JP2023509448A

JP2023509448A - 抗ｃｄ７３抗体及びその使用

Info

Publication number: JP2023509448A
Application number: JP2022540938A
Authority: JP
Inventors: ジーナストリ，ホレイシオ; エムステュワート，ショーン; カルロスアルマグロ，フアン; ジョウ，ジン; エイブオンペイン，レベッカ
Original assignee: Incyte Corp
Current assignee: Incyte Corp
Priority date: 2020-01-03
Filing date: 2020-12-30
Publication date: 2023-03-08
Also published as: PE20221409A1; IL294436A; KR20220121850A; CR20220317A; WO2021138467A1; TW202128768A; CA3166533A1; AU2020417804A1; MX2022007575A; AR120936A1; CL2022001769A1; CO2022009248A2; CN115135341A; US20210230293A1; EP4084825A1; BR112022013236A2; ECSP22051701A

Abstract

抗ＣＤ７３抗体を開示する。関連する核酸、ベクター、細胞、及び医薬組成物も開示する。抗ＣＤ７３抗体でがんを治療する方法も開示する。

Description

関連出願
本出願は、２０２０年１月３日に出願された米国仮出願第６２／９５６，８４７号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に援用される。

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に援用される。２０２０年１２月２３日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーは、２０４４３－０６４４ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔという名前で、サイズは８９，０２０バイトである。

表面抗原分類７３（ＣＤ７３）は、細胞外アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）からアデノシンへの変換を触媒するグリコシルホスファチジルイノシトール－（ＧＰＩ－）結合膜タンパク質である。それはホモ二量体として機能し、脱落する可能性があり、循環中の可溶性タンパク質として活性を有する。ＣＤ７３は、その酵素機能に加えて、細胞接着分子でもあり、白血球の輸送を調節する役割を果たす。ＣＤ７３レベルは、組織損傷または低酸素状態のために上方制御されることが知られており、多くの固形腫瘍ではＣＤ７３レベルが上昇している。腫瘍内のＣＤ７３の上方制御は、アデノシンが豊富な腫瘍微小環境に寄与し、これには、多数の腫瘍促進効果と免疫抑制効果がある。したがって、がんにおいてＣＤ７３を標的とする治療法が必要である。

一態様では、本開示は、ヒトＣＤ７３に結合する抗体を提供し、抗体は、ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含み：
ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；そして
ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含み；ならびに
抗体は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含み：
ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
ＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；そして
ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む。

第１の態様のいくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む。

第１の態様のいくつかの実施形態では、抗体は重鎖を含み、重鎖は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む。

第１の態様のいくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む。

第１の態様のいくつかの実施形態では、抗体は軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む。

第１の態様のいくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、ＶＬドメインは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である。

第１の態様のいくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む。

第１の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む。

第２の態様では、本開示は、ヒトＣＤ７３に結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する。

第３の態様では、本開示は、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体を提供する。

第１、第２、及び第３の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。

第１、第２、及び第３の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆｓｃフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、またはダイアボディである。

第４の態様では、本開示は、第１～第３の態様のいずれか１つの抗体をコードする核酸または複数の核酸を提供する。

第５の態様では、本開示は、前述の第４の態様の核酸または複数の核酸を含む発現ベクターまたは複数の発現ベクターを提供する。

第６の態様では、本開示は、第４の態様の核酸もしくは複数の核酸、または第５の態様の発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む単離された細胞を提供する。

第７の態様では、本開示は、プロモーターに作動可能に連結された第１～第３の態様のいずれか１つの抗体のＶＨドメインを含む第１のポリペプチドをコードする第１の核酸を含む第１の発現ベクター、及びプロモーターに作動可能に連結された第１～第３の態様のいずれか１つの抗体のＶＬドメインを含む第２のポリペプチドをコードする第２の核酸を含む第２の発現ベクターを含む、単離された細胞を提供する。

第８の態様では、本開示は、第１～第３の態様のいずれか１つの抗体を産生する単離された細胞を提供する。

第９の態様では、本開示は、第６または第７の態様の細胞を培養し、抗体を単離することを含む、第１～第３の態様のいずれか１つの抗体の作製方法を提供する。

第１０の態様では、本開示は、第１～第３の態様のいずれか１つの抗体及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

第１１の態様では、本開示は、有効量の第１～第３の態様のいずれか１つの抗体をヒト対象に投与することを含む、治療を必要とするヒト対象におけるがんの治療方法を提供する。

第１１の態様のいくつかの実施形態では、がんは、高いアデノシンシグネチャーを有する。

第１１の態様のいくつかの実施形態では、がんは、頭頸部癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膀胱癌、肝臓癌、または腎細胞癌である。

第１２の態様では、本開示は、ヒトＣＤ７３に結合する抗体を提供し、この抗体は、ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含み：
ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；そして
ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；ならびに
抗体は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含み：
ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；そして
ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む。

第１２の態様のいくつかの実施形態では、
ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）を含み；
ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；
ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；そして
ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は重鎖を含み、重鎖は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。

第１２の態様のいくつかの実施形態では、
ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；
ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；
ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；そして
ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は重鎖を含み、重鎖は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号６３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。

第１３の態様では、本開示は、ヒトＣＤ７３に結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する。

第１４の態様では、本開示は、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体を提供する。

第１５の態様では、本開示は、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体を提供する。

第１２～第１５の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。

第１２～第１５の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆｓｃフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、またはダイアボディである。

第１６の態様では、本開示は、第１２～第１５の態様のいずれか１つのその抗体をコードする核酸または複数の核酸を提供する。

第１７の態様では、本開示は、プロモーターに作動可能に連結された第１６の態様の核酸または複数の核酸を含む発現ベクターまたは複数の発現ベクターを提供する。

第１８の態様では、本開示は、第１６の態様の核酸もしくは複数の核酸、または第１７の態様の発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む単離された細胞を提供する。

第１９の態様では、本開示は、プロモーターに作動可能に連結された第１２～第１５の態様のいずれか１つの抗体のＶＨドメインを含む第１のポリペプチドをコードする第１の核酸を含む第１の発現ベクター、及びプロモーターに作動可能に連結された第１２～第１５の態様のいずれか１つの抗体のＶＬドメインを含む第２のポリペプチドをコードする第２の核酸を含む第２の発現ベクターを含む、単離された細胞を提供する。

第２０の態様では、本開示は、第１２～第１５の態様のいずれか１つの抗体を産生する単離された細胞を提供する。

第２１の態様では、本開示は、第１８または第１９の態様の細胞を培養し、抗体を単離することを含む、第１２～第１５の態様のいずれか１つの抗体の作製方法を提供する。

第２２の態様では、本開示は、第１２～第１５の態様のいずれか１つの抗体及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

第２３の態様では、本開示は、有効量の第１２～第１５の態様のいずれか１つの抗体をヒト対象に投与することを含む、治療を必要とするヒト対象におけるがんの治療方法を提供する。

第２３の態様のいくつかの実施形態では、がんは、高いアデノシンシグネチャーを有する。第２３の態様のいくつかの実施形態では、がんは、頭頸部癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膀胱癌、肝臓癌、または腎細胞癌である。

ヒト化ＣＬ２５抗体ＣＬ＿ｈｕ１０－４、ＨｚＣＬ２５、ＣＬ２５＿ｈｕ＿１０－６、及びＣＬ２５＿ｈｕ＿１１－４の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。ヒト化ＣＬ２５抗体ＣＬ２５＿ｈｕ＿１１－５、ＣＬ２５＿ｈｕ＿１１－６、ＣＬ２５＿ｈｕ＿８－４、及びＣＬ２５＿ｈｕ＿８－５のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。ヒト化ＣＬ２５抗体ＣＬ２５＿ｈｕ＿８－６、ＣＬ２５＿ｈｕ＿９－４、ＣＬ２５＿ｈｕ＿９－５、及びＣＬ２５＿ｈｕ＿９－６のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。ＣＬ２５抗体及びヒト化ＣＬ２５抗体のＶＨのアラインメントを示す。ＩＭＧＴ定義に従うＣＤＲ配列に下線が引いてある。ＣＬ２５抗体及びヒト化ＣＬ２５抗体のＶＬのアラインメントを示す。ＩＭＧＴ定義に従うＣＤＲ配列に下線が引いてある。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞上の示された濃度での示された抗体の細胞結合（幾何平均蛍光強度［ＧＭＦＩ］によって測定される）を示すグラフである。Ａ３７５細胞上の示された濃度でのＣＬ２５、またはアイソタイプ対照（ｉｓｏｃｔｒｌ）の細胞結合（ＧＭＦＩによって測定される）を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照（ｉｓｏｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理したＡ３７５細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照（ｉｓｏｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照（ｉｓｏｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照（ｉｓｏｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理した組換えＣＤ７３の阻害を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示すグラフである。ヒトＣＤ７３（４Ｈ２Ｆ．ｐｄｂ）の結晶構造のマップであり、ＣＬ２５抗体エピトープを濃い灰色（矢印付き）で示す。直接コンジュゲートした非競合抗体で測定した、示された抗体またはアイソタイプ対照（ｉｓｏｃｔｒｌ）の存在下で、または未処理（ＮＴ）での２４時間のインキュベーション後の表面ＣＤ７３レベルを示すグラフである。アイソタイプ対照（ＩｇＧ対照）または１ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇのＨｚＣＬ２５を投与したマウスの腫瘍接種後の示された日における平均腫瘍体積を示すグラフである。アイソタイプ対照（ＩｇＧ対照）または１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇのＨｚＣＬ２５を投与して処置したマウスから採取した腫瘍におけるＣＤ７３の阻害率を示すグラフである。非競合抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定した、示された抗体により示された用量で処置したマウスのみに由来する腫瘍細胞の単一細胞懸濁液の全表面ＣＤ７３レベルを示すグラフである。競合抗体のＭＦＩによって測定した、示された抗体により示された用量で処置したマウスのみに由来する腫瘍細胞の単一細胞懸濁液の受容体占有率を示すグラフである。１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ｃｘ００３７６－００１）またはＨｚＣＬ２５を接種した後の示された日の平均腫瘍体積を示すグラフである。ｘ軸の三角形は、薬剤を投与した日を示す。アイソタイプ対照（左）またはＨｚＣＬ２５（右）で処置した図１１Ａのマウスの３３日目までの個々の腫瘍体積を示すグラフである。示された抗体またはＩｇＧアイソタイプ対照で処置したマウスの血清中の全体及び遊離の可溶性ｈＣＤ７３の濃度を示すグラフである。全体の可溶性ｈＣＤ７３は、非競合抗体（抗体Ｘ、下段）で検出し、遊離の可溶性ｈＣＤ７３は、競合抗体（ＨｚＣＬ２５、上段）で検出した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞上の示された濃度での抗体３－Ｆ０３の細胞結合（ＧＭＦＩ）を示すグラフである。Ａ３７５細胞における示された濃度での３－Ｆ０３またはアイソタイプ対照（Ｉｓｏｃｔｒｌ）の細胞結合（ＧＭＦＩによって測定）を示すグラフである。３－Ｆ０３またはアイソタイプ対照（Ｉｓｏｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理したＡ３７５細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。３－Ｆ０３またはアイソタイプ対照（Ｉｓｏｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。３－Ｆ０３またはアイソタイプ対照（Ｉｓｏ対照）により、示された濃度で処理した組換えＣＤ７３の阻害を示すグラフである。３－Ｆ０３またはアイソタイプ対照を様々な濃度で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の割合を示す各グラフである。ヒトＣＤ７３（４Ｈ２Ｆ．ｐｄｂ）の結晶構造のマップであり、３－Ｆ０３抗体エピトープを濃い灰色（矢印付き）で示す。直接コンジュゲートした非競合抗体ＣＬ４３－Ｄｙ６５０で測定した、３－Ｆ０３、アイソタイプ対照（ｉｓｏｃｔｒｌ）の存在下、または未処理（ＮＴ）での２４時間のインキュベーション後のＣＤ７３表面レベルを示すグラフである。１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ｃｘ００３７６－００１）または３－Ｆ０３を接種した後の示された日の平均腫瘍体積を示すグラフである。ｘ軸の三角形は、薬剤を投与した日を示す。アイソタイプ対照（左）または３－Ｆ０３（右）で処置した図１９Ａのマウスの３３日目までの個々の腫瘍体積を示すグラフである。３－Ｆ０３またはＩｇＧアイソタイプ対照で処置したマウスの血清中の全体及び遊離の可溶性ｈＣＤ７３の濃度を示すグラフである。全体の可溶性ｈＣＤ７３は、非競合抗体（抗体Ｘ、上段）で検出し、遊離の可溶性ｈＣＤ７３は、競合抗体（３－Ｆ０３、下段）で検出した。３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における示された濃度での示された抗体の細胞結合（ＧＭＦＩ）を示すグラフである。示された抗体またはアイソタイプ対照により、示された濃度で処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。Ｎ２９７Ａ変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（配列番号７３）、Ｃ末端リジンを伴うＮ２９７Ａ変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（配列番号７５）、及びヒトκ軽鎖定常領域（配列番号７４）の例示的なアミノ酸配列を示す。ＨｚＣＬ２５重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡ配列を示す。３－Ｆ０３＿４１１重鎖をコードするＤＮＡ配列を示す。３－Ｆ０３＿４１１及び３－Ｆ０３＿４１３軽鎖ならびに３－Ｆ０３＿４１３重鎖をコードするＤＮＡ配列を示す。アイソタイプ対照抗体、ＨｚＣＬ２５、または３－Ｆ０３で処置した腫瘍におけるアデノシンの濃度を示すグラフである。示された濃度でのＨｚＣＬ２５抗体（Ａｂ）及びＡＭＰのアデノシン阻害を示すグラフである。示された濃度での３－Ｆ０３抗体（Ａｂ）及びＡＭＰのアデノシン阻害を示すグラフである。示された濃度でのＨｚＣＬ２５抗体（Ａｂ）及びＡＭＰのアデノシン阻害を示すグラフである。

本明細書において、抗ＣＤ７３抗体及び関連する核酸、発現ベクター、細胞、及び医薬組成物を提供する。本明細書に記載の抗ＣＤ７３抗体は、がん（例えば、頭頸部癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膀胱癌、肝臓癌、または腎細胞癌）などの障害の治療または予防に有用である。

ＣＤ７３
ＣＤ７３（「５’－ヌクレオチダーゼ」及び「エクト－５’－ヌクレオチダーゼ」としても知られる）は、原形質膜の外面へのＧＰＩ結合によって結合されるホモ二量体として機能する二量体酵素（ＥＣ：３．１．３．５）である。ＣＤ７３は、脱落することができ、循環中の可溶性タンパク質として活性を有する。ＣＤ７３は、細胞外ＡＭＰのアデノシンへの変換を触媒する。ＣＤ７３酵素活性には、ＣＤ７３の開構造での基質結合が必要である。基質結合後、ＣＤ７３は、開構造から閉構造への大きな構造変化を経て、ＡＭＰをアデノシンに変換する（例えば、Ｋｎａｐｐｅｔａｌ．，２０１２，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２０（１２）：２１６１－７３を参照のこと）。ＣＤ７３は、細胞接着分子としても機能し、白血球の輸送を調節する役割を果たす。

ＣＤ７３酵素活性は、がんの促進と転移に役割を果たす（例えば、ＳｔａｇｇａｎｄＳｍｙｔｈ，２０１０，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２９：５３４６－５３５８；ＳａｌｍｉａｎｄＪａｌｋａｎｅｎ，２０１２，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１：２４７－２４８，２０１２；Ｓｔａｇｇ，２０１２，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１：２１７－２１８；Ｚｈａｎｇ，２０１２，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６７－７０を参照のこと）。がん細胞におけるＣＤ７３の過剰発現は、適応性抗腫瘍免疫応答を損なわせ、腫瘍の成長及び転移を増強する（例えば、Ｎｉｅｍｅｌａｅｔａｌ．，２００４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７２：１６４６－１６５３；Ｓａｄｅｊｅｔａｌ．，２００６，ＮｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ，２５：１１１９－１１２３；Ｂｒａｇａｎｈｏｌｅｔａｌ．，２００７，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，１７７０：１３５２－１３５９；Ｚｈａｎｇ，２０１０，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，７０：６４０７－６４１１；Ｚｈａｎｇ，２０１２，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１：６７－７０を参照のこと）。

成熟ヒトＣＤ７３タンパク質の例示的なアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００２５１７のアミノ酸２７～５４９）は以下のとおりである：
ＷＥＬＴＩＬＨＴＮＤＶＨＳＲＬＥＱＴＳＥＤＳＳＫＣＶＮＡＳＲＣＭＧＧＶＡＲＬＦＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬＬＬＤＡＧＤＱＹＱＧＴＩＷＦＴＶＹＫＧＡＥＶＡＨＦＭＮＡＬＲＹＤＡＭＡＬＧＮＨＥＦＤＮＧＶＥＧＬＩＥＰＬＬＫＥＡＫＦＰＩＬＳＡＮＩＫＡＫＧＰＬＡＳＱＩＳＧＬＹＬＰＹＫＶＬＰＶＧＤＥＶＶＧＩＶＧＹＴＳＫＥＴＰＦＬＳＮＰＧＴＮＬＶＦＥＤＥＩＴＡＬＱＰＥＶＤＫＬＫＴＬＮＶＮＫＩＩＡＬＧＨＳＧＦＥＭＤＫＬＩＡＱＫＶＲＧＶＤＶＶＶＧＧＨＳＮＴＦＬＹＴＧＮＰＰＳＫＥＶＰＡＧＫＹＰＦＩＶＴＳＤＤＧＲＫＶＰＶＶＱＡＹＡＦＧＫＹＬＧＹＬＫＩＥＦＤＥＲＧＮＶＩＳＳＨＧＮＰＩＬＬＮＳＳＩＰＥＤＰＳＩＫＡＤＩＮＫＷＲＩＫＬＤＮＹＳＴＱＥＬＧＫＴＩＶＹＬＤＧＳＳＱＳＣＲＦＲＥＣＮＭＧＮＬＩＣＤＡＭＩＮＮＮＬＲＨＴＤＥＭＦＷＮＨＶＳＭＣＩＬＮＧＧＧＩＲＳＰＩＤＥＲＮＮＧＴＩＴＷＥＮＬＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱＬＫＧＳＴＬＫＫＡＦＥＨＳＶＨＲＹＧＱＳＴＧＥＦＬＱＶＧＧＩＨＶＶＹＤＬＳＲＫＰＧＤＲＶＶＫＬＤＶＬＣＴＫＣＲＶＰＳＹＤＰＬＫＭＤＥＶＹＫＶＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬＬＲＨＤＳＧＤＱＤＩＮＶＶＳＴＹＩＳＫＭＫＶＩＹＰＡＶＥＧＲＩＫＦＳ（配列番号７０）。

成熟マウスＣＤ７３タンパク質の例示的なアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０３５９８１のアミノ酸２９～５５１）は、以下のとおりである：
ＷＥＬＴＩＬＨＴＮＤＶＨＳＲＬＥＱＴＳＤＤＳＴＫＣＬＮＡＳＬＣＶＧＧＶＡＲＬＦＴＫＶＱＱＩＲＫＥＥＰＮＶＬＦＬＤＡＧＤＱＹＱＧＴＩＷＦＴＶＹＫＧＬＥＶＡＨＦＭＮＩＬＧＹＤＡＭＡＬＧＮＨＥＦＤＮＧＶＥＧＬＩＤＰＬＬＲＮＶＫＦＰＩＬＳＡＮＩＫＡＲＧＰＬＡＨＱＩＳＧＬＦＬＰＳＫＶＬＳＶＧＧＥＶＶＧＩＶＧＹＴＳＫＥＴＰＦＬＳＮＰＧＴＮＬＶＦＥＤＥＩＳＡＬＱＰＥＶＤＫＬＫＴＬＮＶＮＫＩＩＡＬＧＨＳＧＦＥＭＤＫＬＩＡＱＫＶＲＧＶＤＩＶＶＧＧＨＳＮＴＦＬＹＴＧＮＰＰＳＫＥＶＰＡＧＫＹＰＦＩＶＴＡＤＤＧＲＱＶＰＶＶＱＡＹＡＦＧＫＹＬＧＹＬＫＶＥＦＤＤＫＧＮＶＩＴＳＹＧＮＰＩＬＬＮＳＳＩＰＥＤＡＴＩＫＡＤＩＮＱＷＲＩＫＬＤＮＹＳＴＱＥＬＧＲＴＩＶＹＬＤＧＳＴＱＴＣＲＦＲＥＣＮＭＧＮＬＩＣＤＡＭＩＮＮＮＬＲＨＰＤＥＭＦＷＮＨＶＳＭＣＩＶＮＧＧＧＩＲＳＰＩＤＥＫＮＮＧＴＩＴＷＥＮＬＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱＬＫＧＳＴＬＫＫＡＦＥＨＳＶＨＲＹＧＱＳＴＧＥＦＬＱＶＧＧＩＨＶＶＹＤＩＮＲＫＰＷＮＲＶＶＱＬＥＶＬＣＴＫＣＲＶＰＩＹＥＰＬＥＭＤＫＶＹＫＶＴＬＰＳＹＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬＬＫＨＤＳＧＤＱＤＩＳＶＶＳＥＹＩＳＫＭＫＶＶＹＰＡＶＥＧＲＩＫＦＳ（配列番号７１）。

成熟カニクイザルＣＤ７３タンパク質の例示的なアミノ酸配列は、以下のとおりである：
ＷＥＬＴＩＬＨＴＮＤＶＨＳＲＬＥＱＴＳＥＤＳＳＫＣＶＮＡＳＲＣＭＧＧＶＡＲＬＦＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬＬＬＤＡＧＤＱＹＱＧＴＩＷＦＴＶＹＫＧＡＥＶＡＨＦＭＮＡＬＲＹＤＡＭＡＬＧＮＨＥＦＤＮＧＶＥＧＬＩＥＰＬＬＫＥＡＫＦＰＩＬＳＡＮＩＫＡＫＧＰＬＡＳＱＩＳＧＬＹＬＰＹＫＶＬＰＶＧＤＥＶＶＧＩＶＧＹＴＳＫＥＴＰＦＬＳＮＰＧＴＮＬＶＦＥＤＥＩＴＡＬＱＰＥＶＤＫＬＫＴＬＮＶＮＫＩＩＡＬＧＨＳＧＦＥＴＤＫＬＩＡＱＫＶＲＧＶＤＶＶＶＧＧＨＳＮＴＦＬＹＴＧＮＰＰＳＫＥＶＰＡＧＫＹＰＦＩＶＴＳＤＤＧＲＫＶＰＶＶＱＡＹＡＦＧＫＹＬＧＹＬＫＩＥＦＤＥＲＧＮＶＩＳＳＨＧＮＰＩＬＬＮＳＳＩＰＥＤＰＳＩＫＡＤＩＮＫＷＲＩＫＬＤＮＹＳＴＱＥＬＧＫＴＩＶＹＬＤＧＳＳＱＳＣＲＦＲＥＣＮＭＧＮＬＩＣＤＡＭＩＮＮＮＬＲＨＡＤＥＭＦＷＮＨＶＳＭＣＩＬＮＧＧＧＩＲＳＰＩＤＥＲＮＮＧＴＩＴＷＥＮＬＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱＬＫＧＳＴＬＫＫＡＦＥＨＳＶＨＲＹＧＱＳＴＧＥＦＬＱＶＧＧＩＨＶＶＹＤＬＳＲＫＰＧＤＲＶＶＫＬＤＶＬＣＴＫＣＲＶＰＳＹＤＰＬＫＭＤＥＩＹＫＶＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬＬＲＨＤＳＧＤＱＤＩＮＶＶＳＴＹＩＳＫＭＫＶＩＹＰＡＶＥＧＲＩＫＦＳ（配列番号７２）。

抗ＣＤ７３抗体
本開示は、がんの治療に有用な抗ＣＤ７３抗体を提供する。これらの抗体は、ヒトＣＤ７３に結合することができる。

いくつかの場合では、これらの抗体は、ヒトＣＤ７３及びカニクイザルＣＤ７３に結合する。いくつかの場合では、これらの抗体は、ヒトＣＤ７３及びカニクイザルＣＤ７３に結合し、マウスＣＤ７３には結合しない。そのような抗ＣＤ７３抗体は、抗ＣＤ７３モノクローナル抗体ＣＬ２５、及びそのヒト化バージョンであるＨｚＣＬ２５の配列を含み、そのヒト化バージョンは、ヒト及びカニクイザルＣＤ７３の両方に高い親和性（例えば、ヒト及びカニクイザルＣＤ７３の両方の開構造において、およそ０．５ｎＭ未満）で結合し、マウスＣＤ７３に対しては、検出限界以下の結合を有する。

いくつかの場合では、これらの抗体は、ヒトＣＤ７３、カニクイザルＣＤ７３、及びマウスＣＤ７３に結合する。そのような抗ＣＤ７３抗体は、ヒト、カニクイザル、及びマウスＣＤ７３のそれぞれの開構造に高い親和性（例えば、ヒトＣＤ７３についてはおよそ０．３７ｎＭ、カニクイザルＣＤ７３についてはおよそ０．７３４ｎＭ、そしてマウスＣＤ７３についてはおよそ１．６６ｎＭ）で結合するヒト抗ＣＤ７３モノクローナル抗体３－Ｆ０３の配列を含む。そのような抗ＣＤ７３抗体は、切断不可能なＣＤ７３リガンドであるＡＰＣＰが過剰に存在する場合、ヒト、カニクイザル、及びマウスＣＤ７３のそれぞれの閉構造に対して検出限界以下の結合を示す。

抗体ＨｚＣＬ２５
抗体ＨｚＣＬ２５は、エフェクター機能を低下させるために重鎖定常領域のアスパラギン－２９７（ＥＵナンバリングによるＮ２９７）の位置にアラニンを有するヒト化ＩｇＧ１／κモノクローナル抗体である。この抗体は、ヒト及びカニクイザルＣＤ７３に高い親和性（Ｋ_Ｄ≦０．５ｎＭ）で特異的に結合し、エフェクター機能は低い。

ＨｚＣＬ２５は、ＣＬ２５抗体のキメラバージョンから構築された。ＣＬ２５マウス重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、ＨＩＳタグを含む組換えヒトＣＤ７３（配列番号７０）で免疫化されたマウスから得られた。Ｂ細胞の抗体配列を決定し、マウス重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（配列番号２６）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）（配列番号２７）を、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ（配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び配列番号７４のアミノ酸配列を含むκ軽鎖定常領域）とのキメラとして発現させた。以下の表１は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによるＣＬ２５相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を示す。以下の表１はまた、ＣＬ２５成熟ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列も示す。

ＨｚＣＬ２５を構築するために、ＣＬ２５のＶＨ及びＶＬ配列をヒトＶＨ及びＶＫ遺伝子のデータベースにアラインメントした。マウスＣＬ２５抗体のＣＤＲ（表１）を、ヒトＶＨ及びＶＫ遺伝子に移植した。

以下の表２は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによるＨｚＣＬ２５ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。以下の表２はまた、ＨｚＣＬ２５成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列も示す。

抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を包含することができる。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨを含む（表２を参照のこと）。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む（表２を参照のこと）。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ（表２を参照のこと）、ならびにＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬ（表２を参照のこと）を含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨを含む（表１を参照のこと）。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む（表１を参照のこと）。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ（表１を参照のこと）、ならびにＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬ（表１を参照のこと）を含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５の６つのＣＤＲのうちの１つ以上（すなわち、１、２、３、４、５、または６つ）に、例えば、１、２、または３つの置換を有し得る。いくつかの場合では、抗体は（ｉ）細胞ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例３に記載のアッセイによる測定で、細胞ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉ）可溶性ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例４に記載のアッセイによる測定で、可溶性ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉｉ）開構造のヒトまたはカニクイザルＣＤ７３に高い親和性（例えば、Ｋ_Ｄ≦０．５ｎＭ）で結合するが、マウス由来の開構造のＣＤ７３に有意に結合せず（例えば、実施例６に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｉｖ）閉構造のヒトまたはカニクイザルＣＤ７３に高い親和性（例えば、Ｋ_Ｄ≦０．５ｎＭ）で結合するが、マウス由来の閉構造のＣＤ７３に有意に結合せず；及び／または（ｖ）配列番号７０のアミノ酸４０～５３内の（すなわち、ＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬ（配列番号７６）内の）エピトープに結合し（例えば、実施例６に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｖｉ）ＡＭＰを介したＴ細胞増殖の抑制を低減し（例えば、実施例５に記載のアッセイによる測定で、Ｔ細胞増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低減し）；及び／または（ｖｉｉ）細胞表面ＣＤ７３のレベルを低下させ（例えば、実施例８に記載のアッセイによる測定で、アイソタイプ対照と比較して、例えば、がん細胞上で、例えば、黒色腫癌細胞上で、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｖｉｉｉ）腫瘍増殖を減少させ（例えば、実施例９に記載のアッセイによる測定で、例えば、黒色腫腫瘍の増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させ）；及び／または（ｉｘ）細胞上の遊離表面ＣＤ７３を減少させる（例えば、実施例１１に記載のアッセイによる測定で、例えば、がん細胞、例えば、黒色腫癌で、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させる）。

抗ＣＤ７３抗体は、ＩＭＧＴ定義、またはＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭＣＤＲ定義、もしくはｃｏｎｔａｃｔ定義などであるがこれらに限定されない代替ＣＤＲ定義による、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含み得る。これらの抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１及び／またはＶＨＣＤＲ２及び／またはＶＨＣＤＲ３に、０、１、２、または３つの置換を含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＩＭＧＴ定義、またはＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭＣＤＲ定義、もしくはｃｏｎｔａｃｔ定義などであるがこれらに限定されない代替ＣＤＲ定義による、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３をさらに含む。これらの抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１及び／またはＶＬＣＤＲ２及び／またはＶＬＣＤＲ３に、０、１、２、または３つの置換を含み得る。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び３に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４、５、及び６に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号７、８、及び９に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１、及び６に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１２、１３、及び９に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１、及び６に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１４、１５、及び９に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１、及び６に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１６、１７、及び１８に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１９、２０、及び２１に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号７、８、及び９に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、２９、及び６に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１２、１３、及び９に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、２９、及び６に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１４、１５、及び９に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、２９、及び６に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１６、２８、及び１８に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１９、２０、及び２１に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの場合では、これらの抗体は（ｉ）細胞ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例３に記載のアッセイによる測定で、細胞ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉ）可溶性ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例４に記載のアッセイによる測定で、可溶性ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉｉ）開構造のヒトまたはカニクイザルＣＤ７３に高い親和性（例えば、Ｋ_Ｄ≦０．５ｎＭ）で結合するが、マウス由来の開構造のＣＤ７３に有意に結合せず（例えば、実施例６に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｉｖ）閉構造のヒトまたはカニクイザルＣＤ７３に高い親和性（例えば、Ｋ_Ｄ≦０．５ｎＭ）で結合するが、マウス由来の閉構造のＣＤ７３に有意に結合せず；及び／または（ｖ）配列番号７０のアミノ酸４０～５３内の（すなわち、ＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬ（配列番号７６）内の）エピトープに結合し（例えば、実施例６に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｖｉ）ＡＭＰを介したＴ細胞増殖の抑制を低減し（例えば、実施例５に記載のアッセイによる測定で、Ｔ細胞増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低減し）；及び／または（ｖｉｉ）細胞表面ＣＤ７３のレベルを低下させ（例えば、実施例８に記載のアッセイによる測定で、アイソタイプ対照と比較して、例えば、がん細胞上で、例えば、黒色腫癌細胞上で、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｖｉｉｉ）腫瘍増殖を減少させ（例えば、実施例９に記載のアッセイによる測定で、例えば、黒色腫腫瘍の増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させ）；及び／または（ｉｘ）細胞上の遊離表面ＣＤ７３を減少させる（例えば、実施例１１に記載のアッセイによる測定で、例えば、がん細胞、例えば、黒色腫癌で、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させる）。

特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２２、２６、及び８２～８４のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨを含み、ＶＨは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含む重鎖を含み、この重鎖は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２３、２７、８０、及び８１のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬを含み、このＶＬは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含む軽鎖を含み、この軽鎖は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列；ならびに（ｉｉ）配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列；ならびに（ｉｉ）配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含む重鎖（重鎖は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含む軽鎖（軽鎖は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。

特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号２３、２７、８０、及び８１に記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ、配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。

特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨ（すなわち、配列番号２２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、ＨｚＣＬ２５のＶＨ（すなわち、配列番号２２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５の重鎖（すなわち、配列番号２４に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖を含み、ＶＨは、ＨｚＣＬ２５のＶＨ（すなわち、配列番号２２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＨｚＣＬ２５の重鎖（すなわち、配列番号２４に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬ（すなわち、配列番号２３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬを含み、ＶＬは、ＨｚＣＬ２５のＶＬ（すなわち、配列番号２３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５の軽鎖（すなわち、配列番号２５に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬを含む軽鎖を含み、ＶＬは、ＨｚＣＬ２５のＶＬ（すなわち、配列番号２３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖は、ＨｚＣＬ２５の軽鎖（すなわち、配列番号２５に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨ（すなわち、配列番号２２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬ（すなわち、配列番号２３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、ＨｚＣＬ２５のＶＨ（すなわち、配列番号２２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、ＨｚＣＬ２５のＶＬ（すなわち、配列番号２３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５の重鎖（すなわち、配列番号２４に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５の軽鎖（すなわち、配列番号２５に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖（重鎖は、ＨｚＣＬ２５の重鎖（すなわち、配列番号２４に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬを含む軽鎖（軽鎖は、ＨｚＣＬ２５の軽鎖（すなわち、配列番号２５に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｉｉ）配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

ＨｚＣＬ２５のＣＤ７３結合エピトープは、アミノ酸配列ＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬ（配列番号７６）（すなわち、配列番号７０に記載のアミノ酸配列のアミノ酸４０～５３）内にある。本開示は、配列ＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬ（配列番号７６）内でＣＤ７３に結合する抗体を特徴とする。この開示は、ＨｚＣＬ２５と同じエピトープに結合する抗体を特徴とする。この開示はまた、ヒトＣＤ７３へのＨｚＣＬ２５の結合を競合的に阻害する抗体を特徴とする。

いくつかの実施形態では、ＨｚＣＬ２５のＶＨを、ＣＨ１ドメイン及びヒンジ領域を含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、ＨｚＣＬ２５のＶＨを、ＣＨ３ドメインを含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を含んでいる。特定の実施形態では、ＨｚＣＬ２５のＶＨを、ヒトＩｇＧ１由来のＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１由来ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１由来ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を含んでいる。特定の実施形態では、そのような抗体は、抗体の安定性を増加させる重鎖定常領域における１つ以上の追加の変異を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、抗体の特性を改変する置換（例えば、Ｆｃ受容体結合の減少、抗体グリコシル化の増加または減少、Ｃ１ｑへの結合の減少）を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、エフェクター機能を低下させるために、重鎖定常領域の位置アスパラギン－２９７（ＥＵナンバリングによるＮ２９７）にアラニンを含む。

特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＩｇＧ抗体である。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４抗体である。別の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２抗体である。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、野生型重鎖定常領域と比較して、１つ以上のリジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠く重鎖定常領域を含む。例えば、特定の実施形態では、抗体は、重鎖定常領域のＣＨ３ドメインのＣ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠く重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む。

抗体３－Ｆ０３
抗体３－Ｆ０３は、エフェクター機能を低下させるために重鎖定常領域のアスパラギン－２９７（ＥＵナンバリングによるＮ２９７）の位置にアラニンを有するヒトＩｇＧ１／κモノクローナル抗体である。３－Ｆ０３は、ヒト、カニクイザル、及びマウスＣＤ７３に高い親和性（Ｋ_Ｄ≦２ｎＭ）で特異的に結合し、エフェクター機能が低下している。

３－Ｆ０３は、単一ドナーライブラリーの複数の選択ラウンドによって得られた配列からエンジニアリングした。次いで、このプールに由来するｓｃＦｖカセットを酵母ディスプレイベクターライブラリーに再結合し、マウスＣＤ７３（配列番号７１）を用いたＦＡＣ選択に供した。酵母３－Ｆ０３ｓｃＦｖカセットのアミノ酸配列を、それぞれ配列番号７７及び６５に記載する。

ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７７）；及び
ＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＨＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号６５）。

３－Ｆ０３抗体を構築するために、酵母３－Ｆ０３ＶＨ及びＶＬを以下のように改変し、ヒトＩｇＧ１／κ骨格にクローニングした。ＶＨについては、酵母３－Ｆ０３ＶＨ（配列番号７７）のＮ末端グルタミン酸（Ｅ）を除去し、配列番号７７のＫａｂａｔ位置Ｈ７７（すなわち、配列番号７７の位置７８）のスレオニン（Ｔ）をアラニン（Ａ）に置換した。ＶＬについては、配列番号６５のＮ末端アラニン（Ａ）を除去した。得られた全長ヒト３－Ｆ０３抗体は、それぞれ配列番号６０及び６１のアミノ酸配列に記載のＶＨ及びＶＬを含む。得られた全長ヒト３－Ｆ０３抗体は、本明細書中では「３－Ｆ０３」と称される。以下の表３は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによる３－Ｆ０３ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。以下の表３はまた、３－Ｆ０３成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列も示す。

３－Ｆ０３のバリアントもまた、本明細書に記載する。３－Ｆ０３＿４１１は３－Ｆ０３と同じであるが、３－Ｆ０３＿４１１重鎖は、（ｉ）３－Ｆ０３では欠失しているＮ末端グルタミン酸（Ｅ）を含み、（ｉｉ）３－Ｆ０３には存在するＣ末端リジンを含まない点が異なる。以下の表４は、３－Ｆ０３＿４１１成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を示す。３－Ｆ０３＿４１３は３－Ｆ０３＿４１１と同じであるが、アスパラギン酸（Ｄ）の代わりにＶＨのＫａｂａｔ位置Ｈ５３（配列番号６０の５４位）にグルタミン酸（Ｅ）を含む点が異なる。以下の表５は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによる３－Ｆ０３＿４１３ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。以下の表５はまた、３－Ｆ０３＿４１３成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列も示す。さらなるバリアントを、以下の実施例に記載する（図２１Ａ～図２１Ｊを参照のこと）。

抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を包含することができる。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨを含む（表３を参照のこと）。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む（表３を参照のこと）。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ（表３を参照のこと）、ならびに３－Ｆ０３のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬ（表３を参照のこと）を含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨを含む（表５を参照のこと）。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１３のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む（表５を参照のこと）。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ（表５を参照のこと）、ならびに３－Ｆ０３＿４１３のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬ（表５を参照のこと）を含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３の６つのＣＤＲのうちの１つ以上（すなわち、１、２、３、４、５、または６つ）に、例えば、１、２、または３つの置換を有し得る。いくつかの例では、これらの抗体は（ｉ）細胞ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例１５に記載のアッセイによる測定で、細胞ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉ）可溶性ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例１６に記載のアッセイによる測定で、可溶性ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉｉ）開構造のヒト、カニクイザルまたはマウスＣＤ７３に高い親和性（例えば、Ｋ_Ｄ≦２ｎＭ）で結合し（例えば、実施例１８に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｉｖ）閉構造のヒト、カニクイザルまたはマウスＣＤ７３に結合せず；及び／または（ｖ）配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９内（すなわち、ＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱ（配列番号７８）内）及び配列番号７０のアミノ酸４７０～４８９内（すなわち、ＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬ（配列番号７９）内）のエピトープに結合し（例えば、実施例６に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｖｉ）ＡＭＰを介したＴ細胞増殖の抑制を低減し（例えば、実施例１７に記載のアッセイによる測定で、Ｔ細胞増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低減し）；及び／または（ｖｉｉ）細胞表面ＣＤ７３のレベルを低下させ（例えば、実施例２０に記載のアッセイによる測定で、アイソタイプ対照と比較して、例えば、がん細胞上で、例えば、黒色腫癌細胞上で、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｖｉｉｉ）腫瘍増殖を減少させる（例えば、実施例２１に記載のアッセイによる測定で、例えば、黒色腫腫瘍の増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させる）。

抗ＣＤ７３抗体は、ＩＭＧＴ定義、またはＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭＣＤＲ定義、もしくはｃｏｎｔａｃｔ定義などであるがこれらに限定されない代替ＣＤＲ定義による、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含み得る。これらの抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３のＶＨＣＤＲ１及び／またはＶＨＣＤＲ２及び／またはＶＨＣＤＲ３に、０、１、２、または３つの置換を含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＩＭＧＴ定義、またはＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭＣＤＲ定義、もしくはｃｏｎｔａｃｔ定義などであるがこれらに限定されない代替ＣＤＲ定義による、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３をさらに含む。これらの抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬＣＤＲ１及び／またはＶＬＣＤＲ２及び／またはＶＬＣＤＲ３に、０、１、２、または３つの置換を含み得る。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号３４、３５、及び３６に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号３７、３８、及び３９に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４１、４２、及び５２に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４６、４７、及び５２に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４９、５０、及び５２に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号５３、５４、及び５６に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号５７、５８、及び５９に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号３７、３８、及び３９に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４１、４３、及び５２に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４６、４８、及び５２に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４９、５１、及び５２に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号５３、５５、及び５６に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号５７、５８、及び５９に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、これらの抗体は（ｉ）細胞ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例１５に記載のアッセイによる測定で、細胞ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉ）可溶性ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例１６に記載のアッセイによる測定で、可溶性ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉｉ）開構造のヒト、カニクイザルまたはマウスＣＤ７３に高い親和性（例えば、Ｋ_Ｄ≦２ｎＭ）で結合し（例えば、実施例１８に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｉｖ）閉構造のヒト、カニクイザルまたはマウスＣＤ７３に結合せず；及び／または（ｖ）配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９内（すなわち、ＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱ（配列番号７８）内）及び配列番号７０のアミノ酸４７０～４８９内（すなわち、ＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬ（配列番号７９）内）のエピトープに結合し（例えば、実施例６に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｖｉ）ＡＭＰを介したＴ細胞増殖の抑制を低減し（例えば、実施例１７に記載のアッセイによる測定で、Ｔ細胞増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低減し）；及び／または（ｖｉｉ）細胞表面ＣＤ７３のレベルを低下させ（例えば、実施例２０に記載のアッセイによる測定で、アイソタイプ対照と比較して、例えば、がん細胞上で、例えば、黒色腫癌細胞上で、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｖｉｉｉ）腫瘍増殖を減少させる（例えば、実施例２１に記載のアッセイによる測定で、例えば、黒色腫腫瘍の増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させる）。

特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、またはそれぞれ配列番号３４、４０及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＨを含み、ＶＨは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３０、３３、及び６６に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、またはそれぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含む重鎖を含み、重鎖は、配列番号３０、３３、及び６６に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号６１、６４、及び６５のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＬを含み、ＶＬは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含む軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列；ならびに（ｉｉ）配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、またはそれぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号３０、３３、及び６６に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列；ならびに（ｉｉ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、またはそれぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含む重鎖（重鎖は、配列番号３０、３３、及び６６に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含む軽鎖（軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。

特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、またはそれぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＨを含み、ＶＨは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＬを含み、ＶＬは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号６１、６４、及び６５に記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、または配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。

特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ（すなわち、それぞれ配列番号６２または６３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４～３６に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＨを含み、ＶＨは、３－Ｆ０３＿４１１のＶＨ（すなわち、配列番号６２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＨを含み、ＶＨは、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ（すなわち、配列番号６３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿Ｆ１３の重鎖（すなわち、それぞれ配列番号３０または３３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４～３６に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、３－Ｆ０３＿４１１の重鎖（すなわち、配列番号３０に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、３－Ｆ０３＿４１３の重鎖（すなわち、配列番号３３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ（すなわち、配列番号６１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＬを含み、ＶＬは、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ（すなわち、配列番号６１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３の軽鎖（すなわち、配列番号３１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３の軽鎖（すなわち、配列番号３１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ（すなわち、それぞれ配列番号６２または６３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ（すなわち、配列番号６１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３＿４１１のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４～３６に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、３－Ｆ０３のＶＨ（すなわち、配列番号６２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３＿４１１のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、３－Ｆ０３のＶＬ（すなわち、配列番号６１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３＿４１３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ（すなわち、配列番号６３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３＿４１３のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ（すなわち、配列番号６１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ
、及び（ｉｉ）配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３の重鎖（すなわち、配列番号３０または３３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３の軽鎖（すなわち、配列番号３１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３＿４１１のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４～３６に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖（重鎖は、３－Ｆ０３＿４１１の重鎖（すなわち、配列番号３０に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３＿４１１のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＬを含む軽鎖（軽鎖は、３－Ｆ０３の軽鎖（すなわち、配列番号３１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３＿４１３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖（重鎖は、３－Ｆ０３の重鎖（すなわち、配列番号３３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３＿４１３のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＬを含む軽鎖（軽鎖は、３－Ｆ０３＿４１３の軽鎖（すなわち、配列番号３１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｉｉ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｉｉ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

３－Ｆ０３（及びそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１及び３－Ｆ０３＿４１３）のＣＤ７３結合エピトープは、ＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱ（配列番号７８）（すなわち、配列番号７０に記載のアミノ酸配列のアミノ酸３８６～３９９）及びＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬ（配列番号７９）（すなわち、配列番号７０に記載のアミノ酸配列のアミノ酸４７０～４８９）を含む。本開示は、ＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱ（配列番号７８）及びＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬ（配列番号７９）内でエピトープをＣＤ７３に結合する抗体を特徴とする。本開示は、３－Ｆ０３（またはそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）と同じエピトープに結合する抗体を特徴とする。本開示はまた、ヒトＣＤ７３への３－Ｆ０３（またはそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）の結合を競合的に阻害する抗体を特徴とする。

いくつかの実施形態では、３－Ｆ０３（またはそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨを、ＣＨ１ドメイン及びヒンジ領域を含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、３－Ｆ０３（またはそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨを、ＣＨ３ドメインを含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を含んでいる。特定の実施形態では、３－Ｆ０３のＶＨ（またはそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）を、ヒトＩｇＧ１由来のＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１由来ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１由来ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を含んでいる。特定の実施形態では、そのような抗体は、抗体の安定性を増加させる重鎖定常領域における１つ以上の追加の変異を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、抗体の特性を改変する置換（例えば、Ｆｃ受容体結合の減少、抗体グリコシル化の増加または減少、Ｃ１ｑへの結合の減少）を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、エフェクター機能を低下させるために、重鎖定常領域の位置アスパラギン－２９７（ＥＵナンバリングによるＮ２９７）にアラニン（Ａ）を含む。

抗体断片
いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、抗体断片である。本明細書に記載の抗体の断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｃｂ、及びＦｖ）は、インタクトな抗体のタンパク質分解によって調製され得る。例えば、抗体断片は、全抗体を、パパイン、ペプシン、またはプラスミンなどの酵素で処理することによって得ることができる。全抗体をパパイン消化することにより、Ｆ（ａｂ）_２またはＦａｂフラグメントが生成され、全抗体をペプシン消化することにより、Ｆ（ａｂ’）_２またはＦａｂ’が生成され、全抗体をプラスミン消化することにより、Ｆａｃｂ断片が生成される。

あるいは、抗体断片を、組換え産生することができる。例えば、目的の抗体断片をコードする核酸を構築し、発現ベクターに導入し、好適な宿主細胞で発現させることができる。例えば、Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：２９６８－２９７６（１９９４）、Ｂｅｔｔｅｒ，Ｍ．ａｎｄＨｏｒｗｉｔｚ，Ａ．Ｈ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１７８：４７６－４９６（１９８９）、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ａ．ａｎｄＳｋｅｒｒａ，Ａ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１７８：４７６－４９６（１９８９）、Ｌａｍｏｙｉ，Ｅ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：６５２－６６３（１９８９）、Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ，Ｊ．ｅｔａｌ．、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，（１９８９）１２１：６６３－６６９（１９８９）、及びＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ｅｔａｌ．，ＴＩＢＴＥＣＨ，９：１３２－１３７（１９９１）を参照されたい）。抗体断片はすべて、Ｅ．ｃｏｌｉ中で発現させ、分泌させることができるため、これらの断片を容易に大量に産生することができる。抗体断片は、抗体ファージライブラリから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨ断片を、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ）_２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒｅｔａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：１６３－１６７（１９９２））。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）_２断片を、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎｖｉｖｏ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片については、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。

ミニボディ
いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、ミニボディである。抗ＣＤ７３抗体のミニボディには、ダイアボディ、一本鎖（ｓｃＦｖ）、及び一本鎖（Ｆｖ）_２（ｓｃ（Ｆｖ）_２）が含まれる。

「ダイアボディ」は、遺伝子融合によって構築される二価のミニボディである（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ｅｔａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９０：６４４４－６４４８（１９９３）、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１を参照されたい）。ダイアボディは、２つのポリペプチド鎖からなる二量体である。ダイアボディの各ポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨドメインは、リンカーによって結合される。リンカーを構成するアミノ酸残基の数は、２～１２個の残基（例えば、３～１０個の残基、または５個もしくは約５個の残基）であり得る。ダイアボディ中のポリペプチドのリンカーは、一般的には、短すぎるため、ＶＬとＶＨが互いに結合することはできない。したがって、同じポリペプチド鎖にコードされるＶＬ及びＶＨは、一本鎖可変領域断片を形成することはできないが、代わりに、異なる一本鎖可変領域断片を有する二量体を形成する。その結果、ダイアボディは２つの抗原結合部位を有する。

ｓｃＦｖは、ＶＨ及びＶＬをリンカーと連結することによって得られる一本鎖ポリペプチド抗体である（例えば、Ｈｕｓｔｏｎｅｔａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５：５８７９－５８８３（１９８８）、及びＰｌｉｃｋｔｈｕｎ，“ ＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”Ｖｏｌ．１１３，ＥｄＲｅｓｅｎｂｕｒｇａｎｄＭｏｏｒｅ，ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５，（１９９４）を参照されたい）。連結されるＶＨ及びＶＬの順序は特に限定されず、任意の順序で配置され得る。配置の例として、［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］；または［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］が挙げられる。ｓｃＦｖにおける重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、本明細書に記載の任意の抗ＣＤ７３抗体に由来し得る。

ｓｃ（Ｆｖ）_２は、２つのＶＨ及び２つのＶＬがリンカーによって連結されて、一本鎖を形成するミニボディである（Ｈｕｄｓｏｎ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，（１９９９）２３１：１７７－１８９（１９９９））。ｓｃ（Ｆｖ）_２は、例えば、ｓｃＦｖをリンカーと接続することによって調製することができる。本発明のｓｃ（Ｆｖ）_２は、好ましくは２つのＶＨ及び２つのＶＬが以下の順序で配置されている抗体を含む：一本鎖ポリペプチドのＮ末端から開始して、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ、及びＶＬ（［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］）；ただし、２つのＶＨ及び２つのＶＬの順序は、上記の配置に限定されず、それらは任意の順序で配置され得る。

二重特異性抗体
いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、ＣＤ７３タンパク質の２つの異なるエピトープに結合し得る。他のそのような抗体は、ＣＤ７３結合部位を、別のタンパク質の結合部位と組み合わせ得る。二重特異性抗体は、全長抗体またはその低分子量形態（例えば、Ｆ（ａｂ’）_２二重特異性抗体、ｓｃ（Ｆｖ）_２二重特異性抗体、ダイアボディ二重特異性抗体）として調製することができる。

全長二重特異性抗体の伝統的な産生は、２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の共発現に基づき、これらの２つの鎖は、異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７－５３９（１９８３））。異なるアプローチによると、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメインを、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合する。免疫グロブリン重鎖融合体、また所望の場合は免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを、別個の発現ベクターに挿入し、好適な宿主細胞に共トランスフェクトする。これにより、３つのポリペプチド断片の比率を調整する際に、より大きな自由度が得られる。しかしながら、少なくとも２つのポリペプチド鎖を均等な比率で発現させることにより高収率が得られる場合、２つまたは３つすべてのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。

米国特許第５，７３１，１６８号に記載される別のアプローチに従って、一対の抗体分子間の界面を改変して、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の割合を最大化することができる。好ましい界面は、ＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面由来の１つ以上の小さいアミノ酸側鎖を、より大きい側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換える。大きいアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、大きい側鎖（複数可）と同一または同様のサイズの補償「空洞」が第２の抗体分子の界面上に作製される。これにより、ホモ二量体などの他の望ましくない最終産物よりもヘテロ二量体の収率を増加させるための機序が提供される。

二重特異性抗体としては、架橋または「ヘテロコンジュゲート」抗体が挙げられる。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体のうちの一方をアビジンにカップリングさせ、他方をビオチンにカップリングさせることができる。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の簡便な架橋方法を使用して作製され得る。

「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体断片を作製するための代替機序を提供する。これらの断片は、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによってＶＬに接続されたＶＨを含む。したがって、１つの断片のＶＨ及びＶＬドメインが別の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインと対合させられ、それにより２つの抗原結合部位が形成される。

多価抗体
いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、多価抗体である。多価抗体は、その抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも速く内部移行（及び／または異化）され得る。本明細書に記載される抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有する多価抗体（例えば、四価抗体）であってもよく、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に産生され得る。多価抗体は、二量体化ドメイン、及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。例示的な二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。多価抗体は、３～約８個（例えば、４個）の抗原結合部位を含む（またはそれらからなる）ことができる。多価抗体は、任意選択で少なくとも１つのポリペプチド鎖（例えば、少なくとも２つのポリペプチド鎖）を含み、このポリペプチド鎖（複数可）は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１－（Ｘ１）_ｎ－ＶＤ２－（Ｘ２）_ｎ－Ｆｃを含み得、ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域のポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸またはペプチドスペーサーを表し、ｎは０または１である。

コンジュゲート抗体
いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、コンジュゲート抗体である。本明細書に開示される抗体は、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧで修飾されたポリエチレンイミン（ＰＥＩ）（ＰＥＩ－ＰＥＧ）、ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）（Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）コポリマー）、ヒアルロン酸、放射性物質（例えば、^９０Ｙ、^１３１Ｉ）、蛍光物質、発光物質、ハプテン、酵素、金属キレート剤、薬物、及び毒素（例えば、カルケアマイシン、シュードモナス外毒素Ａ、リシン（例えば、デグリコシル化リシンＡ鎖））などの巨大分子物質を含む様々な分子に結合されるコンジュゲート抗体であってもよい。

一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体の細胞傷害作用を向上させ、それにより、それらの治療効果を向上させるために、抗体を、放射性同位体及び細胞傷害剤を含む強毒性物質とコンジュゲートさせる。これらのコンジュゲートは、標的部位（すなわち、抗体によって認識される抗原を発現する細胞）に選択的に毒性負荷を送達することができ、一方で、抗体によって認識されない細胞は、免除される。毒性を最小限に抑えるために、コンジュゲートは、一般に、血清半減期が短い分子（したがって、マウス配列、及びＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの使用）に基づいて改変される。

特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体を、循環中で、例えば、血液、血清、もしくは他の組織中で、その安定化及び／または保持を、例えば、少なくとも１．５、２、５、１０、または５０倍向上させる部分で修飾する。例えば、抗ＣＤ７３抗体を、ポリマー、例えば、ポリアルキレンオキシドまたはポリエチレンオキシドなどの実質的に非抗原性ポリマーと会合させる（例えば、コンジュゲートする）ことができる。好適なポリマーは、重量によって実質的に変化する。約２００～約３５，０００ダルトン（または約１，０００～約１５，０００、及び２，０００～約１２，５００）の範囲の分子数平均重量を有するポリマーを使用することができる。例えば、抗ＣＤ７３抗体を、水溶性ポリマー、例えば、親水性ポリビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンにコンジュゲートすることができる。そのようなポリマーの例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールなどのポリアルキレンオキシドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、これらのコポリマー及びこれらのブロックコポリマー（ブロックコポリマーの水溶性が維持されることを条件とする）が挙げられる。さらなる有用なポリマーとして、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレンなどのポリオキシアルキレン、ならびにポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレンのブロックコポリマー；ポリメタクリレート；カルボマー；ならびに分枝または非分枝の多糖類が挙げられる。

上述のコンジュゲート抗体は、それぞれ、本明細書に記載の抗体またはその低分子量形態に対して化学修飾を行うことによって調製することができる。抗体を修飾するための方法は、当技術分野で周知である（例えば、ＵＳ５，０５７，３１３及びＵＳ５，１５６，８４０）。

抗体の産生方法
抗体は、細菌または真核細胞において産生され得る。いくつかの抗体、例えば、Ｆａｂは、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞において産生され得る。抗体はまた、形質転換細胞株（例えば、ＣＨＯ、２９３Ｅ、ＣＯＳ）などの真核細胞において産生され得る。さらに、抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｏｗｅｒｓｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３－３５（２００１））、Ｈａｎｓｅｕｌａ、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓなどの酵母細胞内で発現させることができる。目的の抗体を産生するために、抗体をコードするポリヌクレオチドを構築し、発現ベクターに導入し、次いで、好適な宿主細胞に発現させる。標準的な分子生物学的技術を使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を回収する。

抗体を細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させる場合、発現ベクターは、細菌細胞内でそのベクターが増幅可能である特徴を有するべきである。さらに、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＨＢ１０１、またはＸＬ１－ＢｌｕｅなどのＥ．ｃｏｌｉを宿主として使用する場合、ベクターは、例えば、ｌａｃＺプロモーター（Ｗａｒｄｅｔａｌ．，３４１：５４４－５４６（１９８９）、ａｒａＢプロモーター（Ｂｅｔｔｅｒｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１－１０４３（１９８８））、またはＴ７プロモーターなどのＥ．ｃｏｌｉにおいて効率的な発現を可能にすることができるプロモーターを有さなければならない。そのようなベクターの例として、例えば、Ｍ１３シリーズベクター、ｐＵＣシリーズベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ－Ｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ－５Ｘ－１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、「ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓｓｙｓｔｅｍ」（ＱＩＡＧＥＮ）、ｐＥＧＦＰ、及びｐＥＴ（この発現ベクターが使用する場合、宿主は好ましくはＴ７ＲＮＡポリメラーゼを発現するＢＬ２１である）が挙げられる。発現ベクターは、抗体分泌のためのシグナル配列を含有し得る。Ｅ．ｃｏｌｉの周辺質への産生のために、ｐｅｌＢシグナル配列（Ｌｅｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６９：４３７９（１９８７））を、抗体分泌のシグナル配列として使用してもよい。細菌の発現については、塩化カルシウム法またはエレクトロポレーション法を使用して、発現ベクターを細菌細胞に導入してもよい。

抗体を、ＣＨＯ、ＣＯＳ、及びＮＩＨ３Ｔ３細胞などの動物細胞内で発現させる場合、発現ベクターは、これらの細胞内での発現に必要なプロモーター、例えば、ＳＶ４０プロモーター（Ｍｕｌｌｉｇａｎｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，２７７：１０８（１９７９））、ＭＭＬＶ－ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１８：５３２２（１９９０））、またはＣＭＶプロモーターを含む。免疫グロブリンまたはそのドメインをコードする核酸配列に加えて、追加の配列、例えば、宿主細胞内でのベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び選択マーカー遺伝子を、組換え発現ベクターに保有させることができる。選択マーカー遺伝子は、ベクターを導入した宿主細胞の選択を促進することができる（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、及び同第５，１７９，０１７号を参照されたい）。例えば、通常、選択マーカー遺伝子は、ベクターを導入した宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、メトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。選択マーカーを有するベクターの例として、ｐＭＡＭ、ｐＤＲ２、ｐＢＫ－ＲＳＶ、ｐＢＫ－ＣＭＶ、ｐＯＰＲＳＶ、及びｐＯＰ１３が挙げられる。

一実施形態では、抗体を、哺乳動物細胞で産生する。抗体を発現するための例示的な哺乳動物宿主細胞として、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（ＵｒｌａｕｂａｎｄＣｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６－４２２０に記載されるｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を含み、例えば、ＫａｕｆｍａｎａｎｄＳｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１６２１に記載されるように、ＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用される）、ヒト胚性腎臓２９３細胞（例えば、２９３、２９３Ｅ、２９３Ｔ）、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、リンパ球細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞及びＳＰ２細胞、ならびにトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳動物に由来する細胞が挙げられる。例えば、細胞は、哺乳動物内皮細胞である。

抗体発現の例示的な系では、抗ＣＤ７３抗体の抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクター（例えば、ＣＬ２５、ＨｚＣＬ２５、３－Ｆ０３、３－Ｆ０３＿４１１、または３－Ｆ０３＿４１３）を、リン酸カルシウムを介したトランスフェクションによりｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞に導入する。組換え発現ベクター内で、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子はそれぞれ、エンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントまたはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントなどのＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来する）に作用可能に連結され、遺伝子の高レベルの転写を駆動する。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサート選択／増幅を使用して、ベクターでトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子を保有する。選択された形質転換宿主細胞を、抗体重鎖及び軽鎖が発現できるように培養し、抗体を培養培地から回収する。

抗体は、遺伝子改変動物によって産生することもできる。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号は、トランスジェニック哺乳動物の乳腺において抗体を発現させる方法を記載している。乳液特異的プロモーターと目的の抗体をコードする核酸及び分泌用のシグナル配列を含む導入遺伝子を構築する。そのようなトランスジェニック哺乳動物の雌によって産生される乳液は、その内部に分泌される、目的の抗体を含む。抗体は、乳液から精製するか、またはいくつかの用途のために直接使用することができる。本明細書に記載される核酸のうちの１つ以上を含む動物も提供する。

本開示の抗体を、宿主細胞の内部または外部（培地など）から単離し、実質的に純粋で均質な抗体として精製することができる。抗体精製のために一般的に使用される単離方法及び精製方法を、抗体の単離及び精製のために使用してもよく、これらは任意の特定の方法に限定されない。抗体は、例えば、カラムクロマトグラフィー、濾過、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動、透析、及び再結晶化を適切に選択し、組み合わせることによって単離し、精製してもよい。クロマトグラフィーとして、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、及び吸着クロマトグラフィーが挙げられる（ＳｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＣｏｕｒｓｅＭａｎｕａｌ．ＥｄＤａｎｉｅｌＲ．Ｍａｒｓｈａｋｅｔａｌ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，１９９６）。クロマトグラフィーは、ＨＰＬＣ及びＦＰＬＣなどの液相クロマトグラフィーを使用して実施することができる。アフィニティークロマトグラフィーに使用するカラムとして、プロテインＡカラム及びプロテインＧカラムが挙げられる。プロテインＡカラムを使用するカラムの例として、ＨｙｐｅｒＤ、ＰＯＲＯＳ、及びＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が挙げられる。本開示はまた、これらの精製方法を使用して高度に精製される抗体も含む。

ポリヌクレオチド、発現ベクター、及び細胞
本開示はまた、本明細書に記載の抗ＣＤ７３抗体またはその一部（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＨＣ、またはＬＣ）をコードするポリヌクレオチド及びベクターを提供する。本開示のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であり得る。いくつかの例では、ポリヌクレオチドはＤＮＡである。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）である。いくつかの例では、ポリヌクレオチドはＲＮＡである。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨをコードする（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと）。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬをコードする（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと）。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨを含む重鎖をコードする（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと）。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む軽鎖をコードする（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと）。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨを含む（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと））；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと））を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨを含む重鎖を含む（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと））；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む軽鎖を含む（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと））を含む。いくつかの例では、第１の核酸を第１のプロモーターに作動可能に連結し、第２の核酸を第２のプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）のＶＨをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）のＶＬをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）のＶＨを含む）；及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）のＶＬを含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、第１の核酸は、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列をコードし、第２の核酸は、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列をコードする。いくつかの例では、第１の核酸は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列をコードし、第２の核酸は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列をコードする。いくつかの例では、第１の核酸を第１のプロモーターに作動可能に連結し、第２の核酸を第２のプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）の重鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号８９に記載の配列を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）の軽鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号９０に記載の配列を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）の重鎖及びＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）の軽鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）配列番号８９に記載の配列を含む第１の核酸、及び（ｉｉ）配列番号９０に記載の配列を含む第２の核酸を含む。いくつかの例では、第１の核酸を第１のプロモーターに作動可能に連結し、第２の核酸を第２のプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨを含む）；及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬを含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、第１の核酸は、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列をコードし、第２の核酸は、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列をコードする。いくつかの例では、第１の核酸は、配列番号６２に記載のアミノ酸配列をコードし、第２の核酸は、配列番号６１に記載のアミノ酸配列をコードする。いくつかの例では、第１の核酸は、配列番号６３に記載のアミノ酸配列をコードし、第２の核酸は、配列番号６１に記載のアミノ酸配列をコードする。いくつかの例では、第１の核酸を第１のプロモーターに作動可能に連結し、第２の核酸を第２のプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）の重鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３０、３３、及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３０、３３、及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３０、３３、及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号９１に記載の配列を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号９３に記載の配列を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）の軽鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号９２に記載の配列を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）の重鎖及び３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）の軽鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号３０、３３，及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号３０、３３、及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号３０、３３、及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）配列番号９１に記載の配列を含む第１の核酸、及び（ｉｉ）配列番号９２に記載の配列を含む第２の核酸を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）配列番号９３に記載の配列を含む第１の核酸、及び（ｉｉ）配列番号９２に記載の配列を含む第２の核酸を含む。いくつかの例では、第１の核酸を第１のプロモーターに作動可能に連結し、第２の核酸を第２のプロモーターに作動可能に連結する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは単離されている。

本明細書ではまた、本明細書に記載の抗ＣＤ７３抗体またはその一部（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＨＣ、及び／またはＬＣ）をコードする発現ベクターも提供する。本明細書ではまた、本明細書に記載の１つ以上のポリヌクレオチドを含む発現ベクターも提供する。様々なタイプの発現ベクターが当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている（例えば、上記の「抗体の産生方法」の節を参照されたい）。

本明細書ではまた、本明細書に記載の抗ＣＤ７３抗体を含む細胞も提供する。本明細書ではまた、本明細書に記載の１つ以上のポリヌクレオチドを含む細胞も提供する。本明細書ではまた、本明細書に記載の１つ以上の発現ベクターを含む細胞も提供する。様々なタイプの細胞が当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている（例えば、上記の「抗体の産生方法」の節を参照されたい）。

グリコシル化を改変した抗ＣＤ７３抗体
異なる糖形態は、薬物動態、薬力学、受容体相互作用、及び組織特異的標的化を含む、治療薬の特性に深く影響を及ぼし得る（Ｇｒａｄｄｉｓｅｔａｌ．，２００２，ＣｕｒｒＰｈａｒｍＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：２８５－２９７）。特に、抗体について、オリゴ糖構造は、抗体のエフェクター機能（例えば、ＣＤＣを誘導する補体複合体Ｃ１への結合、及びＡＤＣＣ経路の調節を担うＦｃγＲ受容体への結合）に加えて、プロテアーゼ耐性、ＦｃＲｎ受容体によって媒介される抗体の血清半減期、食作用、及び抗体フィードバックに関連する特性に影響を及ぼし得る（ＮｏｓｅａｎｄＷｉｇｚｅｌｌ，１９８３、ＬｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗａｎｄＤｗｅｋ，１９８３；Ｌｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗｅｔａｌ．，１９８５、Ｗａｌｋｅｒｅｔａｌ．，１９８９、Ｃａｒｔｅｒｅｔａｌ．，１９９２，ＰＮＡＳ，８９：４２８５－４２８９）。

したがって、抗体のエフェクター機能を調節する別の手段は、抗体定常領域のグリコシル化を改変することを含む。グリコシル化の改変には、例えば、グリコシル化残基の数の減少または増加、グリコシル化残基のパターンまたは位置の変化、及び糖構造（複数可）の変化が含まれる。ヒトＩｇＧに見出されるオリゴ糖は、それらのエフェクター機能の程度に影響を及ぼし（Ｒａｊｕ，Ｔ．Ｓ．ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＡｐｒｉｌ２００３．４４－５３）；ヒトＩｇＧオリゴ糖の微小不均一性は、ＣＤＣ及びＡＤＣＣなどの生物学的機能、様々なＦｃ受容体への結合、ならびにＣｌｑタンパク質への結合に影響を及ぼし得る（ＷｒｉｇｈｔＡ．＆ＭｏｒｒｉｓｏｎＳＬ．ＴＩＢＴＥＣＨ１９９７，１５２６－３２；Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００１２７６（９）：６５９１－６０４；Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００２；２７７（３０）：２６７３３－４０；Ｓｈｉｎｋａｗａｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００３２７８（５）：３４６６－７３；Ｕｍａｎａｅｔａｌ．ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９Ｆｅｂ；１７（２）：１７６－８０）。例えば、Ｃ１ｑに結合し、補体カスケードを活性化するＩｇＧの能力は、２つのＣＨ２ドメインの間に位置付けられた炭水化物部分（通常Ａｓｎ２９７に固定されている）の存在、非存在、または修飾に依存し得る（ＷａｒｄａｎｄＧｈｅｔｉｅ，ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２：７７－９４（１９９５））。したがって、いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、野生型定常領域に対して、Ａｓｎ２９７Ａｌａ置換を含む。

Ｆｃ含有ポリペプチド内、例えば、ＩｇＧ抗体などの抗体内のグリコシル化部位は、標準的な技術によって同定され得る。グリコシル化部位の同定は、実験により、または配列解析もしくはモデリングデータに基づくことができる。コンセンサスモチーフ、すなわち、様々なグリコシルトランスフェラーゼによって認識されるアミノ酸配列が記載されている。例えば、Ｎ結合グリコシル化モチーフのコンセンサスモチーフは、高頻度でＮＸＴまたはＮＸＳであり、式中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸であり得る。潜在的なグリコシル化モチーフを見つけるためのいくつかのアルゴリズムも記載されている。したがって、抗体またはＦｃ含有断片内の潜在的なグリコシル化部位を同定するために、公開データベース、例えば、ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｅｑｕｅｎｃｅＡｎａｌｙｓｉｓによって提供されるウェブサイトを使用して、抗体の配列を調べる（Ｎ結合グリコシル化部位を予測するためのＮｅｔＮＧｌｙｃサービス及びＯ結合グリコシル化部位を予測するためのＮｅｔＯＧｌｙｃサービスを参照されたい）。

ｉｎｖｉｖｏ研究により、アグリコシル抗体のエフェクター機能が低減していることが確認されている。例えば、アグリコシル抗ＣＤ８抗体は、マウスにおけるＣＤ８保有細胞を枯渇させることができず（Ｉｓａａｃｓ，１９９２Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：３０６２）、アグリコシル抗ＣＤ３抗体は、マウスまたはヒトにおいてサイトカイン放出症候群を誘導しない（Ｂｏｙｄ，１９９５（上記）；Ｆｒｉｅｎｄ，１９９９Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ６８：１６３２）。抗ＣＤ７３抗体のアグリコシル化形態もまた、エフェクター機能が低減している。

重要なことに、ＣＨ２ドメイン内のグリカンの除去は、エフェクター機能に有意な影響を及ぼすように見えるが、抗体の他の機能的特性及び物理的特性は、変化しないままである。具体的には、グリカンの除去は、血清半減期及び抗原への結合にほとんどまたは全く影響を及ぼさないことが示されている（Ｎｏｓｅ，１９８３（上記）；Ｔａｏ，１９８９（上記）；Ｄｏｒａｉ，１９９１（上記）；Ｈａｎｄ，１９９２（上記）；Ｈｏｂｂｓ，１９９２Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：９４９）。

本発明の抗ＣＤ７３抗体を、（第２のＣＤ７３特異的抗体と比較して）エフェクター機能（複数可）の増加または低下を誘発するように修飾または改変してもよい。抗体のグリコシル化部位を改変するための方法は、例えば、ＵＳ６，３５０，８６１及びＵＳ５，７１４，３５０、ＷＯ０５／１８５７２及びＷＯ０５／０３１７５に記載されており；これらの方法を使用して、改変された、低減された、またはグリコシル化されていない本発明の抗ＣＤ７３抗体を産生することができる。

効能
本開示の抗ＣＤ７３抗体は、ＣＤ７３の活性を調節することができる。したがって、ＣＤ７３を本明細書に記載の抗体または組成物のうちのいずれか１つ以上と接触させることによるＣＤ７３の阻害方法において、本明細書に記載の化合物、塩または立体異性体を使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の有効量の抗体を投与することによる、阻害を必要とする個体／患者におけるＣＤ７３活性の阻害方法において、この抗体を使用することができる。いくつかの実施形態では、調節は、阻害である。いくつかの実施形態では、接触は、ｉｎｖｉｖｏである。いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏである。

本開示の別の態様は、治療を必要とする個体に、治療有効量または治療有効用量の本開示の１つ以上の抗体またはその医薬組成物を投与することによる、個体（例えば、患者）におけるＣＤ７３関連疾患または障害の治療方法に関する。ＣＤ７３関連疾患または障害には、過剰発現及び／または異常な活性レベルを含む、ＣＤ７３の発現または活性に直接または間接的に関連づけられる任意の疾患、障害、または病態が含まれ得る。

本開示の別の態様は、治療を必要とする個体に、治療有効量または治療有効用量の本開示の１つ以上の抗体またはその医薬組成物を投与することによる、個体（例えば、患者）における疾患または障害（例えば、がん）の処置方法に関し、疾患または障害は、高いアデノシンシグネチャーを有する。疾患または障害が高いアデノシンシグネチャーを有することを判定する方法は、当技術分野で公知である。例えば、腫瘍組織の遺伝子発現分析を、定義されたアデノシン応答性遺伝子パネルを使用して実行することができる。

本開示の化合物は、例えば、がん、炎症性疾患、心血管疾患、神経変性疾患、免疫調節障害、中枢神経系疾患、及び糖尿病を含む、ＣＤ７３の活性に関連する疾患の治療に有用である。

複数の免疫抑制メカニズムにおけるＣＤ７３の説得力のある役割に基づいて、阻害剤を開発することにより、免疫系を増強して腫瘍の進行を抑制することができる。抗ＣＤ７３抗体は、単独で、または他の治療法と組み合わせて、膀胱癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺転移性）、黒色腫（例えば、転移性黒色腫）、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、結腸直腸癌、膵臓癌、食道癌、前立腺癌、腎臓癌、皮膚癌、甲状腺癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、子宮癌、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、及び腎細胞癌を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態では、前立腺癌は、転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）である。いくつかの実施形態では、結腸直腸癌は結腸直腸癌腫（ＣＲＣ）である。

いくつかの実施形態では、疾患または障害は、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、黒色腫、膵臓癌、乳癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、結腸癌、子宮内膜癌、膀胱癌、皮膚癌、子宮癌、腎癌、胃癌、または肉腫である。いくつかの実施形態では、肉腫は、アスキン腫瘍、ブドウ状肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性神経鞘腫、骨肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、葉状嚢肉腫、隆起性皮膚線維肉腫、デスモイド腫瘍、線維形成性小丸細胞腫瘍、類上皮肉腫、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、血管周囲細胞腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、または未分化多形肉腫である。

いくつかの実施形態では、疾患または障害は、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、結腸直腸癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、黒色腫、卵巣癌、膀胱癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、または腎細胞癌である。

いくつかの実施形態では、疾患または障害は、中皮腫または副腎癌である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、中皮腫である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、副腎癌である。

ＭＤＳＣ（骨髄系由来抑制細胞）は、骨髄系列（骨髄幹細胞を起源とする細胞のファミリー）由来の不均一な免疫細胞の群である。ＭＤＳＣは、造血の変化の結果として、慢性感染症及びがんなどの病理学的状況で強力に増殖する。ＭＤＳＣは、免疫刺激特性ではなく強力な免疫抑制活性を有することで、他の骨髄細胞型とは区別される。他の骨髄系細胞と同様に、ＭＤＳＣは、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及びナチュラルキラー細胞を含む他の種類の免疫細胞と相互作用して、それらの機能を調節する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物などは、マクロファージ及び／またはＭＤＳＣの浸潤の高い基礎レベルを伴う固形腫瘍を含む、ＭＤＳＣの高い浸潤を伴うがん組織（例えば、腫瘍）に関連する方法に使用され得る。

いくつかの実施形態では、本開示の抗体を、ブレオマイシン誘発性肺線維症及びアデノシンデアミナーゼ欠損症に関連する傷害を含む肺炎の治療に使用することができる。

いくつかの実施形態では、本開示の抗体を、アレルギー反応（例えば、ＣＤ７３依存性アレルギー反応）及び他のＣＤ７３免疫反応などの炎症性疾患の治療薬として使用することができる。本開示の抗体によって治療することができるさらなる炎症性疾患には、呼吸障害、敗血症、再灌流傷害、及び血栓症が含まれる。

いくつかの実施形態では、本開示の抗体を、心血管疾患、例えば、冠状動脈疾患（心筋梗塞、狭心症、心不全）、脳血管疾患（脳卒中、一過性虚血性発作）、末梢動脈疾患、ならびにアテローム性動脈硬化及び動脈瘤の治療薬として使用することができる。アテローム性動脈硬化は、多くの種類の心血管疾患の根本的な病因である。アテローム性動脈硬化は、青年期に脂肪線条で始まり、成人期にプラークに進行し、最終的に血管の閉塞を引き起こす血栓性事象を引き起こし、臨床的に有意な罹患率と死亡率をもたらす。

いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、運動活動；線条体黒質ドーパミン系の変性によって引き起こされる欠損症；及びパーキンソン病；うつ病の動機付けの症状のいくつかにおける障害の治療として使用することができる。

いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、糖尿病及びインスリン抵抗性などの関連する障害の治療薬として使用することができる。糖尿病は、アデノシンの産生ならびにＩＬ－６及びＣＲＰ産生を刺激するＡ２Ｂアデノシン受容体（Ａ２ＢＲ）の発現、インスリン抵抗性、ならびにＡ２ＢＲ遺伝子一塩基多型（ＡＤＯＲＡ２ＢＳＮＰ）と炎症マーカーとの関連性に影響を及ぼす。糖尿病におけるＡ２ＢＲシグナル伝達の増加は、炎症誘発性メディエーターを上昇させることにより、インスリン抵抗性を部分的に増加させ得る。選択的抗ＣＤ７３抗体は、インスリン抵抗性の治療に役立ち得る。

同じ意味で使用される用語「個体」または「患者」または「対象」とは、哺乳動物、好ましくはマウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、最も好ましくはヒト（すなわち、ヒト対象）を含む任意の動物を指す。

語句「治療有効量」とは、研究者、獣医、医師、または他の臨床医が組織、系、動物、個体またはヒトにおいて求めている生物学的または医薬的応答を引き出す、活性抗体または医薬品の量を指す。

本明細書中で使用する場合、用語「治療すること」または「治療」とは、１）疾患を阻害すること；例えば、疾患、病態または障害の病理または症状を経験するか、または示している個体における疾患、病態または障害を阻害すること（すなわち、病理または症状のさらなる進行を阻止すること）；及び２）疾患を改善すること；例えば、疾患、病態または障害の病理または症状を経験するか、または示している個体における疾患、病態または障害を改善すること（すなわち、病態または症状を逆転させること）、例えば、疾患の重症度を低下させること、のうちの１つ以上を指す。

いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、本明細書中で言及する疾患のいずれかを発症するリスクの予防または低減に；例えば、疾患、病態または障害に罹患しやすい可能性があるが、疾患の病理または症状をまだ経験していないか、または呈していない個体における疾患、病態、または障害を発症するリスクの予防または低減に有用である。

医薬組成物
本明細書に記載の抗ＣＤ７３抗体は、例えば、本明細書に記載の障害を治療するために、対象に投与するための医薬組成物として製剤化することができる。一般的に、医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含む。本明細書中で使用する場合、「薬剤的に許容される担体」には、生理的に適合性である、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌薬剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩を含み得る（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１－１９を参照されたい）。

医薬製剤は確立された技術であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓａｎｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈＥｄ．，ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆ＷｉｌｋｉｎｓＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；及びＫｉｂｂｅ（ｅｄ．），ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓＡｍｅｒｉｃａｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，３ｒｄｅｄ．（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）においてさらに説明されている。

医薬組成物は、様々な形態であり得る。これらには、例えば、液体溶液（例えば、注射用及び注入用溶液）、分散剤または懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム及び坐剤などの液体、半固体及び固体剤形が含まれる。好ましい形態は、意図される投与様式及び治療的用途に依存し得る。一般的には、本明細書に記載の薬剤のための組成物は、注射可能または注入可能な溶液の形態である。

組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソーム、または高い濃度での安定な保存に好適な他の秩序ある構造として、製剤化することができる。滅菌注射液は、必要な量の本明細書に記載の薬剤を、上に列挙された成分のうちの１つまたはその組み合わせと共に、適切な溶媒に組み込み、続いて必要に応じて、濾過滅菌することによって調製することができる。一般的に、本明細書に記載の薬剤を、基本の分散媒、及び上で列挙された成分由来の必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって、分散液を調製する。滅菌注射液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、本明細書に記載の薬剤に、任意の追加的な所望の成分の事前に滅菌濾過された溶液から任意の追加的な所望の成分を添加した粉末をもたらす、真空乾燥及び凍結乾燥である。例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合、必要とされる粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって、溶液の適切な流動性が維持され得る。組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを含ませることによって、注射用組成物の持続的吸収をもたらすことができる。

特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体を、インプラントを含む徐放性製剤及びマイクロカプセル化送達系など、急速放出から化合物を保護する担体を用いて調製してもよい。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤の調製のための多くの方法は、特許取得されているか、または一般的に知られている。例えば、ＳｕｓｔａｉｎｅｄａｎｄＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９７８）を参照されたい。

投与
抗ＣＤ７３抗体は、様々な方法によって、対象、例えば、それを必要とする対象、例えば、ヒト対象に投与することができる。多くの用途で、投与経路は：静脈内注射または注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）、または筋肉内注射のうちの１つである。関節内送達を使用することも可能である。非経口投与の他の様式も使用することができる。そのような様式の例として：動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、ならびに硬膜外及び胸骨内注射が挙げられる。いくつかの場合では、投与は経口であり得る。

抗体の投与経路及び／または投与様式はまた、例えば、腫瘍を視覚化するために、例えば断層撮像を使用して、例えば、対象をモニタリングすることによって、個々の症例に合わせて調整することができる。

抗体は、固定用量として、またはｍｇ／ｋｇ患者体重の用量で投与することができる。用量はまた、抗ＣＤ７３抗体に対する抗体の産生を低減または回避するように選択され得る。投薬レジメンは、所望の応答、例えば、治療応答、または組み合わせ治療効果を提供するために調整される。一般的に、対象に薬剤を生体利用可能な量で提供するために、抗ＣＤ７３抗体（及び任意選択で第２の薬剤）の用量を使用することができる。

本明細書中で使用する投薬単位形態または「固定用量」または「均一用量」は、対象を治療するための単位投薬量として適した、物理的に別々の単位を指し；各単位は、必要な医薬担体に関連して、及び任意選択で他の薬剤に関連して、所望の治療効果をもたらすように算出された、既定量の活性化合物を含有する。単回または複数回の投薬を行ってもよい。あるいは、またはさらに、抗体を、連続注入により投与してもよい。

以下は、本発明の実施の例である。これらの実施例は、いかなる意味でも本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

以下の実施例は、特許請求される発明をよりよく例示するために提供され、本発明の範囲を限定するものとは意図されない。特定の材料が言及される範囲では、それは単に例示の目的のためのものであり、本発明を限定するようには意図されない。当業者は、発明の能力を働かせることなく、かつ本発明の範囲から逸脱することなく、等価な手段または反応物を開発することができる。

実施例１：抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体の生成
抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体を生成するために、マウスをＣ末端ＨＩＳタグを含む組換えヒトＣＤ７３（配列番号７０）タンパク質で免疫し、Ｂ細胞をマウスの脾臓及びリンパ節から単離した。Ｂ細胞の抗体配列を、１０×ＧｅｎｏｍｉｃｓＶＨ／ＶＬペアＢ細胞配列決定法を使用して決定した。マウスＶＨ／ＶＬペアを、ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ（配列番号７３及び７４）とのキメラとして発現させ、結合及び機能性について試験した。このプロセスによってＣＬ２５と称される抗体を産生した。上記の表１は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによるＣＬ２５ＣＤＲ、ならびに成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列を示す。

キメラ抗体ＣＬ２５（配列番号２６のマウスＶＨ及び配列番号２７のマウスＶＬを含む）をヒト化して、特異的活性を維持しながら抗体フレームワークの免疫原性を最小化した。ＶＨ及びＶＬ配列をヒトＶＨ及びＶＫ遺伝子のデータベースにアラインメントすることによって、ヒト化を実施した。マウスＣＬ２５抗体のＣＤＲ（表１）を、いくつかの上位ヒトＶＨ及びＶＫ遺伝子に移植した。例示的なヒト化ＣＬ２５抗体のＶＨ及びＶＬ配列を図１Ａ～図１Ｃに示す。ＣＬ２５及び例示的なヒト化ＣＬ２５抗体のＶＨ及びＶＬのアラインメントをそれぞれ図１Ｄ及び図１Ｅに示す。マウスＣＬ２５に存在するいくつかのフレームワーク変異も、マウスＣＤＲとともに試験した（図１Ａ～図１Ｅ）。配列番号２２のＶＨ及び配列番号２３のＶＬを有するＣＬ２５のヒト化バージョン（本明細書中では「ＨｚＣＬ２５」と称される）を、さらなる研究のために選択した。上記の表２は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによるＨｚＣＬ２５ＣＤＲ、ならびに成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列を示す。

実施例２：細胞表面ＣＤ７３への抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体の結合
ヒト化及び非ヒト化ＣＬ２５クローンの細胞表面ＣＤ７３への結合を試験するために、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１またはＡ３７５細胞を洗浄し、５×１０^４細胞／ウェルで９６ウェルプレートに添加した。細胞を、示された濃度の抗体で氷上で３０分間染色した（図２Ａ及び図２Ｂ）。次に、細胞を洗浄し、フィコエリトリン（ＰＥ）にコンジュゲートしたヤギ抗マウス二次抗体を使用して氷上で３０分間染色した。次いで細胞を洗浄し、フローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ７３染色の幾何平均蛍光強度（ＧＭＦＩ）をグラフ化した（図２Ａ及び図２Ｂ）。ＣＬ２５とＨｚＣＬ２５はどちらも、高レベルの表面ＣＤ７３（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞）と中レベルの表面ＣＤ７３（Ａ３７５細胞で試験）を有する細胞に高い効力の結合を示した。

実施例３：抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体を介した細胞ＣＤ７３阻害
細胞上のＣＤ７３活性を阻害する抗ＣＤ７３抗体の能力を測定するために、Ａ３７５細胞及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を無血清ＲＰＭＩ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で洗浄し、９６ウェルプレートに、Ａ３７５については８×１０^４細胞／ウェル、またはＭＤＡ－ＭＢ－２３１については１×１０^４細胞／ウェルの濃度で播種した。細胞を、示された濃度の抗体またはＡＰＣＰと共に３７℃、５％ＣＯ_２にて３０分間インキュベートした（図３Ａ、図３Ｂ、及び図３Ｃ）。次に、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）を最終濃度が１００μＭになるように添加し、細胞を３７℃、５％ＣＯ_２にてさらに３時間インキュベートした。プレートを３００ｇで１～２分間遠心分離し、２５μＬの上清を新しい９６ウェルプレートに移した。製造元の指示（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従ってＡＭＰ－Ｇｌｏアッセイを使用した。相対発光単位（ＲＬＵ）は、このアッセイのＡＭＰ濃度と直接相関している。結果を図３Ａ、図３Ｂ、及び図３Ｃに示す。

ＣＬ２５とＨｚＣＬ２５はどちらも、試験した両方の細胞型において細胞ＣＤ７３を阻害するのに良好な効力を有していた（図３Ａ、図３Ｂ、及び図３Ｃ）。ＨｚＣＬ２５は、ＣＬ２５と同様の細胞ＣＤ７３阻害能力を有していた（図３Ａ、図３Ｂ、及び図３Ｃ）。

実施例４：抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体を介した可溶性ＣＤ７３阻害
組換えタンパク質のＣＤ７３活性を阻害するＣＤ７３抗体の能力を測定するために、組換えヒトＣＤ７３（ｒｈｕＣＤ７３）（配列番号７０）を最終濃度０．００８μｇ／ｍＬで、示された濃度の抗体（図４）またはアデノシン５’－［α，β－メチレン］二リン酸（ＡＰＣＰ）と共に９６ウェルプレートに添加し、３７℃、５％ＣＯ_２にて３０分間インキュベートした。３０分間のインキュベーション後、ＡＭＰを最終濃度１００μＭになるように添加し、反応物を３７℃、５％ＣＯ_２にてさらに３時間インキュベートした。２５μＬの上清を新しい９６ウェルプレートに移した。製造元の指示に従ってＡＭＰ－Ｇｌｏアッセイを使用した。ＲＬＵは、このアッセイのＡＭＰ濃度と直接相関している。結果を図４に示す。ＣＬ２５とＨｚＣＬ２５はどちらも高い効力を示し、フック効果はなかった（図４）。ＨｚＣＬ２５は、ＣＬ２５と同様の細胞ＣＤ７３阻害能力を有していた（図４）。

実施例５：Ｔ細胞増殖のＡＭＰ媒介抑制の抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体を介した逆転
Ｔ細胞増殖のＡＭＰ媒介抑制を逆転させるＣＤ７３抗体の能力を測定するために、ヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞分離キット（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を使用して、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から初代ヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞を精製した。単離されたＣＤ４^＋Ｔ細胞を、製造元のプロトコルに従って、１μＭのカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で標識した。ＣＦＳＥ標識細胞を、１０％ウシ胎仔血清と６０ＩＵ／ｍｌ組換えヒトＩＬ－２を含有するＲＰＭＩに再懸濁した。丸底９６ウェルプレートにおよそ５０，０００細胞／ウェルを加えた。ＤｙｎａｂｅａｄｓヒトＴ活性化因子ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを、ビーズ：細胞比１：１で細胞懸濁液に添加し、３７℃で１時間インキュベートした。抗体の段階希釈液を指定のウェルに添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。最後に、ＡＭＰを最終濃度１０００μＭで添加し、培養物全体をインキュベーター内で３７℃で５日間インキュベートした。５日後、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖を、ＬＳＲＦＯＲＴＥＳＳＡＸ－２０アナライザー（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用したＣＦＳＥベースのフローサイトメトリー分析によって決定した。

抗ＣＤ７３抗体は、複数の異なるヒトドナーにおいて濃度依存的にＣＤ４＋Ｔ細胞増殖のＡＭＰ媒介抑制を逆転させた（図５Ａ～５Ｎ）。

実施例６：結合親和性
ＣＤ７３酵素活性には、開構造での基質結合が必要である。基質結合後、ＣＤ７３は、ＡＭＰをアデノシンに変換するために、開構造から閉構造への大きな構造変化を経る必要がある。この構造変化を阻害または調節する抗体結合は、ＡＭＰからアデノシンへの変換率を低下させる可能性がある。

ＨｚＣＬ２５の結合親和性を評価するために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）をＢｉａｃｏｒｅ８Ｋ機器（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して２５℃で実行した。ＳＰＲランニング緩衝液（１０ｍＭＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ及び０．０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）を、１０ＸＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）から調製した。抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、ＳシリーズセンサーチップＣＭ５（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）の１６個のフローセルすべてにアミンカップリングを介して固定化した。固定化レベルは、すべてのフローセルで約９０００ＲＵであった。抗ＣＤ７３抗体の望ましい捕捉レベルは、各チャネルのアクティブフローセルに適切な濃度の抗ＣＤ７３抗体を流すことによって達成した。Ｚｎ^２＋が存在する切断不可能なＡＤＰ類似体ＡＰＣＰ（アデノシン－５’－（α，β－メチレン）二リン酸）を使用して、ＣＤ７３の構造平衡を開状態から閉状態にシフトさせることができる。したがって、組換えＣＤ７３を、１００μＭＡＰＣＰ及び１０μＭＺｎＣｌ_２（閉鎖ＳＰＲランニング緩衝液）の存在下でＳＰＲランニング緩衝液と共にインキュベートし、閉構造でのＣＤ７３への抗ＣＤ７３抗体の結合を調べた。これを実現するために、Ｂｉａｃｏｒｅ８ＫのＡＢＡインジェクション機能を使用した。開構造の場合、ＡＢＡ注入シーケンスは、ランニング緩衝液の６０秒注入から開始した。次いで、ＣＤ７３ストック（ＢＰＳＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とランニング緩衝液から調製したＣＤ７３の３倍段階希釈濃度シリーズを１８０秒間注入した直後に、ランニング緩衝液を２４０秒間注入した。閉構造の場合、通常のＳＰＲランニング緩衝液を閉鎖ＳＰＲランニング緩衝液に置き換えた。３ＭＭｇＣｌ_２を３０秒間注入すると、表面が再生された。結合速度及び親和性パラメーターは、１対１の結合モデルへのデータのグローバルフィットから得られた。開構造または閉構造のいずれかでのヒト、カニクイザル、及びマウスＣＤ７３への結合親和性ならびに速度論的結合及び解離速度定数を以下の表６に示す。表６の結果から、カニクイザルの薬物動態データがヒトの薬物動態データを反映することが保証される。

実施例７：エピトープマッピング
ＣＬ２５のエピトープをマッピングするために、水素－重水素交換質量分析（ＨＤＸ）を実施した。ＣＤ７３を、単独またはＣＬ２５Ｆａｂとの複合体のいずれかで重水素酸化物中でインキュベートした。重水素交換を、２０℃で０秒、６０秒、６００秒、または３６００秒実行した。交換反応物を低ｐＨでクエンチし、タンパク質をペプシン／プロテアーゼＶＩＩＩで消化した。同定されたペプチドの重水素レベルを、ＬＣ－ＭＳの質量シフトからモニタリングした。すべてのペプチドの交換時間にわたる重水素蓄積曲線を時間に対してプロットした。Ｆａｂに結合すると重水素の取り込みが有意に減少するペプチドを、各抗体のエピトープとして割り当てた。ＣＬ２５についてＨＤＸ－ＭＳによって決定したエピトープを、ヒトＣＤ７３（４Ｈ２Ｆ．ｐｄｂ）の結晶構造にマッピングし（図６）、ＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬ（配列番号７６）（すなわち、配列番号７０のアミノ酸４０～５３）である。

実施例８：ＣＤ７３細胞表面レベル
抗体処理後の細胞表面上のＣＤ７３の量を測定するために、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を培地（１０％ＦＢＳＲＰＭＩ－１６４０）に再懸濁し、９６ウェルプレートに１×１０^５細胞／ウェルで播種した。示された抗体を最終濃度１０μｇ／ｍＬで添加し、プレートを３７℃、５％ＣＯ_２にて２４時間インキュベートした。Ｖｅｒｓｅｎｅを使用して細胞を回収し、新しい９６ウェルプレートに移した。細胞を洗浄し、Ｄｙ６５０に直接コンジュゲートした１０μｇ／ｍＬの非競合抗体で氷上にて３０分間染色した。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ７３細胞表面受容体密度を、ＱｕａｎｔｕｍＳｉｍｐｌｙＣｅｌｌｕｌａｒビーズを使用した抗体結合能（ＡＢＣ）によって決定した。細胞をＣＬ２５で２４時間処理すると、細胞表面ＣＤ７３のレベルが低下した（図７）。

実施例９：腫瘍増殖に対する抗ＣＤ７３抗体の効果
ＣＬ２５抗体のｉｎｖｉｖｏでの効果を試験した。ｈｕ－ＣＤ３４ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の腹腔内投与のために、ＨｚＣＬ２５を１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に懸濁した。１×ＰＢＳ及び１×ＰＢＳに懸濁したＦｃ無効化ヒトＩｇＧ１を、対照としてこの研究に含めた。ヒト化免疫系を有するマウスは、ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｓ（ＢａｒＨａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）から購入した。簡潔に述べると、３週齢の雌ＮＳＧ／ＮＯＤＳＣＩＤマウスに、免疫細胞前駆細胞に対して毒性を有する放射線を単回照射し、次いでヒト臍帯血、ＣＤ３４^＋選択細胞の注射によって「レスキュー」した。１２週間後（ヒト免疫細胞の回復と生着を可能にするため）、マウスに、ＩｎｃｙｔｅＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＡＡＬＡＳ認定ビバリウムを投与した。マウスは、免疫応答の個人差をよりよく表すために、３人の異なるヒト免疫ドナーのレシピエントで構成された。

マトリゲル（ＣｏｒｎｉｎｇＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｔｅｗｋｓｂｕｒｙ，Ｍａｓｓ）に懸濁したヒトメラノーマ株Ａ３７５（ＡＴＣＣ、ＭａｎａｓｓａｓＶｉｒｇｉｎｉａ）の５×１０^６細胞を接種する前日に、マウスの左側腹部を剃毛した。１１日目に、腫瘍の寸法をノギスで測定し、体積を式Ｖｏｌｕｍｅ＝［Ｌ（長寸）×Ｗ２（短寸）］／２で推定した。マウスは、おおよその平均体積（約２００ｍｍ^３）とドナー表現による５匹または６匹のマウスの３つの群に無作為化した。研究期間中、腫瘍を２～４日ごとに測定した。

ＨｚＣＬ２５をＰＢＳで１ｍｇ／ｍｌ及び０．１ｍｇ／ｍｌの濃度に希釈し、対応するアイソタイプ対照（ｃｘ００３７６－００１）を投与の朝に新鮮な１ｍｇ／ｍｌに希釈した。１１日目から６日ごとに、１０ｍｌ／ｋｇの腹腔内注射により抗体をマウスに投与し、１ｍｇ／ｋｇ体重及び１０ｍｇ／ｋｇ体重の有効用量を達成した。合計３回の投与を行った。

３回目の最終投与の４８時間後、マウスをＣＯ_２窒息により安楽死させた。腫瘍を切除し、プロテアーゼを含有する培地に入れ、氷上に置き、次いでＧｅｎｔｌｅＭａｃｓＴｉｓｓｕｅＤｉｓｒｕｐｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，ＡｕｂｕｒｎＣＡ）を使用して破砕し、単一細胞の懸濁液とした。フローサイトメトリー及び酵素アッセイのために処理している間、細胞を氷上に残した。

ＨｚＣＬ２５を投与したマウスは、両方の用量で腫瘍成長阻害を示し；低用量（ｐ＝．０２６、両側ｔ検定）は著しく、成長を５６％遅らせた（図８）。

実施例１０：ｅｘｖｉｖｏ酵素活性アッセイ
ＨｚＣＬ２５を投与した腫瘍保有マウスにおけるＣＤ７３の酵素活性を評価するために、図８の実験に由来する腫瘍ホモジネートの単一細胞懸濁液から、ＤｅａｄＣｅｌｌＲｅｍｏｖａｌＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を使用して、生細胞を選別した。細胞選択後、ウェルあたり１０，０００個の生細胞を１００μＭのＡＭＰとともにプレーティングした。陽性対照として、２５０μＭＡＰＣＰ処理細胞を使用した。処理後、ＡＭＰ－ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ；カタログ番号Ｖ５０１１）を使用して、製造元のガイドラインに従ってＣＤ７３の酵素活性を検出した。ＡＭＰレベル検出の尺度として発光を使用し、各動物からの読み取り値をＡＰＣＰ処理培養物の読み取り値に正規化し、その場合、ＡＰＣＰ処理培養物は、ＣＤ７３活性の最大阻害を示すと考えられた（図９）。図９に示すように、ＨｚＣＬ２５は、腫瘍細胞に対するＣＤ７３酵素活性の用量依存的阻害を示した。

実施例１１：抗ＣＤ７３処置腫瘍の遊離表面ＣＤ７３
処置後の受容体被覆率を評価するために、図８の実験に由来する腫瘍ホモジネートの単一細胞の懸濁液を、生死判定用色素（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２３１１０）、ヒトＣＤ４５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０４０３６）、マウスＣＤ４５（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６３４１０）、マウスＣＤ９０．２（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６５２５７）に対する蛍光色素コンジュゲート抗体、及び競合抗体（ＡＦ４８８コンジュゲートＣＬ２５抗体）または非競合抗体（ＰＥコンジュゲート抗体Ｘ）で染色した。細胞は、ＢＤＦＡＣＳｙｍｐｈｏｎｙフローサイトメトリーアナライザーとＦｌｏｗＪｏソフトウェアパッケージをそれぞれ使用して実行し、分析した。分析は、腫瘍細胞集団に焦点を当てて、生細胞集団をゲーティングし、続いてマウス細胞とヒト免疫細胞を排除することによって実行した。腫瘍細胞の全ＣＤ７３レベルは、フルオロフォアタグ付きの非競合ＣＤ７３抗体を使用して検出した。用量依存的に、ＨｚＣＬ２５は、腫瘍細胞の全ＣＤ７３レベルを低下させた（図１０Ａ）。図１０Ａで測定されたＣＤ７３を発現する細胞のうち、遊離表面ＣＤ７３を、フルオロフォアタグ付き競合（ＣＬ２５）抗体を使用して測定した（図１０Ｂ）。ＨｚＣＬ２５処置は、遊離表面ＣＤ７３の用量依存的な減少を示した（図１０Ｂ）。さらに、両方の用量での遊離表面ＣＤ７３レベルのこの低下は、ＩｇＧ処置腫瘍と比較して有意に低かった（図１０Ｂ）。

実施例１２：抗ＣＤ７３抗体の薬物動態及び薬力学のｉｎｖｉｖｏ研究
ｉｎｖｉｖｏでのＨｚＣＬ２５の有効性を評価するために、雌のヒトＣＤ３４^＋再構成マウス（２１週齢；ＴｈｅＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）に５×１０^６個のＡ３７５ヒト黒色腫細胞（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ－１６１９）を皮下接種した。腫瘍を保有するマウスの治療を、接種の７日後、腫瘍体積がおよそ３３０ｍｍ^３に達した時に開始した。Ａ３７５を移植したヒト化ＮＳＧマウスに、５日ごとに１０ｍｇ／ｋｇのＨｚＣＬ２５を腹腔内投与した。研究動物に、抗体を合計６回投与し、最終投与は３２日目であった。腫瘍を、２６日目と２９日目に体重の１０％を超える腫瘍を有するマウスから、そして３３日目に残りのすべての動物から回収した。血清を、２６日目にすべての動物から回収し、２９日目に体重の１０％を超える腫瘍を有するマウスから再度回収し、そして３３日目に残りのすべての動物から回収した。２６日間（その時点で対照ＩｇＧ群はその平均有効性エンドポイントに達した）、ＨｚＣＬ２５は１４％の若干であるが有意ではない腫瘍増殖阻害を示した（図１１Ａ）。しかしながら、３２日間の長期投与は、ＨｚＣＬ２５で処置した動物とＩｇＧ対照を投与した残りのマウスとの間で腫瘍増殖率と生存率に著しい違いを示した（図１１Ｂ）。

別の薬力学的（ＰＤ）研究を、２２日目に、３日ごとに１０ｍｇ／ｋｇのＨｚＣＬ２５、合計２回の抗体投与を使用して開始した。ＰＤ動物由来の腫瘍は、２７日目（２回目の抗体投与の４８時間後）に回収した。抗体処置後のマウス血清中の可溶性ヒトＣＤ７３（ｈＣＤ７３）を測定するために、ＭＳＤプレートを１μｇ／ｍＬの非競合捕捉ＩｇＧ抗体でコーティングし、４℃にて一晩インキュベートした。プレートを洗浄し、１：５に希釈したマウス血清試料を加えた。標準曲線を、組換えヒトＣＤ７３（ｒｈｕＣＤ７３）を使用して作成した。プレートを６００ｒｐｍで振とうしながら室温で２時間インキュベートした。プレートを洗浄し、スルホタグに直接コンジュゲートした競合（ＨｚＣＬ２５）または非競合（抗体Ｘ）抗体を１μｇ／ｍＬでプレートに添加し、６００ｒｐｍで振とうしながら室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、１５０μＬのリード緩衝液を添加し、ＭＳＤプレートリーダーを使用して分析した。マウス血清由来の可溶性ｈＣＤ７３レベルを標準曲線から計算した。ＨｚＣＬ２５による処置は、マウス内の可溶性ヒトＣＤ７３をわずかに安定化させたが、可溶性ヒトＣＤ７３のレベルは、依然としてマウス内の抗体レベルをはるかに下回っていた（図１２）。

実施例１３：抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体３－Ｆ０３の生成
さらなる抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体を生成するために、単一のドナーライブラリーの複数の選択ラウンドを実行した。およそ１．５Ｅ１２ファージ粒子のライブラリーを、２００ｎＭのビオチン化ヒトＣＤ７３（配列番号７０）を使用して、３ラウンドのパニングで濃縮した。次いで、このプールに由来するｓｃＦｖカセットを酵母ディスプレイベクターに再結合し、およそ５．４Ｅ７のライブラリーを作成した。このライブラリーを、１００ｎＭのビオチン化マウスＣＤ７３（配列番号７１）を使用して、３ラウンドにわたってＦＡＣＳによって選択した。酵母コロニーのサンガーシーケンシングによる最終的なソーティング出力から、固有の配列を取得した。酵母３－Ｆ０３ｓｃＦｖ配列はこのプールから同定され、配列番号７７に記載のアミノ酸配列のＶＨ及び配列番号６５に記載のアミノ酸配列のＶＬを含んでいた。

全長のヒト３－Ｆ０３抗体を構築するために、配列番号７３に記載のヒトＩｇＧ１定常領域及び配列番号７４に記載のヒトκ軽鎖定常領域を含むヒトＩｇＧ１骨格にクローニングする前に、酵母３－Ｆ０３ｓｃＦｖ配列を改変した。ＶＨについては、配列番号７７のＮ末端グルタミン酸（Ｅ）を除去し、配列番号７７のＫａｂａｔ位置Ｈ７７（すなわち、配列番号７７の位置７８）のスレオニン（Ｔ）をアラニン（Ａ）に置換した。ＶＬについては、配列番号６５のＮ末端アラニン（Ａ）を除去した。得られた全長ヒト３－Ｆ０３抗体は、それぞれ配列番号６０及び６１のアミノ酸配列に記載のＶＨ及びＶＬを含む。得られた全長ヒト３－Ｆ０３抗体は、それぞれ配列番号６６及び３１のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖を含む。この抗体は、本明細書中では「３－Ｆ０３」と称される。上記の表３は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによる３－Ｆ０３ＣＤＲ、ならびに成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列を示す。

実施例１４：細胞表面ＣＤ７３への３－Ｆ０３の結合
細胞表面ＣＤ７３への３－Ｆ０３の結合を、上記の実施例２に記載されているように実施した。３－Ｆ０３は、高レベルの表面ＣＤ７３（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）及び中レベルのＣＤ７３（Ａ３７５細胞）を有する細胞への高い効力の結合を示す（図１３Ａ及び図１３Ｂ）。

実施例１５：３－Ｆ０３を介した細胞ＣＤ７３阻害
細胞上のＣＤ７３活性を阻害する３－Ｆ０３の能力を、上記の実施例３に記載されているように評価した。結果を図１４Ａ及び図１４Ｂに示す。

クローン３－Ｆ０３は、ＣＤ７３の小分子阻害剤であるＡＰＣＰと比較して、試験した両方の細胞型で細胞ＣＤ７３の最大阻害を示した（図１４Ａ及び図１４Ｂ）。

実施例１６：３－Ｆ０３を介した可溶性ＣＤ７３阻害
組換えタンパク質のＣＤ７３活性を阻害する３－Ｆ０３の能力を、０．０２５ｕｇ／ｍＬのｒｈｕＣＤ７３を使用したこと以外は、上記の実施例４に記載したように評価した。結果を図１５に示す。抗体３－Ｆ０３は良好な効力を示した（図１５）。抗体３－Ｆ０３はフック効果を示さなかった。

実施例１７：Ｔ細胞増殖のＡＭＰ媒介抑制の抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体を介した逆転
Ｔ細胞増殖のＡＭＰ媒介抑制を逆転させる３－Ｆ０３の能力を、上記の実施例５に記載されているように評価した。３－Ｆ０３は、複数の異なるヒトドナーにおいて、濃度依存的にＣＤ４＋Ｔ細胞増殖のＡＭＰ媒介抑制を逆転させた（図１６Ａ～１６Ｄ）。

実施例１８：抗ＣＤ７３抗体の結合親和性
３－Ｆ０３の結合親和性を、上記の実施例６に記載されているように評価した。開構造または閉構造でのヒト、カニクイザル、及びマウスＣＤ７３への結合親和性ならびに速度論的結合及び解離速度定数を以下の表７に示す。

実施例１９：３－Ｆ０３のエピトープマッピング
３－Ｆ０３のエピトープを、上記の実施例７に記載されているようにマッピングした。３－Ｆ０３についてＨＤＸ－ＭＳによって決定したエピトープを、ヒトＣＤ７３の結晶構造（４Ｈ２Ｆ．ｐｄｂ）にマッピングし（図１７）、それらは、ＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱ（配列番号７８）（すなわち、配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９）及びＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬ（配列番号７９）（すなわち、配列番号７０のアミノ酸４７０～４８９）であった。

実施例２０：ＣＤ７３細胞表面レベルに対する３－Ｆ０３の効果
３－Ｆ０３で処置した後の細胞表面上のＣＤ７３の量を、上記の実施例８に記載されているように評価した。３－Ｆ０３は、アイソタイプ対照抗体または未処置の細胞と比較して、細胞表面で検出可能なＣＤ７３のレベルを劇的に低下させた（図１８）。

実施例２１：ｉｎｖｉｖｏ研究
３－Ｆ０３のｉｎｖｉｖｏ有効性を、上記の実施例１２に記載されているように評価した。２６日間（その時点で対照ＩｇＧ群はその平均有効性エンドポイントに達した）、３－Ｆ０３は８％の若干であるが統計的に有意ではない腫瘍増殖阻害を示した（図１９Ａ）。しかしながら、３２日間の長期投与は、３－Ｆ０３で処置した動物とＩｇＧ対照を投与した残りのマウスとの間で腫瘍増殖率と生存率に著しい違いを示した（図１９Ｂ）。

３－Ｆ０３のＰＤ特性もまた、上記の実施例１２に記載されているように評価した。３－Ｆ０３での処置では、全体または遊離の可溶性ヒトＣＤ７３の検出可能な増加がなかったことから、３－Ｆ０３での処置はマウスの可溶性ヒトＣＤ７３を安定化させなかった（図２０）。

実施例２２：３－Ｆ０３バリアント
３－Ｆ０３軽鎖（ＬＣ、配列番号６６）及び重鎖（ＨＣ、配列番号３１）の配列を使用して、相同性モデルを構築した。図２１Ａ～図２１Ｊは、例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を示す。これらのＶＨ及びＶＬ配列を含む抗体は、配列番号７３に記載の重鎖定常領域及び配列番号７４に記載の軽鎖定常領域を含んでいた。表８は、例示的な３－Ｆ０３バリアントの結合親和性及び結合速度を示す。試験した変異はいずれも、ＢｉａｃｏｒｅによるＣＤ７３への結合に劇的な影響を及ぼさなかった。試験したすべての変異は、３－Ｆ０３抗体の１０倍以内の親和性を有し、大部分は３－Ｆ０３の２倍以内であった。

改変された３－Ｆ０３バリアントの細胞表面ＣＤ７３への結合を試験するために、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を洗浄し、５×１０^４細胞／ウェルで９６ウェルプレートに添加した。細胞を、示された濃度の抗体で氷上にて１時間染色した。次いで、細胞を洗浄し、ＰＥにコンジュゲートしたヤギ抗マウス二次抗体で氷上にて３０分間染色した。次いで細胞を洗浄し、フローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ７３染色のＧＭＦＩをグラフ化している（図２２）。わずかに高いＹｍａｘを示した３－Ｆ０３＿４１７を除いて、３－Ｆ０３バリアントのそれぞれは同様の結合特性を有していた（図２２）。これらのデータは、Ｂｉａｃｏｒｅの研究を裏付けており（表８）：これらの変異は、これらのバリアントのクローンに対するヒトＣＤ７３の結合を劇的に変化させなかった。

細胞上のＣＤ７３活性を阻害する３－Ｆ０３バリアントの能力を試験するために、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を無血清ＲＰＭＩ培地で洗浄し、９６ウェルプレートに１×１０^４細胞／ウェルで播種した。細胞を、示された濃度の抗体またはＡＰＣＰと共に３７℃、５％ＣＯ_２にて３０分間インキュベートした。次に、ＡＭＰを最終濃度が１００μＭになるように添加し、細胞を３７℃、５％ＣＯ_２にてさらに３時間インキュベートした。プレートを３００ｇで１～２分間遠心分離し、２５μＬの上清を新しい９６ウェルプレートに移した。製造元の指示に従ってＡＭＰ－Ｇｌｏアッセイを使用した。ＲＬＵは、このアッセイにおけるＡＭＰ濃度と直接相関している。３－Ｆ０３は、３－Ｆ０３バリアントの中で最大の阻害を示した（図２３）。バリアント３－Ｆ０３＿４１７、３－Ｆ０３＿４１１、及び３－Ｆ０３＿４１３は、３－Ｆ０３と比較してわずかに低い効力を示した（図２３）。バリアント３－Ｆ０３＿４１２は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞上の膜結合ＣＤ７３を阻害しなかった（図２３）。

実施例２３：抗ＣＤ７３抗体で処置した腫瘍の腫瘍アデノシンレベル
腫瘍内アデノシンを調節するＨｚＣＬ２５及び３－Ｆ０３の能力をｉｎｖｉｖｏで評価した。雌のヒトＣＤ３４＋再構成マウス（２９週齢；ＴｈｅＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）に対し、処置群ごとに３匹のマウスで、それらの左側腹部上に、マトリゲル（ＣｏｒｎｉｎｇＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）に懸濁した３×１０^６個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ－２６）を皮下接種した。腫瘍を保有するマウスの治療を、接種の１０日後、腫瘍体積がおよそ２４０ｍｍ^３に達した時に開始した。ＨｚＣＬ２５、３－Ｆ０３またはＩｇＧアイソタイプ対照をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１ｍｇ／ｍｌに希釈し、１２日目に１０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内注射し、再度、５日後、１７日目にマウスに投与した。１８日目に、マウスを安楽死させ、腫瘍を切除し、クライオチューブに入れ、液体窒素中にフラッシュ凍結した。

腫瘍内のアデノシン濃度を測定するために、凍結組織試料を切片化し、８０μｍの空間分解能で３回の定量的ＭＡＬＤＩ質量分析イメージング（ＭＳＩ）に供した。組織切片から取得したＭＳＩデータセットと、対照切片にスポットした一連の希釈標準に基づいて、選択した組織切片のアデノシンの定量化をマルチイメージングソフトウェアで取得した。検量線と得られたシグナルとの相関関係を作成して、関心対象の各領域の分析物の濃度を決定した。関心対象の領域を含む腫瘍を、連続切片のＨ＆Ｅ染色によって同定した。

図２６に示すように、ＨｚＣＬ２５または３－Ｆ０３による処置は、腫瘍内アデノシン濃度をそれぞれ３５％及び４２％低下させた。

実施例２４：抗ＣＤ７３抗体によるＣＤ７３酵素阻害
３－Ｆ０３及びＨｚＣＬ２５の阻害の分子メカニズムを、組換え全長ＣＤ７３を使用し、アデノシンの産生をＬＣＭＳで測定する酵素アッセイを使用して調べた。データを混合阻害モデルを使用して分析し、３－Ｆ０３とＨｚＣＬ２５の両方の結果を表９にまとめる。

簡潔に述べると、薬剤の阻害効力を、アデノシン^１３Ｃ_１０、^１５Ｎ_５５’－一リン酸ナトリウム塩溶液（６５０６７６，Ｓｉｇｍａ）を基質として使用し、生成物であるアデノシンをＬＣ－ＭＳで検出する酵素アッセイで測定した。抗体剤を緩衝液で段階希釈し、５μＬの容量を９６ウェルプレートに移した。アッセイ緩衝液（２５ｍＭＴｒｉｓ、５ｍＭＭｇＣｌ_２、０．００５％Ｂｒｉｊ３５ｐＨ７．５）中の２０μＬの０．５ｐＭ組換えＣＤ７３をプレートに添加し、２５℃で２時間プレインキュベートした。様々な濃度のＡＭＰを含有する２５μＬの溶液を添加することによってアッセイを開始した。反応を２５℃で０．５時間実施し、次いで５０μＬのメタノールでクエンチした。

結果は、ＨｚＣＬ２５が非競合的阻害剤であり、Ｋｉ値が０．３±０．２ｎＭであり、α値が１に近いことを示した（図２７）。３－Ｆ０３は、Ｋｉが１．５±０．７ｎＭ、αが１９±１２の混合阻害剤であり、３－Ｆ０３が酵素基質よりも遊離酵素に対して高い親和性を示し、競合性を示すことを示している（図２８）。

さらに、ＨｚＣＬ２５は「フック」効果を示し、高濃度の薬剤で阻害の損失が観察された（図２９）。これは、ＨｚＣＬ２５とＣＤ７３の分子相互作用の化学量論が、それらの濃度比が変化するにつれて変化し、分子集団が抑制種から非抑制種にシフトすることを示している。

他の実施形態
本発明をその詳細な説明に関連して記載してきたが、前述の記載は、本発明の範囲を限定するものではなく、それを示すことを意図し、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲で定義される。他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲内である。

Claims

ヒトＣＤ７３に結合する抗体であって、前記抗体が、ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含み：
前記ＶＨＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
前記ＶＨＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；そして
前記ＶＨＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含み；ならびに
前記抗体が、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含み：
前記ＶＬＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
前記ＶＬＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；そして
前記ＶＬＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む、前記抗体。
前記ＶＨドメインが、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体が重鎖を含み、前記重鎖が、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
前記ＶＬドメインが、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体が軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
前記ＶＨドメインが、配列番号２２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＬドメインが、配列番号２３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である、請求項１に記載の抗体。
前記ＶＨドメインが配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
ヒトＣＤ７３に結合する抗体であって、前記抗体が、配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する、前記抗体。
ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体。
ヒト化抗体である、請求項１、９、または１０に記載の抗体。
前記抗体が、二重特異性抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆｓｃフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）_２、またはダイアボディである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体。
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体をコードする核酸または複数の核酸。
プロモーターに作動可能に連結された請求項１３に記載の核酸または複数の核酸を含む発現ベクターまたは複数の発現ベクター。
請求項１３に記載の核酸もしくは複数の核酸または請求項１４に記載の発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む単離された細胞。
プロモーターに作動可能に連結された請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体のＶＨドメインを含む第１のポリペプチドをコードする第１の核酸を含む第１の発現ベクター、及びプロモーターに作動可能に連結された請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体のＶＬドメインを含む第２のポリペプチドをコードする第２の核酸を含む第２の発現ベクターを含む、単離された細胞。
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体を産生する、単離された細胞。
請求項１５または１６に記載の細胞を培養し、前記抗体を単離することを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体の作成方法。
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
ヒト対象に、有効量の請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体を投与することを含む、治療を必要とするヒト対象におけるがんの治療方法。
前記がんが、高いアデノシンシグネチャーを有する、請求項２０に記載の方法。
前記がんが、頭頸部癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膀胱癌、肝臓癌、または腎細胞癌である、請求項２０または２１に記載の方法。
ヒトＣＤ７３に結合する抗体であって、前記抗体が、ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含み：
前記ＶＨＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
前記ＶＨＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；そして
前記ＶＨＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；ならびに
前記抗体が、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含み：
前記ＶＬＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
前記ＶＬＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；そして
前記ＶＬＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む、前記抗体。
前記ＶＨＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
前記ＶＨＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）を含み；
前記ＶＨＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；
前記ＶＬＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
前記ＶＬＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；そして
前記ＶＬＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む、請求項２３に記載の抗体。
前記ＶＨドメインが、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の抗体。
前記抗体が重鎖を含み、前記重鎖が、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の抗体。
前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の抗体。
前記抗体が軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の抗体。
前記ＶＨドメインが、配列番号６２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である、請求項２４に記載の抗体。
前記ＶＨドメインが配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の抗体。
前記抗体が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の抗体。
前記ＶＨＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
前記ＶＨＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；
前記ＶＨＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；
前記ＶＬＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
前記ＶＬＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；そして
前記ＶＬＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む、請求項２３に記載の抗体。
前記ＶＨドメインが、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の抗体。
前記抗体が重鎖を含み、前記重鎖が、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の抗体。
前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の抗体。
前記抗体が軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の抗体。
前記ＶＨドメインが、配列番号６３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である、請求項３２に記載の抗体。
前記ＶＨドメインが、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の抗体。
前記抗体が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の抗体。
ヒトＣＤ７３に結合する抗体であって、前記抗体が、配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する、前記抗体。
ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体。
ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体。
ヒト化抗体である、請求項２３、３２、４０、４１または４２に記載の抗体。
前記抗体が、二重特異性抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆｓｃフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）_２、またはダイアボディである、請求項２３～４２のいずれか一項に記載の抗体。
請求項２３～４４のいずれか一項に記載の抗体をコードする核酸または複数の核酸。
プロモーターに作動可能に連結された請求項４５に記載の核酸または複数の核酸を含む発現ベクターまたは複数の発現ベクター。
請求項４５に記載の核酸もしくは複数の核酸または請求項４６に記載の発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む単離された細胞。
プロモーターに作動可能に連結された請求項２３～４４のいずれか一項に記載の抗体のＶＨドメインを含む第１のポリペプチドをコードする第１の核酸を含む第１の発現ベクター、及びプロモーターに作動可能に連結された請求項２３～４４のいずれか一項に記載の抗体のＶＬドメインを含む第２のポリペプチドをコードする第２の核酸を含む第２の発現ベクターを含む、単離された細胞。
請求項２３～４４のいずれか一項に記載の抗体を産生する、単離された細胞。
請求項４７または４８に記載の細胞を培養し、前記抗体を単離することを含む、請求項２３～４４のいずれか一項に記載の抗体の作成方法。
請求項２３～４４のいずれか一項に記載の抗体、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
ヒト対象に、有効量の請求項２３～４４のいずれか一項に記載の抗体を投与することを含む、治療を必要とするヒト対象におけるがんの治療方法。
前記がんが、高いアデノシンシグネチャーを有する、請求項５２に記載の方法。
前記がんが、頭頸部癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膀胱癌、肝臓癌、または腎細胞癌である、請求項５２または５３に記載の方法。