JP2846598B2 - 抗菌性テルペン化合物の製造法 - Google Patents
抗菌性テルペン化合物の製造法Info
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- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、稲カルスの液体培養
液に稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫病菌等の植物病
原菌の菌体抽出物を添加して、稲いもち病菌等に抗菌性
を示すテルペン化合物のファイトカサンとモミラクトン
を産生させた後、これを分離することからなる抗菌性テ
ルペン化合物のファイトカサンないしモミラクトンを高
産生率で製造する方法に関する。
液に稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫病菌等の植物病
原菌の菌体抽出物を添加して、稲いもち病菌等に抗菌性
を示すテルペン化合物のファイトカサンとモミラクトン
を産生させた後、これを分離することからなる抗菌性テ
ルペン化合物のファイトカサンないしモミラクトンを高
産生率で製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】一般に、植物は、病原菌と接触すると抵
抗性反応（過敏感反応）を示し、反応部位の周囲の組織
に病原菌に対し抗菌性を示すファイトアレキシンを産生
することが知られている。稲のファイトアレキシンとし
ては、モミラクトンＡ、Ｂ、オリザレキシンＡ、Ｂ、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｓ、サクラネチン、オリザリックアシ
ドＡ、Ｂ、オリザライドＡ、Ｂが知られており、その他
に、本発明者等が見いだした新規化合物のファイトカサ
ンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄがある。
抗性反応（過敏感反応）を示し、反応部位の周囲の組織
に病原菌に対し抗菌性を示すファイトアレキシンを産生
することが知られている。稲のファイトアレキシンとし
ては、モミラクトンＡ、Ｂ、オリザレキシンＡ、Ｂ、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｓ、サクラネチン、オリザリックアシ
ドＡ、Ｂ、オリザライドＡ、Ｂが知られており、その他
に、本発明者等が見いだした新規化合物のファイトカサ
ンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄがある。
【０００３】稲のファイトアレキシンについての、これ
までの研究成果としては、以下のようなものが例示され
る。 １）モミラクトンＡ、Ｂ（稲におけるファイトアレキシ
ンのモミラクトンの生成） Ｄ．Ｃａｒｔｗｒｉｇｈｔ，Ｐ．Ｌａｎｇｃａｋｅ，
Ｒ．Ｊ．Ｐｒｙｃｅ，Ｄ．Ｐ．Ｌｅｗｏｒｔｈｙ ａｎ
ｄ Ｊ．Ｐ．Ｒｉｄｅ：Ｎａｔｕｒｅ，２６７，５１１
−５１３（１９７７） ２）オリザレキシンＡ（いもち罹病稲葉より新規ファイ
トアレキシンのオリザレキシンＡの分離） Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ，Ｏ．Ｋｏｄａｍａ，Ｈ．Ｋａｔ
ｏ，Ｙ．Ｋｏｎｏ ａｎｄ Ｓ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ：Ａ
ｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４７，４４５−４４
７（１９８３） ３）オリザレキシンＡ，Ｂ，Ｃ（化学構造の報告、短
報） Ｙ．Ｋｏｎｏ，Ｓ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ，Ｏ．Ｋｏｄａｍ
ａ ａｎｄ Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ：Ａｇｒｉｃ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４８，２５３−２５５（１９８４） ４）オリザレキシンＡ，Ｂ，Ｃ（オリザレキシンＡ，
Ｂ，Ｃの分離、性状、稲いもち病菌に対する抗菌活性） Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ，Ｏ．Ｋｏｄａｍａ，Ｈ．Ｓｅｋ
ｉｄｏ，Ｙ．Ｋｏｎｏａｎｄ Ｓ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ：
Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４９，１６８９−
１６９４（１９８５） ５）オリザレキシンＡ，Ｂ，Ｃ（構造の詳報） Ｙ．Ｋｏｎｏ，Ｓ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ，Ｏ．Ｋｏｄａｍ
ａ，Ｈ．Ｓｅｋｉｄｏａｎｄ Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ：
Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４９，１６９５−
１７０１（１９８５） ６）オリザレキシンＤ（分離、構造、活性） Ｈ．Ｓｅｋｉｄｏ，Ｔ．Ｅｎｄｏ，Ｒ．Ｓｕｇａ，Ｏ．
Ｋｏｄａｍａ，Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ，Ｙ．Ｋｏｎｏ
ａｎｄ Ｓ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ：Ｊ．Ｐｅｓｔｉｃｉｄ
ｅ Ｓｃｉ．，１１，３６９−３７２（１９８６） ７）オリザレキシンＥ（紫外線照射稲より新規稲ファイ
トアレキシンのオリザレキシンＥの分離、構造、活性） Ｈ．Ｋａｔｏ，Ｏ．Ｋｏｄａｍａ ａｎｄ Ｔ．Ａｋａ
ｔｓｕｋａ：Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３，７
９−８１（１９９３） ８）オリザレキシンＦ（紫外線照射稲より新規稲ファイ
トアレキシンのオリザレキシンＦの分離、構造、活性） Ｈ．Ｋａｔｏ，Ｏ．Ｋｏｄａｍａ ａｎｄ Ｔ．Ａｋａ
ｔｓｕｋａ：Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６，２
９９−３０１（１９９４） ９）オリザレキシンＳ（紫外線照射稲より新規稲ファイ
トアレキシンのオリザレキシンＳの分離、構造） Ｏ．Ｋｏｄａｍａ，Ｗ．Ｘ．Ｌｉ，Ｓ．Ｔａｍｏｇａｍ
ｉ ａｎｄ Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ：Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂ
ｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５６，１００２−１
００３（１９９２） １０）サクラネチン（紫外線照射稲よりフラバノン骨格
ファイトアレキシンの分離と稲いもち病菌に対する活
性） Ｏ．Ｋｏｄａｍａ，Ｊ．Ｍｉｙａｋａｗａ，Ｔ．Ａｋａ
ｔｓｕｋａ ａｎｄＳ．Ｋｉｙｏｓａｗａ：Ｐｈｙｔｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１，３８０７−３８０９（１９
９２） １１）オリザライドＡ（稲白葉枯れ病抵抗性品種稲葉か
ら稲白葉枯れ病菌に抗菌性のあるオリザライドＡの分離
短報） Ｍ．Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｙ．Ｓａｋａｉ，Ｔ．Ｔｅｒａ
ｏｋａ，Ｈ．Ａｂｅ，Ｙ．Ｋｏｎｏ，Ｊ．Ｕｚａｗａ，
Ｋ．Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｙ．Ｓｕｚｕｋｉａｎｄ
Ａ．Ｓａｋｕｒａｉ：Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，５４，１１０３−１１０５（１９９０） １２）オリザライドＡ，Ｂ，オリザリックアシドＡ（稲
白葉枯れ病抵抗性品種稲葉から稲白葉枯れ病菌に抗菌性
のあるオリザライドＡ，Ｂ，オリザリックアシドＡの分
離） Ｙ．Ｋｏｎｏ，Ｊ．Ｕｚａｗａ，Ｋ．Ｋｏｂａｙａｓｈ
ｉ，Ｙ．Ｓｕｚｕｋｉ，Ｍ．Ｕｒａｍｏｔｏ，Ａ．Ｓａ
ｋｕｒａｉ，Ｍ．Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｔ．Ｔｅｒａｏｋ
ａ，Ｄ．Ｈｏｓｏｋａｗａ，Ｍ．Ｗａｔａｎａｂｅ ａ
ｎｄ Ｈ．Ｋｏｎｄｏ：Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，５５，８０３−８１１（１９９１） １３）オリザリックアシドＢ（オリザリックアシドＢ及
び関連のＡ，Ｂ，Ｃ物質の構造） Ｍ．Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｙ．Ｋｏｎｏ，Ｍ．Ｗａｔａｎ
ａｂｅ，Ｊ．Ｕｚａｗａ，Ｔ．Ｔｅｒａｏｋａ，Ｄ．Ｈ
ｏｓｏｋａｗａ，Ｙ．Ｓｕｚｕｋｉ，Ａ．Ｓａｋｕｒａ
ｉ ａｎｄ Ｍ．Ｔｅｒａｇｕｃｈｉ：Ｂｉｏｓｃｉ．
Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５６，１１３−１
１７（１９９２） １４）オステオスペルマム（Ｏｓｔｅｏｓｐｅｒｍｕ
ｍ）種植物のジテルペン化合物（ファイトアレキシンで
はないが、ファイトカサンと同じカサン（ｃａｓｓａｎ
ｅ）骨格を有する化合物。但し、ファイトカサンとは構
造が異なっており、また、生理活性についての記載は何
もない） Ｆｅｒｄｉｎａｎｄ Ｂｏｈｌｍａｎｎ，Ｍｉｃｈａｅ
ｌ Ｗａｌｌｍｙｅｒ，Ｊａｓｍｉｎ Ｊａｋｕｐｏｖ
ｉｃ ａｎｄ Ｊｕｒｇｅｎ Ｚｉｅｓｃｈｅ：Ｐｈｙ
ｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２２（７），１６４５−１６
５１（１９８３） １５）ファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ（稲いもち病菌及
び稲紋枯れ病菌に対する活性、化学構造） 特願平７−４３５２０号
までの研究成果としては、以下のようなものが例示され
る。 １）モミラクトンＡ、Ｂ（稲におけるファイトアレキシ
ンのモミラクトンの生成） Ｄ．Ｃａｒｔｗｒｉｇｈｔ，Ｐ．Ｌａｎｇｃａｋｅ，
Ｒ．Ｊ．Ｐｒｙｃｅ，Ｄ．Ｐ．Ｌｅｗｏｒｔｈｙ ａｎ
ｄ Ｊ．Ｐ．Ｒｉｄｅ：Ｎａｔｕｒｅ，２６７，５１１
−５１３（１９７７） ２）オリザレキシンＡ（いもち罹病稲葉より新規ファイ
トアレキシンのオリザレキシンＡの分離） Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ，Ｏ．Ｋｏｄａｍａ，Ｈ．Ｋａｔ
ｏ，Ｙ．Ｋｏｎｏ ａｎｄ Ｓ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ：Ａ
ｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４７，４４５−４４
７（１９８３） ３）オリザレキシンＡ，Ｂ，Ｃ（化学構造の報告、短
報） Ｙ．Ｋｏｎｏ，Ｓ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ，Ｏ．Ｋｏｄａｍ
ａ ａｎｄ Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ：Ａｇｒｉｃ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４８，２５３−２５５（１９８４） ４）オリザレキシンＡ，Ｂ，Ｃ（オリザレキシンＡ，
Ｂ，Ｃの分離、性状、稲いもち病菌に対する抗菌活性） Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ，Ｏ．Ｋｏｄａｍａ，Ｈ．Ｓｅｋ
ｉｄｏ，Ｙ．Ｋｏｎｏａｎｄ Ｓ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ：
Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４９，１６８９−
１６９４（１９８５） ５）オリザレキシンＡ，Ｂ，Ｃ（構造の詳報） Ｙ．Ｋｏｎｏ，Ｓ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ，Ｏ．Ｋｏｄａｍ
ａ，Ｈ．Ｓｅｋｉｄｏａｎｄ Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ：
Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４９，１６９５−
１７０１（１９８５） ６）オリザレキシンＤ（分離、構造、活性） Ｈ．Ｓｅｋｉｄｏ，Ｔ．Ｅｎｄｏ，Ｒ．Ｓｕｇａ，Ｏ．
Ｋｏｄａｍａ，Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ，Ｙ．Ｋｏｎｏ
ａｎｄ Ｓ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ：Ｊ．Ｐｅｓｔｉｃｉｄ
ｅ Ｓｃｉ．，１１，３６９−３７２（１９８６） ７）オリザレキシンＥ（紫外線照射稲より新規稲ファイ
トアレキシンのオリザレキシンＥの分離、構造、活性） Ｈ．Ｋａｔｏ，Ｏ．Ｋｏｄａｍａ ａｎｄ Ｔ．Ａｋａ
ｔｓｕｋａ：Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３，７
９−８１（１９９３） ８）オリザレキシンＦ（紫外線照射稲より新規稲ファイ
トアレキシンのオリザレキシンＦの分離、構造、活性） Ｈ．Ｋａｔｏ，Ｏ．Ｋｏｄａｍａ ａｎｄ Ｔ．Ａｋａ
ｔｓｕｋａ：Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６，２
９９−３０１（１９９４） ９）オリザレキシンＳ（紫外線照射稲より新規稲ファイ
トアレキシンのオリザレキシンＳの分離、構造） Ｏ．Ｋｏｄａｍａ，Ｗ．Ｘ．Ｌｉ，Ｓ．Ｔａｍｏｇａｍ
ｉ ａｎｄ Ｔ．Ａｋａｔｓｕｋａ：Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂ
ｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５６，１００２−１
００３（１９９２） １０）サクラネチン（紫外線照射稲よりフラバノン骨格
ファイトアレキシンの分離と稲いもち病菌に対する活
性） Ｏ．Ｋｏｄａｍａ，Ｊ．Ｍｉｙａｋａｗａ，Ｔ．Ａｋａ
ｔｓｕｋａ ａｎｄＳ．Ｋｉｙｏｓａｗａ：Ｐｈｙｔｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１，３８０７−３８０９（１９
９２） １１）オリザライドＡ（稲白葉枯れ病抵抗性品種稲葉か
ら稲白葉枯れ病菌に抗菌性のあるオリザライドＡの分離
短報） Ｍ．Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｙ．Ｓａｋａｉ，Ｔ．Ｔｅｒａ
ｏｋａ，Ｈ．Ａｂｅ，Ｙ．Ｋｏｎｏ，Ｊ．Ｕｚａｗａ，
Ｋ．Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｙ．Ｓｕｚｕｋｉａｎｄ
Ａ．Ｓａｋｕｒａｉ：Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，５４，１１０３−１１０５（１９９０） １２）オリザライドＡ，Ｂ，オリザリックアシドＡ（稲
白葉枯れ病抵抗性品種稲葉から稲白葉枯れ病菌に抗菌性
のあるオリザライドＡ，Ｂ，オリザリックアシドＡの分
離） Ｙ．Ｋｏｎｏ，Ｊ．Ｕｚａｗａ，Ｋ．Ｋｏｂａｙａｓｈ
ｉ，Ｙ．Ｓｕｚｕｋｉ，Ｍ．Ｕｒａｍｏｔｏ，Ａ．Ｓａ
ｋｕｒａｉ，Ｍ．Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｔ．Ｔｅｒａｏｋ
ａ，Ｄ．Ｈｏｓｏｋａｗａ，Ｍ．Ｗａｔａｎａｂｅ ａ
ｎｄ Ｈ．Ｋｏｎｄｏ：Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，５５，８０３−８１１（１９９１） １３）オリザリックアシドＢ（オリザリックアシドＢ及
び関連のＡ，Ｂ，Ｃ物質の構造） Ｍ．Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｙ．Ｋｏｎｏ，Ｍ．Ｗａｔａｎ
ａｂｅ，Ｊ．Ｕｚａｗａ，Ｔ．Ｔｅｒａｏｋａ，Ｄ．Ｈ
ｏｓｏｋａｗａ，Ｙ．Ｓｕｚｕｋｉ，Ａ．Ｓａｋｕｒａ
ｉ ａｎｄ Ｍ．Ｔｅｒａｇｕｃｈｉ：Ｂｉｏｓｃｉ．
Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５６，１１３−１
１７（１９９２） １４）オステオスペルマム（Ｏｓｔｅｏｓｐｅｒｍｕ
ｍ）種植物のジテルペン化合物（ファイトアレキシンで
はないが、ファイトカサンと同じカサン（ｃａｓｓａｎ
ｅ）骨格を有する化合物。但し、ファイトカサンとは構
造が異なっており、また、生理活性についての記載は何
もない） Ｆｅｒｄｉｎａｎｄ Ｂｏｈｌｍａｎｎ，Ｍｉｃｈａｅ
ｌ Ｗａｌｌｍｙｅｒ，Ｊａｓｍｉｎ Ｊａｋｕｐｏｖ
ｉｃ ａｎｄ Ｊｕｒｇｅｎ Ｚｉｅｓｃｈｅ：Ｐｈｙ
ｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２２（７），１６４５−１６
５１（１９８３） １５）ファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ（稲いもち病菌及
び稲紋枯れ病菌に対する活性、化学構造） 特願平７−４３５２０号
【０００４】これらのファイトアレキシンは、稲植物体
から分離されているが、モミラクトンＡ、Ｂ、オリザレ
キシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄについては稲の液体培養細胞から
分離する方法が検討されている（特願昭６３−４１９０
３）。しかしながら、当該方法は稲いもち病菌を直接接
種するものであり、稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫
病菌の菌体抽出物を用いるものではなく、当該菌体抽出
液の有効性については全く検討されておらず、また、産
生量もきわめてわずかなものであって到底実用化は望め
ないものであった。ファイトカサンは、本発明者等が見
いだした新規化合物であり、ファイトカサンＡ、Ｂ、
Ｃ、Ｄは、稲いもち病菌あるいは稲紋枯れ病菌に罹病し
た稲の抵抗性反応部位から採取できるが、その製造法を
含めてこれまで報告された例はない。また、本発明者等
がこれまでに研究したところによれば、ファイトカサン
を植物病害防除剤として利用するには、多量の稲を栽培
して病原菌を接種し、抵抗性反応部位を集め有効成分を
分離する必要があった。しかし、この方法では、植物の
栽培、病原菌の接種作業などに多大の労力がかかり、ま
た、植物体成分と有効物質の分離が煩雑であるという問
題点があった。
から分離されているが、モミラクトンＡ、Ｂ、オリザレ
キシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄについては稲の液体培養細胞から
分離する方法が検討されている（特願昭６３−４１９０
３）。しかしながら、当該方法は稲いもち病菌を直接接
種するものであり、稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫
病菌の菌体抽出物を用いるものではなく、当該菌体抽出
液の有効性については全く検討されておらず、また、産
生量もきわめてわずかなものであって到底実用化は望め
ないものであった。ファイトカサンは、本発明者等が見
いだした新規化合物であり、ファイトカサンＡ、Ｂ、
Ｃ、Ｄは、稲いもち病菌あるいは稲紋枯れ病菌に罹病し
た稲の抵抗性反応部位から採取できるが、その製造法を
含めてこれまで報告された例はない。また、本発明者等
がこれまでに研究したところによれば、ファイトカサン
を植物病害防除剤として利用するには、多量の稲を栽培
して病原菌を接種し、抵抗性反応部位を集め有効成分を
分離する必要があった。しかし、この方法では、植物の
栽培、病原菌の接種作業などに多大の労力がかかり、ま
た、植物体成分と有効物質の分離が煩雑であるという問
題点があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明者等は、上記従
来技術及び本発明者等の研究成果に鑑みて、植物成分の
製造に用いられる事が多い植物のカルス液体培養法に着
目し、稲カルス培養液に稲いもち病菌あるいはじゃがい
も疫病菌等の植物病原菌の菌体抽出物をファイトカサン
及びモミラクトン誘導物質として添加して培養する方法
を試験した結果、稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫病
菌等の植物病原菌の菌体抽出物を使用することにより、
短期間に多量のファイトカサンないしモミラクトンを容
易に高産生率で得ることが出来る事を見いだし本発明を
完成させた。
来技術及び本発明者等の研究成果に鑑みて、植物成分の
製造に用いられる事が多い植物のカルス液体培養法に着
目し、稲カルス培養液に稲いもち病菌あるいはじゃがい
も疫病菌等の植物病原菌の菌体抽出物をファイトカサン
及びモミラクトン誘導物質として添加して培養する方法
を試験した結果、稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫病
菌等の植物病原菌の菌体抽出物を使用することにより、
短期間に多量のファイトカサンないしモミラクトンを容
易に高産生率で得ることが出来る事を見いだし本発明を
完成させた。
【０００６】すなわち、本発明は、稲のカルス培養液に
稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫病菌等の植物病原菌
の菌体抽出物をファイトカサン誘導物質として添加して
ファイトカサンを産生させた後、これを分離することを
特徴とするファイトカサンの製造法を提供することを目
的とするものである。
稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫病菌等の植物病原菌
の菌体抽出物をファイトカサン誘導物質として添加して
ファイトカサンを産生させた後、これを分離することを
特徴とするファイトカサンの製造法を提供することを目
的とするものである。
【０００７】また、本発明は、稲のカルス培養液に稲い
もち病菌あるいはじゃがいも疫病菌等の植物病原菌の菌
体抽出物をモミラクトン誘導物質として添加してモミラ
クトンを産生させた後、これを分離することを特徴とす
るモミラクトンの製造法を提供することを目的とするも
のである。
もち病菌あるいはじゃがいも疫病菌等の植物病原菌の菌
体抽出物をモミラクトン誘導物質として添加してモミラ
クトンを産生させた後、これを分離することを特徴とす
るモミラクトンの製造法を提供することを目的とするも
のである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明で使用される稲の
液体培地は、炭素源、窒素源、無機塩類、ビタミン、植
物ホルモン等からなる従来から稲の組織培養に用いられ
ている培地ならいずれも使用出来るが、好ましくは、Ｄ
Ｋ培地である。これらの培地には炭素源として蔗糖等の
炭水化物が用いられ、無機塩類、窒素源として、硝酸カ
リ、硫酸アンモニュウム、塩化カルシュウム、アスパラ
ギン酸、グルタミン等が使用される。また、ビタミン類
としてはニコチン酸、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン
等が用いられる。植物ホルモンとしては、２，４−Ｄ、
カイネチン、アブシジン酸、インドール酢酸等が適宜用
いられる。
液体培地は、炭素源、窒素源、無機塩類、ビタミン、植
物ホルモン等からなる従来から稲の組織培養に用いられ
ている培地ならいずれも使用出来るが、好ましくは、Ｄ
Ｋ培地である。これらの培地には炭素源として蔗糖等の
炭水化物が用いられ、無機塩類、窒素源として、硝酸カ
リ、硫酸アンモニュウム、塩化カルシュウム、アスパラ
ギン酸、グルタミン等が使用される。また、ビタミン類
としてはニコチン酸、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン
等が用いられる。植物ホルモンとしては、２，４−Ｄ、
カイネチン、アブシジン酸、インドール酢酸等が適宜用
いられる。
【０００９】使用する稲の品種、組織部位は特に限定さ
れないが、好ましくは、こしひかりの種子より調製した
カルスである。稲カルスを形成させるには、常法に準じ
て行えばよく、特に限定されるものではないが、好適に
は、例えば、稲の種子のもみがらを除いた胚乳と胚の部
位を上記液体培地に２，４−Ｄを倍量加え、アスパラギ
ン酸、グルタミンを除いた培地により無菌的に培養すれ
ばよく、例えば、ｐＨ５．８、２５℃にて３０日間暗所
静置培養することにより、稲カルスが形成される。
れないが、好ましくは、こしひかりの種子より調製した
カルスである。稲カルスを形成させるには、常法に準じ
て行えばよく、特に限定されるものではないが、好適に
は、例えば、稲の種子のもみがらを除いた胚乳と胚の部
位を上記液体培地に２，４−Ｄを倍量加え、アスパラギ
ン酸、グルタミンを除いた培地により無菌的に培養すれ
ばよく、例えば、ｐＨ５．８、２５℃にて３０日間暗所
静置培養することにより、稲カルスが形成される。
【００１０】本発明においては、稲カルスの液体培養液
に稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫病菌等の植物病原
菌の菌体抽出物を添加して抗菌性テルペン化合物を誘導
させる。ファイトカサンの誘導物質であるいもち病菌、
じゃがいも疫病菌等の植物病原菌の菌体抽出成分の調製
方法は、好適なものを例示すると、例えば、次の通りで
ある。ライ麦液体培地（１Ｌ中、ライ麦種子６０ｇの水
抽出物とサッカロース２０ｇ、イーストエキス２ｇを含
む）にそれぞれの菌株を接種し、稲いもち病菌は２８℃
で５〜７日振盪培養、じゃがいも疫病菌は１８℃で１ヶ
月静置培養する。それぞれの培養液を濾過し、菌体を分
ける。約５０ｇの菌体に１８０ｍｌの水を加えホモジナ
イザーで磨砕し超音波で破砕後、オートクレーブ（１２
１℃、６０分）で熱分解する。分解物を遠心分離して得
られる上清液をファイトカサン誘導物質試料として用い
る。モミラクトン誘導物質も、同様にして調製すること
ができる。菌体抽出成分の調製方法は、上記方法に限ら
ず、それと同効のものであれば同様に使用できることは
云うまでもない。
に稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫病菌等の植物病原
菌の菌体抽出物を添加して抗菌性テルペン化合物を誘導
させる。ファイトカサンの誘導物質であるいもち病菌、
じゃがいも疫病菌等の植物病原菌の菌体抽出成分の調製
方法は、好適なものを例示すると、例えば、次の通りで
ある。ライ麦液体培地（１Ｌ中、ライ麦種子６０ｇの水
抽出物とサッカロース２０ｇ、イーストエキス２ｇを含
む）にそれぞれの菌株を接種し、稲いもち病菌は２８℃
で５〜７日振盪培養、じゃがいも疫病菌は１８℃で１ヶ
月静置培養する。それぞれの培養液を濾過し、菌体を分
ける。約５０ｇの菌体に１８０ｍｌの水を加えホモジナ
イザーで磨砕し超音波で破砕後、オートクレーブ（１２
１℃、６０分）で熱分解する。分解物を遠心分離して得
られる上清液をファイトカサン誘導物質試料として用い
る。モミラクトン誘導物質も、同様にして調製すること
ができる。菌体抽出成分の調製方法は、上記方法に限ら
ず、それと同効のものであれば同様に使用できることは
云うまでもない。
【００１１】カルスの培養液に上記のファイトカサン及
びモミラクトン誘導物質を添加後、数日間培養して上清
液を遠心分離する。上清液を酢酸エチル等の溶媒で抽
出、溶媒を留去して粗ファイトカサン及びモミラクトン
の混合物を得る事が出来る。ファイトカサンＡ、Ｂ、
Ｃ、Ｄの各成分量、モミラクトンＡ、Ｂの各成分量は、
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で確認するこ
とが出来、また、相当する各成分のピークを分取するこ
とによって各成分を単一に得ることが出来る。ファイト
カサンの分離のためのＨＰＬＣの条件は、以下の様であ
る。 カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ １２０Ｔ （４．６ｍｍ×３００ｍｍ） 溶媒： アセトニトリル（４５）：水（５５）（容積比） 流速： １ｍｌ／ｍｉｎ 検出器：ＵＶ ２８０ｎｍ また、モミラクトンについては、以下の様である。 カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ １２０Ｔ （４．６ｍｍ×３００ｍｍ） 溶媒： アセトニトリル（４５）：水（５５）（容積比） 流速： １ｍｌ／ｍｉｎ 検出器：ＵＶ ２１５ｎｍ
びモミラクトン誘導物質を添加後、数日間培養して上清
液を遠心分離する。上清液を酢酸エチル等の溶媒で抽
出、溶媒を留去して粗ファイトカサン及びモミラクトン
の混合物を得る事が出来る。ファイトカサンＡ、Ｂ、
Ｃ、Ｄの各成分量、モミラクトンＡ、Ｂの各成分量は、
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で確認するこ
とが出来、また、相当する各成分のピークを分取するこ
とによって各成分を単一に得ることが出来る。ファイト
カサンの分離のためのＨＰＬＣの条件は、以下の様であ
る。 カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ １２０Ｔ （４．６ｍｍ×３００ｍｍ） 溶媒： アセトニトリル（４５）：水（５５）（容積比） 流速： １ｍｌ／ｍｉｎ 検出器：ＵＶ ２８０ｎｍ また、モミラクトンについては、以下の様である。 カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ １２０Ｔ （４．６ｍｍ×３００ｍｍ） 溶媒： アセトニトリル（４５）：水（５５）（容積比） 流速： １ｍｌ／ｍｉｎ 検出器：ＵＶ ２１５ｎｍ
【００１２】本発明のファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ
は、新規物質であり、下記の一般式（Ｉ）で表されるカ
サン（ｃａｓｓａｎｅ）骨格を持つ化合物である。
は、新規物質であり、下記の一般式（Ｉ）で表されるカ
サン（ｃａｓｓａｎｅ）骨格を持つ化合物である。
【００１３】
【化１】
【００１４】本発明のファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ
は、上記培養の上清液を出発材料として、酢酸エチル、
メタノール、エタノール、アセトン等の溶媒で抽出処理
し、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラ
フィー、薄層クロマトグラフィー等の手段により精製処
理することによって単一成分のものとして単離すること
ができる。
は、上記培養の上清液を出発材料として、酢酸エチル、
メタノール、エタノール、アセトン等の溶媒で抽出処理
し、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラ
フィー、薄層クロマトグラフィー等の手段により精製処
理することによって単一成分のものとして単離すること
ができる。
【００１５】精製の具体的プロセスとしては、例えば、
溶媒で抽出した後、セップパックＣ−１８のカラムクロ
マトグラフィーによる吸着、及び溶出処理によりファイ
トカサン画分を分離し、次に、ＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ１
２０等のカラムによる高速液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）による分画、濃縮乾固操作等の精製プロセスに
より、精製、単離する方法が好適なものとして例示され
るが、該方法に限らず、他の同様の精製手段を適宜組み
合わせて実施することも可能であり、その精製プロセス
については特に限定されるものではない。
溶媒で抽出した後、セップパックＣ−１８のカラムクロ
マトグラフィーによる吸着、及び溶出処理によりファイ
トカサン画分を分離し、次に、ＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ１
２０等のカラムによる高速液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）による分画、濃縮乾固操作等の精製プロセスに
より、精製、単離する方法が好適なものとして例示され
るが、該方法に限らず、他の同様の精製手段を適宜組み
合わせて実施することも可能であり、その精製プロセス
については特に限定されるものではない。
【００１６】本発明のファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ
は、次のような性質を有する。 １）ファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは、いずれも無色の
ガム状物質で、アセトン、クロロホルム、メタノール、
エタノールに可溶であり、界面活性剤を含む水に１００
ｐｐｍ前後の濃度で溶解する。 ２）高分解能質量分析による精密分子量は、以下の通り
である。 ファイトカサンＡ：316.2052（Ｃ20 Ｈ28 Ｏ3 としての
計算値316.2065) ファイトカサンＢ（水素１原子付加したものとして）：
335.2286（Ｃ20 Ｈ31Ｏ4 としての計算値335.2223) ファイトカサンＣ：318.2164（Ｃ20 Ｈ30 Ｏ3 としての
計算値318.2133) ファイトカサンＤ：316.2048（Ｃ20 Ｈ28 Ｏ3 としての
計算値316.2065) ３）ファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは、図１〜４に示さ
れる13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。 ４）ファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは、稲いもち病菌の
胞子の発芽及び菌糸の伸長を阻害する性質を有し、これ
らを稲に施用すると、稲いもち病の発生を阻害すること
ができる。稲いもち病菌の菌糸の伸長を５０％阻害する
ファイトカサンの濃度は、ファイトカサンＡが１０ｐｐ
ｍ、ファイトカサンＢが３ｐｐｍ、ファイトカサンＣが
６ｐｐｍ、ファイトカサンＤが２０ｐｐｍである。 ５）ファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは、稲紋枯れ病菌の
菌糸の伸長を阻害する性質を有し、これらを稲に施用す
ると、稲の紋枯れ病の発生を阻害することができる。稲
紋枯れ病菌の菌糸の伸長を阻害するファイトカサンの濃
度については、ファイトカサンＡが１７ｐｐｍで菌糸の
伸長がかなり阻害され、ファイトカサンＢが１５ｐｐｍ
及びファイトカサンＣが１０ｐｐｍで菌糸の伸長が完全
に阻害される。ファイトカサンＤでは５０ｐｐｍで菌糸
の伸長がかなり阻害される。
は、次のような性質を有する。 １）ファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは、いずれも無色の
ガム状物質で、アセトン、クロロホルム、メタノール、
エタノールに可溶であり、界面活性剤を含む水に１００
ｐｐｍ前後の濃度で溶解する。 ２）高分解能質量分析による精密分子量は、以下の通り
である。 ファイトカサンＡ：316.2052（Ｃ20 Ｈ28 Ｏ3 としての
計算値316.2065) ファイトカサンＢ（水素１原子付加したものとして）：
335.2286（Ｃ20 Ｈ31Ｏ4 としての計算値335.2223) ファイトカサンＣ：318.2164（Ｃ20 Ｈ30 Ｏ3 としての
計算値318.2133) ファイトカサンＤ：316.2048（Ｃ20 Ｈ28 Ｏ3 としての
計算値316.2065) ３）ファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは、図１〜４に示さ
れる13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。 ４）ファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは、稲いもち病菌の
胞子の発芽及び菌糸の伸長を阻害する性質を有し、これ
らを稲に施用すると、稲いもち病の発生を阻害すること
ができる。稲いもち病菌の菌糸の伸長を５０％阻害する
ファイトカサンの濃度は、ファイトカサンＡが１０ｐｐ
ｍ、ファイトカサンＢが３ｐｐｍ、ファイトカサンＣが
６ｐｐｍ、ファイトカサンＤが２０ｐｐｍである。 ５）ファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは、稲紋枯れ病菌の
菌糸の伸長を阻害する性質を有し、これらを稲に施用す
ると、稲の紋枯れ病の発生を阻害することができる。稲
紋枯れ病菌の菌糸の伸長を阻害するファイトカサンの濃
度については、ファイトカサンＡが１７ｐｐｍで菌糸の
伸長がかなり阻害され、ファイトカサンＢが１５ｐｐｍ
及びファイトカサンＣが１０ｐｐｍで菌糸の伸長が完全
に阻害される。ファイトカサンＤでは５０ｐｐｍで菌糸
の伸長がかなり阻害される。
【００１７】本発明のファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ
は、稲いもち病菌の胞子の発芽及び菌糸の伸長を阻害す
る性質、稲紋枯れ病菌の菌糸の伸長を阻害する性質を有
しており、これらは、稲いもち病害防除剤、稲紋枯れ病
害防除剤の有効成分として有用である。本発明のファイ
トカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは、前記した各種の性質を有す
ることから、該化合物を適宜の形態の薬剤として稲に施
用することにより、稲いもち病の発生、稲紋枯れ病の発
生を抑制することができる。該化合物を稲に施用するた
めの薬剤の形態、その使用形態、施用方法等は、特に限
定されるものではなく、例えば、前記した稲いもち病菌
の菌糸の伸長を５０％阻害する濃度を基準として、該化
合物を有効成分とする適宜の分量及び形態の薬剤を調製
し、常法により施用すればよい。
は、稲いもち病菌の胞子の発芽及び菌糸の伸長を阻害す
る性質、稲紋枯れ病菌の菌糸の伸長を阻害する性質を有
しており、これらは、稲いもち病害防除剤、稲紋枯れ病
害防除剤の有効成分として有用である。本発明のファイ
トカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは、前記した各種の性質を有す
ることから、該化合物を適宜の形態の薬剤として稲に施
用することにより、稲いもち病の発生、稲紋枯れ病の発
生を抑制することができる。該化合物を稲に施用するた
めの薬剤の形態、その使用形態、施用方法等は、特に限
定されるものではなく、例えば、前記した稲いもち病菌
の菌糸の伸長を５０％阻害する濃度を基準として、該化
合物を有効成分とする適宜の分量及び形態の薬剤を調製
し、常法により施用すればよい。
【００１８】本発明のファイトカサンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ
は、稲の植物体内に産生される天然の物質であり、しか
も、健全植物組織によって容易に分解され、ほとんど残
留しない性質を有していることから、稲いもち病菌及び
稲紋枯れ病菌に対する高い抗菌活性を有するだけでな
く、特に、環境保全の視点からその開発が期待されてい
るいわゆる低毒性、無公害の抗菌剤として使用し得るも
のとしてその有用性はきわめて顕著なものである。
は、稲の植物体内に産生される天然の物質であり、しか
も、健全植物組織によって容易に分解され、ほとんど残
留しない性質を有していることから、稲いもち病菌及び
稲紋枯れ病菌に対する高い抗菌活性を有するだけでな
く、特に、環境保全の視点からその開発が期待されてい
るいわゆる低毒性、無公害の抗菌剤として使用し得るも
のとしてその有用性はきわめて顕著なものである。
【００１９】一方、モミラクトンＡ、Ｂは、稲種子の発
芽を抑制し、稲いもち病菌に抗菌性を示す物質として知
られているものであって、モミラクトンＡ、Ｂの分子式
と分子量は、以下に示される。 モミラクトンＡ Ｃ20Ｈ26Ｏ3 ３１４ モミラクトンＢ Ｃ20Ｈ26Ｏ4 ３３０ また、モミラクトンＡ、Ｂは、下記の化学構造を有す
る。
芽を抑制し、稲いもち病菌に抗菌性を示す物質として知
られているものであって、モミラクトンＡ、Ｂの分子式
と分子量は、以下に示される。 モミラクトンＡ Ｃ20Ｈ26Ｏ3 ３１４ モミラクトンＢ Ｃ20Ｈ26Ｏ4 ３３０ また、モミラクトンＡ、Ｂは、下記の化学構造を有す
る。
【００２０】
【化２】
【００２１】
【化３】
【００２２】モミラクトンＡ、Ｂは、前記培養の上清液
を出発材料として、前記ファイトカサンの場合と同様に
して精製することができる。後記の実施例に示されるよ
うに、モミラクトンＡ、Ｂの産生量は、従来法による
と、培養液１ｍｌ当たり０．２４５μｇ、０．８６４μ
ｇであったが、本発明によると、３．３μｇ、１０．５
μｇであり、産生量が顕著に増大し、従来、高産生率化
を達成することが困難であったモミラクトンの産生量を
大幅に改善できることが分かった。
を出発材料として、前記ファイトカサンの場合と同様に
して精製することができる。後記の実施例に示されるよ
うに、モミラクトンＡ、Ｂの産生量は、従来法による
と、培養液１ｍｌ当たり０．２４５μｇ、０．８６４μ
ｇであったが、本発明によると、３．３μｇ、１０．５
μｇであり、産生量が顕著に増大し、従来、高産生率化
を達成することが困難であったモミラクトンの産生量を
大幅に改善できることが分かった。
【００２３】
【実施例】以下、実施例で本発明を具体的に説明する。 実施例１ （稲のカルスの形成）稲（こしひかり）種子のもみがら
の部分を取り除いた胚及び胚乳部分を、７０％エタノー
ル液と１％次亜塩素酸曹達溶液で殺菌した後、ＤＫ培地
からアスパラギン酸、グルタミンを除き２，４−Ｄを２
倍量とアガロースを１％加えた培地に植えた。３０日後
にカルスが誘導されるので、これを液体培地に移す。
の部分を取り除いた胚及び胚乳部分を、７０％エタノー
ル液と１％次亜塩素酸曹達溶液で殺菌した後、ＤＫ培地
からアスパラギン酸、グルタミンを除き２，４−Ｄを２
倍量とアガロースを１％加えた培地に植えた。３０日後
にカルスが誘導されるので、これを液体培地に移す。
【００２４】（稲のカルスの増殖）稲（こしひかり）の
カルスをＤＫ培地（１Ｌ中、ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ｇ，
ＫＮＯ3 ０．８０９ｇ，（ＮＨ4 ）ＳＯ4 ０．０６
６ｇ，ＮａＨ2 ＰＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ０．３１２ｇ，Ｃａ
Ｃｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．１４８ｇ，ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2
Ｏ ０．２４６ｇ，Ｆｅ−ＥＤＴＡ ０．０２ｇ，ビタ
ミン類 ０．１０１ｇ，グリシン ２ｍｇ，アスパラギ
ン酸 ０．７ｇ，グルタミン０．７ｇ，２，４−Ｄ １
ｍｇ，その他の塩、ＭｎＳＯ4 ・４〜６Ｈ2 Ｏ，ＺｎＳ
Ｏ4 ・７Ｈ2Ｏ，ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ，Ｎａ2 ＭｏＯ
4 ・２Ｈ2 Ｏ，Ｈ3 ＢＯ3 の必要量を含む液体培地）
で、ｐＨ５．８、２５℃、１４日間、旋回培養（９０ｒ
ｐｍ，２５℃，３，０００ ｌｕｘ）して増殖させた。
このカルスを適量とり、スパーテルで細かく潰し、２０
メッシュの金網を通過するカルスのみを篩別した。
カルスをＤＫ培地（１Ｌ中、ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ｇ，
ＫＮＯ3 ０．８０９ｇ，（ＮＨ4 ）ＳＯ4 ０．０６
６ｇ，ＮａＨ2 ＰＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ０．３１２ｇ，Ｃａ
Ｃｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．１４８ｇ，ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2
Ｏ ０．２４６ｇ，Ｆｅ−ＥＤＴＡ ０．０２ｇ，ビタ
ミン類 ０．１０１ｇ，グリシン ２ｍｇ，アスパラギ
ン酸 ０．７ｇ，グルタミン０．７ｇ，２，４−Ｄ １
ｍｇ，その他の塩、ＭｎＳＯ4 ・４〜６Ｈ2 Ｏ，ＺｎＳ
Ｏ4 ・７Ｈ2Ｏ，ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ，Ｎａ2 ＭｏＯ
4 ・２Ｈ2 Ｏ，Ｈ3 ＢＯ3 の必要量を含む液体培地）
で、ｐＨ５．８、２５℃、１４日間、旋回培養（９０ｒ
ｐｍ，２５℃，３，０００ ｌｕｘ）して増殖させた。
このカルスを適量とり、スパーテルで細かく潰し、２０
メッシュの金網を通過するカルスのみを篩別した。
【００２５】（ファイトカサンの製造）篩別したカルス
を５００ｍｌの三角フラスコに入れ９０ｍｌのＤＫ培地
を加え、２日間旋回培養（９０ｒｐｍ，２５℃，３，０
００ ｌｕｘ）を行った後、培養液に無菌濾過したじゃ
がいも疫病菌の菌体抽出成分溶液１ｍｌを加え、更に４
日間旋回培養を続けた。培養終了後、培養液を遠心分離
して（１２，０００ｒｐｍ）得られた上清液に同量の酢
酸エチルを加えてファイトカサンを抽出し、抽出液を減
圧下、濃縮乾固した。濃縮物を適量とり、エタノール４
０％の液に溶解して高速液体クロマトグラフィーで分析
した結果、ファイトカサン各成分量は表１の様であっ
た。
を５００ｍｌの三角フラスコに入れ９０ｍｌのＤＫ培地
を加え、２日間旋回培養（９０ｒｐｍ，２５℃，３，０
００ ｌｕｘ）を行った後、培養液に無菌濾過したじゃ
がいも疫病菌の菌体抽出成分溶液１ｍｌを加え、更に４
日間旋回培養を続けた。培養終了後、培養液を遠心分離
して（１２，０００ｒｐｍ）得られた上清液に同量の酢
酸エチルを加えてファイトカサンを抽出し、抽出液を減
圧下、濃縮乾固した。濃縮物を適量とり、エタノール４
０％の液に溶解して高速液体クロマトグラフィーで分析
した結果、ファイトカサン各成分量は表１の様であっ
た。
【００２６】
【表１】 ファイトカサンの種類 ファイトカサンの産生量 μｇ／培養上清液１ｍｌ ファイトカサンＡ ６．３ ファイトカサンＢ ０．６ ファイトカサンＣ １５．４ ファイトカサンＤ １．２
【００２７】ファイトサカンの各成分をＨＰＬＣで分画
後、相当するピーク部分を分取して濃縮乾固した。少量
のアセトンに溶解し、ガスクロマトグラフ質量分析計で
分析した結果、それぞれの分子量に相当する分子イオン
ピークを示すマススペクトルが得られた（図５〜図
８）。なお、稲いもち病菌の菌体抽出成分を使用して同
様に実施したところ、ほぼ同様の結果が得られた。
後、相当するピーク部分を分取して濃縮乾固した。少量
のアセトンに溶解し、ガスクロマトグラフ質量分析計で
分析した結果、それぞれの分子量に相当する分子イオン
ピークを示すマススペクトルが得られた（図５〜図
８）。なお、稲いもち病菌の菌体抽出成分を使用して同
様に実施したところ、ほぼ同様の結果が得られた。
【００２８】（モミラクトンの製造）篩別したカルスを
５００ｍｌの三角フラスコに入れ９０ｍｌのＤＫ培地を
加え、２日間旋回培養（９０ｒｐｍ，２５℃，３，００
０ ｌｕｘ）を行った後、培養液に無菌濾過したじゃが
いも疫病菌の菌体抽出成分溶液１ｍｌを加え、更に４日
間旋回培養を続けた。培養終了後、培養液を遠心分離し
て（１２，０００ｒｐｍ）得られた上清液に同量の酢酸
エチルを加えてモミラクトンを抽出し、抽出液を減圧
下、濃縮乾固した。濃縮物を適量とり、エタノール４０
％の液に溶解して高速液体クロマトグラフィーで分析し
た結果、モミラクトン各成分量は表２の様であった。な
お、従来法（稲いもち病菌を直接接種する方法）により
産生されるモミラクトンＡ、Ｂの産生量は、それぞれ、
０．２４５μｇ／ｍｌ、０．８６４μｇ／ｍｌ程度であ
ることから、本発明によるモミラクトンの産生量は従来
法と比較してきわめて高産生率のものであることが分か
る。
５００ｍｌの三角フラスコに入れ９０ｍｌのＤＫ培地を
加え、２日間旋回培養（９０ｒｐｍ，２５℃，３，００
０ ｌｕｘ）を行った後、培養液に無菌濾過したじゃが
いも疫病菌の菌体抽出成分溶液１ｍｌを加え、更に４日
間旋回培養を続けた。培養終了後、培養液を遠心分離し
て（１２，０００ｒｐｍ）得られた上清液に同量の酢酸
エチルを加えてモミラクトンを抽出し、抽出液を減圧
下、濃縮乾固した。濃縮物を適量とり、エタノール４０
％の液に溶解して高速液体クロマトグラフィーで分析し
た結果、モミラクトン各成分量は表２の様であった。な
お、従来法（稲いもち病菌を直接接種する方法）により
産生されるモミラクトンＡ、Ｂの産生量は、それぞれ、
０．２４５μｇ／ｍｌ、０．８６４μｇ／ｍｌ程度であ
ることから、本発明によるモミラクトンの産生量は従来
法と比較してきわめて高産生率のものであることが分か
る。
【００２９】
【表２】 モミラクトンの種類 モミラクトンの産生量 μｇ／培養上清液１ｍｌ モミラクトンＡ ３．３ モミラクトンＢ １０．５
【００３０】モミラクトンの各成分をＨＰＬＣで分画
後、相当するピーク部分を分取して濃縮乾固した。少量
のアセトンに溶解し、ガスクロマトグラフ質量分析計で
分析した結果、それぞれの分子量に相当する分子イオン
ピークを示すマススペクトルが得られた（図９〜図１
０）。なお、稲いもち病菌の菌体抽出成分を使用して同
様に実施したところ、ほぼ同様の結果が得られた。
後、相当するピーク部分を分取して濃縮乾固した。少量
のアセトンに溶解し、ガスクロマトグラフ質量分析計で
分析した結果、それぞれの分子量に相当する分子イオン
ピークを示すマススペクトルが得られた（図９〜図１
０）。なお、稲いもち病菌の菌体抽出成分を使用して同
様に実施したところ、ほぼ同様の結果が得られた。
【００３１】
【発明の効果】本発明に係る抗菌性テルペン化合物の製
造法は液体培地を使用するので、タンク培養が可能であ
り大量の試料を調製することが可能である。また、抽出
原料としてカルス培養液の上清液を使用するため、稲植
物体に比して磨砕作業が不必要で、色素の混入も少ない
ため、抽出精製作業が容易となり大量試料の調製が容易
に行える様になった。さらに、本発明は、誘導物質とし
て稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫病菌等の植物病原
菌の菌体抽出液を使用することによって、抗菌性テルペ
ン化合物の産生量を顕著に向上させることが可能となっ
た。
造法は液体培地を使用するので、タンク培養が可能であ
り大量の試料を調製することが可能である。また、抽出
原料としてカルス培養液の上清液を使用するため、稲植
物体に比して磨砕作業が不必要で、色素の混入も少ない
ため、抽出精製作業が容易となり大量試料の調製が容易
に行える様になった。さらに、本発明は、誘導物質とし
て稲いもち病菌あるいはじゃがいも疫病菌等の植物病原
菌の菌体抽出液を使用することによって、抗菌性テルペ
ン化合物の産生量を顕著に向上させることが可能となっ
た。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明により製造されたファイトカサンＡの13
Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】本発明により製造されたファイトカサンＢの13
Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】本発明により製造されたファイトカサンＣの13
Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４】本発明により製造されたファイトカサンＤの13
Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】本発明により製造されたファイトカサンＡのマ
ススペクトルを示す。
ススペクトルを示す。
【図６】本発明により製造されたファイトカサンＢのマ
ススペクトルを示す。
ススペクトルを示す。
【図７】本発明により製造されたファイトカサンＣのマ
ススペクトルを示す。
ススペクトルを示す。
【図８】本発明により製造されたファイトカサンＤのマ
ススペクトルを示す。
ススペクトルを示す。
【図９】本発明により製造されたモミラクトンＡのマス
スペクトルを示す。
スペクトルを示す。
【図１０】本発明により製造されたモミラクトンＢのマ
ススペクトルを示す。
ススペクトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 小笠原 長宏 新潟県西蒲原郡西川町大字曽根1962番地 株式会社植物防御システム研究所内 (56)参考文献 特開 平１−218591（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−6632（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−51233（ＪＰ，Ａ) 特開 昭51−86118（ＪＰ，Ａ) 特許2668200（ＪＰ，Ｂ２) 特許2780737（ＪＰ，Ｂ２) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A01N 35/06 A01N 43/12 A01N 65/00 ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (3)
- 【請求項１】 稲カルスの液体培養液に稲いもち病菌あ
るいはじゃがいも疫病菌等の植物病原菌の菌体抽出物を
添加して抗菌性テルペン化合物を産生させた後、これを
分離することを特徴とする抗菌性テルペン化合物の製造
方法。 - 【請求項２】 抗菌性テルペン化合物が、ファイトカサ
ンＡ、Ｂ、Ｃ又はＤであることを特徴とする請求項１記
載の製造方法。 - 【請求項３】 抗菌性テルペン化合物が、モミラクトン
Ａ又はＢであることを特徴とする請求項１記載の製造方
法。
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|---|---|---|---|
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| CN96191870A CN1173898A (zh) | 1995-02-08 | 1996-02-07 | 抗菌性萜烯化合物及其制造方法 |
| PCT/JP1996/000259 WO1996024681A1 (fr) | 1995-02-08 | 1996-02-07 | Composes antifongiques a base de terpene et procedes de production |
| KR1019970705409A KR19980702014A (ko) | 1995-02-08 | 1996-02-07 | 항균성 테르펜 화합물 및 그 제조방법 |
| US08/875,760 US5849956A (en) | 1995-02-08 | 1996-02-07 | Antifungal terpene compounds and process for producing the same |
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-
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- 1995-03-20 JP JP7087396A patent/JP2846598B2/ja not_active Expired - Fee Related
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|---|---|
| JPH08259407A (ja) | 1996-10-08 |
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|---|---|---|---|
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