JP2023547661A - Ｃｄ３に結合するポリペプチド構築物 - Google Patents

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Abstract

本発明は、ポリペプチド又はポリペプチド構築物であって、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含むか又はそれからなる、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する結合ドメインを含み、ｉ）ＶＨ領域は、Ｘ１ＹＡＸ２Ｎ（ここで、Ｘ１は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｔ又はＩであり；及びＸ２は、Ｍ又はＩである）のＣＤＲ－Ｈ１配列；ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ１ＶＫＸ２（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＱであり；及びＸ２は、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥである）のＣＤＲ－Ｈ２配列；及びＨＸ１ＮＦＧＮＳＹＸ２ＳＸ３Ｘ４ＡＹ（ここで、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ３は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；及びＸ４は、Ｗ、Ｆ又はＹである）のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；ｉｉ）ＶＬ領域は、Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＸ２Ｘ３Ｘ４ＹＸ５Ｎ（ここで、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｓ又はＴであり；Ｘ３は、Ｇ又はＳであり；Ｘ４は、Ｎ又はＹであり；及びＸ５は、Ｐ又はＡである）のＣＤＲ－Ｌ１配列；Ｘ１ＴＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（ここで、Ｘ１は、Ｇ又はＡであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｄ又はＮであり；Ｘ３は、Ｆ、Ｍ又はＫであり；Ｘ４は、Ｌ又はＲであり；Ｘ５は、Ａ、Ｐ又はＶであり；及びＸ６は、Ｐ又はＳである）のＣＤＲ－Ｌ２配列；及びＸ１ＬＷＹＳＮＸ２ＷＶ（ここで、Ｘ１は、Ｖ、Ａ又はＴであり；及びＸ２は、Ｒ又はＬである）のＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；ｉｉｉ）ｉ）のＶＨ領域及び／又はｉｉ）のＶＬ領域のＣＤＲ配列の１つ以上は、ＣＤＲ－Ｈ１のＸ２４Ｖ及びＸ２４Ｆ；ＣＤＲ－Ｈ２のＤ１５及びＸ１１６Ａ；ＣＤＲ－Ｈ３のＨ１、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４及びＮ６；並びにＣＤＲ－Ｌ３のＸ１１Ｌ及びＷ３から選択される１つのアミノ酸置換又はその組合せを含む、ポリペプチド又はポリペプチド構築物に関する。本発明は、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチド、前記ポリヌクレオチドを含むベクター及び前記ポリヌクレオチド又は前記ベクターで形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞にも関する。さらに、本発明は、前記ポリペプチド又はポリペプチド構築物を産生するためのプロセス及び本発明の前記ポリペプチド又はポリペプチド構築物を含む医薬組成物も提供する。さらに、本発明は、前記ポリペプチド又はポリペプチド構築物の医学的使用及び前記ポリペプチド又はポリペプチド構築物を含むキットに関する。

Description

本発明は、ポリペプチド又はポリペプチド構築物であって、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含むか又はそれからなる、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する結合ドメインを含み、ｉ）ＶＨ領域は、Ｘ１ＹＡＸ２Ｎ（ここで、Ｘ１は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｔ又はＩであり；及びＸ２は、Ｍ又はＩである）のＣＤＲ－Ｈ１配列；ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ１ＶＫＸ２（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＱであり；及びＸ２は、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥである）のＣＤＲ－Ｈ２配列；及びＨＸ１ＮＦＧＮＳＹＸ２ＳＸ３Ｘ４ＡＹ（ここで、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ３は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；及びＸ４は、Ｗ、Ｆ又はＹである）のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；ｉｉ）ＶＬ領域は、Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＸ２Ｘ３Ｘ４ＹＸ５Ｎ（ここで、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｓ又はＴであり；Ｘ３は、Ｇ又はＳであり；Ｘ４は、Ｎ又はＹであり；及びＸ５は、Ｐ又はＡである）のＣＤＲ－Ｌ１配列；Ｘ１ＴＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（ここで、Ｘ１は、Ｇ又はＡであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｄ又はＮであり；Ｘ３は、Ｆ、Ｍ又はＫであり；Ｘ４は、Ｌ又はＲであり；Ｘ５は、Ａ、Ｐ又はＶであり；及びＸ６は、Ｐ又はＳである）のＣＤＲ－Ｌ２配列；及びＸ１ＬＷＹＳＮＸ２ＷＶ（ここで、Ｘ１は、Ｖ、Ａ又はＴであり；及びＸ２は、Ｒ又はＬである）のＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；ｉｉｉ）ｉ）のＶＨ領域及び／又はｉｉ）のＶＬ領域のＣＤＲ配列の１つ以上は、ＣＤＲ－Ｈ１のＸ２４Ｖ及びＸ２４Ｆ；ＣＤＲ－Ｈ２のＤ１５及びＸ１１６Ａ；ＣＤＲ－Ｈ３のＨ１、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４及びＮ６；並びにＣＤＲ－Ｌ３のＸ１１Ｌ及びＷ３から選択される１つのアミノ酸置換又はその組合せを含む、ポリペプチド又はポリペプチド構築物に関する。本発明は、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチド、前記ポリヌクレオチドを含むベクター及び前記ポリヌクレオチド又は前記ベクターで形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞にも関する。さらに、本発明は、前記ポリペプチド又はポリペプチド構築物を産生するためのプロセス及び本発明の前記ポリペプチド又はポリペプチド構築物を含む医薬組成物も提供する。さらに、本発明は、前記ポリペプチド又はポリペプチド構築物の医学的使用及び前記ポリペプチド又はポリペプチド構築物を含むキットに関する。
Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＣＥ）は、Ｔ細胞受容体を介して変異細胞又は感染細胞上の外来性ペプチドを認識するＴ細胞の能力を利用する。Ｔ細胞認識は、低親和性でペプチドＭＨＣ（ｐＭＨＣ）のペプチド負荷分子と相互作用するクローン型分布アルファベータ及びガンマデルタＴ細胞受容体（ＴｃＲ）によって媒介される。ＴｃＲの抗原特異的鎖は、シグナル伝達ドメインを有さず、代わりに保存されたマルチサブユニットシグナル伝達装置ＣＤ３に結合される。ＴｃＲライゲーションがシグナル伝達装置に直接伝達される機構は、Ｔ細胞生物学における基本的な関心事項である。簡潔に説明すると、細胞表面抗原結合を細胞内リン酸化シグナル伝達カスケードに変換するＣＤ３サブユニットである。これらのリン酸化事象は、サイトカイン並びにグランザイム及びパーフォリン等のエフェクタータンパク質の発現増加をもたらすＮＦＡＴ及びＮＦｋＢ等の転写因子の活性化をもたらす。腫瘍細胞上の標的抗原とＴ細胞上のＣＤ３とを同時に結合して人工免疫シナプスを形成し、最終的に前記標的抗原を発現する細胞の破壊をもたらすＴＣＥによって使用されるのは、この特徴である。
臨床的観点から、ＴＣＥは、効率的な殺細胞活性を示す必要があるだけでなく、同時に例えば管理可能な副作用プロファイルのような他の特性が望ましい。しかしながら、これらの態様は、ＴＣＥの開発に関して考慮すべき唯一のものではない。薬物開発にとって重要な他の領域は、患者前段階、すなわち例えば貯蔵寿命、生産の拡張性、溶解性、安定性及び製剤の容易さ等、患者の体外のＴＣＥの懸念特性である。換言すれば、薬学的観点からの重要な特徴は、例えば、薬物製造又は投与におけるような特定の必要性に対処するための所与のＴＣＥ又はその一部の開発可能性である。臨床的及び薬理学的観点からの要件をまとめることは、商業化に関連したＴＣＥプラットフォームの進歩にとって重要である。免疫シナプスの形成を誘導するＴＣＥを有することの生物学的複雑さを考慮すると、標的細胞の死滅を媒介する際のその有効性を維持しながら、例えば貯蔵寿命、生産の拡張性、溶解性、安定性及び製剤の容易さ等の他の特性に関してＴＣＥを操作することは、困難であり得る。
ＴＣＥの熱安定性は、患者の体内及び体外の重要な特徴である。ＴＣＥのより高い熱安定性は、引き起こされる高分子量凝集体の形成を減少させ、それにより、次いで体内で長時間活性であるが、貯蔵中により安定であるＴＣＥが提供される。さらに、高分子量凝集体の減少はまた、投与時のＴＣＥのより好ましい免疫原性プロファイルをもたらし、それにより副作用のリスクを低減することができる。
従来、ＴＣＥの抗標的及び抗ＣＤ３結合ドメインを構成するＶＨ及びＶＬドメインは、安定性を改善する焦点であった領域である。これは、ＴＣＥの一部であるＦｖに特に当てはまる。ＶＨとＶＬとの間の疎水性相互作用は、Ｆｖの安定性を強く決定すると考えられている。相互作用は、多くのＦｖにおいて、インビトロ及び／又はインビボ用途のために安定であるほど十分に強くない可能性がある。これは、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）をもたらすリンカーによるＦｖのＶドメインのカップリングをもたらした。リンカーは、Ｖドメイン（可変ドメイン）を共に保持するのに有効であることが示されているが、ｓｃＦｖを活性に保つこと又は所与の用途にとって十分に活性であることが常に有効であるとは限らず、そのため、安定性をさらに改善する必要がある。安定性を高めるための１つのアプローチは、２つのＶドメインの相互作用を増加させることにより、生物学的に活性なＦｖの安定性を、標的結合モノマーのままであるように増加させることができることである。ｓｃＦｖの安定性を改善するためのアプローチは、当技術分野で記載されているが、ＴＣＥの一部であるＦｖの安定性を改善することは、当技術分野で依然として必要とされている。
本発明は、ポリペプチド又はポリペプチド構築物であって、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含むか又はそれからなる、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する結合ドメインを含み、
ｉ）ＶＨ領域は、
Ｘ１ＹＡＸ２Ｎ（ここで、Ｘ１は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｔ又はＩであり；及びＸ２は、Ｍ又はＩである）のＣＤＲ－Ｈ１配列；
ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ１ＶＫＸ２（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＱであり；及びＸ２は、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥである）のＣＤＲ－Ｈ２配列；及び
ＨＸ１ＮＦＧＮＳＹＸ２ＳＸ３Ｘ４ＡＹ（ここで、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ３は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；及びＸ４は、Ｗ、Ｆ又はＹである）のＣＤＲ－Ｈ３配列
を含み；
ｉｉ）ＶＬ領域は、
Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＸ２Ｘ３Ｘ４ＹＸ５Ｎ（ここで、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｓ又はＴであり；Ｘ３は、Ｇ又はＳであり；Ｘ４は、Ｎ又はＹであり；及びＸ５は、Ｐ又はＡである）のＣＤＲ－Ｌ１配列；
Ｘ１ＴＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（ここで、Ｘ１は、Ｇ又はＡであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｄ又はＮであり；Ｘ３は、Ｆ、Ｍ又はＫであり；Ｘ４は、Ｌ又はＲであり；Ｘ５は、Ａ、Ｐ又はＶであり；及びＸ６は、Ｐ又はＳである）のＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
Ｘ１ＬＷＹＳＮＸ２ＷＶ（ここで、Ｘ１は、Ｖ、Ａ又はＴであり；及びＸ２は、Ｒ又はＬである）のＣＤＲ－Ｌ３配列
を含み；
ｉｉｉ）ｉ）のＶＨ領域及び／又はｉｉ）のＶＬ領域の１つ以上のＣＤＲ配列は、
ＣＤＲ－Ｈ１のＸ２４Ｖ及びＸ２４Ｆ；
ＣＤＲ－Ｈ２のＤ１５（好ましくはＥ）及びＸ１１６Ａ；
ＣＤＲ－Ｈ３のＨ１（好ましくはＡ又はＮ）、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４（好ましくはＩ）及びＮ６（好ましくはＳ又はＴ）；並びに
ＣＤＲ－Ｌ３のＸ１１Ｌ及びＷ３（好ましくはＹ）
から選択される１つ以上のアミノ酸を含む、ポリペプチド又はポリペプチド構築物に関する。
「ポリペプチド構築物」（代わりには本明細書では「化合物」とも称される）という用語は、パラトープを含むドメイン自体を含む抗原結合（又はエピトープ結合）分子を指す。本発明に関連して、ポリペプチド構築物は、天然に存在せず、操作された少なくとも１つの連続した非分枝アミノ酸鎖を含む有機ポリマーとして理解される。単一ポリペプチドであるポリペプチド構築物の例は、単一ポリペプチド鎖上に少なくとも１つの機能的標的結合ドメインを少なくとも１つの完全な機能的ＣＤ３結合ドメインと共に含むコア構造を含むＢｉＴＥ（登録商標）分子であり、これらのドメインは、例えば、異なるポリペプチド鎖上に標的結合因子とＣＤ３結合因子とを含むＸｍａｂとは異なり、いずれかの挿入ドメインなしで可撓性のあるペプチド（「リンカー」）によって直接連結されている。本発明と関連して、複数のアミノ酸鎖を含むこのようなポリペプチド構築物も同様に想定される。「ポリペプチド」という用語は、本発明の化合物の一本鎖形態と関係して使用されることが好ましいが、「ポリペプチド構築物」は、好ましくは、複数のポリペプチド鎖、例えば２つ、３つ又は４つのポリペプチド鎖を含むポリペプチドも説明するのにより適切であり得る。さらに、「ポリペプチド構築物」という用語は、１つ以上の非アミノ酸系構成成分、例えばヒト血清アルブミン等（ＨＳＡ）を含む本発明の化合物を記載するのにも適している。ポリペプチドのアミノ酸鎖は、典型的には、少なくとも５０個のアミノ酸を含み、好ましくは少なくとも１００個、２００個、３００個、４００個又は５００個のアミノ酸を含む。本発明と関連して、ポリマーのアミノ酸鎖は、アミノ酸で構成されていない実体に連結していることも想定される。
このポリペプチドは、抗体、例えば完全長の免疫グロブリン分子の構造及び／又は機能に基づいた構造的及び／又は機能的な特徴を含む。このため、ポリペプチド構築物は、その標的又は抗原に、より正確には前記標的又は標的抗原のエピトープに特異的に且つ好ましくは選択的に又は免疫特異的に結合し、且つ／又は抗体において天然に見られる重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むか、又はその抗体に由来するドメインを含む。したがって、構築物は、代わりに、天然抗体又はその断片において見られるようなパラトープ状構造及びエピトープ結合構造を含むと見なされ得る。本発明によるポリペプチド構築物は、免疫特異的標的結合を可能にする抗体、すなわち、特に指定しない限り、標的抗原上のエピトープを免疫特異的に又は免疫選択的に認識するパラトープの最小構造要件を含む。この最小要件は、例えば、少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲ（すなわちＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であり、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲ－Ｌ３とも称される）並びに／又は３つの重鎖ＣＤＲ（すなわちＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であり、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３とも称される）、好ましくは６つすべてのＣＤＲの存在によって定義され得る。このため、ポリペプチド構築物は、結合ドメインにおける３つ又は６つのＣＤＲの存在を特徴とし得、当業者は、それらのＣＤＲがパラトープ結合構造内で（どのような順序で）どこに位置するかをわかっている。ポリペプチド又はポリペプチド構築物のＣＤ３結合ドメインとの関連において、前記パラトピック結合構造は、ＣＤＲを含むＶＨ領域及びＶＬ領域の存在を特徴とする結合ドメインであると特定される。したがって、本発明によるポリペプチド／ポリペプチド構築物は、ＣＤＲを有するＶＨ領域及びＶＬ領域を含むヒトＣＤ３ε（本明細書ではＣＤ３ε又は「ＣＤ３イプシロン」とも呼ばれる）鎖の細胞外エピトープに選択的、免疫特異的及び／又は免疫選択的に結合する結合ドメインである少なくとも１つのパラトピック結合構造を含む。したがって、本発明によるポリペプチド／ポリペプチド構築物は、ヒトＣＤ３εに、免疫特異的に及び／又は免疫選択的に結合するパラトープを含む。用語「ＣＤＲ」及びその複数の「ＣＤＲ」は、３個が軽鎖可変領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３）の結合特性を構成し、３個が重鎖可変領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３）の結合特性を構成する相補性決定領域を指す。ＣＤＲは、抗体（又は構築物又は結合ドメイン）の、抗原との特異的相互作用を担う残基の大部分を含有するため、抗体分子の機能的活性に寄与し：ＣＤＲは、抗原特異性の主要な決定基である。ＣＤＲ境界及び長さの正確な定義は、異なる分類及び付番方式に依存する。したがって、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ｃｏｎｔａｃｔ又は本明細書に記載のナンバリングシステムを含む任意の他の境界定義によって参照され得る。異なる境界にもかかわらず、これらのシステムのそれぞれは、可変配列内のいわゆる「超可変領域」を構成するものにある程度の重複を有する。したがって、これらの系に従うＣＤＲの定義は、隣接するフレームワーク領域に関する長さ及び境界領域が異なる場合がある。例えば、Ｋａｂａｔ（異種間の配列可変性に基づくアプローチ）、Ｃｈｏｔｈｉａ（抗原－抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ）及び／又はＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，前掲；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１９８７，１９６：９０１－９１７；及びＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１９９６，２６２：７３２）。抗原結合部位の特性決定のためのさらに別の基準は、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用されるＡｂＭ定義である。例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂ Ｍａｎｕａｌ（Ｅｄ．：Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．ａｎｄ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）参照。２つの残基同定技術が、重複するが同一ではない領域を定義する限り、それらを組み合わせてハイブリッドＣＤＲを定義することができる。しかしながら、いわゆるＫａｂａｔシステムによるナンバリングが好ましい。本明細書で使用される「抗原結合構造」という用語は、抗原結合構造又は特定の標的抗原に対して結合活性を有するいずれかの分子を含むいずれかのポリペプチド／ポリペプチド構築物を指す。前記抗原結合構造又は抗原結合分子は、生物に由来するものに限定されず、例えば、人工的に設計された配列から生じたポリペプチドであり得る。これらの抗原結合構造又は抗原結合分子は、天然のポリペプチド、合成ポリペプチド、組換えポリペプチドなどのいずれでもあり得る。本発明による抗原結合構造は、抗原の一部に特異的に結合する、すなわちＣＤ３εのエピトープに特異的に結合するため、抗原（エピトープ）結合構造は、本明細書では広く「パラトープ構造」としても定義され得る。したがって、本発明によるポリペプチド／ポリペプチド構築物は、標的抗原／標的エピトープに好ましくは免疫特異的に又は免疫選択的に結合しているパラトープを含むドメインとしても定義され得、少なくとも１つのさらなるパラトープを含む特定の実施形態では、さらなる、異なる又は同じ標的抗原／標的エピトープに好ましく免疫特異的に又は免疫選択的に結合する。そのため、本明細書が本発明の構築物又は分子のドメインに言及するときには常に、構築物は、本明細書において、特に添付の特許請求の範囲のいずれか１つによって特定されるように、ヒトＣＤ３εに結合する少なくとも１つのパラトープ構造（又はパラトープ）を含む。特定の実施形態において、前記構築物は、ヒトＣＤ３ε又は本明細書で定義される異なる標的抗原にも結合する少なくとも１つのさらなるパラトープを含む。
本発明に従って使用される「抗体」という用語は、生物工学的又はタンパク質工学的方法又はプロセスによって生成されたラクダ抗体及び他の免疫グロブリンも含む完全長抗体を含む。これらの完全長抗体は、例えば、モノクローナル抗体、組換え抗体、キメラ抗体、脱免疫化抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体並びにマウス、ハムスター、ウサギ、ラット、ヤギ又は非ヒト霊長類などの他の種由来の抗体であり得る。
本発明の「ポリペプチド／ポリペプチド構築物」は、天然に存在する完全長免疫グロブリンの構造も含み得る。例えば、抗体構築物は、（少なくとも）２つの完全長抗体重鎖及び２つの完全長抗体軽鎖を含み得る。しかしながら、本発明によるポリペプチド／ポリペプチド構築物は、好ましくはＣＤ３結合ドメインのＶＨ領域及びＶＬ領域を連結するリンカーを含み、好ましくはｓｃＦｖをもたらし、且つ／又は他の実施形態では、パラトープを含む少なくとも１つのさらなる結合ドメインを含むことを考えると、それらは、天然に存在せず、その機能は、天然に存在する産物と著しく異なる。このために、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物は、好ましくは、ｓｃＦｖ並びに／又はいくつかの実施形態では異なる特異性及び／若しくは選択性を有する別個のパラトープ／結合ドメインを含む、人工「複合」分子である。
上述のように、本発明のポリペプチドは、１つを超えるポリペプチド鎖を含み得、すなわち２つ以上のポリペプチド鎖を含むポリペプチド、特にＣＤ３εへの免疫特異的結合を可能にする三次元タンパク質様構造を形成するポリペプチドも本発明の対象である。したがって、「ポリペプチド構築物」という用語の定義には、１つのポリペプチド鎖のみからなる分子と、２つ、３つ、４つ又はそれより多数のポリペプチド鎖であって、同一である（ホモ二量体、ホモ三量体又はホモオリゴマー）か又は異なる（ヘテロ二量体、ヘテロ三量体又はヘテロオリゴマー）かのいずれかであり得るポリペプチド鎖からなる分子とが含まれる。上述で特定された抗体及びその断片、変異体、誘導体並びにこれらに由来する構築物についての例は、とりわけ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｅｂｅｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２ｎｄ ｅｄ．２０１０；並びにＬｉｔｔｌｅ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ ２００９で説明されている。
本発明の「ポリペプチド／ポリペプチド構築物」は、ＶＨ、ＶＨＨ、ＶＬ、（ｓ）ｄＡｂ、Ｆｖ、軽鎖（ＶＬ－ＣＬ）、Ｆｄ（ＶＨ－ＣＨ１）、重鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は「ｒＩｇＧ」（重鎖と軽鎖とからなる「半抗体」）などの完全長抗体の断片も含み得るが、ＶＨ及びＶＬ領域を含むと定義されているため、上述の断片のすべてがＣＤ３ε結合ドメインに対して適用可能であるわけではないが、少なくとも１つのさらなる結合ドメインに関する実施形態に適用可能である。本発明によるポリペプチド／ポリペプチド構築物は、抗体変異体又は抗体誘導体とも呼ばれる抗体の修飾断片も含み得る。例として、ｓｃＦｖ、ジ－ｓｃＦｖ若しくはビ（ス）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ｓｃＦｖ－ジッパー、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムダイアボディ（Ｔａｎｄａｂ）、タンデムジ－ｓｃＦｖ、タンデムトリ－ｓｃＦｖ、以下のような構造：（ＶＨ－ＶＬ－ＣＨ３）２、（ｓｃＦｖ－ＣＨ３）２、（（ｓｃＦｖ）２－ＣＨ３＋ＣＨ３）、（（ｓｃＦｖ）２－ＣＨ３）又は（ｓｃＦｖ－ＣＨ３－ｓｃＦｖ）２、トリアボディ又はテトラボディなどのマルチボディ及びＶＨＨ、ＶＨ又はＶＬであり得る、選択的且つ好ましくは他の可変領域若しくは可変ドメインとは無関係に抗原又は標的に特異的に結合する単に１つの可変領域を含むナノボディ又は単一可変ドメイン抗体などの単一ドメイン抗体である構造によって具現化される「ミニボディ」が挙げられるが、これらに限定されないものの、ＶＨ及びＶＬ領域を含むと定義されているため、上述の断片のすべてがＣＤ３ε結合ドメインに対して適用可能であるわけではないが、少なくとも１つのさらなる結合ドメインに関する実施形態には適用可能である。本発明によるポリペプチド／ポリペプチド構築物のさらなる可能な形式は、クロスボディ、マキシボディ、ヘテロＦｃ構築物、モノＦｃ構築物及びｓｃＦｃ構築物である。これらの形式の例を本明細書において以下に説明する。
さらに、「ポリペプチド構築物」という用語の定義には、二価及び多価（ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ）／多価（ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ）のポリペプチド／ポリペプチド構築物並びに異なる結合ドメインを介して２種、３種又はより多種の抗原構造（エピトープ）に選択的に且つ好ましくは特異的に結合する二重特異性及び多特異性／多重特異性ポリペプチド／ポリペプチド構築物が含まれる。例えば、ポリペプチド構築物が、ある標的（ＣＤ３イプシロン）に対する２つの結合ドメインと、別の標的、例えば本明細書で後述するものに対する１つの結合ドメインとを有する場合又はその逆の場合、このポリペプチド構築物は、特異性よりも大きい結合価を有し得、いずれの場合でも、このポリペプチド構築物は、三価であり、且つ二重特異性である。一般的に、「二重特異性」という用語は、ポリペプチド構築物が少なくとも２つの異なる抗原、例えば前記ＣＤ３ε及びさらなる標的、例えば本明細書で以下に特定されるものに結合するという意味を含む。
「パラトープ」、「抗原結合ドメイン」、「エピトープ結合ドメイン」、「結合ドメイン」又は「～に結合するドメイン」という用語は、本発明と関連して、標的上の又は抗原（ここではＣＤ３）上のエピトープに選択的に且つ好ましくは特異的に又は免疫特異的に結合する／エピトープと選択的に且つ好ましくは特異的に又は免疫特異的に相互作用する／エピトープを選択的に且つ好ましくは特異的に又は免疫特異的に認識する構築物のドメインを特徴付ける。「結合ドメイン」、又は「～に結合するドメイン」、又は「ドメイン」という用語は、本発明と関連して、標的上の又は抗原上のエピトープに免疫特異的に結合する／エピトープと免疫特異的に相互作用する／エピトープを免疫特異的に認識する構築物のドメインを特徴付ける。ＣＤ３ε結合ドメイン（さらなる結果的に第２、第３などの結合ドメインを含むポリペプチド／ポリペプチド構築物の場合、第１の結合ドメインとも称される）の構造及び機能、好ましくはいずれかのさらなる結合ドメイン（例えば、細胞表面抗原、例えば腫瘍抗原等に結合する）の構造及び／又は機能も、抗体、例えば完全長免疫グロブリンポリペプチドの構造及び／又は機能に基づいている。そのため、「結合ドメイン」又は「～に結合するドメイン」は、免疫特異的標的結合を可能にする抗体の最小限の構造要件を含み得る。ＣＤ３ε結合ドメインの構造要件は、１領域当たり対応する３つのＣＤＲを有するＶＨ及びＶＬ領域を含むように指定されているが、いずれかのさらなる結合ドメインにおける前記最小構造要件は、例えば、少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲ（すなわちＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び／又は３つの重鎖ＣＤＲ（すなわちＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）、好ましくは６つのＣＤＲすべての存在によって定義され得る。「～に結合するドメイン」（又は「結合ドメイン」）は、典型的には、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体重鎖可変領域（ＶＨ）とを含み得るが、両方を含む必要はなく、ＶＨ又はＶＬの一方のみを含み得る。Ｆｄ断片は、例えば、インタクトな抗原結合ドメインの何らかの抗原結合機能を保持していることが多い。「パラトープ」、「抗原結合構造」及び「エピトープ結合構造」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原又はその部分の全体又は一部分に特異的に結合し、且つその全体又は一部分に相補的である領域を含む抗体（又は本発明による分子）の一部分も指し、すなわち、抗体は、抗原の特定の一部分にのみ結合することができる。特定の部分は、「エピトープ」と呼ばれる。抗原結合ドメインは、１つ以上の抗体可変ドメインから提供することができる。好ましくは、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体重鎖可変領域（ＶＨ）の両方を含む抗体可変領域を含有する。このような好ましい抗原結合ドメインとしては、例えば、「一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）」、「一本鎖抗体」、「Ｆｖ」、「単鎖Ｆｖ２（ｓｃＦｖ２）」、「Ｆａｂ」及び「Ｆ（ａｂ’）２」が挙げられる。ＣＤ３ε結合ドメインについて、ｓｃＦｖの形態をとることが好ましい。
「～に結合するドメイン」、「パラトープを含むドメイン」（又は「結合ドメイン」、「抗原結合構造」、「エピトープ結合構造」）の形式の例としては、別段の定義がない限り、下記が挙げられるが、これらに限定されない：完全長抗体、完全長抗体の断片（例えば、ＶＨ、ＶＨＨ、ＶＬ）、（ｓ）ｄＡｂ、Ｆｖ、軽鎖（ＶＬ－ＣＬ）、Ｆｄ（ＶＨ－ＣＨ１）、重鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は「ｒ ＩｇＧ」（「半抗体」）、抗体バリアント又は抗体誘導体、例えばｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ又はｂｉ（ｓ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ｓｃＦｖ－ジッパー、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムダイアボディ（Ｔａｎｄａｂ’ｓ）、タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、「ミニボディ」（（ＶＨ－ＶＬ－ＣＨ３）２、（ｓｃＦｖ－ＣＨ３）２、（（ｓｃＦｖ）２－ＣＨ３＋ＣＨ３）、（（ｓｃＦｖ）２－ＣＨ３）又は（ｓｃＦｖ－ＣＨ３－ｓｃＦｖ）２等の形式から選択される）、マルチボディ（例えば、トリアボディ又はテトラボディ）及び単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ、ＶＨ又はＶＬであり得る１つの可変領域のみを含むナノボディ又は単一可変ドメイン抗体）。「～に結合するドメイン」（又は「結合ドメイン」）の形式のさらなる例として、以下が挙げられる：（１）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１を含む抗体断片又は抗体バリアント（例えばＦａｂ）；（２）２個の連結されたＦａｂ断片を含む抗体断片又は抗体バリアント（例えばＦ（ａｂ’）２）；（３）ＶＨ及びＣＨ１を含む抗体断片又は抗体バリアント（例えばＦｄ）；（４）ＶＬ及びＣＬを含む抗体断片又は抗体バリアント（例えば軽鎖）；（５）ＶＬ及びＶＨを含む抗体断片又は抗体バリアント（例えばＦｖ）；（５）ＶＨドメインを有するｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；（６）重鎖及び／又は軽鎖の少なくとも３つの単離されたＣＤＲを含む抗体バリアント；並びに（７）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）。本発明に係る構築物又は結合ドメインの実施形態についての例は、例えば、国際公開第００／００６６０５号パンフレット、国際公開第２００５／０４０２２０号パンフレット、国際公開第２００８／１１９５６７号パンフレット、国際公開第２０１０／０３７８３８号パンフレット、国際公開第２０１３／０２６８３７号パンフレット、国際公開第２０１３／０２６８３３号パンフレット、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２８５号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３０２０３７号明細書、国際公開第２０１４／１４４７２２号パンフレット、国際公開第２０１４／１５１９１０号パンフレット及び国際公開第２０１５／０４８２７２号パンフレットで説明されている。本発明に関連して、パラトープは、本明細書で説明されているポリペプチドの一部であり且つ抗原を認識してこの抗原に結合する抗原部位として理解される。パラトープは、典型的は、少なくとも約５つのアミノ酸の小さい領域である。本明細書で理解されるパラトープは、典型的には、抗体由来の重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の配列の一部を含む。本発明に係るポリペプチドの各結合ドメインは、それぞれ３つが抗体由来のＶＨ配列及びＶＬ配列内に含まれる６つの相補性決定領域（ＣＤＲループ）のセットを含むパラトープを備えている。
化合物、特に本発明の構築物について、ａ）構築物は単鎖ポリペプチド若しくは単鎖構築物であり、ｂ）ＣＤ３ε結合ドメインはｓｃＦｖの形式であり、ｃ）いずれかのさらなる、例えば第２の結合ドメイン及び／若しくは第３のドメインはｓｃＦｖの形式であり、ｄ）第１及び前記さらなる、例えば前記第２及び／若しくは第３のドメインは、リンカー、好ましくはペプチドリンカー、より好ましくはグリシン／セリン又はグリシン／グルタミンリンカーを介して結合しており、且つ／又はｅ）構築物は、血清半減期の延長を提供するドメイン、例えばＦｃベースのドメイン若しくはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含むことが想定される。後者の場合、「ポリペプチド構築物」という用語は、単一より多いペプチド鎖を含むことを明らかにする好ましい実施形態である。血清半減期を延長する好ましいＦｃベースのドメイン（「ＨＬＥ」ドメインとも呼ばれる）は、各々がヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む２つのポリペプチドモノマーを含み、前記２つのポリペプチドモノマーはペプチドリンカー（例えば、配列番号１８及び１９を参照）を介して互いに融合しており；形式はＮ末端からＣ末端の順序で、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－リンカー－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３である。
本発明の構築物は、好ましくは、「インビトロ生成構築物」及び／又は「組換え構築物」である。本発明との関連において、「インビトロ生成」という用語は、結合ドメイン又は可変領域（例えば、少なくとも１つのＣＤＲ）のすべて又は部分がタンパク質チップ上の非免疫細胞選択、例えばインビトロファージディスプレイ又は候補アミノ酸配列をその抗原への結合能力に関して試験することのできるいずれかの他の方法で生成されている上述の定義による構築物を指す。したがって、この用語は、好ましくは、動物の免疫細胞におけるゲノム再編成によってのみ生成される配列を除外する。構築物の第１及び／又は第２のドメインは、既存の（モノクローナル）抗体からのＣＤＲ配列を足場に移植することによってではなく、ファージディスプレイ法又はライブラリースクリーニング法によって産生されるか、又はそれによって得ることができることが想定される。「組換え構築物」は、（とりわけ）組換えＤＮＡ技術又は遺伝子工学を用いて生成又は製造された構築物である。
本発明の構築物は、モノクローナルであることが想定される。本明細書で使用される場合、「モノクローナル」（ｍＡｂ）と称されるポリペプチド又は構築物は、実質的に均一な抗体／構築物の集団から得られ、すなわち、この集団に含まれる個々の抗体／構築物は、微量で存在し得る天然に存在する可能な変異及び／又は翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて、（特にそのアミノ酸配列に関して）同一である。モノクローナル抗体／構築物は、高度に特異的であり、抗原内の単一のエピトープを対象としており、これは、典型的には異なる決定基（又はエピトープ）を対象とする異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物と対照的である。この特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養によって合成されるため、他の免疫グロブリンによる混入を受けない点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体／構築物の特徴を示すのであり、いずれかの特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるものではない。
モノクローナル抗体の調製には、連続細胞株培養によって産生された抗体を提供するいずれかの技術を使用することができる。例えば、使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｅｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に説明されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、又は組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照されたい）によって作製され得る。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのさらなる技術の例としては、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４（１９８３），７２）及びＥＢＶ－ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５），７７－９６）が挙げられる。
次に、ハイブリドーマは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）及び表面プラズモン共鳴（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標））分析などの標準方法を用いてスクリーニングして、特定の抗原に選択的に且つ好ましくは特異的に又は免疫特異的に結合する抗体を産生する１つ以上のハイブリドーマを同定することができる。例えば、組換え抗原、その天然に存在する形態、いずれかの変異体又は断片及びこれらの抗原性ペプチドなど、いずれかの形態の関連抗原が免疫原として使用され得る。ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）システムで採用されている表面プラズモン共鳴を使用して、標的抗原のエピトープにファージ抗体／構築物が結合する効率を高めることができる（Ｓｃｈｉｅｒ，Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ７（１９９６），９７－１０５；Ｍａｌｍｂｏｒｇ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８３（１９９５），７－１３）。
構築物又は結合ドメインを作製する別の例示的方法としては、タンパク質発現ライブラリー、例えば、ファージディスプレイ又はリボソームディスプレイライブラリーのスクリーニングが挙げられる。ファージディスプレイについては、例えば、Ｌａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，２２３，４０９号明細書、Ｓｍｉｔｈ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１３１５－１３１７、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７（１９９１）で説明されている。
ディスプレイライブラリーの使用に加えて、関連抗原を使用して、非ヒト動物、例えばげっ歯類（例えば、マウス、ハムスター、ウサギ又はラットなど）を免疫化することができる。一実施形態において、非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子の少なくとも一部を含む。例えば、マウス抗体産生が欠損したマウス系統を、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）遺伝子座の大きいフラグメントを用いて改変することが可能である。ハイブリドーマ技術を用いて、所望の特異性を有する遺伝子に由来する抗原特異的モノクローナル抗体を製造及び選択し得る。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）マウス、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３－２１、米国特許出願公開第２００３－００７０１８５号明細書、国際公開第９６／３４０９６号パンフレット及び国際公開第９６／３３７３５号パンフレットを参照されたい。
モノクローナル抗体は、非ヒト動物からも得られ、次いで当技術分野で公知の組換えＤＮＡ技術を使用して、修飾、例えばヒト化、脱免疫化、キメラ化などを行うことができる。修飾された構築物又は結合ドメインの例として、非ヒト抗体／構築物のヒト化変異体、「親和性成熟化した」構築物又は結合ドメイン（例えば、Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５４，８８９－８９６（１９９２）及びＬｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０，１０８３２－１０８３７（１９９１）を参照されたい）及びエフェクター機能が変化した抗体変異体又は突然変異体（例えば、米国特許第５，６４８，２６０号明細書、前掲のＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｅｂｅｌ（２０１０）及び前掲のＬｉｔｔｌｅ（２００９）を参照されたい）が挙げられる。
免疫学において、親和性成熟とは、Ｂ細胞が免疫応答の過程中に抗原に対する親和性が高まった抗体を産生する過程である。同じ抗原への反復曝露により、宿主は連続的により高い親和性の抗体を産生する。天然のプロトタイプと同様に、インビトロ親和性成熟は、突然変異及び選択の原理に基づいている。インビトロ親和性成熟は、抗体、抗体断片、抗体変異体、構築物又は結合ドメインを最適化するためにうまく使用されてきた。ＣＤＲ内部のランダム突然変異は、放射線、化学的変異原又は誤りがちなＰＣＲを用いて導入される。加えて、遺伝的多様性は、チェイン・シャッフリング法によって増大させることができる。ファージディスプレイのようなディスプレイ法を使用した２回又は３回の突然変異及び選択により、通常、低ナノモル濃度範囲の親和性の抗体、抗体断片、抗体変異体、構築物又は結合ドメインが得られる。
本発明の構築物又は結合ドメインの好ましい種類のアミノ酸置換変異には、親抗体構造（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体構造）の超可変領域内の１つ以上の残基を置換することが関わる。概して、結果として得られた、さらなる開発のために選択された変異体は、その生成の元になった親抗体構造と比べて改善された生物学的特性を有する。そのような置換変異体を作製するための簡便な方法は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟を含む。簡潔に言えば、超可変領域のいくつかの部位（例えば、６～７箇所の部位）を変異させて、各部位に可能なすべてのアミノ酸置換を生成する。このように生成された変異体を、各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物との融合体として繊維状ファージ粒子から一価の状態で提示する。次いで、ファージにより提示された変異体を、本明細書に開示されるそれらの生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。抗原結合に大きく寄与する候補超可変領域部位（修飾のための候補）を同定するために、アラニンスキャニング突然変異誘発も実施することができる。代わりに又は加えて、抗原と構築物又は結合ドメインとの間の複合体の結晶構造の解析は、結合ドメインとその特異的抗原との間の接触点の同定に有益であり得る。そのような接触残基及び隣接残基は、本明細書中で詳述される技術による置換の候補である。そのような変異体が生成されると、変異体のパネルは、本明細書において説明されるようなスクリーニングに供され、１つ以上の関連するアッセイにおいて優れた特性を有する抗体、その抗原結合断片、構築物又は結合ドメインが、さらなる開発のために選択され得る。
本発明の構築物及び結合ドメインは、「キメラ」バージョンを特に含み、このキメラバージョンでは、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来するか又は特定の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか又は相同であり、この鎖の残部が所望の生物学的活性を示す限り、別の種に由来するか又は別の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体並びにそのような抗体の断片又はバリアント中の対応する配列と同一であるか又は相同である（米国特許第４，８１６，５６７号明細書、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））。本明細書における目的のキメラ構築物又は結合ドメインには、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿等）に由来する可変ドメイン抗原結合配列とヒト定常領域配列とを含む「霊長類化」構築物が含まれる。キメラ抗体又は構築物を作製する種々の手法が記載されている。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６８５１，１９８５、Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２，１９８５、Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．、米国特許第４，８１６，５６７号明細書；Ｂｏｓｓ ｅｔ ａｌ．、米国特許第４，８１６，３９７号明細書；Ｔａｎａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．、欧州特許第０１７１４９６号明細書、欧州特許第０１７３４９４号明細書及び英国特許第２１７７０９６号明細書を参照されたい。
抗体、ポリペプチド構築物、抗体断片、抗体変異体又は結合ドメインは、例えば、国際公開第９８／５２９７６号パンフレット又は国際公開第００／３４３１７号パンフレットに開示される方法を用いて、ヒトＴ細胞エピトープの特異的欠失（「脱免疫化」と呼ばれる方法）によっても修飾され得る。簡潔に言えば、ＭＨＣクラスＩＩに結合するペプチドに関して抗体、構築物又は結合ドメインの重鎖及び軽鎖可変領域を分析することができる。これらのペプチドは、潜在的Ｔ細胞エピトープに相当する（例えば、国際公開第９８／５２９７６号パンフレット及び国際公開第００／３４３１７号パンフレットに定義される通り）。潜在的なＴ細胞エピトープの検出には、国際公開第９８／５２９７６号パンフレット及び国際公開第００／３４３１７号パンフレットに記載される通り、「ペプチドスレッディング法」と呼ばれるコンピューターモデリング手法を適用することができ、加えて、ヒトＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドのデータベースで、ＶＨ及びＶＬ配列に存在するモチーフを検索することができる。これらのモチーフは、１８の主要なＭＨＣクラスＩｌ ＤＲアロタイプのいずれかに結合し、したがって潜在的なＴ細胞エピトープを構成する。検出された潜在的Ｔ細胞エピトープは、可変ドメイン又は可変領域内の少数のアミノ酸残基の置換によって又は好ましくは単一アミノ酸置換によって除去することができる。典型的には、保存的置換が行われる。限定されないが、多くの場合、ヒト生殖系列抗体配列中の位置に共通のアミノ酸が使用され得る。ヒト生殖細胞系配列については、例えば、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６－７９８；Ｃｏｏｋ，Ｇ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ Ｖｏｌ．１６（５）：２３７－２４２；及びＴｏｍｌｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＥＭＢＯ Ｊ．１４：１４：４６２８－４６３８において開示される。Ｖ ＢＡＳＥディレクトリ（ｗｗｗ２．ｍｒｃ－ｌｍｂ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅ／ｌｉｓｔ２．ｐｈｐ）は、ヒト免疫グロブリン可変領域配列の包括的な要覧を提供する（編纂者Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，ＬＡ．ｅｔ ａｌ．ＭＲＣ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫにより編集）。これらの配列をヒト配列の供給源として、例えばフレームワーク領域及びＣＤＲに使用することができる。例えば、米国特許第６，３００，０６４号明細書に記載されるコンセンサスヒトフレームワーク領域を使用することもできる。
「ヒト化」抗体、そのバリアント又は断片、構築物及び結合ドメインは、主としてヒト配列の免疫グロブリンをベースとし、これは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する。ほとんどの場合、ヒト化抗体、そのバリアント又は断片、構築物及び結合ドメインは、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）をベースとし、このヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）では、超可変領域又はＣＤＲからの残基が、所望の特異性、親和性、能力及び／又は生物学的活性を有する、げっ歯類（例えば、マウス、ハムスター、ラット又はウサギ）等の非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域又はＣＤＲからの残基に置き換えられる。いくつかの例において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、本明細書で使用されている「ヒト化」抗体、その変異体又は断片、構築物及び結合ドメインは、レシピエント抗体でもドナー抗体でも見られない残基も含み得る。これらの修飾は、抗体の性能をさらに改良及び最適化するために行われる。ヒト化抗体、その変異体又は断片、構築物及び結合ドメインは、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分（例えば、Ｆｃ）も含み得、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含み得る。さらなる詳細については、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３－５９６（１９９２）参照。
ヒト化抗体、その変異体又は断片、構築物及び結合ドメインを、抗原結合に直接関与しない（Ｆｖ）可変領域の配列をヒト（Ｆｖ）可変領域からの均等な配列に置き換えることにより作成し得る。そのような分子を生成するための例示的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２－１２０７；Ｏｉ ｅｔ ａｌ．（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４並びに米国特許第５，５８５，０８９号明細書、米国特許第５，６９３，７６１号明細書、米国特許第５，６９３，７６２号明細書、米国特許第５，８５９，２０５号明細書及び米国特許第６，４０７，２１３号明細書によって提供される。これらの方法は、重鎖又は軽鎖の少なくとも一方からの免疫グロブリン（Ｆｖ）可変領域のすべて又は一部をコードする核酸配列を単離すること、操作すること及び発現させることを含む。そのような核酸は、上記のように、所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマ及び他の供給源から得ることができる。次に、ヒト化抗体、そのバリアント若しくは断片、構築物又は結合ドメインをコードする組換えＤＮＡを適切な発現ベクターにクローニングし得る。
ヒト化抗体、そのバリアント又は断片、構築物及び結合ドメインを、ヒト重鎖及び軽鎖の遺伝子を発現するが、内因性マウス免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の遺伝子の発現能を有しないトランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用しても作製し得る。Ｗｉｎｔｅｒは、本明細書に記載されるヒト化分子の調製に用い得る例示的ＣＤＲグラフト方法について記載している（米国特許第５，２２５，５３９号明細書）。所与のヒト配列のＣＤＲがすべて、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部に置き換えら得るか、又はＣＤＲの一部のみが非ヒトＣＤＲに置き換えられ得る。ヒト化分子が所定の抗原に結合するのに必要な数のＣＤＲを置き換えるのみで十分である。
ヒト化抗体、そのバリアント若しくは断片、構築物又は結合ドメインを保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系列置換及び／又は復帰変異の導入により最適化し得る。そのような変化した免疫グロブリン分子は、当技術分野で公知のいくつかの技術のいずれかによって作製することができる（例えば、Ｔｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０：７３０８－７３１２，１９８３；Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，４：７２７９，１９８３；Ｏｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，９２：３－１６，１９８２及び欧州特許第２３９４００号明細書）。
ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答により、業界はキメラ抗体又は他のヒト化抗体／構築物を調製するに至った。しかしながら、特に抗体又は構築物の慢性又は多用量利用において、ある種のヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）反応が観察されるであろうことが予想される。したがって、ＨＡＭＡ又はＨＡＣＡ反応の懸念及び／又は影響をなくすために、標的に対するヒト結合ドメインを含む構築物を提供することが望ましいであろう。
そのため、一実施形態によれば、ポリペプチド構築物は、少なくとも１つのさらなる結合ドメインを有し、前記結合ドメインは、「ヒト」である。用語「ヒト抗体」、「ヒト構築物」及び「ヒト結合ドメイン」には、例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）（前掲）によって記載されているものを含む、当技術分野で公知のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に実質的に対応する、可変領域及び定常領域又はドメインなどの抗体由来領域をそれぞれ有する抗体、構築物及び結合ドメインが含まれる。本発明のヒト構築物又は結合ドメインは、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダム又は部位特異的突然変異誘発により導入されるか、又はインビボで体細胞突然変異により導入された突然変異）を、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３に含み得る。ヒト構築物又は結合ドメインは、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基に置き換えられた少なくとも１、２、３、４、５つ又はそれを超える位置を有し得る。本明細書で使用される通りのヒト抗体、構築物及び結合ドメインの定義は、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）マウス等の技術又はシステムを用いて誘導し得るもののように、抗体の人工的及び／又は遺伝的に改変されていないヒト配列のみを含む完全ヒト抗体、構築物及び結合ドメインも企図する。
少なくとも１つのヒト結合ドメインを含むポリペプチド／ポリペプチド構築物は、齧歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター又はウサギ）などの非ヒト可変及び／又は定常領域を有する抗体又は構築物に伴う問題の一部を回避する。そのような齧歯類由来タンパク質が存在すると、抗体若しくは構築物の迅速なクリアランスをもたらす可能性があるか、又は患者による抗体若しくは構築物に対する免疫応答を生じさせる可能性がある。げっ歯類由来の構築物の使用を回避するため、げっ歯類が完全ヒト抗体を産生するようにげっ歯類にヒト抗体機能を導入してヒト化又は完全ヒト構築物を作製することができる。
ＹＡＣにおいてメガベースサイズのヒト遺伝子座をクローニング及び再構築する能力並びにそれらをマウス生殖細胞系列に導入する能力は、非常に大きいか又は粗くマッピングされた遺伝子座の機能的要素の解明並びにヒト疾患の有用なモデルの作出にとって強力な手法を提供する。さらに、マウス遺伝子座をそれらのヒト均等物で置換するためのそのような技術の使用は、発生中のヒト遺伝子産物の発現及び調節、他の系とのそれらのコミュニケーション並びに疾患の誘導及び進行へのそれらの関与に対する特有の洞察を提供することができる。
そのような戦略の重要な実際的応用は、マウス体液性免疫系の「ヒト化」である。内在性免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子が不活性化されたマウスへのヒトＩｇ遺伝子座の導入により、抗体のプログラムされた発現及び構築並びにＢ細胞の発生におけるそれらの役割の基礎となる機構を研究する機会が得られる。さらに、このような戦略であれば、ヒト疾患における抗体療法の可能性を実現する上で重要なマイルストーンとなる完全ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の作製にとって理想的な供給源を得ることができるであろう。完全ヒト抗体又はそれに由来する構築物は、マウスｍＡｂ又はマウス由来ｍＡｂに固有の免疫原性及びアレルギー反応を最小化し、それによって投与される抗体／構築物の有効性及び安全性を増大させることが期待される。完全ヒト抗体又は構築物の使用により、化合物の反復投与を必要とする慢性及び再発性のヒト疾患、例えば炎症、自己免疫及び癌の治療に実質的な利点が得られると予想され得る。
この目標に向けた１つのアプローチは、そのようなマウスがマウス抗体の非存在下でヒト抗体の大きいレパートリーを産生することを見越して、ヒトＩｇ遺伝子座の大きい断片を用いてマウス抗体産生が欠損したマウス系統を操作することであった。大きいヒトＩｇ断片は、大きい可変遺伝子多様性並びに抗体産生及び発現の適切な調節を保存するであろう。抗体の多様化及び選択並びにヒトタンパク質に対する免疫寛容の欠如のためにマウス機構を利用することにより、これらのマウス株における再現されたヒト抗体レパートリーは、ヒト抗原を含む任意の目的の抗原に対する高親和性抗体を生じるはずである。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトｍＡｂを容易に産生及び選択することができた。この一般的な戦略は、最初のＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウス系統の発生と関連して実証された（Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３－２１（１９９４）を参照されたい）。このＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）系統は、可変領域及び定常領域のコア配列を含有したヒト重鎖遺伝子座及びカッパ軽鎖遺伝子座のそれぞれ２４５ｋｂ及び１９０ｋｂサイズの生殖細胞系列配置断片を含有する酵母人工染色体（ＹＡＣ）を用いて操作された。ＹＡＣを含有するヒトＩｇは、抗体の再配列及び発現の両方についてマウス系と適合性であることが証明され、不活性化マウスＩｇ遺伝子を置換することができた。これは、それらがＢ細胞の発生を誘導して、完全ヒト抗体の成体様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトｍＡｂを産生する能力によって実証された。これらの結果は、多数のＶ遺伝子、追加の調節エレメント及びヒトＩｇ定常領域を含有するヒトＩｇ遺伝子座の大部分の導入が、感染及び免疫化に対するヒト液性応答を特徴とする実質的に完全なレパートリーを再現し得ることも示唆した。Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．の研究は、それぞれヒト重鎖遺伝子座及びκ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖細胞系列配置ＹＡＣ断片を導入することによる約８０％超のヒト抗体レパートリーの導入にまで拡張された。Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６－１５６（１９９７）及び米国特許出願公開第０８／７５９，６２０号明細書を参照されたい。
ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）モデルの作製は、米国特許出願公開第０７／４６６，００８号明細書、同第０７／６１０，５１５号明細書、同第０７／９１９，２９７号明細書、同第０７／９２２，６４９号明細書、同第０８／０３１，８０１号明細書、同第０８／１１２，８４８号明細書、同第０８／２３４，１４５号明細書、同第０８／３７６，２７９号明細書、同第０８／４３０，９３８号明細書、同第０８／４６４，５８４号明細書、同第０８／４６４，５８２号明細書、同第０８／４６３，１９１号明細書、同第０８／４６２，８３７号明細書、同第０８／４８６，８５３号明細書、同第０８／４８６，８５７号明細書、同第０８／４８６，８５９号明細書、同第０８／４６２，５１３号明細書、同第０８／７２４，７５２号明細書、同第０８／７５９，６２０号明細書並びに米国特許第６，１６２，９６３号明細書；同第６，１５０，５８４号明細書；同第６，１１４，５９８号明細書；同第６，０７５，１８１号明細書及び同第５，９３９，５９８号明細書並びに日本特許第３０６８１８０Ｂ２号公報、同第３０６８５０６Ｂ２号公報及び同第３０６８５０７Ｂ２号公報でさらに議論され詳述されている。Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６－１５６（１９９７）及びＧｒｅｅｎ ａｎｄ Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３－４９５（１９９８）、欧州特許第０４６３１５１Ｂ１号明細書、国際公開第９４／０２６０２号パンフレット、国際公開第９６／３４０９６号パンフレット、国際公開第９８／２４８９３号パンフレット、国際公開第００／７６３１０号パンフレット及び国際公開第０３／４７３３６号パンフレットも参照されたい。
別のアプローチでは、とりわけ、ＧｅｎＰｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．を含む他社が「小遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｕｓ）」アプローチを利用している。小遺伝子座法では、外来性Ｉｇ遺伝子座は、Ｉｇ遺伝子座からの小片（個々の遺伝子）を含めることを通して模倣される。したがって、１つ以上のＶＨ遺伝子、１つ以上のＤＨ遺伝子、１つ以上のＪＨ遺伝子、μ定常領域及び第２の定常領域（好ましくはγ定常領域）が動物への挿入用構築物として形成される。この手法は、Ｓｕｒａｎｉ ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第５，５４５，８０７号明細書並びにそれぞれＬｏｎｂｅｒｇ及びＫａｙに対する米国特許第５，５４５，８０６号明細書、同第５，６２５，８２５号明細書、同第５，６２５，１２６号明細書、同第５，６３３，４２５号明細書、同第５，６６１，０１６号明細書、同第５，７７０，４２９号明細書、同第５，７８９，６５０号明細書、同第５，８１４，３１８号明細書、同第５，８７７，３９７号明細書、同第５，８７４，２９９号明細書及び同第６，２５５，４５８号明細書、Ｋｒｉｍｐｅｎｆｏｒｔ及びＢｅｒｎｓに対する米国特許第５，５９１，６６９号明細書及び同第６，０２３．０１０号明細書、Ｂｅｒｎｓ ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第５，６１２，２０５号明細書、同第５，７２１，３６７号明細書及び同第５，７８９，２１５号明細書並びにＣｈｏｉ及びＤｕｎｎに対する米国特許第５，６４３，７６３号明細書並びにＧｅｎＰｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの米国特許出願公開第０７／５７４，７４８号明細書、同第０７／５７５，９６２号明細書、同第０７／８１０，２７９号明細書、同第０７／８５３，４０８号明細書、同第０７／９０４，０６８号明細書、同第０７／９９０，８６０号明細書、同第０８／０５３，１３１号明細書、同第０８／０９６，７６２号明細書、同第０８／１５５，３０１号明細書、同第０８／１６１，７３９号明細書、同第０８／１６５，６９９号明細書、同第０８／２０９，７４１号明細書に記載されている。欧州特許第０５４６０７３Ｂ１号明細書、国際公開第９２／０３９１８号パンフレット、国際公開第９２／２２６４５号パンフレット、国際公開第９２／２２６４７号パンフレット、国際公開第９２／２２６７０号パンフレット、国際公開第９３／１２２２７号パンフレット、国際公開第９４／００５６９号パンフレット、国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第９６／１４４３６号パンフレット、国際公開第９７／１３８５２号パンフレット及び国際公開第９８／２４８８４号パンフレット並びに米国特許第５，９８１，１７５号明細書も参照されたい。さらに、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）、Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）、Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．（１９９３）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（１９９４）、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）及びＴｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９６）を参照されたい。
Ｋｉｒｉｎも、ミクロセル融合によって大きい染色体片又は染色体全体が導入された、マウスからのヒト抗体の作製を実証した。欧州特許出願公開第７７３２８８号明細書及び同第８４３９６１号明細書を参照されたい。Ｘｅｎｅｒｅｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓは、ヒト抗体の潜在的な作製のための技術を開発している。この技術では、ＳＣＩＤマウスをヒトリンパ細胞、例えばＢ細胞及び／又はＴ細胞で再構成する。次いで、マウスを抗原で免疫化し、抗原に対する免疫応答を生じさせることができる。米国特許第５，４７６，９９６号明細書、同第５，６９８，７６７号明細書及び同第５，９５８，７６５号明細書を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本発明の構築物は、「単離された」又は「実質的に純粋な」構築物である。「単離された」又は「実質的に純粋な」は、本明細書に開示される構築物の記載に使用されるとき、その生産環境の成分から識別、分離及び／又は回収されている構築物を意味する。好ましくは、構築物は、その生産環境由来の他のすべての成分との関連がないか、又は実質的に関連がない。組換えトランスフェクト細胞から生じるものなど、その産生環境の夾雑成分は、構築物の診断又は治療使用を妨げ得る材料であり、酵素、ホルモン及び他のタンパク質性又は非タンパク質性化合物を挙げることができる。単離された又は実質的に純粋な構築物は、状況に応じて、所与の試料における全タンパク質／ポリペプチド含量の５重量％～９９．９重量％を占め得ることが理解される。所望の構築物は、誘導性プロモーター又は高発現プロモーターを使用して、有意により高い濃度で製造され得る。この定義は、当技術分野で知られている多種多様な生物体及び／又は宿主細胞における構築物の産生を含む。特定の実施形態において、構築物は、（１）スピニングカップシークエネーターを用いることによりＮ末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、又は（２）クマシーブルー又は好ましくは銀染色法を用いた非還元又は還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均一になるまで精製されることになる。しかしながら、通常、単離された構築物は、少なくとも１つの精製工程により調製されることになる。
一実施形態によれば、構築物全体及び／又は結合ドメインは、１つ以上のポリペプチドの形態又はタンパク質の形態である。タンパク質性部分に加えて、そのようなポリペプチド又はタンパク質は、非タンパク質性部分（例えば、化学的リンカー又は化学的架橋剤、例えばグルタルアルデヒド）を含み得る。
ペプチドは、共有結合性ペプチド（アミド）結合によって連結されたアミノ酸モノマーの短鎖である。そのため、ペプチドは、広範な化学的クラスの生物学的オリゴマー及びポリマーに分類される。ペプチド又はポリペプチド鎖の一部であるアミノ酸は「残基」と呼ばれ、連続してナンバリングすることができる。環状ペプチドを除くすべてのペプチドは、ペプチドの一端にＮ末端残基を有し、他端にＣ末端残基を有する。オリゴペプチドは、ごく少数のアミノ酸からなる（通常、２～２０個）。ポリペプチドは、より長く連続した非分枝ペプチド鎖である。ペプチドは、サイズに基づいてタンパク質と区別され、任意の基準としておよそ５０個以下のアミノ酸を含有するものと理解され得る。タンパク質は、通常、生物学的に機能的な方法で配置された１個以上のポリペプチドからなる。ペプチドとポリペプチド及びタンパク質とに適用される実験技法の態様（例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー等の詳細）が異なるが、ペプチドをポリペプチド及びタンパク質と区別するサイズ境界は、絶対的ではない。そのため、本発明に関連して、「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、相互交換可能に使用され得、「ポリペプチド」という用語が多くの場合に好ましい。
ポリペプチドは、上述のように、２個以上のポリペプチド分子からなる二量体、三量体及びより高次のオリゴマー等の多量体をさらに形成し得る。このような二量体、三量体などを形成するポリペプチド分子は、同一であっても又はなくてもよい。そのような多量体の対応する高次構造は、結果的に、ホモ二量体又はヘテロ二量体、ホモ三量体又はヘテロ三量体等と称される。ヘテロ多量体の例は、その天然に存在する形態において、２つの同一のポリペプチド軽鎖及び２つの同一のポリペプチド重鎖からなる抗体分子又は免疫グロブリン分子である。「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、修飾が、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などの翻訳後修飾によって達成される天然に修飾されたペプチド／ポリペプチド／タンパク質も指す。「ペプチド」、「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、本明細書で言及される場合、ペグ化など、化学的にも修飾され得る。そのような修飾は、当技術分野で周知であり、本明細書で後述される。
「選択的に」及び「好ましくは、選択的に」、「（特異的に又は免疫特異的に）結合する」、「（特異的に又は免疫特異的に）認識する」又は「（特異的に又は免疫特異的に）反応する」という用語は、本発明に従い、構築物又は結合ドメインが、標的分子（抗原）、本明細書ではそれぞれＣＤ３上の所与のエピトープと選択的に相互作用する又は（免疫学的）特異的に相互作用することを意味する。この選択的相互作用又は会合は、代替物質（非標的分子、例えば、本明細書ではＣＤ３γ等）と比べて、特定の標的（本明細書ではＣＤ３ε）上のエピトープに対してより頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、より高い親和性で又はこれらのパラメータのいくつかの組合せで生じる。しかしながら、異なる種における相同タンパク質間の配列類似性のため、標的（例えば、ヒト標的）に選択的に且つ／又は免疫特異的に結合する構築物又は結合ドメインは、異なる種由来の（例えば、非ヒト霊長類由来の）相同標的分子と交差反応し得る。したがって、「選択的に結合する」、「特異的／免疫特異的結合」などという用語は、２個以上の種のエピトープ又は構造的に関連するエピトープへの構築物又は結合ドメインの結合を含み得る。本発明との関連において、本発明のポリペプチドは、そのそれぞれの標的構造に特定の様式で結合する。好ましくは、本発明に係るポリペプチドは、それぞれの標的構造に「特異的に若しくは免疫特異的に結合する」か、それを「（特異的に若しくは免疫特異的に）認識する」か又はそれと「（特異的に若しくは免疫特異的に）反応する」１つの結合ドメイン当たり１つのパラトープを含む。これは、本発明に従い、ポリペプチド又はその結合ドメインが、標的分子（抗原）、すなわちＣＤ３ε上の所与のエピトープと相互作用するか又は（免疫）特異的に相互作用するこし、特定の実施形態では、第２及び／又は第３の標的分子など、少なくとも１つのさらなる標的分子上の所与のエピトープと相互作用することを意味する。この相互作用又は会合は、代替物質（非標的分子）と比べて、特定の標的上のエピトープに対してより頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、より大きい親和性で又はこれらのパラメータのいくつかの組合せで生じる。しかしながら、異なる種における相同タンパク質間の配列類似性のため、その標的（ヒト標的など）に免疫特異的に結合する抗体構築物又は結合ドメインは、異なる種（非ヒト霊長類など）からの相同標的分子と交差反応し得る。したがって、用語「特異的な／免疫特異的な結合」は、複数の種中のエピトープ及び／又は構造的に関連するエピトープに対する抗体構築物又は結合ドメインの結合を含み得る。用語「（免疫）選択的に結合する」は、構造的に関連するエピトープへの結合を除外する。
本発明に関連して、「エピトープ」という用語は、結合構造、すなわちパラトープによって選択的に認識される／免疫特異的に認識される抗原の部分又は領域を指す。「エピトープ」は、抗原性であり、したがってエピトープという用語は、本明細書では「抗原構造」又は「抗原決定基」とも呼ばれることがある。エピトープに結合する結合ドメインの部分は、パラトープと呼ばれる。特異的結合は、結合ドメイン及び抗原のアミノ酸配列中の特異的モチーフによって達成されると考えられている。したがって、結合は、その一次構造、二次構造及び／又は三次構造のため並びに前記構造の潜在的な二次修飾の結果として達成される。パラトープがその抗原決定基と特異的に相互作用すると、前記部位が抗原に単純に結合し得る。いくつかの場合、代わりに又は加えて、特異的相互作用により、例えば抗原の立体配座の変化の誘導、抗原のオリゴマー化などに起因してシグナルの開始がもたらされ得る。
タンパク質抗原のエピトープは、その構造及びパラトープとの相互作用に基づいて２つのカテゴリー、立体エピトープ及び線状エピトープに分類される。立体配座エピトープは、抗原のアミノ酸配列の不連続なセクションから構成される。こうしたエピトープは、抗原の三次元表面の特徴及び形状又は三次構造（折り畳み）に基づいてパラトープと相互作用する。エピトープの立体配座を決定する方法としては、Ｘ線結晶学、二次元核磁気共鳴（２Ｄ－ＮＭＲ）分光法並びに部位特異的スピン標識及び電子常磁性共鳴（ＥＰＲ）分光法があるが、これらに限定されない。対照的に、線状エピトープは、その一次構造に基づいて、パラトープと相互作用する。線状エピトープは、抗原由来のアミノ酸の連続配列によって形成され、典型的には、特有の配列内に少なくとも３つ又は少なくとも４つ、より一般的には少なくとも５つ又は少なくとも６つ又は少なくとも７つ、例えば約８～約１０個のアミノ酸を含む。
所与のヒト標的タンパク質についてのエピトープマッピングのための方法を以下に説明する。前記所与のヒト標的タンパク質内の所定の領域（連続したアミノ酸ストレッチ）は、標的タンパク質パラログの対応する領域と交換される／置き換えられる（結合ドメインが、使用されるパラログと交差反応しない限り）。これらのヒト標的／パラログキメラを宿主細胞（ＣＨＯ細胞など）の表面上に発現させる。抗体又は構築物の結合は、ＦＡＣＳ解析を介して試験することができる。このキメラ分子への抗体若しくは構築物の結合が完全になくなる場合又は大幅な結合の低下を観察する場合、このキメラ分子から取り除かれたヒト標的の領域が免疫特異的エピトープ－パラトープ認識に関連すると結論付けることができる。前記結合の低下は、ヒト（野生型）標的への結合と比較して、好ましくは少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％又は５０％、より好ましくは少なくとも６０％、７０％又は８０％、最も好ましくは９０％、９５％又はさらに１００％であり、それにより、ヒト標的への結合は１００％であるよう設定される。代わりに、上述のエピトープマッピング解析は、１つ又はいくつかの点突然変異をヒト標的の配列へと導入することによって改変することができる。これらの点突然変異は、例えば、ヒト標的とそのパラログとの間の差異を反映し得る。
構築物又は結合ドメインによる認識に対する標的抗原の特定の残基の寄与を決定するさらなる方法は、解析される各残基を、例えば、部位特異的変異誘発によりアラニンに置き換えるアラニンスキャニング（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＫＬ＆Ｗｅｉｓｓ ＧＡ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２００１ Ｊｕｎ；５（３）：３０２－７を参照されたい）である。アラニンが使用される理由は、アラニン以外のアミノ酸の多くが有する二次構造基準をそれでも模倣する、かさ高くなく、化学的に不活性なメチル官能基があるからである。突然変異した残基のサイズの保存が所望される場合、バリン又はロイシンなどのかさ高いアミノ酸を使用し得る。
結合ドメインと標的抗原のエピトープとの間の相互作用は、結合ドメインがエピトープ／標的抗原（本明細書ではＣＤ３）に対して認識可能な又は有意な親和性を呈し、概して標的抗原以外のタンパク質又は抗原に対して、上述で論議した、例えば他の種由来の相同標的との交差反応性があったとしても、有意な親和性を呈さないことを含意する。「有意な親和性」としては、１０－６Ｍ以下の親和性（解離定数、ＫＤ）での結合が挙げられる。好ましくは、結合は、結合親和性が１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ以下、１０－９Ｍ以下、１０－１０Ｍ以下又はさらに１０－１１Ｍ以下若しくは１０－１２Ｍ以下であるときに特異的と見なされる。結合ドメイン（免疫）が標的と特異的に反応又は結合するかどうかは、例えば、その所望の標的タンパク質又は抗原に対する前記結合ドメインの親和性を非標的タンパク質又は抗原（ここではそれぞれＣＤ３以外のタンパク質）に対する前記結合ドメインの親和性と比較することにより、容易に試験することができる。好ましくは、本発明の構築物は、さらなる標的に対する任意のさらなる結合ドメインが本発明の構築物に意図的に導入されない限り、ＣＤ３以外のタンパク質又は抗原に有意に結合せず（すなわち、ＣＤ３結合ドメインは、ＣＤ３以外のタンパク質に結合しない）、その場合、その結合ドメインのその特異的標的への結合も本発明によって提供される。
第１のドメインの親和性は、ヒトＣＤ３εについて１００ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下又は２０ｎＭ以下であることが想定される。これらの値は、好ましくは、スキャッチャードアッセイなど、細胞ベースのアッセイで測定される。他の親和性決定方法も周知である。これらの値は、好ましくは、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイなど、表面プラズモン共鳴アッセイで測定される。
「有意に結合しない」及び「選択的に結合しない」という用語は、本発明の構築物又は結合ドメインが、細胞の表面上に発現する場合、前記ＣＤ３以外のタンパク質又は抗原に結合しないことを意味する。したがって、構築物は、ＣＤ３以外のタンパク質又は抗原と（前記タンパク質又は抗原が細胞の表面上に発現するときに）３０％以下、好ましくは２０％以下、より好ましくは１０％以下、特に好ましくは９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下又は１％以下の反応性（ここではそれぞれＣＤ３への結合を１００％とする）を示す。「反応性」は、例えば、親和性値で表すことができる（上述を参照されたい）。
本発明の構築物（より具体的にはヒトＣＤ３εに結合するパラトープ／結合ドメインを含むドメイン）は、ＣＤ３ε類似体、より具体的にはヒトＣＤ３ε類似体及び／又はマカク／カニクイザルＣＤ３ε類似体に結合しないか又は有意に結合しないことが想定される。構築物が標的細胞の表面上の（ヒト又はマカク／カニクイザル）ＣＤ３εパラログに結合しないか又は有意に結合しないことも想定される。
ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する結合ドメインの一部としてのＶＨ領域は、上記のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３配列を含む。ＣＤＲ配列は、当技術分野で一般的な慣行であるように、プレースホルダの代わりになり得る所与のアミノ酸残基について「Ｘ」として示されるプレースホルダを含む。プレースホルダは、所与のＣＤＲ配列ごとに、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３などの形式で連続してナンバリングされる。列挙されたＣＤＲ配列中のプレースホルダの代わりになり得るアミノ酸残基は、好ましくは、例えば他の実施形態では、特に明記されない限り、最初に列挙されたアミノ酸が最も好ましく、２番目に列挙されたアミノ酸が２番目に好ましく、以下同様である。配列が２つ以上のプレースホルダを含む場合、アミノ酸の優先性に関して同じことが適用され；すなわち各プレースホルダについて列挙された最初のアミノ酸残基の組合せが最も好ましく、各プレースホルダについて列挙された２番目のアミノ酸残基の組合せが２番目に好ましいなどである。この好ましい階層は、異なる好ましいアミノ酸残基が組み合わされるように、前記好ましい階層とは独立したプレースホルダのそれぞれについてのアミノ酸残基の組合せを排除しない。同じ階層は、本明細書中下記に記載されるアミノ酸配列におけるプレースホルダの代わりになる本明細書中下記に列挙されるすべてのアミノ酸残基に当てはまる。したがって、上記は、ＶＨ及びＶＬ配列並びに本明細書全体を通して列挙される任意の他の配列の配列において「Ｘ」として示されるプレースホルダにも適用される。
ＣＤＲ－Ｈ１配列は、Ｘ１ＹＡＸ２Ｎのアミノ酸配列を含み、Ｘ１は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｔ又はＩであり；Ｘ２は、Ｍ又はＩである。プレースホルダアミノ酸に関して、上記で説明した階層に従い、プレースホルダＸ１及びＸ２のアミノ酸は、その嗜好性に従って列挙され、最初に列挙されたアミノ酸が最も好ましく、２番目に列挙されたアミノ酸が２番目に好ましいなどである。Ｘ１について、アミノ酸Ｋが最も好ましく、Ｘ２について、アミノ酸Ｍが最も好ましい。好ましい組合せは、それぞれＫ及びＭ、Ｖ及びＭ、Ｓ及びＭから選択される、Ｘ１及びＸ２の組合せ等、Ｘ１のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ２のＭであり、最も好ましい組合せはＫ及びＭである。別の好ましい組合せは、それぞれＸ１及びＸ２のＫ及びＩである。ＣＤＲ－Ｈ１配列の好ましい例は、ＫＹＡＭＮ、ＶＹＡＭＮ、ＳＹＡＭＮ、ＧＹＡＭＮ、ＲＹＡＭＮ、ＴＹＡＭＮ、ＩＹＡＭＮ及びＫＹＡＩＮから選択され、ＫＹＡＭＮ又はＫＹＡＩＮが最も好ましい。
ＣＤＲ－Ｈ２配列は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ１ＶＫＸ２のアミノ酸配列を含み、Ｘ１は、Ｓ又はＱであり；Ｘ２は、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥである。Ｘ１について、アミノ酸Ｓが最も好ましく、Ｘ２について、アミノ酸Ｄが最も好ましい。好ましい組合せは、Ｓ及びＤ、Ｓ及びＧ、Ｓ及びＫ、Ｓ及びＳから選択される、それぞれＸ１及びＸ２に対する組合せ等、Ｘ２のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ１のＳであり、最も好ましいのは組合せＳ及びＤである。ＣＤＲ－Ｈ２配列の好ましい例は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＳ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＥ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ及びＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤから選択され、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが最も好ましい。
ＣＤＲ－Ｈ３配列は、ＨＸ１ＮＦＧＮＳＹＸ２ＳＸ３Ｘ４ＡＹのアミノ酸配列を含み、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ３は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ４は、Ｗ、Ｆ又はＹである。Ｘ１について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ２について、アミノ酸Ｉが最も好ましく；Ｘ３について、アミノ酸Ｙが最も好ましく；Ｘ４について、アミノ酸Ｗが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｈ３配列の好ましい例は、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＴＳＹＹＡＹ、ＨＲＮＦＧＮＳＹＬＳＷＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＦＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＹＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＦＷＡＹ、ＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ及びＨＧＮＦＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹから選択され、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが最も好ましい。
ＣＤＲ－Ｌ１配列は、Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＸ２Ｘ３Ｘ４ＹＸ５Ｎのアミノ酸配列を含み、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｓ又はＴであり；Ｘ３は、Ｇ又はＳであり；Ｘ４は、Ｎ又はＹであり；Ｘ５は、Ｐ又はＡである。Ｘ１について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ２について、アミノ酸Ｓが最も好ましく；Ｘ３について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ４について、アミノ酸Ｎが最も好ましく；Ｘ５について、アミノ酸Ｐが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｌ１配列の好ましい例は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＲＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ及びＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮから選択され、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが最も好ましい。
ＣＤＲ－Ｌ２配列は、Ｘ１ＴＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６のアミノ酸配列を含み、Ｘ１は、Ｇ又はＡであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｄ又はＮであり；Ｘ３は、Ｆ、Ｍ又はＫであり；Ｘ４は、Ｌ又はＲであり；Ｘ５は、Ａ、Ｐ又はＶであり；Ｘ６は、Ｐ又はＳである。Ｘ１について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ２について、アミノ酸Ｋが最も好ましく；Ｘ３について、アミノ酸Ｆが最も好ましく；Ｘ４について、アミノ酸Ｌが最も好ましく；Ｘ５について、アミノ酸Ａが最も好ましく、Ｘ６について、アミノ酸Ｐが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｌ２配列の好ましい例は、ＧＴＫＦＬＡＰ、ＡＴＤＭＲＰＳ、ＧＴＫＦＬＶＰ及びＧＴＮＫＲＡＰから選択され、ＧＴＫＦＬＡＰが最も好ましい。
ＣＤＲ－Ｌ３配列は、Ｘ１ＬＷＹＳＮＸ２ＷＶのアミノ酸配列を含み、Ｘ１は、Ｖ、Ａ又はＴであり；Ｘ２は、Ｒ又はＬである。Ｘ１について、アミノ酸Ｖが最も好ましく、Ｘ２について、アミノ酸Ｒが最も好ましい。好ましい組合せは、Ｖ及びＲ、Ａ及びＲ、Ｔ及びＲからそれぞれ選択される、Ｘ１及びＸ２の組合せ等、Ｘ１のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ２のＲであり、最も好ましい組合せはＶ及びＲである。ＣＤＲ－Ｌ３配列の好ましい例は、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＡＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＴＬＷＹＳＮＲＷＶ及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶから選択され、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶが最も好ましい。
好ましい実施形態において、ｉ）の前記ＶＨ領域は、Ｘ１ＹＡＸ２Ｎのアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ１配列（Ｘ１は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ又はＩであり；Ｘ２は、Ｍ又はＩである）；ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ１ＶＫＸ２のＣＤＲ－Ｈ２配列（Ｘ１は、Ｓ又はＱであり；Ｘ２は、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥである）；及びＨＸ１ＮＦＧＮＳＹＸ２ＳＸ３Ｘ４ＡＹのＣＤＲ－Ｈ３配列（Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ３は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ４は、Ｗ、Ｆ又はＹである）を含み；及びｉｉ）の前記ＶＬ領域は、Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮのＣＤＲ－Ｌ１配列（Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２はＮ又はＹである）；Ｘ１ＴＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６のＣＤＲ－Ｌ２配列（Ｘ１はＧ又はＡであり；Ｘ２はＫ又はＤであり；Ｘ３はＦ又はＭであり；Ｘ４はＬ又はＲであり；Ｘ５は、Ａ、Ｐ又はＶであり；Ｘ６はＰ又はＳであり；及びＸ１ＬＷＹＳＮＲＷＶのＣＤＲ－Ｌ３配列（Ｘ１はＶ、Ａ又はＴである）を含み；ｉ）のＶＨ領域及び／又はｉｉ）のＶＬ領域の前記１つ以上のＣＤＲ配列は、ＣＤＲ－Ｈ１中のＸ２４Ｖ又はＸ２４Ｆ；ＣＤＲ－Ｈ２中のＤ１５（好ましくはＥ）、Ｘ１１６Ａ；ＣＤＲ－Ｈ３中のＨ１（好ましくはＡ又はＮ）、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４（好ましくはＩ）及び／又はＣＤＲ－Ｈ３中のＮ６（好ましくはＳ又はＴ）；及びＣＤＲ－Ｌ３中のＷ９３（好ましくはＹ）から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。
前記ＣＤＲ－Ｈ１配列は、Ｘ１ＹＡＸ２Ｎのアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ又はＩであり；Ｘ２は、Ｍ又はＩである。Ｘ１について、アミノ酸Ｋが最も好ましく、Ｘ２について、アミノ酸Ｍが最も好ましい。好ましい組合せは、それぞれＫ及びＭ、Ｖ及びＭ、Ｓ及びＭから選択される、Ｘ１及びＸ２の組合せ等、Ｘ１のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ２のＭであり、最も好ましい組合せはＫ及びＭである。別の好ましい組合せは、それぞれＸ１及びＸ２のＫ及びＩである。ＣＤＲ－Ｈ１配列の好ましい例は、ＫＹＡＭＮ、ＶＹＡＭＮ、ＳＹＡＭＮ、ＧＹＡＭＮ、ＲＹＡＭＮ、ＩＹＡＭＮ及びＫＹＡＩＮから選択され、ＫＹＡＭＮ又はＫＹＡＩＮが好ましく、ＫＹＡＭＮが最も好ましい。
前記ＣＤＲ－Ｈ２配列は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ１ＶＫＸ２のアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｓ又はＱであり；Ｘ２は、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥである。Ｘ１について、アミノ酸Ｓが最も好ましく、Ｘ２について、アミノ酸Ｄが最も好ましい。好ましい組合せは、Ｓ及びＤ、Ｓ及びＧ、Ｓ及びＫ、Ｓ及びＳから選択される、それぞれＸ１及びＸ２に対する組合せ等、Ｘ２のアミノ酸残基のいずれかと組合せたＸ１のＳであり、最も好ましいのは組合せＳ及びＤである。ＣＤＲ－Ｈ２配列の好ましい例は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＳ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＥ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ及びＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤから選択され、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが最も好ましい。
ＣＤＲ－Ｈ３配列は、ＨＸ１ＮＦＧＮＳＹＸ２ＳＸ３Ｘ４ＡＹのアミノ酸配列を含み、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ３は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ４はＷ、Ｆ又はＹである。Ｘ１について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ２について、アミノ酸Ｉが最も好ましく；Ｘ３について、アミノ酸Ｙが最も好ましく；Ｘ４について、アミノ酸Ｗが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｈ３配列の好ましい例は、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＴＳＹＹＡＹ、ＨＲＮＦＧＮＳＹＬＳＷＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＦＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＹＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＦＷＡＹ、ＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ及びＨＧＮＦＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹから選択され、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが最も好ましい。
ＣＤＲ－Ｌ１配列は、Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮのアミノ酸配列を含み、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｎ又はＹである。Ｘ１について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ２について、アミノ酸Ｎが好ましい。ＣＤＲ－Ｌ１配列の好ましい例は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＲＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ及びＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮから選択され、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ又はＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが好ましく、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが最も好ましい。
ＣＤＲ－Ｌ２配列は、Ｘ１ＴＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６のアミノ酸配列を含み；Ｘ１はＧ又はＡであり；Ｘ２は、Ｋ又はＤであり；Ｘ３は、Ｆ又はＭであり；Ｘ４は、Ｌ又はＲであり；Ｘ５は、Ａ、Ｐ又はＶであり；Ｘ６は、Ｐ又はＳである。Ｘ１について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ２について、アミノ酸Ｋが最も好ましく；Ｘ３について、アミノ酸Ｆが最も好ましく；Ｘ４について、アミノ酸Ｌが最も好ましく；Ｘ５について、アミノ酸Ａが最も好ましく、Ｘ６について、アミノ酸Ｐが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｌ２配列の好ましい例は、ＧＴＫＦＬＡＰ、ＡＴＤＭＲＰＳ及びＧＴＫＦＬＶＰから選択され、ＧＴＫＦＬＡＰ又はＧＴＫＦＬＶＰが好ましく、ＧＴＫＦＬＡＰが最も好ましい。
ＣＤＲ－Ｌ３配列は、Ｘ１ＬＷＹＳＮＲＷＶのアミノ酸配列を含み、Ｘ１はＶ、Ａ又はＴであり、アミノ酸Ｖが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｌ３配列の好ましい例は、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＡＬＷＹＳＮＲＷＶ及びＴＬＷＹＳＮＲＷＶから選択され、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ又はＴＬＷＹＳＮＲＷＶがより好ましく、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶが最も好ましい。
さらに好ましい実施形態において、ｉ）の前記ＶＨ領域は、Ｘ１ＹＡＸ２Ｎのアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ１配列（Ｘ１は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｒ又はＩであり；Ｘ２は、Ｍ又はＩである）；ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ１ＶＫＸ２のＣＤＲ－Ｈ２配列（Ｘ１は、Ｓ又はＱであり；Ｘ２は、Ｄ、Ｇ、Ｋ又はＳである）；及びＨＸ１ＮＦＧＮＳＹＸ２ＳＸ３Ｘ４ＡＹのＣＤＲ－Ｈ３配列（Ｘ１はＧ又はＡであり；Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ３は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ４は、Ｗ、Ｆ又はＹである）を含み；及びｉｉ）の前記ＶＬ領域は、Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮのＣＤＲ－Ｌ１配列（Ｘ１はＧ又はＡであり；Ｘ２はＮ又はＹである）；ＧＴＫＦＬＸ１ＰのＣＤＲ－Ｌ２配列（Ｘ１はＡ又はＶである）；及びＸ１ＬＷＹＳＮＲＷＶのＣＤＲ－Ｌ３配列（Ｘ１はＶ、Ａ又はＴである）；ｉ）のＶＨ領域及び／又はｉｉ）のＶＬ領域の前記１つ以上のＣＤＲ配列は、ＣＤＲ－Ｈ１中のＸ２４Ｖ又はＸ２４Ｆ；ＣＤＲ－Ｈ２中のＤ１５（好ましくはＥ）、Ｘ１１６Ａ；ＣＤＲ－Ｈ３中のＨ１（好ましくはＡ又はＮ）、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４（好ましくはＩ）及び／又はＮ６（好ましくはＳ又はＴ）；及びＣＤＲ－Ｌ３中のＷ９３（好ましくはＹ）から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。
前記ＣＤＲ－Ｈ１配列は、Ｘ１ＹＡＸ２Ｎのアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｒ又はＩであり；Ｘ２は、Ｍ又はＩである。Ｘ１について、アミノ酸Ｋが最も好ましく、Ｘ２について、アミノ酸Ｍが最も好ましい。好ましい組合せは、それぞれＫ及びＭ、Ｖ及びＭ、Ｓ及びＭから選択される、Ｘ１及びＸ２の組合せ等、Ｘ１のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ２のＭであり、最も好ましい組合せはＫ及びＭである。別の好ましい組合せは、それぞれＸ１及びＸ２のＫ及びＩである。ＣＤＲ－Ｈ１配列の好ましい例は、ＫＹＡＭＮ、ＶＹＡＭＮ、ＳＹＡＭＮ、ＲＹＡＭＮ、ＩＹＡＭＮ及びＫＹＡＩＮから選択され、ＫＹＡＭＮ又はＫＹＡＩＮが好ましく、ＫＹＡＭＮが最も好ましい。
前記ＣＤＲ－Ｈ２配列は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ１ＶＫＸ２のアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｓ又はＱであり；Ｘ２は、Ｄ、Ｇ、Ｋ又はＳである。Ｘ１について、アミノ酸Ｓが最も好ましく、Ｘ２について、アミノ酸Ｄが最も好ましい。好ましい組合せは、例えば、それぞれＳ及びＤ、Ｓ及びＧ、Ｓ及びＫ、Ｓ及びＳから選択されるＸ１及びＸ２についての組合せ等のＸ１のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ２のＳであり、最も好ましくは組合せＳ及びＤである。ＣＤＲ－Ｈ２配列の好ましい例は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＳ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ及びＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤから選択され、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ又はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤが好ましく、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが最も好ましい。
前記ＣＤＲ－Ｈ３配列は、ＨＸ１ＮＦＧＮＳＹＸ２ＳＸ３Ｘ４ＡＹのアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｇ又はＡであり；Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ３は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ４は、Ｗ、Ｆ又はＹである。Ｘ１について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ２について、アミノ酸Ｉが最も好ましく；Ｘ３について、アミノ酸Ｙが最も好ましく；Ｘ４について、アミノ酸Ｗが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｈ３配列の好ましい例は、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＴＳＹＹＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＦＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＹＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＦＷＡＹ及びＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹから選択され、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ又はＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが好ましく、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが最も好ましい。
前記ＣＤＲ－Ｌ１配列は、Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮのアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｇ又はＡであり；Ｘ２は、Ｎ又はＹである。Ｘ１について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ２について、アミノ酸Ｎが好ましい。ＣＤＲ－Ｌ１配列の好ましい例は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ及びＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮから選択され、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ又はＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが好ましく、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが最も好ましい。
前記ＣＤＲ－Ｌ２配列は、ＧＴＫＦＬＸ１Ｐのアミノ酸配列を含むか又はそれからなり；Ｘ１は、Ａ又はＶである。Ｘ１について、アミノ酸Ａが好ましい。前記ＣＤＲ－Ｌ２配列は、ＧＴＫＦＬＡＰ又はＧＴＫＦＬＶＰであり、ＧＴＫＦＬＡＰが好ましい。
ＣＤＲ－Ｌ３配列は、Ｘ１ＬＷＹＳＮＲＷＶのアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＶ、Ａ又はＴであり、アミノ酸Ｖが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｌ３配列の好ましい例は、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＡＬＷＹＳＮＲＷＶ及びＴＬＷＹＳＮＲＷＶから選択され、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ又はＴＬＷＹＳＮＲＷＶがより好ましく、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶが最も好ましい。
さらにより好ましい実施形態において、ｉ）の前記ＶＨ領域は、Ｘ１ＹＡＭＮのアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ１配列（Ｘ１は、Ｋ又はＳである）；ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＸ１のＣＤＲ－Ｈ２配列（Ｘ１は、Ｄ又はＧである）；及びＨＧＮＦＧＮＳＹＸ１ＳＸ２ＷＡＹのＣＤＲ－Ｈ３配列（Ｘ１は、Ｉ又はＶであり；Ｘ２はＹ又はＷである）を含み；ｉｉ）の前記ＶＬ領域は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ１ＹＰＮのＣＤＲ－Ｌ１配列（Ｘ１はＮ又はＹである）；ＧＴＫＦＬＡＰのＣＤＲ－Ｌ２配列；及びＸ１ＬＷＹＳＮＲＷＶのＣＤＲ－Ｌ３配列（Ｘ１はＶ又はＡである）を含み；ｉ）のＶＨ領域及び／又はｉｉ）のＶＬ領域の前記１つ以上のＣＤＲ配列は、ＣＤＲ－Ｈ１中のＭ４Ｖ又はＭ４Ｆ；ＣＤＲ－Ｈ２中のＤ１５（好ましくはＥ）、Ｓ１６Ａ；ＣＤＲ－Ｈ３中のＨ１（好ましくはＡ又はＮ）、Ｇ２Ｅ、Ｆ４（好ましくはＩ）及び／又はＮ６（好ましくはＳ又はＴ）；及びＣＤＲ－Ｌ３中のＷ９３（好ましくはＹ）から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。
前記ＣＤＲ－Ｈ１配列は、Ｘ１ＹＡＭＮのアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｋ又はＳであり、アミノ酸Ｋが好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ１配列は、ＫＹＡＭＮ又はＳＹＡＭＮであり、ＫＹＡＭＮが最も好ましい。
前記ＣＤＲ－Ｈ２配列は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＸ１のアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｄ又はＧである。Ｘ１について、アミノ酸Ｄが好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ２配列は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ又はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧであり、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが好ましい。
前記ＣＤＲ－Ｈ３配列は、ＨＧＮＦＧＮＳＹＸ１ＳＸ２ＷＡＹのアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｉ又はＶであり；Ｘ２は、Ｙ又はＷである。Ｘ１について、アミノ酸Ｉが好ましく；Ｘ２について、アミノ酸Ｙが好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ３配列は、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ又はＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹであり、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが好ましい。
前記ＣＤＲ－Ｌ１配列は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ１ＹＰＮのアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｎ又はＹである。Ｘ１について、アミノ酸Ｎが好ましい。前記ＣＤＲ－Ｌ１配列は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ又はＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮであり、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが好ましい。
前記ＣＤＲ－Ｌ２配列は、ＧＴＫＦＬＡＰのアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。
ＣＤＲ－Ｌ３配列は、Ｘ１ＬＷＹＳＮＲＷＶのアミノ酸配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＶ又はＡであり、Ｖが好ましい。前記ＣＤＲ－Ｌ３配列はＶＬＷＹＳＮＲＷＶ又はＡＬＷＹＳＮＲＷＶであり、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶが好ましい。
ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３配列の各々は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３（これはＶＨ領域及びＶＬ領域の好ましい配向である）又はＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３の形式で自由に組み合わされ、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに列挙された結合を示す。
ＶＬ領域のＣＤＲ－Ｌ１～Ｌ３配列の好ましい組合せ及びＶＨ領域のＣＤＲ－Ｈ１～Ｈ３配列の好ましい組合せを以下の表１に列挙する。
Figure 2023547661000001
好ましくは、上述に列挙されたＣＤＲ－Ｌ１～Ｌ３の組合せのいずれかは、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外に結合する結合ドメインの部分として、上述に列挙されたＣＤＲ－Ｈ１～Ｈ３の組合せのいずれかと組み合わされる。換言すれば、ＶＬ領域は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３配列としてこの順で、
ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＧＴＫＦＬＡＰ、ＡＬＷＹＳＮＲＷＶ；
ＲＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＡＴＤＭＲＰＳ、ＡＬＷＹＳＮＲＷＶ；
ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＧＴＫＦＬＡＰ、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ；
ＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＧＴＫＦＬＶＰ、ＴＬＷＹＳＮＲＷＶ；又は
ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ、ＧＴＮＫＲＡＰ、ＡＬＷＹＳＮＬＷＶ
を含むか又はそれからなり；及び
ＶＬ領域は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３配列として、この順で、
ＩＹＡＭＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＳ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＦＦＡＹ；
ＫＹＡＭＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ；
ＳＹＡＭＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＦＷＡＹ；
ＲＹＡＭＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＹＦＡＹ；
ＶＹＡＭＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＷＷＡＹ；
ＫＹＡＭＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＳ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＴＳＹＹＡＹ；
ＧＹＡＭＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＥ、ＨＲＮＦＧＮＳＹＬＳＷＦＡＹ；
ＶＹＡＭＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＷＷＡＹ；
ＳＹＡＭＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹ；
ＫＹＡＩＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤ、ＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ；又は
ＴＹＡＭＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹ
を含むか又はそれからなる。
本発明によれば、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３の順序で列挙されるＶＨ領域及びＶＬ領域の好ましいＣＤＲ配列の組合せは、配列番号１１８～１２３、１６６～１７１、３５６～３６１、５４６～５５１、７２４～７２９、９２２～９２７、１１００～１１０５、１２９０～１２９５、１４６８～１４７３、１６５８～１６６３、１８４８～１８５３で定義される通りである。
最も好ましいのは、ＶＬ領域が、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３配列として、この順序において、
ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＧＴＫＦＬＡＰ、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ
を含み；及び
ＶＬ領域が、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３配列として、この順序において、
配列番号１８４８～配列番号１８５３に示される通り、ＫＹＡＭＮ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ
を含むことである。好ましくは、ＣＤＲの向きは、ＶＨからＶＬに向かってであり、すなわち、可変領域の向きは、Ｎ末端からＣ末端に向けてＶＨからＶＬである。
本発明によれば、ＶＨ領域及び／又はＶＬ領域の前記ＣＤＲ配列は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。当技術分野で一般的であるように、アミノ酸置換の位置及び性質は、本明細書では、置換される位置の元のアミノ酸残基及び例えばＦ４Ｉの形式で置換に使用されるアミノ酸を示すことによって示され、「Ｆ」は、所与のアミノ酸配列の「４」位に生じる元のアミノ酸残基を示し、「Ｉ」は、４位の「Ｆ」を置換したアミノ酸残基を示す。置換が（元のアミノ酸残基以外の）任意のアミノ酸残基による場合、アミノ酸残基は示されず、元のアミノ酸残基及び所与のアミノ酸配列におけるその位置のみが示され、そのため、前の例は「Ｆ４」としてのみ示される。好ましくは、天然に存在するアミノ酸のみが置換のために使用される。
ｉ）のＶＨ領域及び／又はｉｉ）のＶＬ領域は、本明細書中において上記で列挙される１つ以上のＣＤＲ配列において本明細書中で特定されるような１つ以上のアミノ酸置換を含む。したがって、可変領域の列挙されたアミノ酸置換の少なくとも１つは、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する前記結合ドメインに含まれる。前記少なくとも１つ又は１つ以上のアミノ酸置換は、１つのアミノ酸置換のみが存在する場合、前記ＶＨ領域若しくは前記ＶＬ領域のＣＤＲ配列中に存在し得るか、又は２つ以上のアミノ酸置換が存在する場合、ＶＨ領域とＶＬ領域との両方のＣＤＲ中に存在し得るか、又はＶＨ領域若しくはＶＬ領域のみのＣＤＲ配列に限定され得る。２つ以上のアミノ酸置換が存在する特定の実施形態において、置換は、ＶＨ領域及びＶＬ領域にあるか、又は１つの可変領域のみにある。好ましくは、置換は、ＶＨ領域及びＶＬ領域のＣＤＲ内にある。
ＣＤＲ－Ｈ１が４位にアミノ酸置換を含む場合、それは、好ましくは、元のアミノ酸のアミノ酸Ｖでの置換である。好ましくは、ＣＤＲ－Ｈ１配列は、ＫＹＡＩＮ又はＫＹＡＭＮであり、すなわち前記の列挙されたアミノ酸置換のいずれも含まない。
ＣＤＲ－Ｈ２において、１５位のアミノ酸置換は、好ましくはＤ１５Ｅであるか、又は１６位のアミノ酸置換はアミノ酸Ａである。好ましくは、ＣＤＲ－Ｈ１はアミノ酸Ａによる１６位のアミノ酸残基置換を含み；この場合、ＣＤＲ－Ｈ２の最後のアミノ酸の好ましいアミノ酸はＤ又はＧであり、最も好ましいのはＤである。したがって、好ましいＣＤＲ－Ｈ２配列はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＡＶＫＤ又はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＡＶＫＧであり、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＡＶＫＤがより好ましい。ＣＤＲ－Ｈ２が２つのアミノ酸置換を含む場合、１５位のアミノ酸Ｅと１６位のアミノ酸Ａの組合せが好ましく；この場合、ＣＤＲ－Ｈ２の最後のアミノ酸の好ましいアミノ酸はＧである。したがって、１５位のアミノ酸Ｅと１６位のアミノ酸Ａとの組合せの好ましいＣＤＲ－Ｈ２配列はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＥＡＶＫＧである。
ＣＤＲ－Ｈ３において、アミノ酸置換は、１位における、好ましくはアミノ酸Ａ又はＮによる置換、２位におけるアミノ酸Ｅによる置換、４位における、好ましくはアミノ酸Ｉによる置換及び６位における、好ましくはアミノ酸Ｓ又はＴによる置換である。好ましくは、ＣＤＲ－Ｈ３は、１位におけるアミノ酸Ａ又はＮ、６位におけるアミノ酸Ｓ又はＴを含み；この場合及びプレースホルダがＣＤＲ－Ｈ３配列中の示された位置に存在する場合、Ｘ１の好ましいアミノ酸はＧ又はＡであり、最も好ましいのはＧであり；Ｘ２はＩであり；Ｘ３はＹであり；Ｘ４はＷ又はＹである。ＣＤＲ－Ｈ３が２つのアミノ酸置換を含む場合、好ましい組合せは、１位のアミノ酸Ａ及び６位のアミノ酸Ｓ；及び１位のアミノ酸Ｎ及び６位のアミノ酸Ｔであり；この場合及びプレースホルダがＣＤＲ－Ｈ３配列の示された位置に存在する場合、Ｘ１の好ましいアミノ酸はＧ又はＡであり、最も好ましいのはＧであり；Ｘ２はＩであり、Ｘ３はＹであり、Ｘ４はＷ及びＦである。ＣＤＲ－Ｈ３が３つのアミノ酸置換を含む場合、好ましい組合せは、１位のアミノ酸Ａ、４位のアミノ酸Ｉ及び６位のアミノ酸Ｓ；及び１位のアミノ酸Ｎ、４位のアミノ酸Ｉ及び６位のアミノ酸Ｔであり、この場合及びＣＤＲ－Ｈ３配列の示された位置にプレースホルダが存在する場合、Ｘ２の好ましいアミノ酸はＩであり、Ｘ３はＹであり、Ｘ４はＷ及びＦである。ＣＤＲ－Ｈ３が４つのアミノ酸置換を含む場合、好ましい組合せは１位のアミノ酸Ｎ、２位のアミノ酸Ｅ、４位のアミノ酸Ｉ及び６位のアミノ酸Ｔであり；この場合及びＣＤＲ－Ｈ３の示された位置にプレースホルダが存在する場合、Ｘ２の好ましいアミノ酸はＩであり、Ｘ３はＹであり、Ｘ４はＷである。したがって、好ましいＣＤＲ－Ｈ３配列は、ＡＧＮＦＧＳＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＮＥＮＩＧＴＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＡＧＮＦＧＴＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＮＡＮＦＧＴＳＹＩＳＹＦＡＹ及びＡＧＮＦＧＳＳＹＩＳＹＦＡＹから選択され、ＡＧＮＦＧＳＳＹＩＷＡＹ及びＡＧＮＦＧＳＳＹＩＳＹＦＡＹが最も好ましい。
ＣＤＲ－Ｌ３において、１位のアミノ酸置換は、Ｘ１ＬＷＹＳＮＸ２ＷＶの配列において、アミノ酸Ｌによるものであるか、又はアミノ酸置換は、Ｗ９３、好ましくはＷ９３Ｙ（Ｘ１９３Ｙとも呼ばれ得る）であり、Ｘ１は、Ｖ、Ａ又はＴであり；Ｘ２は、Ｒ又はＬである。好ましくは、ＣＤＲ－Ｌ３が１つのアミノ酸置換のみを含む場合、ＣＤＲ－Ｌ３配列は、ＶＬＹＹＳＮＲＷＶである。しかしながら、ＣＤＲ－Ｌ３は、前記Ｘ１１Ｌ及びＷ９３アミノ酸置換を含まないことが好ましく、この場合、好ましいＣＤＲ－Ｌ３配列は、ＶＬＹＹＳＮＲＷＶである。
特定の科学的理論に拘束されることを望むものではないが、上に列挙されたアミノ酸置換のそれぞれは、改変されていない、すなわち前記アミノ酸残基置換を含まないＶＬ領域配列に連結されたＶＨ領域を含むか又はそれからなる、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する結合ドメインと比較して、本明細書に記載のＶＬ領域に連結されたＶＨ領域を含むか又はそれからなる、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する結合ドメインの熱安定性の上昇をもたらす。温度安定性の前記上昇は、好ましくは、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）の周知の本明細書にも記載される方法によって測定される。前記方法は、例えば、Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｎａｎｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｙ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒａｂｉｌｉｔｙ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｖｏｌｕｍｅ ５９３，２０２０，１１３５８１，ＩＳＳＮ ０００３－２６９７又はＤａｒｔ，Ｍ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．（２０１８）“Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ Ａｓｓａｙ ｆｏｒ Ｔａｒｇｅｔ Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ Ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ”ＡＣＳ ｍｅｄｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｌｅｔｔｅｒｓ，９（６），５４６－５５１）に記載されている。実施例のセクションから明らかなように、本明細書で定義されるアミノ酸置換又はその組合せは、本明細書で定義される非修飾ＣＤ３結合ドメイン（「Ｉ２Ｃ」）と比較して熱安定性の上昇（実施例１、表２及び３を参照されたい）をもたらすが、細胞傷害活性は維持され、これは熱安定性を改善するための先行技術の方法、すなわちＣＣ４４／１００シスクランプに当てはまらないことが示され、ここでは、さらなるジスルフィド結合が、本明細書で定義される非修飾ＣＤ３結合ドメインの重鎖可変領域の４４位及び軽鎖可変領域の１００位（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ、１９９１によるナンバリングスキーム）のシステイン残基でアミノ酸残基を置換することによって安定化させる（Ｒｅｉｔｅｒ，Ｙ．ｅｔ ａｌ，１９９４）ために操作された（ＶＨ及びＶＬ配列番号：それぞれ１８５４及び１８５５；実施例２、表５参照）。したがって、本明細書中に記載されるＣＤ３ε結合ドメインのＶＨ領域及びＶＬ領域の組合せは、本明細書中で定義される位置に導入される所与の置換を含有しないＶＨ領域配列及びＶＬ領域配列と比較して温度安定化される。
本発明の請求項１に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物の好ましい実施形態において、ｉｉｉ）で定義される前記１つのアミノ酸置換又はその組合せに加えて、前記ＣＤＲ－Ｈ１配列において、Ｘ２は、Ｉであり；前記ＣＤＲ－Ｈ２配列において、Ｘ２は、Ｇであり；前記ＣＤＲ－Ｈ３配列において、Ｘ１は、Ａであり、Ｘ４は、Ｆであり；及び／又は前記ＣＤＲ－Ｌ３配列において、Ｘ１は、Ａである。本明細書で定義される１つのアミノ酸置換又はその組合せは、さらにＣＤＲの特定の位置の特定のアミノ酸と組み合わされる。したがって、ｉｉｉ）による列挙されたアミノ酸置換の少なくとも１つは、存在し、前記ＣＤＲ－Ｈ２配列中において、Ｘ２の少なくとも１つは、Ｇであり；前記ＣＤＲ－Ｈ３中において、Ｘ１は、Ａであり、Ｘ４は、Ｆであり；及び／又は前記ＣＤＲ－Ｌ３配列中において、Ｘ１は、Ａであり、ＣＤＲ中にさらに存在する。本明細書中において上記で先に述べたように、ＣＤＲ中に１つのさらなるアミノ酸のみが存在する場合、Ｘ２についての好ましいアミノ酸は、前記ＣＤＲ－Ｈ１配列中におけるＩであるか、又はＸ２は、前記ＣＤＲ－Ｈ２配列中のＧであり、Ｘ２は、前記ＣＤＲ－Ｈ１配列中におけるＩであることが最も好ましい。前記さらなるアミノ酸の２つの好ましい組合せは、前記ＣＤＲ－Ｈ１配列においてＸ２がＩであり、及び前記ＣＤＲ－Ｈ３配列においてＸ４がＦであるか；又は前記ＣＤＲ－Ｈ２配列においてＸ２がＧであり、及び前記ＣＤＲ－Ｈ３配列中においてＸ４がＦであることである。前記さらなるアミノ酸の３つの好ましい組合せは、前記ＣＤＲ－Ｈ１配列においてＸ２がＩであり、前記ＣＤＲ－Ｈ３配列においてＸ１がＡであり、及びＸ４がＦであるか；又は前記ＣＤＲ－Ｈ１配列においてＸ２がＩであり、前記ＣＤＲ－Ｈ３配列においてＸ４がＦであり、及び前記ＣＤＲ－Ｌ３配列においてＸ１がＡであることである。後者のアミノ酸はさらに存在することになるため、ｉｉｉ）のアミノ酸置換と位置が重複する列挙された追加のアミノ酸は、重複するアミノ酸置換を置き換えることができないことが理解される。例えば、ｉｉｉ）による唯一のアミノ酸置換がＣＤＲ－Ｈ１中のＸ２４Ｖ又はＸ２４Ｆのいずれかである場合、前記アミノ酸は、結合ドメイン中に残存するｉｉｉ）で定義されたアミノ酸置換がないため、前記ＣＤＲ－Ｈ１配列中のアミノ酸Ｉで置き換えることができない。換言すれば、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物に含まれるｉｉｉ）で定義されるアミノ酸置換の少なくとも１つが常に存在しなければならない。
ＣＤＲの実際の配列に応じて、前記さらなるアミノ酸の１つ以上は、既に本明細書中において上記で定義されるＣＤＲの一部であり得、そうでない場合、それらのＣＤＲは、ｉｉｉ）に列挙されるような１つのアミノ酸置換又はその組合せと組み合わせて前記さらなるアミノ酸を示すように変更されることも理解される。
他の好ましい実施形態において、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物は、ｉｉｉ）で定義される前記アミノ酸置換、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２若しくはそれを超えるアミノ酸置換又は最大２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２のアミノ酸置換の組合せを含むか又はそれからなる。好ましくは、本明細書で定義される置換のみがＶＨ領域配列及びＶＬ領域配列に導入される。これは、ＶＨ領域配列及びＶＬ領域配列が本明細書で定義される置換を有する非修飾アミノ酸配列からなるように、本明細書に列挙されるすべての実施形態に適用される。
より具体的には、ｉ）前記１つのアミノ酸置換は、ａ．ＣＤＲ－Ｈ１におけるＸ２４Ｖ又はＸ２４Ｆ；ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ；及びｂ．ＣＤＲ－Ｌ３におけるＸ１１Ｌ及びＷ３Ｙから選択され；ｉｉ）２つ以上のアミノ酸置換の前記組合せは、ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ及びＣＤＲ－Ｈ３におけるＮ６Ｓ；及びＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ及びＣＤＲ－Ｈ３におけるＮ６Ｔから選択され；ｉｉｉ）３つ以上のアミノ酸置換の前記組合せは、ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ及びＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ及びＮ６Ｓ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ及びＮ６Ｔ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ｎ及びＮ６Ｔから選択され；ｉｖ）４つ以上のアミノ酸置換の前記組合せは、ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ、Ｎ６Ｓ及びＣＤＲ－Ｌ３におけるＷ３Ｙ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ及びＮ６Ｔ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ及びＮ６Ｓ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｓから選択され；ｖ）５つ又は６つのアミノ酸置換の前記組合せは、ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｔ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ｎ、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｓ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ、Ｎ６Ｓ；及びＣＤＲ－Ｌ３におけるＷ３Ｙ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ｎ、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｔ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｔ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＸ１２Ｅ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｔから選択される。
前述に従い、ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸置換Ｈ１Ａは、本明細書で定義されるＣＤＲ配列又はＶＨ領域配列内のＣＤ３ε結合ドメインに１つのアミノ酸置換のみがある場合、好ましいアミノ酸置換である。さらに、ｉｉｉ）で定義されるアミノ酸置換の組合せの場合、好ましくはＣＤＲ－Ｈ３のＨ１Ａは、前記組合せのアミノ酸置換の１つである。
一実施形態において、本発明は、ポリペプチド又はポリペプチド構築物であって、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含むか又はそれからなる、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する結合ドメインを含み、
ｉ）ＶＨ領域が、
Figure 2023547661000002
 の配列を含み、Ｘ１がＱ又はＫであり；Ｘ２がＶ又はＬであり；Ｘ３がＶ又はＥであり；Ｘ４がＧ又はＫであり；Ｘ５が、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｔ又はＩであり；Ｘ６がＭ又はＩであり；Ｘ７がＳ又はＱであり；Ｘ８が、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥであり；Ｘ９がＫ又はＱであり；Ｘ１０がＮ又はＳであり；Ｘ１１がＴ又はＩであり；Ｘ１２がＡ又はＬであり；Ｘ１３がＶ又はＭであり；Ｘ１４が、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ１５が、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ１６が、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ１７が、Ｗ、Ｆ又はＹであり；Ｘ１８がＳ又はＡであり；及び
ｉｉ）ＶＬ領域が、
Figure 2023547661000003
 の配列を含み、Ｘ１がＴ又はＡであり；Ｘ２がＰ又はＳであり；Ｘ３がＳ又はＡであり；Ｘ４がＶ又はＴであり；Ｘ５がＧ又はＥであり；Ｘ６が、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ７がＳ又はＴであり；Ｘ８はＧ又はＳであり；Ｘ９はＮ又はＹであり；Ｘ１０がＰ又はＡであり；Ｘ１１がＱ又はＥであり；Ｘ１２がＧ又はＤであり；Ｘ１３がＱ又はＨであり；Ｘ１４がＡ又はＬであり；Ｘ１５がＰ又はＦであり；Ｘ１６がＲ又はＴであり；Ｘ１７がＧ又はＡであり；Ｘ１８がＫ又はＤであり；Ｘ１９がＦ又はＭであり；Ｘ２０がＬ又はＲであり；Ｘ２１がＡ、Ｐ又はＶであり；Ｘ２２がＰ又はＳであり；Ｘ２３がＴ又はＶであり；Ｘ２４がＬ又はＩであり；Ｘ２５がＧ又はＤであり；Ｘ２６がＬ又はＩであり；Ｘ２７がＳ又はＴであり；Ｘ２８がＶ又はＡであり；Ｘ２９がＰ又はＴであり；Ｘ３０が、Ｅ又はＩであり；Ｘ３１がＹ又はＦであり；Ｘ３２が、Ｖ、Ａ又はＴであり；Ｘ３３はＲ又はＬであり；及び
ｉｉｉ）前記ＶＨ領域配列及び／又はＶＬ領域配列は、
ａ．ｉ）のＶＨ領域配列におけるＮ３０（好ましくはＳ）、Ｘ６３４Ｖ、Ｘ６３４Ｆ、Ｑ３９（Ｅ、Ｋ、Ｒ、Ｄ、好ましくはＥ）、Ｌ４５（Ｍ又はＶ、好ましくはＭ）、Ｄ６４（好ましくはＥ）、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｘ１２８１Ｔ、Ｘ１２８１Ｉ、Ｖ９９（Ａ又はＬ、好ましくはＡ）、Ｈ１０１（好ましくはＡ又はＮ）、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４（好ましくはＩ）及びＮ１０６（好ましくはＳ又はＴ）；及び
ｂ．ｉｉ）のＶＬ領域配列におけるＬ２０（好ましくはＩ又はＭ）、Ｖ３８（好ましくはＩ）、Ｘ１１４０Ｒ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９（Ｓ又はＥ、好ましくはＳ）、Ｘ３２９１Ｌ、Ｘ３３９３（好ましくはＹ）及びＧ１０２（好ましくはＳ）
から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む、ポリペプチド又はポリペプチド構築物に関する。
この実施形態では、結合ドメインに含まれ、ヒトＣＤ３ε鎖への結合を媒介する好ましいＶＨ及びＶＬ領域配列が記載される。上記から明らかなように、ｉ）及びｉｉ）のＶＨ領域配列及びＶＬ領域配列は、様々なプレースホルダを含み、ｉ）及びｉｉ）の前記ＶＨ領域及びＶＬ領域に含まれるＣＤＲに関連して、同じ階層及び命名法は、本明細書で上記に列挙されたプレースホルダに適用される。ＶＨ及びＶＬ領域の配列から明らかなように、本明細書中において上記で記載される前記ＣＤＲは、前記ＶＨ及びＶＬ領域配列の一部である。したがって、本明細書中において上記のｉ）及びｉｉ）の前記ＣＤＲの好ましい実施形態は、この好ましい実施形態にも適用される。
ｉ）のＶＨ領域は、
Figure 2023547661000004
 の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＱ又はＫであり；Ｘ２はＶ又はＬであり；Ｘ３はＶ又はＥであり；Ｘ４はＧ又はＫであり；Ｘ５は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｔ又はＩであり；Ｘ６はＭ又はＩであり；Ｘ７はＳ又はＱであり；Ｘ８は、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥであり；Ｘ９はＫ又はＱであり；Ｘ１０はＮ又はＳであり；Ｘ１１はＴ又はＩであり；Ｘ１２はＡ又はＬであり；Ｘ１３はＶ又はＭであり；Ｘ１４は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ１５は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ１６は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ１７は、Ｗ、Ｆ又はＹであり；Ｘ１８はＳ又はＡである。
前記ＶＨ領域内のＣＤＲ配列は、以下の通りである：Ｘ５ＹＡＸ６Ｎを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ１配列；ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ７ＶＫＸ８を含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ２配列；及びＨＸ１４ＮＦＧＮＳＹＸ１５ＳＸ１６Ｘ１７ＡＹを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ３配列。前記ＣＤＲ－Ｈ１配列Ｘ５ＹＡＸ６Ｎの好ましい例は、ＫＹＡＭＮ、ＶＹＡＭＮ、ＳＹＡＭＮ、ＧＹＡＭＮ、ＲＹＡＭＮ、ＴＹＡＭＮ、ＩＹＡＭＮ及びＫＹＡＩＮから選択され、ＫＹＡＭＮ又はＫＹＡＩＮが最も好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ２配列ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ７ＶＫＸ８の好ましい例は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＳ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＥ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ及びＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤから選択され、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが最も好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ３配列ＨＸ１４ＮＦＧＮＳＹＸ１５ＳＸ１６Ｘ１７ＡＹの好ましい例は、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＴＳＹＹＡＹ、ＨＲＮＦＧＮＳＹＬＳＷＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＦＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＹＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＦＷＡＹ、ＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹから選択され、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが最も好ましい。
Ｘ１について、アミノ酸Ｑが好ましい。Ｘ２について、アミノ酸Ｖが好ましい。Ｘ３について、アミノ酸Ｖが好ましい。Ｘ４について、アミノ酸Ｇが好ましい。Ｘ５について、アミノ酸Ｋが最も好ましく、Ｘ６について、アミノ酸Ｍが最も好ましい。Ｘ５及びＸ６についての好ましい組合せは、それぞれＫ及びＭ、Ｖ及びＭ、Ｓ及びＭから選択される、Ｘ５及びＸ６の組合せ等、Ｘ５のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ６のＭであり、最も好ましい組合せはＫ及びＭである。別の好ましい組合せは、それぞれＸ５及びＸ６のＫ及びＩである。前記ＣＤＲ－Ｈ１配列Ｘ５ＹＡＸ６Ｎの好ましい例は、ＫＹＡＭＮ、ＶＹＡＭＮ、ＳＹＡＭＮ、ＧＹＡＭＮ、ＲＹＡＭＮ、ＴＹＡＭＮ、ＩＹＡＭＮ及びＫＹＡＩＮから選択され、ＫＹＡＭＮ又はＫＹＡＩＮが最も好ましい。Ｘ７について、アミノ酸Ｓが最も好ましく、Ｘ８について、アミノ酸Ｄが最も好ましい。好ましい組合せは、Ｓ及びＤ、Ｓ及びＧ、Ｓ及びＫ、Ｓ及びＳからそれぞれ選択される、Ｘ７及びＸ８の組合せ等、Ｘ８のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ７のＳであり、最も好ましいのは組合せＳ及びＤである。前記ＣＤＲ－Ｈ２配列ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ７ＶＫＸ８の好ましい例は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＳ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ及びＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤから選択され、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが最も好ましい。Ｘ９について、アミノ酸Ｋが好ましい。Ｘ１０について、アミノ酸Ｎが好ましい。Ｘ１１について、アミノ酸Ｔが好ましい。Ｘ１２について、アミノ酸Ａが好ましい。Ｘ１３について、アミノ酸Ｖが好ましい。Ｘ１４について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ１５について、アミノ酸Ｉが最も好ましく；Ｘ１６について、アミノ酸Ｙが最も好ましく；Ｘ１７について、アミノ酸Ｗが最も好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ３配列ＨＸ１４ＮＦＧＮＳＹＸ１５ＳＸ１６Ｘ１７ＡＹの好ましい例は、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＴＳＹＹＡＹ、ＨＲＮＦＧＮＳＹＬＳＷＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＦＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＹＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＦＷＡＹ、ＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹから選択され、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが最も好ましい。Ｘ１８について、アミノ酸配列Ｓが好ましい。
ｉｉ）のＶＬ領域は、
Figure 2023547661000005
 の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＴ又はＡであり；Ｘ２はＰ又はＳであり；Ｘ３はＳ又はＡであり；Ｘ４はＶ又はＴであり；Ｘ５はＧ又はＥであり；Ｘ６は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ７はＳ又はＴであり；Ｘ８はＧ又はＳであり；Ｘ９はＮ又はＹであり；Ｘ１０はＰ又はＡであり；Ｘ１１はＱ又はＥであり；Ｘ１２はＧ又はＤであり；Ｘ１３はＱ又はＨであり；Ｘ１４はＡ又はＬであり；Ｘ１５はＰ又はＦであり；Ｘ１６はＲ又はＴであり；Ｘ１７はＧ又はＡであり；Ｘ１８はＫ又はＤであり；Ｘ１９はＦ又はＭであり；Ｘ２０はＬ又はＲであり；Ｘ２１はＡ、Ｐ又はＶであり；Ｘ２２はＰ又はＳであり；Ｘ２３はＴ又はＶであり；Ｘ２４はＬ又はＩであり；Ｘ２５はＧ又はＤであり；Ｘ２６はＬ又はＩであり；Ｘ２７はＳ又はＴであり；Ｘ２８はＶ又はＡであり；Ｘ２９はＰ又はＴであり；Ｘ３０は、Ｅ又はＩであり；Ｘ３１はＹ又はＦであり；Ｘ３２は、Ｖ、Ａ又はＴであり；及びＸ３３はＲ又はＬである。
前記ＶＬ領域内のＣＤＲ配列は、以下の通りである：Ｘ６ＳＳＴＧＡＶＴＸ７Ｘ８Ｘ９ＹＸ１０Ｎを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ１配列；Ｘ１７ＴＸ１８Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２を含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ２配列；及びＸ３２ＬＷＹＳＮＸ３３ＷＶを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ３配列。ＣＤＲ－Ｌ１配列の好ましい例は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＲＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ及びＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮから選択され、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｌ２配列の好ましい例は、ＧＴＫＦＬＡＰ、ＡＴＤＭＲＰＳ、ＧＴＫＦＬＶＰ及びＧＴＮＫＲＡＰから選択され、ＧＴＫＦＬＡＰが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｌ３配列の好ましい例は、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＡＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＴＬＷＹＳＮＲＷＶ及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶから選択され、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶが最も好ましい。
Ｘ１について、アミノ酸Ｔが好ましい。Ｘ２について、アミノ酸Ｐが好ましい。Ｘ３について、アミノ酸Ｓが好ましい。Ｘ４について、アミノ酸Ｖが好ましい。Ｘ５について、アミノ酸Ｇが好ましい。Ｘ６について、アミノ酸Ｇが最も好ましい。Ｘ７について、アミノ酸Ｓが最も好ましい。Ｘ８について、アミノ酸Ｇが最も好ましい。Ｘ９について、アミノ酸Ｎが最も好ましい。Ｘ１０について、アミノ酸Ｐが最も好ましい。Ｘ６～Ｘ１０は、ＶＬ領域内のＣＤＲ－Ｌ１配列の一部である。前記ＣＤＲ－Ｌ１配列の好ましい例は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＲＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ及びＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮから選択され、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが最も好ましい。Ｘ１１について、アミノ酸Ｑが好ましい。Ｘ１２について、アミノ酸Ｇが好ましい。Ｘ１３について、アミノ酸Ｑが好ましい。Ｘ１４について、アミノ酸Ａが好ましい。Ｘ１５について、アミノ酸Ｐが好ましい。Ｘ１６について、アミノ酸Ｒが好ましい。Ｘ１７について、アミノ酸Ｇが好ましい。Ｘ１８について、アミノ酸Ｋが好ましい。Ｘ１９について、アミノ酸Ｆが好ましい。Ｘ２０について、アミノ酸Ｌが好ましい。Ｘ２１について、アミノ酸Ａが好ましい。Ｘ２２について、アミノ酸Ｐが好ましい。Ｘ１７～Ｘ２２は、ＶＬ領域のＣＤＲ－Ｌ２配列の一部である。前記ＣＤＲ－Ｌ２配列の好ましい例は、ＧＴＫＦＬＡＰ、ＡＴＤＭＲＰＳ、ＧＴＫＦＬＶＰ及びＧＴＮＫＲＡＰから選択され、ＧＴＫＦＬＡＰが最も好ましい。Ｘ２３について、アミノ酸Ｔが好ましい。Ｘ２４について、アミノ酸Ｌが好ましい。Ｘ２５について、アミノ酸Ｇが好ましい。Ｘ２６について、アミノ酸Ｌが好ましい。Ｘ２７について、アミノ酸Ｓが好ましい。Ｘ２８について、アミノ酸Ｖが好ましい。Ｘ２９について、アミノ酸Ｐが好ましい。Ｘ３０について、アミノ酸Ｅが好ましい。Ｘ３１について、アミノ酸Ｙが好ましい。Ｘ３２について、アミノ酸Ｖが好ましい。Ｘ３３について、アミノ酸Ｒが好ましい。Ｘ３２及びＸ３３は、ＶＬ領域のＣＤＲ－Ｌ３配列の一部である。前記ＣＤＲ－Ｌ３配列の好ましい例は、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＡＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＴＬＷＹＳＮＲＷＶ及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶから選択され、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶが最も好ましい。
より好ましい実施形態において、ｉ）のＶＨ領域は、
Figure 2023547661000006
 の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＶ又はＥであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ又はＩであり；Ｘ３はＭ又はＩであり；Ｘ４はＳ又はＱであり；Ｘ５は、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥであり；Ｘ６は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ７は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ８は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ９はＷ又はＦであり；及びｉｉ）のＶＬ領域は、ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＸ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＸ３ＴＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＸ９ＬＷＹＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬの配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２はＮ又はＹであり；Ｘ３はＧ又はＡであり；Ｘ４はＫ又はＤであり；Ｘ５はＦ又はＭであり；Ｘ６はＬ又はＲであり；Ｘ７は、Ａ、Ｐ又はＶであり；Ｘ８はＰ又はＳであり；Ｘ９は、Ｖ、Ａ又はＴである。
ｉ）のＶＨ領域は、
Figure 2023547661000007
 の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＶ又はＥであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ又はＩであり；Ｘ３はＭ又はＩであり；Ｘ４はＳ又はＱであり；Ｘ５は、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥであり；Ｘ６は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ７は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ８は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ９はＷ又はＦである。
前記ＶＨ領域内のＣＤＲ配列は、以下の通りである：Ｘ２ＹＡＸ３Ｎを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ１配列；ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ４ＶＫＸ５を含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ２配列；及びＨＸ６ＮＦＧＮＳＹＸ７ＳＸ８Ｘ９ＡＹを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ３配列。前記ＣＤＲ－Ｈ１配列Ｘ２ＹＡＸ３Ｎの好ましい例は、ＫＹＡＭＮ、ＶＹＡＭＮ、ＳＹＡＭＮ、ＧＹＡＭＮ、ＲＹＡＭＮ、ＴＹＡＭＮ、ＩＹＡＭＮ及びＫＹＡＩＮから選択され、ＫＹＡＭＮ又はＫＹＡＩＮがより好ましく、ＫＹＡＭＮが最も好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ２配列ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ４ＶＫＸ５の好ましい例は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＳ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＥ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ及びＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤから選択され、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ又はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤがより好ましく、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが最も好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ３配列ＨＸ６ＮＦＧＮＳＹＸ７ＳＸ８Ｘ９ＡＹの好ましい例は、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＴＳＹＹＡＹ、ＨＲＮＦＧＮＳＹＬＳＷＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＦＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＹＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＦＷＡＹ、ＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹから選択され、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが最も好ましい。
Ｘ１について、アミノ酸Ｖが好ましい。Ｘ２について、アミノ酸Ｋが最も好ましく、Ｘ３について、アミノ酸Ｍが最も好ましい。Ｘ２及びＸ３についての好ましい組合せは、それぞれＫ及びＭ、Ｖ及びＭ、Ｓ及びＭから選択される、Ｘ２及びＸ３の組合せ等、Ｘ２のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ３のＭであり、最も好ましい組合せはＫ及びＭである。別の好ましい組合せは、それぞれＸ２及びＸ３のＫ及びＩである。前記ＣＤＲ－Ｈ１配列Ｘ２ＹＡＸ３Ｎの好ましい例は、ＫＹＡＭＮ、ＶＹＡＭＮ、ＳＹＡＭＮ、ＧＹＡＭＮ、ＲＹＡＭＮ、ＴＹＡＭＮ、ＩＹＡＭＮ及びＫＹＡＩＮから選択され、ＫＹＡＭＮ又はＫＹＡＩＮがより好ましく、ＫＹＡＭＮが最も好ましい。Ｘ４について、アミノ酸Ｓが好ましい。Ｘ５について、アミノ酸Ｄが最も好ましい。好ましい組合せは、例えば、それぞれＳ及びＤ、Ｓ及びＧ、Ｓ及びＫ、Ｓ及びＳから選択されるＸ４及びＸ５についての組合せ等、Ｘ５のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ４のＳであり、最も好ましくは組合せＳ及びＤである。前記ＣＤＲ－Ｈ２配列ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ４ＶＫＸ５の好ましい例は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＳ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ及びＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤから選択され、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ又はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤが好ましく、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが最も好ましい。Ｘ６について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ７について、アミノ酸Ｉが最も好ましく；８について、アミノ酸Ｙが最も好ましく；Ｘ９について、アミノ酸Ｗが最も好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ３配列ＨＸ６ＮＦＧＮＳＹＸ７ＳＸ８Ｘ９ＡＹの好ましい例は、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＴＳＹＹＡＹ、ＨＲＮＦＧＮＳＹＬＳＷＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＦＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＹＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＦＷＡＹ、ＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹから選択され、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが最も好ましい。
ｉｉ）のＶＬ領域は、ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＸ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＸ３ＴＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＸ９ＬＷＹＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬの配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２はＮ又はＹである；Ｘ３はＧ又はＡであり；Ｘ４はＫ又はＤであり；Ｘ５はＦ又はＭであり；Ｘ６はＬ又はＲであり；Ｘ７は、Ａ、Ｐ又はＶであり；Ｘ８はＰ又はＳであり；Ｘ９は、Ｖ、Ａ又はＴである。
前記ＶＬ領域内のＣＤＲ配列は、以下の通りである：Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ１配列；Ｘ３ＴＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８を含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ２配列；及びＸ９ＬＷＹＳＮＲＷＶを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ３配列。ＣＤＲ－Ｌ１配列の好ましい例は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＲＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ及びＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮから選択され、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｌ２配列の好ましい例は、ＧＴＫＦＬＡＰ、ＡＴＤＭＲＰＳ、ＧＴＫＦＬＶＰ及びＧＴＮＫＲＡＰから選択され、ＧＴＫＦＬＡＰが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｌ３配列の好ましい例は、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＡＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＴＬＷＹＳＮＲＷＶ及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶから選択され、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶが最も好ましい。
Ｘ１について、アミノ酸Ｇが最も好ましい。Ｘ２について、アミノ酸Ｎが好ましい。Ｘ１及びＸ２は、ＶＬ領域内のＣＤＲ－Ｌ１配列Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮの一部である。前記ＣＤＲ－Ｌ１配列の好ましい例は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＲＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ及びＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮから選択され、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが最も好ましい。Ｘ３について、アミノ酸Ｇが好ましい。Ｘ４について、アミノ酸Ｋが好ましい。Ｘ５について、アミノ酸Ｆが好ましい。Ｘ６について、アミノ酸Ｌが好ましい。Ｘ７について、アミノ酸Ａが最も好ましい。Ｘ８について、アミノ酸Ｐが好ましい。Ｘ３～Ｘ８は、ＶＬ領域のＣＤＲ－Ｌ２配列Ｘ３ＴＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８の一部である。前記ＣＤＲ－Ｌ２配列の好ましい例は、ＧＴＫＦＬＡＰ、ＡＴＤＭＲＰＳ、ＧＴＫＦＬＶＰ及びＧＴＮＫＲＡＰから選択され、ＧＴＫＦＬＡＰが最も好ましい。Ｘ９について、アミノ酸Ｖが最も好ましい。Ｘ９は、ＶＬ領域のＣＤＲ－Ｌ３配列Ｘ９ＬＷＹＳＮＲＷＶの一部である。前記ＣＤＲ－Ｌ３配列の好ましい例は、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＡＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＴＬＷＹＳＮＲＷＶ及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶから選択され、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶが最も好ましい。
他の好ましい実施形態において、ｉｉ）のＶＨ領域は、
Figure 2023547661000008
 の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＶ又はＥであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｒ又はＩであり；Ｘ３はＭ又はＩであり；Ｘ４はＳ又はＱであり；Ｘ５は、Ｄ、Ｇ、Ｋ又はＳであり；Ｘ６は、Ｇ又はＡであり；Ｘ７は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ８は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ９はＷ又はＦであり；及びｉｉ）のＶＬ領域は、ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＸ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＫＦＬＸ３ＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＸ４ＬＷＹＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬやの配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＧ又はＡであり；Ｘ２はＮ又はＹであり；Ｘ３はＡ又はＶであり；Ｘ４は、Ｖ、Ａ又はＴである。
ｉｉ）のＶＨ領域は、
Figure 2023547661000009
 の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＶ又はＥであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｒ又はＩであり；Ｘ３はＭ又はＩであり；Ｘ４はＳ又はＱであり；Ｘ５は、Ｄ、Ｇ、Ｋ又はＳであり；Ｘ６は、Ｇ又はＡであり；Ｘ７は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ８は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ９はＷ又はＦである。
前記ＶＨ領域内のＣＤＲ配列は、以下の通りである：Ｘ２ＹＡＸ３Ｎを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ１配列；ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ４ＶＫＸ５を含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ２配列；及びＨＸ６ＮＦＧＮＳＹＸ７ＳＸ８Ｘ９ＡＹを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ３配列。前記ＣＤＲ－Ｈ１配列Ｘ２ＹＡＸ３Ｎの好ましい例は、ＫＹＡＭＮ、ＶＹＡＭＮ、ＳＹＡＭＮ、ＲＹＡＭＮ、ＩＹＡＭＮ及びＫＹＡＩＮから選択され、ＫＹＡＭＮ又はＫＹＡＩＮがより好ましく、ＫＹＡＭＮが最も好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ２配列ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ４ＶＫＸ５の好ましい例は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＳ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ及びＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤから選択され、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ又はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤがより好ましく、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが最も好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ３配列ＨＸ６ＮＦＧＮＳＹＸ７ＳＸ８Ｘ９ＡＹの好ましい例は、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＴＳＹＹＡＹ、ＨＲＮＦＧＮＳＹＬＳＷＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＦＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＹＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＦＷＡＹ、ＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹから選択され、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ又はＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹがより好ましく、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが最も好ましい。
Ｘ１について、アミノ酸Ｖが好ましい。Ｘ２について、アミノ酸Ｋが最も好ましく、Ｘ３について、アミノ酸Ｍが最も好ましい。Ｘ２及びＸ３についての好ましい組合せは、それぞれＫ及びＭ、Ｖ及びＭ、Ｓ及びＭから選択される、Ｘ２及びＸ３の組合せ等、Ｘ２のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ３のＭであり、最も好ましい組合せはＫ及びＭである。別の好ましい組合せは、それぞれＸ２及びＸ３のＫ及びＩである。前記ＣＤＲ－Ｈ１配列Ｘ２ＹＡＸ３Ｎの好ましい例は、ＫＹＡＭＮ、ＶＹＡＭＮ、ＳＹＡＭＮ、ＲＹＡＭＮ、ＩＹＡＭＮ及びＫＹＡＩＮから選択され、ＫＹＡＭＮ又はＫＹＡＩＮがより好ましく、ＫＹＡＭＮが最も好ましい。Ｘ４について、アミノ酸Ｓが好ましい。Ｘ５について、アミノ酸Ｄが最も好ましい。好ましい組合せは、それぞれＳ及びＤ、Ｓ及びＧ、Ｓ及びＫ、Ｓ及びＳから選択される４及びＸ５についての組合せ等、Ｘ５のアミノ酸残基のいずれかと組み合わせたＸ４のＳであり、最も好ましいのは組合せＳ及びＤである。前記ＣＤＲ－Ｈ２配列ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ４ＶＫＸ５の好ましい例は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ及びＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤから選択され、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ又はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤがより好ましく、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが最も好ましく、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＫ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＳ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＥ、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ及びＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＱＶＫＤから選択され、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが最も好ましい。Ｘ６について、アミノ酸Ｇが最も好ましく；Ｘ７について、アミノ酸Ｉが最も好ましく；８について、アミノ酸Ｙが最も好ましく；Ｘ９について、アミノ酸Ｗが最も好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ３配列ＨＸ６ＮＦＧＮＳＹＸ７ＳＸ８Ｘ９ＡＹの好ましい例は、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＴＳＹＹＡＹ、ＨＲＮＦＧＮＳＹＬＳＷＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＦＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＹＦＡＹ、ＨＧＮＦＧＮＳＹＬＳＦＷＡＹ、ＨＡＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹから選択され、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが最も好ましい。
ｉｉ）のＶＬ領域は、ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＸ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＫＦＬＸ３ＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＸ４ＬＷＹＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬの配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＧ又はＡであり；Ｘ２はＮ又はＹであり；Ｘ３はＡ又はＶであり；Ｘ４は、Ｖ、Ａ又はＴである。
前記ＶＬ領域内のＣＤＲ配列は、以下の通りである：Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ１配列；ＧＴＫＦＬＸ３Ｐを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ２配列；及びＸ４ＬＷＹＳＮＲＷＶを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ３配列。ＣＤＲ－Ｌ１配列の好ましい例は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＲＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ及びＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮから選択され、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｌ２配列の好ましい例は、ＧＴＫＦＬＡＰ、ＡＴＤＭＲＰＳ、ＧＴＫＦＬＶＰ及びＧＴＮＫＲＡＰから選択され、ＧＴＫＦＬＡＰが最も好ましい。ＣＤＲ－Ｌ３配列の好ましい例は、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＡＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＴＬＷＹＳＮＲＷＶ及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶから選択され、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶが最も好ましい。
Ｘ１について、アミノ酸Ｇが好ましい。Ｘ２について、アミノ酸Ｎが好ましい。Ｘ１及びＸ２は、ＶＬ領域内のＣＤＲ－Ｌ１配列Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ２ＹＰＮの一部である。前記ＣＤＲ－Ｌ１配列の好ましい例は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ、ＲＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮ、ＡＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ及びＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮから選択され、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが最も好ましい。Ｘ３は、ＶＬ領域のＣＤＲ－Ｌ２配列ＧＴＫＦＬＸ３Ｐの一部である。前記ＣＤＲ－Ｌ２配列は、ＧＴＫＦＬＡＰ又はＧＴＫＦＬＶＰのいずれかであり得、ＧＴＫＦＬＡＰが好ましい。Ｘ３について、アミノ酸Ａが好ましい。Ｘ４は、ＶＬ領域のＣＤＲ－Ｌ３配列Ｘ４ＬＷＹＳＮＲＷＶの一部である。前記ＣＤＲ－Ｌ３配列の好ましい例は、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ、ＡＬＷＹＳＮＲＷＶ及びＴＬＷＹＳＮＲＷＶから選択され、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶが最も好ましい。Ｘ４について、アミノ酸Ｖが最も好ましい。
さらに好ましい実施形態では、ｉ）のＶＨ領域は、
Figure 2023547661000010
 の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＫ又はＳであり；Ｘ２はＤ又はＧであり；Ｘ３はＩ又はＶであり；Ｘ４はＹ又はＷであり；及びｉｉ）のＶＬ領域は、ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ１ＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＫＦＬＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＸ２ＬＷＹＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬの配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＮ又はＹであり；Ｘ２はＶ又はＡである。
ｉ）のＶＨ領域は、
Figure 2023547661000011
 の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＫ又はＳであり、Ｋが好ましく；Ｘ２はＤ又はＧであり、Ｄが好ましく；Ｘ３は、Ｉ又はＶであり、Ｉが好ましく；Ｘ４はＹ又はＷであり、Ｙが好ましい。
前記ＶＨ領域内のＣＤＲ配列は、以下の通りである：Ｘ１ＹＡＭＮを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ１配列；ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＸ２を含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ２配列；及びＨＧＮＦＧＮＳＹＸ３ＳＸ４ＷＡＹを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｈ３配列。前記ＣＤＲ－Ｈ１配列Ｘ１ＹＡＭＮはＫＹＡＭＮ又はＳＹＡＭＮから選択され、ＫＹＡＭＮが好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ２配列ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＸ２の好ましい例は、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ及びＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧから選択され、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤが好ましい。前記ＣＤＲ－Ｈ３配列ＨＧＮＦＧＮＳＹＸ３ＳＸ４ＷＡＹは、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹ又はＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＷＡＹであり、ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＡＹが好ましい。
ｉｉ）のＶＬ領域は、ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ１ＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＫＦＬＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＸ２ＬＷＹＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬの配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１はＮ又はＹであり、Ｎが好ましく；Ｘ２はＶ又はＡであり、Ｖが好ましい。
前記ＶＬ領域内のＣＤＲ配列は、以下の通りである：ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＸ１ＹＰＮを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ１配列；ＧＴＫＦＬＡＰを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ２配列；及びＸ２ＬＷＹＳＮＲＷＶを含むか又はそれからなるＣＤＲ－Ｌ３配列。前記ＣＤＲ－Ｌ１配列は、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮ又はＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＹＹＰＮであり、ＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮが好ましい。前記ＣＤＲ－Ｌ３配列は、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶ又はＡＬＷＹＳＮＲＷＶであり、ＶＬＷＹＳＮＲＷＶが好ましい。
好ましい実施形態では、ｉ）のＶＨ領域は、配列番号１２４、１７２、３６２、５５２、７３０、９２８、１１０６、１２９６、１４７４、１６６４又は１８５４で定義される配列を含むか又はそれからなり、ｉｉ）のＶＬ領域は、配列番号１２５、１７３、３６３、５５３、７３１、９２９、配列番号１１０７、配列番号１２９７、配列番号１４７５、配列番号１６６５又は配列番号１８５５で定義される配列を含むか又はそれからなる。ｉ）及びｉｉ）のＶＨ領域及びＶＬ領域の好ましい組合せは、配列番号１２４及び１２５（「２Ｂ２」と呼ばれる結合剤の組合せ）、１７２及び１７３（「Ａ２Ｊ」）、３６２及び３６３（「Ｅ１Ｌ」）、５５２及び５５３（「Ｅ２Ｍ」）、７３０及び７３１（「Ｆ１２Ｑ」）、９２８及び９２９（「Ｆ６Ａ」）、１１０６及び１１０７（「Ｆ７Ｏ」）、１２９６及び１２９７（「Ｇ４Ｈ」）、１４７４及び１４７５（「Ｈ１Ｅ」）、１６６４及び１６６５（「Ｈ２Ｃ」）又は１８５４及び１８５５（「Ｉ２Ｃ」）に定義されている。好ましいのは、ＣＤ３ε結合ドメインが、配列番号１２４及び１２５、１７２及び１７３、３６２及び３６３、５５２及び５５３、７３０及び７３１、９２８及び９２９、１１０６及び１１０７、１２９６及び１２９７、１４７４及び１４７５、１６６４及び１６６５並びに１８５４及び１８５５からなる群から選択されるｉ）及びｉｉ）のＶＨ及びＶＬ領域の組合せを含むか又はそれからなることである。より好ましいのは、ＣＤ３ε結合ドメインが、配列番号１２４及び１２５、３６２及び３６３、７３０及び７３１、９２８及び９２９、１１０６及び１１０７、１２９６及び１２９７、１４７４及び１４７５、１６６４及び１６６５並びに１８５４及び１８５５からなる群から選択されるｉ）及びｉｉ）のＶＨ及びＶＬ領域の組合せを含むか又はそれからなることである。さらにより好ましいのは、ＣＤ３ε結合ドメインが、配列番号１２４及び１２５、７３０及び７３１、１６６４及び１６６５並びに１８５４及び１８５５からなる群から選択されるｉ）及びｉｉ）のＶＨ及びＶＬ領域の組合せを含むか又はそれからなることである。なおさらにより好ましい実施形態において、ＣＤ３ε結合ドメインは、配列番号７３０及び７３１、１６６４及び１６６５並びに１８５４及び１８５５からなる群から選択されるｉ）及びｉｉ）のＶＨ及びＶＬ領域の組合せを含むか又はそれからなる。
最も好ましい実施形態では、ｉ）のＶＨ領域は、
Figure 2023547661000012
 の配列を含むか又はそれからなり；及びｉｉ）のＶＬ領域は、ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＫＦＬＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＶＬＷＹＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号１８５５）の配列を含むか又はそれからなる。
ＣＤＲ配列中のアミノ酸置換に関連して本明細書で上に概説し、本実施形態にも適用するように、ｉ）のＶＨ領域及び／又はｉｉ）のＶＬ領域は、本明細書で上に明記した１つ以上のアミノ酸置換を含む。したがって、可変領域の列挙されたアミノ酸置換の少なくとも１つは、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する前記結合ドメインに含まれる。前記少なくとも１つ又は１つ以上のアミノ酸置換は、１つのアミノ酸置換のみが存在する場合、前記ＶＨ領域若しくは前記ＶＬ領域のＣＤＲ配列中に存在し得るか、又は２つ以上のアミノ酸置換が存在する場合、ＶＨ領域とＶＬ領域との両方のＣＤＲ中に存在し得るか、又はＶＨ領域若しくはＶＬ領域のみのＣＤＲ配列に限定され得る。２つ以上のアミノ酸置換が存在する特定の実施形態において、置換は、ＶＨ領域及びＶＬ領域にあるか、又は１つの可変領域のみにある。好ましくは、置換は、ＶＨ領域及びＶＬ領域内にある。
具体的には、ｉ）のＶＨ及び／又はｉｉ）のＶＬ領域配列は、
ａ．ｉ）のＶＨ領域配列におけるＮ３０（好ましくはＳ）、Ｘ６３４Ｖ、Ｘ６３４Ｆ、Ｑ３９（Ｅ、Ｋ、Ｒ、Ｄ、好ましくはＥ）、Ｌ４５（Ｍ又はＶ、好ましくはＭ）、Ｄ６４（好ましくはＥ）、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｘ１２８１Ｔ、Ｘ１２８１Ｉ、Ｖ９９（Ａ又はＬ、好ましくはＡ）、Ｈ１０１（好ましくはＡ又はＮ）、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４（好ましくはＩ）、Ｎ１０６（好ましくはＳ又はＴ）；及び
ｂ．ｉｉ）のＶＬ領域配列におけるＬ２０（好ましくはＩ又はＭ）、Ｖ３８（Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ又はＹ、好ましくはＩ）、Ｘ１１４０Ｒ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９（Ｓ又はＥ、好ましくはＳ）、Ｘ３２９１Ｌ、Ｘ３３９３（好ましくはＹ）、Ｇ１０２（好ましくはＳ）
から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。
ＶＨ領域配列において、３０位のアミノ酸置換は、好ましくはＳである（したがって、Ｎ３０Ｓと書くことができ；位置番号に従って与えられる後続の置換についても同様である）。３４位のアミノ酸置換はＶ又はＦである。好ましくは、ＶＨ領域配列の３４位はＩ又はＭ、最も好ましくはＩを含む。３９位のアミノ酸置換はＥ、Ｋ、Ｒ、Ｄ、好ましくはＥである。４５位のアミノ酸置換は好ましくはＭ又はＶ、より好ましくはＭである。６４位のアミノ酸置換は好ましくはＥである。６５位のアミノ酸置換はＡである。８１位のアミノ酸置換はＶ、Ｔ又はＩ、好ましくはＶである。９９位のアミノ酸置換は好ましくはＡ又はＬ、より好ましくはＡである。１０１位のアミノ酸置換は好ましくはＡ又はＮ、より好ましくはＡ（Ｈ１Ａ）である。１０２位のアミノ酸置換はＥである。１０４位のアミノ酸置換は好ましくはＩである。１０６位のアミノ酸置換は好ましくはＳ又はＴ、より好ましくはＳである。
上記にもかかわらず、ＶＨ領域配列内のＣＤＲ－Ｈ２配列では、６４位のアミノ酸置換は、好ましくはＤ１５Ｅであるか、又は６５位のアミノ酸置換はアミノ酸Ａによるものである。好ましくは、前記ＣＤＲ－Ｈ２は、アミノ酸Ａによる６５位のアミノ酸残基置換を含み；この場合、ＣＤＲ－Ｈ２の最後のアミノ酸の好ましいアミノ酸はＤ又はＧ、好ましくはＤである。したがって、好ましいＣＤＲ－Ｈ２配列はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＡＶＫＤ又はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＡＶＫＧであり、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＡＶＫＤがより好ましい。ＣＤＲ－Ｈ２が２つのアミノ酸置換を含む場合、６４位のアミノ酸Ｅ及び６４位のアミノ酸Ａの組合せが好ましく；この場合、ＣＤＲ－Ｈ２の最後のアミノ酸の好ましいアミノ酸はＧである。したがって、６４位のアミノ酸Ｅと６５位のアミノ酸Ａとの組合せの好ましいＣＤＲ－Ｈ２配列はＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＥＡＶＫＧである。
ＶＨ配列のＣＤＲ－Ｈ３配列において、アミノ酸置換は、１０１位における、好ましくはアミノ酸Ａ又はＮによる置換、１０２位におけるアミノ酸Ｅによる置換、１０４位における、好ましくはアミノ酸Ｉによる置換及び１０６位における、好ましくはアミノ酸Ｓ又はＴによる置換である。好ましくは、ＣＤＲ－Ｈ３は、１０１位におけるアミノ酸Ａ又はＮ、１０６位におけるアミノ酸Ｓ又はＴを含み；この場合及びプレースホルダがＣＤＲ－Ｈ３配列中の示された位置に存在する場合、Ｘ１４の好ましいアミノ酸はＧ又はＡであり、最も好ましいのはＧであり；Ｘ１５はＩであり；Ｘ１６はＹであり；Ｘ１７はＷ又はＹである。ＣＤＲ－Ｈ３が２つのアミノ酸置換を含む場合、好ましい組合せは、１０１位のアミノ酸Ａ及び１０６位のアミノ酸Ｓ；及び１０１位のアミノ酸Ｎ及び１０６位のアミノ酸Ｔであり；この場合及びプレースホルダがＣＤＲ－Ｈ３配列の示された位置に存在する場合、Ｘ１４の好ましいアミノ酸はＧ又はＡであり、最も好ましいのはＧであり；Ｘ１５はＩであり、Ｘ１６はＹであり、Ｘ１７はＷ及びＦである。ＣＤＲ－Ｈ３が３つのアミノ酸置換を含む場合、好ましい組合せは、１０１位のアミノ酸Ａ、１０４位のアミノ酸Ｉ及び１０６位のアミノ酸Ｓ；及び１０１位のアミノ酸Ｎ、１０４位のアミノ酸Ｉ及び１０６位のアミノ酸Ｔであり、この場合及びＣＤＲ－Ｈ３配列の示された位置にプレースホルダが存在する場合、Ｘ１５の好ましいアミノ酸はＩであり、Ｘ１６はＹであり、Ｘ１７はＷ及びＦである。ＣＤＲ－Ｈ３が４つのアミノ酸置換を含む場合、好ましい組合せは１０１位のアミノ酸Ｎ、１０２位のアミノ酸Ｅ、１０４位のアミノ酸Ｉ及び１０６位のアミノ酸Ｔであり；この場合及びＣＤＲ－Ｈ３の示された位置にプレースホルダが存在する場合、Ｘ１５の好ましいアミノ酸はＩであり、Ｘ１６はＹであり、Ｘ１７はＷである。したがって、好ましいＣＤＲ－Ｈ３配列は、ＡＧＮＦＧＳＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＮＥＮＩＧＴＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＡＧＮＦＧＴＳＹＩＳＹＷＡＹ、ＮＡＮＦＧＴＳＹＩＳＹＦＡＹ及びＡＧＮＦＧＳＳＹＩＳＹＦＡＹから選択され、ＡＧＮＦＧＳＳＹＩＳＹＷＡＹ及びＡＧＮＦＧＳＳＹＩＳＹＦＡＹが最も好ましい。
ＶＬ領域配列において、２０位におけるアミノ酸置換は、好ましくはＩ又はＭ、より好ましくはＩである。３８位におけるアミノ酸置換は、好ましくはＩ、Ｌ、Ｍ、Ｆ又はＹ、より好ましくはＩによるものである。４０位におけるアミノ酸置換は、好ましくはＫ又はＲ、より好ましくはＫである。６９位におけるアミノ酸置換は、好ましくはＳ又はＥ、より好ましくはＳである。９１位におけるアミノ酸置換はＬである。９３位におけるアミノ酸置換は、好ましくはＹである。１０２位におけるアミノ酸置換は、好ましくはＳである。
上記にもかかわらず、ＶＬ領域配列内のＣＤＲ－Ｌ３配列において、１位のアミノ酸置換はアミノ酸Ｌによるものであるか、又はアミノ酸置換はＷ９３、好ましくはＷ９３Ｙである。好ましくは、ＣＤＲ－Ｌ３配列は、ＣＤＲ－Ｌ３がアミノ酸置換を含む場合、ＶＬＹＹＳＮＲＷＶである。しかしながら、ＣＤＲ－Ｌ３は、前記Ｘ１１Ｌ及びＷ９３アミノ酸置換を含まないことが好ましく、この場合、好ましいＣＤＲ－Ｌ３配列はＶＬＹＹＳＮＲＷＶである。
前述に従い、本明細書で定義されるＶＨ領域配列及び／又はＶＬ領域配列内のＣＤ３ε結合ドメイン中にただ１つのアミノ酸置換が存在する場合、ＶＨ領域（ＣＤＲ－Ｈ３の一部）中のアミノ酸置換Ｈ１０１Ａは、そのアミノ酸置換であることが好ましい。さらに、ｉｉｉ）で定義されるアミノ酸置換の組合せの場合、ＶＨ領域配列中のＨ１０１Ａが、前記組合せのアミノ酸置換の１つであるのが好ましい。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物の好ましい実施形態において、ｉｉｉ）で定義される前記１つのアミノ酸置換又はその組合せに加えて、Ｘ６は、Ｉであり；Ｘ８は、Ｇであり；前記ＶＨ領域配列において、Ｘ１２は、Ｌであり、Ｘ１４は、Ａであり、Ｘ１７は、Ｆであり；及び／又はＸ３２は、前記ＶＬ領域配列中のＡである。本発明の請求項１に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物の好ましい実施形態において、ｉｉｉ）で定義される前記１つのアミノ酸置換又はその組合せに加えて、Ｘ６は、Ｉであり；Ｘ８は、Ｇであり；前記ＶＨ領域配列中において、Ｘ１４は、Ａであり、Ｘ１７は、Ｆであり；及び／又は前記ＶＬ領域配列において、Ｘ３２は、Ａである。本明細書で定義される１つのアミノ酸置換又はその組合せは、さらにＣＤＲの特定の位置の特定のアミノ酸と組み合わされる。したがって、ｉｉｉ）による列挙されたアミノ酸置換の少なくとも１つが存在し、Ｘ８の少なくとも１つは、Ｇであり；前記ＶＨ領域配列において、Ｘ１４は、Ａであり、Ｘ１７は、Ｆであり；及び／又は前記ＶＬ領域配列において、Ｘ３２は、Ａであり、ＣＤＲ中にさらに存在する。本明細書中において上記で先に述べたように、ＣＤＲ中に１つのさらなるアミノ酸のみが存在する場合、前記ＶＨ領域配列中において、Ｘ６の好ましいアミノ酸は、Ｉであるか、又はＸ８は、Ｇであり、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ５は、Ｉであることが最も好ましい。前記さらなるアミノ酸の２つの好ましい組合せは、前記ＶＨ領域配列においてＸ６がＩであり、Ｘ１７がＦであるか；又は前記ＶＨ領域配列においてＸ８がＧであり、Ｘ１７がＦであることである。前記さらなるアミノ酸の３つの好ましい組合せは、前記ＶＨ領域配列においてＸ６がＩであり、Ｘ１４がＡであり、Ｘ１７がＦであるか；又は前記ＶＨ領域配列においてＸ６がＩであり、Ｘ１７がＦであり、及び前記ＶＬ領域配列においてＸ３２がＡであることである。後者のアミノ酸は、さらに存在することになるため、ｉｉｉ）のアミノ酸置換と位置が重複する列挙された追加のアミノ酸は、重複するアミノ酸置換を置き換えることができないことが理解される。例えば、ｉｉｉ）による唯一のアミノ酸置換がＣＤＲ－Ｈ１中のＸ６３４Ｖ又はＸ６３４Ｆのいずれかである場合、前記アミノ酸は、結合ドメイン中に残存するｉｉｉ）で定義されたアミノ酸置換がないため、前記ＣＤＲ－Ｈ１配列中のアミノ酸Ｉで置き換えることができない。換言すれば、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物に含まれるｉｉｉ）で定義されるアミノ酸置換の少なくとも１つが常に存在しなければならない。
ＶＨ領域配列及び／又はＶＬ領域配列の実際の配列に依存して、前記さらなるアミノ酸の１つ以上は、既に本明細書中において上記で定義されるような所与の可変配列の一部であり得るか、又はそうでない場合、前記所与の可変領域は、ｉｉｉ）に列挙されるような１つのアミノ酸置換又はその組合せと組み合わせて前記さらなるアミノ酸を示すように変更されるであろうことも理解される。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物の好ましい実施形態において、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超えるアミノ酸置換のｉｉｉ）で定義される前記アミノ酸置換の組合せを含む。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物の好ましい実施形態において、ｉ）前記１つのアミノ酸置換はａ．ＶＨ領域におけるＸ６３４Ｖ、Ｑ３９Ｅ、Ｑ３９Ｋ、Ｑ３９Ｒ、Ｑ３９Ｄ、Ｌ４５Ｍ、Ｌ４５Ｖ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｘ１２８１Ｔ、Ｘ１２８１Ｉ、Ｖ９９Ａ、Ｖ９９Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｈ１０１Ｎ；及びｂ．Ｖ３８Ｉ、Ｖ３８Ｌ、Ｖ３８Ｍ、Ｖ３８Ｆ、Ｖ３８Ｙ、Ｘ１１４０Ｒ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ、Ｘ２４６９Ｅ、Ｘ３２９１Ｌ、Ｘ３３９３Ｙから選択され；ｉｉ）２つ以上のアミノ酸置換の組合せは、ＶＨ領域におけるＸ６３４Ｆ及びＡ８１Ｖ（Ｘ１２８１Ｖとも称し得る）；ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ及びＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ；ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ及びＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｒ；ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ及びＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ；ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ及びＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｒ；ＶＨ領域におけるＬ４５Ｖ及びＶＬ領域におけるＶ３８Ｆ；ＶＨ領域におけるＬ４５Ｖ及びＶＬ領域におけるＶ３８Ｙ；ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ及びＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ；ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＡ８１Ｖ及びＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋから選択され；ｉｉｉ）３つ以上のアミノ酸置換の前記組合せは、ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓから選択され；ｉｖ）４つ以上のアミノ酸置換の前記組合せは、ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＡ８１Ｖ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓから選択され；及び／又はｖ）５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０若しくはそれを超えるアミノ酸置換の前記組合せは、ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ；ＶＨ領域におけるＡ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、Ａ８１Ｖ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｇ１０２Ｓ；ＶＨ領域におけるＬ４５Ｖ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｆ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓから選択される。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のより好ましい実施形態では、アミノ酸置換の前記組合せは、
ｉ）ＶＨ領域における、
ａ．Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
ｂ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ及びＮ１０６Ｓ；
ｃ．Ｌ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
ｄ．Ｌ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
ｅ．Ｑ３９Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ｎ及びＮ１０６Ｔ；
ｆ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
ｇ．Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ及びＮ１０６Ｔ；
ｈ．Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ及びＮ１０６Ｓ；
ｉ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
ｊ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
ｋ．Ｘ７６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
ｌ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
ｍ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
ｎ．Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
ｏ．Ｎ３０Ｓ、Ｑ３９Ｅ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ及びＮ１０６Ｔ；
ｐ．Ｌ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
ｑ．Ｎ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
ｒ．Ｎ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
ｉｉ）ＶＬ領域における、
ａ．Ｌ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ｂ．Ｌ２０Ｉ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ｃ．Ｌ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｅ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ｄ．Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ｅ．Ｌ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ｆ．Ｌ２０Ｍ、Ｘ１１４０Ｋ及びＸ２４６９Ｅ；
ｇ．Ｌ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｅ及びＧ１０２Ｓ；
ｈ．Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ｉ．Ｘ１１４０Ｋ及びＸ２４６９Ｓ；並びに
ｉｉｉ）ｉ）及びｉｉ）の１つのアミノ酸置換の組合せ
から選択される。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらに他の好ましい実施形態では、ｉｉｉ）のアミノ酸置換の組合せの前記組合せは、
ａ．ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ｂ．ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ｃ．ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ｄ．ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｅ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ｅ．ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ｎ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ｆ．ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ｇ．ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ｈ．ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ｉ．ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ｊ．ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ｋ．ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ｌ．ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ｍ．ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ｎ．ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ｏ．ＶＨ領域におけるＮ３０Ｓ、Ｑ３９Ｅ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｍ、Ｘ１１４０Ｋ及びＸ２４６９Ｅ；
ｐ．ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｅ及びＧ１０２Ｓ；
ｑ．ＶＨ領域におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＸ２４６９Ｓ；及び
ｒ．ＶＨ領域におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＸ２４６９Ｓ
から選択される。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物の他の好ましい実施形態では、定義されるアミノ酸置換の組合せの前記組合せにおいて、
ａ．及びｍ．では、Ｘ６は、前記ＶＨ領域配列中のＩであり；
ｂ．及びｒ．では、Ｘ８は、前記ＶＨ領域配列中のＧであり；
ｃ．では、Ｘ１２は、前記ＶＨ領域中のＬであり；
ｄ．では、前記ＶＨ領域において、Ｘ１２は、Ｌであり、Ｘ１７は、Ｆであり；
ｅ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ６は、Ｉであり、Ｘ１４は、Ａであり、及びＸ１７は、Ｆであり；
ｆ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ６は、Ｉであり；及び前記ＶＬ領域配列において、Ｘ３２は、Ａであり；
ｇ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ６は、Ｉであり；
ｈ．では、及びｉ．前記ＶＨ領域配列において、Ｘ８は、Ｇであり；
ｊ．、ｌ及びｎ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ６は、Ｉであり、Ｘ１７は、Ｆであり；及び前記ＶＬ領域配列において、Ｘ３２は、Ａであり；
ｋ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ６は、Ｉであり；及び前記ＶＬ領域配列において、Ｘ３２は、Ａであり；
ｐ．では、前記ＶＨ領域において、Ｘ１２は、Ｌであり；又は
ｑ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ８は、Ｇであり、Ｘ１７は、Ｆである。
本実施形態において定義されるようなＶＨ領域配列及びＶＬ領域配列の例は、配列番号２０１２及び２０１３；２０２０及び２０２１；２０２８及び２０２９；２０３６及び２０３７；２０４４及び２０４５；２６及び２７；３４及び３５；４２及び４３；５０及び５１；５８及び５９；６６及び６７；７４及び７５；８２及び８３；９０及び９１；９８及び９９；１００及び１０１；１０８及び１０９；１１６及び１１７によって定義される。表２は、「Ｉ２Ｃ」として定義されるＶＨ及びＶＬの組合せ（それぞれ配列番号１８５４及び１８５５）を含むＣＤ３ε結合ドメインを超えるＣＤ３ε結合ドメインの前述のＶＨ及びＶＬ領域配列の組合せの温度安定性の上昇を証明している。
本発明によれば、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合し、本明細書で定義されるＶＨ領域及びＶＬ領域を含むか又はそれからなる本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物の結合ドメインは、配列番号１８７８、１９０８、１９８９及び２００３で定義される以下のＣＤＲ配列又はその組合せの少なくとも１つを含む。前記配列は、ｉｉｉ）で定義されるような１つのアミノ酸置換又はその組合せを含み、いくつかの例では、本明細書中において上記で定義されるような前記さらなるアミノ酸も含む。前記ＣＤＲ配列の好ましい組合せを、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３の順で以下に列挙する：１８７８～１８８３；１９０８～１９１３；１９８４～１９８９；１９９８～２００３。
配列番号１２６～１３１；１３４～１３９；１４２～１４７；１５０～１５５；１５８～１６３で定義されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３の順序のＣＤＲ配列の組合せも本発明によるものである。
本発明によれば、配列番号（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３の順に列挙）：２００６～２０１１；２０１４～２０１９；２０２２～２０２７；２０３０～２０３５；２０３８～２０４３；２０～２５；３６～４１；４４～４９；５２～５７；６０～６５；６８～７３；７６～８１；８４～８９；９２～９７；１０２～１０７；１１０～１１５で定義されるＣＤＲ配列の組合せもより好ましい。さらなる例は、配列番号２８２～２８７；２９０～２９５；２９８～３０３；３０６～３１１；３１４～３１９；４７２～４７７；４８０～４８５；４８８～４９３；４９６～５０１；５０４～５０９；６５０～６５５；６５８～６６３；６６６～６７１；６７４～６７９；６８２～６８７；８４０～８４５；８４８～８５３；８５６～８６１；８６４～８６９；８７２～８７７；１０２６～１０３１；１０３４～１０３９；１０４２～１０４７；１０５０～１０５５；１０５８～１０６３；１２１６～１２２１；１２２４～１２２９；１２３２～１２３７；１２４０～１２４５；１２４８～１２５３；１３９４～１３９９；１４０２～１４０７；１４１０～１４１５；１４１８～１４２３；１４２６～１４３１；１５８４～１５８９；１５９２～１５９７；１６００～１６０５；１６０８～１６１３；１６１６～１６２１；１７７４～１７７９；１７８２～１７８７；１７９０～１７９５；１７９８～１８０３；１８０６～１８１１である。
本発明によれば、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物の結合ドメインは、以下の配列番号１８５６、１８６０、１８６２、１８６４、１８７２、１８８４、１８９４、１８９６、１８９８、１９００、１９０２、１９０４、１９０６、１９１４、１９１６、１９１８、１９２０、１９２２、１９２４、１９２６、１９２８、１９３０、１９３２、１９３４、１９３６、１９３８、１９４０、１９４２、１９４４、１９４６、１９４８、１９５０で定義されるＶＨ領域配列を含むか又はそれからなる。前記配列は、本明細書中の上記で定義されるような１つのアミノ酸置換又はその組合せを含み、いくつかの例では、本明細書中において上記で定義されるような前記さらなるアミノ酸も含む。これは、本明細書で特定されるアミノ酸残基交換から生じる配列ＩＤ番号ＣＤ３ε結合ドメインを特徴とする以下の実施形態にも当てはまる。
本発明によれば、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物の結合ドメインは、以下の配列番号１８６７、１８６９、１８７１、１８７５、１８７７、１８９９、１９０１、１９０３、１９０５、１９０７、１９１９、１９２１、１９２３、１９２５、１９２７、１９２９、１９３１、１９３３、１９３５、１９３７、１９３９、１９４１、１９４３、１９６１、１９６３、１９６５、１９６７、１９６９、１９７１、１９７５、１９９１、１９９３、１９９５、１９９７又は２００５で定義されるＶＬ領域配列を含むか又はそれからなる。
ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物の前記結合ドメインのＶＨ及びＶＬ領域配列の好ましい組合せは、以下の配列番号：１８５６及び１８５７；１８６０及び１８６１；１８６２及び１８６３；１８６４及び１８６５；１８６６及び１８６７；１８６８及び１８６９；１８７０及び１８７１；１８７２及び１８７３；１８７４及び１８７５；１８７６及び１８７７；１８８４及び１８８５；１８９４及び１８９５；１８９６及び１８９７；１８９８及び１８９９；１９００及び１９０１；１９０２及び１９０３；１９０４及び１９０５；１９０６及び１９０７；１９１４及び１９１５；１９１６及び１９１７；１９１８及び１９１９；１９２０及び１９２１；１９２２及び１９２３；１９２４及び１９２５；１９２６及び１９２７；１９２８及び１９２９；１９３０及び１９３１；１９３２及び１９３３；１９３４及び１９３５；１９３６及び１９３７；１９３８及び１９３９；１９４０及び１９４１；１９４２及び１９４３；１９４４及び１９４５；１９４６及び１９４７；１９４８及び１９４９；１９５０及び１９５１；１９６０及び１９６１；１９６２及び１９６３；１９６４及び１９６５；１９６６及び１９６７；１９６８及び１９６９；１９７０及び１９７１；１９７４及び１９７５；１９９０及び１９９１；１９９２及び１９９３；１９９４及び１９９５；１９９６及び１９９７；又は２００４及び２００５で定義される。
配列番号１３２、１４０、１４８、１５６及び１６４で定義されているＶＨ領域配列も本発明に従うものである。
配列番号１３３、１４１、１４９、１５７及び１６５で定義されているＶＬ領域配列も本発明に従うものである。
上記の特に好ましいＶＨ及びＶＬ領域配列の任意の組合せも本発明に従うものである。以下の配列番号によって定義される下記のＶＨ及びＶＬの組合せが好ましい：配列番号１３２及び１３３；１４０及び１４１；１４８及び１４９；１５６及び１５７；並びに１６４及び１６５。
配列番号２０１２、２０２０、２０２８、２０３６、２０４４、２６、３４、４２、５０、５８、６６、７４、８２、９０、９８、１００、１０８及び１１６で定義されるＶＨ領域配列も本発明に従うものであり、より好ましい。さらなる例は、配列番号２８８、２９６、３０４、３１２、３２０、４７８、４８６、４９４、５０２、５１０、６５６、６６４、６７２、６８０、６８８、８４６、８５４、８６２、８７０、８７８、１０３２、１０４０、１０４８、１０５６、１０６４、１２２２、１２３０、１２３８、１２４６、１２５４、１４００、１４０８、１４１６、１４２４、１４３２、１５９０、１５９８、１６０６、１６１４、１６２２、１７８０、１７８８、１７９６、１８０４及び１８１２である。
配列番号２０１３、２０２１、２０２９、２０３７、２０４５、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０１、１０９及び１１７で定義されるＶＬ領域配列も本発明に従うものであり、より好ましい。さらなる例は、配列番号２８９、２９７、３０５、３１３、３２１、４７９、４８７、４９５、５０３、５１１、６５７、６６５、６７３、６８１、６８９、８４７、８５５、８６３、８７１、８７９、１０３３、１０４１、１０４９、１０５７、１０６５、１２２３、１２３１、１２３９、１２４７、１２５５、１４０１、１４０９、１４１７、１４２５、１４３３、１５９１、１５９９、１６０７、１６１５、１６２３、１７８１、１７８９、１７９７、１８０５及び１８１３である。
上記の特に好ましいＶＨ及びＶＬ領域配列の任意の組合せも本発明に従うものであり、好ましい。以下の配列番号によって定義される下記のＶＨ及びＶＬの組合せが好ましい：２０１２及び２０１３；２０２０及び２０２１；２０２８及び２０２９；２０３６及び２０３７；２０４４及び２０４５；２６及び２７；３４及び３５；４２及び４３；５０及び５１；５８及び５９；６６及び６７；７４及び７５；８２及び８３；９０及び９１；９８及び９９；１００及び１０１；１０８及び１０９；並びに１１６及び１１７。さらなる例は、配列番号２８８及び２８９；２９６及び２９７；３０４及び３０５；３１２及び３１３；３２０及び３２１；４７８及び４７９；４８６及び４８７；４９４及び４９５；５０２及び５０３；５１０及び５１１；６５６及び６５７；６６４及び６６５；６７２及び６７３；６８０及び６８１；６８８及び６８９；８４６及び８４７；８５４：８５５；８６２及び８６３；８７０及び８７１；８７８及び８７９；１０３２及び１０３３；１０４０及び１０４１；１０４８及び１０４９；１０５６及び１０５７；１０６４及び１０６５；１２２２及び１２２３；１２３０及び１２３１；１２３８及び１２３９；１２４６及び１２４７；１２５４及び１２５５；１４００及び１４０１；１４０８及び１４０９；１４１６及び１４１７；１４２４及び１４２５；１４３２及び１４３３；１５９０及び１５９１；１５９８及び１５９９；１６０６及び１６０７；１６１４及び１６１５；１６２２及び１６２３；１７８０及び１７８１；１７８８及び１７８９；１７９６及び１７９７；１８０４及び１８０５；並びに１８１２及び１８１３である。
本発明によれば、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物の前記結合ドメインは、配列番号２０１２、２０２０、２０２８、２０３６、２０４４、２６、３４、４２、５０、５８、６６、７４、８２、９０、９８、１００、１０８、１１６、２８８、２９６、３０４、３１２、３２０、４７８、４８６、４９４、５０２、５１０、６５６、６６４、６７２、６８０、６８８、８４６、８５４、８６２、８７０、８７８、１０３２、１０４０、１０４８、１０５６、１０６４、１２２２、１２３０、１２３８、１２４６、１２５４、１４００、１４０８、１４１６、１４２４、１４３２、１５９０、１５９８、１６０６、１６１４、１６２２、１７８０、１７８８、１７９６、１８０４、１８１２、１８５６、１８６０、１８６２、１８６４、１８７２、１８８４、１８９４、１８９６、１８９８、１９００、１９０２、１９０４、１９０６、１９１４、１９１６、１９１８、１９２０、１９２２、１９２４、１９２６、１９２８、１９３０、１９３２、１９３４、１９３６、１９３８、１９４０、１９４２、１９４４、１９４６、１９４８、１９５０、１３２、１４０、１４８、１５６及び１６４から選択されるＶＨ領域配列；及び／又は配列番号２０１３、２０２１、２０２９、２０３７、２０４５、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０１、１０９及び１１７、２８９、２９７、３０５、３１３、３２１、４７９、４８７、４９５、５０３、５１１、６５７、６６５、６７３、６８１、６８９、８４７、８５５、８６３、８７１、８７９、１０３３、１０４１、１０４９、１０５７、１０６５、１２２３、１２３１、１２３９、１２４７、１２５５、１４０１、１４０９、１４１７、１４２５、１４３３、１５９１、１５９９、１６０７、１６１５、１６２３、１７８１、１７８９、１７９７、１８０５、１８１３、１８６７、１８６９、１８７１、１８７５、１８７７、１８９９、１９０１、１９０３、１９０５、１９０７、１９１９、１９２１、１９２３、１９２５、１９２７、１９２９、１９３１、１９３３、１９３５、１９３７、１９３９、１９４１、１９４３、１９６１、１９６３、１９６５、１９６７、１９６９、１９７１、１９７５、１９９１、１９９３、１９９５、１９９７、２００５、１３３、１４１、１４９、１５７及び１６５から選択されるＶＬ領域配列を含むか又はそれからなる。
本発明によれば、好ましくは、ポリペプチド又はポリペプチド構築物は、ｉ）ＶＨ領域及びｉｉ）ＶＬ領域を含むか又はそれからなる、前記ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する結合ドメインを含み、ｉ）及びｉｉ）の前記ＶＨ及びＶＬ領域は、配列番号１２４及び１２５、１７２及び１７３、３６２及び３６３、５５２及び５５３、７３０及び７３１、９２８及び９２９、１１０６及び１１０７、１２９６及び１２９７、１４７４及び１４７５、１６６４及び１６６５並びに１８５４及び１８５５で定義されるＶＨ及びＶＬ領域の組合せから選択され、前記ＶＨ及び／又はＶＬ領域配列における前記１つのアミノ酸置換又はその組合せは、以下のアミノ酸残基を有するＶＨ及び／又はＶＬ領域配列をもたらす：
ｉ．ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、８１位のＶ、９９位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における４５位のＭ、６５位のＡ、８１位のＬ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における４５位のＭ、６５位のＡ、８１位のＬ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、１１２位のＦ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、３８位のＩ、４０位のＫ、６９位のＥ、１０２位のＳ及び９３位のＹ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、３９位のＥ、６５位のＡ、１０１位のＮ、１０２位のＡ、１０６位のＴ、１１２位のＦ、ＶＬ領域配列における４０位のＫ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６４位のＥ、６５位のＡ、９９位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、ＶＬ領域配列における４０位のＫ、９１位のＡ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、８１位のＶ、９９位のＡ、１０１位のＡ、１０２位のＥ、１０４位のＩ、１０６位のＴ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における６４位のＥ、６５位のＡ、６８位のＧ、８１位のＶ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６４位のＥ、６５位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、１１２位のＦ、ＶＬ領域配列における４０位のＫ、９１位のＡ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６４位のＥ、６５位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、１１２位のＦ、ＶＬ領域配列における４０位のＫ、９１位のＡ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６４位のＥ、６５位のＡ、８１位のＶ、９９位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ、１０２位のＳ及び９３位のＹ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、１１２位のＦ、ＶＬ領域配列における４０位のＫ、９１位のＡ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における４５位のＭ、６４位のＥ、６５位のＡ、８１位のＬ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、３８位のＩ、４０位のＫ、６９位のＥ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３０位のＳ、４５位のＭ、６５位のＡ、６８位のＧ、８１位のＶ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、１１２位のＦ、ＶＬ領域配列における４０位のＫ、６９位のＳ及び９３位のＹ；及び
ＶＨ領域配列における３０位のＳ、４５位のＭ、６４位のＥ、６５位のＡ、６８位のＧ、８１位のＶ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、ＶＬ領域配列における４０位のＫ及び６９位のＳ；
ｉｉ．ＶＨ領域配列における６４位のＥ、６５位のＡ、６８位のＧ、８１位のＶ、１０１位のＮ、１０２位のＥ、１０４位のＩ、１０６位のＴ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における６５位のＡ、６８位のＧ、８１位のＶ、１０１位のＮ、１０２位のＥ、１０４位のＩ、１０６位のＳ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、９９位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、ＶＬ領域配列における４０位のＫ、９１位のＡ及び１０２位のＳ；並びに
ＶＨ領域配列における３０位のＳ、３９位のＥ、６４位のＥ、６５位のＡ、８１位のＶ、１０１位のＡ、１０２位のＥ、１０４位のＩ、１０６位のＴ、ＶＬ領域配列における２０位のＭ、４０位のＫ及び６９位のＥ；
ｉｉｉ．ＶＨ領域配列における１０１位のＡ；
ｉｖ．ＶＨ領域配列における８１位のＶ、９９位のＡ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、８１位のＶ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、３９位のＥ、８１位のＶ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
ｖ．ＶＨ領域配列における３４位のＩ、８１位のＶ及びＶＬ領域配列における４０位のＫ；
ＶＨ領域配列における４５位のＭ、ＶＨ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、１０１位のＡ及び１０６位のＳ；
ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＦ及び８１位のＶ；
ＶＨ領域配列における４５位のＭ及びＶＬ領域配列における４０位のＫ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３９位のＤ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ及び８１位のＶ；
ＶＨ領域配列における３９位のＥ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における４５位のＭ及びＶＬ領域配列における４０位のＫ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、８１位のＶ、９９位のＡ、１０１位のＡ及び１０６位のＳ；又は
ｖｉ．ＶＨ領域配列における３９位のＤ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＲ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３４位のＩ；
ＶＬ領域配列における４０位のＫ；
ＶＨ領域配列における３９位のＤ及びＶＬ領域配列における４０位のＫ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における２０位のＩ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３９位のＫ；
ＶＨ領域配列における３９位のＥ及びＶＬ領域配列における４０位のＫ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３９位のＥ、ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＲ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における３９位のＤ及びＶＬ領域配列における４０位のＲ及び１０２位のＳ；
ＶＨ領域配列における８１位のＶ；
ＶＨ領域配列における３９位のＤ及びＶＬ領域配列における４０位のＫ；
ＶＨ領域配列における１１２位のＦ；
ＶＨ領域配列における１１２位のＦ及びＶＬ領域配列における３８位のＩ；
ＶＨ領域配列における３９位のＥ及びＶＬ領域配列における４０位のＫ；
ＶＨ領域配列における３４位のＶ。
上記のアミノ酸残基は、本発明によるＣＤ３ε結合ドメイン中の所与の位置に存在する。変更されることになるＶＨ及び／又はＶＬ領域配列（ｉ）のＶＨ領域及びｉｉ）のＶＬ領域）の１つ、すなわち塩基ＶＨ及び／又はＶＬ領域配列が、所与の位置に上記のアミノ酸残基の１つを既に含有する場合、それぞれのアミノ酸残基がｉ）及び／又はｉｉ）のＶＨ領域及び／又はＶＬ領域に既に存在するため、これらは、変更できないことになる。
より好ましいのは、ＣＤ３ε結合ドメインが、配列番号１２４及び１２５、３６２及び３６３、７３０及び７３１、９２８及び９２９、１１０６及び１１０７、１２９６及び１２９７、１４７４及び１４７５、１６６４及び１６６５並びに１８５４及び１８５５からなる群から選択されるｉ）及びｉｉ）のＶＨ及びＶＬ領域の組合せを含むか又はそれからなることである。さらにより好ましいのは、ＣＤ３ε結合ドメインが、配列番号１２４及び１２５、７３０及び７３１、１６６４及び１６６５並びに１８５４及び１８５５からなる群から選択されるｉ）及びｉｉ）のＶＨ及びＶＬ領域の組合せを含むか又はそれからなることである。なおさらにより好ましい実施形態において、ＣＤ３ε結合ドメインは、配列番号７３０及び７３１、１６６４及び１６６５並びに１８５４及び１８５５からなる群から選択されるｉ）及びｉｉ）のＶＨ及びＶＬ領域の組合せを含むか又はそれからなる。最も好ましいのは、前記ＣＤ３ε結合ドメインが、それぞれ配列番号１８５４及び１８５５のｉ）及びｉｉ）のＶＨ領域及びＶＬ領域の組合せを含むか又はそれからなることである。
実施例の節から明らかなように、所与の位置における上記で列挙されたアミノ酸残基は、ＤＳＦ（示差走査蛍光測定）の周知の本明細書に記載される方法によって測定される温度安定性の上昇に好ましい効果を有する；例えば、ｉ）及びｉｉ）の上に列挙されたＶＨ配列及びＶＬ配列に導入された場合、Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｎａｎｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｙ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒａｂｉｌｉｔｙ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ５９３，２０２０，１１３５８１，ＩＳＳＮ ０００３－２６９７；Ｄａｒｔ，Ｍ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２０１８）“Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ Ａｓｓａｙ ｆｏｒ Ｔａｒｇｅｔ Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ Ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ”ＡＣＳ ｍｅｄｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｌｅｔｔｅｒｓ，９（６），５４６－５５１）を参照されたい。より具体的には、セクションｉ及びｉｖ．に列挙された所与の位置のアミノ酸残基は、非改変配列、すなわち各基本のＶＨ及びＶＬ配列について測定した値と比較して、６℃以上の温度安定性の上昇を示す。セクションｉｉ．及びｖ．は、非改変配列、すなわちそれぞれの基本のＶＨ及びＶＬ配列について測定された値と比較して、３℃以上の温度安定性の上昇を示し、一方、セクションｉｉｉ．及びｖｉ．は改変されていない配列、すなわちそれぞれの基本のＶＨ及びＶＬ配列について測定された値と比較して、１℃以上の温度安定性の上昇を示す。
好ましくは、セクションｉ．、ｉｉ．、ｉｖ．及び／又はｖ．の所与の位置のアミノ酸残基は、本実施形態によるＣＤ３ε結合ドメイン中に存在する。より好ましいのは、セクションｉ及び／又はｉｖ．の所与の位置のアミノ酸残基が、本発明によるＣＤ３ε結合ドメイン中に存在することである。この好ましさは、以下に列挙される好ましい実施形態にも当てはまる。本明細書に概説されるように、ＶＨ及びＶＬ領域は、リンカー、好ましくはペプチドリンカー、最も好ましくはＧ４Ｓ又はＧ４Ｑリンカーによって連結されていることも好ましく、好ましくは、前記Ｇ４Ｓ又はＧ４Ｑリンカーは、３回繰り返され、すなわち（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３リンカーである。
本発明によれば、本発明は、ポリペプチド又はポリペプチド構築物であって、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含むか又はそれからなる、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する結合ドメインを含み、
ａ）ＶＨ領域が配列番号１８５４で定義される配列を含むか又はそれからなり、及びＶＬ領域が配列番号１８５５で定義される配列を含むか又はそれからなり；ＶＨ及び／又はＶＬ領域配列は、
ｉ．ＶＨ領域配列（配列番号２０１２で定義される得られるＶＨ配列）におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列（配列番号２０１３で定義される得られるＶＬ配列）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号２０３６）におけるＬ４５Ｍ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号２０３７）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号２０２８）におけるＬ４５Ｍ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号２０２９）におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｅ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ＶＨ領域配列（配列番号２０４４）におけるＭ３４Ｉ、Ｑ３９Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ｎ、Ｇ１０２Ａ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号２０４５）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号３４）におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号３５）におけるＱ４０Ｋ、Ｖ９１Ａ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号９０）におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号９１）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１００）におけるＤ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列（配列番号１０１）におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号５８）におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号５９）におけるＱ４０Ｋ、Ｖ９１Ａ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号５０）におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号５１）におけるＱ４０Ｋ、Ｖ９１Ａ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号９８）におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列（配列番号９９）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ＶＨ領域配列（配列番号４２）におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号４３）におけるＱ４０Ｋ、Ｖ９１Ａ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１１６）におけるＬ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号１１７）におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｅ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号８２）におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｓ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号８３）におけるＱ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＷ９３Ｙ；並びに
ＶＨ領域配列（配列番号７４）におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列（配列番号７５）におけるＱ４０Ｋ及びＬ６９Ｓ；
ｉｉ．ＶＨ領域配列（配列番号２０２０）におけるＤ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号２０２１）におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１０８）におけるＳ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列（配列番号１０９）におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号２６）におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号２７）におけるＱ４０Ｋ、Ｖ９１Ａ及びＧ１０２Ｓ；及び
ＶＨ領域配列（配列番号６６）におけるＮ３０Ｓ、Ｑ３９Ｅ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号６７）におけるＬ２０Ｍ、Ｑ４０Ｋ及びＬ６９Ｅ；
ｉｉｉ．ＶＨ領域配列（配列番号２５６０）におけるＨ１０１Ａ；
ｉｖ．ＶＨ領域配列におけるＡ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１８９８）におけるＭ３４Ｉ、Ａ８１Ｖ、ＶＬ領域配列（配列番号１８９９）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９０４）におけるＭ３４Ｉ、ＶＬ領域配列（１９０５）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９０６）におけるＭ３４Ｉ、Ｑ３９Ｅ、Ａ８１Ｖ、ＶＬ領域配列（配列番号１９０７）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ｖ．ＶＨ領域配列（配列番号１９００）におけるＭ３４Ｉ、Ａ８１Ｖ及びＶＬ領域配列（配列番号１９０１）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号１８６６）におけるＬ４５Ｍ、ＶＨ領域配列（配列番号１８６７）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１８８４）におけるＭ３４Ｆ及びＡ８１Ｖ；
ＶＨ領域配列（配列番号１８７０）におけるＬ４５Ｍ、ＶＬ領域配列（配列番号１８７１）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９１８）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号１９１９）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１８６９）におけるＭ３４Ｉ及びＡ８１Ｖ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９３２）におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列（配列番号１９３３）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１８６８）におけるＬ４５Ｍ及びＶｌ領域配列（配列番号１８６９）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；又は
ｖｉ．ＶＨ領域配列（配列番号１９２８）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号１９２９）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１８９２）におけるＭ３４Ｉ；
ＶＬ領域配列（配列番号１９７４）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９２２）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号１９２３）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＬ２０Ｉ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９４４）におけるＱ３９Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９３８）におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列（配列番号１９３９）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９３４）におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列（配列番号１９３５）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９２６）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号１９２６）におけるＱ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１８６２）におけるＡ８１Ｖ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９２０）におけるＱ３９Ｄ及びＶＬ領域配列（配列番号１９２１）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９５８）におけるＷ１１２Ｆ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９６０）におけるＷ１１２Ｆ及びＶＬ領域配列（配列番号１９６１）におけるＶ３８Ｉ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９３６）におけるＱ３９Ｅ及びＶＬ領域配列（配列番号１９３７）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号１９１４）におけるＭ３４Ｖ
から選択されるアミノ酸置換を含み；
ｂ）ＶＨ領域が、配列番号７３０で定義される配列を含むか又はそれからなり、及びＶＬ領域が配列番号７３１で定義される配列を含むか又はそれからなり；ＶＨ及び／又はＶＬ領域配列は、
ｉ．ＶＨ領域配列（配列番号８４６で定義される得られるＶＨ配列）におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列（配列番号８４７で定義される得られるＶＬ配列）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号８７０）におけるＬ４５Ｍ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号８７１）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号８６２）におけるＬ４５Ｍ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号８６３）におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｅ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ＶＨ領域配列（配列番号８７８）におけるＭ３４Ｉ、Ｑ３９Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ｎ、Ｇ１０２Ａ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号８７９）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ、Ｖ９１Ａ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＤ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ、Ｖ９１Ａ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ、Ｖ９１Ａ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ、Ｖ９１Ａ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＬ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｅ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＷ９３Ｙ；並びに
ＶＨ領域配列におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＬ６９Ｓ；
ｉｉ．ＶＨ領域配列（配列番号８５４）におけるＤ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号８５５）におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＳ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ、Ｖ９１Ａ及びＧ１０２Ｓ；並びに
ＶＨ領域配列におけるＮ３０Ｓ、Ｑ３９Ｅ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｍ、Ｑ４０Ｋ及びＬ６９Ｅ；
ｉｉｉ．ＶＨ領域配列におけるＨ１０１Ａ；
ｉｖ．ＶＨ領域配列におけるＡ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号７７４）におけるＭ３４Ｉ、Ａ８１Ｖ、ＶＬ領域配列（配列番号７７５）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号７８０）におけるＭ３４Ｉ、ＶＬ領域配列（７８１）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号７８２）におけるＭ３４Ｉ、Ｑ３９Ｅ、Ａ８１Ｖ、ＶＬ領域配列（配列番号７８３）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ｖ．ＶＨ領域配列（配列番号７７６）におけるＭ３４Ｉ、Ａ８１Ｖ及びＶＬ領域配列（配列番号７７７）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号７４２）におけるＬ４５Ｍ、ＶＨ領域配列（配列番号７４３）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号７６０）におけるＭ３４Ｆ及びＡ８１Ｖ；
ＶＨ領域配列（配列番号７４６）におけるＬ４５Ｍ、ＶＬ領域配列（配列番号７４７）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号７９４）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号７９５）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号７７２）におけるＭ３４Ｉ及びＡ８１Ｖ；
ＶＨ領域配列（配列番号８０８）におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列（配列番号８０９）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号７４４）におけるＬ４５Ｍ及びＶｌ領域配列（配列番号７４５）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；又は
ｖｉ．ＶＨ領域配列（配列番号７９６）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号７９７）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号７６８）におけるＭ３４Ｉ；
ＶＬ領域配列（配列番号８９１）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号８００）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号８０１）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＬ２０Ｉ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号８２０）におけるＱ３９Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号８１４）におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列（配列番号８１５）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号８１０）におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列（配列番号８１１）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号８０４）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号８０５）におけるＱ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号７３８）におけるＡ８１Ｖ；
ＶＨ領域配列（配列番号７９８）におけるＱ３９Ｄ及びＶＬ領域配列（配列番号７９９）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号８３４）におけるＷ１１２Ｆ；
ＶＨ領域配列（配列番号８３６）におけるＷ１１２Ｆ及びＶＬ領域配列（配列番号８３７）におけるＶ３８Ｉ；
ＶＨ領域配列（配列番号８１２）におけるＱ３９Ｅ及びＶＬ領域配列（配列番号８１３）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号７９０）におけるＭ３４Ｖ
から選択されるアミノ酸置換を含み；
ＶＨ領域が、配列番号１６６４で定義される配列を含むか又はそれからなり、及びＶＬ領域が配列番号１６６５で定義される配列を含むか又はそれからなり；ＶＨ及び／又はＶＬ領域配列は、
ｉ．ＶＨ領域配列（配列番号１７８０で定義される得られるＶＨ配列）におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列（配列番号１７８１で定義される得られるＶＬ配列）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１８０４）におけるＬ４５Ｍ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号１８０５）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７９６）におけるＬ４５Ｍ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号１７９７）におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｅ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ＶＨ領域配列（配列番号１８１２）におけるＭ３４Ｉ、Ｑ３９Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ｎ、Ｇ１０２Ａ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号１８１３）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＤ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＬ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｅ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｓ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＷ９３Ｙ；並びに
ＶＨ領域配列におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＬ６９Ｓ；
ｉｉ．ＶＨ領域配列（配列番号１７８８）におけるＤ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号１７８９）におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＳ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；並びに
ＶＨ領域配列におけるＮ３０Ｓ、Ｑ３９Ｅ、Ｄ６４Ｅ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｇ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｍ、Ｑ４０Ｋ及びＬ６９Ｅ；
ｉｉｉ．ＶＨ領域配列におけるＨ１０１Ａ；
ｉｖ．ＶＨ領域配列におけるＡ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７０８）におけるＭ３４Ｉ、Ａ８１Ｖ、ＶＬ領域配列（配列番号１７０９）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７１４）におけるＭ３４Ｉ、ＶＬ領域配列（１７１５）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７１６）におけるＭ３４Ｉ、Ｑ３９Ｅ、Ａ８１Ｖ、ＶＬ領域配列（配列番号１７１７）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ｖ．ＶＨ領域配列（配列番号１７１０）におけるＭ３４Ｉ、Ａ８１Ｖ及びＶＬ領域配列（配列番号１７１１）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号１６７６）におけるＬ４５Ｍ、ＶＨ領域配列（配列番号１６７７）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１６９４）におけるＭ３４Ｆ及びＡ８１Ｖ；
ＶＨ領域配列（配列番号１６８０）におけるＬ４５Ｍ、ＶＬ領域配列（配列番号１６８１）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７２８）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号１７２９）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７０６）におけるＭ３４Ｉ及びＡ８１Ｖ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７４２）におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列（配列番号１７４３）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１６７８）におけるＬ４５Ｍ及びＶｌ領域配列（配列番号１６７９）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｉ、Ｓ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；又は
ｖｉ．ＶＨ領域配列（配列番号１７３０）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号１７３１）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７０２）におけるＭ３４Ｉ；
ＶＬ領域配列（配列番号１７５５）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７３４）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号１７３５）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＬ２０Ｉ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７５４）におけるＱ３９Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７４８）におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列（配列番号１７４９）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７４４）におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列（配列番号１７４５）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７３８）におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列（配列番号１７３９）におけるＱ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１６７２）におけるＡ８１Ｖ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７３２）におけるＱ３９Ｄ及びＶＬ領域配列（配列番号１７３３）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７６８）におけるＷ１１２Ｆ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７７０）におけるＷ１１２Ｆ及びＶＬ領域配列（配列番号１７７１）におけるＶ３８Ｉ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７４６）におけるＱ３９Ｅ及びＶＬ領域配列（配列番号１７４７）におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列（配列番号１７２４）におけるＭ３４Ｖ
から選択されるアミノ酸置換を含むか；又は
ｄ）ＶＨ領域が、配列番号１２４で定義される配列を含むか又はそれからなり、及びＶＬ領域が配列番号１２５で定義される配列を含むか又はそれからなり；ＶＨ及び／又はＶＬ領域配列は、
ｉ．ＶＨ領域配列（配列番号１３２で定義される得られるＶＨ配列）におけるＱ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列（配列番号１３３で定義される得られるＶＬ配列）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１５６）におけるＬ４５Ｍ、Ｑ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号１５７）におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列（配列番号１４８）におけるＬ４５Ｍ、Ｑ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号１４９）におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｅ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ＶＨ領域配列（配列番号１６４）におけるＱ３９Ｅ、Ｑ６５Ａ、Ｈ１０１Ｎ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列（配列番号１６５）におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＤ６４Ｅ、Ｑ６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ、Ｔ９１Ａ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＱ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ａ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＤ６４Ｅ、Ｑ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＤ６４Ｅ、Ｑ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＤ６４Ｅ、Ｑ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＤ６４Ｅ、Ｑ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ及びＷ９３Ｙ；
ＶＨ領域配列におけるＱ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＬ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｑ６５Ａ、Ａ８１Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｅ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｑ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、Ｗ１１２Ｆ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＷ９３Ｙ；並びに
ＶＨ領域配列におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｑ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＬ６９Ｓ；
ｉｉ．ＶＨ領域配列（配列番号１４０）におけるＤ６４Ｅ、Ｑ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ａ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列（配列番号１４１）におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＱ６５Ａ、Ｄ６８Ｇ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ａ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｓ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｌ６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＱ６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；並びに
ＶＨ領域配列におけるＮ３０Ｓ、Ｑ３９Ｅ、Ｄ６４Ｅ、Ｑ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ａ１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｍ、Ｑ４０Ｋ及びＬ６９Ｅ；
ｉｉｉ．ＶＨ領域配列におけるＨ１０１Ａ；
ｉｖ．ＶＨ領域配列におけるＡ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＡ８１Ｖ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＱ３９Ｅ、Ａ８１Ｖ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ｖ．ＶＨ領域配列におけるＡ８１Ｖ及びＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列におけるＬ４５Ｍ、ＶＨ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＱ６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ、Ｌ６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＩ３４Ｆ及びＡ８１Ｖ；
ＶＨ領域配列におけるＬ４５Ｍ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＬ４５Ｍ及びＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列におけるＱ６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；又は
ｖｉ．ＶＨ領域配列におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＬ２０Ｉ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＱ３９Ｋ；
ＶＨ領域配列におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＱ３９Ｅ、ＶＬ領域配列におけるＬ２０Ｉ、Ｑ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＱ３９Ｄ、ＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；
ＶＨ領域配列におけるＡ８１Ｖ；
ＶＨ領域配列におけるＱ３９Ｄ及びＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列におけるＷ１１２Ｆ；
ＶＨ領域配列におけるＷ１１２Ｆ及びＶＬ領域配列におけるＶ３８Ｉ；
ＶＨ領域配列におけるＱ３９Ｅ及びＶＬ領域配列におけるＱ４０Ｋ；
ＶＨ領域配列におけるＭ３４Ｖ
から選択されるアミノ酸置換を含む、ポリペプチド又はポリペプチド構築物に関する。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のＣＤ３ε結合ドメインとして上に列挙した選択肢ａ）～ｃ）が好ましく、選択肢ａ）がより好ましい。上記の好ましいリンカー、すなわち（Ｇ４Ｓ）３又はＧ４Ｑ）３も本実施形態に好ましい。
本発明によれば、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物は、配列番号１～１９及び２５５１に開示されているリンカー、半減期延長ペプチド及び他の構造部分を有し得る。これらの構造の性質及び機能に関する詳細は、本明細書に開示される配列表に見出される。
本発明は、ポリペプチド構築物が、ｓｃＦｖ、さらなる結合ドメインが存在する限り、（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ及び上記形式のいずれかのオリゴマーからなる群から選択される形式である実施形態を提供する。「形式である」という用語は、構築物が、例えば本明細書に記載される他の部分への結合又は融合によってさらに修飾され得ることを排除しない。本発明のポリペプチド構築物の一実施形態によれば、本明細書に記載のパラトープを含むドメインはｓｃＦｖの形式である。ｓｃＦｖにおいて、ＶＨ領域及びＶＬ領域は、ＶＨ－ＶＬ又はＶＬ－ＶＨの順に（Ｎ末端からＣ末端に）配置される。ドメインのＶＨ領域及びＶＬ領域は、リンカー、好ましくはペプチドリンカーを介して接続されることが想定される。好ましい実施形態において、ペプチドリンカーは、Ｇ４Ｓ若しくはＧ４Ｑリンカー又はそれらの反復、例えば好ましくは（Ｇ４Ｓ）３（すなわちＧ４Ｓの３回の反復）又は（Ｇ４Ｑ）３（すなわちＧ４Ｑの３回の反復）である。本明細書に記載するＶＨ及びＶＬ領域を含む結合ドメインの一実施形態によれば、ＶＨ領域はリンカーのＮ末端に位置し、ＶＬ領域はリンカーのＣ末端に位置する。換言すれば、本明細書で説明されるパラトープを含むドメインの一実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ－リンカー－ＶＬを含む。ポリペプチド又はポリペプチド構築物が前記ＣＤ３ε結合ドメインに加えて少なくとも１つのさらなる結合ドメインを含む場合、構築物の結合ドメイン（本明細書に記載のパラトープを含む）は、リンカー、好ましくはペプチドリンカーを介して連結されることがさらに想定される。構築物は、例えば、（Ｎ末端からＣ末端に向かって）ＣＤ３結合ドメイン－リンカー－さらなる結合ドメインの順にドメインを含み得る。逆の順序（さらなる結合ドメイン－リンカー－ＣＤ３結合ドメイン）も可能であり、好ましい配向である。
リンカーは、好ましくは、ペプチドリンカーであり、より好ましくは短鎖ペプチドリンカーである。本発明に従えば、「ペプチドリンカー」は、構築物の一方のドメインのアミノ酸配列を、もう一方の（可変且つ／又は結合）ドメイン（例えば、可変ドメイン又は結合ドメイン）と連結するアミノ酸配列を含む。このようなペプチドリンカーの本質的な技術的特徴は、重合活性を含まないことである。好適なペプチドリンカーには、米国特許第４，７５１，１８０号明細書及び同第４，９３５，２３３号明細書又は国際公開第８８／０９３４４号パンフレットに記載されるものがある。ペプチドリンカーは、他のドメイン又はモジュール又は領域（半減期延長ドメインなど）を本発明の構築物に結合するためにも使用され得る。有用なペプチドリンカーの例は、配列番号１～１１及び２５５１に示される。これに関連して、「短い」リンカーは、２～５０個のアミノ酸、好ましくは３～３５個のアミノ酸、４～３０個のアミノ酸、５～２５個のアミノ酸、６～２０個のアミノ酸又は６～１７個のアミノ酸を有する。１個の結合ドメインの２個の可変領域間のリンカーは、２個の結合ドメイン間のリンカーとは異なる長さ（例えば、より長くてもよい）を有し得る。例えば、１個の結合ドメインの２個の可変領域間のリンカーは、７～１５アミノ酸、好ましくは９～１３の長さを有し得、２個の結合ドメイン間のリンカーは、３～１０アミノ酸、好ましくは４～８の長さを有し得る。さらに、ペプチドリンカーは、配列番号１～１１及び２５５１に示されるものなど、グリシン／セリンリンカーであることが想定される。グリシン／セリンリンカーのアミノ酸の殆どは、グリシン及びセリンから選択される。
リンカーが使用される場合、このリンカーは、第１及び第２のドメインのそれぞれが互いに独立してその異なる結合特異性を確実に保持できる長さ及び配列であることが好ましい。構築物において少なくとも２つの結合ドメイン（又は１つの結合ドメインを形成する２つの可変領域）を接続するペプチドリンカーについては、ごく少数のアミノ酸残基のみ、例えば１２アミノ酸残基以下を含むペプチドリンカーが想定される。したがって、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個又は５個のアミノ酸残基のペプチドリンカーが好ましい。５個未満のアミノ酸を有する想定されるペプチドリンカーは、４、３、２又は１個のアミノ酸を含み、Ｇｌｙリッチなリンカーが好ましい。前記「ペプチドリンカー」に関連して、「単一アミノ酸」リンカーは、Ｇｌｙである。ペプチドリンカーの別の実施形態は、アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ、すなわちＧｌｙ４Ｓｅｒ（配列番号１５）又はそのポリマー、すなわち（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｘを特徴とし、ここで、ｘは、１以上の整数（例えば、２又は３）、例えば配列番号１及び２である。好ましいリンカーは、配列番号２、４、５、６、８、１０、１１及び２５５１に示されている。他の好ましいリンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）６を含むか又はそれからなる。前記ペプチドリンカーの特徴は、当技術分野で既知であり、例えばＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９８）３７，９２６６－９２７３）、Ｃｈｅａｄｌｅ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９２）２９，２１－３０）及びＲａａｇ ａｎｄ Ｗｈｉｔｌｏｗ（ＦＡＳＥＢ（１９９５）９（１），７３－８０）に記載されている。二次構造を促進しないペプチドリンカーが好ましい。前記ドメインの互いの連結は、例えば遺伝子工学によって提供することができる。融合し且つ作動可能に連結された二重特異性一本鎖構築物を調製し、それを哺乳動物細胞又は細菌において発現させる方法は、当技術分野で公知である（例えば、国際公開第９９／５４４４０号パンフレット又はＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００１）。より好ましくは、前記ペプチドリンカーは、Ｇ４Ｓ若しくはＧ４Ｑリンカー又はその反復、例えば（Ｇ４Ｓ）３若しくは（Ｇ４Ｑ）３である。
本発明の一実施形態によれば、本発明のポリペプチド構築物は、「単鎖構築物」又は「単鎖ポリペプチド」である。さらなる結合ドメインの場合、ＣＤ３の結合ドメイン若しくはさらなる結合ドメイン（「第２」とも呼ばれる）のいずれか又は両方の結合ドメインが「一本鎖Ｆｖ」（ｓｃＦｖ）の形式であり得ることも想定される。Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によりコードされるが、これらは、組換え法を使用して、ＶＬ及びＶＨ領域が一価の分子を形成するように対をなす単一のタンパク質鎖としてこれらが作製されることを可能にする（本明細書の上述で説明されているような）人工リンカーにより結合することができ、例えば、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３）を参照されたい。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を使用して得られ、その断片は、完全長抗体又はＩｇＧと同じ様式で機能について評価される。したがって、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、免疫グロブリンの重鎖の可変領域（ＶＨ）及び軽鎖の可変領域（ＶＬ）の融合タンパク質であり、通常、短いリンカーペプチドで連結されている。リンカーは、通常、可撓性にとってグリシンが豊富であり、且つ溶解度にとってセリン又はさらにトレオニンが豊富であり、ＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端と結合させることができるか又はその逆も可能である。このタンパク質は、定常領域を除去し、リンカーを導入したにもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。
二重特異性一本鎖分子は、当技術分野で公知であり、国際公開第９９／５４４４０号パンフレット、Ｍａｃｋ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９７），１５８，３９６５－３９７０、Ｍａｃｋ，ＰＮＡＳ，（１９９５），９２，７０２１－７０２５、Ｋｕｆｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，（１９９７），４５，１９３－１９７、Ｌｏｅｆｆｌｅｒ，Ｂｌｏｏｄ，（２０００），９５，６，２０９８－２１０３、Ｂｒｕｅｈｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，（２００１），１６６，２４２０－２４２６、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，（１９９９），２９３，４１－５６で説明されている。単鎖構築物（とりわけ、米国特許第４，９４６，７７８号明細書、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｅｂｅｌ（２０１０），前掲及びＬｉｔｔｌｅ（２００９），前掲を参照されたい）を製造するために説明された技術は、選定した標的を選択的に、好ましくは特異的に認識する単鎖構築物を製造するように適合させることができる。
（ｓｃＦｖ）２形式を有する二価（ｂｉｖａｌｅｎｔ）（二価（ｄｉｖａｌｅｎｔ）とも呼ばれる）又は二重特異性一本鎖可変断片（ｂｉ－ｓｃＦｖ若しくはｄｉ－ｓｃＦｖ）は、２つのｓｃＦｖ分子を（例えば、前述したようなリンカーによって）連結することによって改変することができる。連結は、２つのＶＨ領域と２つのＶＬ領域とを有する単一ポリペプチド鎖を作製してタンデムｓｃＦｖを生じさせることにより行うことができる（例えば、Ｋｕｆｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２２（５）：２３８－２４４を参照されたい）。別の可能性は、２個の可変領域が一緒に折り畳まれるには短すぎるリンカーペプチド（例えば約５アミノ酸）を有するｓｃＦｖ分子の作製であり、ｓｃＦｖを強制的に二量体化させる。この場合、結合ドメイン（ＣＤ３ε又はさらなる標的抗原のいずれかに結合）のＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーを介して直接接続してはいない。したがって、ＣＤ３抗原結合ドメインのＶＨが、例えば、さらなる標的抗原結合ドメインのＶＬにペプチドリンカーを介して融合し得、さらなる標的抗原結合ドメインのＶＨがかかるペプチドリンカーを介してＣＤ３結合ドメインのＶＬと融合している。このタイプはダイアボディとして知られている（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ，Ｐｈｉｌｉｐｐ ｅｔ ａｌ．，（Ｊｕｌｙ １９９３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ ９０（１４）：６４４４－８を参照されたい）。
本発明に従って、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物は、少なくとも１つのさらなる結合ドメインを含む。換言すれば、ポリペプチド又はポリペプチド構築物は、本明細書中において上記で定義されるＣＤ３ε結合ドメイン及び少なくとも１つのさらなる結合ドメインを含む。前記さらなる結合ドメインは、さらなるＣＤ３結合ドメイン、好ましくは本明細書で定義されるものであり得る。したがって、ポリペプチドは、本明細書で定義される同じＣＤ３結合ドメインの２つを含むことができる。代替的又は追加的に（少なくとも３つの結合ドメインを含む構築物において）、少なくとも１つのさらなる結合ドメインは、異なる標的、例えば細胞表面抗原に結合する。
好ましくは、前記少なくとも１つのさらなる結合ドメインは、細胞表面抗原に結合する。本明細書で使用される「細胞表面抗原」という用語は、細胞の表面に提示される分子を示す。ほとんどの場合、この分子は、この分子の少なくとも部分が三次形態で細胞の外側からアクセス可能なままであるように、細胞の原形質膜の内部又は膜上に位置する。原形質膜の内部に位置する細胞表面分子の非限定的な例は、その三次立体配座において親水性及び疎水性の領域を含む膜貫通タンパク質である。ここで、少なくとも１つの疎水性領域は、細胞表面分子が細胞の疎水性原形質膜に包埋される又は挿入されることを可能にするが、親水性領域は原形質膜のいずれかの側で細胞質及び細胞外空間へとそれぞれ延在する。細胞外エピトープは、細胞外空間に配置されたタンパク質の一部、例えば、細胞表面分子が原形質膜に配置、包埋又は挿入された天然の構成である場合、細胞外空間に延びる細胞表面分子の一部によって構成されるエピトープを指すことが理解されるであろう。原形質膜上に位置する細胞表面分子の非限定的な例は、パルミトイル基を有するようにシステイン残基で修飾されたタンパク質、ファルネシル基を有するようにＣ末端システイン残基で修飾されたタンパク質又はグリコシルホスファチジルイノシトール（「ＧＰＩ」）アンカーを有するようにＣ末端で修飾されたタンパク質である。
前記細胞表面抗原は、好ましくは腫瘍抗原である。本明細書で使用する場合、用語「腫瘍抗原」は、腫瘍細胞上に提示されるそれらの抗原として理解され得る。これらの抗原は、細胞外部分と共に細胞表面上に提示され得、多くの場合、分子の膜貫通部分及び細胞質部分を併せ持つ。これらの抗原は、場合により腫瘍細胞によってのみ提示され得、正常細胞によって決して提示され得ない。腫瘍抗原は、腫瘍細胞上に限って発現され得るか、又は正常細胞と比較して腫瘍特異的突然変異を示し得る。この場合、それらは、腫瘍特異抗原と呼ばれる。より一般的な抗原は、腫瘍細胞及び正常細胞によって提示される抗原であり、それらは、腫瘍関連抗原と呼ばれる。これらの腫瘍関連抗原は、正常細胞と比較して過剰発現され得るか、又は正常組織と比較して、腫瘍組織のよりコンパクトさに欠ける構造のため、腫瘍細胞において抗体結合のために接近可能である。
好ましい実施形態では、腫瘍抗原は、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、ＣＤ１２３（インターロイキン－３受容体アルファ鎖（ＩＬ－３Ｒ））、ＣＤ１９（Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９）、ＣＤ２０（Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０）、ＣＤ２２（分化クラスター－２２）、ＣＤ３３（Ｓｉｇｌｅｃ－３）、ＣＤ７０（分化クラスター７０）、ＣＤＨ１９（カドヘリン１９）、ＣＤＨ３（カドヘリン３）、ＣＬＬ１（Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ）、ＣＳ１（ＣＣＮＤ３サブセット１）、ＣＬＤＮ６（クローディン－６）、ＣＬＤＮ１８．２（クローディン１８．２）、ＤＬＬ３（Ｄｅｌｔａ様リガンド３）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮成長因子受容体ｖＩＩＩ）、ＦＬＴ３（ｆｍｓ様キナーゼ３）、ＭＡＧＥＢ２（黒色腫関連抗原Ｂ２）、ＭＡＲＴ１（Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１）、ＭＳＬＮ（メソテリン）、ＭＵＣ１７（ムチン－１７）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）及びＳＴＥＡＰ１（メタロレダクターゼＳＴＥＡＰ１）からなる群から選択される。これらの腫瘍抗原は、腫瘍細胞上でのそれらの発現により、当技術分野で周知である。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＢＣＭＡ結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＢＣＭＡ結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２０７２～２０９５で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＤ１２３結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＤ１２３結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２０９６～２１１０で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＤ１９結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＤ１９結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２１１１～２１２５で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＤ２０結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＤ２０結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２１２６～２１４０で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＤ２２結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＤ２２結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２１４１～２１５４で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＤ３３結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＤ３３結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２１５５～２１７８で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＤ７０結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＤ７０結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２１７９～２１９２で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＤＨ１９結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＤＨ１９結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２１９３～２２１２で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＤＨ３結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＤＨ３結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２２１３～２２５６で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＬＬ１結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＬＬ１結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２２５７～２２７１で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＳ１結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＳ１結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２２７２～２２８５で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＬＤＮ６結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＬＤＮ６結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２２８６～２２９９で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＣＬＤＮ１８．２結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＣＬＤＮ１８．２結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２３００～２３１４で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＤＬＬ３結合ドメインについて好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＤＬＬ３結合ドメインを有する本発明に従ったポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性単鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２３１５～２３２８で定義される。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインについて好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインを有する本発明に従ったポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性単鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２３２９～２３４２で定義される。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＦＬＴ３結合ドメインについて好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＦＬＴ３結合ドメインを有する本発明に従ったポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性単鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２３４３～２３５７で定義される。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＭＡＧＥＢ２結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＭＡＧＥＢ２結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２３５８～２３７８で定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＭＡＲＴ１結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列は、配列番号２３７９～２３８７に定義されている。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＭＳＬＮ結合ドメインについて好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＭＳＬＮ結合ドメインを有する本発明に従ったポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性単鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２３８８～２４３１で定義される。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＭＵＣ１７結合ドメインについて好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＭＵＣ１７結合ドメインを有する本発明に従ったポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性単鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２４３２～２４４５で定義される。
本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物のさらなる結合ドメインとしてのＰＳＭＡ結合ドメインについての好ましいＣＤＲ配列及びＶＨ／ＶＬ領域配列並びにさらなる結合ドメインとしてのＰＳＭＡ結合ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の二重特異性一本鎖分子配列（半減期延長ドメインあり及びなし）は、配列番号２４４６～２４７５で定義される。
さらなる結合ドメインとしてのＣＤ２０及びＣＤ２２結合ドメイン（本明細書で定義されるさらなるＣＤ３結合ドメインあり及びなし）及び半減期延長ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の好ましい二重特異性一本鎖分子配列は、配列番号２５０５～２５１６で定義される。
さらなる結合ドメインとしてのＣＳ１及びＢＣＭＡ結合ドメイン並びに半減期延長ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の好ましい二重特異性一本鎖分子配列は、配列番号２５１７～２５２２に定義される。
さらなる結合ドメインとしてのＭＳＬＮ及びＣＤＨ３結合ドメイン並びに半減期延長ドメインを有する本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物の好ましい二重特異性一本鎖分子配列は、配列番号２５２９～２５３６に定義される。
本明細書で上述に展開されたように、本発明のポリペプチド構築物は、Ｔ細胞の表面上のＣＤ３に結合する結合ドメインを含む。「ＣＤ３」（分化クラスター３）は、４つの鎖で構成されるＴ細胞共受容体である。哺乳動物では、ＣＤ３タンパク質複合体は、ＣＤ３γ（ガンマ）鎖、ＣＤ３δ（デルタ）鎖及び２つのＣＤ３ε（イプシロン）鎖を含有する。これらの４つの鎖がＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及びいわゆるζ（ゼータ）鎖と会合して、「Ｔ細胞受容体複合体」を形成し、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生じる。ＣＤ３γ（ガンマ）、ＣＤ３δ（デルタ）及びＣＤ３ε（イプシロン）鎖は、免疫グロブリンスーパーファミリーの高度に関連性のある細胞表面タンパク質であり、それぞれが単一の細胞外免疫グロブリンドメインを含有する。ＣＤ３分子の細胞内テールは、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）として知られる単一の保存モチーフを含有し、これは、ＴＣＲのシグナル伝達能に必須である。ＣＤ３ε分子は、ヒトの第１１染色体に存在するＣＤ３ε遺伝子によってコードされるポリペプチドである。本発明に関連して、ＣＤ３は、細胞障害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋ナイーブＴ細胞）及びＴヘルパー細胞（ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞）の両方の活性化に関与するタンパク質複合体及びＴ細胞共受容体として理解される。ＣＤ３は、典型的には、４つの異なる鎖から構成される。特に哺乳動物では、この複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖及び２つのＣＤ３ε鎖を含有する。これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及びζ鎖（ゼータ鎖）と会合して、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生じる。ＴＣＲ、ζ鎖及びＣＤ３分子は一緒に、ＴＣＲ複合体を構成する。
Ｔ細胞上のＣＤ３及び標的細胞上の標的タンパク質に結合する構築物によるＴ細胞の動員を介して向け直された標的細胞の溶解には、概して、細胞溶解性シナプス形成並びにパーフォリン及びグランザイムの送達が関わる。会合したＴ細胞は、一連の標的細胞溶解能力を有し、ペプチド抗原プロセシング及び提示又はクローナルなＴ細胞分化を妨げる免疫エスケープ機構の影響を受けず、例えば、国際公開第２００７／０４２２６１号パンフレットを参照されたい。
所与の腫瘍抗原×ＣＤ３構築物によって介在する細胞障害性は、様々な方法で測定することができる。「最大半量有効濃度」（ＥＣ５０）は、本発明の構築物などの生物学的に活性のある分子の効力の尺度として一般に使用される。これは、モル濃度単位で表され得る。細胞障害性を測定するこの場合、ＥＣ５０値は、ベースラインと最大値との中間の細胞障害性応答（標的細胞の溶解）を誘導する構築物の濃度を指す。細胞障害性アッセイにおけるエフェクター細胞は、例えば、刺激された濃縮（ヒト）ＣＤ８陽性Ｔ細胞又は刺激されていない（ヒト）末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）であり得る。ＥＣ５０値は、典型的には、刺激された／濃縮されたＣＤ８＋Ｔ細胞がエフェクター細胞として使用される場合、刺激されていないＰＢＭＣと比較して低いと予想され得る。標的細胞がマカク起源のものであるか、又は所与のマカク腫瘍抗原でトランスフェクトされている場合、エフェクター細胞は、マカクＴ細胞株、例えば、４１１９ＬｎＰｘなどのマカク起源のものでもあるものとする。標的細胞は、前記腫瘍抗原を細胞表面に発現するものとする。標的細胞は、前記腫瘍抗原を安定して又は一過性にトランスフェクトされた細胞株（ＣＨＯなど）であり得る。代わりに、標的細胞は、ヒト癌株などの腫瘍抗原陽性天然発現細胞株であり得る。通常、ＥＣ５０値は、より低い標的発現率を有する標的細胞と比較して、細胞表面上により高いレベルの前記腫瘍抗原を発現する標的細胞を使用する場合、より低いと予想される。
細胞障害性アッセイにおけるエフェクター対標的細胞（Ｅ：Ｔ）比は、通常、約１０：１であるが、変動もし得る。腫瘍抗原×ＣＤ３構築物の細胞障害活性は、５１－クロム放出アッセイ（例えば、約１８時間のインキュベーション時間を用いる）又はＦＡＣＳベースの細胞障害性アッセイ（例えば、約４８時間のインキュベーション時間を用いる）において測定することができる。インキュベーション時間（細胞障害性反応）の修正も想定される。他の細胞障害性測定方法は、周知であり、ＭＴＴ又はＭＴＳアッセイ、生物発光アッセイを含めたＡＴＰベースのアッセイ、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイ、ＷＳＴアッセイ、クローン原性アッセイ及びＥＣＩＳ技術を含む。
一実施形態によれば、本発明の腫瘍抗原×ＣＤ３構築物によって介在する細胞障害性活性は、細胞ベースの細胞障害性アッセイにおいて測定される。これは、５１－クロム放出アッセイでも測定され得る。本発明の構築物のＥＣ５０値は、３００ｐＭ以下、２８０ｐＭ以下、２６０ｐＭ以下、２５０ｐＭ以下、２４０ｐＭ以下、２２０ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１８０ｐＭ以下、１６０ｐＭ以下、１５０ｐＭ以下、１４０ｐＭ以下、１２０ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、９０ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、７０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１５ｐＭ以下、１０ｐＭ以下又は５ｐＭ以下であることが想定される。
上述の所与のＥＣ５０値は、異なるアッセイにおいて異なる条件下で測定することができる。例えば、エフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣが使用され、且つ標的細胞としてＣＨＯ細胞などの腫瘍抗原トランスフェクト細胞が使用されるとき、腫瘍抗原×ＣＤ３構築物のＥＣ５０値は、５００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２８０ｐＭ以下、２６０ｐＭ以下、２５０ｐＭ以下、２４０ｐＭ以下、２２０ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１８０ｐＭ以下、１６０ｐＭ以下、１５０ｐＭ以下、１４０ｐＭ以下、１２０ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、９０ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、７０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１５ｐＭ以下、１０ｐＭ以下又は５ｐＭ以下であることが想定される。エフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣが使用されるとき、且つしたがって標的細胞がＣＬＤＮ６陽性細胞株であるとき、ＣＬＤＮ６×ＣＤ３構築物のＥＣ５０値は、３００ｐＭ以下、２８０ｐＭ以下、２６０ｐＭ以下、２５０ｐＭ以下、２４０ｐＭ以下、２２０ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１８０ｐＭ以下、１６０ｐＭ以下、１５０ｐＭ以下、１４０ｐＭ以下、１２０ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、９０ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、７０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１５ｐＭ以下、１０ｐＭ以下又は５ｐＭ以下であることが想定される。
一実施形態によれば、本発明の腫瘍抗原×ＣＤ３ポリペプチド／ポリペプチド構築物は、溶解を誘導／溶解に介在しないか、又はＣＨＯ細胞などの細胞の表面に前記所与の腫瘍抗原を発現しない細胞（腫瘍抗原陰性細胞）の溶解を本質的に誘導しない／溶解に本質的に介在しない。「溶解を誘導しない」、「本質的に溶解を誘導しない」、「溶解に介在しない」又は「本質的に溶解に介在しない」という用語は、本発明の構築物が腫瘍抗原陰性細胞の３０％超、好ましくは２０％以下、より好ましくは１０％以下、特に好ましくは９％、８％、７％、６％又は５％以下の溶解を誘導しないか又はそれに介在せず、それにより腫瘍抗原発現標的細胞（前記腫瘍抗原で形質転換又はトランスフェクトされた細胞又はヒト癌株などの天然の発現細胞株）の溶解が１００％となるよう設定されていることを意味する。これは、通常、最大５００ｎＭの構築物の濃度に当てはまる。細胞溶解測定は、日常的な技術である。その上、本明細書では、細胞溶解の測定方法の具体的な指示を教示する。
個々の腫瘍抗原×ＣＤ３ポリペプチド／ポリペプチド構築物の単量体アイソフォームと二量体アイソフォームとの細胞障害性活性の差は、「効力ギャップ」と称される。この効力ギャップは、例えば、その分子の単量体形態のＥＣ５０値と二量体形態のＥＣ５０値との間の比率として算出することができる。このギャップを決定する１つの方法では、後述する通り、精製構築物の単量体及び二量体を用いて、１８時間の５１－クロム放出アッセイ又は４８時間のＦＡＣＳベース細胞障害性アッセイが実施される。エフェクター細胞は、刺激された濃縮ヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞又は非刺激ヒトＰＢＭＣである。標的細胞は、ヒト腫瘍抗原をトランスフェクトされたＣＨＯ細胞である。エフェクター対標的細胞（Ｅ：Ｔ）比は、１０：１である。本発明の腫瘍抗原×ＣＤ３構築物の効力ギャップは、好ましくは５以下、より好ましくは４以下、さらにより好ましくは３以下、さらにより好ましくは２以下、最も好ましくは１以下である。
本発明のポリペプチド構築物の結合ドメインは、好ましくは、マカクなどの霊長類の哺乳動物目のメンバーに対して交差種特異的である。一実施形態によれば、さらなる結合ドメインは、ヒト腫瘍抗原への結合に加えて、（限定されないが）新世界霊長類（コモンマーモセット（Ｃａｌｌｉｔｈｒｉｘ ｊａｃｃｈｕｓ）、ワタボウシタマリン（Ｓａｇｕｉｎｕｓ Ｏｅｄｉｐｕｓ）又はリスザル（Ｓａｉｍｉｒｉ ｓｃｉｕｒｅｕｓ）など）、旧世界霊長類（ヒヒ及びマカクなど）、テナガザル、オランウータン及び非ヒトのヒト科を含め、霊長類の前記腫瘍抗原にも結合することになる。本発明のＴ細胞の表面上のヒトＣＤ３に結合するドメインは、少なくともマカクＣＤ３にも結合することが想定される。好ましいマカクは、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）である。アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）（アカゲザル（Ｒｈｅｓｕｓ））も想定される。本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物は、Ｔ細胞の表面上のヒトＣＤ３イプシロン及び少なくともマカクＣＤ３に結合するドメインを含む。
一実施形態において、（例えば、ＢｉａＣｏｒｅによって又はスキャッチャード解析によって決定されるような）マカクＣＤ３と比べたヒトＣＤ３を結合することについての本発明による構築物の親和性ギャップ［ＫＤ ｍａ ＣＤ３：ＫＤ ｈｕ ＣＤ３］は、０．０１～１００、好ましくは０．１～１０、より好ましくは０．２～５、より好ましくは０．３～４、さらにより好ましくは０．５～３又は０．５～２．５及び最も好ましくは０．５～１である。
本明細書で先に詳述したように、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物の前記結合ドメインは、ヒトＣＤ３イプシロン（又はＴ細胞の表面上のヒトＣＤ３イプシロン）に結合し、好ましくは、マーモセット（Ｃａｌｌｉｔｈｒｉｘ ｊａｃｃｈｕｓ）又はリスザル（Ｓａｉｍｉｒｉ ｓｃｉｕｒｅｕｓ）のＣＤ３イプシロンに結合する。より具体的には、前記ドメインは、ヒトＣＤ３εの細胞外エピトープに結合する。前記ドメインがヒトの細胞外エピトープ及びマカクＣＤ３ε鎖に結合することも想定される。ＣＤ３イプシロンの前記細胞外エピトープは、ヒトＣＤ３イプシロン細胞外ドメインのアミノ酸残基１～２７内に含まれる（配列番号２５５２；配列番号２５５３のアミノ酸残基１～２７を参照されたい）。さらにより詳細には、エピトープは、少なくともアミノ酸配列Ｇｌｎ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ｇｌｕを含む。マーモセット（Ｃａｌｌｉｔｈｒｉｘ ｊａｃｃｈｕｓ）は、マーモセット（Ｃａｌｌｉｔｒｉｃｈｉｄａｅ）科に属する新世界霊長類であるが、リスザル（Ｓａｉｍｉｒｉ ｓｃｉｕｒｅｕｓ）は、オマキザル（Ｃｅｂｉｄａｅ）科に属する新世界霊長類である。
好ましい実施形態では、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物は、少なくとも二重特異性である一本鎖ポリペプチドである。本実施形態では、本発明によるＣＤ３結合ドメインは、ポリペプチド又はポリペプチド構築物中にｓｃＦｖとして存在することが好ましい。
本発明のポリペプチド構築物は、ＣＤ３に結合するその機能に加えて、特定の実施形態では、少なくともさらなる結合ドメインに結合するさらなる機能を有することも想定される。この形式では、構築物は、好ましくは腫瘍抗原結合を通して標的細胞を標的化し、ＣＤ３結合を通して細胞障害性Ｔ細胞活性に介在し、且つ血清半減期を亢進又は延長させる手段又はドメイン、エフェクター細胞の動員を通して細胞障害性に介在する完全に機能性の又は修飾されたＦｃ定常ドメイン、標識（蛍光等）、毒素又は放射性核種などの治療薬など、さらなる機能を提供することにより、三機能又は多機能構築物であり得る。
本発明のポリペプチド／ポリペプチド構築物の血清半減期を延長する手段又はドメインの例としては、ポリペプチド／ポリペプチド構築物に融合するか又は他の方法で付着するペプチド、タンパク質又はタンパク質のドメインが挙げられる。ペプチド、タンパク質又はタンパク質ドメインの群は、血清アルブミン等の人体における好ましい薬物動態学的プロファイルを有する他のタンパク質に結合するペプチドを含む（国際公開第２００９／１２７６９１号パンフレットを参照されたい）。そのような半減期延長ペプチドの代替概念には、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ、国際公開第２００７／０９８４２０号パンフレットを参照されたい）に結合するペプチドが含まれ、これも本発明の構築物において使用することができる。タンパク質のより大きいドメイン又は完全なタンパク質を付着させる概念には、ヒト血清アルブミン、ヒト血清アルブミン（国際公開第２０１１／０５１４８９号パンフレット、国際公開第２０１２／０５９４８６号パンフレット、国際公開第２０１２／１５０３１９号パンフレット、国際公開第２０１３／１３５８９６号パンフレット、国際公開第２０１４／０７２４８１号パンフレット、国際公開第２０１３／０７５０６６号パンフレットを参照されたい）又はそのドメインの変異体又は突然変異体の融合並びに免疫グロブリン定常領域（Ｆｃドメイン）及びその変異体の融合が含まれる。Ｆｃドメインのそのような変異体は、Ｆｃベースのドメインと呼ばれ、例えば、二量体又は多量体の所望の対形成を可能にするために、Ｆｃ受容体結合を無効にするため（例えば、ＡＤＣＣ又はＣＤＣを回避するため）又は他の理由で最適化／修飾され得る。ヒト体内の物質又は分子の半減期を延長する、当技術分野で公知のさらなる概念は、（本発明の構築物などの）それらの分子のペグ化である。
一実施形態では、本発明によるポリペプチド／ポリペプチド構築物は、例えば、構築物の血清半減期を延長するために、融合パートナー（例えば、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドなど）と（例えばペプチド結合を介して）連結される。これらの融合パートナーは、ヒト血清アルブミン（「ＨＳＡ」又は「ＨＡＬＢ」）並びにその配列変異体、ＨＳＡに結合するペプチド、ＦｃＲｎに結合するペプチド（「ＦｃＲｎ ＢＰ」）又は（抗体由来）Ｆｃ領域を含む構築物から選択することができる。これらの融合パートナーの例示的な配列は、配列番号１６、１８及び１９に示されている。一般的に、融合パートナーは、本発明による構築物のＮ末端又はＣ末端に直接（例えばペプチド結合を介して）又は（ＧＧＧＧＳ）ｎ若しくは（ＧＧＧＧＱ）ｎ（式中、「ｎ」は、２以上の整数、例えば２、又は３、又は４である）などのペプチドリンカーを通してかのいずれかで連結され得る。適切なペプチドリンカーは上記で議論されており、配列番号２及び２５５１に示されている。
本発明によるポリペプチド構築物は、少なくとも二重特異性である一本鎖ポリペプチドを含み、前記ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって以下の順序において、
ａ）ＶＬ（細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＨ（細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＨ（ＣＤ３ε結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）；
ｂ）ＶＨ（細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＨ（ＣＤ３ε結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）；
ｃ）ＶＬ（細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＨ（細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＨ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（Ｇ４）－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）－（Ｇ４Ｓ）６又は（Ｇ４Ｑ）６－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）；
ｄ）ＶＨ（細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＨ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（Ｇ４）－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）－（Ｇ４Ｓ）６又は（Ｇ４Ｑ）６－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）；
ｅ）ＶＨ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＬ（第２の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＨ（第２の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＨ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（Ｇ４）－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）－（Ｇ４Ｓ）６又は（Ｇ４Ｑ）６又は－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）、
ｆ）ＶＨ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＨ（第２の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（第２の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＨ（ＣＤ３ε結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（Ｇ４）－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）－（Ｇ４Ｓ）６又は（Ｇ４Ｑ）６又は－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）；
ｇ）ＶＬ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＨ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＬ（第２の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＨ（第２の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＨ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（Ｇ４）－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）－（Ｇ４Ｓ）６又は（Ｇ４Ｑ）６又は－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）
ｈ）ＶＬ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＨ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＨ（第２の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（第２の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）－ＶＨ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（ＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－ペプチドリンカー（Ｇ４）－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）－（Ｇ４Ｓ）６又は（Ｇ４Ｑ）６又は－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）；又は
ｉ）結合ドメイン１（（ＶＬ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＨ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む））又は（ＶＨ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）））－ペプチドリンカー（Ｇ４Ｓ）又は（Ｇ４Ｑ）－ＣＤ３結合ドメイン１（ＶＨ（第１のＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（第１のＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む））－ペプチドリンカー（Ｇ４）－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）－（Ｇ４Ｓ）６又は（Ｇ４Ｑ）６－Ｆｃモノマー（ＨＬＥドメインの一部）－ペプチドリンカー（Ｇ４）－結合ドメイン２（（ＶＬ（第２の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＨ（第１の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む））又は（ＶＨ（第２の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（第２の細胞表面抗原結合ドメイン／パラトープの一部を含む）））－ペプチドリンカー（Ｇ４Ｓ）又は（Ｇ４Ｑ）－ＣＤ３結合ドメイン２（ＶＨ（第２のＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む）－（Ｇ４Ｓ）３又は（Ｇ４Ｑ）３－ＶＬ（第２のＣＤ３イプシロン結合ドメイン／パラトープの一部を含む））
を含むか又はそれからなる。
上述から明らかなように、細胞表面抗原の結合ドメインのＶＨ及びＶＬ領域の配列の向きは、ＶＨ－ＶＬ又はＶＬ－ＶＨであり得る。好ましくは、細胞表面抗原は、本明細書中において上で詳述する腫瘍抗原である。詳細には、Ｆｃモノマー及び連結リンカーから構成されるＨＬＥドメイン配列は、好ましくは、配列番号１８及び１９に定義される配列から選択される。項目ｉ）のポリペプチド構築物の２つのＣＤ３結合ドメインは、好ましくは同じＣＤ３結合ドメイン、例えば、好ましくは、配列番号２０２８及び２０２９のＶＨ領域配列及びＶＬ領域配列を有するＣＤ３結合ドメインである。ペプチドリンカー（ＳＧ４Ｓ）又は（ＳＧ４Ｑ）が示された位置において好ましいが、（Ｇ４Ｓ）又は（Ｇ４Ｑ）リンカーで置き換えることもできる。
ポリペプチド／ポリペプチド構築物の共有結合修飾も本発明の範囲内に含まれ、概して翻訳後に行われるが、必ずしもそうではない。例えば、構築物の特定のアミノ酸残基を、選択された側鎖又はＮ末端残基若しくはＣ末端残基と反応させることができる有機誘導体化作用因子と反応させることにより、構築物のいくつかのタイプの共有結合修飾が分子内へと導入される。二官能性作用因子による誘導体化は、種々の方法で使用するために、本発明の構築物を水不溶性支持体マトリックス又は表面に架橋するのに有用である。グルタミニル残基及びアスパラギニル残基は、多くの場合、それぞれ対応するグルタミル残基及びアスパルチル残基に脱アミド化される。代わりに、これらの残基は、弱酸性条件下で脱アミド化される。これらの残基のいずれの形態も本発明の範囲内に入る。他の修飾としては、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル残基又はスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン側鎖、アルギニン側鎖及びヒスチジン側鎖のα－アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，１９８３，ｐｐ．７９－８６）、Ｎ末端アミンのアセチル化並びにいずれかのＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
本発明の範囲内に含まれる構築物の別の種類の共有結合修飾は、タンパク質のグリコシル化パターンを変化させることを含む。当技術分野で公知のように、グリコシル化パターンは、タンパク質の配列（例えば、後述で論議される特定のグリコシル化アミノ酸残基の有無）又はタンパク質が産生される宿主細胞若しくは生物の両方に依存し得る。特定の発現系を後述で論議する。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合型又はＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－トレオニン（式中、Ｘはプロリンを除くいずれかのアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素結合のための認識配列である。そのため、ポリペプチド中でのこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在により、潜在的なグリコシル化部位が作り出される。Ｏ結合型グリコシル化は、糖であるＮ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース又はキシロースの１つがヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はトレオニンに結合することを指すが、５－ヒドロキシプロリン又は５－ヒドロキシリジンも使用され得る。
構築物へのグリコシル化部位の付加は、（Ｎ結合型グリコシル化部位について）上述のトリペプチド配列の１つ以上を含有するようにアミノ酸配列を変化させることによって好都合に達成される。変化は、（Ｏ結合型グリコシル化部位について）出発配列への１つ以上のセリン残基又はトレオニン残基の付加又は置換によっても行われ得る。容易にするため、構築物のアミノ酸配列は、ＤＮＡレベルでの変化を通して、特にポリペプチドをコードするＤＮＡを予め選択された塩基で突然変異させて、それにより所望のアミノ酸に翻訳されることになるコドンを生じさせることによって変化し得る。
構築物上の炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、グリコシドのタンパク質への化学的又は酵素によるカップリングによるものである。これらの手順は、Ｎ及びＯ結合型グリコシル化のためのグリコシル化能力を有する宿主細胞におけるタンパク質の産生を必要としないという点で有利である。使用されるカップリング様式に応じて、糖は、（ａ）アルギニン及びヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）システインのものなど遊離スルフヒドリル基、（ｄ）セリン、トレオニン若しくはヒドロキシプロリンのものなど遊離ヒドロキシル基、（ｅ）フェニルアラニン、チロシン若しくはトリプトファンのものなど芳香族残基、又は（ｆ）グルタミンのアミド基に結合し得る。これらの方法は、国際公開第８７／０５３３０号パンフレット及びＡｐｌｉｎ ａｎｄ Ｗｒｉｓｔｏｎ，１９８１，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９－３０６に説明されている。
出発構築物上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的に又は酵素で達成され得る。化学的脱グリコシル化は、化合物トリフルオロメタンスルホン酸又は同等の化合物へのタンパク質の曝露を必要とする。この処理は、ポリペプチドをインタクトのままにしながら、連結している糖（Ｎ－アセチルグルコサミン又はＮ－アセチルガラクトサミン）を除くほとんど又はすべての糖の切断をもたらす。化学的脱グリコシル化は、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５９：５２及びＥｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８：１３１によって説明されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素による切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１３８：３５０によって説明される通りの様々なエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼを使用することで達成することができる。潜在的なグリコシル化部位でのグリコシル化は、Ｄｕｓｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：３１０５によって説明される化合物ツニカマイシンを使用することで防止され得る。ツニカマイシンは、タンパク質－Ｎ－グリコシド結合の形成を遮断する。
構築物の他の修飾も本明細書で企図される。例えば、構築物の別の種類の共有結合修飾は、米国特許第４，６４０，８３５号明細書、同第４，４９６，６８９号明細書、同第４，３０１，１４４号明細書、同第４，６７０，４１７号明細書、同第４，７９１，１９２号明細書又は同第４，１７９，３３７号明細書に示されている様式で、ポリオールを含む様々な非タンパク質性ポリマーに構築物を連結することを含む。加えて、当技術分野で公知のように、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリマーの付加を容易にするために、構築物内の様々な位置でアミノ酸置換を行い得る。
いくつかの実施形態では、本発明の構築物の共有結合修飾は、１つ以上の標識の付加を含む。潜在的な立体障害を低減するために、様々な長さのスペーサーアームを介して標識基が構築物に連結され得る。タンパク質を標識するための様々な方法が当技術分野で公知であり、本発明を実施する際に使用することができる。「標識」又は「標識基」という用語は、いずれかの検出可能な標識を指す。一般的に、標識は、これが検出されることとなるアッセイに応じて、種々のクラスに分けられ、以下の例が挙げられるが、これらに限定されない：
ａ）放射性同位体又は放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）などの放射性又は重同位体であり得る同位体標識
ｂ）磁気標識（例えば、磁気粒子）
ｃ）酸化還元活性部分
ｄ）蛍光基（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍りん光体）、化学発光基及び「小分子」蛍光体又はタンパク質性蛍光体のいずれかであり得る蛍光標識又は蛍光体等の光学染料（限定されないが、発色団、蛍りん光体及び蛍光体を含む）
ｅ）酵素基（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）
ｆ）ビオチン化基
ｇ）二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体のための結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグなど）。
「蛍光標識」とは、その固有の蛍光特性を介して検出され得るいずれかの分子を意味する。適切な蛍光標識には、フルオレセイン、ローダミン、テトラメチルローダミン、エオシン、エリスロシン、クマリン、メチル－クマリン、ピレン、マラサイトグリーン、スチルベン、ルシファーイエロー、Ｃａｓｃａｄｅ ＢｌｕｅＪ、テキサスレッド、ＩＡＥＤＡＮＳ、ＥＤＡＮＳ、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ、ＬＣレッド６４０、Ｃｙ ５、Ｃｙ ５．５、ＬＣレッド７０５、オレゴングリーン、Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ色素（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５４６、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０）、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｙｅｌｌｏｗ及びＲ－フィコエリトリン（ＰＥ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）、ＦＩＴＣ、ローダミン及びＴｅｘａｓ Ｒｅｄ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）が含まれるが、これらに限定されない。蛍光体を含む適切な光学染料は、Ｒｉｃｈａｒｄ Ｐ．ＨａｕｇｌａｎｄによるＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋに説明されている。
適切なタンパク質性蛍光標識として、緑色蛍光タンパク質、例えば、Ｒｅｎｉｌｌａ、Ｐｔｉｌｏｓａｒｃｕｓ又はＡｅｑｕｏｒｅａ種のＧＦＰ（Ｃｈａｌｆｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：８０２－８０５）、ＥＧＦＰ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇｅｎｂａｎｋ（登録商標）受託番号Ｕ５５７６２）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ，Ｑｕａｎｔｕｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．１８０１ ｄｅ Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ Ｂｌｖｄ．Ｗｅｓｔ，８ｔｈ Ｆｌｏｏｒ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ Ｈ３Ｈ １Ｊ９、Ｓｔａｕｂｅｒ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４：４６２－４７１、Ｈｅｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．６：１７８－１８２）、強化型黄色蛍光タンパク質（ＥＹＦＰ，Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、ルシフェラーゼ（Ｉｃｈｉｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５４０８－５４１７）、βガラクトシダーゼ（Ｎｏｌａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２６０３－２６０７）及びＲｅｎｉｌｌａ（国際公開第９２／１５６７３号パンフレット、国際公開第９５／０７４６３号パンフレット、国際公開第９８／１４６０５号パンフレット、国際公開第９８／２６２７７号パンフレット、国際公開第９９／４９０１９号パンフレット、米国特許第５，２９２，６５８号明細書；同第５，４１８，１５５号明細書；同第５，６８３，８８８号明細書；同第５，７４１，６６８号明細書；同第５，７７７，０７９号明細書；同第５，８０４，３８７号明細書；同第５，８７４，３０４号明細書；同第５，８７６，９９５号明細書；同第５，９２５，５５８号明細書）も挙げられるが、これらに限定されない。
ロイシンジッパードメインは、それらが見出されるタンパク質のオリゴマー化を促進するペプチドである。ロイシンジッパーは元来、種々の異なるタンパク質において発見されて以来、いくつかのＤＮＡ結合タンパク質において同定された（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１７５９）。公知のロイシンジッパーの中には、天然に存在するペプチド及び二量化する又は三量化するその誘導体がある。可溶性オリゴマータンパク質を製造するのに適切なロイシンジッパードメインの例がＰＣＴ出願の国際公開第９４／１０３０８号パンフレットに説明されており、且つ肺サーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰＤ）に由来するロイシンジッパーがＨｏｐｐｅ ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３４４：１９１に説明されている。それに融合した異種タンパク質の安定した三量化を可能にする修飾ロイシンジッパーの使用は、Ｆａｎｓｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２６７－７８に説明されている。
本発明のポリペプチド構築物は、例えば、分子の単離に役立つか、又は分子の適合した薬物動態特性に関する追加のドメインも含み得る。構築物の単離に役立つドメインは、単離方法、例えば単離カラム内で捕捉することができるペプチドモチーフ又は二次導入部分から選択され得る。そのような追加のドメインの非限定的な実施形態は、Ｍｙｃ－タグ、ＨＡＴ－タグ、ＨＡ－タグ、ＴＡＰ－タグ、ＧＳＴ－タグ、キチン結合ドメイン（ＣＢＤ－タグ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ－タグ）、Ｆｌａｇ－タグ、Ｓｔｒｅｐ－タグ及びそれらの変異体（例えば、ＳｔｒｅｐＩＩ－タグ）並びにＨｉｓ－タグとして公知のペプチドモチーフを含む。同定されたＣＤＲを特徴とする本明細書に開示される構築物はすべて、分子のアミノ酸配列において連続するＨｉｓ残基、例えば、５つのＨｉｓ残基又は６つのＨｉｓ残基（ヘキサ－ヒスチジン）のリピートとして一般に公知のＨｉｓタグドメインを含み得る。Ｈｉｓタグは、例えば、構築物のＮ末端又はＣ末端に位置し得る。一実施形態では、本発明による構築物のＣ末端にペプチド結合を介してヘキサヒスチジンタグ（ＨＨＨＨＨＨ）が連結される。ヒスチジンタグ、特に６×Ｈｉｓタグが好ましい。
本発明は、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチドにも関する。核酸分子は、ヌクレオチドからなるバイオポリマーである。ポリヌクレオチドは、鎖中で共有結合した１３個以上のヌクレオチドモノマーから構成されるバイオポリマーである。ＤＮＡ（ｃＤＮＡ等）及びＲＮＡ（ｍＲＮＡ等）は、異なる生物学的機能を有するポリヌクレオチド／核酸分子の例である。ヌクレオチドは、ＤＮＡ又はＲＮＡのような核酸分子のモノマー又はサブユニットとして機能する有機分子である。本発明の核酸分子又はポリヌクレオチドは、二本鎖又は一本鎖、線状又は環状であり得る。核酸分子又はポリヌクレオチドはベクターに含まれることが想定される。さらに、そのようなベクターは、宿主細胞に含まれることが想定される。前記宿主細胞は、例えば、本発明のベクター又はポリヌクレオチド／核酸分子による形質転換又はトランスフェクション後、構築物を発現することができる。この目的のために、ポリヌクレオチド又は核酸分子は、制御配列に作動可能に連結されている。
遺伝暗号は、遺伝物質（核酸）内でコードされる情報がタンパク質へと翻訳される規則のセットである。生細胞中での生物学的解読は、アミノ酸を運搬し、ｍＲＮＡ中の３つのヌクレオチドを一度に読み取るｔＲＮＡ分子を使用して、ｍＲＮＡによって指定された順にアミノ酸を連結するリボソームによって達成される。この暗号は、コドンと呼ばれる三つ組のヌクレオチド配列が、タンパク質の合成時に次に付加されることになるアミノ酸をどのように指定するかを定義する。いくつかの例外があるが、核酸配列中の３ヌクレオチドのコドンは、１つのアミノ酸を指定する。大部分の遺伝子は、厳密に同じ暗号で暗号化されているため、この特定の暗号を基準遺伝暗号又は標準遺伝暗号と称する場合が多い。
コドンの縮重は、アミノ酸を指定する３塩基対コドンの複数の組合せとして示される遺伝暗号の重複性である。縮重は、コード可能なアミノ酸と比べてコドンが多数であるために生じる。１つのアミノ酸をコードするコドンは、その３つの位置のいずれかにおいて異なり得るが、多くの場合、この差異は、２番目又は３番目の位置にある。例えば、コドンＧＡＡ及びＧＡＧは両方ともグルタミン酸を指定し、冗長性を示すが、いずれも他のアミノ酸を特定しておらず、したがって曖昧性を示さない。異なる生物の遺伝暗号は、他のものよりも同じアミノ酸をコードするいくつかのコドンの１個を使用することに偏っている可能性があり、すなわち、１個の頻度は、偶然によって予想されるよりも高い。例えば、ロイシンは、６つの別個のコドンにより指定され、そのいくつかは、ほとんど使用されない。ほとんどの生物についてのゲノムコドン使用頻度を詳述するコドン使用表が利用可能である。組換え遺伝子技術では、コドン最適化と称される技術を実施することにより、この効果がよく利用され、例えばタンパク質発現を増大させるために、それぞれの宿主細胞（例えば、ヒト、ハムスター起源の細胞、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）細胞又はサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）細胞）によって優先されるコドンを使用してポリヌクレオチドを設計する。したがって、本開示のポリヌクレオチド／核酸分子はコドン最適化されていることが想定される。それにもかかわらず、本発明の構築物をコードするポリヌクレオチド／核酸分子は、所望のアミノ酸をコードする任意のコドンを使用して設計され得る。
一実施形態によれば、本発明のポリペプチド構築物をコードする本発明のポリヌクレオチド／核酸分子は、１個の単一分子の形態又は２個以上の別個の分子の形態である。本発明の構築物が一本鎖構築物である場合、そのような構築物をコードするポリヌクレオチド／核酸分子はまた、単一分子の形態である可能性が最も高い。しかしながら、ポリペプチド構築物の異なる構成要素（例えば、異なるドメイン、例えば、細胞表面抗原に結合するパラトープ（抗原結合（エピトープ結合）構造）含有ドメイン、ＣＤ３に結合するパラトープ（抗原結合（エピトープ結合）構造）含有ドメイン及び／又は抗体定常ドメインなどのさらなるドメイン）が別個のポリペプチド鎖上に位置することも想定され、その場合、ポリヌクレオチド／核酸分子は２つ以上の別個の分子の形態である可能性が最も高い。
同じことは、本発明のポリヌクレオチド／核酸分子を含むベクターにも当てはまる。本発明の構築物が一本鎖構築物である場合、１個のベクターは、構築物をコードするポリヌクレオチドを１つの場所（１つのオープンリーディングフレームとして、ＯＲＦ）に含み得る。１個のベクターは、（個々のＯＲＦを有する）別々の位置に２個以上のポリヌクレオチド／核酸分子も含み得、それらの各々は、本発明の構築物の異なる構成要素をコードする。本発明のポリヌクレオチド／核酸分子を含むベクターは、１個の単一ベクター又は２個以上の別個のベクターの形態であることが想定される。一実施形態では、構築物を宿主細胞で発現させる目的のために、本発明の宿主細胞は、構築物をコードするポリヌクレオチド／核酸分子又はそのようなポリヌクレオチド／核酸分子を全体に含むベクターを含むべきであり、これは、構築物のすべての構成要素（単一分子としてコードされるか、又は別々の分子／位置にコードされるかにかかわらず）が翻訳後に集合し、本発明の生物学的に活性のある構築物を一緒に形成することを意味する。
さらに、本発明は、本発明のポリヌクレオチド／核酸分子を含むベクターに関する。ベクターは、通常、遺伝材料の複製及び／又は発現を確保するために、（外来性）遺伝材料を細胞内へと移入するためのビヒクルとして使用される核酸分子である。「ベクター」という用語は、プラスミド、ウイルス、コスミド及び人工染色体を包含するが、これらに限定されない。いくつかのベクターはクローニング用に特別に設計されており（クローニングベクター）、他のベクターはタンパク質発現用に設計されている（発現ベクター）。いわゆる転写ベクターは主として、そのインサートを増幅するために使用される。ＤＮＡの操作は、通常、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ベクターに対して行われ、このベクターは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）内でのその維持に必要な要素を含有する。しかしながら、ベクターは、それらが酵母、植物又は哺乳動物細胞等の別の生物において維持されることを可能にする要素も有し得、これらのベクターは、シャトルベクターと呼ばれる。標的又は宿主細胞中へのベクターの挿入は、通常、細菌細胞について形質転換と呼ばれ、真核細胞についてトランスフェクションと呼ばれる一方、ウイルスベクターの挿入は、多くの場合、形質導入と呼ばれる。
一般的に、操作されたベクターは、複製起点、マルチクローニング部位及び選択可能なマーカーを含む。ベクター自体は、一般的に、インサート（導入遺伝子）と、ベクターの「骨格」としての役割を果たすより大きい配列とを含むヌクレオチド配列、通常、ＤＮＡ配列である。遺伝暗号は、所与のコード領域のポリペプチド配列を決定するが、他のゲノム領域は、これらのポリペプチドがいつどこで生成されるかに影響を及ぼし得る。そのため、現代のベクターは、導入遺伝子インサート及び骨格の他に、以下の追加の特徴を包含し得る：プロモーター、遺伝子マーカー、抗生物質耐性、レポーター遺伝子、ターゲティング配列、タンパク質精製タグ。発現ベクター（発現構築物）と呼ばれるベクターは、具体的には、標的細胞における導入遺伝子の発現のためのものであり、一般に制御配列を有する。
「制御配列」という用語は、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した制御配列として、例えば、プロモーター、場合によってはオペレーター配列及びリボソーム結合部位が挙げられる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、コザック配列及びエンハンサーを利用することが公知である。
核酸は、この核酸が別の核酸配列と機能的関連性に置かれる場合、「作動可能に連結されて」いる。例えば、プレ配列又は分泌リーダーのＤＮＡは、このＤＮＡがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、このポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結されているか、プロモーター又はエンハンサーは、これが配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結されているか、又はリボソーム結合部位は、このリボソーム結合部位が翻訳を促進するために配置される場合、コード配列に作動可能に連結されている。概して、「作動可能に連結されている」とは、連結されているヌクレオチド配列が連続的であり、分泌リーダーの場合、連続的であり、且つリーディングフェーズにあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、連続している必要はない。連結は、都合のよい制限部位でのライゲーションによって達成される。このような部位が存在しない場合、従来の慣例に従い、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーを使用する。
「トランスフェクション」は、標的細胞内へ核酸分子又はポリヌクレオチド（ベクターを含む）を意図的に導入するプロセスである。この用語は主として、真核細胞における非ウイルス性の方法に用いられる。形質導入を使用して、核酸分子又はポリヌクレオチドのウイルス媒介性移入を説明することが多い。動物細胞のトランスフェクションは、典型的に、細胞膜に一過性の細孔又は「穴」を開けて材料の取込みを可能にすることを伴う。トランスフェクションは、生物学的粒子（例えば、ウイルス形質導入とも称されるウイルストランスフェクション）、化学物質ベースの方法（例えば、リン酸カルシウム、リポフェクション、Ｆｕｇｅｎｅ、カチオン性ポリマー、ナノ粒子を使用するなど）又は物理的処理（例えば、電気穿孔、マイクロインジェクション、遺伝子銃、細胞スクイージング、マグネトフェクション、静水圧、インペイルフェクション、音波処理、光学的形質移入、熱ショック）を使用して実行することができる。
「形質転換」という用語は、細菌及び植物細胞を含む非動物真核細胞への核酸分子又はポリヌクレオチド（ベクターを含む）の非ウイルス移入を説明するために使用される。そのため、形質転換は、細胞膜を通したその周辺からの直接的取込み及びそれに続く外来性遺伝子材料（核酸分子）の組込みから生じる、細菌又は非動物真核細胞の遺伝的改変である。形質転換は、人為的手段によって達成することができる。形質転換が起こるには、細胞又は細菌がコンピテンスの状態でなければならず、これは、飢餓及び細胞密度等の環境条件に対する時間的に限られた応答として生じ得、且つ人為的に誘導することもできる。
その上、本発明は、本発明のポリヌクレオチド／核酸分子又は本発明のベクターにより形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞を提供する。
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」又は「レシピエント細胞」という用語は、本発明の構築物をコードするベクター、外来性核酸分子及び／又はポリヌクレオチドのレシピエントであり得るか若しくはレシピエントであったいずれかの個々の細胞又は細胞培養物並びに／或いは構築物自体のレシピエントを含むことを意図している。細胞内への個々の材料の導入は、形質転換、トランスフェクション及び同類のものにより実行される（上述参照）。「宿主細胞」という用語は、単一細胞の継代又は潜在的な継代を含むことも意図する。後継世代において、自然発生的、偶発的若しくは意図的な突然変異のいずれか又は環境的影響に起因して特定の修飾が生じる場合があるため、そのような継代は、実際には、（形態学的性質又はゲノムＤＮＡ若しくは総ＤＮＡ補足因子において）親細胞と完全に同一ではない場合もあるが、依然として本明細書で使用される用語の範囲内に含まれる。適切な宿主細胞として、原核細胞又は真核細胞が挙げられ、以下に限定されないが、細菌（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）など）、酵母細胞、真菌細胞、植物細胞及び動物細胞（例えば、昆虫細胞及び哺乳動物細胞、例えば、ハムスター、マウス、ラット、マカク又はヒト）が挙げられる。
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核微生物が本発明の構築物に適したクローニング又は発現宿主である。サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）又は一般的なパン酵母が下等真核生物宿主微生物の中で最も一般的に使用されている。しかしながら、いくつかの他の属、種及び系統が一般に利用可能であり、且つ本発明において有用であり、例えばシゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）、Ｋ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）、Ｋ．フラジリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ １２４２４）、Ｋ．ブルガリクス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ １６０４５）、Ｋ．ウィッカラミイ（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ）（ＡＴＣＣ ２４１７８）、Ｋ．ワルチイ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）（ＡＴＣＣ ５６５００）、Ｋ．ドロソフィラルム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）（ＡＴＣＣ ３６９０６）、Ｋ．サーモトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）及びＫ．マルキサヌス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）などのクリベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）宿主；ヤロウイア属（ｙａｒｒｏｗｉａ）（欧州特許第４０２２２６号明細書）；ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）（欧州特許第１８３０７０号明細書）；カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）；トリコデルマ・レシア（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ）（欧州特許第２４４２３４号明細書）；ニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）；シュワニオミセス・オクシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）などのシュワニオミセス属（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）；並びに糸状菌、例えばニューロスポラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）及びアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）宿主、例えばＡ．ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）及びＡ．ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）が挙げられる。
グリコシル化された構築物の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が含まれる。多くのバキュロウイルス株及びバリアント並びにヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（イモムシ）、ネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ）（蚊）、ヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（蚊）、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）（ショウジョウバエ）及びカイコ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）（家蚕）などの宿主由来の対応する許容される昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株（例えば、オートグラファ・カリフォルニア（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）ＮＰＶのＬ－１バリアント及びカイコ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）ＮＰＶのＢｍ－５株）が公的に入手可能であり、そのようなウイルスは、本明細書で、本発明によるウイルスとして使用され得、特にヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞の形質移入に使用され得る。
綿、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマト、シロイヌナズナ及びタバコの植物細胞培養物も宿主として使用することができる。植物細胞培養におけるタンパク質の産生に有用なクローニング及び発現ベクターは、当業者に公知である。例えば、Ｈｉａｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８９）３４２：７６－７８、Ｏｗｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７９０－７９４、Ａｒｔｓａｅｎｋｏ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊ ８：７４５－７５０及びＦｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３２：９７９－９８６を参照されたい。
しかしながら、最も高い関心が持たれてきたのは、脊椎動物細胞であり、培養下（細胞培養下）での脊椎動物細胞の増殖は日常的手順となっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１など）、ヒト胚性腎臓株（２９３細胞又は懸濁培養物中での成長のためにサブクローニングした２９３細胞など、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））、仔ハムスター腎細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０など）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯなど、Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４など、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））；サル腎細胞（ＣＶＩ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０など）、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５８７など）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２など）、イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４など）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２など）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５など）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、１４１３ ８０６５など）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ－５１など）、ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９８２）３８３：４４－６８）、ＭＲＣ ５細胞、ＦＳ４細胞及びヒト肝細胞腫株（Ｈｅｐ Ｇ２など）である。
さらなる実施形態では、本発明は、本発明のポリペプチド又はポリペプチド構築物を産生するためのプロセスであって、本発明の構築物の発現を可能にする条件下において、本発明の宿主細胞を培養することと、産生された構築物を培養物から回収することとを含むプロセスを提供する。
本明細書で使用する場合、「培養すること」という用語は、培地中の適切な条件下での細胞のインビトロでの維持、分化、成長、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）及び／又は増殖（ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ）を指す。細胞は、細胞成長培地中で、適切な温度及び混合気体にて成長し、維持される。培養条件は、各細胞型について幅広く異なる。典型的な成長条件は、約３７℃の温度、約５％のＣＯ２濃度及び約９５％の湿度である。成長培地のためのレシピは、例えば、ｐＨ、炭素源（例えばグルコース）の濃度、成長因子の性質及び濃度並びに他の栄養素（例えば、アミノ酸又はビタミン）の存在が異なり得る。補足培地に使用される成長因子は、多くの場合、動物血液の血清（例えば、胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）、仔ウシ血清（ＦＣＳ）、ウマ血清及びブタ血清）に由来する。細胞は、懸濁培養中で又は接着培養物としてのいずれかで成長させることができる。懸濁培養下で生存可能であるように修飾されているため、付着条件よりも高い密度に成長し得る細胞株も存在する。
「発現」という用語は、転写、転写後修飾、翻訳、折り畳み、翻訳後修飾、特定の細胞内又は細胞外位置へのターゲティング及び分泌を含むが、これらに限定されない本発明の構築物の製造に関与するいずれかの工程を含む。「回収する」という用語は、細胞培養物から構築物を単離することを意図した一連のプロセスを指す。「回収」又は「精製」のプロセスは、細胞培養物のタンパク質部分と非タンパク質部分とを分離し、最終的に所望の構築物を他のすべてのポリペプチド及びタンパク質から分離することができる。分離工程は、通常、タンパク質サイズ、物理化学的特性、結合親和性及び生物学的活性の違いを利用する。分取精製は、その後の使用のために比較的大量の精製タンパク質を生成することを目的とするが、分析精製は、様々な研究又は分析目的のために比較的少量のタンパク質を生成する。
組換え技術を使用する場合、構築物は、細胞膜周辺腔において細胞内で産生され得るか、又は培地中に直接分泌され得る。構築物が細胞内で産生される場合、第１の段階として、例えば遠心分離又は限外濾過により、宿主細胞又は溶解した断片の粒子状の細片を除去する。本発明の構築物は、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）等の細菌内で産生され得る。発現後、構築物を細菌細胞ペーストから可溶性画分で単離し、例えばアフィニティークロマトグラフィー及び／又はサイズ排除を介して精製することができる。最終的な精製は、哺乳動物細胞内で発現して培地中へと分泌された構築物を精製するためのプロセスと同じように実行することができる。Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）１９９２ Ｆｅｂ；１０（２）：１６３－７）は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の細胞周辺腔に分泌される抗体を単離する手順を説明する。
抗体が培地に分泌される場合、そのような発現系からの上清は、一般的に、市販のタンパク質濃縮フィルタ、例えば限外濾過ユニットを使用して最初に濃縮される。
宿主細胞から調製された本発明の構築物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析及びアフィニティークロマトグラフィーを使用して回収又は精製することができる。イオン交換カラムでの分画、混合モードイオン交換、ＨＩＣ、エタノール沈殿、サイズ排除クロマトグラフィー、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンセファロースでのクロマトグラフィー、アニオン又はカチオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラム等）でのクロマトグラフィー、免疫親和性（プロテインＡ／Ｇ／Ｌ等）クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、超遠心分離及び硫酸アンモニウム沈殿等のタンパク質精製のための他の技術も、回収される構築物に応じて利用可能である。
上述の工程のいずれでも、タンパク質分解を阻害するためにプロテアーゼ阻害薬が含まれ得、汚染物質の成長を防止するために抗生物質が含まれ得る。
その上、本発明は、本発明のポリペプチド若しくはポリペプチド構築物又は本発明のプロセスによって産生されたポリペプチド若しくはポリペプチド構築物を含む医薬組成物又は製剤を提供する。
本明細書で使用する場合、「医薬組成物」という用語は、患者、好ましくはヒト患者への投与に適切である組成物に関する。本発明の特に好ましい医薬組成物は、１つ以上の本発明の構築物を好ましくは治療有効量で含む。好ましくは、医薬組成物は、１つ以上の（医薬として有効な）担体、安定剤、賦形剤、希釈剤、可溶化剤、界面活性剤、乳化剤、保存剤及び／又はアジュバントの好適な製剤をさらに含む。組成物の許容可能な成分は、好ましくは、使用される投与量及び濃度でレシピエントに対して非毒性である。本発明の医薬組成物には、液体、凍結及び凍結乾燥組成物が含まれるが、これらに限定されない。
組成物は、医薬として許容可能な担体を含み得る。一般的に、本明細書で使用する場合、「医薬として許容され得る担体」は、医薬の投与、特に非経口投与に適合するすべての水性及び非水性溶液、滅菌溶液、溶媒、緩衝液、例えばリン酸緩衝塩類溶液（ＰＢＳ）液剤、水、懸濁剤、油／水エマルションなどのエマルション、様々な種類の湿潤剤、リポソーム、分散媒体及びコーティングを意味する。医薬組成物におけるそのような媒体及び作用因子の使用は、当技術分野で周知であり、そのような担体を含む組成物は、周知の従来法によって製剤化することができる。
特定の実施形態は、本発明の構築物及びさらに１つ以上の賦形剤、例えば本節及び本明細書の他の箇所に例示的に説明されているものを含む医薬組成物を提供する。本発明では、賦形剤を多様な目的（例えば、製剤の物理的特性、化学的特性若しくは生物学的特性の調整（例えば、粘度の調整））のために使用し得、且つ／又は有効性を改善し、及び／若しくは例えば製造、出荷、貯蔵、使用前調製、投与及びその後に生じるストレスに起因する分解及び変質に対してそのような製剤及びプロセスを安定化させるために本発明のプロセスで使用し得る。賦形剤は、一般的に、最も低い有効濃度で使用されるものとする。
特定の実施形態では、医薬組成物は、ｐＨ、モル浸透圧濃度、粘度、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解速度又は放出速度、吸着又は浸透（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８”Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙを参照されたい）等の組成物の特定の特性を改変、維持又は保存するための製剤材料を含有し得る。このような実施形態では、好適な製剤材料は、以下を含み得るが、これらに限定されない：
・アミノ酸
・抗菌薬及び抗真菌薬等の抗微生物薬
・酸化防止剤
・組成物を生理的ｐＨ又はそれよりわずかに低いｐＨで維持し、典型的には約５～約８又は９のｐＨ範囲内に維持するために使用される緩衝液、緩衝液系及び緩衝剤
・非水性溶媒、植物油及び注射用有機エステル
・水等の水性担体、アルコール性／水性溶液、エマルション又は懸濁液、例えば生理塩類溶液及び緩衝媒体
・ポリエステル等の生分解性ポリマー
・増量剤
・キレート剤
・等張剤及び吸収遅延剤
・錯化剤
・充填剤
・炭水化物
・好ましくは、ヒト起源の（低分子量）タンパク質、ポリペプチド又はタンパク質性担体
・着色料及び着香料
・含硫還元剤
・希釈剤
・乳化剤
・親水性ポリマー
・塩形成対イオン
・保存剤
・金属錯体
・溶媒及び共溶媒
・糖及び糖アルコール
・懸濁剤
・界面活性剤又は湿潤剤
・安定促進剤
・等張増強剤
・非経口送達媒体
・静脈内送達媒体。
医薬組成物の種々の構成成分が異なる効果を有し得ることは常識であり、例えば、アミノ酸は、緩衝液、安定剤及び／又は抗酸化剤としての役割を果たし得；マンニトールは、増量剤及び／又は等張化促進剤としての役割を果たし得；塩化ナトリウムは、送達媒体及び／又は等張化促進剤としての役割を果たし得る等である。
本発明に関連して、医薬組成物は、
（ａ）本明細書に説明のポリペプチド又はポリペプチド構築物、
（ｂ）少なくとも１つの緩衝剤、
（ｃ）少なくとも１つの糖、及び
（ｄ）少なくとも１つの界面活性剤
を含み得、医薬組成物のｐＨは、３．５～６の範囲である。
上述の組成物において、第１のドメインは、好ましくは、４～９．５の範囲の等電点（ｐＩ）を有し、第２のドメインは、８～１０、好ましくは８．５～９．０の範囲のｐＩを有し、構築物は、それぞれがヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む２個のポリペプチドモノマーを含む第３のドメインを場合により含み、前記２個のポリペプチドモノマーは、ペプチドリンカーを介して互いに融合されている。
上述の組成物において、少なくとも１つの緩衝剤は、５～２００ｍＭの濃度範囲、より好ましくは１０～５０ｍＭの濃度範囲で存在することがさらに想定される。少なくとも１つの糖が、単糖類、二糖類、環状多糖類、糖アルコール、直鎖分岐デキストラン又は直鎖非分岐デキストランからなる群から選択されることも想定される。二糖は、スクロース、トレハロース及びマンニトール、ソルビトール並びにそれらの組合せからなる群から選択されることも想定される。糖アルコールがソルビトールであることがさらに想定される。少なくとも１つの糖は、１～１５％（ｍ／Ｖ）の範囲の濃度、好ましくは９～１２％（ｍ／Ｖ）の濃度範囲で存在することも想定される。構築物は、０．１～８ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．２～２．５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは０．２５～１．０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で存在することがさらに想定される。
上述の組成物の一実施形態によれば、少なくとも１つの界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、プルロニックＦ６８、トリトンＸ－１００、ポリオキシエチレン、ＰＥＧ ３３５０、ＰＥＧ ４０００及びそれらの組合せからなる群から選択される。さらに、少なくとも１つの界面活性剤は、０．００４～０．５％（ｍ／Ｖ）の範囲、好ましくは０．００１～０．０１％（ｍ／Ｖ）の範囲の濃度で存在することが想定される。組成物のｐＨは、４．０～５．０の範囲、好ましくは４．２であることが想定される。医薬組成物は、１５０～５００ｍＯｓｍの範囲のオスモル濃度を有することも想定される。さらに、医薬組成物は、１つ以上のポリオール及び１つ以上のアミノ酸からなる群から選択される賦形剤をさらに含むことが想定される。本発明に関連して、前記１つ以上の賦形剤は、０．１～１５％（ｗ／Ｖ）の濃度範囲で存在することが想定される。
本発明は、（ａ）好ましくは０．１～８ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．２～２．５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは０．２５～１．０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲の本明細書に説明する構築物、（ｂ）１０ｍＭグルタマート又はアセタート、（ｃ）９％（ｍ／Ｖ）スクロース又は６％（ｍ／Ｖ）スクロース及び６％（ｍ／Ｖ）ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、（ｄ）０．０１％（ｍ／Ｖ）ポリソルベート８０、を含む医薬組成物であって、液体医薬組成物のｐＨが４．２である、医薬組成物も提供する。
本発明の組成物は、本明細書で定義される本発明の構築物に加えて、組成物の使用目的に応じてさらなる生物学的に活性のある作用因子を含む場合があることが想定される。かかる薬剤は、胃腸系に作用する薬物、細胞増殖抑制剤として作用する薬物、高尿酸血症を予防する薬物、免疫応答を抑制する薬物、炎症反応を調節する薬物、循環系に作用する薬物及び／又は当技術分野で公知のサイトカインなどの薬剤である可能性がある。本発明のポリペプチド構築物は、併用療法において、すなわち別の抗癌薬と併用して適用されることも想定される。
これに関連して、本発明の医薬組成物（本明細書で上述により詳細に説明されるように、ＣＤ３結合ドメインと、細胞表面標的抗原、好ましくは標的細胞の表面上の腫瘍抗原に結合する少なくとも１つのさらなる結合ドメインとを含む構築物を含む）は、免疫チェックポイント経路のタンパク質（ＰＤ－１又はＣＴＬＡ－４など）又は共刺激免疫チェックポイント受容体（４－１ＢＢなど）に結合する作用因子、好ましくは抗体又は構築物をさらに含むことが想定される。本発明は、本発明によるポリペプチド構築物（本明細書で上述により詳細に説明されるように、ＣＤ３結合ドメインと、細胞表面標的抗原、好ましくは標的細胞の表面上の腫瘍抗原に結合する少なくとも１つのさらなる結合ドメインとを含む構築物を含む）と、免疫チェックポイント経路のタンパク質（ＰＤ－１又はＣＴＬＡ－４など）又は共刺激免疫チェックポイント受容体（４－１ＢＢなど）に結合する作用因子、好ましくは抗体又はポリペプチド構築物との組合せも指す。組合せの少なくとも２つの成分の性質、すなわちそれらの医薬活性のために、その組合せは、治療上の組合せとも称され得る。いくつかの実施形態では、組合せは、医薬組成物又はキットの形態であり得る。一実施形態によれば、医薬組成物又は組合せは、本発明の構築物及びＰＤ－１に結合する抗体又は構築物を含む。この目的に有用な抗ＰＤ－１結合タンパク質は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１９／０１３２０５号明細書に詳細に説明されている。
特定の実施形態において、最適な医薬組成物は、例えば、意図される投与経路、送達形式及び所望の投薬量に応じて決まる。例えば、前掲のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓを参照されたい。特定の実施形態において、かかる組成物は、本発明の構築物の物理的状態、安定性、インビボ放出速度及びインビボクリアランス速度に影響し得る。特定の実施形態では、医薬組成物中の主なビヒクル又は担体は、実際は、水性又は非水性のいずれかであり得る。例えば、好適なビヒクル又は担体は、場合により非経口投与用組成物によく見られる他の材料が補充された注射用水又は生理塩類溶液であり得る。特定の実施形態において、本発明の構築物を含む組成物は、所望の程度の純度を有する選択された成物を、任意選択の製剤化作用因子（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前掲）と混合することにより、凍結乾燥ケーク又は水溶液の形態で貯蔵のために調製され得る。さらに、特定の実施形態において、本発明の構築物は、適切な賦形剤を使用して凍結乾燥物として製剤化され得る。
非経口投与が企図される場合、本発明における使用のための治療用組成物は、医薬として許容され得るビヒクル中に本発明の所望の構築物を含む、発熱物質非含有の非経口的に許容され得る水溶液の形態で提供され得る。非経口注射に特に好適なビヒクルは、滅菌蒸留水であり、この滅菌蒸留水中で、本発明の構築物は、適切に保存された滅菌等張溶液として製剤化される。特定の実施形態において、この調製には、デポー注射によって送達することのできる製剤の制御放出又は持続放出をもたらし得る薬剤又は循環中における有効時間の持続を促進し得る作用因子と共に所望の分子を製剤化することが関わり得る。特定の実施形態では、移植可能な薬物送達デバイスを使用して、所望の構築物を導入し得る。
さらなる医薬組成物は、本発明の構築物を持続送達製剤又は制御送達製剤に含む製剤を含めて、当業者には明らかであろう。種々の持続送達手段又は制御送達手段を製剤化するための技法は、当業者に公知である。構築物は、例えば、コアセルベート技術又は界面重合により、コロイド薬物送達系において又はマクロエマルションにおいて調製されたマイクロカプセルにも封入され得る。そのような技術は、前掲のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに開示されている。
インビボ投与に用いられる医薬組成物は、通常、滅菌製剤として提供される。滅菌は、滅菌濾過膜による濾過によって達成することができる。組成物を凍結乾燥させる場合、本方法を使用する滅菌は、凍結乾燥及び再構成の前又は後に行われ得る。非経口投与用組成物は、凍結乾燥形態で又は溶液中で保存することができる。非経口組成物は、概して、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば皮下注射針で穿刺可能な栓を有する静脈内注射用溶液バッグ又はバイアルに入れられる。
本発明の別の態様は、本発明の構築物を含む自己緩衝製剤を含み、国際公開第２００６／１３８１８１号パンフレットに説明される通り、これは、医薬組成物として使用することができるものである。タンパク質の安定化並びにこれに関して有用な製剤材料及び方法について、Ａｒａｗａｋａ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．１９９１ Ｍａｒ；８（３）：２８５－９１、Ｋｅｎｄｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ．“Ｐｈｙｓｉｃａｌ ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ”ｉｎ：Ｒａｔｉｏｎａｌ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｓｔａｂｌｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ：Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ａｎｄ Ｍａｎｎｉｎｇ，ｅｄｓ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１３：６１－８４（２００２）及びＲａｎｄｏｌｐｈ ａｎｄ Ｊｏｎｅｓ，Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００２；１３：１５９－７５等、様々な刊行物が利用可能であり、特に、賦形剤及び自己緩衝タンパク質製剤のためのプロセス、特に獣医学及び／又はヒト医学での使用のためのタンパク質医薬品並びにプロセスに関する部分を参照されたい。
塩は、本発明の特定の実施形態に従い、例えば組成物若しくは製剤のイオン強度及び／若しくは等張性を調整し、且つ／又は本発明に従った組成物の構築物若しくは他の成分の溶解度及び／若しくは物理的安定性を改善するために使用され得る。イオンは、タンパク質の表面上の帯電した残基へ結合することにより、且つタンパク質の帯電した基及び極性基を遮蔽し、その静電相互作用、引力及び斥力相互作用の強度を低減させることにより、天然状態のタンパク質を安定化させることができる。イオンは、特にタンパク質の変性ペプチド結合（－－ＣＯＮＨ）に結合することによって変性状態のタンパク質を安定化することもできる。さらに、タンパク質中の帯電した基及び極性基とのイオン相互作用は、分子間静電相互作用を低減させることもでき、それによりタンパク質の凝集及び不溶化を防止又は低減することもできる。
イオン種は、タンパク質に対するその効果が著しく異なる。本発明に従って医薬組成物を製剤化する際に使用することができるイオンのいくつかのカテゴリー順位及びタンパク質に対するそれらの効果が開発されている。一例は、イオン性溶質及び極性非イオン性溶質を溶液中のタンパク質の立体配座安定性に対する効果によって順位付けするホーフマイスターの系列である。安定化する溶質は、「コスモトロピック」と称される。不安定化する溶質は、「カオトロピック」と称される。コスモトロープは、一般に、溶液からタンパク質を沈殿させるため高濃度で使用される（「塩析」）。カオトロープは、一般に、タンパク質を変性させ及び／又は可溶化するために使用される（「塩溶」）。「塩溶」及び「塩析」に対するイオンの相対的な有効性により、ホーフマイスターの系列でのイオンの位置が定義される。
遊離アミノ酸は、増量剤、安定剤及び酸化防止剤として且つ他の標準的な使用のために、本発明の様々な実施形態による本発明の構築物を含む製剤又は組成物において使用することができる。特定のアミノ酸は、製剤中のタンパク質を安定化するために使用することができ、他のアミノ酸は、有効成分の正しいケーク構造及び特性を確実にするために凍結乾燥中に有用である。いくつかのアミノ酸は、液体製剤及び凍結乾燥製剤の両方でタンパク質凝集を阻害するのに有用であり得、他のアミノ酸は酸化防止剤として有用である。
ポリオールは、コスモトロピックであり、液体製剤及び凍結乾燥製剤の両方で安定剤としてタンパク質を物理的及び化学的な分解過程から保護するのに有用である。ポリオールは、製剤の張性を調整し、且つ輸送中の凍結融解ストレスから保護するか、又は製造過程中のバルク調製のためにも有用である。ポリオールは、本発明に関連して凍結保護物質としても機能することができる。
本発明の構築物を含む製剤又は組成物の特定の実施形態は、界面活性剤を含むことができる。タンパク質は、表面に吸着しやすく、変性しやすく、結果的に、気－液界面、固－液界面及び液－液界面で凝集しやすい。これらの有害相互作用は、概してタンパク質濃度と逆比例して規模が増減し、典型的には、製品の配送及び取り扱い中に生じるものなど、物理的動揺によって悪化する。界面活性剤は、表面吸着を防止するか、最小限にするか又は低減するために日常的に使用されている。界面活性剤は、タンパク質の立体配座の安定性を制御するためにも通常使用される。これに関して、１つの特定の界面活性剤が典型的には一部のタンパク質を安定させ、他のタンパク質を不安定にするであろうことから、界面活性剤の使用は、タンパク質特異的である。
本発明の構築物を含む製剤又は組成物の特定の実施形態は、１つ以上の酸化防止剤を含むことができる。医薬製剤中のタンパク質の有害な酸化は、適切なレベルの周囲酸素及び周囲温度を維持し、且つ光への曝露を回避することにより、ある程度まで防止することができる。酸化防止賦形剤は、タンパク質の酸化分解を防止するために使用することもできる。本発明による治療用タンパク質製剤に使用するための酸化防止剤は水溶性であり、製品（構築物を含む組成物）の貯蔵寿命を通してそれらの活性を維持することができることが想定される。酸化防止剤は、タンパク質を損傷する可能性があり、このため、とりわけ酸化防止剤が製剤中の構築物又は他のタンパク質を損傷する可能性を排除する又は十分に低減する方法で選択されるべきでもある。
本発明の構築物を含む製剤又は組成物の特定の実施形態は、１つ以上の保存剤を含むことができる。保存剤は、例えば、同じ容器から２回以上取り出すことが関わる複数回用量非経口製剤を展開する場合に必要である。その主な機能は、製剤の貯蔵寿命又は使用期間に渡って微生物の成長を阻害し、製品の無菌性を確保することである。保存剤には、小分子非経口物質と共に使用されてきた長い歴史があるが、保存剤を含むタンパク質製剤の開発は難題であり得る。保存剤は、タンパク質に不安定効果（凝集）を及ぼすことが極めて多く、これは、複数回用量タンパク質製剤におけるその使用が制限される主因になっている。現在に至るまで、ほとんどのタンパク質薬は、単回使用向けとしてのみ製剤化されている。しかしながら、複数回用量製剤が可能である場合、患者の利便性及び高い市場性を実現するという利点が加わる。保存処理された製剤の開発により、より便利な複数回使用の注射ペンの提案が製品化につながったヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は、その好例である。保存処理された剤形の製剤化及び開発中、いくつかの態様を考慮する必要がある。薬物製品中における有効保存剤濃度が最適化されていなければならない。これには、タンパク質安定性を損なうことなく抗微生物有効性を付与する濃度範囲に関して剤形における所与の保存剤を試験する必要がある。
予想される通り、保存剤を含有する液体製剤の開発は、凍結乾燥製剤よりも困難である。凍結乾燥製品は、保存剤なしに凍結乾燥させ、使用時に保存剤を含有する希釈剤で再構成することができる。これにより、保存剤が構築物と接触している時間が短縮され、付随する安定性リスクが大幅に小さく抑えられる。液体製剤では、製品の全有効期間に渡って保存剤の有効性及び安定性が維持されるべきである。注意すべき重要な点として、保存剤の有効性は、活性薬物及びすべての賦形剤成分を含有する最終製剤において実証される必要がある。医薬組成物を製剤化した後、それを液剤、懸濁剤、ゲル剤、エマルション剤、固形剤、結晶剤として又は脱水散剤若しくは凍結乾燥散剤として無菌バイアル内に保存し得る。このような製剤は、使用準備済の形態又は投与前に再構成される（例えば、凍結乾燥）形態のいずれかで保存され得る。
本明細書で定義される医薬組成物の生物活性は、例えば、以下の実施例において、国際公開第９９／５４４４０号パンフレットにおいて又はＳｃｈｌｅｒｅｔｈ ｅｔ ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０（２００５），１－１２）によって説明されるように、インビトロ細胞毒性アッセイによって決定することができる。本明細書で使用される「有効性」又は「インビボ有効性」は、例えば、標準化されたＮＣＩ応答基準を使用した、本発明の製剤の医薬組成物による療法に対する応答を指す。本発明の医薬組成物を用いる療法の成功又はインビボ有効性は、その意図された目的、すなわち組成物がその所望の効果、すなわち病的細胞、例えば腫瘍細胞の激減を引き起こす能力に関する組成物の有効性を指す。インビボ有効性は、白血球数、分化、蛍光細胞分析分離、骨髄吸引を含むが、これらに限定されない、それぞれの疾患実体について確立された標準的な方法によって監視され得る。さらに、様々な疾患特異的臨床化学パラメータ及び他の確立された標準的な方法を使用することができる。さらに、コンピュータ支援断層撮影、Ｘ線、核磁気共鳴断層撮影、陽電子放射断層撮影走査、リンパ節生検／組織学的方法及び他の確立された標準的な方法を使用することができる。
本発明の医薬組成物等の薬物の開発における別の主要な課題は、薬物動態特性の予測可能な調節である。この目的のために、薬物候補の薬物動態プロファイル、すなわち所与の状態を治療する具体的な薬物の能力に影響を及ぼす薬物動態パラメータのプロファイルを確立することができる。特定の疾患を処置するための薬物の能力に影響する薬物の薬物動態パラメータは、半減期、分布容積量、肝臓の初回通過代謝及び血清結合の程度が挙げられるが、これらに限定されない。所与の薬物の有効性は、上述のパラメータの各々によって影響を受ける可能性がある。
「半減期」は、量がその初期値の半分まで低下するのに必要な時間である。医科学では、人体における物質又は薬物の半減期を指す。医学的に関連して、半減期とは、物質／薬物がその活性、例えば薬理学的、生理学的又は放射線学的活性の２分の１を失うまでにかかる時間を指し得る。半減期は、血漿／血清中の薬物又は物質（例えば、本発明の構築物）の濃度がその定常状態値の半分に達するのにかかる時間（「血清半減期」）も表し得る。典型的には、投与された物質／薬物の排除又は除去は、腎臓及び肝臓の機能も含む代謝、排泄等の生物学的プロセスを介した身体の洗浄を指す。「初回通過代謝」は、薬物が循環に到達する前にその濃度が低減する薬物代謝現象である。これは、吸収過程で失われた薬物の割合である。したがって、「肝臓初回通過代謝」とは、肝臓と最初に接触したとき、すなわち肝臓を最初に通過する間に薬物が代謝される傾向を意味する。「分布容積量」（ＶＤ）は、血漿よりもむしろ薬物が体組織に分布する程度を意味し、ＶＤが高いほど組織分布の量が多いことを示す。薬物の滞留は、細胞内及び細胞外間隙、組織及び器官等、体の様々なコンパートメントに渡って起こり得る。「血清結合程度」は、薬物がアルブミンなどの血清タンパク質と相互作用してそれに結合することにより薬物の生物学的活性の低下又は消失につながる傾向を意味する。
薬物動態パラメータには、投与された所与の量の薬物のバイオアベイラビリティ、遅延時間（Ｔ ｌａｇ）、Ｔｍａｘ、吸収速度及び／又はＣｍａｘも含まれる。「バイオアベイラビリティ」は、全身循環（血液区画）に到達する薬物／物質の投与用量の割合を指す。医薬品が静脈内投与される場合、そのバイオアベイラビリティは、１００％であると考えられる。しかしながら、医薬品が他の経路（経口等）を介して投与される場合、そのバイオアベイラビリティは、一般的に低下する。「遅延時間」は、薬物の投与と、血液又は血漿中でのその検出及び測定可能性との間の時間遅延を意味する。Ｃｍａｘは、薬物がその投与後（及び第２の用量の投与前）に達成する最大血漿濃度である。Ｔｍａｘは、Ｃｍａｘに達する時間である。薬物の生物学的効果に必要な薬物の血液濃度又は組織濃度に達するまでの時間は、すべてのパラメータによって影響される。上述に概説したチンパンジー以外の霊長類における前臨床動物試験において決定され得る種間特異性を呈する構築物の薬物動態パラメータは、例えば、Ｓｃｈｌｅｒｅｔｈ ｅｔ ａｌ．（前掲）を参照されたい。
一実施形態は、医薬として使用するための、特に疾患、好ましくは腫瘍性疾患、より好ましくは新生物、癌又は腫瘍の予防、処置又は改善（好ましくは処置）に使用するための、本発明の構築物（又は本発明のプロセスによって産生された構築物）を提供する。別の実施形態は、疾患、好ましくは腫瘍性疾患、より好ましくは新生物、癌又は腫瘍の予防、処置又は改善のための医薬品の製造における本発明の構築物の（又は本発明のプロセスによって産生された構築物の）使用を提供する。疾患、好ましくは腫瘍性疾患、より好ましくは新生物、癌又は腫瘍の予防、処置又は改善のための方法であって、それを必要とする対象に本発明の構築物（又は本発明のプロセスに従って産生された構築物）を投与する工程を含む方法を提供することも想定される。「必要とする対象」、「患者」又は「処置を必要とする」ものという用語は、既に罹患している者及び疾患が予防されるべき者を含む。この用語は、予防的処置又は治療的処置のいずれかを受けるヒト対象及び他の哺乳動物対象も含む。
本発明のポリペプチド／ポリペプチド構築物及び本明細書に説明する製剤／医薬組成物は、それを必要とする患者において本明細書に説明する医学的容態の処置、改善及び／又は予防において有用である。「処置」という用語は、治療的処置及び予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）又は予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方を指す。処置は、疾患、疾患の症状又は疾患に対する素因を治癒するか、癒すか、緩和するか、軽減するか、変化させるか、矯正するか、和らげるか、改善するか又は影響を及ぼす目的で、本明細書に記載の疾患／障害、そのような疾患／障害の症状又はそのような疾患／障害に対する素因を有する患者又は必要とする対象からの身体、単離された組織又は細胞へのポリペプチド／ポリペプチド構築物／医薬組成物の適用又は投与を含む。本明細書で使用される「改善」という用語は、本発明によるポリペプチド構築物をそのような患者又はそれを必要とする対象に投与することによる、患者の病状のあらゆる改善を指す。そのような改善は、患者の疾患の進行の遅延若しくは停止及び／又は疾患症状の重症度の低下、疾患症状のない期間の頻度若しくは持続時間の拡大又は疾患による機能障害若しくは障害の予防であり得る。本明細書で使用される「予防」という用語は、それを必要とする対象への本発明による構築物の投与による、本明細書で特定される疾患の発生又は再発の回避を意味する。
「疾患」という用語は、本明細書に説明する構築物又は医薬組成物による治療から利益を得るいずれかの容態を指す。これには、哺乳動物を問題の疾患に罹りやすくする病理学的容態を含む慢性及び急性の障害又は疾患が含まれる。疾患は、好ましくは腫瘍性疾患、より好ましくは新生物、癌又は腫瘍である。疾患、新生物、癌又は腫瘍は、好ましくは、腫瘍抗原、好ましくは本明細書で上述に定義されるものなどに対して陽性であり、すなわち腫瘍抗原、好ましくは本明細書で上述に定義されるものなどの発現又は過剰発現を特徴とする。腫瘍抗原の過剰発現は、少なくとも１０％、特に少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２５０％、少なくとも５００％、少なくとも７５０％、少なくとも１０００％又はそれを超える上昇があることを意味する。発現は、好ましくは、疾患組織でのみ見られるが、対応する健常な組織での発現は検出できないか、又は有意に検出できない。本発明によれば、腫瘍抗原を発現する細胞と関係する疾患、好ましくは本明細書で上述に定義されるものなどには、癌疾患が含まれる。さらに、本発明によれば、癌疾患は、好ましくは、癌細胞が腫瘍抗原を発現するものである。本発明に従い、疾患、好ましくは腫瘍性疾患、より好ましくは新生物、腫瘍又は癌は、好ましくはＢＣＭＡ陽性、ＣＤ１２３陽性、ＣＤ１９陽性、ＣＤ２０陽性、ＣＤ２２陽性、ＣＤ３３陽性、ＣＤ７０陽性、ＣＤＨ１９陽性、ＣＤＨ３陽性、ＣＬＬ１陽性、ＣＳ１陽性、ＣＬＤＮ６陽性、ＣＬＤＮ１８．２陽性、ＤＬＬ３陽性、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性、ＦＬＴ３陽性、ＭＡＧＥＢ２陽性、ＭＡＲＴ１陽性、ＭＳＬＮ陽性、ＭＵＣ１７陽性、ＰＳＭＡ陽性又はＳＴＥＡＰ１陽性細胞の存在を特徴とする。換言すれば、腫瘍性疾患、より好ましい新生物、腫瘍又は癌は、好ましくは、ＢＣＭＡ陽性、ＣＤ１２３陽性、ＣＤ１９陽性、ＣＤ２０陽性、ＣＤ２２陽性、ＣＤ３３陽性、ＣＤ７０陽性、ＣＤＨ１９陽性、ＣＤＨ３陽性、ＣＬＬ１陽性、ＣＳ１陽性、ＣＬＤＮ６陽性、ＣＬＤＮ１８．２陽性、ＤＬＬ３陽性、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性、ＦＬＴ３陽性、ＭＡＧＥＢ２陽性、ＭＡＲＴ１陽性、ＭＳＬＮ陽性、ＭＵＣ１７陽性、ＰＳＭＡ陽性又はＳＴＥＡＰ１陽性細胞の存在に関係しており、そのため、腫瘍性疾患、より好ましい新生物、腫瘍又は癌は、ＢＣＭＡ陽性、ＣＤ１２３陽性、ＣＤ１９陽性、ＣＤ２０陽性、ＣＤ２２陽性、ＣＤ３３陽性、ＣＤ７０陽性、ＣＤＨ１９陽性、ＣＤＨ３陽性、ＣＬＬ１陽性、ＣＳ１陽性、ＣＬＤＮ６陽性、ＣＬＤＮ１８．２陽性、ＤＬＬ３陽性、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性、ＦＬＴ３陽性、ＭＡＧＥＢ２陽性、ＭＡＲＴ１陽性、ＭＳＬＮ陽性、ＭＵＣ１７陽性、ＰＳＭＡ陽性又はＳＴＥＡＰ１陽性の新生物、腫瘍又は癌と呼ぶことができる。本明細書では、前記腫瘍抗原陽性新生物、腫瘍又は癌の各々は、前記新生物、腫瘍又は癌が関係している細胞によって発現する腫瘍抗原に対する結合ドメインを含む本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物を使用して予防、処置又は改善することができることが理解される。ＢＣＭＡ陽性、ＣＤ１２３陽性、ＣＤ１９陽性、ＣＤ２０陽性、ＣＤ２２陽性、ＣＤ３３陽性、ＣＤ７０陽性、ＣＤＨ１９陽性、ＣＤＨ３陽性、ＣＬＬ１陽性、ＣＳ１陽性、ＣＬＤＮ６陽性、ＣＬＤＮ１８．２陽性、ＤＬＬ３陽性、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性、ＦＬＴ３陽性、ＭＡＧＥＢ２陽性、ＭＡＲＴ１陽性、ＭＳＬＮ陽性、ＭＵＣ１７陽性、ＰＳＭＡ陽性又はＳＴＥＡＰ１陽性の新生物、腫瘍又は癌は、ＢＣＭＡ（ＢＣＭＡ陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＤ１２３（ＣＤ１２３陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＤ１９（ＣＤ１９陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＤ２０（ＣＤ２０陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＤ２２（ＣＤ２２陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＤ３３（ＣＤ３３陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＤ７０（ＣＤ７０陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＤＨ１９（ＣＤＨ１９陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＤＨ３（ＣＤＨ３陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＬＬ１（ＣＬＬ１陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＳ１（ＣＳ１陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＬＤＮ６（ＣＬＤＮ６陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＣＬＤＮ１８．２（ＣＬＤＮ１８．２陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＤＬＬ３（ＤＬＬ３陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＦＬＴ３（ＦＬＴ３陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＭＡＧＥＢ２（ＭＡＧＥＢ２陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＭＡＲＴ１（ＭＡＲＴ１陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＭＳＬＮ（ＭＳＬＮ陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＭＵＣ１７（ＭＵＣ１７陽性新生物、腫瘍又は癌について）、ＰＳＭＡ（ＰＳＭＡ陽性新生物、腫瘍又は癌について）及びＳＴＥＡＰ１（ＳＴＥＡＰ１陽性新生物、腫瘍又は癌について）それぞれに対する結合ドメインを含む、本発明によるポリペプチド又はポリペプチド構築物を用いて、予防、処置又は改善することができる。
「新生物」は、常にではないが、通常、塊を形成する組織の異常な成長である。塊を形成する場合、それは、通常、「腫瘍」とも呼ばれる。新生物又は腫瘍は、良性、潜在的に悪性（前癌性）又は悪性（癌性）であり得る。悪性新生物／腫瘍は、一般的に、癌と呼ばれる。それらは、通常、周囲の組織に浸潤し、破壊し、転移を形成することがあり、すなわち、それらは、身体の他の部分、組織又は器官に広がる。「原発性腫瘍」は、腫瘍の進行が始まり、進行して癌性の塊を生じた解剖学的部位で成長する腫瘍である。ほとんどの癌は、それらの原発性部位で発症するが、その後、進んで、身体の他の部分（例えば、組織及び器官）に転移し又は拡がる。これらのさらなる腫瘍は「続発性腫瘍」である。ほとんどの癌は、身体の他の部分に拡がった後でもその原発部位にちなんで呼ばれ続ける。
リンパ腫及び白血病はリンパ系新生物である。本発明の目的のために、それらは「腫瘍」及び「癌」という用語にも包含される。本発明の目的のために、「新生物」、「腫瘍」及び「癌」という用語は互換的に使用され得、それらは、原発性腫瘍／癌及び続発性腫瘍／癌（又は「転移」）の両方、並びに塊形成性新生物（腫瘍）及びリンパ性新生物（リンパ腫及び白血病等）、並びに最少残存病変（ＭＲＤ）も含む。
「最小残存病変」（ＭＲＤ）という用語は、癌処置後、例えば患者が寛解している（疾患の症状又は徴候がない）ときに、患者に残存する少数の残存癌細胞の存在についての証拠を指す。癌を評価又は検出するために使用される標準的な試験は、ＭＲＤを検出するのに十分な感度を有していないため、通常、ごく少数の残存癌細胞は、日常的な手段によって検出することができない。最近では、フローサイトメトリー、ＰＣＲ及び次世代シークエンシング等のＭＲＤ向けの極めて高感度の分子生物学的試験が利用可能である。これらの試験は、組織試料中の最小限のレベルの癌細胞、時には１００万個の正常細胞中の１個の癌細胞ほどの低さを測定することができる。本発明に関連して、癌の「予防」、「処置」又は「改善」という用語は、ＭＲＤが検出されたか否かにかかわらず、「ＭＲＤの予防、処置又は改善」も包含することが想定される。
本発明の構築物は、一般に、とりわけバイオアベイラビリティ及び持続性の範囲において、特定の投与経路及び投与方法、特定の薬用量及び投与頻度、特定の疾患の特定の処置に合わせて設計されることとなる。組成物の材料は、好ましくは、投与部位に許容され得る濃度で製剤化される。したがって、製剤及び組成物は、本発明に従い、適切なあらゆる投与経路による送達に合わせて設計され得る。本発明に関連して、投与経路には、局所経路、経腸経路及び非経口経路が含まれるが、これらに限定されない。
医薬組成物が凍結乾燥されている場合、まず投与前に凍結乾燥材料を適切な液体で再構成する。凍結乾燥材料は、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又は凍結乾燥前にタンパク質が存在した同じ製剤中で再構成され得る。本発明の医薬組成物及び構築物は、非経口投与、例えば静脈内送達、例えば注射又は注入に特に有用である。医薬組成物は、医療機器を使用して投与され得る。医薬組成物を投与するための医療機器の例は、米国特許第４，４７５，１９６号明細書；同第４，４３９，１９６号明細書；同第４，４４７，２２４号明細書；同第４，４４７，２３３号明細書；同第４，４８６，１９４号明細書；同第４，４８７，６０３号明細書；同第４，５９６，５５６号明細書；同第４，７９０，８２４号明細書；同第４，９４１，８８０号明細書；同第５，０６４，４１３号明細書；同第５，３１２，３３５号明細書；同第５，３１２，３３５号明細書；同第５，３８３，８５１号明細書；及び同第５，３９９，１６３号明細書に説明されている。
本発明の組成物は、例えば、用量漸増試験で決定することができる適切な用量で対象に投与することができる。上述に示される通り、本明細書に説明される通りの異種間特異性を呈する本発明の構築物は、有利には、非チンパンジー霊長類での前臨床試験で使用することもできる。投与計画は、主治医が臨床的要因によって決定することになる。医学分野で周知の通り、任意の１人の患者に対する薬用量は、患者の大きさ、体表面積、年齢、投与する具体的な化合物、性別、投与時刻及び投与経路、全身レベルの健康状態及び同時に投与される他の薬物を含め、多くの要因に依存する。
「有効量」は、所望の効果を実現するか又は少なくとも部分的に実現するのに十分な治療薬の量である。「治療有効量」は、疾患に罹患している患者の疾患及びその合併症、徴候及び症状を治癒するか又は少なくとも部分的に抑止するのに十分な量である。この使用に有効な量又は用量は、治療しようとする疾患（対象疾患）、送達される構築物、治療の状況及び目的、疾患の重症度、前回の療法、患者の病歴及び治療薬に対する奏効、投与経路、患者のサイズ（体重、体表）及び／又は容態（年齢及び全身レベルの健康状態）及び患者自身の免疫系の全身の状態に依存することになる。最適な治療効果を得るため、適切な用量を主治医の判断に基づいて調整することができる。
本発明の構築物の治療有効量は、好ましくは、疾患症状の重症度の低下、無疾患症状期間の頻度若しくは持続時間の増加又は疾患に起因する機能障害若しくは能力障害の予防をもたらす。腫瘍抗原発現腫瘍の処置において、前記腫瘍抗原に対する結合ドメインを含む本発明の構築物の治療有効量は、好ましくは、未処置患者と比較して少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％の腫瘍細胞成長を阻害する。化合物が腫瘍成長を阻害する能力は、ヒト腫瘍における有効性の予測指標となる動物モデルでも評価され得る。
さらなる実施形態において、本発明は、本発明の構築物、本発明のプロセスによって産生される構築物、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター及び／又は本発明の宿主細胞を含むキットを提供する。本発明に関連して、「キット」という用語は、その１つが本発明の構築物、医薬組成物、ポリヌクレオチド、ベクター又は宿主細胞に対応する、容器、レシピエント又は他に一緒に包装された２つ以上の構成要素を意味する。したがって、キットは、単品として販売することができる特定の目的を達成するのに十分な製品及び／又は用具の一式であると説明することができる。
本発明のキットのさらなる構成要素は、免疫チェックポイント経路のタンパク質（ＰＤ－１又はＣＴＬＡ－４等）又は共刺激免疫チェックポイント受容体（４－１ＢＢ等）に結合する薬剤、好ましくは抗体又は構築物であることが想定される。こうした作用因子は、本明細書において上述でさらに詳細に説明される。一実施形態によれば、キットは、本発明の構築物と、ＰＤ－１に結合する抗体又は構築物とを含む。この目的に有用な抗ＰＤ－１結合タンパク質は、例えば、ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１９／０１３２０５号明細書に詳細に説明されている。特定の実施形態において、キットは、構成要素の同時及び／又は逐次投与を可能にする。
キットは、投与に適した薬用量（上述を参照されたい）の本発明の構築物又は医薬組成物を含有する任意の適切な形状、サイズ及び材料（好ましくは防水性、例えばプラスチック又はガラス）の１つ以上の容器（例えば、バイアル、アンプル、コンテナ、注射器、ボトル、バッグ）を含み得る。キットには、使用説明書（例えば、小冊子又は取扱説明書の形式）、注射器、ポンプ、注入器又はこれらに類するものなど、本発明の構築物又は医薬組成物を投与するための手段、本発明の構築物を再構成するための手段及び／又は本発明の構築物を希釈するための手段がさらに含まれ得る。
本発明は、単回用量投与単位のためのキットも提供する。本発明のキットには、乾燥／凍結乾燥した構築物又は医薬組成物を含む第１の容器及び水性製剤を含む第２の容器が含まれ得る。本発明の特定の実施形態では、単一チャンバ及び複数チャンバを備えたプレフィルドシリンジが入ったキットが提供される。
「構築物」という用語が本明細書内で使用されるときには常に、前記用語は、示されるような本発明の使用されるポリペプチド／ポリペプチド構築物又はその対照を指す。
本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その」には、文脈上特に明確に指示されない限り、複数形の言及が含まれる。したがって、例えば、「試薬」に対する言及は、１つ以上のそのような種々の試薬を含み、「方法」に対する言及は、本明細書に説明される方法のために改変され得るか又はそれと置換され得る、当業者に公知の均等の工程及び方法に対する言及を含む。
特に指示されない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、その一連の中にあるあらゆる要素に言及していると理解されるものとする。当業者であれば、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を、単なるルーチン実験を使用して認識又は確認することができるであろう。このような均等物は、本発明に包含されるものとする。
本明細書で使用される場合、「及び／又は」という用語は、「及び」、「又は」及び「前記用語によって接続された要素のすべて又はいずれかの他の組合せ」の意味を含む。
本明細書で使用される「約」又は「およそ」という用語は、所与の値又は範囲の±２０％以内、好ましくは±１５％以内、より好ましくは±１０％以内、最も好ましくは±５％以内を意味する。これには、具体的な値も含まれ、例えば、「約５０」は、値「５０」を含む。
本明細書及び特許請求の範囲の全体を通して、文脈上特に要求されない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる」等の変化形は、説明されている整数若しくは工程又は整数若しくは工程の群を含むが、いずれかの他の整数若しくは工程又は整数若しくは工程の群を除外しないことを含意すると理解されるであろう。本明細書で使用される場合、「含む」という用語は、「含有する」若しくは「包含する」という用語で置換されることができるか、又は本明細書で使用される場合には「有する」という用語で置換することができる。
本明細書で使用される場合、「からなる」は、特許請求の範囲の要素において指定されていないいかなる要素、工程又は成分も除外する。本明細書で使用される場合、「から本質的になる」は、特許請求の範囲の基本的な且つ新規の特徴に事実上影響を与えない材料又は工程を除外しない。
本明細書における各例において、「含む」、「から本質的になる」及び「からなる」のいずれも、他の２つの用語のいずれかに置き換えられ得る。
上述の説明及び以下の例は、例示的配置を提供するが、本発明は、本明細書で説明される具体的な方法論、技法、プロトコル、材料、試薬、物質等に限定されず、このようなものとして異なり得る。本明細書で使用される用語は、具体的な実施形態のみを説明するのに役立つ。本明細書で使用される用語は、本発明の範囲を限定するよう意図されておらず、特許請求の範囲によってのみ定義される。本発明の態様は、独立請求項で提供される。本発明の一部の任意選択的な特徴は、従属請求項で提供される。
本明細書の本文を通して引用されたすべての刊行物及び特許（すべての特許、特許出願、科学刊行物、製造元の仕様書、説明書などを含む）は、上述であろうと又は後述であろうと、その全体が参照により本明細書により組み込まれる。本明細書中のいかなるものも、本発明が先行発明によってそのような開示に先行する権利がないことの承認として解釈されないものとする。参照により組み込まれる材料が本明細書と矛盾しているか又は一致していない限りにおいて、本明細書はいかなるそのような材料にも取って代わる。
本発明及びその利点のより良い理解は、例示目的のためにのみ提供される以下の実施例から得られる。実施例は、決して本発明の範囲をいかなる方法においても限定するものであるとは解釈されないものとする。
エフェクター細胞：ヒト非刺激Ｔ細胞；標的細胞：ＣＨＯ ｈｕ ＣＤ７０ ｐＥＦＤＨＲ 凡例： Ｉ２Ｃ：ＣＤ７０ １－Ａ９Ｄ ＣＣｘＩ２ＣｘｓｃＦｃ Ｉ２ＣＡ：ＣＤ ７０ １－Ａ ９ Ｄ ＣＣｘＩ２Ｃ Ｈ１０９Ａ × ｓｃＦｃ ８Ａ８．０４：ＣＤ７０ １－Ａ９Ｄ ＣＣｘ８Ａ８．０４ｘｓｃＦｃ ５Ｃ３．０４：ＣＤ７０ １－Ａ９Ｄ ＣＣｘ５Ｃ３．０４ｘｓｃＦｃ Ｉ２Ｅ：ＣＤ７０ １－Ａ９Ｄ ＣＣｘ５Ｃ３．０１ｘｓｃＦｃ Ｉ２Ｋ：ＣＤ７０ １－Ａ９Ｄ ＣＣｘ５Ｇ６．０５ｘｓｃＦｃ ５Ｇ６．０４：ＣＤ７０ １－Ａ９Ｄ ＣＣｘ５Ｇ６．０４ｘｓｃＦｃ ５Ｇ６．０３：ＣＤ７０ １－Ａ９Ｄ ＣＣｘ５Ｇ６．０３ｘｓｃＦｃ １Ｄ５．０４：ＣＤ７０ １－Ａ９Ｄ ＣＣｘ１Ｄ５．０４ｘｓｃＦｃ ８Ａ８．０２：ＣＤ７０ １－Ａ９Ｄ ＣＣｘ８Ａ８．０２ｘｓｃＦｃ １Ｄ５．０３：ＣＤ７０ １－Ａ９Ｄ ＣＣｘ１Ｄ５．０３ｘｓｃＦｃ。 エフェクター細胞：ヒト非刺激Ｔ細胞；標的細胞：ｈｕ ｏｒｌ ＦＬＴ３ ｖ１ ｃｏ ＣＨＯ ＃１２ 凡例： Ｉ２Ｃ：ＦＬ ７－Ｈ３ ＣＣｘＩ２ＣｘｓｃＦｃ ５Ｇ６．０４：ＦＬ ７－Ｈ３ ＣＣｘ５Ｇ６．０４ｘｓｃＦｃ ８Ａ８．０４：ＦＬ ７－Ｈ３ ＣＣｘ８Ａ８．０４ｘｓｃＦｃ ５Ｃ３．０４：ＦＬ ７－Ｈ３ ＣＣｘ５Ｃ３．０４ｘｓｃＦｃ Ｉ２Ｅ：ＦＬ ７－Ｈ３ ＣＣｘ５Ｃ３．０１ｘｓｃＦｃ Ｉ２Ｋ：ＦＬ ７－Ｈ３ ＣＣｘ５Ｇ６．０５ｘｓｃＦｃ Ｉ２Ｃ ＣＣ ４４／１００：ＦＬ ７－Ｈ３ ＣＣｘＩ２Ｃ ＣＣ ４４／１００ｘｓｃＦｃ。
実施例１：熱安定性
スクリーニング緩衝剤中で製剤化した１ｍｇ／ｍｌの精製モノマーＢｉＴＥ（登録商標）タンパク質を分析した。熱安定性は、動的光散乱ＤＬＳ及び示差走査蛍光測定ＤＳＦによって決定した。
ＤＬＳ
１００μｌのタンパク質溶液をマルチウェルプレート内に二重で移し、パラフィン油で覆い、ＤＬＳプレートリーダー（温度制御部を備えたＤｙｎａＰｒｏ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ ＩＩ、Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｅｕｒｏｐｅ ＧｍｂＨ、Ｄｅｒｎｂａｃｈ－Ｇｅｒｍａｎｙ）に静置した。熱安定性は、この範囲の異なる温度で流体力学的半径を測定しながら、４０℃～７０℃の直線的な温度上昇スキャンで決定した。半径が膨張し始める温度で凝集温度を定義した。決定された両方の凝集温度の平均を計算し、候補ランキングに使用した。
ＤＳＦ
３つのガラス毛細管にそれぞれ約４０μｌのタンパク質溶液を充填し、温度制御部付きＤＳＦリーダー（Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ｎａｎｏＤＳＦ、ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＧｍｂＨ、Ｍｕｎｉｃｈ－Ｇｅｒｍａｎｙ）に同時に静置した。タンパク質内部蛍光を、励起波長２８０ｎｍ並びに発光波長３３０及び３５０ｎｍで、２０℃～９５℃の線形増加温度スキャンで測定した。２つの発光波長強度の比の変化は、タンパク質の立体構造変化を示し、したがって分析されたＢｉＴＥタンパク質の融解温度を示す。比率３５０／３３０ｎｍ曲線の第１の誘導体の第１の最大値を第１の融解温度と定義した。決定された３つのすべての第１の融解温度の平均を計算し、候補ランキングに使用した。
ＢｉＴＥ－ＨＬＥに関連して、抗ＣＤ３結合剤Ｉ２Ｃ（配列番号１８５４及び１８５５でそれぞれ定義され、配列番号２のペプチドリンカーで連結されたＶＨ及びＶＬ；配列番号２１８５及び２１８６でそれぞれ定義され、配列番号２のペプチドリンカーで連結されたＣＤ７０標的結合剤ＶＨ及びＶＬ；配列番号６のリンカーでＣＤ３結合ドメインに連結されたＣＤ７０結合ドメイン；ＣＤ３結合剤のＶＬ領域のＣ末端にＧ４リンカーで連結された配列番号１８で特定されるＨＬＥドメイン；ＣＤ７０結合ドメインはＮ末端にあり、ＢｉＴＥ（登録商標）分子のＣ末端にＨＬＥドメインを有するＣＤ３結合ドメインが続く）の配列に特定のアミノ酸変異を組み込むと、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定して５７．５℃～６２．０℃の凝集温度値及び示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）によって測定して６２．９℃～７０．３℃の融解温度値が得られた。Ｉ２Ｃバリアントを有するＢｉＴＥ－ＨＬＥ分子は、未改変Ｉ２Ｃと比較して２．３℃～６．８℃の凝集温度上昇を示した。Ｉ２Ｃバリアントの融解温度測定で同じ効果が観察され、未改変Ｉ２Ｃと比較して２．１℃～９．５℃の上昇をもたらした。
重鎖可変領域の４４位及び軽鎖可変領域の１００位のシステイン残基（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１による番号付けスキーム）でアミノ酸残基を置換することによって安定化する（Ｒｅｉｔｅｒ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，１９９４）ために追加のジスルフィド結合を操作した抗ＣＤ３結合剤バリアントＩ２Ｃ ＣＣ４４／１００を含むＢｉＴＥ－ＨＬＥ構築物は、未改変Ｉ２Ｃと比較して、ＤＬＳでは３．２℃及びＤＳＦでは５．３℃の熱安定性上昇も示した。しかしながら、前記ＢｉＴＥ（登録商標）－ＨＬＥ構築物は、有意に低下した細胞傷害活性を示し（さらなる実施例を参照されたい）、その結果、さらなる開発及びＴ細胞エンゲージャーの一部としての使用に適していない構築物をもたらした。
Figure 2023547661000013
ＢｉＴＥ－ＨＬＥに関連して、抗ＣＤ３結合剤Ｉ２Ｃの配列中の単一以上のアミノ酸の変異は、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定される５７．０℃～６２．４℃の凝集温度値及び示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）によって測定される６２．１℃～６８．８℃の融解温度値をもたらした。Ｉ２Ｃ変異を有するＢｉＴＥ－ＨＬＥ分子は、未改変Ｉ２Ｃと比較して１．８℃～７．２℃の凝集温度上昇を示した。Ｉ２Ｃ変異体の融解温度測定で同じ効果が観察され、未改変Ｉ２Ｃと比較して１．０℃～７．７℃の上昇をもたらした。以下の表で参照されるＣＤ３結合剤は、アミノ酸残基交換及び第１の列におけるその位置を特定し；各エントリについて、本発明による信頼できる命名法である、配列番号１８５４で定義されるＶＨ領域配列及び配列番号１８５５で定義されるＶＬ領域配列の塩基配列に関して使用される位置を括弧内に示す。
Figure 2023547661000014
Figure 2023547661000015
実施例２：細胞傷害活性
細胞傷害活性
ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、輸血用血液を収集する血液バンクの副産物である濃縮されたリンパ球製剤（バフィーコート）からフィコール密度勾配遠心分離により調製した。バフィーコートは末梢血バンクにより供給され、血液収集の同日にＰＢＭＣを調製した。フィコール密度遠心分離及びダルベッコＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）での徹底洗浄後、残存赤血球がＰＢＭＣから赤血球溶解緩衝液（１５５ｍＭ ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ ＫＨＣＯ３、１００μＭ ＥＤＴＡ）とのインキュベーションを介して除去された。１００×ｇでＰＢＭＣを遠心すると、上清を介して血小板が除去された。残ったリンパ球は、主にＢ及びＴリンパ球、ＮＫ細胞及び単球を含む。ＰＢＭＣを、１０％ＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏ）含有のＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ）中３７℃／５％ＣＯ２で培養下において維持した。
ＣＤ１４＋及びＣＤ５６＋細胞の枯渇
ＣＤ１４＋細胞の枯渇の場合、ヒトＣＤ１４マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙ Ｂｉｏｔｅｃ、ＭＡＣＳ、＃１３０－０５０－２０１）が、ＮＫ細胞ヒトＣＤ５６マイクロビーズ（ＭＡＣＳ、＃１３０－０５０－４０１）の枯渇に使用された。ＰＢＭＣを計数し、３００×ｇで室温にて１０分間遠心分離した。上清を廃棄し、細胞ペレットをＭＡＣＳ単離緩衝剤［８０μＬ／１０７細胞；ＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃２００１２－０４３）、０．５％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、＃１０２７０－１０６）、２ｍＭ ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、＃Ｅ－６５１１）］に再懸濁した。ＣＤ１４マイクロビーズ及びＣＤ５６マイクロビーズ（２０μｌ／１０７細胞）を加え、４～８℃で１５分間インキュベートした。ＭＡＣＳ単離緩衝剤（１～２ｍｌ／１０７細胞）で細胞を洗浄した。遠心分離（上記参照）後、上清が廃棄され、細胞がＭＡＣＳ単離緩衝液（５００μＬ／１０８細胞）に再懸濁された。次に、ＣＤ１４／ＣＤ５６陰性細胞をＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０－０４２－４０１）を使用して単離した。ＣＤ１４＋／ＣＤ５６＋細胞を含まないＰＢＭＣを、１０％ＦＢＳ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ、＃Ｓ０１１５）、１×非必須アミノ酸（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ、＃Ｋ０２９３）、１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝剤（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ、＃Ｌ１６１３）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ、＃Ｌ０４７３）及び１００Ｕ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシン（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ、＃Ａ２２１３）を補充したＲＰＭＩ完全培地、すなわちＲＰＭＩ１６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ、＃ＦＧ１２１５）中において、必要になるまでインキュベーター中、３７℃で培養した。
標的細胞標識
フローサイトメトリーアッセイにおける細胞溶解の分析のために、蛍光膜色素ＤｉＯＣ１８（ＤｉＯ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、＃Ｖ２２８８６）を使用して、ヒト標的トランスフェクトＣＨＯ細胞を標的細胞として標識し、それらをエフェクター細胞と区別した。すなわち、細胞が収集され、ＰＢＳで１回洗浄され、２％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ及び膜色素ＤｉＯ（５μＬ／１０６細胞）を含有するＰＢＳで１０６細胞／ｍＬに調整された。３７℃で３分間のインキュベーション後、細胞が完全ＲＰＭＩ培地で２回洗浄され、細胞数が１．２５×１０５細胞／ｍＬに調整された。細胞の活力を、ＮＣ－２５０細胞カウンター（Ｃｈｅｍｏｍｅｔｅｃ）を使用して測定した。
フローサイトメトリーベースの解析
このアッセイを、ヒト標的トランスフェクトＣＨＯ細胞の溶解を抗標的多重特異性構築物の段階希釈物の存在下で定量するように設計した。等容積のＤｉＯ標識標的細胞及びエフェクター細胞（すなわちＣＤ１４＋及びＣＤ５６＋細胞のないＰＢＭＣ）を混合し、１０：１のＥ：Ｔ細胞比を得た。この懸濁液８０μｌを、９６ウェルプレートの各ウェルに移した。抗標的×抗ＣＤ３多重特異性構築物及び陰性対照（無関係な標的抗原を認識するＣＤ３ベースの多重特異性構築物）又はさらなる陰性対照としてのＲＰＭＩ完全培地の連続希釈液２０μＬを添加した。７％ＣＯ２の加湿インキュベーター内で、多重特異性構築物媒介性の細胞傷害性反応が４８時間進行された。次に、細胞を新たな９６ウェルプレートに移し、標的細胞膜の完全性の喪失を、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を１μｇ／ｍＬの終濃度で添加することにより監視した。ＰＩは、通常、生細胞から排除される膜不透過性色素であるのに対し、死細胞は、それを取込み、蛍光発光により同定可能になる。
試料を、ｉＱｕｅ Ｐｌｕｓ機器でのフローサイトメトリーにより測定し、Ｆｏｒｅｃｙｔソフトウェア（共にＩｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）により解析した。標的細胞を、ＤｉＯ陽性細胞として同定した。ＰＩ陰性標的細胞は、生存標的細胞に分類した。細胞障害性の百分率を以下の式によって算出した。
Figure 2023547661000016
 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６ソフトウェア（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）を使用し、細胞障害性の百分率を、対応する二重特異性構築物濃度に対してプロットした。用量応答曲線を、固定ヒル傾斜を有するシグモイド用量応答曲線の評価のための４つのパラメトリックロジスティック回帰モデルを用いて解析し、ＥＣ５０値を算出した。
結果：
Figure 2023547661000017
抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ Ｉ２Ｃ、Ｉ２ＣＡ、８Ａ８．０４、５Ｃ３．０４、Ｉ２Ｅ、Ｉ２Ｋ、５Ｇ６．０４、５Ｇ６．０３、１Ｄ５．０４、８Ａ８．０２及び１Ｄ５．０３を有するＴ細胞エンゲージャーは、０．０５ｐＭ～０．４ｐＭの範囲の同様のＥＣ５０値を示す（図１Ａ）及び表４）。
Figure 2023547661000018
抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ Ｉ２Ｃ、５Ｇ６．０４、８Ａ８．０４、Ｉ２Ｅ及びＩ２Ｋを有するＴ細胞エンゲージャーは、４．５ｐＭ～７．０ｐＭの範囲の同様のＥＣ５０値を示す。抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ Ｉ２Ｃ ＣＣ ４４／１００を有するＴ細胞エンゲージャーは、１５７８ｐＭのＥＣ５０値を示し、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ Ｉ２Ｃを有するＴ細胞エンゲージャーと比較して２９７倍活性が低い（図１Ｂ）及び表５）。
配列
以下の配列表は、明細書本文及び特許請求の範囲で参照される配列番号についての信頼できるリストであり、連続する番号付けに関してギャップを含み得る。連続した番号付けを含むＷＩＰＯ規格ＳＴ．２５に準拠するリスト等の任意のさらなるリストがこのリストから生成されており、配列番号の差は、以下のリストと整合されるべきである。配列同一性は、「指定」として識別される第２の列の固有のエントリ並びに配列アラインメントを参照することにより、さらに混乱することなく識別することができる。
Figure 2023547661000019
Figure 2023547661000020
Figure 2023547661000021
Figure 2023547661000022
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Figure 2023547661000142
Figure 2023547661000143

Claims (28)

  1. ポリペプチド又はポリペプチド構築物であって、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含むか又はそれからなる、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する結合ドメインを含み、
    ｉ）前記ＶＨ領域は、
    Ｘ１ＹＡＸ２Ｎ（ここで、Ｘ１は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｔ又はＩであり；及びＸ２は、Ｍ又はＩである）のＣＤＲ－Ｈ１配列；
    ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＸ１ＶＫＸ２（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＱであり；及びＸ２は、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥである）のＣＤＲ－Ｈ２配列；及び
    ＨＸ１ＮＦＧＮＳＹＸ２ＳＸ３Ｘ４ＡＹ（ここで、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ３は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；及びＸ４は、Ｗ、Ｆ又はＹである）のＣＤＲ－Ｈ３配列
    を含み；
    ｉｉ）前記ＶＬ領域は、
    Ｘ１ＳＳＴＧＡＶＴＸ２Ｘ３Ｘ４ＹＸ５Ｎ（ここで、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ２は、Ｓ又はＴであり；Ｘ３は、Ｇ又はＳであり；Ｘ４は、Ｎ又はＹであり；及びＸ５は、Ｐ又はＡである）のＣＤＲ－Ｌ１配列；
    Ｘ１ＴＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（ここで、Ｘ１は、Ｇ又はＡであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｄ又はＮであり；Ｘ３は、Ｆ、Ｍ又はＫであり；Ｘ４は、Ｌ又はＲであり；Ｘ５は、Ａ、Ｐ又はＶであり；及びＸ６は、Ｐ又はＳである）のＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
    Ｘ１ＬＷＹＳＮＸ２ＷＶ（ここで、Ｘ１は、Ｖ、Ａ又はＴであり；及びＸ２は、Ｒ又はＬである）のＣＤＲ－Ｌ３配列
    を含み、
    ｉｉｉ）ｉ）の前記ＶＨ領域及び／又はｉｉ）の前記ＶＬ領域のＣＤＲ配列の１つ以上は、ＣＤＲ－Ｈ１におけるＸ２４Ｖ及びＸ２４Ｆ；
    ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５及びＸ１１６Ａ；
    ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４及びＮ６；並びに
    ＣＤＲ－Ｌ３におけるＸ１１Ｌ及びＷ３
    から選択される１つのアミノ酸置換又はその組合せを含む、ポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  2. ｉｉｉ）で定義される前記１つのアミノ酸置換又はその組合せに加えて、前記ＣＤＲ－Ｈ１配列において、Ｘ２は、Ｉであり；前記ＣＤＲ－Ｈ２配列において、Ｘ２は、Ｇであり；前記ＣＤＲ－Ｈ３配列において、Ｘ１は、Ａであり、Ｘ４は、Ｆであり；及び／又は前記ＣＤＲ－Ｌ３配列において、Ｘ１は、Ａである、請求項１に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  3. ２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超えるアミノ酸置換の、ｉｉｉ）で定義される前記アミノ酸置換の組合せを含む、請求項１又は２に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  4. ｉ）前記１つのアミノ酸置換は、
    ａ．ＣＤＲ－Ｈ１におけるＸ２４Ｖ又はＸ２４Ｆ；ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ；及び
    ｂ．ＣＤＲ－Ｌ３におけるＸ１１Ｌ及びＷ３Ｙ
    から選択されるか；
    ｉｉ）２つ以上のアミノ酸置換の前記組合せは、ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ及びＣＤＲ－Ｈ３におけるＮ６Ｓ；並びにＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ及びＣＤＲ－Ｈ３におけるＮ６Ｔから選択されるか；
    ｉｉｉ）３つ以上のアミノ酸置換の前記組合せは、ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ及びＮ６Ｓ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ及びＮ６Ｔ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ｎ及びＮ６Ｔから選択されるか；
    ｉｖ）４つ以上のアミノ酸置換の前記組合せは、ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ、Ｎ６Ｓ及びＣＤＲ－Ｌ３におけるＷ３Ｙ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ及びＮ６Ｔ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ及びＮ６Ｓ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｓから選択されるか；又は
    ｖ）５つ又は６つのアミノ酸置換の前記組合せは、ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｔ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＸ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ｎ、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｓ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ、Ｎ６Ｓ；及びＣＤＲ－Ｌ３におけるＷ３Ｙ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ｎ、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｔ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＨ１Ａ、Ｘ１２Ｅ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｔ；ＣＤＲ－Ｈ２におけるＤ１５Ｅ、Ｘ１１６Ａ、ＣＤＲ－Ｈ３におけるＸ１２Ｅ、Ｆ４Ｉ及びＮ６Ｔから選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  5. ポリペプチド又はポリペプチド構築物であって、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含むか又はそれからなる、ヒトＣＤ３ε鎖の細胞外エピトープに結合する結合ドメインを含み、
    ｉ）前記ＶＨ領域は、
    Figure 2023547661000144
     の配列を含み、ここで、Ｘ１は、Ｑ又はＫであり；Ｘ２は、Ｖ又はＬであり；Ｘ３は、Ｖ又はＥであり；Ｘ４は、Ｇ又はＫであり；Ｘ５は、Ｋ、Ｖ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｔ又はＩであり；Ｘ６は、Ｍ又はＩであり；Ｘ７は、Ｓ又はＱであり；Ｘ８は、Ｄ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＥであり；Ｘ９は、Ｋ又はＱであり；Ｘ１０は、Ｎ又はＳであり；Ｘ１１は、Ｔ又はＩであり；Ｘ１２は、Ａ又はＬであり；Ｘ１３は、Ｖ又はＭであり；Ｘ１４は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ１５は、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＴであり；Ｘ１６は、Ｙ、Ｗ又はＦであり；Ｘ１７は、Ｗ、Ｆ又はＹであり；及びＸ１８は、Ｓ又はＡであり；及び
    ｉｉ）前記ＶＬ領域は、
    Figure 2023547661000145
     の配列を含み、ここで、Ｘ１は、Ｔ又はＡであり；Ｘ２は、Ｐ又はＳであり；Ｘ３は、Ｓ又はＡであり；Ｘ４は、Ｖ又はＴであり；Ｘ５は、Ｇ又はＥであり；Ｘ６は、Ｇ、Ｒ又はＡであり；Ｘ７は、Ｓ又はＴであり；Ｘ８は、Ｇ又はＳであり；Ｘ９は、Ｎ又はＹであり；Ｘ１０は、Ｐ又はＡであり；Ｘ１１は、Ｑ又はＥであり；Ｘ１２は、Ｇ又はＤであり；Ｘ１３は、Ｑ又はＨであり；Ｘ１４は、Ａ又はＬであり；Ｘ１５は、Ｐ又はＦであり；Ｘ１６は、Ｒ又はＴであり；Ｘ１７は、Ｇ又はＡであり；Ｘ１８は、Ｋ又はＤであり；Ｘ１９は、Ｆ又はＭであり；Ｘ２０は、Ｌ又はＲであり；Ｘ２１は、Ａ、Ｐ又はＶであり；Ｘ２２は、Ｐ又はＳであり；Ｘ２３は、Ｔ又はＶであり；Ｘ２４は、Ｌ又はＩであり；Ｘ２５は、Ｇ又はＤであり；Ｘ２６は、Ｌ又はＩであり；Ｘ２７は、Ｓ又はＴであり；Ｘ２８は、Ｖ又はＡであり；Ｘ２９は、Ｐ又はＴであり；Ｘ３０は、Ｅ又はＩであり；Ｘ３１は、Ｙ又はＦであり；Ｘ３２は、Ｖ、Ａ又はＴであり；Ｘ３３は、Ｒ又はＬであり；
    ｉｉｉ）前記ＶＨ及び／又はＶＬ領域配列は、
    ａ．ｉ）の前記ＶＨ領域配列におけるＮ３０、Ｘ６３４Ｖ、Ｘ６３４Ｆ、Ｑ３９、Ｌ４５、Ｄ６４、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｘ１２８１Ｔ、Ｘ１２８１Ｉ、Ｖ９９、Ｈ１０１、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４及びＮ１０６；並びに
    ｂ．ｉｉ）の前記ＶＬ領域配列におけるＬ２０、Ｖ３８、Ｘ１１４０Ｒ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９、Ｘ３２９１Ｌ、Ｘ３３９３及びＧ１０２
    から選択される１つのアミノ酸置換又はその組合せを含む、ポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  6. ｉｉｉ）で定義される前記１つのアミノ酸置換又はその組合せに加えて、Ｘ６は、Ｉであり；Ｘ８は、Ｇであり；前記ＶＨ領域配列において、Ｘ１２は、Ｌであり、Ｘ１４は、Ａであり、Ｘ１７は、Ｆであり；及び／又は前記ＶＬ領域配列において、Ｘ３２は、Ａである、請求項５に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  7. ２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超えるアミノ酸置換の、ｉｉｉ）で定義される前記アミノ酸置換の組合せを含む、請求項５又は６に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  8. ｉ）前記１つのアミノ酸置換は、
    ａ．前記ＶＨ領域におけるＸ６３４Ｖ、Ｑ３９Ｅ、Ｑ３９Ｋ、Ｑ３９Ｒ、Ｑ３９Ｄ、Ｌ４５Ｍ、Ｌ４５Ｖ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｘ１２８１Ｔ、Ｘ１２８１Ｉ、Ｖ９９Ａ、Ｖ９９Ｌ、Ｈ１０１Ａ、Ｈ１０１Ｎ；及び
    ｂ．Ｖ３８Ｉ、Ｖ３８Ｌ、Ｖ３８Ｍ、Ｖ３８Ｆ、Ｖ３８Ｙ、Ｘ１１４０Ｒ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ、Ｘ２４６９Ｅ、Ｘ３２９１Ｌ、Ｘ３３９３Ｙ
    から選択され；
    ｉｉ）２つ以上のアミノ酸置換の前記組合せは、前記ＶＨ領域におけるＸ６３４Ｆ及びＸ１２８１Ｖ；前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ及び前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ；前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ及び前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｒ；前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ及び前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ；前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ及び前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｒ；前記ＶＨ領域におけるＬ４５Ｖ及び前記ＶＬ領域におけるＶ３８Ｆ；前記ＶＨ領域におけるＬ４５Ｖ及び前記ＶＬ領域におけるＶ３８Ｙ；前記ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ及び前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ；前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＸ１２８１Ｖ及び前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋから選択され；
    ｉｉｉ）３つ以上のアミノ酸置換の前記組合せは、前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓから選択され；
    ｉｖ）４つ以上のアミノ酸置換の前記組合せは、前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｄ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｒ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＸ１２８１Ｖ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓから選択され；
    ｖ）５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０又はそれを超えるアミノ酸置換の前記組合せは、前記ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｎ１０６Ｓ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｎ１０６Ｔ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｓ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＸ１２８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、Ｘ１２８１Ｖ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；前記ＶＨ領域におけるＬ４５Ｖ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｆ、Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓから選択される、請求項５～７のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  9. アミノ酸置換の前記組合せは、
    ｉ）前記ＶＨ領域における、
    ａ．Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
    ｂ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ａ８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ及びＮ１０６Ｓ；
    ｃ．Ｌ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
    ｄ．Ｌ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
    ｅ．Ｑ３９Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ｎ及びＮ１０６Ｔ；
    ｆ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
    ｇ．Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ及びＮ１０６Ｔ；
    ｈ．Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ及びＮ１０６Ｓ；
    ｉ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
    ｊ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
    ｋ．Ｘ７６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
    ｌ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
    ｍ．Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
    ｎ．Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
    ｏ．Ｎ３０Ｓ、Ｑ３９Ｅ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ及びＮ１０６Ｔ；
    ｐ．Ｌ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
    ｑ．Ｎ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｔ；
    ｒ．Ｎ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ及びＮ１０６Ｓ；
    ｉｉ）前記ＶＬ領域における、
    ａ．Ｌ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
    ｂ．Ｌ２０Ｉ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
    ｃ．Ｌ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｅ、Ｇ１０２Ｓ及びＸ３３９３Ｙ；
    ｄ．Ｘ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
    ｅ．Ｌ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ及びＸ３３９３Ｙ；
    ｆ．Ｌ２０Ｍ、Ｘ１１４０Ｋ及びＸ２４６９Ｅ；
    ｇ．Ｌ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｅ及びＧ１０２Ｓ；
    ｈ．Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＸ３３９３Ｙ；又は
    ｉ．Ｘ１１４０Ｋ及びＸ２４６９Ｓ；並びに
    ｉｉｉ）ｉ）及びｉｉ）の１つのアミノ酸置換の組合せの組合せ
    から選択される、請求項５～８のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  10. ｉｉｉ）のアミノ酸置換の組合せの前記組合せは、
    ａ．前記ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
    ｂ．前記ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｓ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
    ｃ．前記ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
    ｄ．前記ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｅ、Ｇ１０２Ｓ及びＸ３３９３Ｙ；
    ｅ．前記ＶＨ領域におけるＱ３９Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ｎ、Ｎ１０６Ｔ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
    ｆ．前記ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
    ｇ．前記ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
    ｈ．前記ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｈ１０１Ｎ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｓ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
    ｉ．前記ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ２４６９Ｓ及びＧ１０２Ｓ；
    ｊ．前記ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
    ｋ．前記ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
    ｌ．前記ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
    ｍ．前記ＶＨ領域におけるＤ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｖ９９Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｓ、Ｇ１０２Ｓ及びＸ３３９３Ｙ；
    ｎ．前記ＶＨ領域におけるＸ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＧ１０２Ｓ；
    ｏ．前記ＶＨ領域におけるＮ３０Ｓ、Ｑ３９Ｅ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｘ１４１０２Ｅ、Ｆ１０４Ｉ、Ｎ１０６Ｔ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｍ、Ｘ１１４０Ｋ及びＸ２４６９Ｅ；
    ｐ．前記ＶＨ領域におけるＬ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、前記ＶＬ領域におけるＬ２０Ｉ、Ｖ３８Ｉ、Ｘ１１４０Ｋ、Ｘ２４６９Ｅ及びＧ１０２Ｓ；
    ｑ．前記ＶＨ領域におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｔ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＸ２４６９Ｓ；並びに
    ｒ．前記ＶＨ領域におけるＮ３０Ｓ、Ｌ４５Ｍ、Ｄ６４Ｅ、Ｘ７６５Ａ、Ｘ１２８１Ｖ、Ｈ１０１Ａ、Ｎ１０６Ｓ、前記ＶＬ領域におけるＸ１１４０Ｋ及びＸ２４６９Ｓ
    から選択される、請求項９に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  11. 定義されるアミノ酸置換の組合せの前記組合せにおいて、
    ａ．及びｍ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ６は、Ｉであり；
    ｂ．及びｒ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ８は、Ｇであり；
    ｃ．では、前記ＶＨ領域において、Ｘ１２は、Ｌであり；
    ｄ．では、前記ＶＨ領域において、Ｘ１２は、Ｌであり、及びＸ１７は、Ｆであり；
    ｅ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ６は、Ｉであり、Ｘ１４は、Ａであり、及びＸ１７は、Ｆであり；
    ｆ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ５は、Ｉであり；及び前記ＶＬ領域配列において、Ｘ３２は、Ａであり；
    ｇ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ５は、Ｉであり；
    ｈ．及びｉ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ８は、Ｇであり；
    ｊ．、ｌ及びｎ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ６は、Ｉであり、及びＸ１７は、Ｆであり；且つ前記ＶＬ領域配列において、Ｘ３２は、Ａであり；
    ｋ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ６は、Ｉであり；及び前記ＶＬ領域配列において、Ｘ３２は、Ａであり；
    ｐ．では、前記ＶＨ領域において、Ｘ１２は、Ｌであり；及び
    ｑ．では、前記ＶＨ領域配列において、Ｘ８は、Ｇであり、及びＸ１７は、Ｆである、請求項１０に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  12. ｉ）及びｉｉ）の前記ＶＨ及びＶＬ領域は、配列番号１２４及び１２５、１７２及び１７３、３６２及び３６３、５５２及び５５３、７３０及び７３１、９２８及び９２９、１１０６及び１１０７、１２９６及び１２９７、１４７４及び１４７５、１６６４及び１６６５並びに１８５４及び１８５５で定義されるＶＨ及びＶＬ領域の組合せから選択され、前記ＶＨ及び／又はＶＬ領域配列における前記１つのアミノ酸置換又はその組合せは、ＶＨ及び／又はＶＬ領域配列であって、以下のアミノ酸残基：
    ｉ．前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、８１位のＶ、９９位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における４５位のＭ、６５位のＡ、８１位のＬ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における４５位のＭ、６５位のＡ、８１位のＬ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、１１２位のＦ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、３８位のＩ、４０位のＫ、６９位のＥ、１０２位のＳ及び９３位のＹ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、３９位のＥ、６５位のＡ、１０１位のＮ、１０２位のＡ、１０６位のＴ、１１２位のＦ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６４位のＥ、６５位のＡ、９９位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ、９１位のＡ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、８１位のＶ、９９位のＡ、１０１位のＡ、１０２位のＥ、１０４位のＩ、１０６位のＴ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における６４位のＥ、６５位のＡ、６８位のＧ、８１位のＶ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６４位のＥ、６５位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、１１２位のＦ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ、９１位のＡ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６４位のＥ、６５位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、１１２位のＦ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ、９１位のＡ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６４位のＥ、６５位のＡ、８１位のＶ、９９位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ、１０２位のＳ及び９３位のＹ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、１１２位のＦ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ、９１位のＡ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における４５位のＭ、６４位のＥ、６５位のＡ、８１位のＬ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、３８位のＩ、４０位のＫ、６９位のＥ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３０位のＳ、４５位のＭ、６５位のＡ、６８位のＧ、８１位のＶ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、１１２位のＦ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ、６９位のＳ及び９３位のＹ；並びに
    前記ＶＨ領域配列における３０位のＳ、４５位のＭ、６４位のＥ、６５位のＡ、６８位のＧ、８１位のＶ、１０１位のＡ、１０６位のＳ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ及び６９位のＳ；
    ｉｉ．前記ＶＨ領域配列における６４位のＥ、６５位のＡ、６８位のＧ、８１位のＶ、１０１位のＮ、１０２位のＥ、１０４位のＩ、１０６位のＴ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における６５位のＡ、６８位のＧ、８１位のＶ、１０１位のＮ、１０２位のＥ、１０４位のＩ、１０６位のＳ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、９９位のＡ、１０１位のＡ、１０６位のＴ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ、９１位のＡ及び１０２位のＳ；並びに
    前記ＶＨ領域配列における３０位のＳ、３９位のＥ、６４位のＥ、６５位のＡ、８１位のＶ、１０１位のＡ、１０２位のＥ、１０４位のＩ、１０６位のＴ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＭ、４０位のＫ及び６９位のＥ；
    ｉｉｉ．前記ＶＨ領域配列における１０１位のＡ；
    ｉｖ．前記ＶＨ領域配列における８１位のＶ、９９位のＡ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、８１位のＶ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、３９位のＥ、８１位のＶ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
    ｖ．前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、８１位のＶ及び前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ；
    前記ＶＨ領域配列における４５位のＭ、前記ＶＨ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、１０１位のＡ及び１０６位のＳ；
    前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ、６９位のＳ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＦ及び８１位のＶ；
    前記ＶＨ領域配列における４５位のＭ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３９位のＤ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ及び８１位のＶ；
    前記ＶＨ領域配列における３９位のＥ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＫ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における４５位のＭ及び前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ、６５位のＡ、８１位のＶ、９９位のＡ、１０１位のＡ及び１０６位のＳ；又は
    ｖｉ．前記ＶＨ領域配列における３９位のＤ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＲ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＩ；
    前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ；
    前記ＶＨ領域配列における３９位のＤ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における２０位のＩ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３９位のＫ；
    前記ＶＨ領域配列における３９位のＥ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３９位のＥ、前記ＶＬ領域配列における２０位のＩ、４０位のＲ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における３９位のＤ、前記ＶＬ領域配列における４０位のＲ及び１０２位のＳ；
    前記ＶＨ領域配列における８１位のＶ；
    前記ＶＨ領域配列における３９位のＤ及び前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ；
    前記ＶＨ領域配列における１１２位のＦ；
    前記ＶＨ領域配列における１１２位のＦ及び前記ＶＬ領域配列における３８位のＩ；
    前記ＶＨ領域配列における３９位のＥ及び前記ＶＬ領域配列における４０位のＫ；
    前記ＶＨ領域配列における３４位のＶ
    を有するＶＨ及び／又はＶＬ領域配列をもたらす、請求項５又は６～１１のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  13. 前記ＶＨ及びＶＬ領域配列は、リンカーによって連結されている、請求項１～１２のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  14. 前記リンカーは、ペプチドリンカーである、請求項１３に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  15. 前記ペプチドリンカーは、Ｇ４Ｓリンカー若しくはＧ４Ｑリンカー又はその反復を含むか又はそれからなる、請求項１４に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  16. 少なくとも１つのさらなる結合ドメインを含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  17. 前記少なくとも１つのさらなる結合ドメインは、細胞表面抗原に結合する、請求項１６に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  18. 前記細胞表面抗原は、腫瘍抗原である、請求項１７に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  19. 前記腫瘍抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７０、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ３、ＣＬＬ１、ＣＳ１、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ１８．２、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＦＬＴ３、ＭＡＧＥＢ２、ＭＡＲＴ１、ＭＳＬＮ、ＭＵＣ１７、ＰＳＭＡ及びＳＴＥＡＰ１からなる群から選択される、請求項１８に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  20. 少なくとも二重特異性である一本鎖ポリペプチドである、請求項１～１９のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物。
  21. 請求項１～２０のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチド。
  22. 請求項２１に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  23. 請求項２１に記載のポリヌクレオチド又は請求項２２に記載のベクターで形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞。
  24. 請求項１～２０のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物を産生するためのプロセスであって、請求項１～２０のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチド構築物の発現を可能にする条件下において、請求項２３に記載の宿主細胞を培養することと、前記産生されたポリペプチド又はポリペプチド構築物を培養物から回収することとを含むプロセス。
  25. 請求項１～２０のいずれか一項に記載のポリペプチド若しくはポリペプチド構築物又は請求項２４に記載のプロセスによって産生されたポリペプチド若しくはポリペプチド構築物を含む医薬組成物。
  26. 腫瘍性疾患から選択される疾患の予防、処置又は寛解に使用するための、請求項１８～２０のいずれか一項に記載のポリペプチド若しくはポリペプチド構築物又は請求項２４に記載のプロセスによって産生されたポリペプチド若しくはポリペプチド構築物。
  27. 腫瘍性疾患の予防、処置又は寛解のための方法であって、請求項１８～２０のいずれか一項に記載のポリペプチド若しくはポリペプチド構築物又は請求項２４に記載のプロセスによって産生されたポリペプチド若しくはポリペプチド構築物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
  28. 請求項１～２０のいずれか一項に記載のポリペプチド若しくはポリペプチド構築物、請求項２４に記載のプロセスによって産生されたポリペプチド若しくはポリペプチド構築物、請求項２１に記載のポリヌクレオチド、請求項２２に記載のベクター及び／又は請求項２３に記載の宿主細胞を含むキット。
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Family Cites Families (141)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3180193A (en) 1963-02-25 1965-04-27 Benedict David Machines for cutting lengths of strip material
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US4751180A (en) 1985-03-28 1988-06-14 Chiron Corporation Expression using fused genes providing for protein product
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4935233A (en) 1985-12-02 1990-06-19 G. D. Searle And Company Covalently linked polypeptide cell modulators
WO1987005330A1 (en) 1986-03-07 1987-09-11 Michel Louis Eugene Bergh Method for enhancing glycoprotein stability
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
DE3853515T3 (de) 1987-05-21 2005-08-25 Micromet Ag Multifunktionelle proteine mit vorbestimmter zielsetzung.
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
EP0320015B1 (en) 1987-12-09 1994-07-20 Omron Tateisi Electronics Co. Inductive data communicating apparatus
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
US5683888A (en) 1989-07-22 1997-11-04 University Of Wales College Of Medicine Modified bioluminescent proteins and their use
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5292658A (en) 1989-12-29 1994-03-08 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Boyd Graduate Studies Research Center Cloning and expressions of Renilla luciferase
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
ATE356869T1 (de) 1990-01-12 2007-04-15 Amgen Fremont Inc Bildung von xenogenen antikörpern
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE352612T1 (de) 1990-08-29 2007-02-15 Pharming Intellectual Pty Bv Homologe rekombination in säugetier-zellen
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
WO1992015673A1 (en) 1991-03-11 1992-09-17 The University Of Georgia Research Foundation, Inc. Cloning and expression of renilla luciferase
WO1992022670A1 (en) 1991-06-12 1992-12-23 Genpharm International, Inc. Early detection of transgenic embryos
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
AU2235992A (en) 1991-06-14 1993-01-12 Genpharm International, Inc. Transgenic immunodeficient non-human animals
WO1993004169A1 (en) 1991-08-20 1993-03-04 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
EP0746609A4 (en) 1991-12-17 1997-12-17 Genpharm Int NON-HUMAN TRANSGENIC ANIMALS CAPABLE OF PRODUCING HETEROLOGOUS ANTIBODIES
NZ253943A (en) 1992-06-18 1997-01-29 Genpharm Int Transfering polynucleotides into eukaryotic cells using co-lipofection complexes of a cationic lipid and the polynucleotide
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
WO1994002602A1 (en) 1992-07-24 1994-02-03 Cell Genesys, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
WO1994010308A1 (en) 1992-10-23 1994-05-11 Immunex Corporation Methods of preparing soluble, oligomeric proteins
US5981175A (en) 1993-01-07 1999-11-09 Genpharm Internation, Inc. Methods for producing recombinant mammalian cells harboring a yeast artificial chromosome
AU6819494A (en) 1993-04-26 1994-11-21 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
KR960705209A (ko) 1993-09-10 1996-10-09 잭 엠. 그랜노위츠 녹색 형광 단백의 용도
US5625825A (en) 1993-10-21 1997-04-29 Lsi Logic Corporation Random number generating apparatus for an interface unit of a carrier sense with multiple access and collision detect (CSMA/CD) ethernet data network
WO1995021191A1 (en) 1994-02-04 1995-08-10 William Ward Bioluminescent indicator based upon the expression of a gene for a modified green-fluorescent protein
US5643763A (en) 1994-11-04 1997-07-01 Genpharm International, Inc. Method for making recombinant yeast artificial chromosomes by minimizing diploid doubling during mating
US5777079A (en) 1994-11-10 1998-07-07 The Regents Of The University Of California Modified green fluorescent proteins
AU5632296A (en) 1995-04-27 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
WO1996034096A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5811524A (en) 1995-06-07 1998-09-22 Idec Pharmaceuticals Corporation Neutralizing high affinity human monoclonal antibodies specific to RSV F-protein and methods for their manufacture and therapeutic use thereof
EP0859841B1 (en) 1995-08-18 2002-06-19 MorphoSys AG Protein/(poly)peptide libraries
CA2230759C (en) 1995-08-29 2012-02-21 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Chimeric animal and method for producing the same
US5874304A (en) 1996-01-18 1999-02-23 University Of Florida Research Foundation, Inc. Humanized green fluorescent protein genes and methods
US5804387A (en) 1996-02-01 1998-09-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University FACS-optimized mutants of the green fluorescent protein (GFP)
US5876995A (en) 1996-02-06 1999-03-02 Bryan; Bruce Bioluminescent novelty items
US5925558A (en) 1996-07-16 1999-07-20 The Regents Of The University Of California Assays for protein kinases using fluorescent protein substrates
US5976796A (en) 1996-10-04 1999-11-02 Loma Linda University Construction and expression of renilla luciferase and green fluorescent protein fusion genes
WO1998024893A2 (en) 1996-12-03 1998-06-11 Abgenix, Inc. TRANSGENIC MAMMALS HAVING HUMAN IG LOCI INCLUDING PLURAL VH AND Vλ REGIONS AND ANTIBODIES PRODUCED THEREFROM
ATE290205T1 (de) 1996-12-12 2005-03-15 Prolume Ltd Vorrichtung und verfahren zum nachweis und identifizieren von infektiösen wirkstoffen
AU736549B2 (en) 1997-05-21 2001-08-02 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschrankter Haftung Method for the production of non-immunogenic proteins
WO1999049019A2 (en) 1998-03-27 1999-09-30 Prolume, Ltd. Luciferases, fluorescent proteins, nucleic acids encoding the luciferases and fluorescent proteins and the use thereof in diagnostics
AU761587B2 (en) 1998-04-21 2003-06-05 Amgen Research (Munich) Gmbh CD19xCD3 specific polypeptides and uses thereof
ATE251181T1 (de) 1998-07-28 2003-10-15 Micromet Ag Heterominikörper
US7254167B2 (en) 1998-10-30 2007-08-07 Broadcom Corporation Constellation-multiplexed transmitter and receiver
CN1202128C (zh) 1998-12-08 2005-05-18 拜奥威神有限公司 修饰蛋白的免疫原性
US6833268B1 (en) 1999-06-10 2004-12-21 Abgenix, Inc. Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions
US7230167B2 (en) 2001-08-31 2007-06-12 Syngenta Participations Ag Modified Cry3A toxins and nucleic acid sequences coding therefor
ES2645563T3 (es) 2001-11-30 2017-12-05 Amgen Fremont Inc. Animales transgénicos que portan genes de cadena ligera de Ig humana
US8486859B2 (en) 2002-05-15 2013-07-16 Bioenergy, Inc. Use of ribose to enhance plant growth
US7904068B2 (en) 2003-06-06 2011-03-08 At&T Intellectual Property I, L.P. System and method for providing integrated voice and data services utilizing wired cordless access with unlicensed spectrum and wired access with licensed spectrum
DE602004030811D1 (de) 2003-10-16 2011-02-10 Micromet Ag Multispezifische deimmunisierte cd3-bindende moleküle
DE602006017460D1 (de) 2005-03-14 2010-11-25 Omron Tateisi Electronics Co Programmierbares Steuersystem
WO2006138181A2 (en) 2005-06-14 2006-12-28 Amgen Inc. Self-buffering protein formulations
US8234145B2 (en) 2005-07-12 2012-07-31 International Business Machines Corporation Automatic computation of validation metrics for global logistics processes
BRPI0604215A (pt) 2005-08-17 2007-04-10 Biosigma Sa método para projetar oligonucleotìdeos para técnicas de biologia molecular
JP5686953B2 (ja) 2005-10-11 2015-03-18 アムゲン リサーチ （ミュンヘン） ゲーエムベーハー 交差種特異的（ｃｒｏｓｓ−ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体を含む組成物および該組成物の使用
JP2007122396A (ja) 2005-10-27 2007-05-17 Hitachi Ltd ディスクアレイ装置及びその障害対応検証方法
TW200745163A (en) 2006-02-17 2007-12-16 Syntonix Pharmaceuticals Inc Peptides that block the binding of IgG to FcRn
US7919297B2 (en) 2006-02-21 2011-04-05 Cornell Research Foundation, Inc. Mutants of Aspergillus niger PhyA phytase and Aspergillus fumigatus phytase
US7574748B2 (en) 2006-03-07 2009-08-18 Nike, Inc. Glove with support system
US7990860B2 (en) 2006-06-16 2011-08-02 Harris Corporation Method and system for rule-based sequencing for QoS
US8430938B1 (en) 2006-07-13 2013-04-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Control algorithm for autothermal reformer
KR101146588B1 (ko) 2006-08-11 2012-05-16 삼성전자주식회사 Ｆｉｎ 구조체 및 이를 이용한 핀 트랜지스터의 제조방법
CN100589507C (zh) 2006-10-30 2010-02-10 华为技术有限公司 一种拨号提示系统及方法
US7466008B2 (en) 2007-03-13 2008-12-16 Taiwan Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. BiCMOS performance enhancement by mechanical uniaxial strain and methods of manufacture
ES2695047T3 (es) 2007-04-03 2018-12-28 Amgen Research (Munich) Gmbh Dominio de unión específico entre especies
US8209741B2 (en) 2007-09-17 2012-06-26 Microsoft Corporation Human performance in human interactive proofs using partial credit
US8464584B2 (en) 2007-10-19 2013-06-18 Food Equipment Technologies Company, Inc. Beverage dispenser with level measuring apparatus and display
WO2009067987A1 (de) 2007-11-29 2009-06-04 Luk Lamellen Und Kupplungsbau Beteiligungs Kg Kraftübertragungsvorrichtung, insbesondere zur leistungsübertragung zwischen einer antriebsmaschine und einem abtrieb
US8376279B2 (en) 2008-01-23 2013-02-19 Aurora Flight Sciences Corporation Inflatable folding wings for a very high altitude aircraft
EP2268668A1 (en) 2008-04-17 2011-01-05 Ablynx N.V. Peptides capable of binding to serum proteins and compounds, constructs and polypeptides comprising the same
WO2010037838A2 (en) 2008-10-01 2010-04-08 Micromet Ag Cross-species-specific single domain bispecific single chain antibody
JP4956801B2 (ja) 2009-03-04 2012-06-20 日産自動車株式会社 排気ガス浄化触媒及びその製造方法
US8463191B2 (en) 2009-04-02 2013-06-11 Qualcomm Incorporated Beamforming options with partial channel knowledge
RU2607374C2 (ru) 2009-10-30 2017-01-10 Новозаймс Байофарма Дк А/С Варианты альбумина
EP2635598A1 (en) 2010-11-01 2013-09-11 Novozymes Biopharma DK A/S Albumin variants
US9676298B2 (en) 2010-12-30 2017-06-13 C. Rob. Hammerstein Gmbh & Co. Kg Longitudinal adjustment device for a motor vehicle seat, comprising two pairs of rails
RU2650784C2 (ru) 2011-05-05 2018-04-17 Альбумедикс А/С Варианты альбумина
UA116192C2 (uk) 2011-08-23 2018-02-26 Рош Глікарт Аг Активуюча т-клітини біоспецифічна антигензв'язуюча молекула
US20130078250A1 (en) 2011-08-23 2013-03-28 Oliver Ast Bispecific t cell activating antigen binding molecules
EP2780364A2 (en) 2011-11-18 2014-09-24 Eleven Biotherapeutics, Inc. Proteins with improved half-life and other properties
ES2664328T3 (es) 2012-03-16 2018-04-19 Albumedix A/S Variantes de albúmina
US20140128326A1 (en) 2012-11-08 2014-05-08 Novozymes Biopharma Dk A/S Albumin variants
US20140302037A1 (en) 2013-03-15 2014-10-09 Amgen Inc. BISPECIFIC-Fc MOLECULES
US11634502B2 (en) 2013-03-15 2023-04-25 Amgen Inc. Heterodimeric bispecific antibodies
US20140308285A1 (en) 2013-03-15 2014-10-16 Amgen Inc. Heterodimeric bispecific antibodies
EP3049440B1 (en) 2013-09-25 2020-03-25 Amgen Inc. V-c-fc-v-c antibody
TW201609812A (zh) * 2014-07-31 2016-03-16 安美基研究（慕尼黑）公司 最佳化之跨物種特異性雙特異性單鏈抗體構築體
US10105142B2 (en) 2014-09-18 2018-10-23 Ethicon Llc Surgical stapler with plurality of cutting elements
TWI717375B (zh) * 2015-07-31 2021-02-01 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Ｃｄ７０及ｃｄ３抗體構築體
WO2018224441A1 (en) * 2017-06-05 2018-12-13 Numab Innovation Ag Novel anti-cd3 antibodies
AU2019271138A1 (en) * 2018-05-14 2021-01-07 Harpoon Therapeutics, Inc. Binding moiety for conditional activation of immunoglobulin molecules

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