて接種を行な
う。Ｍ−７細胞を３０℃で３−４日生育させる。詳細な
手順は以下のとおりである。無菌のＰＷＹＥ培地（水１
リットル中ペプトン５．０％、酵母エキス０．１％，Ｎ
ａＣｌ ０．５％，pH７．５に調整）を含有する一連の
１５０ml三角フラスコに、バシラス・スリンギエンシス
菌株サンディエゴ、ＮＲＲＬ Ｂ−１５９３９をペトリ
皿培養基から接種する。フラスコを回転振とう機（２０
０rpm ）上、３０℃で一夜培養する。この出発培養基か
ら、その７．５mlを用いて２リットルフラスコ中のＬＢ
ブロス３００mlに接種する。ＬＢブロスのフラスコを出
発培養基と同じ条件下に培養するが、４日後に取り入れ
る。 【００５５】上の手順は、この技術で周知の手順によ
り、大醗酵容器まで容易に規模拡大できる。上の醗酵で
得られるＢｔ胞子及び結晶を、この技術で周知の手順に
より単離できる。しばしば使用される手順は、取り入れ
た醗酵液を分離手法、例えば遠心分離にかけることであ
る。 【００５６】実施例２ Ｍ−７毒素遺伝子のクローン化
及び発現 全体のＤＮＡ（染色体ＤＮＡとプラスミド）を実施例１
のＭ−７細胞から単離し、標準手順によって精製した。
生ずる精製ＤＮＡを、供給者の指示を用いて制限エンド
ヌクレアーゼＢａｍＨＩで消化させた。消化されたＤＮ
Ａを周知のプラスミドｐＢＲ３２２のＢａｍＨＩ位置に
クローン化すると、Ｍ−７ ＤＮＡのジーンバンクが得
られた。このクローン化手順を、周知の標準的な手順に
従って行なった。 【００５７】ジーンバンクを選別するためのＤＮＡプロ
ーブは、次のように得られた。ＮＹＳＭ培地（トリプト
ン１０ｇ，ＮａＣｌ ５ｇ、酵母エキス５ｇ，ＭｇＳＯ
4 ・７Ｈ2 Ｏ ２ｇ、水１０００ml，pH７．５）中３０
℃で一夜生育させた培養基から、Ｍ−７結晶を単離し
た。精製した結晶を８Ｍ尿素、０．１Ｍグリシン、pH
８．２に溶解し、室温で一夜、トリプシンで消化させ
た。生ずるペプチド断片をＣ 4 逆相多孔カラム上で、ア
セトニトリル中０．１％トリフルオロ酢酸中の９１％溶
液Ａ（０．１％トリフルオロ酢酸水溶液）から４０％溶
液Ａまでの１８０分勾配によって分離した。幾つかのト
リプシン断片のアミノ酸配列が得られ、３２の重剰性を
もつ長さ１７塩基の混合プローブの合成に６アミノ酸の
配列を選んだ。 【００５８】ポリヌクレオチドキナーゼと〔γ−32Ｐ〕
ＡＴＰでプローブに末端標識を付け、Ｍ−７ジーンバン
ク用に構築された組替えプラスミドを含有する細菌集落
にハイブリダイズさせた。集落のフィルターは、ハナハ
ン（Ｈａｎａｈａｎ）及びメセルソン（Ｍｅｓｅｌｓｏ
ｎ）（１９８０年）Ｇｅｎｅ １０巻６３−６７頁に従
ってつくられた。陽性集落は、オートラジオグラフィに
よって確認された。七つの陽性クローン（代表としてｐ
ＣＨ−Ｂ３）から単離された組替えプラスミドは、Ｂａ
ｍＨＩ位置に挿入された５．８kb（キロ塩基対）のＤＮ
Ａ断片をもつことがわかった。 【００５９】ｐＣＨ−Ｂ３のウェスタン・ブロット〔バ
ーネット・ダブリュー・エヌ（Ｂｕｒｎｅｔｔｅ，Ｗ．
Ｎ．）〔１９８１年〕Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１
２巻１９５頁〕は、ウサギ抗Ｍ−７結晶抗血清を用い
て、一夜培養基のＳＤＳ−ＰＡＧＥで行なった。約８６
キロダルトンの蛋白質が確認された。従って、クローン
ｐＣＨ−Ｂ３は、Ｍ−７からの結晶蛋白質による血清学
的身元証明のある蛋白質に対するコードをもつＭ−７
ＤＮＡ断片を含有している。組替え蛋白質は、所定のプ
ラスミド構築で転写及び／又は翻訳の停止信号が入手で
きないため、溶解化されたＭ−７結晶からの毒素より大
きいこともありうる。 【００６０】Ｂ．ｔ．ｓｄ毒素遺伝子を暗号化したヌク
レオチド配列を配列番号：１に示す。演えき的に導かれ
たアミノ酸配列を配列番号：２に示す。この技術で周知
のように、蛋白質のアミノ酸配列はＤＮＡのヌクレオチ
ド配列によって決まる。遺伝暗号の縮重性のため、すな
わち蛋白質をつくるために用いられるアミノ酸のほとん
どに対して、一つ以上の暗号化ヌクレオチドトリプレッ
ト（コードン）を使用できるため、ある特定のアミノ酸
に対して異なるヌクレオチド配列が暗号化できる。この
ため、遺伝暗号を次のように表わすことができる。 【００６１】 【表２】 【００６２】かぎ：各３文字のデオキシヌクレオチドト
リプレットは、左に５′−末端、右に３′−末端をもつ
ｍＲＮＡのトリヌクレオチドに対応している。本明細書
に記載のＤＮＡ配列は、いずれもｍＲＮＡの配列に対応
する配列のＤＮＡ鎖のものであって、但しウラシルには
チミンが置き変わる。文字はデオキシヌクレオチド配列
を形成するプリン又はピリミジン塩基を表わしている。 【００６３】 【表３】【００６４】以上は、Ｍ−７毒素又は他の有用な蛋白質
の新規なアミノ酸配列が、蛋白質の同じアミノ酸配列を
暗号化した同等なヌクレオチド配列によってつくられる
ことを示す。従って本発明は、このような同等なヌクレ
オチド配列を包含している。更に、アミノ酸配列を変更
しても蛋白質の二次構造が変化しないならば、確認され
た構造と機能の蛋白質をこのような変更によって構築で
きることがわかった〔カイザー・イー・ティー（Ｋａｉ
ｓｅｒ，Ｅ．Ｔ．）及びケズディ・エフ・ジェイ（Ｋｅ
ｚｄｙ，Ｆ．Ｊ．）〔１９８４年〕Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
２３巻２４９−２５５頁〕。このように本発明は、蛋白
質の二次構造を変更しないか、又は構造が変更される場
合でも生物活性が同程度に保持されるような、本明細書
に記載のアミノ酸配列の突然変異物を包含している。な
お、本発明においてアミノ酸配列の突然変異物とは、配
列番号：２に示すアミノ酸配列に対して、本件出願前に
周知であった部位特定変異誘発法等により可能な程度で
１又は数個のアミノ酸の付加、欠失及び／又は他のアミ
ノ酸による置換により変異しており且つ所定の毒性を維
持しているアミノ酸配列を意味する。 【００６５】実施例３ クローンｐＣＨ−Ｂ３によるＭ
−７毒素蛋白質の生産 ｐＣＨ−Ｂ３培養基２０リットル（アンピシリン７０μ
ｇ／mlを含有するＬ−ブロス）を醗酵容器中で生育さ
せ、ＯＤ６００＝３．３５で取り入れた。細胞ペレット
を水洗し、リゾチーム２ｇ，１mM ＰＭＳＦ（弗化フェ
ニルメチルスルホニル）、１mM ＴＰＣＫ（１−トシル
アミド−２−フェニルエチルクロロメチルケトン）及び
ＤＮａｓｅ Ｉ５００μｇを含有するグリシン緩衝液
（０．１Ｍグリシン、トリス塩基によりpH８．０）５０
０mlに再懸濁し、室温で３０分培養した。次にpHをＮａ
ＯＨで１０に上げ、ビードビーター（バイオスペック・
プロダクツ社、オクラホマ州バートルスビル）により、
氷上で３０秒の打撃を５分間隔で４回与えて細胞を破裂
させた。次に抽出液を１０，０００xGで３０分遠心分離
した。 【００６６】実施例４ クローンｐＣＨ−Ｂ３でつくら
れるＭ−７毒素蛋白質の単離及び精製 アフィニティークロマトグラフィ〔クァトレカサ・ビー
（Ｃｕａｔｒｅｃａｓａ，Ｐ．）及びアンフィンセン・
シー・ビー（Ａｎｆｉｎｓｅｎ，Ｃ．Ｂ．）〔１９７１
年〕Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２２巻〔ダブリ
ュー・ビー・ジャコビー編、アカデミックプレス社、ニ
ューヨーク〕を用いて、ｐＣＨ−Ｂ３からの蛋白質を次
のように精製した。クァトレカサ及びアンフィンセンの
記述のとおりに、臭化シアンでセファロースを活性化し
た。 【００６７】活性化したセファロースにうさぎ抗Ｍ−７
結晶血清を添加し、たえずかきまぜながら室温で一夜培
養した。アフィニティー樹脂を１％エタノールアミン、
３ＭＮａＣｌ，pH９．２で洗い、次に０．０２％ナトリ
ウムアジドを含有するＴＢＳ（０．０２Ｍ トリス−Ｈ
Ｃｌ，０．０７Ｍ ＮａＣｌ，pH７．５）で洗った。１
mM ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、１mM ＰＭ
ＳＦ，１mM ＴＰＣＫ、及び０．０２％ナトリウムアジ
ドを含有するpH１０（トリス塩基で）の０．１Ｍグリシ
ン中でカラムを平衡化した。 【００６８】上のように調製した大腸菌抽出液をカラム
に装填し、４℃で６４時間再循環させた。抽出液を１Ｍ
ＮａＣｌ及び０．１Ｍグリシン−トリス（pH１０）で
カラムから洗い、結合Ｍ−７毒素を３Ｍ過塩素酸ナトリ
ウム、０．１Ｍグリシン−トリス（pH１０）でカラムか
ら除去した。次にＭ−７毒素を水に対して透析し濃縮し
た（マイクロプロＤ：コン、ピアース・ケミカル社、イ
リノイ州ロックフォード）。植生を保護するため、精製
されたＭ−７毒素を、出没する鞘翅目の甲虫に感受性の
ある植生に投与（施用）できる。この技術で周知の適当
な被覆剤を用いて、Ｍ−７毒素を環境的に安定化させる
のが有利である。 【００６９】実施例５ シュードモナス・フルオレッセ
ンスへのＭ−７毒素遺伝子の二次クローン化及び発現 Ｍ−７毒素遺伝子をもつ５．８kb ＤＮＡ断片をプラス
ミドｐＣＨ−Ｂ３からＢａｍＨＩで切り取り、精製し、
プラスミドｐＲＯ１６１４のＢａｍＨＩ位置へ二次クロ
ーン化した。シュードモナス・フルオレッセンスをこの
プラスミドで形質転換した。組み替えシュードモナス細
胞によるＭ−７毒素の発現は、ウェスタン・ブロットで
の確認によって証明された。 【００７０】実施例６ バシラス・スリンギエンシス菌
株サンディエゴ、ＮＲＲＬ Ｂ−１５９３９、の胞子及
び結晶の試験 上に記述されたとおりに得られるバシラス・スリンギエ
ンシス菌株サンディエゴ、ＮＲＲＬ Ｂ−１５９３９、
の胞子と結晶を種々の昆虫に対して試験した。試験され
た昆虫種と結果の要約は、表４に一覧されている。 【００７１】Ｄ．ウンデシムプンクタータ（西部班点ウ
リハムシ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｓｐｏｔｔｅｄ ｃｕｃｕ
ｍｂｅｒ ｂｅｅｔｌｅ，ＷＳＣＢ）の活性についての
試験に使用される方法は、噴霧塔装置内でレタス葉のデ
ィスクへ胞子／結晶懸濁液を噴霧することからなる。
（この昆虫種の幼虫はレタス葉で生育する。）層流フー
ド内で噴霧液を乾燥し、容器内の湿ったろ紙上に置い
た。ＷＳＣＢの幼虫１０匹を加え、容器を２５℃，１４
時間の光周期で培養した。新しく処理したディスクを必
要に応じて加えた。食物接種の抑制が認められ、５日と
７日に死亡率を記録した。２回の生物検定の結果を第２
表に示す。 【００７２】ピラルタ・ルテオラ（Ｐｙｒｒｈａｌｔａ
ｌｕｔｅｏｌａ、ニレハムシ）に対するＭ−７毒素の
活性を試験するために、Ｍ−７結晶から溶解化された蛋
白質をニレの葉に施用した。次に乾燥した葉を容器内の
湿った砂の上に置いた。Ｐ．ルテオラ幼虫５〜１０匹を
加え、容器を室温で培養した。３日と５日に死亡率を記
録した。葉表面のcm2 当り毒素１２０ngのＬＣ50をこれ
らの検定から計算した。 【００７３】 【表４】 【００７４】 【表５】【００７５】 【表６】 【００７６】 【表７】【００７７】 【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：１９３２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ 配 列 ATGAATCCGA ACAATCGAAG TGAACATGAT ACAATAAAAA CTACTGAAAA TAATGAGGTG 60 CCAACTAACC ATGTTCAATA TCCTTTAGCG GAAACTCCAA ATCCAACACT AGAAGATTTA 120 AATTATAAAG AGTTTTTAAG AATGACTGCA GATAATAATA CGGAAGCACT AGATAGCTCT 180 ACAACAAAAG ATGTCATTCA AAAAGGCATT TCCGTAGTAG GTGATCTCCT AGGCGTAGTA 240 GGTTTCCCGT TTGGTGGAGC GCTTGTTTCG TTTTATACAA ACTTTTTAAA TACTATTTGG 300 CCAAGTGAAG ACCCGTGGAA GGCTTTTATG GAACAAGTAG AAGCATTGAT GGATCAGAAA 360 ATAGCTGATT ATGCAAAAAA TAAAGCTCTT GCAGAGTTAC AGGGCCTTCA AAATAATGTC 420 GAAGATTATG TGAGTGCATT GAGTTCATGG CAAAAAAATC CTGTGAGTTC ACGAAATCCA 480 CATAGCCAGG GGCGGATAAG AGAGCTGTTT TCTCAAGCAG AAAGTCATTT TCGTAATTCA 540 ATGCCTTCGT TTGCAATTTC TGGATACGAG GTTCTATTTC TAACAACATA TGCACAAGCT 600 GCCAACACAC ATTTATTTTT ACTAAAAGAC GCTCAAATTT ATGGAGAAGA ATGGGGATAC 660 GAAAAAGAAG ATATTGCTGA ATTTTATAAA AGACAACTAA AACTTACGCA AGAATATACT 720 GACCATTGTG TCAAATGGTA TAATGTTGGA TTAGATAAAT TAAGAGGTTC ATCTTATGAA 780 TCTTGGGTAA ACTTTAACCG TTATCGCAGA GAGATGACAT TAACAGTATT AGATTTAATT 840 GCACTATTTC CATTGTATGA TGTTCGGCTA TACCCAAAAG AAGTTAAAAC CGAATTAACA 900 AGAGACGTTT TAACAGATCC AATTGTCGGA GTCAACAACC TTAGGGGCTA TGGAACAACC 960 TTCTCTAATA TAGAAAATTA TATTCGAAAA CCACATCTAT TTGACTATCT GCATAGAATT 1020 CAATTTCACA CGCGGTTCCA ACCAGGATAT TATGGAAATG ACTCTTTCAA TTATTGGTCC 1080 GGTAATTATG TTTCAACTAG ACCAAGCATA GGATCAAATG ATATAATCAC ATCTCCATTC 1140 TATGGAAATA AATCCAGTGA ACCTGTACAA AATTTAGAAT TTAATGGAGA AAAAGTCTAT 1200 AGAGCCGTAG CAAATACAAA TCTTGCGGTC TGGCCGTCCG CTGTATATTC AGGTGTTACA 1260 AAAGTGGAAT TTAGCCAATA TAATGATCAA ACAGATGAAG CAAGTACACA AACGTACGAC 1320 TCAAAAAGAA ATGTTGGCGC GGTCAGCTGG GATTCTATCG ATCAATTGCC TCCAGAAACA 1380 ACAGATGAAC CTCTAGAAAA GGGATATAGC CATCAACTCA ATTATGTAAT GTGCTTTTTA 1440 ATGCAGGGTA GTAGAGGAAC AATCCCAGTG TTAACTTGGA CACATAAAAG TGTAGACTTT 1500 TTTAACATGA TTGATTCGAA AAAAATTACA CAACTTCCGT TAGTAAAGGC ATATAAGTTA 1560 CAATCTGGTG CTTCCGTTGT CGCAGGTCCT AGGTTTACAG GAGGAGATAT CATTCAATGC 1620 ACAGAAAATG GAAGTGCGGC AACTATTTAC GTTACACCGG ATGTGTCGTA CTCTCAAAAA 1680 TATCGAGCTA GAATTCATTA TGCTTCTACA TCTCAGATAA CATTTACACT CAGTTTAGAC 1740 GGGGCACCAT TTAATCAATA CTATTTCGAT AAAACGATAA ATAAAGGAGA CACATTAACG 1800 TATAATTCAT TTAATTTAGC AAGTTTCAGC ACACCATTCG AATTATCAGG GAATAACTTA 1860 CAAATAGGCG TCACAGGATT AAGTGCTGGA GATAAAGTTT ATATAGACAA AATTGAATTT 1920 ATTCCAGTGA AT 1932 【００７８】配列番号：２ 配列の長さ：６４４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配 列 Met Asn Pro Asn Asn Arg Ser Glu His Asp Thr Ile Lys Thr Thr Glu 5 10 15 Asn Asn Glu Val Pro Thr Asn His Val Gln Tyr Pro Leu Ala Glu Thr 20 25 30 Pro Asn Pro Thr Leu Glu Asp Leu Asn Tyr Lys Glu Phe Leu Arg Met 35 40 45 Thr Ala Asp Asn Asn Thr Glu Ala Leu Asp Ser Ser Thr Thr Lys Asp 50 55 60 Val Ile Gln Lys Gly Ile Ser Val Val Gly Asp Leu Leu Gly Val Val 65 70 75 80 Gly Phe Pro Phe Gly Gly Ala Leu Val Ser Phe Tyr Thr Asn Phe Leu 85 90 95 Asn Thr Ile Trp Pro Ser Glu Asp Pro Trp Lys Ala Phe Met Glu Gln 100 105 110 Val Glu Ala Leu Met Asp Gln Lys Ile Ala Asp Tyr Ala Lys Asn Lys 115 120 125 Ala Leu Ala Glu Leu Gln Gly Leu Gln Asn Asn Val Glu Asp Tyr Val 130 135 140 Ser Ala Leu Ser Ser Trp Gln Lys Asn Pro Val Ser Ser Arg Asn Pro 145 150 155 160 His Ser Gln Gly Arg Ile Arg Glu Leu Phe Ser Gln Ala Glu Ser His 165 170 175 Phe Arg Asn Ser Met Pro Ser Phe Ala Ile Ser Gly Tyr Glu Val Leu 180 185 190 Phe Leu Thr Thr Tyr Ala Gln Ala Ala Asn Thr His Leu Phe Leu Leu 195 200 205 Lys Asp Ala Gln Ile Tyr Gly Glu Glu Trp Gly Tyr Glu Lys Glu Asp 210 215 220 Ile Ala Glu Phe Tyr Lys Arg Gln Leu Lys Leu Thr Gln Glu Tyr Thr 225 230 235 240 Asp His Cys Val Lys Trp Tyr Asn Val Gly Leu Asp Lys Leu Arg Gly 245 250 255 Ser Ser Tyr Glu Ser Trp Val Asn Phe Asn Arg Tyr Arg Arg Glu Met 260 265 270 Thr Leu Thr Val Leu Asp Leu Ile Ala Leu Phe Pro Leu Tyr Asp Val 275 280 285 Arg Leu Tyr Pro Lys Glu Val Lys Thr Glu Leu Thr Arg Asp Val Leu 290 295 300 Thr Asp Pro Ile Val Gly Val Asn Asn Leu Arg Gly Tyr Gly Thr Thr 305 310 315 320 Phe Ser Asn Ile Glu Asn Tyr Ile Arg Lys Pro His Leu Phe Asp Tyr 325 330 335 Leu His Arg Ile Gln Phe His Thr Arg Phe Gln Pro Gly Tyr Tyr Gly 340 345 350 Asn Asp Ser Phe Asn Tyr Trp Ser Gly Asn Tyr Val Ser Thr Arg Pro 355 360 365 Ser Ile Gly Ser Asn Asp Ile Ile Thr Ser Pro Phe Tyr Gly Asn Lys 370 375 380 Ser Ser Glu Pro Val Gln Asn Leu Glu Phe Asn Gly Glu Lys Val Tyr 385 390 395 400 Arg Ala Val Ala Asn Thr Asn Leu Ala Val Trp Pro Ser Ala Val Tyr 405 410 415 Ser Gly Val Thr Lys Val Glu Phe Ser Gln Tyr Asn Asp Gln Thr Asp 420 425 430 Glu Ala Ser Thr Gln Thr Tyr Asp Ser Lys Arg Asn Val Gly Ala Val 435 440 445 Ser Trp Asp Ser Ile Asp Gln Leu Pro Pro Glu Thr Thr Asp Glu Pro 450 455 460 Leu Glu Lys Gly Tyr Ser His Gln Leu Asn Tyr Val Met Cys Phe Leu 465 470 475 480 Met Gln Gly Ser Arg Gly Thr Ile Pro Val Leu Thr Trp Thr His Lys 485 490 495 Ser Val Asp Phe Phe Asn Met Ile Asp Ser Lys Lys Ile Thr Gln Leu 500 505 510 Pro Leu Val Lys Ala Tyr Lys Leu Gln Ser Gly Ala Ser Val Val Ala 515 520 525 Gly Pro Arg Phe Thr Gly Gly Asp Ile Ile Gln Cys Thr Glu Asn Gly 530 535 540 Ser Ala Ala Thr Ile Tyr Val Thr Pro Asp Val Ser Tyr Ser Gln Lys 545 550 555 560 Tyr Arg Ala Arg Ile His Tyr Ala Ser Thr Ser Gln Ile Thr Phe Thr 565 570 575 Leu Ser Leu Asp Gly Ala Pro Phe Asn Gln Tyr Tyr Phe Asp Lys Thr 580 585 590 Ile Asn Lys Gly Asp Thr Leu Thr Tyr Asn Ser Phe Asn Leu Ala Ser 595 600 605 Phe Ser Thr Pro Phe Glu Leu Ser Gly Asn Asn Leu Gln Ile Gly Val 610 615 620 Thr Gly Leu Ser Ala Gly Asp Lys Val Tyr Ile Asp Lys Ile Glu Phe 625 630 635 640 Ile Pro Val Asn
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ
Ｃ１２Ｒ 1:19）
(72)発明者 エドワード ウィルコックス
アメリカ合衆国 92025 カリフォルニ
ア州 エスコンディド マリー レーン
プレイス 2623
(56)参考文献 特開 平８−103281（ＪＰ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名)
C12N 15/00
C12P 21/02
C07K 14/325
A01N 37/18
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 １．配列番号：２に示すアミノ酸配列あるいは該アミノ
酸配列に対して１又は数個のアミノ酸の付加、欠失及び
／又は他のアミノ酸による置換により変異しているアミ
ノ酸配列であって毒性を維持しているものを有するポリ
ペプチド毒素。 ２．配列番号：２に示すアミノ酸配列あるいは該アミノ
酸配列に対して１又は数個のアミノ酸の付加、欠失及び
／又は他のアミノ酸による置換により変異しているアミ
ノ酸配列であって毒性を維持しているものを有するポリ
ペプチド毒素の製造方法であって、 前記アミノ酸配列をコードするＤＮＡを含んで成る発現
ベクターにより形質転換された細菌又は酵母を培養し；
そして該ポリペプチド毒素を回収する； ことを含んで成る方法。 ３．コレオプテラ目の甲虫類に対して毒性でありそして
バシルス・ツリンジエンシス・サンディエゴ株ＮＲＲＬ
Ｂ−１５９３９の結晶性蛋白質の免疫学的性質を有す
るポリペプチド毒素の製造方法であって、該ポリペプチ
ド毒素をコードする遺伝子を細菌又は酵母中にクローニ
ングし、そして該外来性宿主微生物により発現したポリ
ペプチド毒素を精製する、ことを含んで成る請求項２に
記載の方法。 ４．前記細菌が大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉ）である、請求項３に記載の方法。 ５．前記ポリペプチド毒素を、アフィニティーカラムを
用いて精製しそして単離する、請求項２〜４のいずれか
１項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/767,227 US4865981A (en) | 1985-08-16 | 1985-08-16 | Cloning and expression of Bacillus Thuringiensis toxin gene toxic to bettles of the order coleoptera |
| US06/874,727 US4771131A (en) | 1985-08-16 | 1986-06-16 | Cloning and expression of Bacillus thuringiensis toxin gene encoding a protein toxic to beetles of the order Coleoptera |
| US874727 | 1986-06-16 | ||
| US767227 | 1986-06-16 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61190672A Division JP2513635B2 (ja) | 1985-08-16 | 1986-08-15 | 鞘翅目の甲虫に有毒なバシラス・スリンギエンシス毒素遺伝子のクロ−ン化及び発現 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08104699A JPH08104699A (ja) | 1996-04-23 |
| JP2860319B2 true JP2860319B2 (ja) | 1999-02-24 |
Family
ID=27117881
Family Applications (4)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61190672A Expired - Lifetime JP2513635B2 (ja) | 1985-08-16 | 1986-08-15 | 鞘翅目の甲虫に有毒なバシラス・スリンギエンシス毒素遺伝子のクロ−ン化及び発現 |
| JP7265471A Expired - Fee Related JP2846608B2 (ja) | 1985-08-16 | 1995-10-13 | 殺虫性組成物 |
| JP7265387A Expired - Fee Related JP2846607B2 (ja) | 1985-08-16 | 1995-10-13 | 殺虫性組成物及びその使用 |
| JP7265417A Expired - Fee Related JP2860319B2 (ja) | 1985-08-16 | 1995-10-13 | 殺虫性ポリペプチド |
Family Applications Before (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61190672A Expired - Lifetime JP2513635B2 (ja) | 1985-08-16 | 1986-08-15 | 鞘翅目の甲虫に有毒なバシラス・スリンギエンシス毒素遺伝子のクロ−ン化及び発現 |
| JP7265471A Expired - Fee Related JP2846608B2 (ja) | 1985-08-16 | 1995-10-13 | 殺虫性組成物 |
| JP7265387A Expired - Fee Related JP2846607B2 (ja) | 1985-08-16 | 1995-10-13 | 殺虫性組成物及びその使用 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4771131A (ja) |
| EP (1) | EP0213818B1 (ja) |
| JP (4) | JP2513635B2 (ja) |
| DE (1) | DE3677431D1 (ja) |
Families Citing this family (61)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1341283C (en) * | 1985-03-28 | 2001-08-14 | Frank H. Gaertner | Biological pesticides and methods for their delivery and use |
| AU590558B2 (en) * | 1985-04-30 | 1989-11-09 | Monsanto Company | Plant-colonizing microorganisms containing the toxin gene of b. thuringiensis as a chromosomal insertion |
| US4865981A (en) * | 1985-08-16 | 1989-09-12 | Mycogen Corporation | Cloning and expression of Bacillus Thuringiensis toxin gene toxic to bettles of the order coleoptera |
| US5002765A (en) * | 1985-08-16 | 1991-03-26 | Mycogen Corporation | Cloning and expression of bacillus thuringiensis gene toxic to beetles of the order coleoptera |
| US4910136A (en) * | 1985-08-16 | 1990-03-20 | Mycogen Corporation | Cloning and expression of Bacillus thuringiensis toxin gene toxic to beetles of the order Coleoptera |
| US4853331A (en) * | 1985-08-16 | 1989-08-01 | Mycogen Corporation | Cloning and expression of Bacillus thuringiensis toxin gene toxic to beetles of the order Coleoptera |
| US5017373A (en) * | 1985-08-16 | 1991-05-21 | Mycogen Corporation | Cloning and expression of bacillus thuringiensis gene toxic to beetles of the order coleoptera |
| US4771131A (en) * | 1985-08-16 | 1988-09-13 | Mycogen Corporation | Cloning and expression of Bacillus thuringiensis toxin gene encoding a protein toxic to beetles of the order Coleoptera |
| US5229292A (en) * | 1986-07-28 | 1993-07-20 | Stine Seed Farm, Inc. | Biological control of insects using pseudomonas strains transformed with bacillus thuringiensis insect toxingene |
| TR27832A (tr) * | 1987-04-29 | 1995-08-31 | Monsanto Co | Zararli ucucu hasarata mukavim bitkiler. |
| US5024837A (en) * | 1987-05-06 | 1991-06-18 | Donovan William P | Coleopteran active microorganisms, related insecticide compositions and methods for their production and use |
| US5350689A (en) * | 1987-05-20 | 1994-09-27 | Ciba-Geigy Corporation | Zea mays plants and transgenic Zea mays plants regenerated from protoplasts or protoplast-derived cells |
| JPH02500566A (ja) * | 1987-08-17 | 1990-03-01 | プラント・ジェネティック・システムズ・エヌ・ブイ | バチルス・スリンギエンシスからのｄｎａ配列で形質転換された植物 |
| NZ226442A (en) * | 1987-10-13 | 1991-08-27 | Lubrizol Genetics Inc | Anti-coleopteran toxin and gene |
| DE68914477T2 (de) * | 1988-01-22 | 1994-11-24 | Mycogen Corp | Bacillus-thuringiensis-Hybridgen, Plasmid und transformiertes Pseudomonas fluorescens. |
| US5128130A (en) * | 1988-01-22 | 1992-07-07 | Mycogen Corporation | Hybrid Bacillus thuringiensis gene, plasmid and transformed Pseudomonas fluorescens |
| US4999192A (en) * | 1988-02-12 | 1991-03-12 | Mycogen Corporation | Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate |
| US4966765A (en) * | 1988-02-23 | 1990-10-30 | Mycogen Corporation | Novel coleopteran-active Bacillus thuringiensis isolate |
| US5055294A (en) * | 1988-03-03 | 1991-10-08 | Mycogen Corporation | Chimeric bacillus thuringiensis crystal protein gene comprising hd-73 and berliner 1715 toxin genes, transformed and expressed in pseudomonas fluorescens |
| US5133962A (en) * | 1988-03-04 | 1992-07-28 | Mycogen Corporation | Method of controlling coleopteran insects with Bacillus thuringiensis |
| US4996155A (en) * | 1988-03-04 | 1991-02-26 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis gene encoding a coleopteran-active toxin |
| US5104974A (en) * | 1988-03-04 | 1992-04-14 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis coleopteran-active toxin |
| USH875H (en) * | 1988-03-18 | 1991-01-01 | E. I. Du Pont De Nemours And Company, Inc. | Toxin-encoding nucleic acid fragments derived from a Bacillus thuringiensis subsp. israelensis gene |
| US5683691A (en) * | 1989-02-15 | 1997-11-04 | Plant Genetic Systems, N.V. | Bacillus thuringiensis insecticidal toxins |
| EP0382990A1 (en) * | 1989-02-15 | 1990-08-22 | Plant Genetic Systems, N.V. | Strains of bacillus thuringiensis |
| AU638438B2 (en) * | 1989-02-24 | 1993-07-01 | Monsanto Technology Llc | Synthetic plant genes and method for preparation |
| US5126133A (en) * | 1989-06-27 | 1992-06-30 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis isolate active against lepidopteran pests, and genes encoding novel lepidopteran-active toxins |
| US5246852A (en) * | 1989-06-27 | 1993-09-21 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis isolate active against lepidopteran pests, and genes encoding novel lepidopteran-active toxins |
| IT1231766B (it) * | 1989-08-01 | 1991-12-21 | Mini Ricerca Scient Tecnolog | Bacillus thuringiensis var. donegani, preparato o tossina da esso ottenuta aventi attivita' insetticida contro i coleotteri. |
| US5204237A (en) * | 1989-10-25 | 1993-04-20 | Mycogen Corporation | Universal and specific probes for Bacillus thuringiensis endotoxin genes |
| US5187091A (en) * | 1990-03-20 | 1993-02-16 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects |
| EP0528857B1 (en) * | 1990-04-26 | 2002-01-30 | Aventis CropScience N.V. | New bacillus thuringiensis strain and its gene encoding insecticidal toxin |
| GB9023735D0 (en) * | 1990-11-01 | 1990-12-12 | Ici Plc | Bacterial strain |
| US5264364A (en) * | 1991-01-31 | 1993-11-23 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryIIIc(B) toxin gene and protein toxic to coleopteran insects |
| ATE237679T1 (de) | 1991-02-05 | 2003-05-15 | Valent Biosciences Corp | Bacillus thuringiensis isolate |
| US5186934A (en) * | 1991-02-21 | 1993-02-16 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis gene encoding a coleopteran-active toxin |
| US5208017A (en) * | 1991-02-21 | 1993-05-04 | Mycogen Corporation | Biologically active Bacillus thuringiensis isolates |
| US5211946A (en) * | 1991-09-13 | 1993-05-18 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis isolates for controlling acarides |
| US5262158A (en) * | 1991-04-30 | 1993-11-16 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis isolates for controlling acarida |
| US5616495A (en) * | 1991-05-22 | 1997-04-01 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis gene encoding hymenopteran-active toxins |
| US5596071A (en) * | 1991-05-22 | 1997-01-21 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis toxins active against hymenopteran pests |
| WO1993003619A1 (en) * | 1991-08-19 | 1993-03-04 | Research Corporation Technologies, Inc. | Multi-targeted bacillus thuringiensis bioinsecticide |
| TW261517B (ja) * | 1991-11-29 | 1995-11-01 | Mitsubishi Shozi Kk | |
| US5308760A (en) * | 1992-01-10 | 1994-05-03 | Washington Research Foundation | Crystal proteins of Bacillus thuringiensis, genes encoding them, and host expressing them |
| CA2101610A1 (en) * | 1992-08-07 | 1994-02-08 | William D. Prevatt | Production of bacillus entomotoxins in methylotrophic yeast |
| US5262159A (en) * | 1992-08-24 | 1993-11-16 | Mycogen Corporation | Use of Bacillus thuringiensis isolates for controlling pests in the family aphididae |
| US6258356B1 (en) | 1995-02-10 | 2001-07-10 | Valent Biosciences Corp. | Methods for controlling insect pests with compositions containing Bacillus thuringiensis strains |
| US5707619A (en) | 1995-03-06 | 1998-01-13 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis isolates active against weevils |
| BR9611000A (pt) * | 1995-10-13 | 1999-12-28 | Dow Agro Sciences Llc | Seq³ência de nucleotídeos otimizada de plantas e de gene inseticida otimizada específica do milho, construção genética sintética capaz de expressão em células de plantas, planta transgênica, somente de plantas, processo de construção de uma seq³ência de gene inseticida otimizada específica de milho e promotor recombinante. |
| US6063756A (en) * | 1996-09-24 | 2000-05-16 | Monsanto Company | Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor |
| ES2229395T3 (es) | 1996-11-20 | 2005-04-16 | Monsanto Technology Llc | Endotoxinas delta de amplio espectro. |
| US6713063B1 (en) | 1996-11-20 | 2004-03-30 | Monsanto Technology, Llc | Broad-spectrum δ-endotoxins |
| US6017534A (en) | 1996-11-20 | 2000-01-25 | Ecogen, Inc. | Hybrid Bacillus thuringiensis δ-endotoxins with novel broad-spectrum insecticidal activity |
| US6121436A (en) | 1996-12-13 | 2000-09-19 | Monsanto Company | Antifungal polypeptide and methods for controlling plant pathogenic fungi |
| CN1314911A (zh) | 1998-05-01 | 2001-09-26 | 麦克西根股份有限公司 | 用dna改组优化害虫抗性基因 |
| US6551800B1 (en) * | 1999-10-26 | 2003-04-22 | The Board Of Regents, The University Texas System | Recombinant materials for production of a protein toxic to fire ants |
| US9522937B2 (en) | 2007-03-28 | 2016-12-20 | Syngenta Participations Ag | Insecticidal proteins |
| MX2009010062A (es) | 2007-03-28 | 2009-10-13 | Syngenta Participations Ag | Proteinas insecticidas. |
| US8269069B1 (en) | 2008-07-30 | 2012-09-18 | Dow Agrosciences, Llc | Modified Bacillus thuringiensis cry proteins that inhibit coleopterans |
| BRPI1007915B1 (pt) * | 2009-02-05 | 2019-05-14 | Athenix Corporation | Genes de variante axmi-r1 delta-endotoxina, vetor, célula hospedeira microbiana, polipeptídeo recombinante e seu método de produção, composição, e métodos para controlar e matar uma população de peste de coleópteros, 5 e para protegeruma planta de uma peste |
| US10465205B2 (en) | 2017-04-03 | 2019-11-05 | Monsanto Technology Llc | Insect inhibitory proteins |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1982003872A1 (en) * | 1981-04-27 | 1982-11-11 | Washington Univ | B.thuringiensis crystal protein in e.coli |
| DE3346138A1 (de) * | 1983-12-21 | 1985-07-11 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera |
| AU588557B2 (en) * | 1984-12-10 | 1989-09-21 | Monsanto Company | Insertion of the bacillus thuringiensis crystal protein gene into plant-colonizing microorganisms and their use |
| US4764372A (en) * | 1985-03-22 | 1988-08-16 | Mycogen Corporation | Compositions containing bacillus thuringiensis toxin toxic to beetles of the order coleoptera, and uses thereof |
| US4771131A (en) * | 1985-08-16 | 1988-09-13 | Mycogen Corporation | Cloning and expression of Bacillus thuringiensis toxin gene encoding a protein toxic to beetles of the order Coleoptera |
-
1986
- 1986-06-16 US US06/874,727 patent/US4771131A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-08-08 DE DE8686306151T patent/DE3677431D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-08-08 EP EP86306151A patent/EP0213818B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-08-15 JP JP61190672A patent/JP2513635B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-10-13 JP JP7265471A patent/JP2846608B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-10-13 JP JP7265387A patent/JP2846607B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-10-13 JP JP7265417A patent/JP2860319B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08103281A (ja) | 1996-04-23 |
| US4771131A (en) | 1988-09-13 |
| JPH08103282A (ja) | 1996-04-23 |
| JPS6251981A (ja) | 1987-03-06 |
| EP0213818A1 (en) | 1987-03-11 |
| JP2513635B2 (ja) | 1996-07-03 |
| EP0213818B1 (en) | 1991-02-06 |
| JP2846608B2 (ja) | 1999-01-13 |
| JP2846607B2 (ja) | 1999-01-13 |
| DE3677431D1 (de) | 1991-03-14 |
| JPH08104699A (ja) | 1996-04-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2860319B2 (ja) | 殺虫性ポリペプチド | |
| US4853331A (en) | Cloning and expression of Bacillus thuringiensis toxin gene toxic to beetles of the order Coleoptera | |
| JP3531872B2 (ja) | 鱗翅類害虫に対して活性のある新規なバランス・スリンギエンシス分離体、及び鱗翅類に活性のある新規な毒素をコートした遺伝子 | |
| JP3298103B2 (ja) | 新規なハイブリッドバシラス・スリンギエンシス遺伝子、プラスミド、及び形質転換されたシユードモナス・フルオレッセンス | |
| JP3054158B2 (ja) | 鱗翅類害虫活性のＢ．ｔ．ＰＳ８１ＧＧと命々される新規バシラス・スリンギエンシス分離体と、鱗翅類活性毒素をコードした遺伝子 | |
| JP2576912B2 (ja) | 鱗翅類害虫活性の新規バシラス・スリンギエンシス分離体と、新規な鱗翅類活性毒素をコードした遺伝子 | |
| JP2514793B2 (ja) | 生物学的殺虫剤の細胞カプセル化 | |
| JPH0558833A (ja) | 新規な双翅類害虫に活性の新規なバシラス・チユーリンゲンシス単離体 | |
| RU2225114C2 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ДНК, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛОК, КОТОРЫЙ ПРЕДСТАВЛЯЕТ СОБОЙ ИНСЕКТИЦИДНОЕ СРЕДСТВО, ИНСЕКТИЦИДНОЕ СРЕДСТВО (ВАРИАНТЫ), ШТАММ БАКТЕРИЙ Xenorhabdus nematophilus (ВАРИАНТЫ), ИНСЕКТИЦИДНАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБ БОРЬБЫ С НАСЕКОМЫМИ-ВРЕДИТЕЛЯМИ | |
| HU228475B1 (en) | Methods of controlling cutworm pests | |
| JPH07501323A (ja) | 新規な鞘翅類活性バシラスチューリンゲンシス単離体及び鞘翅類活性毒素をコードする遺伝子 | |
| US5302387A (en) | Bacillus thuringiensis isolates active against cockroaches and genes encoding cockroach-active toxins | |
| JP3388543B2 (ja) | ダニを抑制するための新規なバシルスチューリンゲンシス単離体 | |
| EP1143800B1 (en) | Biological control of nematodes | |
| US4865981A (en) | Cloning and expression of Bacillus Thuringiensis toxin gene toxic to bettles of the order coleoptera | |
| US5017373A (en) | Cloning and expression of bacillus thuringiensis gene toxic to beetles of the order coleoptera | |
| US5002765A (en) | Cloning and expression of bacillus thuringiensis gene toxic to beetles of the order coleoptera | |
| EP0767610B1 (en) | Bacillus thuringiensis isolates active against cockroaches | |
| US4910136A (en) | Cloning and expression of Bacillus thuringiensis toxin gene toxic to beetles of the order Coleoptera | |
| EP0585396B1 (en) | Novel bacillus thuringiensis isolates active against hymenopteran pests and genes encoding hymenopteran-active toxins | |
| JPH0829100B2 (ja) | 新規なハリブリッド バシルス チューリンゲンシス遺伝子プラスミド及び形質転換されたシュードモナス フルオレスセンス | |
| AU1170900A (en) | Insecticidal agents | |
| US5260058A (en) | Bacillus thuringiensis isolates active against hymenopteran pests | |
| JPH05103676A (ja) | 新規な鞘翅目活性タンパク毒素をコードしたバチルス・チユーリンゲンシス遺伝子 | |
| US5268297A (en) | Bacillus thuringiensis isolate active against hymenopteran pests and gene(s) encoding hymenopteran-active toxins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |